JPH09136841A - メタロプロテナーゼ阻害物質の治療上の有効性を測定するための方法、新規の阻害物質、およびその治療上の使用 - Google Patents

メタロプロテナーゼ阻害物質の治療上の有効性を測定するための方法、新規の阻害物質、およびその治療上の使用

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JPH09136841A
JPH09136841A JP20849096A JP20849096A JPH09136841A JP H09136841 A JPH09136841 A JP H09136841A JP 20849096 A JP20849096 A JP 20849096A JP 20849096 A JP20849096 A JP 20849096A JP H09136841 A JPH09136841 A JP H09136841A
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ディ スタツィオ ジョバンニ
De Luca Giovanna
デ ルーカ ジョバンナ
Materazzi Mario
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 生態内で産生される内在性メタロプロテナー
ゼによって誘発される障害を治療するために有効な薬物
をスクリーニングする方法、有効な薬物およびその薬物
の使用方法の提供。 【解決手段】 ガラガラヘビ科およびクサリヘビ科のヘ
ビの毒から抽出した亜鉛依存性メタロプロテナーゼを使
用する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヘビ毒中に存在す
るメタロプロテナーゼ阻害物質であるペプチド類似物質
に関して、ヒトを含めた哺乳類における治療上の有効性
を高い精度で測定するための方法に関するものである。
【０００２】本発明はまた、上述の範疇に属する新規物
質に関するものであり、腫瘍による侵襲、慢性関節リウ
マチ、歯周炎、角膜潰瘍、多発性硬化症、大動脈の動脈
瘤、骨粗鬆症、創傷の瘢痕形成、接触性皮膚炎、動脈硬
化、敗血症性ショック、寄生虫による侵襲、高血圧症、
アレルギー、免疫反応不全、アルツハイマー病、慢性気
管支肺炎、肺気腫、肝硬変、拡張型心筋症、および生殖
系の機能不全等、ヒトでの多数の重大な疾患における治
療のための使用も含める。
【０００３】
【従来の技術】ヘビ毒は複雑な混合物であり、獲物を消
化したり特に心臓循環系におけるその生理的機能を変化
させたりする働きをもつ様々な蛋白質溶解酵素を含有し
ている。事実、クサリヘビ科に属するヘビからの毒は止
血系およびフィブリン溶解系に対して重大な影響を及ぼ
し、凝血薬前駆体、あるいは抗凝血薬としての活性を示
すことがよく知られている（例としてCritical Reviews
in Toxicology 21 、171 〜182 、1991年を参照のこ
と）。同様にして、プロトロンビンあるいはフィブリン
の活性化を阻害する因子と共に、血小板凝集に対して強
力な阻害作用を有する因子が発見されている。
【０００４】ガラガラヘビ科に属するヘビの毒中に検出
される酵素の中で非常に重要なのは、いわゆる出血性因
子、あるいは出血素と呼ばれる酵素である。これらは構
造上ヘビにとって有用である。なぜならば、速やかに獲
物の体内で広範な出血を引き起こして循環系を虚脱状態
にし、獲物を死から逃れられないようにするからであ
る。出血作用の機序は、これらの酵素が各種の基底内皮
細胞との間の結合を保っている多数の糸状蛋白質をきわ
めて容易に消化し得るため、血液成分が血管から溢出し
てしまう、というものである。最近の研究（例としてPh
armacology and Therapeutics 62、325 〜372 、1994年
を参照のこと）によって、ヘビ毒から分離された多数の
酵素から成る出血性因子は非常に様々な分子量をもち
（通常20〜90KDaの間）、出血作用、血小板凝集阻害作
用、および粘着活性を発揮するいくつかの機能的サブユ
ニットから構成されることが多い、とのことが確認され
ている。出血素の分子量には大きな変動があるが、触媒
部位において蛋白質鎖の中の特定のアミノ酸に対して亜
鉛が結合する様式、および血管の基底膜中の蛋白質を攻
撃する様式に関してはいくつかの固有の特徴をもってい
る。
【０００５】活性部位に亜鉛が存在するというのは出血
素に限られたことではないが、最も小さく最も単純なも
のから最も高度に進化したものまで、動物の体内で生理
学的および病理学的に重要な機能を果たす種々の蛋白質
溶解酵素に共通の特徴である。亜鉛との結合に関与する
蛋白質鎖およびアミノ酸からの残基配列に関する研究か
ら、この種のプロテアーゼに関してある種の「系統樹」
が得られている（例としてFEBS Letters 312、110 〜11
4 、1992年）：したがって、アスタシン（川に住む甲殻
類から抽出）、セラチン（微生物から分離）、マトリキ
シン（哺乳類の体内に存在し、細胞の移動および損傷組
織の再構成に対して重要な影響を及ぼす）、およびヘビ
毒の出血素等、種々の生物の体内に存在する酵素は、事
実上活性部位において亜鉛に結合している４個のアミノ
酸のうちの１個が異なるだけであることが明らかとな
り、ある意味で互いに若干の関連をもつと考えることが
できる。ただし、これはこれらの酵素が果たす機能が類
似しているという意味ではない：実際、ヘビ毒の蛋白質
溶解酵素は構造的にも機能的にも動植物界に存在する他
のどの蛋白質とも類似していないことが示されている。
ただし、亜鉛部位だけは例外でこれらは互いにきわめて
よく類似しており、いずれも単一の祖先遺伝子から派生
したものと考えられる。このため、ヘビ毒メタロプロテ
ナーゼという新しいプロテアーゼグループを定義するこ
とが可能である（例としてBiol.Chem.Hoppe-Seyler 37
3、381 〜385 、1992年を参照のこと）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明に至った研究プ
ログラムの中で、当初ヘビ毒のメタロプロテナーゼに対
して強力な阻害作用を有する物質を合成した：これはヘ
ビに咬まれた患者における有毒かつ致命的な作用を拮抗
するために有効である物質を発見するという明確な目的
の下に実施されたものであるが、ヘビ毒出血因子および
哺乳類細胞中に存在する他の亜鉛依存性メタロプロテナ
ーゼ（例えばマトリキシン）の活性部位と構造的に類似
した物質から得られる新たな薬理活性を評価する上でも
有用である。
【０００７】当研究プログラムの開始点は、ヘビ毒から
検出される種々の成分の存在および機能に関する申請者
の長年の経験から得られたものであり、また（Biomed.B
iochim.Acta 50、769 〜773 、1991年）中に発表された
ように、ヘビは酵素に対する競合阻害剤として作用する
２種類のトリペプチドを産生することによって自身のメ
タロプロテナーゼの毒性作用から身を守っているとの証
拠にも基づいている。最初の段階は、元のトリペプチド
が酵素の活性部位に対する親和性を向上させ得る化学基
によって置換されたという特徴をもつ新しいグループの
ペプチド類似物質を合成することであった。次に、in v
itroで用いられる蛋白質溶解試験に対して特に感受性の
高い出血素を選択し、ヒガシダイヤガラガラヘビの毒か
ら精製した：このようにして、合成した物質の活性を測
定するための条件を十分に満たすモデルを確立した。最
後に、いくつかの新たなペプチド類似物質について、新
規物質の治療上の有用性を予測することのできるモデル
において薬理学的な検討を行なった。
【０００８】得られた結果は本発明の根拠となるまった
く刷新的なものであり、出血作用を有するヘビ毒により
産生される酵素の阻害剤を合成することによって、ある
種のヘビ毒の致死的な作用を拮抗するための新しい方
法、そして病因として亜鉛依存性メタロプロテナーゼが
介在することが確認されているヒトでの種々の疾患にお
ける治療上の有効性をきわめて正確に予測するための新
しい系を開発することが可能であると言える。これらの
疾患とは、腫瘍による侵襲から慢性関節リウマチ、歯周
炎、角膜潰瘍、多発性硬化症、大動脈の動脈瘤、骨粗鬆
症、創傷の瘢痕形成、接触性皮膚炎、動脈硬化、敗血症
性ショック、寄生虫による侵襲、高血圧症、アレルギ
ー、免疫反応不全、アルツハイマー病、慢性気管支肺
炎、肺気腫、肝硬変、拡張型心筋症、および生殖系の機
能不全まで広範にわたるものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】このように、本発明の目
的は、ヒトおよび動物の治療に有効な薬物を特定し生産
するために、ペプチド類似型の物質の哺乳類における治
療活性を測定する方法であり、次の段階から構成され
る；ガラガラヘビ科およびクサリヘビ科に属するヘビの
毒から抽出した亜鉛依存性メタロプロテナーゼの阻害物
質としての当該物質の第一水準での阻害活性を、第一段
階の酵素阻害試験によって測定する；当該物質をヘビ毒
からの当該亜鉛依存性メタロプロテナーゼの阻害物質と
して定義するために十分な活性の閾値に関して、当該第
一水準を実証する；哺乳類の生体に内在し当該哺乳類に
おいて病的状態を誘発する亜鉛依存性メタロプロテナー
ゼの阻害物質としての当該物質の第二水準での阻害活性
を、第二段階の酵素阻害試験によって測定する；当該物
質を哺乳類に内在する当該亜鉛依存性メタロプロテナー
ゼの阻害物質として定義するために十分な活性の閾値に
関して、当該第二水準を実証する；そして標準的な薬理
学試験によって、当該病的状態に関する当該物質の活性
を実証する。
【００１０】また本発明は、ヒトにおける種々の病的状
態の治療のために使用することのできる物質をも対象と
している。これらの病的状態とはすなわち、ヘビに咬ま
れたことによる中毒から腫瘍細胞による侵襲、慢性関節
リウマチおよびその他の炎症、多発性硬化症、大動脈の
動脈瘤、骨粗鬆症、動脈硬化、敗血症性ショック、アル
