JPH0920687A - 凍結乾燥血液の戻し液 - Google Patents
凍結乾燥血液の戻し液Info
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- JPH0920687A JPH0920687A JP7167613A JP16761395A JPH0920687A JP H0920687 A JPH0920687 A JP H0920687A JP 7167613 A JP7167613 A JP 7167613A JP 16761395 A JP16761395 A JP 16761395A JP H0920687 A JPH0920687 A JP H0920687A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 凍結乾燥血液の戻し工程において、赤血球な
どの血液細胞の生存率（再生率）を低下させない凍結乾
燥された、細胞を含む血液及び／または細胞を含む血液
成分の戻し液を提供する。 【解決手段】 糖類、バイオポリマー、又は酸若しくは
酸の塩のうち少なくとも１種類を含有してなる溶液に、
細胞賦活剤を含有させて得られることを特徴としてい
る。
どの血液細胞の生存率（再生率）を低下させない凍結乾
燥された、細胞を含む血液及び／または細胞を含む血液
成分の戻し液を提供する。 【解決手段】 糖類、バイオポリマー、又は酸若しくは
酸の塩のうち少なくとも１種類を含有してなる溶液に、
細胞賦活剤を含有させて得られることを特徴としてい
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、保存において、特
殊な冷媒・装置を必要とせず、そのためのエネルギーの
供給も少なくてすみ、かつグリセリン等の凍結防止剤を
混入・脱離させる必要のない、凍結乾燥された細胞を含
む血液及び／または細胞を含む血液成分（以下凍結乾燥
血液という）に関し、特に高い血液細胞の再生率を得る
ための戻し液に関する。
殊な冷媒・装置を必要とせず、そのためのエネルギーの
供給も少なくてすみ、かつグリセリン等の凍結防止剤を
混入・脱離させる必要のない、凍結乾燥された細胞を含
む血液及び／または細胞を含む血液成分（以下凍結乾燥
血液という）に関し、特に高い血液細胞の再生率を得る
ための戻し液に関する。
【０００２】
【従来の技術】自分の血液を保存しておいて必要なとき
に輸血する、いわゆる自己血輸血や、まれな血液型をも
つ人が万一の場合に備えて貯血するまれ血、又は一般の
輸血用血液、及びこれらの血液成分は、保存を必要とす
る。保存期間は１カ月以上のものが対象となる場合が多
い。
に輸血する、いわゆる自己血輸血や、まれな血液型をも
つ人が万一の場合に備えて貯血するまれ血、又は一般の
輸血用血液、及びこれらの血液成分は、保存を必要とす
る。保存期間は１カ月以上のものが対象となる場合が多
い。
【０００３】前記血液及び血液成分の長期保存には、代
表的なものにエレクトリックフリーザを用いる−８０℃
の冷凍法や液体窒素を使う冷凍法（約−１９６℃保
存）、また液体ヘリウムを使う冷凍法（−２７０℃保
存）がある。これらの貯血方法はいずれも、冷却するた
めに特殊な冷媒と容器、及びそのためのエネルギーの供
給が必要である。また、これらの方法においては、氷の
結晶の成長または浸透圧などにより細胞膜が破壊される
ことを防ぐために、グリセリン等の凍結防止剤を、冷凍
保存前に血液と混合させることが行われているが、使用
時には、これを解凍して当該グリセリン等の凍結防止剤
を除去する必要があった。
表的なものにエレクトリックフリーザを用いる−８０℃
の冷凍法や液体窒素を使う冷凍法（約−１９６℃保
存）、また液体ヘリウムを使う冷凍法（−２７０℃保
存）がある。これらの貯血方法はいずれも、冷却するた
めに特殊な冷媒と容器、及びそのためのエネルギーの供
給が必要である。また、これらの方法においては、氷の
結晶の成長または浸透圧などにより細胞膜が破壊される
ことを防ぐために、グリセリン等の凍結防止剤を、冷凍
保存前に血液と混合させることが行われているが、使用
時には、これを解凍して当該グリセリン等の凍結防止剤
を除去する必要があった。
【０００４】しかしながらこのような方法は、血液の保
存に特殊な冷媒と容器を必要とし、そのための大きなエ
ネルギーを供給しなければならないこと、また脱グリセ
リン操作が繁雑で時間を要するため緊急用には適用でき
ないという問題があった。
存に特殊な冷媒と容器を必要とし、そのための大きなエ
ネルギーを供給しなければならないこと、また脱グリセ
リン操作が繁雑で時間を要するため緊急用には適用でき
ないという問題があった。
【０００５】したがってこのような問題を解決するため
に、血液を凍結乾燥する方法が開発された。この方法
は、血球を含む血液、骨髄液（造血幹細胞）、および血
漿中血小板からなる群から選択される１種の液体を、糖
類、バイオポリマー、または、酸もしくはその塩のうち
の少なくとも１種類を含有する溶液で前処理する工程
と、この前処理した液体を第１の所定のサイズに微粒子
化する工程と、微粒子化した液体を第２の所定のサイズ
の生成物に急速冷凍する工程と、凍結物から水分を昇華
して乾燥する工程とからなることを特徴としている（特
願平７−３２７１８号参照）。
に、血液を凍結乾燥する方法が開発された。この方法
は、血球を含む血液、骨髄液（造血幹細胞）、および血
漿中血小板からなる群から選択される１種の液体を、糖
類、バイオポリマー、または、酸もしくはその塩のうち
の少なくとも１種類を含有する溶液で前処理する工程
と、この前処理した液体を第１の所定のサイズに微粒子
