JPH09176002A - Ｈｓｐ２７ファミリーに属するタンパク質のジンゲロール含有合成抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 分子量１６キロダルトンから４０キロダルト
ンまでの間の熱ショックタンパク質（ＨＳＰ２７ファミ
リー）がその悪性化や温熱療法の効果の減少に関連する
癌、又はＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質がそ
の発症に関連する多発性硬化症などの自己免疫疾患の患
者の生理学的状態を有効に改善させ、前記病気を効果的
に治療することができる、ＨＳＰ２７ファミリーに属す
るタンパク質の合成抑制剤を提供する。 【解決手段】 ジンゲロール又はその誘導体を有効成分
として含有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ジンゲロール又は
その誘導体、特に［６］−ジンゲロールを有効成分とし
て含有する、分子量１６キロダルトン（ｋＤ）から４０
ｋＤまでの間の熱ショックタンパク質群（以下、ＨＳＰ
２７ファミリーと称する）に属するタンパク質の合成抑
制剤に関する。本発明によるＨＳＰ２７ファミリーに属
するタンパク質の合成抑制剤は、特に、ＨＳＰ２７ファ
ミリーに属するタンパク質の組織内合成を抑制すること
によって、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質が
発症、悪性化、又は治療の障害に関与するものと考えら
れている病気、例えば、癌、又は多発性硬化症などの患
者の生理学的状態を有効に改善させ、前記の病気を効果
的に治療することができる。

【０００２】

【従来の技術】近年の化学療法、外科療法、放射線療
法、及び免疫療法などの進歩にもかかわらず、依然とし
て癌による死亡原因に癌の悪性化が直接的又は間接的に
関わっており、癌の悪性化の克服が今後の癌治療の大き
な課題の一つとなっている。癌の悪性度は、癌の増殖
性、浸潤性、又は転移性などによって定められる。悪性
化の現象の一つである転移は原発癌の種類により、転移
を起こしやすい臓器が異なる。癌の転移は複合事象であ
り、原発腫瘍の増殖、癌細胞の原発巣からの離脱と周辺
組織への浸潤・増殖から始まって、腫瘍血管新生、癌細
胞の最寄りの血管内への侵入、血流による遠隔部位への
移動と血管内皮細胞への接着・着床、更に、血管外への
浸潤、遠隔部位（転移組織）での増殖の開始に続いて新
たな腫瘍血管が新生され、やがて可視的な転移巣の形成
に至るまでの複雑な反応カスケードから成り立ってい
る。一般に、癌は、高い悪性度を有するものと、比較的
に悪性度の低いものとに分けられる。しかし、悪性度の
高い癌に対しては根本的な治療法は確立しておらず、患
者は遂には死に至ることが極めて多い。

【０００３】また、癌の温熱療法（ハイパーサーミア；
hyperthermia）とは、癌組織を加温することにより、腫
瘍細胞を選択的に殺し、癌を治療しようとする方法であ
り、近年注目を浴びている。温熱療法による癌治療は、
温熱の生物学的効果をみると、４１〜４５℃の比較的温
和な加温で細胞致死効果が得られること、また放射線や
抗癌剤などと併用することにより相乗的な効果が得られ
ることなど、有利な点が多い。温熱療法による癌の治療
法は、臨床においてはほとんどすべての各科で試みられ
ている。しかし、温熱療法の問題点の一つは、加温後一
過性に誘導される温熱耐性である。すなわち、癌細胞が
１回目の加温により一時的に温熱耐性になるために、次
の加温による殺細胞効果が減少する。温熱耐性とは、細
胞（又は組織）を一度亜致死的な加温をすることによ
り、次の加温に対してその細胞（又は組織）が一過性に
温熱抵抗性になることである。温熱耐性のため、現在ほ
とんどの施設において温熱療法を行うのは週１〜２回に
限定されているのが現状である。

【０００４】また、癌の化学療法においても、化学療法
に殆ど反応しない肺癌や大腸癌などの固型癌が依然とし
て存在する一方で、化学療法剤に反応する癌でも、やが
て抗癌剤が効かなくなる耐性化が問題となっている。１
９８８年のアメリカの統計によれば、１年間に診断され
た癌の４９％が化学療法に最初から抵抗性を示す内因性
耐性であり、４７％が当初化学療法が有効で、腫瘍がい
ったん消退した後に再発した獲得性耐性とされている。
これらの事実から、癌に対する化学療法の効果を妨げる
最も重要な問題の一つは細胞毒性薬剤に対する耐性であ
ることがわかる。