ツハイマー病、アレルギー等に至るまでの広範なもので
ある；いずれの場合にも、主要な病原物質は、ヘビ毒に
よって産生されたものであるか哺乳類の細胞内で合成さ
れたものであるかにかかわらず、亜鉛依存性メタロプロ
テナーゼである。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明中に記載する物質に共通の
特徴は、クサリヘビ科およびガラガラヘビ科に属するヘ
ビによって多数産生される亜鉛依存性メタロプロテナー
ゼの有効な阻害物質であるという点である。この酵素
は、これらのヘビに咬まれることによって生じる致死的
因子の中で最も重要なものの１つである。
【００１２】本発明の著者らによって発表された研究
（Biomedica Biochimica Acta 50、769 〜773 、1991
年）から明らかなように、ヘビ毒はおそらくメタロプロ
テナーゼ阻害作用を有すると思われる大量の小ペプチド
を産生するため、ヘビ自身の組織が損傷を受けることは
ない。ただし、獲物の体内に注入された時に酵素が遊離
される必要があるため、これらの阻害物質の活性は非常
に弱い。したがって我々の課題は、ある意味でヘビ毒中
に検出されるペプチドと類似しているが、阻害活性がは
るかに高く（最高約1000倍）、通常の薬物と同様に経口
投与が可能である物質を合成することであった。
【００１３】ヘビ毒中に検出される酵素の阻害と、病因
が哺乳類の組織によって産生される亜鉛依存性メタロプ
ロテナーゼであると推定される動物モデルにおいて得ら
れる薬理学的成績との間に密接な関連があることが明ら
かになっており、本発明における新規の方法の根拠にも
なっている。したがって、ヘビ毒の亜鉛依存性メタロプ
ロテナーゼは一次スクリーニングのための優れたモデル
となること、そしてこの酵素の阻害物質は哺乳類の体内
に存在する亜鉛依存性メタロプロテナーゼによって誘発
されるあらゆる病的状態において有用であると予想され
ることが結論される。
【００１４】本発明に基づく方法の中での使用に適した
亜鉛依存性メタロプロテナーゼとして、特に次のものが
挙げられる：ヒガシダイヤガラガラヘビの出血素、ニシ
ダイヤガラガラヘビの出血素、マムシのボトロパシンお
よび出血素、そして該当するヘビの毒から抽出したある
種のカーペットバイパー出血素。
【００１５】メタロプロテナーゼに対する阻害物質の阻
害活性の強さを測定するために使用する手順として、酵
素の活性を阻害するために必要な阻害物質の量（ＩＣ5
0）を測定する試験を用いることができる。
【００１６】このようにして阻害活性を定量的に評価す
ることが可能となり、活性の強さに基づいて選択するこ
とができる。
【００１７】上述のように、阻害活性が高いということ
は、哺乳類の体内に内在しヒトにおける様々な障害およ
び疾患の原因となっている他のメタロプロテナーゼに対
しても当該物質が阻害作用を発揮する、ということを示
す非常に信頼性の高い指標であることが明らかになって
いる。
【００１８】したがって、本発明に記載する方法は、偶
然ではなく直接的な選択基準の下に新薬を製造するため
の手段を提供するものである。
【００１９】本発明に記載する方法に基づいて、治療上
の有効性をもついくつかの新しい阻害物質も発見されて
いる。
【００２０】本発明に記載する他の物質は新規のもので
はないが、同一の出願人によるPCTWO92／06108 に相当
する以前のアメリカ特許5,504,071 号の対象である。こ
れらの既知物質はすべて、ヘビ毒中に存在するメタロプ
ロテナーゼ阻害性ペプチド類似物質のグループに属す
る。これらの物質に関する本発明の対象は、ヒトを含め
た哺乳類の体内で産生され各種の疾患を誘発する内在性
メタロプロテナーゼを阻害する上での有効性を利用して
薬効のある物質として使用することである。
【００２１】本発明に記載する新規物質は、次のような
一般式を用いて表される：
【化１３】 ただし：Ａは
【化１４】 ＹはＯＨ、ＮＨ2 、ＮＨＯＨ、Ｎ（ＣＨ3 ）ＯＨ、およ
びエステル；Ｒ４はＣＨ−（ＣＨ3 ）2 、インドール−
２−yl、フェニル、シクロヘキシル、ＣＯ−ＮＨ2 、
（ＣＨ2 ）3 −ＮＨ−Ｆmoc ；ＸはＸa 、Ｘb 、Ｘc 、
５−メトキシ−１−インダノン−３−アセチル、ナフト
イル、ホモセリル、ただしＸa は
【化１５】 ただし Ｘ１は：ＣＨ、Ｎ、Ｃ−ＯＭe Ｗは ：Ｃ、Ｎ Ｙ１は：ＣＨ、Ｎ Ｚ１は：Ｃ、Ｎ Ｒ１は：ＣＯ、（ＣＨ2 ）2 −ＣＯ、ＳＯ2 、ＣＨ2 −
ＣＯ、Ｓ−ＣＨ2 −ＣＯ Ｒ２は：ＯＭe 、Ｈ、ＮＯ2 、Ｃl 、ＯＥt 、ＣＨ3 Ｒ３は：ＯＥt 、Ｈ、ＯＭe Ｘb は
【化１６】 ただし Ｘ２は：Ｏ、Ｎ、ＮＨ ｎは ：１、２ Ｒ６は：Ｈ Ｒ７は：Ｈ、ＯＨ、ＯＭe 、Ｃl Ｒ８は：Ｈ、ＯＭe Ｒ５は：ＣＯ Ｘc は
【化１７】 ただし Ｘ３は：Ｏ、ＣＨ Ｙ３は：Ｏ、ＣＨ Ｒ９は：ＣＯ または上述の物質の薬学上容認される塩、エステルある
いはアミド。
【００２２】物質の化学合成に関して説明する。 「試薬および溶媒」の項に使用する略語： ＨＢＴＵ＝Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，
Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムエサフルオロ
リン酸 ＴＥＡ ＝トリエチルアミン ＳＯＣl2＝塩化チオニル ＤＣＨＡ＝ジシクロヘキサラミン ＤＭＡＰ＝ジメチルアミノピリジン ＤＭＦ ＝ジメチルホルムアミド ＤＣＣ ＝ジシクロエシルカルボジイミド ＨＯＢＴ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＴＭＳＣl ＝トリメチルクロロキシレン ＣＨ2 Ｃl2＝ジクロロメタン ＣＨ3 ＣＮ＝アセトニトリル （Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ＝（Ｓ）−１，２，３，４テトラヒ
ドロ−９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−３−カ
ルボン酸 −Ｂoc−（Ｌ）−Leu −ＯＨ＝Ｎ−（tert−ブトキシカ
ルボニル）−（Ｌ）−Leu −ＯＨ −Ｂoc−（Ｌ）−Trp −ＯＨ＝Ｎ−（tert−ブトキシカ
ルボニル）−（Ｌ）−Trp −ＯＨ −Ｂoc−（Ｌ）−Phe −ＯＨ＝Ｎ−（tert−ブトキシカ
ルボニル）−（Ｌ）−Phe −ＯＨ −Ｂoc−（Ｌ）−Cha −ＯＨ＝Ｎ−（tert−ブトキシカ
ルボニル）−（Ｌ）−β−シクロヘキシル−Ala −ＯＨ −Ｂoc−（Ｌ）−Asn −ＯＨ＝Ｎ−（tert−ブトキシカ
ルボニル）−（Ｌ）−Asn −ＯＨ −Ｂoc−（Ｌ）−Lys （Ｆmoc ）−ＯＨ＝Ｎa −（tert
−ブトキシカルボニル） −Ｎe −（９−フルオロニルメトキシ−カルボニル）−
（Ｌ）−Lys −ＯＨ −ＰＩＣ ＝ピコリニル −２−ＰＭＴＡ＝（２−ピリミジルチオ）アセチル −４−ＰＴＡ ＝（４−ピリジルチオ）アセチル −３−ＡＰＺＣ＝（３−アミノ−２−ピラジニル）カル
ボニル −７−ＭＢＦ ＝７−メトキシ−２−ベンゾフロイル −４−ＭＱＣ ＝（４−メトキシ−２−キノリル）カル
ボニル −５−ＨＩＣ ＝（５−ヒドロキシ−インドール−２−
イル）カルボニル −５−ＭＩＣ ＝（５−メトキシ−インドール−２−イ
ル）カルボニル −２−ＦＵＲ ＝２−フロイル −３−ＦＵＲ ＝３−フロイル −２−ＢＺＦ ＝２−ベンゾフロイル −２−ＱＩＣ ＝キナルジル −２−ＰＺＣ ＝ピラジノイル −２−ＭＰＡ ＝２−メトキシフェニルアセチル −２−ＥＢＺ ＝２−エトキシベンゾイル −５−ＭＰＺ ＝（５−メチル−ピラジン−２−イル）
カルボニル −６−ＭＮＣ ＝６−メチルニコチノイル −５−ＭＩＡ ＝５−メトキシ−１−イナドン−３−ア
セチル −２，４−ＤＭＢ＝２，４−ジメトキシベンゾイル −４−ＭＢＺ ＝４−メトキシベンゾイル −４−ＮＢＺ ＝４−ニトロベンゾイル −４−ＣＢＺ ＝４−クロロベンゾイル −３−ＮＩＣ ＝ニコチノイル −４−ＮＩＣ ＝イソニコチノイル −３，４−ＤＭＢ＝３，４−ジメトキシベンゾイル −ＨＤＣ ＝３−フェニルプロピオニル −ＢＺＳ ＝ベンゼンスルホニル −４−ＥＢＺ＝４−エトキシベンゾイル −１−ＮＡＦ＝１−ナフトイル
【００２３】本発明に記載する方法および以下に説明す
る治療場面において使用可能である阻害物質として、以
下の化学式（２）で表される物質をここに挙げる。当該
物質は前述のようにアメリカ特許5,504,071 号に記載さ
れ発表されている。
【００２４】化学式（２）で表される物質： Ｑ−Ｂ−Ｔ （２） ただし、Ｑは以下のグループから選択される環状分子の
一価ラジカル
【化１８】 ただし Ｘ４はＣＨ2 、ＳまたはＣＨＯＨ ｎは０、１または２ Ｒ11はＨまたはＣＨ3 Ｒ10はＨ、ＣＨ3 、またはペプチド合成に使用される
１’窒素原子を阻害する化学基（ＣＢＺ、ＢＯＣ、Ｆmo
c およびアセタイル等） Ｙ４はＣＨ2 またはＣＯ Ｚ４はＮＨ、ＮＣＨ3 、ＯまたはＳ Ｂはグリシン、ロイシン、アラニンまたはバリンから成
るグループから選択される（Ｌ）−α−アミノ酸の二価
ラジカル；そしてＴはトリプトファン、フェニルアラニ
ン、フェニルグリシンから成るグループから選択される
芳香族（Ｌ）−アミノ酸の一価ラジカル、および薬学的
に許容されるそれらの塩、エステルおよびアミド、また
は以下に示す物質のうちの１つ、あるいは薬学的に許容
されるそれらの塩、エステルおよびアミド
【化１９】 ただしＲ11は上述のとおり、そしてＲ12はＨ、ＯＨ、Ｏ
ＣＨ3 、またはＣＨ3 。
【００２５】
【実施例】
実施例１ 物質Ｘ−（Ｌ）−Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−Ｙ合成の
ための一般的過程 一般的合成過程の第一段階は、中間体である（Ｌ）−Ａ
（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−Ｙを得ることである。その後