化する工程と、微粒子化した液体を第２の所定のサイズ
の生成物に急速冷凍する工程と、凍結物から水分を昇華
して乾燥する工程とからなることを特徴としている（特
願平７−３２７１８号参照）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】こうして調製された凍
結乾燥血液は、必要に応じて保存された後、使用前に戻
し液に溶解して洗浄後、輸血などに供されるが、この戻
し工程において、凍結乾燥血液中の赤血球などの血液細
胞の生存数を低下させずに、できるだけ凍結乾燥前のレ
ベルを維持させることが重要である。本発明は、前記事
情に鑑みてなされたもので、凍結乾燥血液の戻し工程に
おいて、赤血球などの血液細胞の生存率（再生率）を低
下させない凍結乾燥血液の戻し液を提供することを目的
とする。
結乾燥血液は、必要に応じて保存された後、使用前に戻
し液に溶解して洗浄後、輸血などに供されるが、この戻
し工程において、凍結乾燥血液中の赤血球などの血液細
胞の生存数を低下させずに、できるだけ凍結乾燥前のレ
ベルを維持させることが重要である。本発明は、前記事
情に鑑みてなされたもので、凍結乾燥血液の戻し工程に
おいて、赤血球などの血液細胞の生存率（再生率）を低
下させない凍結乾燥血液の戻し液を提供することを目的
とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、糖類、
バイオポリマー、又は酸若しくは酸の塩のうち少なくと
も１種類を含有してなる溶液に、細胞賦活剤を含有させ
て得られる凍結乾燥血液の戻し液が提供される。
バイオポリマー、又は酸若しくは酸の塩のうち少なくと
も１種類を含有してなる溶液に、細胞賦活剤を含有させ
て得られる凍結乾燥血液の戻し液が提供される。
【０００８】前記糖類は、マンノース、キシロース、グ
ルコース、トレハロース、スクロース、マルトロースか
ら選ばれた糖類を少なくとも一種類以上含んでよい。前
記バイオポリマーは、デキストラン、リン酸エステル
塩、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、アルブミンから
選ばれたバイオポリマーを少なくとも１種類以上含んで
よい。
ルコース、トレハロース、スクロース、マルトロースか
ら選ばれた糖類を少なくとも一種類以上含んでよい。前
記バイオポリマーは、デキストラン、リン酸エステル
塩、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、アルブミンから
選ばれたバイオポリマーを少なくとも１種類以上含んで
よい。
【０００９】前記酸若しくは酸の塩は、フィチン酸（別
名、イノシトールヘキサりん酸：ＩＨＰ）、ピロりん酸
塩、アデノシン三りん酸（ＡＴＰ）、２，３−ジホスホ
グリセリン（２，３−ＤＰＧ）、から選ばれた物質を少
なくとも一種類以上含んでよい。前記細胞賦活剤は、ホ
スホエノールピルビン酸（ＰＥＰ）を含む物質で構成さ
れてよい。
名、イノシトールヘキサりん酸：ＩＨＰ）、ピロりん酸
塩、アデノシン三りん酸（ＡＴＰ）、２，３−ジホスホ
グリセリン（２，３−ＤＰＧ）、から選ばれた物質を少
なくとも一種類以上含んでよい。前記細胞賦活剤は、ホ
スホエノールピルビン酸（ＰＥＰ）を含む物質で構成さ
れてよい。
【００１０】前記凍結乾燥血液の戻し液は、そのｐＨが
４から９の間としてよい。さらに前記凍結乾燥血液の戻
し液は、そのｐＨが６から８の間としてよい。
４から９の間としてよい。さらに前記凍結乾燥血液の戻
し液は、そのｐＨが６から８の間としてよい。
【００１１】
【発明の実施の形態】以下本発明について詳細に説明す
る。なお、以下の説明においては、血液又は血液成分を
例にとり、説明の便宜上、単に血液と略記して説明す
る。
る。なお、以下の説明においては、血液又は血液成分を
例にとり、説明の便宜上、単に血液と略記して説明す
る。
【００１２】本発明の戻し液に使用される糖類の例とし
ては、マンノース、キシロース、グルコース、トレハロ
ース、スクロース、マルトースから選ばれた糖類を少な
くとも一種類以上含むものが挙げられる。糖類の濃度は
１〜２Ｍ程度が好ましく、３Ｍ以上であると高張度が高
すぎて好ましくない。
ては、マンノース、キシロース、グルコース、トレハロ
ース、スクロース、マルトースから選ばれた糖類を少な
くとも一種類以上含むものが挙げられる。糖類の濃度は
１〜２Ｍ程度が好ましく、３Ｍ以上であると高張度が高
すぎて好ましくない。
【００１３】また前記バイオポリマーの例としては、デ
キストラン、りん酸エステル塩、ポリビニルピロリドン
（ＰＶＰ）、アルブミンから選ばれたバイオポリマーを
少なくとも一種類以上含むものが挙げられる。これらの
バイオポリマーは通常市販されているものを広く利用す
ることができ、例えば、前記りん酸エステル塩の例とし
ては、ホスホリルコリンクロライド［シグマ（Ｓｉｇｍ
ａ）試薬＃Ｐ０３７８］、５−ホスホリルリボース−１
−ピロホスフェート（シグマ試薬＃Ｐ８２９６）、ま
た、Ｃ3Ｈ3ＮＯ6Ｐ（シグマ試薬＃Ｐ５５０６）、Ｃ3Ｈ
5ＮＯ6Ｐ（シグマ試薬＃Ｐ０７５３）、Ｃ3Ｈ8ＮＯ6Ｐ
（シグマ試薬＃Ｐ０８７８）、Ｃ3Ｈ10ＮＯ6Ｐ（シグマ
試薬＃Ｐ１００３）が挙げられ、それらの塩の例として
はナトリウム塩、カルシウム塩が挙げられる。
キストラン、りん酸エステル塩、ポリビニルピロリドン
（ＰＶＰ）、アルブミンから選ばれたバイオポリマーを
少なくとも一種類以上含むものが挙げられる。これらの
バイオポリマーは通常市販されているものを広く利用す
ることができ、例えば、前記りん酸エステル塩の例とし
ては、ホスホリルコリンクロライド［シグマ（Ｓｉｇｍ