【０００５】また、多発性硬化症（multiple sclerosi
s，ＭＳ）は中枢神経白質を特異的に障害する炎症性脱
髄性疾患であり、その発症機序に、神経線維を包んでい
るミエリン鞘を免疫系が攻撃することが示されている自
己免疫疾患である。多発性硬化症は多くの場合、初期に
は急性憎悪・寛解を繰り返すが、その後徐々に進行性の
経過をとるようになる。急性期の症状改善を目的とした
ものとして、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）や副腎
皮質ステロイド剤が、また寛解期での再発予防や慢性進
行型の症状進展防止を目的として、アザチオプリンやサ
イクロフォスファミドなどの免疫抑制剤が用いられてき
た。しかし、現在、多発性硬化症患者に投与されている
薬剤の多くは、その効果が期待されていたほどでなく、
非特異的な療法で副作用も多くみられるなど、十分とは
いい難いのが現状である。多発性硬化症のより特異的な
治療法の開発が期待されている。

【０００６】一方、熱ショックタンパク質（heat shock
protein；ＨＳＰ、ストレスタンパク質ともいう）は、
細胞を何らかのストレス、例えば熱、重金属、薬剤、ア
ミノ酸類似体、又は低酸素（低濃度酸素）などで刺激す
ることにより、細胞に発現される一群のタンパク質であ
る。熱ショックタンパク質は、自然界に普遍的に存在し
ており、細菌、酵母、植物、昆虫、及びヒトを含む高等
動物により産生される。

【０００７】ＨＳＰは、その種類は多種多様であるが、
分子量の大きさからＨＳＰ９０ファミリー（例えば、９
０ｋＤ又は１１０ｋＤのＨＳＰなど）、ＨＳＰ７０ファ
ミリー（例えば、７０〜７３ｋＤのＨＳＰなど）、ＨＳ
Ｐ６０ファミリー（例えば、５７〜６８ｋＤのＨＳＰな
ど）、低分子ＨＳＰファミリー（例えば、２０ｋＤ、２
５〜２８ｋＤ、又は４７ｋＤのＨＳＰなど）の４ファミ
リーに大別することができる。なお、本明細書において
は、特定分子量を有するＨＳＰを、ＨＳＰとその直後に
記載する数字とによって示すものとし、例えば、分子量
２７ｋＤのＨＳＰを『ＨＳＰ２７』と称するものとす
る。以上のように、ＨＳＰには多くの種類が存在する
が、これらは分子量だけでなく、構造、機能、又は性質
などもそれぞれ異なるものである。ストレスへの応答に
加えて、これらのタンパク質の中には構成的に合成され
るものがあり、正常な環境の下で、タンパク質のフォー
ルディング、アンフォールディング、タンパク質サブユ
ニットの会合、タンパク質の膜輸送のような、必須の生
理的な役割を演じていることが示されている。熱ショッ
クタンパク質としてのこれらの機能は、分子シャペロン
と称される。

【０００８】ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質
の発現は、ヒト乳癌において、リンパ節転移、リンパや
血管への浸潤、より短い生存率との間に顕著な相関があ
る（"J. Natl. Cancer Inst." 83: 170-178, 1991)。胃
癌においてもＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質
はネガティブな予後因子であるとの報告がある（"Br.J.
Surg.", 78: 334-336, 1991)。ＨＳＰ２７ファミリー
に属するタンパク質の原発癌細胞における発現レベルが
癌悪性度、特に癌の再発率と正の相関があるという報告
もあるので（"Breast Cancer Res. Treat.", 12: 130,
1988; "Proc.Am. Assoc. Cancer Res.", 30: 252, 19
89)、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質の発現
を抑制することにより、癌の悪性化を防止することが可
能である。

【０００９】癌の温熱療法で問題となる温熱耐性にＨＳ
Ｐ２７ファミリーに属するタンパク質が関与するという
報告がある。ヒトＨＳＰ２７遺伝子をマウス又はハムス
ター細胞に導入して発現させたところ、熱ショック後に
生き残る温熱耐性の細胞がＨＳＰ２７のタンパク質の量
に依存して誘導され増加する（"J. Cell. Biol.", 109
: 7-15, 1989）。また、チャイニーズハムスター細胞
で、ＨＳＰ２７を定常的に発現するようになった変異株
が熱耐性を獲得できるようになる（"J. Cell. Physio
l.", 137 : 157, 1988)。α−Ｂクリスタリンは、熱シ
ョック処理で誘導され、ＨＳＰ２７とアミノ酸配列の相
同性が高いタンパク質であり、ＨＳＰ２７ファミリーに
属するタンパク質の一つであるが、α−Ｂクリスタリン
を過剰発現させた細胞も熱ストレスに対する耐性を獲得
する（"J. Cell. Biol.", 125 : 1385-1393, 1994)。こ
のことは、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質の
発現を抑制することにより、温熱耐性を抑え、癌に対す
る温熱療法の効果を増強する可能性を示している。ま
た、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質の発現と
薬剤耐性とが相関するとの報告もあるので（"Breast Ca
ncer Res. Treat.", 23:178, 1992; "Cancer Res.", 5
1: 5245-5252, 1991)、ＨＳＰ２７ファミリーに属する
タンパク質の発現を抑制することにより、薬剤耐性を抑
え、化学療法の効果を増強することも可能である。