この物質に、３種類の合成方法を用いて残基Ｘを付加す
る。 Ｉ．中間体（Ｌ）−Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−ＣytＯＭe の
合成。 （Ｓ）−ＣytＯＭe ．ＨＣl （1.0 eq）およびＢoc−Ａ
（Ｒ4 ）−ＯＨ（1.1eq）をＣＨ3 ＣＮ中に溶解し、氷
浴中で冷却する。数分間撹拌した後、ＨＢＴＵ（1.2 e
q）およびＴＥＡ（2.2 eq）を添加し、混合液を撹拌し
ながら室温になるまで放置する。この後、回転式蒸発器
上で反応液を濃縮し、ＣＨ2 Ｃl2を添加する。通常の酸
塩基処理を用いて洗浄する。有機層に無水硫酸ナトリウ
ムを添加し、冷却する。乾燥させ、得られた反応産物を
真空下でＫＯＨと共に一晩放置する。Ｂoc−（Ｌ）−Ａ
−（Ｒ4 ）−（Ｓ）−ＣytＯＭe （1.0 eq）を無水ジオ
キサン中にとり、溶液を撹拌しながら０℃まで冷却した
後、アルゴンガス中に置く。温度が安定した後、無水ジ
オキサン中のＨＣl ４Ｍ（４ eq ）を滴下し、混合液を
撹拌しながら液温が室温になるまでアルゴンガス中に放
置する。反応産物に過酸化物を含まない無水エチルエー
テルを添加し、回転式蒸発器上で濃縮する。残渣をメタ
ノール中に回収し、過酸化物を含まない無水エチルエー
テルによって沈澱させる。撹拌しながら室温中に放置
し、その後氷室に移す。沈渣をＧ４上で濾過し、Ｐ2 Ｏ
5 と共に真空下に置く。（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）
−ＣytＯＭe が得られる。
【００２６】II．Ｘ−（Ｌ）−Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃ
yt−ＯＨ合成のための方法ａ）。 Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe ．ＨＣl （1.0 e
q）を無水ＣＨ3 ＣＮ中Ｘ−ＯＨ酸（1.2 eq）溶液に添
加する。この溶液を撹拌しながら氷浴中で冷却し、ＨＢ
ＴＵ（1.2 eq）およびＴＥ（2.2 eq）を添加する。反応
が完了するまで反応を進める。反応液を濃縮し、ＣＨ2
Ｃl2を添加した後、通常の酸塩基洗浄によって処理す
る。有機層に無水硫酸ナトリウムを添加し、冷却する。
反応産物Ｘ−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe （1.
0 eq）をＣＨ3 ＣＮおよびＨ2 Ｏ中にとる。この溶液を
撹拌しながら氷浴中で冷却し、Ｎa ＯＨ 0.1Ｎ（2.0 e
q）を添加する。この溶液を数時間反応させ、温度を室
温まで上昇させる。反応産物をＳＰＥ Ｃ18上で精製す
る。Ｘ−（Ｌ）−Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨが得
られる。
【００２７】III ．Ｘ−（Ｌ）−Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−
Ｃyt−ＯＨ合成のための方法ｂ）。 アルゴン気流下で撹拌しながら、無水ＣＨ2 Ｃl2中Ｘ−
ＯＨ酸ＤＣＨＡ塩（1.0 eq）溶液にピリジン（1.17 eq
）およびＳＯＣl2（1.165 eq）を添加する。塩化チオ
ニルを添加してから１分後に、（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−
（Ｓ）−ＣytＯＭe ．ＨＣl （0.604 eq）および無水Ｃ
Ｈ2 Ｃl2中ＤＭＡＰ（1.202 eq）を添加する。反応が完
了したらＡc ＯＥt を添加し、有機層を飽和Ｎa Ｃl 溶
液で洗浄した後、10％クエン酸で洗浄し、さらに５％炭
酸水素塩で洗浄する。最後に、有機層のｐＨが中性にな
るまで飽和Ｎa Ｃl 溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム
を添加して冷却する。Ｘ−（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−
（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe を含有する有機層を乾燥させた
後、加水分解する。エステルＸ−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）
−Ｃyt−ＯＭe （1.0 eq）をＣＨ3 ＣＮおよびＨ2 Ｏ中
にとる。この溶液を撹拌しながら氷浴中で冷却し、Ｎa
ＯＨ 0.1Ｎ（2.0 eq）を添加する。この溶液を数時間反
応させ、温度を室温まで上昇させる。反応産物をＳＰＥ
Ｃ18上で精製する。Ｘ−（Ｌ）−Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−
Ｃyt−ＯＨが得られる。
【００２８】IV．Ｘ−（Ｌ）−Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃ
yt−ＯＨ調製のための方法ｃ）。 −Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−ＣytＯＭe ．ＨＣl （1.0 eq）
およびＸ−ＯＨ（1.1eq）をＣＨ3 ＣＮ中に溶解し、氷
浴中で冷却する。数分間撹拌した後、ＨＢＴＵ（1.2 e
q）およびＴＥＡ（2.2 eq）を添加し、混合液を撹拌し
ながら放置し、温度を室温まで上昇させる。反応が完了
したらＡc ＯＥt を添加し、有機層を飽和Ｎa Ｃl 溶液
で洗浄した後、10％クエン酸で洗浄し、さらに５％炭酸
水素塩で洗浄する。最後に、有機層のｐＨが中性になる
まで飽和Ｎa Ｃl 溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムを
添加して冷却する。Ｘ−（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）
−Ｃyt−ＯＭe を含有する有機層を乾燥させた後、加水
分解する。エステルＸ−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−
ＯＭe （1.0 eq）をＣＨ3 ＣＮおよびＨ2 Ｏ中にとる。
この溶液を撹拌しながら氷浴中で冷却し、Ｎa ＯＨ 0.1
Ｎ（2.0 eq）を添加する。この溶液を数時間反応させ、
温度を室温まで上昇させる。反応産物をＳＰＥ Ｃ18上
で精製する。Ｘ−（Ｌ）−Ａ（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−
ＯＨが得られる。
【００２９】Ｖ．合成の特別な例。 ＰＩＣ−（Ｌ）−Leu −（Ｓ）−Ｃyt−ＮＨＯＨの合成 無水塩化メチレン４ ml 中にPic −Leu −Ｃyt−ＯＨ
（1.0 eq）43 mg を溶解した溶液を室温で撹拌しなが
ら、19 mg のＨＯＢＴ（1.25 eq ）および20.5 mgのＤ
ＣＣ（1.0 eq）を添加する。60分後に溶液を濾過し、濾
液に8.5 mgの塩酸ヒドロキシルアミン（1.02 eq ）およ
び17μl のトリエチルアミン（1.02 eq ）の塩化メチレ
ン（３ ml ）中混合液を添加する。室温で18時間撹拌し
た後、回転式蒸発器上で濃縮する。次に20 ml の水を添
加し、混合液のｐＨが２となるまで２ＮのＨＣl により
酸性化する。飽和塩化ナトリウム溶液10 ml を添加し、
20 ml の酢酸エチルにより混合液の抽出を２回行なう。
有機層を併せた抽出液を中性になるまで飽和塩化ナトリ
ウム溶液で洗浄する。次に有機層に無水硫酸ナトリウム
を添加し、冷却する。有機層を乾燥させた後、５ ml の
メタノールにとる。このようにして得た溶液を２ＮのＨ
Ｃl により酸性化し、過剰な開始化合物を沈澱させる。
溶液を濾過して乾燥させた後、凍結乾燥する。次の物質
が得られる：ピコリニル−（Ｌ）−Leu −（Ｓ）−Ｃyt
−ＮＨＯＨ（ＰＩＣ−（Ｌ）−Leu −（Ｓ）−Ｃyt−Ｎ
ＨＯＨと略す）（収率50％）。（分子量449.49；実験式
Ｃ24Ｈ27Ｎ5 Ｏ4 ；融点130 ℃；元素組成：Ｃ＝64.23
（理論値64.13 ）、Ｈ＝6.11（理論値6.05）、Ｎ＝15.4
7 （理論値15.58 ）。）
【００３０】ＰＩＣ−（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）−
Ｃyt−ＮＨＯＨ（Ａ−（Ｒ4 ）は（Ｌ）−Leu に相当、
ＰＩＣはピコリニルに相当）の合成のために用いたのと
同一の手順によって、以下の産物を調製した：ＰＩＣ−
（Ｌ）−Leu −（Ｓ）−Ｃyt−Ｎ−（ＣＨ3 ）−ＯＨ
（分子量463.51、実験式Ｃ25Ｈ29Ｎ5 Ｏ4 ；融点145
℃；元素組成：Ｃ＝64.81 （理論値64.78）、Ｈ＝6.35
（理論値6.31）、Ｎ＝15.08 （理論値15.11 ）。）
【００３１】実施例２ ５−ＭＩＣ−（Ｌ）−Ｃha−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨの合成 Ｉ．中間体メチル−（Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒ
ドロ−９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−３−カ
ルボキシレートの合成。 10 g（1.0 eq）の（Ｌ）−Trp −ＯＨおよび6.1 mlの40
％ホルムアルデヒド（1.8 eq）に水および0.1 Ｎ硫酸の
混合液（ｖ／ｖ２：１）120 mlを添加し、撹拌しながら
室温で16時間放置した。その後、得られた沈渣をＧ４上
で濾過し、冷水で洗浄した後、真空下でＰ2 Ｏ5 により
一晩乾燥させた。このようにして得られた反応産物
（Ｓ）−１，２，３，４テトラヒドロ−９Ｈ−ピリド
［３，４−ｂ］インドール−３−カルボン酸（（Ｓ）−
ＣytＯＨ．Ｈ2 ＳＯ4 と省略）（収率80％）を次の段階
に使用した。８g の（Ｓ）−ＣytＯＨ．Ｈ2 ＳＯ4 （1.
