JPH09221470A - アジリジンジカルボン酸誘導体、その製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【解決手段】下記式〔Ｉ〕 〔式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化されていてもよい
カルボキシル基、Ｒ²はＨ、メチル基またはエチル基、
Ｒ³はフェニル基またはナフチル基、Ｒ⁴は３−メトキシ
プロピルアミノ基、２−フェニルエチルアミノ基など、
（Ｒ）はＲ配位であることを示す〕で表わされる化合物
またはその塩、その製造法および該化合物〔Ｉ〕または
その塩を含有する骨疾患の予防・治療剤、カテプシンＬ
阻害剤、抗炎症剤などの医薬。 【効果】上記の化合物〔Ｉ〕またはその塩は、チオール
プロテアーゼ阻害剤、特にカテプシンＬ阻害剤として有
用である。また、チオールプロテアーゼに由来する疾
患、例えば、筋ジストロフィー症，空胞型ジスタールミ
オパチー、心筋梗塞などの予防・治療剤や抗炎症剤とし
ても有用であり、さらに、例えば、骨粗鬆症、悪性高カ
ルシウム血症、ページェット病等の骨疾患の予防・治療
剤としても有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、カテプシンＬ阻害
剤、骨疾患の予防・治療剤等として有用なアジリジンジ
カルボン酸誘導体およびその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】骨組織では骨吸収と骨形成がバランスを
保ちながら常に繰り返され、骨の恒常性が維持されてお
り、骨粗鬆症などの骨疾患は、このバランスが骨吸収側
に傾くことによって引き起こされる。近年、骨疾患の予
防・治療作用を有するアジリジン化合物（ＷＯ９５／２
８４１６）、システインプロテアーゼ阻害作用を有する
アジリジン化合物〔ジャーナル・オブ・メディシナル・
ケミストリー（Journal of Medicinal Chemistry）、38
巻、3078頁（1995年）〕が報告されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】現在、骨疾患、例えば
骨粗鬆症の予防・治療には、エストロゲン剤、カルシト
ニン等の骨吸収抑制物質が用いられている。しかし、こ
れらの治療薬を投与する場合、投与対象が限定された
り、効果が不確実である場合もあり、まだ満足できるも
のではない。また、現在のところ破骨細胞のリソゾーム
から分泌されるチオールプロテアーゼに対して満足な阻
害作用を有する化合物は得られていない。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述した
課題に鑑み、チオールプロテアーゼ、その中でも最近、
骨吸収に主な役割を果たしていることが明らかになりつ
つあるカテプシンＬ〔エイチ・カケガワ（H. Kakegaw
a）ら、フェブス・レターズ（FEBS Letters）、321巻、
247頁（1993）〕に着目し、鋭意探索の結果、炭素原子
がＲ配位である式

【化５】 で表わされるアジリジン基を有する式

【０００５】

【化６】 〔式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化されていてもよい
カルボキシル基を、Ｒ²は水素原子、メチル基またはエ
チル基を、Ｒ³はフェニル基またはナフチル基を、Ｒ⁴は
３−メトキシプロピルアミノ基、２−フェニルエチルア
ミノ基、ナフチルメチルアミノ基、イソペンチルアミノ
基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ基またはモルホ
リノ基を、（Ｒ）は当該記号が付された炭素原子がＲ配
位であることを示す〕で表わされる新規アジリジンジカ
ルボン酸誘導体が、強力なカテプシンＬ阻害作用を示
し、さらに、優れた骨吸収抑制作用を有することを見い
だした。本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに
研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明は、（１）式

【化７】 〔式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化されていてもよい
カルボキシル基を、Ｒ²は水素原子、メチル基またはエ
チル基を、Ｒ³はフェニル基またはナフチル基を、Ｒ⁴は
３−メトキシプロピルアミノ基、２−フェニルエチルア
ミノ基、ナフチルメチルアミノ基、イソペンチルアミノ
基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ基またはモルホ
リノ基を、（Ｒ）は当該記号が付された炭素原子がＲ配
位であることを示す〕で表わされる化合物またはその
塩、