【００１０】多発性硬化症における免疫的に優性な抗原
が、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質であるα
−Ｂクリスタリンであることが突き止められている（"N
ature", 375 : 739-740, 1995)。α−Ｂクリスタリン
は、多発性硬化症患者の神経組織中での発現が、非発病
者の組織中での発現よりも強く、非常に免疫原性が高い
（"Nature", 375 : 798-801, 1995)。これらの事実は、
多発性硬化症で自己抗原となっているのは、ＨＳＰ２７
ファミリーに属するタンパク質の１種であるα−Ｂクリ
スタリンであり、ミエリン鞘におけるα−Ｂクリスタリ
ンの発現を抑制することが多発性硬化症の根本的治療に
結び付くことを示している。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記事
情に鑑み、癌や多発性硬化症などの病気の患者の生理学
的状態を有効に改善させ、前記の病気を効果的に治療す
ることのできる方法を開発するために、ＨＳＰ２７ファ
ミリーに属するタンパク質に対して合成抑制作用を示す
化合物に関して、種々検討を重ねてきた。その結果、本
発明者らは、意外にも、ショウキョウの成分であるジン
ゲロール、又はその誘導体、特に［６］−ジンゲロール
が、病態を示す組織の細胞におけるＨＳＰ２７ファミリ
ーに属するタンパク質の合成を特異的に抑制することを
見出した。すなわち、ジンゲロール、又はその誘導体を
投与することにより、細胞内でのＨＳＰ２７ファミリー
に属するタンパク質の合成が抑制され、従って、癌や多
発性硬化症などの病気の治療が可能であることを見出し
たのである。本発明はこうした知見に基づくものであ
り、癌や多発性硬化症などの病気を効果的に治療するこ
とのできる、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質
の合成抑制剤を提供することを目的とする。

【００１２】

【課題を解決するための手段】従って、本発明は、ジン
ゲロール又はその誘導体、特に［６］−ジンゲロールを
有効成分として含有することを特徴とする、分子量１６
キロダルトンから４０キロダルトンまでの間の熱ショッ
クタンパク質（すなわち、ＨＳＰ２７ファミリーに属す
るタンパク質）の合成抑制剤に関する。本明細書におい
て、「ＨＳＰ２７ファミリー」とは、前記のとおり、分
子量が１６ｋＤ〜４０ｋＤの熱ショックタンパク質群を
意味する。ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質と
しては、例えば、哺乳動物のＨＳＰ２７（すなわち、分
子量２７ｋＤの熱ショックタンパク質）〔若しくはＨＳ
Ｐ２８（すなわち、分子量２８ｋＤの熱ショックタンパ
ク質）〕、トリのＨＳＰ２５（すなわち、分子量２５ｋ
Ｄの熱ショックタンパク質）、又は酵母のＨＳＰ２６
（すなわち、分子量２６ｋＤの熱ショックタンパク質）
などを挙げることができる。なお、一般的に、タンパク
質の分子量は、例えば、分子量測定方法又は実験条件な
どの違いにより多少の差が生じるので、ＨＳＰ２７ファ
ミリーに属するタンパク質の中には、例えば、哺乳動物
におけるＨＳＰ２７とＨＳＰ２８とのように、分子量表
記が異なっていても、それらがアミノ酸配列の異なる別
異のタンパク質であるのか、あるいは単に分子量表記の
みが外見上異なる同一のタンパク質であるのかが、現在
のところ明らかではないものも含まれている。ＨＳＰ２
７ファミリーに属するタンパク質は、前記の低分子ＨＳ
Ｐファミリーに属する熱ショックタンパク質のうち哺乳
動物において最も主要な熱ショックタンパク質であり、
生物種を超えてよく保存された特徴を示す。しかし、Ｈ
ＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質は、他の熱ショ
ックタンパク質とは異なり、種ごとに異なる分子量を有
しており、分子量１６ｋＤ〜４０ｋＤと、非常に多様な
タンパク質である。また、ＨＳＰ２７とアミノ酸配列の
相同性の高いα−Ｂクリスタリンも熱ショック処理で誘
導され、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質の一
つである