0 eq）および18.6 ml のクロロトリメチルシラン（ＴＭ
ＳＣl と省略、4.0 eq）に90 mlの純粋メタノールを添
加した。ＴＭＳＣl を添加してから30分間、室温におい
てアルゴン存在下で反応を進めた後、温度を55℃まで上
昇させ、アルゴン存在下で一晩還流した。過酸化物を含
まない無水エーテルを用い、反応液を真空下で３回濃縮
した。残渣を５ ml のメタノールにとり、無水エーテル
により沈澱させた。この物質を冷却し、Ｇ４上で濾過し
た。産物をＰ2 Ｏ5 により一晩乾燥させた。（Ｓ）−Ｃ
yt−ＯＭe −ＨＣl が得られた（収率87％）。
【００３２】II．中間体（Ｌ）−Ｃha−（Ｓ）−ＣytＯ
Ｍe の合成。 128 mgの（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe −ＨＣl （1.0 eq）およ
び108 mgのＮ−（tert−ブトキシカルボニル）−Ｌ−β
−シクロヘキシル−Ala −ＯＨ（Ｂoc−Ｃhaと省略）
（1.1 eq）に氷浴中で冷却した10 ml のアセトニトリル
（ＣＨ3 ＣＮ）を添加し、混合液を数分間撹拌した。そ
の後181 mlのＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，
Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオ
ロホスフェート（ＨＢＴＵと省略）（1.2 eq）および12
2 μl のトリエチルアミン（ｄ＝0.726 、2.2 eq）を添
加し、撹拌しながら４時間放置して温度を室温まで上げ
た。この後、反応液の容積が８ ml になるまで回転式蒸
発器により濃縮し、90 mlのジクロロメタン（ＣＨ2 Ｃl
2）を添加した。次にこれを80 ml の塩水中で洗浄し、
さらに80 ml の４％硫酸水素カリウム中で２回洗浄し
た。その後、中性になるまで80 ml の塩水によって３回
洗浄し、90ml の５％炭酸水素塩中で２回洗浄した。ｐ
Ｈが中性になるまで飽和食塩水により洗浄した。有機層
に無水硫酸ナトリウムを添加し、冷却した。得られた物
質を乾燥させ、得られた発泡体を真空下でＫＯＨと共に
一晩放置した。残渣Ｂoc−Ｃha−（Ｓ）−ＣytＯＭe を
８ ml の無水ジオキサン中にとり、溶液を撹拌しながら
０℃まで冷却した後、アルゴンガス中に置いた。温度が
安定化した後、無水ジオキサン中４Ｍ ＨＣl 3.1 mlを
滴下し、撹拌しながらアルゴンガス存在下で４時間放置
し反応液の温度を室温に戻した。過酸化物を含まない無
水エーテルを用いて、反応産物を回転式蒸発器により３
回濃縮した。残渣を３ ml のメタノール中にとり、過酸
化物を含まない無水エーテル500 mlによって沈澱させ
た。その後撹拌しながら室温に１時間放置し、冷室でさ
らに３時間放置した。沈渣をＧ４上で濾過し、Ｐ2 Ｏ5
と共に真空下に置いた。（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）
−Ｃyt−ＯＭe （Ａ−（Ｒ4 ）は（Ｌ）−Ｃhaに相当）
の合成に用いたのと同一の手順によって、以下の産物を
調製した： ＨＣl.（Ｌ）−Trp −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe ＨＣl.（Ｌ）−Phe −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe ＨＣl.（Ｌ）−Leu −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe ＨＣl.（Ｌ）−Asn −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe ＨＣl.（Ｌ）−Lys （Ｆmoc ）−（Ｓ）−Ｃyt−−ＯＭ
e
【００３３】III ．方法ａ）に基づく５−ＭＩＣ−Ｃha
−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨの合成。 撹拌しながら氷浴中で冷却した無水アセトニトリル（Ｃ
Ｈ3 ＣＮ）15 ml 中の５−メトキシ−２−インドールカ
ルボン酸（Aldrich ）100 mg（1.1 eq、５−ＭＩＣと省
略）溶液に200 mgのＣha−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe ．ＨＣ
l （1.2 eq）、217 mgのＨＢＴＵ（Aldrich ）（1.2 e
q）および150 μl のトリエチルアミン（ｄ＝0.726 、
2.2 eq）を添加した。反応を３時間続けた。反応が終了
してから反応液を濃縮し、90 ml の塩化メチレンを添加
した後通常の酸塩基洗浄による処理を行なった。有機層
に無水硫酸ナトリウムを添加し、冷却した。反応産物５
−ＭＩＣ−Ｃha−Ｃyt−ＯＭe 250 mg（1.0 eq）を10 m
l のアセトニトリルおよび0.7 mlの水にとった。溶液を
撹拌しながら氷浴中で冷却し、9.3mlの0.1 Ｎ Ｎa Ｏ
Ｈ（2.0 eq）を添加した。溶液を12時間撹拌し、室温に
戻した。反応液を次のようにして処理した： １）非加水分解エステルからの精製 反応液を、予め反応溶媒で平衡化したＣ18ＳＰＥカラム
（Backer）１ gに添加した。産物５−ＭＩＣ−Ｃha−
（Ｓ）−ＣytＯＨのみを含有する溶出液に１ＮのＨＣl
を添加することによって酸性化し、溶液が濁るまで水を
添加した。 ２）酸の精製 次に、産物を含有する溶液を、予め試料酸溶離液で平衡
化した２ＳＰＥカラム（Backer）に添加した。溶出画分
を除去し、ＳＰＥカラムをメタノールで溶出した。有機
層を併せ、容積が３ ml となるまで濃縮し、500 mlの0.
1 Ｎ ＨＣl によって沈澱させた。冷室で冷却した後、
沈渣をＧ４上で濾過し、真空下でＰ2 Ｏ5と共に乾燥さ
せた（収率60％）。５−ＭＩＣ−Ｃha−（Ｓ）−Ｃyt−
ＯＨ（物質１）が得られた。
【００３４】実施例３ ５−ＭＩＣ−（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−Ｏ
Ｈ（Ａ−（Ｒ4 ）は（Ｌ）−Ｃhaに相当、５−ＭＩＣは
（５−メトキシ−インドール−２−イルに相当）の合成
に用いたのと同一の手順によって、以下の産物を調製し
た： ２−ＰＭＴＡ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２） ４−ＰＴＡ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３） ３−ＡＰＺＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質４） ７−ＭＢＦ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質５） ４−ＭＱＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質６） ５−ＨＩＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質７） ５−ＭＩＣ−（Ｌ）−Ｐhe−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質８） ＰＩＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質９） ２−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ｃha−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１０） ２−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ｐhe−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１１） （Ｌ）−Ｈomo Ｓer−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１２）
【表１】
【００３５】実施例４ 方法ｂ）に基づく３−Ｆur−（Ｌ）−Leu −（Ｓ）−Ｃ
yt−ＯＨの合成。 ５ ml の無水ＣＨ2 Ｃ12中３−フロン酸ＤＣＨＡ塩120
mg（1.0 eq）の溶液をアルゴン気流下で撹拌しながら、
39μl のピリジン（水酸化カリウム中）（1.17eq ）お
よび35μl のＳＯＣ12（1.165 eq）を添加した。塩化チ
オニルを添加してから１分後に、100 mgの（Ｌ）−Leu
−（Ｓ）−ＣytＯＭe ．ＨＣl （0.604eq）および３ ml
の無水ＣＨ2 Ｃ12中ＤＭＡＰ 64 mg（1.202 eq）を添
加した。１時間後に80 ml の酢酸エチルを添加し、有機
層を飽和Ｎa Ｃl 溶液で洗浄した後、10％クエン酸（80
* ２ ml ）で洗浄し、さらに５％炭酸水素塩（80* ２ m
l ）で洗浄した。その後有機層のｐＨが中性になるまで
飽和Ｎa Ｃl 溶液（80*３ ml ）で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムを添加して冷却した。３−フロイル−（Ｌ）−
Leu −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe を含有する有機層を乾燥さ
せ、加水分解した。産物である118 mgの３−フロイル−
Leu −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe （1.0 eq）を10 ml のＣＨ
3 ＣＮおよび4.8 mlのＨ2 Ｏ中にとった。この溶液を撹
拌しながら氷浴中で冷却し、5.2 mlの0.1 ＮＮa ＯＨ
（2.0 eq）を添加した。溶液を12時間撹拌した後、室温
まで戻した。反応液を次のようにして処理した：
【００３６】１）非加水分解エステルからの精製 反応液を、予め反応溶媒で平衡化したＣ18 ＳＰＥカラ
ム（Backer）１ gに添加した。産物３−フロイル−
（Ｌ）−Leu −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨのみを含有する溶出
液に１ＮのＨＣl を添加することによって酸性化し、溶
液が濁るまで水を添加した。 ２）酸の精製 次に、産物を含有する溶液を、予め試料酸溶離液で平衡
化した２ＳＰＥカラム（Backer）に添加した。溶出画分
を除去し、ＳＰＥカラムをメタノールで溶出した。有機
層を併せ、容積が３ ml となるまで濃縮し、500 mlの0.