【０００７】（２）Ｎ-（Ｎ-（（２Ｒ,３Ｒ）-３-エト
キシカルボニルアジリジン-２-カルボニル）-（２Ｓ）-
フェニルアラニル）-１-アミノ-３-メトキシプロパンで
ある第（１）項記載の化合物、（３）Ｎ-（Ｎ-（（２
Ｒ,３Ｒ）-３-カルボキシアジリジン-２-カルボニル）-
（２Ｓ）-フェニルアラニル）-１-アミノ-３-メトキシ
プロパン・モノナトリウム塩である第（１）項記載の化
合物、

【０００８】（４）（ｉ）式

【化８】 〔式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化されていてもよい
カルボキシル基を、Ｒ²¹は水素原子、メチル基、エチル
基またはアミノ基の保護基を、Ｒ³はフェニル基または
ナフチル基を、（Ｒ）は当該記号が付された炭素原子が
Ｒ配位であることを示す〕で表わされる化合物、その反
応性誘導体またはその塩と、式 Ｒ⁴Ｈ 〔III〕 〔式中、Ｒ⁴は３−メトキシプロピルアミノ基、２−フ
ェニルエチルアミノ基、ナフチルメチルアミノ基、イソ
ペンチルアミノ基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ
基またはモルホリノ基を示す〕で表わされる化合物また
はその塩とを反応させ、所望により脱保護基反応に付す
か、または

【０００９】（ii）式

【化９】 〔式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化されていてもよい
カルボキシル基を、Ｒ²¹は水素原子、メチル基、エチル
基またはアミノ基の保護基を、（Ｒ）は当該記号が付さ
れた炭素原子がＲ配位であることを示す〕で表わされる
化合物、その反応性誘導体またはその塩と、式

【化１０】 〔式中、Ｒ³はフェニル基またはナフチル基を、Ｒ⁴は３
−メトキシプロピルアミノ基、２−フェニルエチルアミ
ノ基、ナフチルメチルアミノ基、イソペンチルアミノ
基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ基またはモルホ
リノ基を示す〕で表わされる化合物またはその塩とを反
応させ、所望により脱保護基反応に付すことを特徴とす
る第（１）項記載の化合物の製造法、

【００１０】（５）第（１）項記載の化合物またはその
塩を含有してなる医薬、（６）第（１）項記載の化合物
またはその塩を含有してなるカテプシンＬ阻害剤、
（７）骨疾患の予防・治療剤である第（５）項記載の医
薬、および（８）骨疾患が骨粗鬆症である第（７）項記
載の医薬を提供する。

【００１１】本願明細書中で常用される保護基および試
薬を下記の略号で表記する。 Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル Ｂｚｌ ：ベンジル ＤＣＣ ：Ｎ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＷＳＣ ：水溶性カルボジイミド〔１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸
塩〕 （Ｒ） ：Ｒ配位 （Ｓ） ：Ｓ配位

【００１２】上記式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化さ
れていてもよいカルボキシル基を示す。Ｒ¹としては、
エトキシカルボニル基（−ＣＯＯＣ₂Ｈ₅）またはカルボ
キシル基（−ＣＯＯＨ）の何れでも好ましいが、−ＣＯ
ＯＨの場合は後述する塩を形成している場合が好まし
い。特に、ナトリウム塩（−ＣＯＯＮａ）が好適であ
る。Ｒ²は水素原子、メチル基またはエチル基を示す。
なかでも、水素原子が好ましい。Ｒ²がメチル基または
エチル基である場合、Ｒ⁴としては、例えば３−メトキ
シプロピルアミノ基などが好適である。Ｒ³はフェニル
基またはナフチル基（例えば、１−ナフチル基、２−ナ
フチル基など）を示す。Ｒ³としては、フェニル基、２
−ナフチル基などが好ましく、特にフェニル基などが好
適である。具体的には、式中の部分構造式

