JPH09165338A - 梗塞サイズ減少剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 虚血性心疾患を患っている患者における心筋
梗塞サイズを減少させる医薬を提供する。 【解決手段】 化１のカルボスチリル誘導体： 【化１】 ［式中、Ｒは、必要に応じてフェニル環上に置換基とし
て低級アルコキシ基を有していても良いベンゾイル基で
あり、カルボスチリル骨格の３位および４位の炭素−炭
素結合は、単結合または二重結合である］またはその塩
を有効成分として用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、虚血性心疾患を患
っている被験者における梗塞のサイズを減少させる医薬
に関し、該医薬は、活性成分としてカルボスチリル誘導
体を使用する。

【０００２】

【従来の技術】

Ｉ．カルボスチリル類 下記一般式（１）で示されるカルボスチリル誘導体：

【０００３】

【化２】

【０００４】［式中、Ｒは、必要に応じてフェニル環上
に置換基として低級アルコキシ基を有していても良いベ
ンゾイル基であり、カルボスチリル骨格の３位および４
位の炭素−炭素結合は、単結合または二重結合である］
およびその塩は、当分野で周知である（米国特許第4,41
5,572号は、その全体が本明細書中に参考として援用さ
れている）。

【０００５】これらのカルボスチリル類は、モデル系に
おいて、心拍数または心筋酸素消費に殆ど影響を及ぼす
ことなく心筋収縮性を増強する経口的変力剤であり（フ
ェルドマン(Feldman)ら、ニューイングランド・ジャー
ナル・オブ・メディシン(N. Engl. J. Med.、329: 149-
155 (1993))、うっ血性心不全の患者の治療に有用であ
る（米国特許第4,415,572号；およびホリ(Hori)ら、ジ
ャパニーズ・サーキュレーション・ジャーナル(Jpn. Ci
rc. J.)、50:659-666 (1986)）ことが見い出されてい
る。

【０００６】幾つかの研究は、上記カルボスチリル類
が、うっ血性心不全患者において血行力学指数および運
動能力を改善することを実証している（イノウエ(Inou
e)ら、ハート・ベッセルズ(Heart Vessels)、2: 166-17
1 (1986)；ササヤマ(Sasayama)ら、ハート・ベッセルズ
(Heart Vessels)、2: 23-28 (1986)；およびフェルドマ
ン(Feldman)ら、Am. Heart J.、116: 771-777 (198
8)）。

【０００７】さらに、日本および米国の両国におけるマ
ルチセンター・ランダム化プラシーボ統制試験(multi-c
enter randomized placebo-controlled trials)は、こ
れらのカルボスチリル類が、うっ血性心不全の患者にお
ける生活の質を改善し、死のリスクを減少させたことを
実証している（OPC-8212マルチセンター・リサーチ・グ
ループ、Cardiovasc. Drugs Ther.、4: 419-425 (199
0)；フェルドマン(Feldman)ら、Am. J. Cardiol.、68:
1203-1210 (1991)；およびフェルドマン(Feldman)ら、
ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン
(N. Engl. J. Med.、329: 149-155 (1993)）。

【０００８】これらカルボスチリル類の変力特性に関連
する作用のメカニズムは、カリウム電流の減少（イイジ
マ(Iijima)ら、ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・
アンド・エクスペリメンタル・テラピューティックス
(J. Pharmacol. Exp. Ther.、240: 657-662 (198
7))）、ホスホジエステラーゼの穏やかな阻害、および
内向きのカルシウム電流(inward calcium current)の増
加（ヤタニ(Yatani)ら、J. Cardiovasc. Pharmacol.、1
3: 812-819 (1989)；およびタイラ(Taira)ら、アルツナ
イミッテルフォルシュング(Arzneimittelforschung)、3
4: 347-355 (1984)）を含む。

【０００９】しかしながら、死亡率を減少させるのに最
も有効であるカルボスチリル類の投与量（１日に60mg）
は、血行力学効果を全くか殆ど示さなかったので、この
薬剤は、その陽性変力作用(positive inotropic effec
t)よりも他のメカニズムを介して死亡率を減少するかも
しれないことを意味する（フェルドマン(Feldman)ら、
ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン
(N. Engl. J. Med.、329: 149-155 (1993)；およびパッ
カー(Packer)、ニューイングランド・ジャーナル・オブ
・メディシン(N. Engl. J. Med.、329: 201-202 (199
3)）。

【００１０】上記カルボスチリル類は、リポ多糖で刺激
した末梢血単核細胞(PBMC)によるＴＮＦ−αおよびＩＬ
−６を含む種々のサイトカインの産生を、用量依存的に
阻害することも公知である（マルヤマ(Maruyama)ら、バ
イオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・
コミュニケーションズ(Biochem. Biophys. Res. Comm
u.、195: 1264-1271 (1993))；およびマツモリ(Matsumo
ri)ら、Circul.、89: 955-958 (1994)）。