1 Ｎ ＨＣl によって沈澱させた。冷室で冷却した後、
沈渣をＧ４上で濾過し、真空下でＰ2 Ｏ5と共に乾燥さ
せた。３−フロイル−（Ｌ）−Leu −（Ｓ）−Ｃyt−Ｏ
Ｈ（３−Ｆur−（Ｌ）−Leu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨと省
略）が得られた（収率60％）（物質13）。
【００３７】実施例５ ３−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−Ｏ
Ｍe （Ａ−（Ｒ4 ）は（Ｌ）−Leu に相当、３−ＦＵＲ
は３−フロイルに相当）の合成に用いたのと同一の手順
によって、以下の産物を調製した： ５−ＭＩＣ−（Ｌ）−Ｔrp−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１４） ２−ＢＺＦ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１５） ２−ＱＩＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１６） ５−ＭＩＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１７） ２−ＰＺＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１８） ２−ＭＰＡ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質１９） ２−ＥＢＺ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２０） ５−ＭＰＺ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２１） ６−ＭＮＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２２） ５−ＭＩＡ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２３）
【表２】
【００３８】実施例６ 方法ｃ）に基づく２，４−ＤＭＢ−（Ｌ）−Leu −
（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨの合成。 63.4 mg の２，４−ジメトキシ塩化安息香酸（Aldrich
）（1.2 eq）に15 mlのオキシド不在乾燥ＣＨ2 Ｃ12を
添加した。混合液を撹拌し、100 mgのLeu −（Ｓ）−Ｃ
yt−ＯＭe ．ＨＣl （1.0 eq）を添加した後、さらに81
μl のＴＥＡ（2.2 eq）を添加した。この溶液を氷浴中
で2.5 時間撹拌し、90 ml のＣＨ2 Ｃ12を添加した。溶
液を80 ml の飽和Ｎa Ｃl 溶液で洗浄した後、50 ml の
0.1 ＮＨＣl で洗浄し、さらにｐＨが中性になるまで80
ml の飽和Ｎa Ｃl 溶液で３回洗浄した。有機層に無水
硫酸ナトリウムを添加し、冷室に置いた。２，４−ジメ
トキシベンゾイル−Leu −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe を含有
する有機層を乾燥させ（収率95％）、加水分解した。13
3 mg（1.0 eq）のエステルを19 ml のＣＨ3 ＣＮおよび
11.5 ml のＨ2 Ｏにとり、溶液を氷浴中で冷却した後、
5.23 ml の0.1 Ｎ Ｎa ＯＨ（2.0 eq）を添加した。こ
の溶液を６時間撹拌し、温度を室温に戻した。
【００３９】反応終了後、反応液を次のようにして処理
した： １）非加水分解エステルからの精製 反応液を、予め反応溶媒で平衡化したＣ18ＳＰＥカラム
（Backer）１ gに添加した。産物２，４−ジメトキシベ
ンゾイル−Leu −（Ｓ）−Ｃyt−ＯＭe のみを含有する
溶出液に１ＮのＨＣl を添加することによって酸性化
し、溶液が濁るまで水を添加した。 ２）酸の精製 次に、産物を含有する溶液を、予め試料酸溶離液で平衡
化した２ＳＰＥカラム（Backer）に添加した。溶出画分
を除去し、ＳＰＥカラムをメタノールで溶出した。有機
層を併せ、容積が３ ml となるまで濃縮し、500 mlの0.
1 Ｎ ＨＣl によって沈澱させた。冷室で冷却した後、
沈渣をＧ４上で濾過し、真空下でＰ2 Ｏ5 と共に乾燥さ
せた。２，４−ジメトキシベンゾイル−（Ｌ）−Leu −
（Ｓ）−Cyt −ＯＨ（２，４−ＤＭＢ−（Ｌ）−Leu −
（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨと省略）が得られた（収率74％）
（物質24）。
【００４０】実施例７ ３−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ａ−（Ｒ4 ）−（Ｓ）−Ｃyt−Ｏ
Ｍe （Ａ−（Ｒ4 ）は（Ｌ）−Leu に相当、３−ＦＵＲ
は３−フロイルに相当）の合成に用いたのと同一の手順
によって、以下の産物を調製した： ４−ＭＢＺ−（Ｌ）−Ｔrp−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２５） ４−ＮＢＺ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２６） ４−ＣＢＺ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２７） ３−ＮＩＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２８） ４−ＮＩＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質２９） ３，４−ＤＭＢ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３０） ＨＤＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３１） ＢＺＳ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３２） ４−ＥＢＺ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３３） ２−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ｔrp−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３４） ２−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ａsn−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３５） ２−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ｌys（Ｆmos ）−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３６） １−ＮＡＦ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ （物質３７）
【表３】
【００４１】物質の生化学的活性に関する説明 実施例８ 本発明に記載する物質について、ガラガラヘビ科および
クサリヘビ科に属するヘビの毒（例えばニシダイヤガラ
ガラヘビの出血素、ボトロパシン、マムシの出血素、カ
ーペットバイパーからの各種出血素）から抽出した各種
亜鉛依存性メタプロテナーゼに対する活性の試験を実施
した。以下に示すのは、処理の容易さのためスクリーニ
ングで使用したヒガシダイヤガラガラヘビからの出血素
の精製に関する説明である。１ gの凍結乾燥毒素（アメ
リカ、シグマ社から購入）をｐＨ8.0 のTris−ＨＣl 緩
衝液に溶解し、ＤＥＡＥ Sephadex Ａ-50 樹脂の入った
クロマトグラフィー用カラムに添加した。０〜１Ｍの濃
度のＮa Ｃl を含有する濃度勾配緩衝液を溶離液として
使用し、ヘビ毒中に存在する蛋白質画分として４種類の
主ピークが得られた。これらを濃縮して脱塩した後、以
下に記載する方法を用いてメタロプロテナーゼの存在に
ついて試験した。次に、メタロプロテナーゼ活性の大部
分が含まれていた画分ＩをSephadex Ｇ−150 樹脂の入
ったクロマトグラフィー用カラムに添加し、ｐＨ7.5 の
Tris−ＨＣl 緩衝液で溶出した。２種類の主ピークが得
られ、メタロプロテナーゼ活性は最初のピークに含まれ
ていることが確認された。異物を除去するために、Seph
adex Ｇ−75樹脂を用いてさらに精製した。このように
して精製した酵素を凍結乾燥し、使用時までフリーザー
に保存した。
【００４２】メタロプロテナーゼの活性は、基質として
Bachem社が製造した蛍光物質２−アミノベンゾイル−ア
ラニル−Gly −ロイシル−アラニル−ｐ−ニトロベンジ
ルアミドを使用し、蛍光強度測定器（Perkin Elmer LS
50 B）によって測定した。５μg の酵素に合成した物質
を種々の量で添加し、温度を℃に設定した系の中で撹拌
した。蛍光物質の生成について30分間追跡し（励起：32
0 nm、発光：420 nm）、得られた曲線を物質を添加しな
い場合の対照曲線と比較した。
【表４】
【００４３】実施例９ 上述の方法を用いて、以下の表５に示す物質の確認の際
の出典となったアメリカ特許5,504,071 号に記載の化学
物質（２）の試験を実施した。物質はすべて良好な酵素
阻害活性を有しており、ＩＣ50は１×10-5Ｍ〜１×10-7
Ｍの間であった。
【表５】
【００４４】表４および５に示す結果は、本申請および
アメリカ特許5,504,071 号に記載された物質がすべて、
ヒガシダイヤガラガラヘビの毒から精製した酵素を阻害
する上で非常に有効であることを証明するものであり、
また他のガラガラヘビおよびクサリヘビの毒から精製し
た他のメタロプロテナーゼに対しても中等度の阻害活性
を有することを示すものであるため、あらゆる種類のヘ
ビ毒メタロプロテナーゼに対する阻害物質であると考え
られる。以下の実施例10、11および12は、ヒトおよび哺
乳類に内在するある種のメタロプロテナーゼに対するい
くつかの物質の阻害活性を示すものである。
【００４５】実施例１０ 組み換え型ヒトゼラチナーゼＡに対する“in vitro”で
の作用 ヒトのゼラチナーゼＡは、あらゆる腫瘍細胞が転移の間
に高濃度で放出する酵素であり、多くの病的過程におけ
る刺激された細胞の産物としても認識されている。遺伝
子組み換えバイオテクノロジーによって得られた蛋白質
（イギリス、ケンブリッジ、Strangeways Laboratorie
s）を用いて、この酵素に対するアッセイを実施した。
合成した物質の存在下あるいは不在下で、酵素によって
切断された蛍光基質の量を測定することによって、酵素
活性の経時変化を調べた（Perkin Elmer L 50 B 蛍光強
度測定器）。
【表６】 表６ 物質 濃度 ％阻害 本特許の申請：ｎ．１ 7 ×10-7Ｍ ２５ “ｎ．１１ 8.7 ×10-7Ｍ ４０ “ｎ．１３ 9.4 ×10-7Ｍ ４１ “ｎ．１４ 6.0 ×10-7Ｍ ３７ “ｎ．１６ 8.0 ×10-7Ｍ ２３ “ｎ．２２ 8.0 ×10-7Ｍ ４７ “ｎ．２３ 8.0 ×10-7Ｍ ４０ “ｎ．３１ 8.0 ×10-7Ｍ ３０ ＰＣＴ ＷＯ92／06108 から 実施例１：Ｚ−ＰＲＯ−ＬＥＵ−ＣＹＴ 1.8 ×10-6Ｍ ６４ 実施例８：ＦＵＲ−ＬＥＵ−ＴＲＰ 1.0 ×10-5Ｍ ４１ 実施例８：Tiof−ＬＥＵ−ＴＲＰ 8.0 ×10-6Ｍ ６０ 実施例９：Pirr−ＬＥＵ−ＴＲＰ 9.0 ×10-6Ｍ ３３ 実施例10：Ｍe ＰＲＯ−ＡＬＡ−ＣＹＴ 9.0×10-6Ｍ ３９ 実施例15：Ｚ−Pip −ＬＥＵ−ＴＲＰ 8.0×10-6Ｍ ６３