【００１３】

【化１１】 で表されるアミノ酸残基がフェニルアラニル基である場
合が好ましい。−ＣＨ₂Ｒ³で表わされる基が結合する炭
素原子はＲ配位またはＳ配位の何れでも構わないが、Ｓ
配位である場合がより好ましい。本願明細書では、Ｓ配
位の場合は（２Ｓ）−フェニルアラニルと、Ｒ配位の場
合は（２Ｒ）−フェニルアラニルと表記するが、（２
Ｓ）−フェニルアラニルはＬ−フェニルアラニルを、
（２Ｒ）−フェニルアラニルはＤ−フェニルアラニルを
意味する。−ＣＨ₂Ｒ³で表わされる基が結合する炭素原
子がＲ配位の場合、Ｒ⁴としては、例えばメトキシプロ
ピルアミノ基などが好適である。

【００１４】Ｒ⁴は３−メトキシプロピルアミノ基、２
−フェニルエチルアミノ基、ナフチルメチルアミノ基
（例えば、１−ナフチルメチルアミノ基、２−ナフチル
メチルアミノ基など）、イソペンチルアミノ基、３−
（メチルチオ）プロピルアミノ基またはモルホリノ基を
示す。Ｒ⁴としては、例えば、３−メトキシプロピルア
ミノ基、２−フェニルエチルアミノ基、イソペンチルア
ミノ基などが好ましく、特に３−メトキシプロピルアミ
ノ基などが好適である。（Ｒ）は当該記号が付された炭
素原子がＲ配位であることを示す。本発明の化合物
（Ｉ）の塩としては、好ましくは薬理学的に許容される
塩などが用いられる。このような塩としては、例えば、
ナトリウム，カリウムなどのアルカリ金属との塩、カル
シウム，マグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩基
塩などが用いられる。なかでも、ナトリウムとの塩が好
ましい。

【００１５】本発明の化合物（Ｉ）としては、上記の各
記号を任意に組み合わせたもの全てが好ましいが、特
に、（１）Ｒ¹がエチル基でエステル化されたカルボキ
シル基で、Ｒ²が水素原子、メチル基またはエチル基
（特に、水素原子が好ましい）で、Ｒ³がフェニル基ま
たは２−ナフチル基（特に、フェニル基が好ましい）
で、Ｒ⁴が３−メトキシプロピルアミノ基、２−フェニ
ルエチルアミノ基、１−ナフチルメチルアミノ基、イソ
ペンチルアミノ基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ
基またはモルホリノ基（特に、３−メトキシプロピルア
ミノ基、２−フェニルエチルアミノ基、イソペンチルア
ミノ基が好ましい）で、−ＣＨ₂Ｒ³で表わされる基が結
合する炭素原子がＳ配位である化合物、（２）Ｒ¹がエ
チル基でエステル化されたカルボキシル基で、Ｒ²が水
素原子で、Ｒ⁴がフェニル基で、Ｒ⁴が３−メトキシプロ
ピルアミノ基、２−フェニルエチルアミノ基、１−ナフ
チルメチルアミノ基、イソペンチルアミノ基、３−（メ
チルチオ）プロピルアミノ基またはモルホリノ基（特
に、３−メトキシプロピルアミノ基が好ましい）で、−
ＣＨ₂Ｒ³で表わされる基が結合する炭素原子がＲ配位で
ある化合物、

【００１６】（３）Ｒ¹がカルボキシル基でナトリウム
と塩を形成し、Ｒ²が水素原子、メチル基またはエチル
基（特に、水素原子が好ましい）で、Ｒ³がフェニル基
または２−ナフチル基（特に、フェニル基が好ましい）
で、Ｒ⁴が３−メトキシプロピルアミノ基、２−フェニ
ルエチルアミノ基、１−ナフチルメチルアミノ基、イソ
ペンチルアミノ基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ
基またはモルホリノ基（特に、３−メトキシプロピルア
ミノ基、２−フェニルエチルアミノ基、イソペンチルア
ミノ基が好ましい）で、−ＣＨ₂Ｒ³で表わされる基が結
合する炭素原子がＳ配位である化合物、（４）Ｒ¹がカ
ルボキシル基でナトリウムと塩を形成し、Ｒ²が水素原
子で、Ｒ³がフェニル基で、Ｒ⁴が３−メトキシプロピル
アミノ基、２−フェニルエチルアミノ基、１−ナフチル
メチルアミノ基、イソペンチルアミノ基、３−（メチル
チオ）プロピルアミノ基またはモルホリノ基（特に、３
−メトキシプロピルアミノ基が好ましい）で、−ＣＨ₂
Ｒ³で表わされる基が結合する炭素原子がＲ配位である
化合物などが好適である。