【００１１】さらに、それらは、ＣＦＵ−Ｃの減少に関
連する可逆的好中球減少症を誘発できる（フェルドマン
(Feldman)ら、Am. Heart J. 、116: 771-777 (1988)；O
PC-8212マルチセンター・リサーチ・グループ、Cardiov
asc. Drugs、Ther.、4: 419-425 (1990)；フェルドマン
(Feldman)ら、Am. J. Cardiol.、68: 1203-1210 (199
1)；およびフェルドマン(Feldman)ら、ニューイングラ
ンド・ジャーナル・オブ・メディシン(N. Engl. J. Me
d.、329: 149-155 (1993)）。

【００１２】加えて、上記カルボスチリル類は、アポト
ーシス（プログラムされた細胞死）の制御、並びに癌の
治療、腫瘍転移の阻害およびＲＮＡウイルス複製の阻害
に有用であることが見い出されている（１９９３年４月
３０日に出願された米国特許出願第 07/989, 028号、該
出願はヨーロッパ特許公開0552373に対応し、それぞれ
がその全体として本明細書中に参考として援用されてい
る；ナカイ(Nakai)ら、Jpn. J. Cancer Res.、アブスト
ラクト、およびProc. Jpn. Cancer Assoc.、581ページ
(1993)；およびマルヤマ(Maruyama)ら、バイオケミカル
・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケー
ションズ(Biochem. Biophys. Res. Commu.、195: 1264-
1271 (1993)）。

【００１３】上記カルボスチリル類は、ＤＮＡウイルス
複製の阻害にも有用であり、抗ＲＮＡウイルス化合物と
ともに使用されるときＲＮＡウイルス複製の阻害に相乗
効果を示す（米国特許出願第 08/283,707号、１９９４
年８月１日；および１９９５年７月２８日に出願された
PCT/US95/09141）。

【００１４】さらに、上記カルボスチリル類は、哺乳動
物細胞において、ヌクレオシドおよびヌクレオベース(n
ucleobase)輸送、例えば、アデノシンを用量依存的に阻
害するのに有用であり、またヌクレオシド・アナローグ
とくにＡＺＴのリン酸化を増強するのに有用であること
が見い出されている（米国特許出願No. 08/283,707、１
９９４年８月１日；および１９９５年７月２８日に出願
されたPCT/US95/09141）。他方、別のヌクレオシド輸送
阻害剤であるジピリダモール(dipyridamole)は高濃度
（治療的範囲外）でのみ（10-100 μM）アデノシン輸送
を阻害する（ショルティセック(Scholtissek)ら、Bioch
em. Biophys. Acta、158: 435-447 (1968)；およびプレ
イグマン(Plagemann)ら、J. Membr. Biol.、81: 255-26
2 (1984)）。

【００１５】ジピリダモールは、細胞内へのアデノシン
輸送の阻害により、アデノシン存在部位に限局化された
アデノシン濃度の増加(localized increase)を引起こす
と提案されている（プレイグマン(Plagemann)ら、Bioch
em. Biophys. Acta、947: 405-443 (1988)）。アデノシ
ンは、アデニル酸シクラーゼの活性化により或いはホス
ホジエステラーゼの阻害により、心筋細胞中のｃＡＭＰ
の増加（フォックス(Fox)ら、アニュアル・レビュー・
オブ・バイオケミストリー(Ann. Rev. Biochem.)、47:
655-686 (1978)；およびタケヤマ(Takeyama)ら、Drug R
es.、34: 364-370 (1984)）、細胞表面膜上の特異的な
アデノシン・レセプターへのその結合により、冠状動脈
の拡張（フォックス(Fox)ら、アニュアル・レビュー・
オブ・バイオケミストリー(Ann. Rev. Biochem.)、47:
655-686 (1978)）、脳血流量の増加（ハイスタッド(Hei
stad)ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロ
ジー(Am. J. Physiol.))、240: 775-780 (1981)）、Ｔ
ＮＦ−α産生の減少（パーメリー(Parmely)ら、ジャー
ナル・オブ・イミュノロジー(J. Immunol.)、151: 389-
396 (1993)）、および血小板凝集の減少（ダウィッキ(D
awicki)ら、バイオケミカル・ファーマコロジー(Bioche
m. Pharmacol.)、34: 3965-3972 (1985)）を誘発するこ
とが知られている。

【００１６】カルボスチリル類によって引起こされるア
デノシン輸送の阻害は、それらの作用の他の新しい側面
とのリンクをもたらすと信じられている。即ち、上記カ
ルボスチリル類は、アデノシン輸送を阻害することによ
りアデノシンの血中濃度を増加させ、こうして、うっ血
性心疾患における（フェルドマン(Feldman)ら、ニュー
イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン(N. Eng
l. J. Med.、329: 149-155 (1993)；およびパッカー(Pa
cker)、ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メデ
ィシン(N. Engl. J. Med.、329: 201-202 (1993)）、或
いはＴＮＦ−α産生の減少における（マルヤマ(Maruyam
a)ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リ
サーチ・コミュニケーションズ(Biochem. Biophys. Re
s. Commu.、195: 1264-1271 (1993)；およびマツモリ
ら、Circul.、89: 955-958 (1994)）、ベスナリノンの
治療的利点のいくつかを説明するかもしれない。