【００４６】得られた結果から、本申請に記載した物質
およびＰＣＴ ＷＯ92／06108 に記載した物質は、ヘビ
毒の出血性因子および病的障害への関与が大きいヒトゼ
ラチナーゼＡに対する強力な阻害物質であることが示さ
れる。
【００４７】実施例１１ 組み換え型ヒトゼラチナーゼＢに対する“in vitro”で
の作用 腫瘍細胞が放出するもう１つの酵素であるヒトゼラチナ
ーゼＢに対するアッセイを、やはり遺伝子組み換えバイ
オテクノロジーによって得られた蛋白質（イギリス、ケ
ンブリッジ、Strangeways Laboratories）を用いて実施
した。上述の例と同様に、合成した物質の存在下あるい
は不在下で、酵素によって切断された蛍光基質の量を測
定することによって、酵素活性の経時変化を調べた（Pe
rkin Elmer L 50 B 蛍光強度測定器）。
【表７】 表７ 物質 濃度 ％阻害 本特許の申請：物質ｎ．９ 1.1 ×10-5Ｍ ２０ “ｎ．１０ 1.1 ×10-5Ｍ ３２ “ｎ．１６ 1.0 ×10-5Ｍ ５１ “ｎ．２１ 5.5 ×10-6Ｍ ４３ “ｎ．２４ 1.0 ×10-5Ｍ ４８ “ｎ．３２ 1.0 ×10-5Ｍ ４２ ＰＣＴ ＷＯ92／06108 から 実施例１：Ｚ−ＰＲＯ−ＬＥＵ−ＣＹＴ 9.0 ×10-6Ｍ ３２ 実施例８：ＦＵＲ−ＬＥＵ−ＴＲＰ 1.0 ×10-5Ｍ ２２ 実施例10：Ｍe ＰＲＯ−ＬＥＵ−ＣＹＴ 1.1×10-5Ｍ ３７
【００４８】上述の結果から、病的反応の間にヒトの細
胞により産生されるもう１つの酵素であるゼラチナーゼ
Ｂもまた、本申請およびＰＣＴ ＷＯ92／06108 に記載
の物質によって阻害されることが示される。
【００４９】実施例１２ 組み換え型ヒトコラゲナーゼに対する“in vitro”での
アッセイ 既述の酵素測定法（蛍光物質を含有する基質ペプチドの
切断を蛍光強度測定により検出）を用いて、哺乳類の生
体におけるあらゆる炎症反応に関与するとされる酵素、
好中球コラゲナーゼに対する試験を一部の物質に関して
行なった。この場合もやはり、遺伝子組み換えバイオテ
クノロジーによって純粋な酵素を得た。
【表８】 表８ 物質 濃度 ％阻害 本特許の申請：物質ｎ．10 2.1 ×10-5Ｍ ５１ “ｎ．１１ 2.2 ×10-5Ｍ ２７ “ｎ．２４ 2.0 ×10-5Ｍ １９ “ｎ．２５ 5.2 ×10-5Ｍ ２３ “ｎ．２７ 2.1 ×10-5Ｍ ２８ ＰＣＴ ＷＯ92／06108 から 実施例１：Ｚ−ＰＲＯ−ＬＥＵ−ＣＹＴ 1.8 ×10-5Ｍ ２３ 実施例８：ＦＵＲ−ＬＥＵ−ＴＲＰ 2.4 ×10-5Ｍ １２ 実施例９：Ｐirr −ＬＥＵ−ＴＲＰ 1.1×10-5Ｍ １５
【００５０】結果から、炎症反応の間にヒトの細胞によ
り産生される最も重要な酵素のうちの１つに対してもあ
る程度の阻害活性を有することが示される。
【００５１】物質の薬理活性に関する説明。 実施例１３ 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）に対する“in vitro”での活
性。 ＴＮＦはある種の生理的防御反応において非常に重要な
役割を果たすことがよく知られているが、一方で過剰な
量、あるいは長時間にわたって循環中に放出されると重
篤な損傷を誘発する。最近、ＴＮＦが細胞表面上で活性
型として産生される際に亜鉛依存性メタロプロテナーゼ
が関与することが確認された。このため、本発明および
アメリカ特許5,504,071 号に記載されている物質の中か
ら選択したある種の物質がヒトの細胞培養培地中（Jurk
at）への活性ＴＮＦの放出を阻害し得るかどうか検討し
た。メタロプロテナーゼ阻害剤の存在下または不在下
で、細胞を72時間培養した。その後、活性化剤（ＰＭＡ
およびイオノフォアであるカルシウム）を用いてＴＮＦ
の放出を促進し、Elisa 試験（Genzyme ）を用いて培養
培地中に因子を添加した。
【００５２】本発明に記載の物質９、10および25はいず
れも、細胞によるＴＮＦ放出に対して用量依存的な阻害
作用を示したが、その程度は様々であった（物質９のＩ
Ｃ50値は８μg ／ml付近；物質10は200 μg ／ml付近；
および物質25は0.7 μg ／ml付近）。また、物質Ｚ−Ｐ
ＲＯ−ＬＥＵ−Ｃyt（アメリカ特許5,504,071 号の実施
例１に記載）自体も活性を示し、ＩＣ50値は５μg ／ml
付近であった。この物質については、ヒトの他の培養細
胞株（クローン１）からのＴＮＦ放出を評価するために
別の試験も実施した：この場合も、阻害活性が認められ
た（ＩＣ50値は１μg ／ml未満）。
【００５３】これらの結果から、ヘビ毒メタロプロテナ
ーゼの阻害剤はヒト細胞からのＴＮＦ放出をも阻害する
ことができるため、慢性関節リウマチ（および他の型の
関節炎）から敗血症性ショック、多発性硬化症、ウイル
ス感染に起因する免疫不全に至るまでの種々の病的状態
の治療に有用であると思われる。
【００５４】実施例１４ ＴＮＦに対する“in vivo ”での活性。 “in vitro”での試験に使用したのと同一の物質を用い
て、致死用量のＬＰＳ（ＴＮＦの放出を促進する細菌由
来物質）を投与することによりBalb／c 系統のマウスで
起こる死を阻害する作用があるかどうか検討するための
試験も実施した。すべての物質がマウスの致死率を改善
する作用を示し、ＩＣ50は0.5 〜５μg／マウス（腹腔
内注射）の範囲であった。これらの結果から、ヘビ毒メ
タロプロテナーゼの阻害剤はＴＮＦによって起こるあら
ゆる病的状態において有用であることが確認される。
【００５５】実施例１５ ヒトコラゲナーゼに対する活性 本申請に記載する物質、およびアメリカ特許5,504,071
号の物質について、ヒト好中球から精製した酵素コラゲ
ナーゼに対する活性の試験を行なった。物質の半数以上
がこの酵素を強く阻害した。この酵素はまた、炎症反応
（慢性関節リウマチ、変形性関節症等）、腫瘍による侵
襲、創傷の瘢痕形成、歯周炎、角膜潰瘍等にも直接関与
することが知られている。このため、ヘビ毒メタロプロ
テナーゼに対する阻害試験の結果からヒト細胞により産
生されるコラゲナーゼに対する阻害活性を非常によく予
測することが可能であり、阻害自体に関連する治療上の
重要な有効性についても予測できる。
【００５６】実施例１６ ヘビ毒により誘発される出血の阻害 ヒガシダイヤガラガラヘビの毒から精製したメタロプロ
テナーゼに対する“invitro”での優れた阻害物質であ
るＦur−ＬＥＵ−ＴＲＰ（アメリカ特許5,504,071 号の
実施例８に記載）について、ヘビ毒により誘発される出
血および致死作用を拮抗する作用があるかどうか検討す
るため、マウスにおける“in vivo ”での試験を実施し
た。結果から、この物質を各種ヘビ毒の出血性因子と共
にインキュベートすると毒性作用が中和されることが示
された。また、33μg ／マウスの用量においてこの物質
は、ヘビ毒の後（30分後まで）に投与した場合であって
も、ヘビ毒の注射による死からマウスを救うことができ
た。上述のアメリカ特許、および本申請からの他の物質
もヘビ毒（ガラガラヘビおよびクサリヘビ）の毒性およ
び致死作用を拮抗し得るが、その作用はさほど強いもの
ではない。したがって、ヘビ毒メタロプロテナーゼの阻
害剤は、ガラガラヘビ科およびクサリヘビ科のヘビによ
る中毒の症例において有効な新しい合成解毒剤となり得
ると言える。
【００５７】実施例１７ ヒスタミンにより誘発される微小血管出血に対する作
用。 アメリカ特許5,504,071 号の実施例１に記載の物質Ｚ−
ＰＲＯ−ＬＥＵ−Ｃytについて、ハムスターにヒスタミ
ンを投与した後誘発される毛細血管透過性変化モデルに
対する広範な試験を行なった。このモデルは一般に、微
小循環およびアテローム性硬化の現象に対する活性をも
つ物質を検索する上で有用である。さらに、ヒスタミン
を投与すると、ヘビ毒出血性因子を投与した場合に見ら
れるのと同様の様式で細動脈レベルでの微小出血が誘発
されるため、このモデルを用いることにより被験物質が
ヒスタミンの作用に関与する哺乳類内在性のメタロプロ
テナーゼと相互作用し得るかどうか評価することが可能
である。結果から、この物質は静脈内注射した場合にも
経口投与した場合にも、ヒスタミンにより誘発される微
小血管出血をきわめて強力に阻害することが確認され
た。いずれの場合にも、作用の50％を阻害し得る用量は
50μg ／kg付近であった。本申請および上述のアメリカ
特許に記載した他の物質もまた、ハムスターにおいてヒ
スタミンにより誘発される微小血管出血を阻害する活性
を示したが、やや高濃度側においてであった。したがっ
て、ヘビ毒メタロプロテナーゼの阻害剤は血管内の微小
出血に至る病的過程を拮抗することができるため、アテ
ローム性動脈硬化症や血管組織の病変に由来するその他
の病的状態において有用であると推測される。
【００５８】実施例１８ 気管支−肺組織における浸潤に対する作用 哺乳類の細胞によって産生されるメタロプロテナーゼ
は、細胞が生体内で１つの組織から別の組織へと移動す
る上で非常に重要な役割を果たすため、本申請に記載の
物質９、18、25および31、そしてアメリカ特許5,504,07
1 号の物質Ｚ−ＰＲＯ−ＬＥＵ−Ｃyt（実施例１）およ
びＦＵＲ−ＬＥＵ−Ｃyt（実施例８に記載）について、
ラットにおいてSephadex Ｇ−200 樹脂により誘発され
る好酸球増加症に対する活性を検討した。得られた結果
から、程度の差はあるが、すべての物質が炎症部位へ移
動する血液細胞の数を低下させ、分析した細胞種（リン
パ球、好中球、好酸球、マクロファージ）のうちの最低
１種類の運動能を阻害することが確認された。したがっ
て、ヘビ毒メタロプロテナーゼの阻害剤は、気管支−肺
レベルで炎症反応に関与する細胞の運動能に作用し、肺
気腫、成人呼吸障害症候群（ＡＲＤＳ）、間質性線維
症、肉芽腫症、肺および胸膜の腫瘍等、メタロプロテナ
ーゼによって誘発される多くの気管支−肺病態に対して
治療上有用であると思われる。
【００５９】実施例１９ 免疫学的作用 本申請に記載の多くの物質について、免疫反応の進行に
対して作用し得るかどうか検討するため、免疫反応試験
を行なった。得られた結果から、すべての物質が、Ｔリ
ンパ球の増殖によって示されるように、免疫反応を顕著
に促進し得ることが確認された。さらに、物質の多く
が、インフルエンザウイルスに特異的な抗体の存在によ
って示されるように、このウイルスに対する反応を増強
した。また、接触感受性試験（アレルギー反応と関連）
において、物質の多くが反応の強力な阻害物質であるこ
とが明らかになった。したがって、ヘビ毒メタロプロテ
ナーゼの阻害剤は、Ｔリンパ球の増殖および抗体産生の
増加という両方の点において、哺乳類の免疫反応に対し
て顕著な作用を有すると結論される。さらに、アレルギ
ー型の反応を阻害する作用も示す。
【００６０】実施例２０ マトリゲルを通じたヒト黒色腫細胞侵襲の阻害 腫瘍細胞の体内を通じての移動能（転移）を合成した物
質が阻害し得るかどうか検討するために、ヒトの黒色腫
細胞株ＶＭＭ−５を用いてマトリゲルによる侵襲アッセ
イを行なった。このアッセイでは、24穴組織培養用プレ
ート中の基底膜マトリゲル（Becton Dickinson）および
孔サイズ８ミクロンの組織培養インサートをボイデンチ
ャンバーとして使用した。希釈したマトリゲルをチャン
バーにコーティングし、一晩乾燥させた；その後血清不
在培地を添加し、黒色腫細胞（400000／ml）を各インサ