【００１３】

【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明の合成抑制剤は、有効成分としてジンゲロ
ール又はその誘導体を含有する。本明細書においてジン
ゲロールとは、例えば、［３］−ジンゲロール（［３］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［４］−ジンゲロール（［４］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［５］−ジンゲロール（［５］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［６］−ジンゲロール（［６］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［８］−ジンゲロール（［８］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［１０］−ジンゲロール（［１
０］−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、又は［１２］−ジンゲロー
ル（［１２］−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）等を意味する。本発
明においては、それらのジンゲロール同族体は、単独で
用いることもできるし、あるいは、異なる複数のジンゲ
ロールを組み合わせて同時に用いることもできる。本発
明の合成抑制剤において用いられるジンゲロールとして
は、特に、［６］−ジンゲロール〔（Ｓ）−５−ヒドロ
キシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）
−３−デカノン；Ｃ₁₇Ｈ₂₆Ｏ₄ ＝２９４．３８〕が最も
好適である。［６］−ジンゲロールは、式

【化１】 で表される化合物であり、例えば、ショウキョウ等の生
薬に含まれている。

【００１４】本発明の合成抑制剤に含有されるジンゲロ
ール又はその誘導体は、化学合成によって、又は天然物
から抽出して精製することによって、調製することがで
きる。あるいは、市販品を用いてもよい。また、本発明
の合成抑制剤において有効成分として用いるジンゲロー
ルを、天然物から抽出する場合には、ジンゲロールを含
有する植物の全体又は一部分（例えば、全草、葉、根、
根茎、茎、根皮、若しくは花）をそのまま用いて、又は
簡単に加工処理（例えば、乾燥、切断、若しくは粉末
化）したもの（例えば、生薬）を用いて抽出する。抽出
条件は一般的に植物抽出に用いられる条件ならば特に制
限はない。

【００１５】本発明におけるジンゲロールは、生薬から
抽出する場合、これに限定するものではないが、例えば
ショウキョウから抽出することが好ましい。ショウキョ
ウ（生姜：Ｇｉｎｇｅｒ；Ｚｉｎｇｉｂｅｒｉｓ Ｒｈ
ｉｚｏｍａ）とは、ショウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆ
ｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）の根茎の生又は乾燥
物を意味し、それらの部分を単独であるいは任意に組み
合わせて使用することができる。

【００１６】本発明による合成抑制剤において有効成分
として用いるショウキョウ抽出物は、前記のジンゲロー
ル、特に［６］−ジンゲロールを含有していればよく、
従って、ショウキョウの粗抽出物を用いることができ
る。本発明で用いるショウキョウ抽出物の製造方法とし
ては、ショウキョウを、例えば、水（例えば、温水、好
ましくは熱湯）によって抽出するか、又は有機溶媒を用
いて抽出する。有機溶媒としては、例えば、メチルアル
コール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、
イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、酢酸メチ
ル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、アセト
ン、メチルイソブチルケトン、石油エーテル、シクロヘ
キサン、四塩化炭素、トルエン、ベンゼン、ジクロロメ
タン、クロロホルム、エーテル、ピリジン、ポリエチレ
ングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコ
ール、又はアセトニトリルなどを用いることができ、こ
れらの有機溶媒を単独、又は適宜組み合わせ、一定の比
率で混合し、更には無水又は含水状態で用いることがで
きる。好ましくは、エチルアルコール−水混合溶媒、エ
チルアルコール、エーテル、クロロホルム、ベンゼン、
アセトン、又は熱石油エーテル等が望ましい。

【００１７】水抽出又は有機溶媒抽出の方法としては、
通常の生薬抽出に用いられる方法を用いることができ、
例えば（乾燥）ショウキョウ１重量部に対し、水又は有
機溶媒５〜３００重量部を用いて、攪拌しながら、その
沸点以下の温度で加熱還流することが望ましい。抽出工
程は、通常は５分〜７日間、好ましくは１０分〜２４時
間実施し、必要に応じて、攪拌等の補助的手段を加える
ことにより、抽出時間を短縮することができる。