【００１７】II．虚血性心疾患 心室の機能障害は、慢性心不全および虚血性心疾患の患
者で起こるが、これら２つの心疾患の病態生理学は全く
異なる。即ち、慢性心不全では、筋フィラメントのＣａ
²⁺に対する反応性は、交感神経調節の機能障害、並びに
レニン−アンギオテンシンシステムおよびサイトカイン
システムの機能障害により、低下する。他方、虚血性心
疾患では、細胞の嫌気的代謝が、可逆的および非可逆的
な細胞障害を生み出し、心室の機能障害をもたらす。嫌
気的心筋代謝は、主として、冠血流量調節障害に起因す
る。

【００１８】カルボスチリル類は、虚血領域の冠血流量
を増加させることが見い出され、それは、大動脈血圧の
増大および冠状動脈拡張作用によると仮定される（マル
ヤマ(Maruyama)ら、J. Cardiovasc. Pharmacol.、8: 16
1-169 (1986)）。しかしながら、大動脈血圧の増大は、
冠血流量の増加を引き起こし得、酸素要求量の増大を引
き起こすかもしれない。これは、冠状血管拡張の有利な
効果を鈍らせるかもしれない。

【００１９】しかしながら、カルボスチリル類はまた、
心拍数または収縮期血圧に変化を生じることなく運動誘
発性虚血の改善を生み出し、虚血の進行をブロックする
ことが見い出されている（キノシタ(Kinoshita)ら、Res
pir. Circ.、36: 1199-1203(1988)）。心筋虚血の範囲
は血流依存性であるので、冠血流量の増加は心筋虚血の
減弱化を意味するかもしれないが、梗塞のサイズは冠状
血管拡張能力によっては決定されない。これは、心筋虚
血の間、冠状動脈が完全に閉塞するからである。心筋梗
塞の進行は、ＡＴＰ枯渇(ATP depletion)の速度と虚血
の際の側副流の程度により、また血小板と好中球の活性
化、Ｃａ²⁺とカテコラミンの過負荷、および酸素により
誘導されたフリーラジカル産生による。従って、冠状血
管拡張による心筋虚血の減弱化は、必ずしも梗塞サイズ
の限定を意味しない。

【００２０】カルボスチリル類はまた、冠状動脈疾患を
有する患者において、運動中のＳＴ低下(ST depressio
n)を改善することが示されている（キノシタ(Kinoshit
a)ら、上記文献）。心電図のＳＴ−Ｔレベルは、Ｃ
ａ²⁺、Ｋ⁺、Ｈ⁺およびＮａ⁺の細胞内および細胞外バラ
ンス、心臓自体の回旋運動(rotation of heart)、心室
壁運動、および虚血の存在により変化する（ノーブル(N
oble)ら、Cardiovasc. Res.、12: 13-17 (1978)）。従
って、カルボスチリル類が心筋虚血を改善できるという
示唆は、そこには全くない。カルボスチリル類によって
引起こされる冠状血管拡張により虚血領域の心筋機能が
改善されるとしても、虚血の減弱化が梗塞サイズの減少
を示すわけではない。これは、心筋壊死が複数の冠血流
量非依存性の病因(multiple coronary blood flow-inde
pendent pathogenesis)によるためである。

【００２１】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、虚血
性心疾患を有する患者において心筋梗塞サイズを減少さ
せる方法を提供することである。

【００２２】

【課題を解決するための手段】本発明では、カルボスチ
リル類が、心筋虚血を減弱化し、心筋梗塞サイズを減少
することが、思いがけなくも発見された。これは驚くべ
きことである。なぜなら、カルボスチリル類は、陽性変
力剤(positive inotropic agent)として分類されてお
り、陽性変力剤は虚血性障害を拡大することが知られて
いるからである（ブレイクロック(Blaiklogk)ら、ジャ
ーナル・オブ・モレキュラー・アンド・セルラー・カー
ディオロジー(J. Mol. Cell. Cardiol.)、10: 499-509
(1987)）。

【００２３】本発明の上記目的は、下記の発明の詳細な
説明より明らかになるが、以下の一般式（１）で示され
るカルボスチリル誘導体：

【００２４】

【化３】

【００２５】［式中、Ｒは、フェニル環上に置換基とし
て低級アルコキシ基を有していても良いベンゾイル基で
あり、カルボスチリル骨格の３位および４位の炭素−炭
素結合は、単結合または二重結合である］、およびその
塩を使用することによって達成される。

【００２６】

【発明の実施の形態】一般式（１）において、フェニル
環上に置換基として低級アルコシキ基を有していても良
いベンゾイル基は、フェニル環を置換する１〜３個の直
鎖状または分岐状Ｃ_1-6アルコキシ基を有していても良
いベンゾイル基、例えば、ベンゾイル、２−メトキシベ
ンゾイル、３−メトキシベンゾイル、４−メトキシベン
ゾイル、２−エトキシベンゾイル、３−エトキシベンゾ
イル、４−エトキシベンゾイル、４−イソブトキシベン
ゾイル、４−ヘキシルオキシベンゾイル、３，４−ジメ
トキシベンゾイル、３，４−ジエトキシベンゾイル、
３，４，５−トリメトキシベンゾイル、２，５−ジメト
キシベンゾイル、などを含む。