ａ）試薬＃Ｐ０３７８］、５−ホスホリルリボース−１
−ピロホスフェート（シグマ試薬＃Ｐ８２９６）、ま
た、Ｃ3Ｈ3ＮＯ6Ｐ（シグマ試薬＃Ｐ５５０６）、Ｃ3Ｈ
5ＮＯ6Ｐ（シグマ試薬＃Ｐ０７５３）、Ｃ3Ｈ8ＮＯ6Ｐ
（シグマ試薬＃Ｐ０８７８）、Ｃ3Ｈ10ＮＯ6Ｐ（シグマ
試薬＃Ｐ１００３）が挙げられ、それらの塩の例として
はナトリウム塩、カルシウム塩が挙げられる。
【００１４】また前記アルブミンの例としては、人アル
ブミン、牛アルブミン、卵白アルブミンから選ばれたア
ルブミンを少なくとも一種類以上含むものが挙げられ
る。
ブミン、牛アルブミン、卵白アルブミンから選ばれたア
ルブミンを少なくとも一種類以上含むものが挙げられ
る。
【００１５】ここで、人アルブミンの例としては、シグ
マ試薬Ａ−１６５３，同Ａ−１８８７，同Ａ−９５１
１，同Ａ−８７６３，同Ａ−３７８２，同Ａ−６７８
４，同Ａ−６０１９，同Ａ−６９０９，ジニトリフェニ
ール（同Ａ−６６６１）などがある。
マ試薬Ａ−１６５３，同Ａ−１８８７，同Ａ−９５１
１，同Ａ−８７６３，同Ａ−３７８２，同Ａ−６７８
４，同Ａ−６０１９，同Ａ−６９０９，ジニトリフェニ
ール（同Ａ−６６６１）などがある。
【００１６】また、牛アルブミンの例としては、シグマ
試薬Ａ−２１５３，同Ａ−３３５０，同Ａ−４５０３，
同Ａ−３４２５，同Ａ−９６４７，同Ａ−８０２２，同
Ａ−６００３，同Ａ−２９３４，同Ａ−９５４３，同Ａ
−４６２８，同Ａ−７８８８，同Ａ−４３７８，同Ａ−
３４２４，同Ａ−７５１１，同Ａ−７６３８，同Ａ−０
２８１，同Ａ−３０５９，同Ａ−３９０２，同Ａ−７９
０６，同Ａ−６７９３，同Ａ−６９１８，同Ａ−３９１
２，同Ａ−７４０９，同Ａ−７５３４，同Ａ−７２８
４，同Ａ−１６６２，同Ａ−３２９９，同Ａ−３１７
４，同Ａ−７１５９，同Ａ−７０３４，同Ａ−３２９
４，同Ａ−７０３０，同Ａ−９４３０，同Ａ−３８０
３，同Ａ−７６８８，同Ａ−３６７５，同Ａ−９３０
６，などがある。
試薬Ａ−２１５３，同Ａ−３３５０，同Ａ−４５０３，
同Ａ−３４２５，同Ａ−９６４７，同Ａ−８０２２，同
Ａ−６００３，同Ａ−２９３４，同Ａ−９５４３，同Ａ
−４６２８，同Ａ−７８８８，同Ａ−４３７８，同Ａ−
３４２４，同Ａ−７５１１，同Ａ−７６３８，同Ａ−０
２８１，同Ａ−３０５９，同Ａ−３９０２，同Ａ−７９
０６，同Ａ−６７９３，同Ａ−６９１８，同Ａ−３９１
２，同Ａ−７４０９，同Ａ−７５３４，同Ａ−７２８
４，同Ａ−１６６２，同Ａ−３２９９，同Ａ−３１７
４，同Ａ−７１５９，同Ａ−７０３４，同Ａ−３２９
４，同Ａ−７０３０，同Ａ−９４３０，同Ａ−３８０
３，同Ａ−７６８８，同Ａ−３６７５，同Ａ−９３０
６，などがある。
【００１７】また、卵白アルブミンの例としては、シグ
マ試薬Ａ−５２５３，同Ａ−５３７８，同Ａ−５５０
３，同Ａ−２５１２，同Ａ−７６４１，同Ａ−３１５
４，などがある。
マ試薬Ａ−５２５３，同Ａ−５３７８，同Ａ−５５０
３，同Ａ−２５１２，同Ａ−７６４１，同Ａ−３１５
４，などがある。
【００１８】またポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）とし
ては、分子量が約10,000〜360,000のものを好ましく用
いることができ、分子量約40,000程度がより好ましい。
ては、分子量が約10,000〜360,000のものを好ましく用
いることができ、分子量約40,000程度がより好ましい。
【００１９】前記戻し液中のバイオポリマーの濃度は、
５〜２０％程度が好ましく、１０〜２０％程度がより好
ましい。
５〜２０％程度が好ましく、１０〜２０％程度がより好
ましい。
【００２０】また、前記酸若しくは酸の塩の例として
は、フィチン酸（別名、イノシトールヘキサりん酸：Ｉ
ＨＰ）、ピロりん酸塩、アデノシン三りん酸（ＡＴ
Ｐ）、２，３−ジホスホグリセリン酸（２，３−ＤＰ
Ｇ）から選ばれた物質を少なくとも一種類以上含むもの
が挙げられる。そして前記ピロりん酸塩の例としては、
カルシウム塩（Ｃａ2Ｐ2Ｏ7）、鉄塩［Ｆｅ4（Ｐ2Ｏ7）
3］、カリウム塩（Ｋ4Ｐ2Ｏ7）、ナトリウム塩（Ｎａ2
Ｈ2Ｐ2Ｏ7、又はＮａ4Ｐ2Ｏ7・１０Ｈ2Ｏ）、スズ塩
（Ｓｎ2Ｐ2Ｏ7）、トリブチルアンモニウム塩が挙げら
れる。前記戻し液中の酸若しくは酸の塩の濃度は、０．
１〜３％程度が好ましく１％程度がより好ましい。
は、フィチン酸（別名、イノシトールヘキサりん酸：Ｉ
ＨＰ）、ピロりん酸塩、アデノシン三りん酸（ＡＴ
Ｐ）、２，３−ジホスホグリセリン酸（２，３−ＤＰ
Ｇ）から選ばれた物質を少なくとも一種類以上含むもの
が挙げられる。そして前記ピロりん酸塩の例としては、
カルシウム塩（Ｃａ2Ｐ2Ｏ7）、鉄塩［Ｆｅ4（Ｐ2Ｏ7）
3］、カリウム塩（Ｋ4Ｐ2Ｏ7）、ナトリウム塩（Ｎａ2
Ｈ2Ｐ2Ｏ7、又はＮａ4Ｐ2Ｏ7・１０Ｈ2Ｏ）、スズ塩
（Ｓｎ2Ｐ2Ｏ7）、トリブチルアンモニウム塩が挙げら
れる。前記戻し液中の酸若しくは酸の塩の濃度は、０．
１〜３％程度が好ましく１％程度がより好ましい。
【００２１】また前記細胞賦活剤の例としては、ホスホ
エノールピルビン酸（ＰＥＰ、Ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌ
ｐｙｔｕｖａｔｅ）が挙げられる。前記戻し液中の細胞
賦活剤の濃度は、５０〜５００ｍＭ程度が好ましく、５
０〜１００ｍＭ程度がより好ましい。
エノールピルビン酸（ＰＥＰ、Ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌ
ｐｙｔｕｖａｔｅ）が挙げられる。前記戻し液中の細胞
賦活剤の濃度は、５０〜５００ｍＭ程度が好ましく、５