【００１８】抽出工程終了後、濾過又は遠心分離等の適
当な方法により、水又は有機溶媒抽出液から、不溶物を
分離して粗抽出物を得ることができる。なお、本発明の
合成抑制剤において、天然物より抽出、分画したジンゲ
ロール、特に［６］−ジンゲロールを用いる場合には、
前記の粗抽出物を特に精製することなく、そのまま使用
してもよい。常法による熱水抽出物又は有機溶媒抽出物
の他に、前記の粗抽出物を各種有機溶媒又は吸着剤等に
より、更に処理した精製抽出物も、本発明の合成抑制剤
の有効成分として用いることができる。これらの粗抽出
物及び各種の精製処理を終えた精製抽出物を含むショウ
キョウ抽出物は、抽出したままの溶液を用いても、溶媒
を濃縮したエキスを用いても良いし、溶媒を留去し乾燥
した粉末、更には結晶化して精製したもの、あるいは粘
性のある物質を用いても良く、またそれらの希釈液を用
いることもできる。こうして得られたショウキョウ抽出
物は、ショウキョウに含まれるジンゲロール（例えば、
［３］−ジンゲロール、［４］−ジンゲロール、［５］
−ジンゲロール、［６］−ジンゲロール、［８］−ジン
ゲロール、［１０］−ジンゲロール、及び／又は［１
２］−ジンゲロール等）を混合物として含み、同時に原
料のショウキョウに由来する不純物を含んでいる。

【００１９】また、ジンゲロール誘導体としては、例え
ば、天然物中に本来含有されているジンゲロール誘導
体、抽出又は分画の際の化学的処理によって変換したジ
ンゲロール誘導体、及び化学的修飾を行ったジンゲロー
ル誘導体等が含まれる。天然物中に本来含有されている
ジンゲロール誘導体としては、例えば、［６］−ジンジ
ャージオール（［６］−ｇｉｎｇｅｒｄｉｏｌ）、
［８］−ジンジャージオール（［８］−ｇｉｎｇｅｒｄ
ｉｏｌ）、［１０］−ジンジャージオール（［１０］−
ｇｉｎｇｅｒｄｉｏｌ）、メチル［６］−ジンジャージ
オール（ｍｅｔｈｙｌ［６］−ｇｉｎｇｅｒｄｉｏ
ｌ）、メチル［６］−ジンジャージオールジアセテート
（ｍｅｔｈｙｌ ［６］−ｇｉｎｇｅｒｄｉｏｌ ｄｉ
ａｃｅｔａｔｅ）、又はデヒドロジンゲロン（ｄｅｈｙ
ｄｒｏｚｉｎｇｅｒｏｎｅ）等を挙げることができる。
抽出若しくは分画の際の化学的処理によって変換したジ
ンゲロール誘導体としては、例えば、［６］−ショウガ
オール（［６］−ｓｈｏｇａｏｌ）、［８］−ショウガ
オール（［８］−ｓｈｏｇａｏｌ）、［１０］−ショウ
ガオール（［１０］−ｓｈｏｇａｏｌ）、又はジンゲロ
ン（ｚｉｎｇｅｒｏｎｅ）等を挙げることができる。化
学的修飾を行ったジンゲロール誘導体としては、例え
ば、メチルジンゲロール（ｍｅｔｈｙｌｇｉｎｇｅｒｏ
ｌ）、ジメチルジンゲロール（ｄｉｍｅｔｈｙｌｇｉｎ
ｇｅｒｏｌ）、又はジニトロフェニルジンゲロール（ｄ
ｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌｇｉｎｇｅｒｏｌ）等を挙げ
ることができる。なお、前記のジンゲロール又はその誘
導体には、立体異性体が存在し、本発明では、それらの
任意の純粋な立体異性体又はそれらの混合物を用いるこ
とができる。

【００２０】本発明の合成抑制剤は、ジンゲロール若し
くはその誘導体、又はジンゲロール含有植物、例えば、
ジンゲロール含有生薬（特には、ショウキョウ）より抽
出、分画したジンゲロール含有抽出物を、それ単独で、
又は好ましくは製剤学的若しくは獣医学的に許容するこ
とのできる通常の担体と共に、動物、好ましくは哺乳動
物（特にはヒト）に投与することができる。投与剤型と
しては、特に限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒
剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロ
ップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射
剤、外用液剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若
しくは点眼薬などの非経口剤を挙げることができる。こ
れらの経口剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリ
ウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、
マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキストリ
ン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシ
チン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸
マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネ
シウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなど
の賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動
性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安
定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、
常法に従って製造することができる。例えば、［６］−
ジンゲロール１重量部と乳糖９９重量部とを混合して充
填したカプセル剤などである。