【００１７】本発明の化合物（Ｉ）の具体例を〔表１〕
に示す。

【表１】

【００１８】次に、本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩
の製造法について述べる。本発明の化合物〔Ｉ〕または
その塩は、（１）式

【化１２】 〔式中、Ｒ¹、Ｒ³および（Ｒ）は前記と同意義を示し、
Ｒ²¹は水素原子、メチル基、エチル基またはアミノ基の
保護基を示す〕で表わされる化合物、その反応性誘導体
またはその塩と、式 Ｒ⁴Ｈ 〔III〕 〔式中、Ｒ⁴は前記と同意義を示す〕で表わされる化合
物またはその塩とを反応させ、所望により脱保護基反応
に付すか、または

【００１９】（２）式

【化１３】 〔式中、Ｒ¹および（Ｒ）は前記と同意義を示し、Ｒ²¹
は水素原子、メチル基、エチル基またはアミノ基の保護
基を示す〕で表わされる化合物、その反応性誘導体また
はその塩と、式

【化１４】 〔式中、Ｒ³は前記と同意義を示す〕で表わされる化合
物またはその塩とを反応させ、所望により脱保護基反応
に付すことにより製造することができる。

【００２０】Ｒ²¹で表されるアミノ基の保護基として
は、有機化学の分野、中でも特に医薬品の分野で通常使
用されるものが適宜に採用されうる。アミノ基の保護基
としては、例えば、 （１）炭素数１ないし６のアルカノイル基（例えば、ホ
ルミル，アセチル，プロピオニル，イソプロピオニル，
ブチリル，イソブチリル，バレリル，イソバレリル，ピ
バロイル，ヘキサノイルなど）、 （２）(a)ニトロ基、(b)ハロゲン原子（例えば、フッ
素，塩素，臭素，ヨウ素など）および(c)炭素数１ない
し４のアルコキシ基（例えば、メトキシ，エトキシ，プ
ロポキシ，イソプロポキシ，ブトキシ、イソブトキシ、
sec-ブトキシ、tert-ブトキシなど）などから選ばれる
１ないし３個の置換基を有していてもよい炭素数７ない
し１１のアロイル基（例えば、ベンゾイルなど）、 （３）炭素数２ないし７のアルコキシカルボニル基（例
えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、n-プ
ロポキシカルボニル、n-ブトキシカルボニル、tert-ブ
トキシカルボニルなど）、

【００２１】（４）(a)ニトロ基、(b)ハロゲン原子（例
えば、フッ素，塩素，臭素，ヨウ素など）および(c)炭
素数１ないし４のアルコキシ基（例えば、メトキシ，エ
トキシ，プロポキシ，イソプロポキシ，ブトキシ、イソ
ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシなど）などか
ら選ばれる１ないし３個の置換基を有していてもよい炭
素数７ないし１１のアリールオキシカルボニル基（例え
ば、フェニルオキシカルボニルなど）、 （５）(a)ニトロ基、(b)ハロゲン原子（例えば、フッ
素，塩素，臭素，ヨウ素など）および(c)炭素数１ない
し４のアルコキシ基（例えば、メトキシ，エトキシ，プ
ロポキシ，イソプロポキシ，ブトキシ、イソブトキシ、
sec-ブトキシ、tert-ブトキシなど）などから選ばれる
１ないし３個の置換基を有していてもよい炭素数８ない
し１３のアラルキルカルボニル基（例えば、ベンジルカ
ルボニル、フェニルエチルカルボニルなど）、 （６）(a)ニトロ基、(b)ハロゲン原子（例えば、フッ
素，塩素，臭素，ヨウ素など）および(c)炭素数１ない
し４のアルコキシ基（例えば、メトキシ，エトキシ，プ
ロポキシ，イソプロポキシ，ブトキシ、イソブトキシ、
sec-ブトキシ、tert-ブトキシなど）などから選ばれる
１ないし３個の置換基を有していてもよい炭素数８ない
し１３のアラルキルオキシカルボニル基（例えば、ベン
ジルオキシカルボニルなど）などである。