０〜１００ｍＭ程度がより好ましい。
【００２２】戻し液のｐＨについては、４から９の間に
制御する。好ましくは６．０〜８．０の間とする。ｐＨ
制御の方法としては、通常用いられるリン酸バッファ等
を用いることができる。例えば、りん酸水素二ナトリウ
ム（Ｎａ2ＨＰＯ4）とりん酸二水素カリウム（ＫＨ2Ｐ
Ｏ4）からなる緩衝液に生理的電解質物質を加えたりん
酸バッファに、前記糖類、バイオポリマー、酸若しくは
酸の塩のいずれか１種類以上と細胞賦活剤を添加して、
最終的に、そのｐＨが４から９の間、好ましくは６．０
〜８．０の間にくるようにすればよい。具体的には、１
／１５モルのＮａ2ＨＰＯ4と１／１５モルのＫＨ2ＰＯ4
からなる緩衝液に、０．２ＭのＮａＣｌと４ｍＭのＫＣ
ｌを加えたものを、好ましく用いることができる。
制御する。好ましくは６．０〜８．０の間とする。ｐＨ
制御の方法としては、通常用いられるリン酸バッファ等
を用いることができる。例えば、りん酸水素二ナトリウ
ム（Ｎａ2ＨＰＯ4）とりん酸二水素カリウム（ＫＨ2Ｐ
Ｏ4）からなる緩衝液に生理的電解質物質を加えたりん
酸バッファに、前記糖類、バイオポリマー、酸若しくは
酸の塩のいずれか１種類以上と細胞賦活剤を添加して、
最終的に、そのｐＨが４から９の間、好ましくは６．０
〜８．０の間にくるようにすればよい。具体的には、１
／１５モルのＮａ2ＨＰＯ4と１／１５モルのＫＨ2ＰＯ4
からなる緩衝液に、０．２ＭのＮａＣｌと４ｍＭのＫＣ
ｌを加えたものを、好ましく用いることができる。
【００２３】ここで、戻し液のｐＨが４未満の場合は、
戻し後、凍結乾燥血液がメト化するために酸素運搬能が
回復しない等の機能劣化がみられるので好ましくない。
また、ｐＨが９より大きい場合には、凍結乾燥血液がア
ルカリ性になるため、溶解・溶血の傾向が見られ、不適
当である。
戻し後、凍結乾燥血液がメト化するために酸素運搬能が
回復しない等の機能劣化がみられるので好ましくない。
また、ｐＨが９より大きい場合には、凍結乾燥血液がア
ルカリ性になるため、溶解・溶血の傾向が見られ、不適
当である。
【００２４】
【実施例】次に、本発明の戻し液を用いて、凍結乾燥血
液を戻す方法について説明する。本発明の戻し液と混合
する凍結乾燥血液は、血液または血液成分を凍結乾燥処
理して調製される。まず、凍結される血液は、前処理を
経て使用することが好ましい。採血された血液から遠心
分離等の方法によってたとえばヘマトクリット値５５〜
９０％の濃厚赤血球を得る。前処理液の例としては、例
えば、特願平７−３２７１８号に記載されている通り、
糖類、バイオポリマー、又は酸若しくは酸の塩のうち少
なくとも１種類を含有してなる溶液でよい。
液を戻す方法について説明する。本発明の戻し液と混合
する凍結乾燥血液は、血液または血液成分を凍結乾燥処
理して調製される。まず、凍結される血液は、前処理を
経て使用することが好ましい。採血された血液から遠心
分離等の方法によってたとえばヘマトクリット値５５〜
９０％の濃厚赤血球を得る。前処理液の例としては、例
えば、特願平７−３２７１８号に記載されている通り、
糖類、バイオポリマー、又は酸若しくは酸の塩のうち少
なくとも１種類を含有してなる溶液でよい。
【００２５】前処理において、濃厚赤血球と前処理液と
は両者適当量混合（混和）する。混合の手段としては、
常法でよく、例えばかくはん、振とう等がある。また、
混合の手順も当該血液を前処理液に注入する方法でも、
その逆の方法であってもよい。好ましくは、該血液中に
前処理液を混和しながら加える。
は両者適当量混合（混和）する。混合の手段としては、
常法でよく、例えばかくはん、振とう等がある。また、
混合の手順も当該血液を前処理液に注入する方法でも、
その逆の方法であってもよい。好ましくは、該血液中に
前処理液を混和しながら加える。
【００２６】前記前処理液で用いられる糖類の例として
は、マンノース、キシロース、グルコース、トレハロー
ス、スクロース、マルトースから選ばれた糖類を少なく
とも一種類以上含むものが挙げられる。
は、マンノース、キシロース、グルコース、トレハロー
ス、スクロース、マルトースから選ばれた糖類を少なく
とも一種類以上含むものが挙げられる。
【００２７】前記前処理液で用いられるバイオポリマー
の例としては、デキストラン、リン酸エステル塩、ポリ
ビニルピロリドン（ＰＶＰ）アルブミンから選ばれたバ
イオポリマーを少なくとも１種類以上含むものが挙げら
れる。
の例としては、デキストラン、リン酸エステル塩、ポリ
ビニルピロリドン（ＰＶＰ）アルブミンから選ばれたバ
イオポリマーを少なくとも１種類以上含むものが挙げら
れる。
【００２８】また、前記前処理液で用いられる酸若しく
は酸の塩の例としては、フィチン酸（別名、イノシトー
ルヘキサりん酸：ＩＨＰ）、ピロりん酸塩、アデノシン
三りん酸（ＡＴＰ）、２，３−ジホスホグリセリン
（２，３−ＤＰＧ）、から選ばれた物質を少なくとも一
種類以上含むものが挙げられる。
は酸の塩の例としては、フィチン酸（別名、イノシトー
ルヘキサりん酸：ＩＨＰ）、ピロりん酸塩、アデノシン
三りん酸（ＡＴＰ）、２，３−ジホスホグリセリン
（２，３−ＤＰＧ）、から選ばれた物質を少なくとも一
種類以上含むものが挙げられる。
【００２９】前処理液のｐＨについては、４から９の間
に制御する。好ましくは７．０〜８．０の間とする。例
えば、りん酸水素二ナトリウム（Ｎａ2ＨＰＯ4）とりん
酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4）からなる緩衝液に生理
的電解質物質を加えたりん酸バッファに、前記糖類、バ
イオポリマー、酸若しくは酸の塩のいずれか１種類以上