ートに分注した。下側のチャンバーには、化学走性誘因
物質を添加した。チャンバーを37℃の保湿ＣＯ2 インキ
ュベーターに入れ、20時間インキュベートした。インサ
ートを乾燥させ、上部表面の細胞を除去した。ポリカー
ボネートフィルターをメタノールで固定し、ヘマトキシ
リンおよびエオジンで染色した後、顕微鏡で計測した。
物質による細胞移動の阻害は、物質を溶解した緩衝液の
みを添加した対照チャンバー中における移動細胞総数に
対する百分率として表した。
【表９】 表９ 物質 濃度（μＭ） ％侵襲阻害 本申請の物質ｎ．３ ５００ ６９ “ｎ．９ ５００ ９４ “ｎ．10 ５００ ９９ “ｎ．24 ５００ １００ ＰＣＴ ＷＯ92／06108 から 実施例１：Ｚ−ＰＲＯ−ＬＥＵ−ＣＹＴ ５００ ７０ 実施例８：ＦＵＲ−ＬＥＵ−ＣＹＴ ５００ ６９ 実施例10：Ｍe ＰＲＯ−ＬＥＵ−ＣＹＴ ５００ ４０
【００６１】上述の結果から、本申請に記載の物質、お
よびＰＣＴ ＷＯ92／06108 に報告した物質は癌細胞移
動能に対する強力な阻害剤であるため、腫瘍に侵された
患者における転移過程の阻害剤として有用であることが
示される。
【００６２】実施例２１ 胃液の蛋白質溶解作用への耐性 Ａ．記載の物質が胃液中の蛋白質溶解作用に対して耐性
であるかどうか、そして経口投与が可能であるかどうか
検討するために、絶食させたラットの胃を生理食塩水中
（１：１）でホモジナイズした。物質溶液300 μl （生
理食塩水１ ml 中１ mg ）を0.5 mlの胃ホモジネートと
共にインキュベートした（37℃）。1.5 mlのメタノール
を添加することによって反応を停止させ、遠心した後、
残余物質の量を測定するために物質の標準溶液を対照と
して10μl をＨＰＬＣ装置に注入した。 結果：
【表１０】 表１０ 物質（化学式１） 60分後の残余物質 120 分後の残余物質 ｎ．３ １００％ ＞９５％ ｎ．10 １００％ ＞９５％ ｎ．11 １００％ ＞９５％ ｎ．26 １００％ ＞９５％ ｎ．30 １００％ ＞９５％ Ｂ．化学式２の物質が胃の中に存在する塩酸および蛋白
質溶解酵素による分解に耐えられるかどうか検討するた
めに、ラットを約18時間絶食させた後屠殺し、その胃を
生理食塩水中（１：１）でホモジナイズした。物質を生
理食塩水中に溶解し（１ mg ／ml）、物質溶液300 μl
を0.5 mlのホモジネートと共に37℃でインキュベートし
た。1.5 mlのメタノールを添加することによって反応を
予定時刻で停止させた。15分間遠心した（Sorvall 遠心
器、ローターＳＳ−34、10,000回転／分）後、少量（10
μl ）をとり、完全な形で残っている物質の量を測定す
るためにＨＰＬＣに注入した。物質番号および実施例番
号はＰＣＴ ＷＯ92／06108 に準拠する。
【表１１】
【表１２】
【００６３】説明：ＣytＯＨは、請求項１２に記載のグ
ループＣに属するシクロトリプトファンラジカルの遊離
酸型である。Ｈypは、グループＡに属するヒドロキシプ
ロリンラジカルである。最後に記載した表から明らかな
ように、一連の新規物質は胃での分解に対して非常に耐
性が高いため、経口投与用として使用することができ
る。これらの物質をヒトに経口投与する場合に適した１
日当たりの用量は10〜200 mgである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＣＤ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＸ ＡＤＲ ＡＣＤ ＡＥＤ ＡＤＲ Ｃ０７Ｃ 237/22 ＡＥＤ (72)発明者 ジョバンナ デ ルーカ イタリア国ローマ，ビア ウゴ デ カロ リス 124 (72)発明者 マリオ マテラッツィ イタリア国ローマ，ビア デレアニ 10

Claims (18)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヒトおよび動物の治療に有効な薬物を特
    定し生産するために、ペプチド類似型の物質の哺乳類に
    おける治療上の有効性を測定するための次の段階から構
    成される方法：ガラガラヘビ科およびクサリヘビ科に属
    するヘビの毒から抽出した亜鉛依存性メタロプロテナー
    ゼの阻害物質としての前記物質の第一水準での阻害活性
    を、第一段階の酵素阻害試験によって測定する；前記物
    質をヘビ毒からの前記亜鉛依存性メタロプロテナーゼの
    阻害物質として定義するために十分な活性の閾値に関し
    て、前記第一水準を実証する；哺乳類の生体に内在し前
    記哺乳類において病的状態を誘発する亜鉛依存性メタロ
    プロテナーゼの阻害物質としての前記物質の第二水準で
    の阻害活性を、第二段階の酵素阻害試験によって測定す
    る；前記物質を哺乳類に内在する亜鉛依存性メタロプロ
    テナーゼの阻害物質として定義するために十分な活性の
    閾値に関して、前記第二水準を実証する；そして標準的
    な薬理学試験によって、前記病的状態に関する前記物質
    の活性を実証する。
  2. 【請求項２】 ヘビ毒から抽出される亜鉛依存性メタロ
    プロテナーゼがニシダイヤガラガラヘビからの出血素、
    マムシのボトロパシンおよび出血素、カーペットバイパ
    ーの各種出血素から成るグループから選択される請求項
    １に記載の方法。
  3. 【請求項３】 哺乳類の体内に内在する亜鉛依存性メタ
    ロプロテナーゼがコラゲナーゼおよびゼラチナーゼ等の
    マトリキシン、およびＴＮＦ−αや生物学的作用を有す
    るその他の蛋白質等のメタロプロテナーゼ関与物質であ
    る請求項１または２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 メタロプロテナーゼ阻害物質が以下のグ
    ループから選択される請求項１または２に記載の方法：
    物質 【化１】 ただし：Ａは 【化２】 ＹはＯＨ、ＮＨ2 、ＮＨＯＨ、Ｎ（ＣＨ3 ）ＯＨ、およ
    びエステル；Ｒ４はＣＨ−（ＣＨ3 ）2 、インドール−
    ２−イル、フェニル、シクロヘキシル、ＣＯ−ＮＨ2 、
    （ＣＨ2 ）3 −ＮＨ−Ｆmoc ；ＸはＸa 、Ｘb 、Ｘc 、
    ５−メトキシ−１−インダノン−３−アセチル、ナフト
    イル、ホモセリル、ただしＸa は 【化３】 ただし Ｘ１は：ＣＨ、Ｎ、Ｃ−ＯＭe Ｗは ：Ｃ、Ｎ Ｙ１は：ＣＨ、Ｎ Ｚ１は：Ｃ、Ｎ Ｒ１は：ＣＯ、（ＣＨ2 ）2 −ＣＯ、ＳＯ2 、ＣＨ2 −
    ＣＯ、Ｓ−ＣＨ2 −ＣＯ Ｒ２は：ＯＭe 、Ｈ、ＮＯ2 、Ｃl 、ＯＥt 、ＣＨ3 Ｒ３は：ＯＥt 、Ｈ、ＯＭe Ｘb は 【化４】 ただし Ｘ２は：Ｏ、Ｎ、ＮＨ ｎは ：１、２ Ｒ６は：Ｈ Ｒ７は：Ｈ、ＯＨ、ＯＭe 、Ｃl Ｒ８は：Ｈ、ＯＭe Ｒ５は：ＣＯ Ｘc は 【化５】 ただし Ｘ３は：Ｏ、ＣＨ Ｙ３は：Ｏ、ＣＨ Ｒ９は：ＣＯ または上述の物質の薬学上容認される塩、エステルある
    いはアミド；または物質 Ｑ−Ｂ−Ｔ （２） ただし、Ｑは以下のグループから選択される環状分子の
    一価ラジカル 【化６】 ただしＸ４はＣＨ2 、ＳまたはＣＨＯＨ ｎは０、１または２ Ｒ11はＨまたはＣＨ3 Ｒ10はＨ、ＣＨ3 、またはペプチド合成に使用される
    １’窒素原子を阻害する化学基（ＣＢＺ、ＢＯＣ、Ｆmo
    c およびアセタイル等） Ｙ４はＣＨ2 またはＣＯ Ｚ４はＮＨ、ＮＣＨ3 、ＯまたはＳ Ｂはグリシン、ロイシン、アラニンまたはバリンから成
    るグループから選択される（Ｌ）−α−アミノ酸の二価
    ラジカル；そしてＴはトリプトファン、フェニルアラニ
    ン、フェニルグリシンから成るグループから選択される
    芳香族（Ｌ）−アミノ酸の一価ラジカル、および薬学的
    に容認されるそれらの塩、エステルおよびアミド、 または以下に示す物質のうちの１つ、あるいは薬学的に
    容認されるそれらの塩、エステルおよびアミド 【化７】 ただしＲ11は上述のとおり、そしてＲ12はＨ、ＯＨ、Ｏ
    ＣＨ3 、またはＣＨ3 ；
  5. 【請求項５】 下記化学式を有する新規物質 【化８】 ただし：Ａは 【化９】 ＹはＯＨ、ＮＨ2 、ＮＨＯＨ、Ｎ（ＣＨ3 ）ＯＨ、およ
    びエステル；Ｒ４はＣＨ−（ＣＨ3 ）2 、インドール−
    ２−yl、フェニル、シクロヘキシル、ＣＯ−ＮＨ2 、
    （ＣＨ2 ）3 −ＮＨ−Ｆmoc ；ＸはＸa 、Ｘb 、Ｘc 、
    ５−メトキシ−１−インダノン−３−アセチル、ナフト
    イル、ホモセリル、ただしＸa は 【化１０】 ただし Ｘ１は：ＣＨ、Ｎ、Ｃ−ＯＭe Ｗは ：Ｃ、Ｎ Ｙ１は：ＣＨ、Ｎ Ｚ１は：Ｃ、Ｎ Ｒ１は：ＣＯ、（ＣＨ2 ）2 −ＣＯ、ＳＯ2 、ＣＨ2 −
    ＣＯ、Ｓ−ＣＨ2 −ＣＯ Ｒ２は：ＯＭe 、Ｈ、ＮＯ2 、Ｃl 、ＯＥt 、ＣＨ3 Ｒ３は：ＯＥt 、Ｈ、ＯＭe Ｘb は 【化１１】 ただし Ｘ２は：Ｏ、Ｎ、ＮＨ ｎは ：１、２ Ｒ６は：Ｈ Ｒ７は：Ｈ、ＯＨ、ＯＭe 、Ｃl Ｒ８は：Ｈ、ＯＭe Ｒ５は：ＣＯ Ｘc は 【化１２】 ただし Ｘ３は：Ｏ、ＣＨ Ｙ３は：Ｏ、ＣＨ Ｒ９は：ＣＯ または上述の物質の薬学上容認される塩、エステルある
    いはアミド。
  6. 【請求項６】 ＡおよびＲ４が請求項５に記載のもので
    ある化学式（Ｌ）−Ａ（Ｒ４）−（Ｓ）−ＣytＯＭe を
    もつ、請求項（５）に記載の化学式（１）の物質の生産
    のための中間生成物としての新規物質。
  7. 【請求項７】 請求項５に記載の物質から成る、哺乳類
    組織中の内在性メタロプロテナーゼの活性化に関与する
    病的状態の治療のための治療上有効な物質。
  8. 【請求項８】 前記物質が以下のものである請求項７に
    記載の治療上有効な物質： ４−ＰＴＡ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ ３−ＡＰＺＣ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ ２−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ｃha−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ ２−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ｐhe−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ ４−ＮＢＺ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ ３，４ＤＭＢ−（Ｌ）−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ ４−ＥＢＺ−Ｌeu−（Ｓ）−Ｃyt−ＯＨ または ２−ＦＵＲ−（Ｌ）−Ｌys（Ｆmos ）−（Ｓ）−Ｃyt−
    ＯＨ．
  9. 【請求項９】 請求項５に記載の化学式（１）の物質か
    ら成る、ヒトを含めた哺乳類の細胞により産生される腫
    瘍壊死因子の放出を阻害するための請求項７に記載の治
    療上有効な物質。
  10. 【請求項１０】 請求項５に記載の物質から成る、ヘビ
    毒の毒性および致死作用を拮抗するための治療上有効な
    物質。
  11. 【請求項１１】 筋肉組織の病変に起因するアテローム
    性動脈硬化およびその他の病的状態を治療するための請
    求項７に記載の物質。