【００２２】上記化合物〔II〕および〔IV〕のカルボン
酸の反応性誘導体としては、例えば、次に示す化合物な
どが用いられる。 １）酸アジド ２）酸ハライド ここで酸ハライドとしては、例えば、酸クロリド，酸ブ
ロミドなどが用いられる。 ３）活性エステル ここで活性エステルとしては、例えば、メチルエステ
ル，エチルエステル，メトキシメチルエステル，プロパ
ルギルエステル，4-ニトロフェニルエステル，2,4-ジニ
トロフェニルエステル，トリクロロフェニルエステル，
ペンタクロロフェニルエステル，メシルフェニルエステ
ルなどのエステルの他、1-ヒドロキシ-1H-2-ピリドン，
N-ヒドロキシこはく酸イミド，N-ヒドロキシフタールイ
ミド, 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBT）などと
のエステルが用いられる。カルボン酸と直接反応させる
場合には、例えば、N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド（DCC）、塩酸 1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロ
ピル)-カルボジイミド(水溶性カルボジイミド；WSC），
N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ），アジ
化ジフェニルホスホリル，シアノりん酸ジエチルなどの
縮合剤が用いられる。これらの縮合剤は、上述の活性エ
ステル、例えば１−ヒドロキシ-1H-2-ピリドン，N-ヒド
ロキシこはく酸イミド，N-ヒドロキシフタールイミド,
1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBT）などとのエス
テル合成に用いてもよい。

【００２３】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などもまた自体公知のものあるい
は自体公知の手段から適宜選択しうる。上記製造法
（１）および（２）は、塩基の存在下に行なってもよ
い。この際、用いられる塩基としては、例えばトリメチ
ルアミン，トリエチルアミン，トリプロピルアミン，N-
メチルピペリジン，N-メチルピロリジン，シクロヘキシ
ルジメチルアミン，N-メチルモルホリンなどの第三アミ
ン、ジ-n-ブチルアミン，ジイソブチルアミン，ジシク
ロヘキシルアミンなどの第二アミン、ピリジン，ルチジ
ン，コリジンなどの芳香族アミン、リチウム，ナトリウ
ム，カリウムなどのアルカリ金属の水酸化物または塩、
カルシウム，マグネシウムなどのアルカリ土類金属の水
酸化物または塩などが用いられる。上記の製造法（１）
の化合物〔II〕と化合物〔III〕との反応において、化
合物〔II〕のカルボン酸の反応性誘導体を化合物〔II
I〕１モルに対して通常１モル程度用いる。上記の製造
法（２）の化合物〔IV〕と化合物〔Ｖ〕との反応におい
て、化合物〔IV〕のカルボン酸の反応性誘導体を化合物
〔Ｖ〕１モルに対して通常１モル程度用いる。

【００２４】これらカルボン酸の反応性誘導体は、反応
に支障のない限り過剰に用いることもできる。塩基を用
いる場合、塩基の使用量は用いられる原料化合物、カル
ボン酸の反応性誘導体の種類、 その他の反応条件によっ
て異なるが、 化合物〔III〕または〔Ｖ〕１モルに対し
て通常約１ないし５モル、好ましくは約１ないし３モル
である。上記の製造法（１）および（２）の反応は、通
常反応に悪影響を及ぼさない溶媒中で行なわれる。該溶
媒としては、ペプチド縮合反応に使用しうることが知ら
れているものから適宜選択されうる。このような溶媒と
しては、例えばホルムアミド，N,N-ジメチルホルムアミ
ド，N-メチルピロリドンなどのアミド類、ジメチルスル
ホキシドなどのスルホキシド類、ピリジンなどの芳香族
アミン類、クロロホルム，ジクロロメタンなどのハロゲ
ン化炭化水素類、テトラヒドロフラン，ジオキサン、ジ
エチルエーテルなどのエーテル類、アセトニトリルなど
のニトリル類、酢酸エチル，ギ酸エチルなどのエステル
類などが挙げられる。これらの溶媒は、適宜の割合で混
合して用いてもよい。反応温度は、反応が進行する限り
特に限定されないが、 通常約−５０℃ないし＋１５０
℃、 好ましくは−３０℃ないし＋８０℃で行われる。反
応時間は、用いられる原料，塩基，反応温度，溶媒の種
類により異なるが、 通常数十分から数十時間である。