を添加して、最終的に、そのｐＨが４から９の間、好ま
しくは７．０〜８．０の間にくるようにする。
に制御する。好ましくは７．０〜８．０の間とする。例
えば、りん酸水素二ナトリウム（Ｎａ2ＨＰＯ4）とりん
酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4）からなる緩衝液に生理
的電解質物質を加えたりん酸バッファに、前記糖類、バ
イオポリマー、酸若しくは酸の塩のいずれか１種類以上
を添加して、最終的に、そのｐＨが４から９の間、好ま
しくは７．０〜８．０の間にくるようにする。
【００３０】ついで前記前処理液と混合されて前処理さ
れた血液を、微粒子化する。微粒子化の方法としては、
エア、窒素ガス等のキャリアガスと血液（前記混合液）
をノズルを用いて混合噴霧させることが好ましい。この
混合噴霧による微粒子化法では、混合・噴霧される血液
は、ノズル径に依存して異なる粒子サイズ（血球が複数
集まったクラスタサイズ）となって飛散する。例えば、
ノズル径１．２ｍｍのノズルを使った場合、キャリアガ
スの圧力と血液の流量に依存する関係となる。ノズル径
１．２ｍｍの場合、血液の流量を１−２０ｃｃ／分の範
囲とし、キャリアガス圧力０．５−６ｋｇ／ｃｍ2の範
囲で数ミクロンから４０ミクロン程度までのサイズのク
ラスタサイズが得られる。ノズル径が大きくなるとクラ
スタサイズは大きくなり、クラスタサイズと血液混合液
の処理量の制御が可能である。
れた血液を、微粒子化する。微粒子化の方法としては、
エア、窒素ガス等のキャリアガスと血液（前記混合液）
をノズルを用いて混合噴霧させることが好ましい。この
混合噴霧による微粒子化法では、混合・噴霧される血液
は、ノズル径に依存して異なる粒子サイズ（血球が複数
集まったクラスタサイズ）となって飛散する。例えば、
ノズル径１．２ｍｍのノズルを使った場合、キャリアガ
スの圧力と血液の流量に依存する関係となる。ノズル径
１．２ｍｍの場合、血液の流量を１−２０ｃｃ／分の範
囲とし、キャリアガス圧力０．５−６ｋｇ／ｃｍ2の範
囲で数ミクロンから４０ミクロン程度までのサイズのク
ラスタサイズが得られる。ノズル径が大きくなるとクラ
スタサイズは大きくなり、クラスタサイズと血液混合液
の処理量の制御が可能である。
【００３１】混合噴霧で微粒子化する方法において、前
記ノズルはジェット流及び又はスパイラルフローを発生
するノズルで構成されることが好ましい。具体的には、
該ノズルは以下の機能を有するものが望ましい。即ち、
「特許出願公告平４−２１５５１」（公告日平成４年４
月１０日／日本国特許第１７３０８６８号）なる「高速
渦流気体による超微粒子発生用ノズル」に記述されてい
る、「液体噴射口と、前記液体噴射口を取り組む位置に
形成された環状の渦流室と、渦巻状に渦流室に延びて、
渦流室内に高速気流を導入する複数の旋回導孔と、前記
渦流室の前記液体噴射口に臨む側に液体噴射口の前方に
向けて開口され、液体噴射口の前方に焦点をもつ先細り
円錐形の高速渦流を噴射形成する環状の気体噴射口とを
備えた高速渦流気体による超微粒子発生ノズル」を用い
る。また、同様な機能を有する日本国特許第１６８９６
４５号，同１６８９６６０号，同１７５７３５１号，ま
たは同１７７０４９６号記載のノズルであってもよい。
これらは、気体と、液体の導入方法の種々例を規定した
ものである。
記ノズルはジェット流及び又はスパイラルフローを発生
するノズルで構成されることが好ましい。具体的には、
該ノズルは以下の機能を有するものが望ましい。即ち、
「特許出願公告平４−２１５５１」（公告日平成４年４
月１０日／日本国特許第１７３０８６８号）なる「高速
渦流気体による超微粒子発生用ノズル」に記述されてい
る、「液体噴射口と、前記液体噴射口を取り組む位置に
形成された環状の渦流室と、渦巻状に渦流室に延びて、
渦流室内に高速気流を導入する複数の旋回導孔と、前記
渦流室の前記液体噴射口に臨む側に液体噴射口の前方に
向けて開口され、液体噴射口の前方に焦点をもつ先細り
円錐形の高速渦流を噴射形成する環状の気体噴射口とを
備えた高速渦流気体による超微粒子発生ノズル」を用い
る。また、同様な機能を有する日本国特許第１６８９６
４５号，同１６８９６６０号，同１７５７３５１号，ま
たは同１７７０４９６号記載のノズルであってもよい。
これらは、気体と、液体の導入方法の種々例を規定した
ものである。
【００３２】そのポイントは、「気体導入口から導入さ
れた気体を、渦巻状に渦流室に延びて渦流室内に高速気
流を導入する複数の旋回導孔によって渦巻き状になし、
渦流室を経て液体噴射口の前方に焦点をもつ先細り円錐
形の環状の気体噴射口から噴射させることによって、高
速渦流を発生させ、これによって液体を粉砕・微粒子化
する」ものである。このノズルを使うと該細胞を含む血
液を微粒子化することが可能となる。また、粒子サイズ
の分布が狭く、サイズのそろった微粒子化が可能とな
る。また、いわゆる通常のスパイラルフローの原理を利
用する他の構成のノズルであってもよい。
れた気体を、渦巻状に渦流室に延びて渦流室内に高速気
流を導入する複数の旋回導孔によって渦巻き状になし、
渦流室を経て液体噴射口の前方に焦点をもつ先細り円錐
形の環状の気体噴射口から噴射させることによって、高
速渦流を発生させ、これによって液体を粉砕・微粒子化
する」ものである。このノズルを使うと該細胞を含む血
液を微粒子化することが可能となる。また、粒子サイズ
の分布が狭く、サイズのそろった微粒子化が可能とな
る。また、いわゆる通常のスパイラルフローの原理を利
用する他の構成のノズルであってもよい。
【００３３】こうして、混合噴霧により微粒子状、好ま