【００２７】本発明の活性成分化合物（１）のうちで
も、３，４−ジヒドロ−６−［４−（３，４−ジメトキ
シベンゾイル）−１−ピペラジニル］−２（１Ｈ）−キ
ノリン、即ち、ベスナリノン(vesnarinone)が最も好ま
しい。

【００２８】上記のカルボスチリル類は、慣用されてい
る酸と容易に塩を形成する。そのような酸として、無機
酸、例えば、硫酸、硝酸、塩酸および臭化水素酸；およ
び有機酸、例えば、酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、エ
タンスルホン酸、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、ク
エン酸、コハク酸および安息香酸が挙げられる。これら
の塩も、本発明において、一般式（１）で示される遊離
の化合物と同じように活性成分として使用できる。

【００２９】一般式（１）の化合物およびその塩は、一
般に、それ自体慣用されている薬学的製剤に剤型化でき
る。そのような製剤は、慣用されている充填剤、増量
剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の
希釈剤または賦形剤を用いて調製される。これらの薬学
的製剤は、治療の目的に応じて選択される種々の投与形
態を有することができ、それらの代表例は、錠剤、丸
剤、粉末剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル
剤、坐剤、注射剤（溶液、懸濁液など）、および眼用溶
液である。

【００３０】錠剤の製造のために、この分野でこれまで
に周知の広範囲の担体が使用できる。従って、例えば、
ビヒクルまたは賦形剤、例えば、ラクトース、スクロー
ス、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、デンプン、炭
酸カルシウム、カオリン、結晶セルロースおよびケイ
酸；結合剤、例えば、水、エタノール、プロパノール、
単シロップ、グルコース溶液、デンプン溶液、ゼラチン
溶液、カルボキシメチルセルロース、シェラック、メチ
ルセルロース、リン酸カルシウムおよびポリビニルピロ
リドン；崩壊剤、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナ
トリウム、カンテン末、ラミナラン末(powdered lamina
ran)、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキ
シエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナ
トリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプンおよ
びラクトース；崩壊阻害剤、例えば、スクロース、ステ
アリン、カカオ脂および硬化油；吸収促進剤、例えば、
第４級アンモニウム塩基類およびラウリル硫酸ナトリウ
ム；湿潤剤または保湿剤、例えば、グリセロールおよび
デンプン；吸着剤、例えば、デンプン、ラクトース、カ
オリン、ベントナイトおよびコロイダルシリカ；および
滑沢剤、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸
末およびポリエチレングリコールが使用できる。必要な
らば、錠剤は、さらに慣用されているコーティングを施
して、例えば、糖衣錠、ゼラチンコーティング錠、腸溶
錠、フィルムコーティング錠、または二層錠もしくは多
層錠としても良い。

【００３１】丸剤の製造のために、この分野で周知の広
範囲の担体が使用できる。その例は、ビヒクルまたは賦
形剤、例えば、グルコース、ラクトース、デンプン、カ
カオ脂、硬化植物油、カオリンおよびタルク；結合剤、
例えば、アラビアゴム末、トラガカントガム末、ゼラチ
ンおよびエタノール；および崩壊剤、例えば、ラミナラ
ンおよびカンテンである。

【００３２】坐剤の製造のために、広範囲の公知の担体
が使用できる。例として、ポリエチレングリコール、カ
カオ脂、高級アルコール類、高級アルコールエステル
類、ゼラチンおよび半合成グリセリド類が挙げられる。

【００３３】注射剤を調製する際には、溶液または懸濁
液は好ましくは滅菌され、好ましくは血液と等張であ
り、また、そのような投与形態を調製するために、当分
野で慣用されている全ての希釈剤を使用できる。従っ
て、例えば、水、エチルアルコール、プロピレングリコ
ール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキ
シル化(polyoxylated)イソステアリルアルコールおよび
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルが挙げら
れる。この場合、薬学的製剤は、塩化ナトリウム、グル
コースまたはグリセロールを、等張溶液を与えるのに十
分な量で含んでいても良い。慣用されている溶解補助
剤、緩衝剤、無痛化剤または局所麻酔剤などを加えるこ
とが可能である。

【００３４】さらに、必要ならば、薬学的製剤は、着色
料、保存剤、香料、矯味矯臭剤、甘味料など、並びに他
の薬剤を含んでいても良い。

【００３５】本発明で使用されるこれらの薬学的製剤中
の活性成分化合物の割合は、限定されず、広い範囲から
適当に選択すれば良い。しかしながら、一般に、その割
合は、約１．０〜約７０重量％、好ましくは約１．０〜
約３０重量％の範囲内から選択することが推奨される。

【００３６】本発明の薬学的製剤の投与経路も限定され
ず、投与形態、患者の年齢、性別および他の要因、並び
に治療されるべき疾患の重篤度により選択される。従っ
て、例えば、それらが錠剤、丸剤、溶液剤、懸濁剤、乳
剤、顆粒剤またはカプセル剤の形態で提供されるとき、
製剤は経口的に投与される。注射可能な溶液剤は、単独
で又はグルコース、アミノ酸などを含有する非経口的注
入のための慣用されている液体と混合して、静脈内に投
与される。必要ならば、これらの溶液剤は、筋肉内、皮
内、皮下または腹腔内経路により投与されても良い。坐
剤は、直腸に投与され、眼用溶液は点眼ローションであ
る。