【００２１】非経口投与方法としては、注射（皮下、静
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としてのジンゲロール若しく
はその誘導体（特には［６］−ジンゲロール）、又はジ
ンゲロール含有植物抽出物、例えば、ジンゲロール含有
生薬抽出物（特には、ショウキョウ抽出物）の他に、例
えば、生理食塩水、リンゲル液等の水溶性溶剤、植物
油、若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ
糖、若しくは塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助
剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤等を任意
に用いることができる。また、本発明の合成抑制剤は、
徐放性ポリマーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて
投与してもよい。例えば、本発明の合成抑制剤をエチレ
ンビニル酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、この
ペレットを治療すべき組織中に外科的に移植することが
できる。

【００２２】本発明の合成抑制剤は、これに限定される
ものではないが、ジンゲロール又はその誘導体を、０．
０１〜９９重量％、好ましくは０．１〜８０重量％の量
で含有することができる。また、ジンゲロール含有植物
抽出物、例えば、ジンゲロール含有生薬抽出物（特に
は、ショウキョウ抽出物）を有効成分として含有する本
発明の合成抑制剤は、その中に含まれるジンゲロール
（特には、［６］−ジンゲロール）が前記の量範囲にな
るように適宜調整して、調製することができる。なお、
ジンゲロール含有植物抽出物、例えば、ジンゲロール含
有生薬抽出物（特には、ショウキョウ抽出物）を有効成
分として含有する合成抑制剤を、経口投与用製剤とする
場合には、製剤学的に許容することのできる担体を用い
て、製剤化することが好ましい。

【００２３】本発明の合成抑制剤を用いる場合の投与量
は、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程
度、又は投与方法などにより異なり、特に制限はない
が、［６］−ジンゲロール量として通常成人１人当り１
ｍｇ〜１０ｇ程度を、１日１〜４回程度にわけて、経口
的に又は非経口的に投与する。更に、用途も医薬品に限
定されるものではなく、種々の用途、例えば、機能性食
品や健康食品として飲食物の形で与えることも可能であ
る。

【００２４】

【作用】上記したように、本発明の合成抑制剤に含有さ
れるジンゲロール又はその誘導体、特に［６］−ジンゲ
ロールは、細胞内のＨＳＰ２７ファミリーに属するタン
パク質の合成を特異的に抑制する作用があるので、前記
ジンゲロール又はその誘導体を投与すると細胞でのＨＳ
Ｐ２７ファミリーに属するタンパク質の生合成が特異的
に減少する。従って、前記ジンゲロール又はその誘導体
は、例えば、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質
がその悪性化に関連する癌の予防及び治療、ＨＳＰ２７
ファミリーに属するタンパク質がその療法への障害とな
る温熱耐性に関連する癌温熱療法の効果の増強、又はＨ
ＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質がその発症に関
連する多発性硬化症などの自己免疫疾患の予防及び治療
などに使用することができる。また、ＨＳＰ２７ファミ
リーに属するタンパク質の発現と薬剤耐性とが相関する
との報告もあるので（"Breast Cancer Res. Treat.",2
3: 178, 1992; "Cancer Res.", 51: 5245-5252, 199
1)、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質の発現を
抑制することにより、薬剤耐性を抑え、化学療法の効果
を増強することも可能である。

【００２５】

【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：ヒト培養癌細胞のＨＳＰ発現量の測定 （１）ヒト培養癌細胞の培養 以下の各種ヒト培養癌細胞を、５％二酸化炭素条件下
で、熱ショック処理時以外は、３７℃で培養した。肺癌
細胞株Ｈ６９（ＡＴＣＣ ＨＴＢ １１９）は、１０％
非働化ウシ胎児血清（以下、ＦＢＳと略称する）を含む
ＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。子宮癌細胞株Ｈｅ
Ｌａ Ｓ３（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２．２）は、１０％非
働化ＦＢＳを含むＭＥＭ培地にて培養した。神経腫瘍細
胞株（神経芽細胞腫）ＳＫ−Ｎ−ＭＣ（ＡＴＣＣ ＨＴ
Ｂ １０）は、非必須アミノ酸（Ｌ−アラニン８．９ｍ
ｇ／ｌ、Ｌ−アスパラギン・Ｈ₂ Ｏ１５．０ｍｇ／ｌ、
Ｌ−アスパラギン酸１３．３ｍｇ／ｌ、Ｌ−グルタミン
酸１４．７ｍｇ／ｌ、グリシン７．５ｍｇ／ｌ、Ｌ−プ
ロリン１１．５ｍｇ／ｌ及びＬ−セリン１０．５ｍｇ／
ｌ）及び１０％非働化ＦＢＳを含むＭＥＭ培地にて培養
した。