しくは数１０ミクロン径の微粒子状となった血液を、容
器の内壁に付着させ瞬間的に凍結させる（凍結工程）。
凍結工程のために、前記容器は冷媒、例えば、液体窒素
等を使用して−１９６℃付近の極低温とすることが好ま
しい。凍結処理の後、真空ポンプによって排気し、いわ
ゆる昇華過程で血液を脱水化して、凍結乾燥血液を得
る。
しくは数１０ミクロン径の微粒子状となった血液を、容
器の内壁に付着させ瞬間的に凍結させる（凍結工程）。
凍結工程のために、前記容器は冷媒、例えば、液体窒素
等を使用して−１９６℃付近の極低温とすることが好ま
しい。凍結処理の後、真空ポンプによって排気し、いわ
ゆる昇華過程で血液を脱水化して、凍結乾燥血液を得
る。
【００３４】前記凍結乾燥の方法では、混合噴霧により
血液を微粒子化して凍結させる方法について説明した
が、微粒子化及び凍結のための前記各方法と異なる方法
としては、少なくとも氷点以下の低温のガス中に血液を
噴霧することによって小さな粒子として凍結させる方法
を用いてもよい。この方法は、アイススクライバとも呼
ばれ、液体窒素温度下で、窒素ガス中に液体を導入する
ことによって、小さな凍結粒子をつくる方法を含む。ま
た前記微粒子化は、超音波で駆動されたヘッド素子によ
り、行うこともできる。
血液を微粒子化して凍結させる方法について説明した
が、微粒子化及び凍結のための前記各方法と異なる方法
としては、少なくとも氷点以下の低温のガス中に血液を
噴霧することによって小さな粒子として凍結させる方法
を用いてもよい。この方法は、アイススクライバとも呼
ばれ、液体窒素温度下で、窒素ガス中に液体を導入する
ことによって、小さな凍結粒子をつくる方法を含む。ま
た前記微粒子化は、超音波で駆動されたヘッド素子によ
り、行うこともできる。
【００３５】このような方法で得られた凍結乾燥血液は
通常の冷蔵庫（保存温度約５℃程度）に保管することが
できる。そして実際の輸血等に使用されるときに、こう
して調製された凍結乾燥血液に、本発明の戻し液を混合
する。凍結乾燥血液と戻し液の混合の方法は常法でよ
く、例えばかくはん、振とう等を用いる。また、混合の
手順も当該血液を前処理液に注入する方法でも、その逆
の方法であってもよい。好ましくは、該血液中に前処理
液を混和しながら加える。さらに戻し工程の後、生理食
塩水などので洗浄し、実際の輸血に供する。
通常の冷蔵庫（保存温度約５℃程度）に保管することが
できる。そして実際の輸血等に使用されるときに、こう
して調製された凍結乾燥血液に、本発明の戻し液を混合
する。凍結乾燥血液と戻し液の混合の方法は常法でよ
く、例えばかくはん、振とう等を用いる。また、混合の
手順も当該血液を前処理液に注入する方法でも、その逆
の方法であってもよい。好ましくは、該血液中に前処理
液を混和しながら加える。さらに戻し工程の後、生理食
塩水などので洗浄し、実際の輸血に供する。
【００３６】
【実施例】本発明の戻し液として、１／１５モルのりん
酸水素二ナトリウムと、１／１５モルのりん酸二水素カ
リウムからなるりん酸バッファをベースに、糖類、バイ
オポリマー、又は酸若しくは酸の塩のうち少なくとも一
種類を含有してなる溶液を種々の組成で作製し、さらに
細胞賦活剤を含有させて作製した（表１の＃１から＃７
までに示す）。いずれも糖類、バイオポリマー、酸もし
くは酸の塩の種類、および細胞賦活剤の濃度以外は同様
な手法で作製した。
酸水素二ナトリウムと、１／１５モルのりん酸二水素カ
リウムからなるりん酸バッファをベースに、糖類、バイ
オポリマー、又は酸若しくは酸の塩のうち少なくとも一
種類を含有してなる溶液を種々の組成で作製し、さらに
細胞賦活剤を含有させて作製した（表１の＃１から＃７
までに示す）。いずれも糖類、バイオポリマー、酸もし
くは酸の塩の種類、および細胞賦活剤の濃度以外は同様
な手法で作製した。
【００３７】＃１から＃７の戻し液を用いて、以下のよ
うに凍結乾燥血液を戻した。凍結乾燥血液は通常の冷蔵
庫（保存温度約５℃程度）に保管し、半年後に保存した
ものを用い、戻した後、血球の生存率を血球カウンタで
計測した。生存率は戻した血液を毎分２０００回転、１
０分間遠心分離した後に上清を採取し、血液カウンタ
（ｓｙｓｍｅｃｓ ＮＥ−８０００）でヘモグロビン量
を測定した。これを予め測定した微粒子化・凍結乾燥前
の混合液のヘモグロビン値で徐した（割った）値を溶血
率とした。この時の溶血率を微粒子化・冷凍乾燥後の生
存率と近似した。即ち、生存率＝１００−（溶血率）で
ある。その結果を併せて表１に示す。
うに凍結乾燥血液を戻した。凍結乾燥血液は通常の冷蔵
庫（保存温度約５℃程度）に保管し、半年後に保存した
ものを用い、戻した後、血球の生存率を血球カウンタで
計測した。生存率は戻した血液を毎分２０００回転、１
０分間遠心分離した後に上清を採取し、血液カウンタ
（ｓｙｓｍｅｃｓ ＮＥ−８０００）でヘモグロビン量
を測定した。これを予め測定した微粒子化・凍結乾燥前
の混合液のヘモグロビン値で徐した（割った）値を溶血
率とした。この時の溶血率を微粒子化・冷凍乾燥後の生
存率と近似した。即ち、生存率＝１００−（溶血率）で
ある。その結果を併せて表１に示す。
【００３８】ここでグルコース、キシロース、マンノー
ス、および二糖類の濃度は、１から２モルとし、ＰＶＰ
は主に、分子量約４０，０００のものを使用した。その
結果を表１に示す。前記糖類の種類を変えた場合、およ
びＰＶＰの分子量を変えた場合、いずれも血球の生存率
が高いという結果が得られた。また、ピロりん酸塩につ
いては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、鉄
塩でいずれも同様な結果が得られた。