【００３７】上記の薬学的製剤の投与量は、投与方法、
患者の年齢、性別および他の背景要因、疾患の重篤度な
どに依存するが、一般に、１日当り体重１キログラム当
り、化合物（１）を活性成分として約０．５〜３０ｍｇ
投与することが推奨される。各投与単位に含まれるべき
活性成分の量は、約１０〜１０００ｍｇである。

【００３８】

【実施例】投与形態例１ ３，４−ジヒドロ−６−［４−（３，４−ジメトキシベンゾイル）−１−ピペラ ジニル］−２（１Ｈ）−キノリン １５０ｇ アビセル(Avicel) （商標、旭化成工業株式会社） ４０ｇ コーンスターチ ３０ｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｇ ヒドロキシプロピルメチルセルロース １０ｇ ポリエチレングリコール６０００ ３ｇ ヒマシ油 ４０ｇ メタノール ４０ｇ 上記活性成分、アビセル、コーンスターチおよびステア
リン酸マグネシウムを混合し、共にすりつぶし、得られ
る混合物を糖衣錠用Ｒ１０ｍｍパンチ(drageeR10 punc
h)で圧縮成型する。このようにして得られる錠剤は、ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリ
コール６０００、ヒマシ油およびメタノールからなるフ
ィルムコーティング組成物でコートして、フィルムコー
ティング錠とする。

【００３９】投与形態例２ ３，４−ジヒドロ−６−［４−（３，４−ジメトキシベンゾイル）−１−ピペラ ジニル］−２（１Ｈ）−キノリン １５０ｇ クエン酸 １ｇ ラクトース ３３．５ｇ リン酸二カルシウム ７０ｇ プルロニック Ｆ−６８(Pluronic F-68) ３０ｇ ラウリル硫酸ナトリウム １５ｇ ポリビニルピロリドン １５ｇ ポリエチレングリコール（カルボワックス１５００(Carbowax 1500)） ４．５ｇ ポリエチレングリコール（カルボワックス６０００(Carbowax 6000)） ４５ｇ コーンスターチ ３０ｇ 乾燥ラウリル硫酸ナトリウム ３ｇ 乾燥ステアリン酸マグネシウム ３ｇ エタノール 適量 上記の活性成分、クエン酸、ラクトース、リン酸二カル
シウム、プルロニックF-68およびラウリル硫酸ナトリウ
ムを混合する。

【００４０】No. 60スクリーンを用いてサイズ選択した
後、混合物を、ポリビニルピロリドン、カルボワックス
１５００およびカルボワツクス６０００を含むアルコー
ル溶液を使用する湿式法によって造粒化する。必要なら
ば、アルコールを添加して、粉末をペースト様の塊にす
る。次に、コーンスターチを加えて、均一な顆粒が形成
されるまで混合を続ける。続いて、混合物を、No.10ス
クリーンに通して、トレイに入れ、１００℃に維持した
オーブン中で１２〜１４時間乾燥する。乾燥された顆粒
を、No.16スクリーンで篩いにかけ、次に、乾燥ラウリ
ル硫酸ナトリウムと乾燥ステアリン酸マグネシウムを加
え、混合した後、混合物を錠剤機を用いて所望のサイズ
と形状に圧縮する。

【００４１】上述のコアを、ニス剤で処理し、水分吸収
を防ぐためにタルクを振りかけ、こうしてコート下層を
作る。ニス剤コーティングは、内服使用(internal use)
に十分な回数だけ繰り返す。錠剤は、さらなるアンダー
コート層と平滑なコーティングを施こして、完全に丸く
滑らかにする。着色コーティングは、所望の着色が得ら
れるまで行なう。乾燥の後、コートされた錠剤を磨い
て、均一に磨かれた錠剤とする。

【００４２】下記の実施例は、例示のみを目的として示
すもので、本発明の範囲を制限することを意図するもの
ではない。

【００４３】実施例１血中アデノシン濃度に対するベスナリノンの効果 体重１５〜２０ｋｇのモングレル(Mongrel)犬を、ペン
トバルビタール・ナトリウム３０ｍｇ／ｋｇを静脈内投
与して麻酔した。続いて、それらの気管を送管し、酸素
を混合した室内空気で換気した。次に、それらの胸部
を、左第５肋間隙で開胸し、それらの心臓を心膜クレイ
ドル(pericardial cradle)中で吊した。各動物の左前下
行枝冠状動脈（left anterior descending coronary ar
tery; ＬＡＤ）にカニューレ挿管し、体外バイパス・チ
ューブにより左頸動脈を介して血液を灌流させた。

【００４４】冠灌流圧（ＣＰＰ）を、冠状動脈カニュー
レの先端でモニターした。

【００４５】灌流された領域の冠状動脈血流量（ＣＢ
Ｆ）を、バイパス・チューブに取付けた電磁流量プロー
ブで測定した。

【００４６】小さく短い採集用チューブ（直径１．０ｍ
ｍおよび長さ７．０ｃｍ）を、灌流領域の中心付近の小
冠状静脈に挿入して冠静脈血(coronary blood)を採取し
た。排出された冠静脈血を、左心房のレベルに置かれた
貯槽に集め、頸静脈に戻した。