【００２６】（２）［６］−ジンゲロール処理及び熱シ
ョック処理 播種２日後の前記各種培養ヒト癌細胞の培地中に、最終
濃度１００μＭになるように［６］−ジンゲロール（松
浦薬業）を添加し、２４時間培養した。その後、４５℃
にて１５分間熱ショック処理をしてから、３７℃にて終
夜培養した。対照試験は、［６］−ジンゲロールを添加
しないこと以外は前記と同様に実施した。

【００２７】（３）ヒト培養癌細胞でのＨＳＰ発現量の
測定 前項（２）で処理した各細胞を、以下に示す方法により
ホモジナイズし、ＨＳＰ発現量をウェスタンブロット法
にて測定した。すなわち、前項（２）で処理した細胞を
リン酸緩衝生理食塩水〔組成：ＫＣｌ＝０．２ｇ／ｌ，
ＫＨ₂ ＰＯ₄ ＝０．２ｇ／ｌ，ＮａＣｌ＝８ｇ／ｌ，Ｎ
ａ₂ ＨＰＯ₄ （無水）＝１．１５ｇ／ｌ；以下、ＰＢＳ
（−）と称する〕で洗浄した後、ライシスバッファー
（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）〔１．０％ＮＰ−４０、
０．１５Ｍ塩化ナトリウム、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ
（ｐＨ８．０）、５ｍＭ−ＥＤＴＡ、２ｍＭ−Ｎ−エチ
ルマレイミド、２ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオ
リド、２μｇ／ｍｌロイペプチン及び２μｇ／ｍｌペプ
スタチン〕１ｍｌを加え、氷上で２０分間静置した。そ
の後、４℃で１２０００ｒｐｍにて、２０分間、遠心を
行った。遠心後の上清１０μｌをＰＢＳ（−）７９０μ
ｌに加え、更にプロテインアッセイ染色液（Dye Reagen
t Concentrate : バイオラッド，カタログ番号500-000
6）２００μｌを加えた。５分間、室温にて静置した
後、５９５ｎｍで吸光度を測定してタンパク質定量を行
った。

【００２８】タンパク質定量を行った試料を用いて、Ｌ
ａｅｍｍｌｉのバッファー系（Laemmli, N. K., "Natur
e", 283 : pp. 249-256, 1970)にて、等量のタンパク質
を含むライセートのＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気
泳動を行った。電気泳動後、ブロッティング及びそれに
続くブロッキングを行った。すなわち、タンパク質転写
装置（Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell：バ
イオ・ラッド，カタログ番号170-3946）を用いて、室温
にて１００Ｖにて、０．４５μｍニトロセルロース膜
（Schleicher & Schuell，カタログ番号401196）にゲル
を密着させ、３時間ブロッティングを行った。ブロッテ
ィングバッファーとしては、０．０２５Ｍトリス及び
０．１９２ＭグリシンよりなりｐＨ８．５に調整された
トリスグリシンバッファー（Tris Gly Running and Blo
tting Buffer；Enprotech, 米国マサチューセッツ州，
カタログ番号 SA100034)にメチルアルコールを２０％に
なるように加えて調製したバッファーを用いた。ブロッ
ティング後、ニトロセルロース膜を１０％スキムミルク
（雪印乳業）−ＰＢＳ（−）溶液に室温にて３０分間、
インキュベートし非特異的結合をブロックした。

【００２９】ブロッキング後、ニトロセルロース膜の上
で、抗ヒトＨＳＰ２７マウスモノクローナル抗体（Stre
ssGen, Victoria, B.C., Canada, カタログ番号 SPA-8
00）により、１次抗体反応を行った。この抗ヒトＨＳＰ
２７マウスモノクローナル抗体は、ヒト乳癌細胞株ＭＣ
Ｆ７（ＡＴＣＣ ＨＴＢ ２２）より単離したＨＳＰ２
４を免疫原として作製した抗体であり（"Cancer Res.",
42, 4256-4258, 1982)、ＨＳＰ２７（ヒトＨＳＰ２
７、チンパンジーＨＳＰ２７、及びヒツジＨＳＰ２７）
と特異的に反応し（"Cancer Res.", 42, 4256-4258, 1
982 ； "Cancer Res.", 43, 4297-4301, 1983)、ＨＳＰ
２４及びＨＳＰ２８とも特異的に反応する。１次抗体反
応後、ＰＢＳ（−）で５分間ずつ、溶液を取り替えて２
回の洗浄をスロー・ロッキング・シェイカーによって行
い、更にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（バイ
オ・ラッド，カタログ番号170-6531）溶液で１５分間ず
つ、溶液を取り替えて４回の洗浄を行った。最終的に、
ＰＢＳ（−）で５分間ずつ、２回の洗浄を行った。