ス、および二糖類の濃度は、１から２モルとし、ＰＶＰ
は主に、分子量約４０，０００のものを使用した。その
結果を表１に示す。前記糖類の種類を変えた場合、およ
びＰＶＰの分子量を変えた場合、いずれも血球の生存率
が高いという結果が得られた。また、ピロりん酸塩につ
いては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、鉄
塩でいずれも同様な結果が得られた。
【００３９】
【表１】
【００４０】以上の実施例の戻し後の血液を生理食塩水
などで洗浄し実際の輸血に供し、良好な結果を得た。
などで洗浄し実際の輸血に供し、良好な結果を得た。
【００４１】
【発明の効果】本発明の凍結乾燥血液の戻し液を用いる
ことにより、凍結乾燥血液の戻し工程において、赤血球
などの血液細胞の高い再生率を高めることができる。し
たがって、本発明の戻し液を用いて、凍結乾燥血液の戻
し工程を行えば、良好な輸血用血液を得ることができ
る。
ことにより、凍結乾燥血液の戻し工程において、赤血球
などの血液細胞の高い再生率を高めることができる。し
たがって、本発明の戻し液を用いて、凍結乾燥血液の戻
し工程を行えば、良好な輸血用血液を得ることができ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 47/26 Ａ６１Ｋ 47/26 Ｚ 47/32 47/32 Ｚ 47/36 47/36 Ｚ 47/42 47/42 Ｚ // Ａ６１Ｋ 35/14 ＡＢＹ 35/14 ＡＢＹＺ
Claims (7)
- 【請求項１】 凍結乾燥された、細胞を含む血液及び／
または細胞を含む血液成分の戻し液であって、糖類、バ
イオポリマー、又は酸若しくは酸の塩のうち少なくとも
１種類を含有してなる溶液に、細胞賦活剤を含有させて
得られることを特徴とする凍結乾燥血液の戻し液。 - 【請求項２】 前記糖類は、マンノース、キシロース、
グルコース、トレハロース、スクロース、マルトロース
から選ばれた糖類を少なくとも一種類以上含むことを特
徴とする請求項１記載の凍結乾燥血液の戻し液。 - 【請求項３】 前記バイオポリマーは、デキストラン、
リン酸エステル塩、ポリビニルピロリドン、アルブミン
から選ばれたバイオポリマーを、少なくとも１種類以上
含むことを特徴とする、請求項１または２記載の凍結乾
燥血液の戻し液。 - 【請求項４】 前記酸若しくは酸の塩は、フィチン酸、
ピロりん酸塩、アデノシン三りん酸、２，３−ジホスホ
グリセリンから選ばれた物質を少なくとも一種類以上含
むことを特徴とする請求項１から３のいずれか１項記載
の凍結乾燥血液の戻し液。 - 【請求項５】 前記細胞賦活剤は、ホスホエノールピル
ビン酸を含む物質で構成されていることを特徴とする請
求項１から４のいずれか１項記載の凍結乾燥血液の戻し
液。 - 【請求項６】 前記凍結乾燥血液の戻し液は、そのｐＨ
が４から９の間であることを特徴とする、請求項１から
５のいずれか１項記載の凍結乾燥血液の戻し液。 - 【請求項７】 前記凍結乾燥血液の戻し液は、そのｐＨ
が６から８の間であることを特徴とする請求項６記載の
凍結乾燥血液の戻し液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7167613A JPH0920687A (ja) | 1995-07-03 | 1995-07-03 | 凍結乾燥血液の戻し液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7167613A JPH0920687A (ja) | 1995-07-03 | 1995-07-03 | 凍結乾燥血液の戻し液 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0920687A true JPH0920687A (ja) | 1997-01-21 |
Family
ID=15853037
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7167613A Pending JPH0920687A (ja) | 1995-07-03 | 1995-07-03 | 凍結乾燥血液の戻し液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0920687A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998034478A1 (en) * | 1997-02-07 | 1998-08-13 | Quadrant Holdings Cambridge Limited | Methods and compositions for producing dried, storage-stable platelets |
| US9314014B2 (en) | 2004-02-18 | 2016-04-19 | University Of Maryland, Baltimore | Compositions and methods for the storage of red blood cells |
| JP2018077046A (ja) * | 2016-11-07 | 2018-05-17 | 東ソー株式会社 | 凍結乾燥状態の検体前処理試薬 |
| US11604026B2 (en) | 2019-03-14 | 2023-03-14 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization loading tray assembly and system |