【００４７】血中乳酸(lactate)濃度を、酵素アッセイ
（バーグメイヤー(Bergmeyer)、メソッズ・オブ・エン
ザイマティック・アナリシス(Methods of Enzymatic An
alysis)、アカデミック・プレス(Academic Press)、ニ
ューヨーク (1963)、266〜270ページ）で測定し、乳酸
濃度の冠動静脈較差(coronary arteriovenous differen
ce)に１００を乗じ、動脈乳酸濃度で除して算出される
乳酸抽出比を計算した。

【００４８】犬の状態をモニターするために、それらの
血圧をＡＰ−６４１Ｇ血圧増幅器（日本光電）を用いて
測定し、それらの全身血(systemic blood)をＡＢＬ３０
０ガス・アナライザー（ラジオメーター(Radiometer)、
コペンハーゲン）を用いて、ｐＨおよびＰＯ₂を含む血
液ガス分析を行った。

【００４９】灌流チューブの量的狭窄を生み出す閉塞物
を使用して、冠血流量を対照時の３３％と６０％に減少
させる狭窄程度を決定した。この手順の後、この閉塞物
を取付けると、安定な低灌流(hypoperfusion)が１０分
間生じ、冠状動脈クランプの開始２０分後に全ての変数
の測定を行った。

【００５０】上記測定の後、ベスナリノンのビヒクル
（１．０％（ｖ／ｖ）ジメチルスルホキシド、ＤＭＳ
Ｏ）をＬＡＤ内に５分間注入し、上記の血行力学および
代謝に関するパラメーターの全てを測定した。即ち、注
入ポンプを用いて、ベスナリノン０．５４ｍｇ／ｍｌを
注入速度０．２〜０．５ｍｌ／分でＬＡＤに注入し、１
５μｇ／ｍｌを達成した。上記の血行力学および代謝パ
ラメーターの全てを、注入から５分後および１０分後に
再度測定した。

【００５１】赤血球によるアデノシン取込みとアデノシ
ン分解の両方をブロックするために０．０２％（ｗ／
ｖ）ジピリダモール０．５ｍｌおよび、５００ｍＭ Ｅ
ＤＴＡ中２’−デオキシコフォルマイシン(2'-deoxycof
ormycin)０．１ｍｇ／ｍｌ溶液１００μｌを含むシリン
ジに、血液１．０ｍｌを取り出して、アデノシンの血中
濃度を測定した。遠心分離（３０００×ｇ）の後、上清
を集め、そのアデノシン濃度をラジオイムノアッセイで
測定した。具体的には、血漿１００μｌ中のアデノシン
を、無水コハク酸４０ｍｇおよびトリエチルアミン０．
４ｍｇを含むジオキサン１００μｌでスクシニル化し
た。４℃で２０分間インキュベーションした後、混合物
を、希釈した抗−アデノシン血清（ヤマサ醤油、千葉、
日本）１００μｌおよび０．５ｐｍｏｌのアデノシン
２’，３’−Ｏ−ジスクシニル−３［¹²⁵Ｉ］ヨードチ
ロシンメチルエステル１００μｌで希釈した。混合物
を、冷水浴（４℃）中に１８時間維持し、第二抗体溶液
（ヒツジ抗ウサギＩｇＧ）（ヤマサ醤油、千葉、日本）
抗血清５００μｌを加えた。４℃で６０分間インキュベ
ーションした後、未反応物質を３０００ｒｐｍ（２，５
００×ｇ）で４℃にて２０分間遠心分離して除去した。
チューブに残っている放射能活性を、ガンマ・カンウン
ターを用いて計測した。この血液サンプリング手順の間
のアデノシン分解は、無視できるものと報告されている
（ヤマネ(Yamane)、ジャーナル・オブ・イムノロジー
(J. Immunol.)、12: 501-519 (1991)；サトー(Sato)
ら、Ann. Biochem.、121: 409-420 (1982)；ホリ(Hori)
ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー(A
m. J. Physiol.)、250: 14509-14518 (1986)；およびキ
タカゼ(Kitakaze)ら、サーキュレーション・リサーチ(C
irc. Res.)、60: 631-630 (1987)）。

【００５２】特異的抗体を用いるこの方法は、アデノシ
ンをわずか５．０ｐｍｏｌ／ｍｌでも検出するのに十分
な感度を有するものであった。アッセイ内およびアッセ
イ間の変動率(coefficient of variance)は、それぞれ
１．３〜３．１％および４．１〜４．９％であることが
観察された。アデノシンを測定するためのこの高感度な
ラジオイムノアッセイは、アデノシンのＨＰＬＣ測定で
通常行われるタンパク質除去を必要としない。代表的な
犬についての結果を下記の表１に示す。