【００３０】洗浄終了後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗
マウスＩｇＧ抗体（CAPPEL，カタログ番号55550)を、２
％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）溶液で５０００倍に
希釈して調製した抗体溶液５ｍｌを用いて、２時間、２
次抗体反応を行った。反応終了後、ニトロセルロース膜
に関して、ＰＢＳ（−）溶液で５分間ずつ溶液を変えて
２回、更にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０溶液
で１５分間ずつ溶液を変えて５回の洗浄をスロー・ロッ
キング・シェイカーにより行った。最後にＰＢＳ（−）
溶液で５分間ずつ２回の洗浄を行った。余分なＰＢＳ
（−）溶液を除去した後、ウェスタンブロッティング検
出試薬（ECL Western blotting detectionreagent；Ame
rsham，カタログ番号RPN2106)をニトロセルロース膜上
に振りかけ、１分間インキュベートした後、余分な検出
試薬を除去し、ニトロセルロース膜をラップに包み、反
応面をＸ線フィルム（コダック X-OMAT, AR, カタログ
番号165 1454）に密着させて露光し、現像してＨＳＰ２
７の有無の検討を行った。結果を表１に示す。表中、
「↓」は、対照に比べて、ＨＳＰ２７発現量が減少した
ことを意味する。

【００３１】

【表１】癌種 癌細胞 子宮 HeLa S3 ↓ 肺 H69 ↓神経 SK-N-MC ↓

【００３２】対照試験、すなわち、［６］−ジンゲロー
ルを添加しなかった細胞では、分子量約２７ｋＤのバン
ドが一本検出された。なお、分子量は、前記抗ヒトＨＳ
Ｐ２７マウスモノクローナル抗体との結合、及び分子量
マーカー（ダイズトリプシンインヒビター及びウシカー
ボニックアンヒドラーゼ）により決定した。表１に示す
とおり、［６］−ジンゲロールは子宮癌細胞株ＨｅＬａ
Ｓ３、肺癌細胞株Ｈ６９、神経腫瘍細胞株ＳＫ−Ｎ−
ＭＣにおいてＨＳＰ２７の発現を抑制した。すなわち、
［６］−ジンゲロールは、ＨＳＰ２７の発現を抑制する
合成抑制剤の活性を有するものと結論づけられる。

【００３３】

【発明の効果】以上詳述したように、ジンゲロール又は
その誘導体、特に［６］−ジンゲロールは細胞内のＨＳ
Ｐ２７ファミリーに属するタンパク質の発現を抑制する
合成抑制剤の活性を有する。従って、ジンゲロール又は
その誘導体、特に［６］−ジンゲロールを投与すること
により、例えば、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパ
ク質がその悪性化や温熱療法の効果の減少に関連する
癌、その発症に関連する多発性硬化症などの自己免疫疾
患の患者の生理学的状態を有効に改善させ、前記病気を
効果的に治療することができる。また、ＨＳＰ２７ファ
ミリーに属するタンパク質発現と薬剤耐性とが相関する
との報告もあるので（"Breast Cancer Res.Treat.", 2
3: 178, 1992; "Cancer Res.", 51: 5245-5252, 199
1)、ＨＳＰ２７ファミリーに属するタンパク質の発現を
抑制することにより、薬剤耐性を抑え、化学療法の効果
を増強することも可能である。

フロントページの続き (72)発明者 清輔 洋一 東京都新宿区百人町３−26−１−303 (72)発明者 吉村 真 神奈川県川崎市麻生区下麻生1154−91 (72)発明者 吉汲 親雄 東京都国立市東２−19−46 (72)発明者 西條 長宏 東京都目黒区東が丘２−５−28

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ジンゲロール又はその誘導体を有効成分
   として含有することを特徴とする、分子量１６キロダル
   トンから４０キロダルトンまでの間の熱ショックタンパ
   ク質の合成抑制剤。
2. 【請求項２】 ジンゲロールが［６］−ジンゲロールで
   ある、請求項１に記載の分子量１６キロダルトンから４
   ０キロダルトンまでの間の熱ショックタンパク質の合成
   抑制剤。
3. 【請求項３】 ジンゲロール含有植物の抽出物を有効成
   分として含有することを特徴とする、分子量１６キロダ
   ルトンから４０キロダルトンまでの間の熱ショックタン
   パク質の合成抑制剤。
4. 【請求項４】 ショウキョウの抽出物を有効成分として
   含有することを特徴とする、分子量１６キロダルトンか
   ら４０キロダルトンまでの間の熱ショックタンパク質の
   合成抑制剤。