| US11634257B2 (en) | 2017-10-09 | 2023-04-25 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization container and method of using same |
| EP3979797A4 (en) * | 2019-06-07 | 2023-06-21 | University of Cincinnati | RED BLOOD CELL STORAGE SOLUTIONS, ADDITIVES AND METHODS TO IMPROVE RED BLOOD CELL STORAGE USING INORGANIC PYROPHOSPHATES |
-
1995
- 1995-07-03 JP JP7167613A patent/JPH0920687A/ja active Pending
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998034478A1 (en) * | 1997-02-07 | 1998-08-13 | Quadrant Holdings Cambridge Limited | Methods and compositions for producing dried, storage-stable platelets |
| US6221575B1 (en) | 1997-02-07 | 2001-04-24 | Quadrant Holdings Cambridge Ltd. | Methods for producing dried storage-stable platelets and compositions obtained thereby |
| US9314014B2 (en) | 2004-02-18 | 2016-04-19 | University Of Maryland, Baltimore | Compositions and methods for the storage of red blood cells |
| JP2018077046A (ja) * | 2016-11-07 | 2018-05-17 | 東ソー株式会社 | 凍結乾燥状態の検体前処理試薬 |
| US11634257B2 (en) | 2017-10-09 | 2023-04-25 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization container and method of using same |
| US11609042B2 (en) | 2019-03-14 | 2023-03-21 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Multi-part lyophilization container and method of use |
| US11609043B2 (en) | 2019-03-14 | 2023-03-21 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization container fill fixture, system and method of use |
| US11604026B2 (en) | 2019-03-14 | 2023-03-14 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization loading tray assembly and system |
| US11740019B2 (en) | 2019-03-14 | 2023-08-29 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization loading tray assembly and system |
| US11747082B2 (en) | 2019-03-14 | 2023-09-05 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Multi-part lyophilization container and method of use |
| US11815311B2 (en) | 2019-03-14 | 2023-11-14 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization container fill fixture, system and method of use |
| US11994343B2 (en) | 2019-03-14 | 2024-05-28 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Multi-part lyophilization container and method of use |
| EP3979797A4 (en) * | 2019-06-07 | 2023-06-21 | University of Cincinnati | RED BLOOD CELL STORAGE SOLUTIONS, ADDITIVES AND METHODS TO IMPROVE RED BLOOD CELL STORAGE USING INORGANIC PYROPHOSPHATES |
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