【００５３】

【表１】

【００５４】上記の表１に示されるように、ＣＰＰが９
６から５３ｍｍＨｇに低下し、その結果ＣＢＦがベース
ライン流量の６０％に減少したとき、冠状静脈血の乳酸
およびアデノシンの濃度は増加した。他方、冠状動脈血
の乳酸濃度（１９．５ｍｇ／ｄｌ）およびアデノシン濃
度（７．２ｐｍｏｌ／ｍｌ）は、本研究を通して、ＣＰ
Ｐの低下によっては変化しなかった。次いで、ＣＢＦ
は、一定に保たれていた。冠状低灌流の間のＤＭＳＯ注
入は、ＣＰＰまたは冠状静脈血の乳酸およびアデノシン
濃度にいかなる変化も生じなかった。

【００５５】しかしながら、上記の表１に示されるよう
に、ベスナリノン注入の間、冠状静脈血のアデノシン濃
度は、冠状静脈血のＣＢＦおよび乳酸濃度が不変である
にもかかわらず、増加した。しかし、ＣＰＰは、アデノ
シンの冠状血管拡張作用により、低下（５３から５１ｍ
ｍＨｇに）した。これらの結果は、ベスナリノンが虚血
性心筋におけるアデノシン放出を増強することを示す。

【００５６】実施例２冠血流量に対するベスナリノンの効果 上記の犬の体外バイパス・チューブに取付けた閉塞物に
より、ＣＰＰを低下させて、ＣＢＦをコントロールＣＢ
Ｆの６０％に減少させた。低いＣＰＰが測定された後、
ＣＰＰを低いレベルに一定に保つように閉塞物を調整し
た。全ての上記血行力学パラメーター、および代謝パラ
メーターについて冠状動脈血および静脈血を、低灌流の
開始から１０分間後に測定した。これらの測定の後、ベ
スナリノンのビヒクル（１．０％（ｗ／ｖ）ＤＭＳＯ）
をＬＡＤ内に注入し、上記の血行力学および代謝パラメ
ーターの全てを、注入から５分後に測定した。次に、注
入ポンプを用いて、ベスナリノン０．５４ｍｇ／ｍｌ
を、注入速度０．２〜０．５ｍｌ／分でＬＡＤ内に注入
し、１５μｇ／ｍｌを達成した。血行力学および代謝パ
ラメーターの全てを、注入から５分後および１０分後に
再び測定した。代表的な犬に関する結果を下記の表２に
示す。

【００５７】

【表２】

【００５８】上記の表２に示されるように、ＣＰＰが９
３から５９ｍｍＨｇに低下し、その結果ＣＢＦがベース
ライン流量の６０％に減少したとき、冠状静脈血の乳酸
濃度は増加したが、冠状動脈血の乳酸濃度は不変であっ
た。次いで、ＣＰＰは一定に保たれていた。ＤＭＳＯ
は、冠状動脈血のＣＢＦまたは乳酸濃度を変化させなか
った。しかしながら、ベスナリノンは、ＣＢＦを増加さ
せ、冠状静脈血の乳酸濃度を減少させた。これらの結果
は、ベスナリノンがＣＢＦを増加でき、即ち、虚血性心
筋における冠状血管拡張がなされ、虚血の重篤度を減少
させることを示す。

【００５９】実施例３ベスナリノンの梗塞サイズに対する効果 アデノシンを用いた灌流は、梗塞サイズを顕著に制限で
き（オラフソン(Olafsson)、Circ.、76: 1135-1145 (19
87)）、上述の実施例１で示されるように、ベスナリノ
ンはアデノシンの血中濃度を増加できる。従って、ベス
ナリノンも梗塞サイズの減少を引き起こすかどうか決定
するための試験を行った。

【００６０】より詳細には、上記の犬のＬＡＤを剥離
し、湿らせた臍帯テープ(umbilical tape)のストリップ
を閉塞を起こすために冠血管の周囲に通過させた。冠閉
塞は、臍帯テープを小さなプラスチック・チューブ内に
通しプラスチック・チューブに圧をかけることによりな
された。局所心筋血流量(regional blood flow)を測定
するため、左房内にマイクロスフェア投与用のカテーテ
ルを留置した。

【００６１】局所的ＣＢＦを、マイクロスフェア法で測
定したが、これは、モリ(Mori)ら、アメリカン・ジャー
ナル・オブ・フィジオロジー(Am. J. Physiol.)、263:
141946-141957 (1992)に記載されるように、種類の異な
る安定な重元素で標識した不活性プラスチックからなる
放射能非活性なマイクロスフェア（セキスイ・プラスチ
ック株式会社、東京、日本）を用いる。