  12. 【請求項１２】 請求項５に記載の物質から成る、哺乳
    類の免疫反応に作用するための請求項７に記載の治療上
    有効な物質。
  13. 【請求項１３】 哺乳類の組織中に内在するメタロプロ
    テナーゼの活性化に関連する病態を治療する薬物を製造
    するための請求項４に記載の化学式（２）の物質の使用
    方法。
  14. 【請求項１４】 ヒトを含めた哺乳類の細胞による腫瘍
    壊死因子の放出を阻害する薬物を製造するための請求項
    ４に記載の化学式（２）の物質の請求項１３に記載の使
    用方法。
  15. 【請求項１５】 ヒトの細胞により産生されるコラゲナ
    ーゼを阻害する薬物を製造するための請求項４に記載の
    化学式（２）の物質の請求項１３に記載の使用方法。
  16. 【請求項１６】 ヘビ毒の毒性および致死作用を拮抗す
    る薬物を製造するための請求項４に記載の化学式（２）
    の物質の使用方法。
  17. 【請求項１７】 筋肉組織の病変に起因するアテローム
    硬化症およびその他の病的状態を治療するための請求項
    １３に記載の使用方法。
  18. 【請求項１８】 気管支−肺における炎症反応に関与す
    る細胞の移動能を阻害する薬物を製造するための請求項
    ４に記載の化学式（２）の物質の請求項13に記載の使用
    方法。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6906036B2 (en) 2001-08-16 2005-06-14 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-aging and wound healing compounds
US7041787B2 (en) 2000-12-29 2006-05-09 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Design and use of advanced zinc chelating peptides to regulate matrix metalloproteinases
US7071164B2 (en) 2001-08-16 2006-07-04 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-cancer and wound healing compounds
US7094754B2 (en) 2001-08-16 2006-08-22 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-aging and wound healing compounds
US7148194B2 (en) 2002-12-30 2006-12-12 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method to increase fibronectin
US7186693B2 (en) 2001-08-16 2007-03-06 Kimberly - Clark Worldwide, Inc. Metalloproteinase inhibitors for wound healing
US7189700B2 (en) 2003-06-20 2007-03-13 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-chrondrosarcoma compounds

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1277904B1 (it) * 1995-08-07 1997-11-12 Polifarma Spa Metodo per determinare l'attivita' terapeutica di composti inibitori di metalloproteinasi, nuovi composti inibitori, e loro impiego
IT1296305B1 (it) * 1997-07-17 1999-06-25 Polifarma Spa Inibitori di metalloproteinasi loro uso terapeutico e procedimento per la produzione del composto di partenza nella loro
WO2000003703A1 (en) * 1998-07-17 2000-01-27 Fuji Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha Novel remedies for allergic diseases
EP1165500A1 (en) * 1999-04-02 2002-01-02 Du Pont Pharmaceuticals Company Amide derivatives as inhibitors of matrix metalloproteinases,tnf-alpha,and aggrecanase
BRPI0400284A (pt) * 2004-03-18 2005-11-01 Fundacao Oswaldo Cruz Uso de dm 43 e seus fragmentos como inibidor de metaloproteases de matriz
FR2962649B1 (fr) * 2010-07-19 2025-10-24 Conservatoire Nat Arts Et Metiers Traitement d'une pathologie liee a un effet excessif du tnf par un compose de benzene sulfonamide
CN102526114A (zh) * 2011-12-27 2012-07-04 苏州人本药业有限公司 物理改性后的眼镜蛇蛇毒在制备治疗肺纤维化药物中的用途
CN104434981A (zh) * 2014-12-05 2015-03-25 苏州人本药业有限公司 眼镜蛇蛇毒在制备治疗慢性阻塞性肺疾病药物中的应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1237474B (it) * 1989-10-05 1993-06-07 Polifarma Spa Composti tripeptidici e loro uso farmaceutico come immuno-modulatori
WO1991005555A2 (en) * 1989-10-13 1991-05-02 The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. N-acyl peptide metalloendopeptidase inhibitors and methods of using same
FR2661920B1 (fr) * 1990-05-10 1995-10-06 Serbio Procede de determination d'un activateur du plasminogene et de son inhibiteur.
IE913456A1 (en) * 1990-10-01 1992-04-08 Mini Agriculture & Fisheries Salmonella polynucleotide sequence
IT1242002B (it) * 1990-10-03 1994-02-02 Polifarma Spa Composti con attivita' farmacologica antiipertensiva, analgesica, immunomodulante e antiinfiammatoria, che presentano nella molecola una sequenza di tre radicali, essendo alfa-amminoacido quello centrale
US5504071A (en) * 1990-10-03 1996-04-02 Polifarma S.P.A. Compounds with a sequence of three radicals, the central one being α-a
JPH05503719A (ja) * 1990-12-03 1993-06-17 セルテック　リミテッド ペプチジル誘導体
IT1277904B1 (it) * 1995-08-07 1997-11-12 Polifarma Spa Metodo per determinare l'attivita' terapeutica di composti inibitori di metalloproteinasi, nuovi composti inibitori, e loro impiego

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7041787B2 (en) 2000-12-29 2006-05-09 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Design and use of advanced zinc chelating peptides to regulate matrix metalloproteinases
US6906036B2 (en) 2001-08-16 2005-06-14 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-aging and wound healing compounds
US7071164B2 (en) 2001-08-16 2006-07-04 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-cancer and wound healing compounds
US7094754B2 (en) 2001-08-16 2006-08-22 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-aging and wound healing compounds
US7186693B2 (en) 2001-08-16 2007-03-06 Kimberly - Clark Worldwide, Inc. Metalloproteinase inhibitors for wound healing
US7196162B2 (en) 2001-08-16 2007-03-27 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-aging and wound healing compounds
US7148194B2 (en) 2002-12-30 2006-12-12 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method to increase fibronectin
US7189700B2 (en) 2003-06-20 2007-03-13 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Anti-chrondrosarcoma compounds

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