【００６２】より詳細には、ＢｒおよびＺｒで標識し
た、平均直径１５μｍを有するマイクロスフェアを使用
した。比重は、Ｂｒに関しては１．３４、Ｚｒに関して
は１．３６であった。マイクロスフェアを、０．０１％
（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ８０を含む等張食塩水中に懸濁さ
せ、凝集を防いだ。マイクロスフェアを５分間、超音波
にかけ、その後、注入直前に５分間攪拌した。１．０ｍ
ｌのマイクロスフェア懸濁液（２〜４×１０⁶個のスフ
ェア）を、左房内に注入し、温かい（３７℃）食塩水
５．０ｍｌで数回フラッシュした。マイクロスフェア
を、冠閉塞の開始から８０分後に投与した。マイクロス
フェア投与の直前に、参照となる血流サンプルを、大腿
動脈から８．０ｍｌ／分の一定速度で２分間、取り出し
た。安定な重元素のＸ線蛍光を、ＰＷ１４８０波長分散
スペクトロメーター（フィリツプス(Phillips Co., Lt
d.)、アルメロ(Almelo)、オランダ）により測定した。
マイクロスフェアを一次Ｘ線ビームで照射するとき、電
子は、より低い軌道に落ち込み、各元素に特徴的なＸ線
蛍光エネルギーレベルを伴った測定可能なエネルギーを
発する。従って、単一混合物(single mixture)中の数種
の標識化マイクロスフェアのＸ線蛍光を同定することが
可能である。局所的ＣＢＦを、式：単位時間当りの流量
＝（組織カウント数）×（参照流量）／（参照カウント
数）に従って計算し、ｍｌ／分／ネットの重量ｇで示
す。

【００６３】コントロールとして、血行力学安定化から
２０分後に、ＬＡＤを９０分間閉塞し、６時間再灌流し
た。注入ポンプを用いて、ベスナリノン０．９０ｍｇ／
ｍｌを注入速度０．２〜０．５ｍｌ／分で、冠閉塞より
２０分前に、および冠閉塞から９０分後に１時間再灌流
する間に注入し、１５μｇ／ｍｌを達成した。

【００６４】再灌流から６時間後に、ＬＡＤを再閉塞し
て自家血液で灌流しながら、エバンスブルー染料を全身
静脈に注射して、心臓の解剖学的危険面積および非虚血
面積を測定した。続いて、心臓を直ちに摘出し、幅６〜
７ｍｍの連続横断切片にスライスした。非虚血面積を、
青染料で同定し、虚血領域を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）中１．０％（ｗ／ｖ）の２，３，５−トリフ
ェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ；シグマケミカ
ル(Sigma Chemical Co.)）で、３７℃にて２０〜３０分
間インキュベートした。ＴＴＣは、非梗塞心筋を赤レン
ガ色に染め、生きている組織に存在するデヒドロゲナー
ゼ酵素によるＴＴＣ減少に起因するホルマザン沈殿物(f
ormazan precipitate)の存在を示す。梗塞サイズを、危
険な状態にある面積のパーセンテージとして計算した。
結果を、下記の表３に示す。

【００６５】

【表３】

【００６６】上記の表３に示されるように、虚血の際の
側副血流量およびＤＭＳＯ群とベスナリノン群の危険面
積は有意に変動しなかったが、梗塞サイズはベスナリノ
ン投与により顕著に減少した。ベスナリノンのこの梗塞
サイズ限定効果は、ベスナリノン処置された犬が８−ス
ルホフェニルテオフィリン（8-sulfophenyltheophyllin
e）（８−ＳＰＴ）２５μｇ／ｋｇ／分を冠状内注入し
た２０分後に、完全になくなった。８−ＳＰＴは、アデ
ノシン・レセプター拮抗剤である。従って、ベスナリノ
ンの梗塞サイズ限定効果は、虚血心臓におけるアデノシ
ン放出の増大によって媒介されるかもしれない。

【００６７】他方、ヌクレオシド輸送阻害剤であるジピ
リダモール１０μｇ／ｋｇ／分を注入速度０．２〜０．
４ｍｌ／分で、冠閉塞より２０分前、および冠閉塞から
９０分後に１時間再灌流する間に注入したとき、観察さ
れた梗塞サイズの減少は、有意に、より小さいものであ
った。

【００６８】上記の結果は明らかに、変力剤であるベス
ナリノンが、梗塞サイズを予想外に著しく減少させるこ
とを示している。

【００６９】虚血心臓でアデノシン放出を増大させるこ
とが知られているジピリダモールは、ベスナリノンに比
し、梗塞サイズの減少効果が低かった。ジピリダモール
は、ベスナリノンと同様にアデノシン・ヌクレオシド輸
送阻害剤であるが、これらの結果は、ベスナリノンとジ
ピリダモールの作用部位および組織親和性が異なること
を示すように思われ、このことが、梗塞サイズ限定効果
に関する能力の予想外の差違を説明するかもしれない。

【００７０】本発明を、その具体的な実施態様を参照し
て詳細に述べたが、種々の変更および修飾が、本発明の
精神および範囲から逸脱することなく為され得ることは
当業者に明らかである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 薬学的有効量の下記一般式（１）で示さ
   れるカルボスチリル誘導体： 【化１】 ［式中、Ｒは、フェニル環上に置換基として低級アルコ
   キシ基を有していても良いベンゾイル基であり、カルボ
   スチリル骨格の３位および４位の炭素−炭素結合は、単
   結合または二重結合である］またはその薬学的に許容さ
   れる塩を有効成分とすることを特徴とする虚血性心疾患
   を有する患者における心筋梗塞サイズ減少剤。
2. 【請求項２】 前記カルボスチリル誘導体が、３，４−
   ジヒドロ−６−［４−（３，４−ジメトキシベンゾイ
   ル）−１−ピペラジニル］−２（１Ｈ）−キノリンまた
   はその薬学的に許容される塩である請求項１に記載の心
   筋梗塞サイズ減少剤。