【００２５】本発明の化合物〔Ｉ〕において、Ｒ²がメ
チル基またはエチル基である化合物またはその塩は、例
えば、化合物〔Ｉ〕においてＲ²が水素原子である化合
物またはその塩を式 Ｒ²²-Ｙ 〔VI〕 〔式中、Ｒ²²はメチル基またはエチル基を、Ｙは脱離基
を示す〕で表される化合物またはその塩を用いた置換反
応に付すことによっても製造することができる。Ｙで表
される脱離基とは、化学反応によって容易に置換される
官能基を表し、具体的には、例えばハロゲン原子（例、
フッ素，塩素，臭素，ヨウ素等）、メタンスルホニルオ
キシ基、p-トルエンスルホニルオキシ基、ベンゼンスル
ホニルオキシ基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ
基、メトキシスルホニルオキシ基、エトキシスルホニル
オキシ基等が用いられる。本反応において塩基の存在下
で実施される場合があり、用いられる塩基としては，例
えば、トリメチルアミン，トリエチルアミン，トリプロ
ピルアミン，N-メチルピペリジン，N-メチルピロリジ
ン，シクロヘキシルジメチルアミン，N-メチルモルフォ
リンなどの第三アミン、ジ-n-ブチルアミン，ジイソブ
チルアミン，ジシクロヘキシルアミンなどの第二アミ
ン、ピリジン，ルチジン，コリジンなどの芳香族アミ
ン，リチウム，ナトリウム，カリウムなどのアルカリ金
属の水酸化物または塩、カルシウム，マグネシウムなど
のアルカリ土類金属の水酸化物または塩などが用いられ
る。

【００２６】本反応は通常溶媒中で行なうことができ
る。該溶媒としては、例えばホルムアミド，N,N-ジメチ
ルホルムアミド，N-メチルピロリドンなどのアミド類、
ジメチルスルホキサイドなどのスルホキシド類、ピリジ
ンなどの芳香族アミン類、クロロホルム，ジクロロメタ
ンなどのハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン，
ジオキサン、ジエチルエーテルなどのエーテル類、アセ
トニトリルなどのニトリル類、酢酸エチル，ギ酸エチル
などのエステル類、メタノ−ル、エタノ−ルなどのアル
コ−ル類、あるいはこれらの適宜の割合の混合物などが
用いられる。反応温度は、反応が進行する限り特に限定
されないが，通常−５０℃ないし１５０℃，好ましくは
−３０℃ないし８０℃で行われる。反応時間は、用いら
れる原料，塩基，反応温度，溶媒の種類により異なる
が，通常数十分から数十時間反応させる。

【００２７】本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩は、要
すれば上記の方法により製造した化合物またはその塩を
脱保護基反応に付すことより製造することができる。脱
保護基反応は自体公知の方法、例えば、ペプチド化学に
常用の方法により行うことができる〔泉屋信夫，大野素
徳，加藤哲夫，青柳東彦著，合成化学シリーズ，ペプチ
ド合成，丸善株式会社発行，１９７５年参照〕。例え
ば、ウレタン型保護基で保護されたアミノ基の脱保護基
反応は、無溶媒もしくは反応に悪影響を与えない溶媒中
で、酸と接触することにより行われる。該溶媒として
は、ハロゲン化炭化水素類（例、ジクロロメタン，クロ
ロホルム，１，２−ジクロロエタンなど）、アルコール
類（例、メタノール，エタノールなど）、エステル類
（例、酢酸エチルなど）、水およびこれらの適宜の割合
の混合物が用いられる。酸としては、例えばハロ酢酸
（例、トリフルオロ酢酸など）、ハロゲン化水素酸
（例、塩化水素酸，臭化水素酸など）等が用いられる。

【００２８】Ｎ−ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基，
Ｎ−４−メトキシベンジルオキシカルボニル基は、例え
ばパラジウム触媒（例、パラジウム／硫酸バリウム，パ
ラジウム活性炭素，パラジウム黒等），ロジウム触媒等
を用いて接触水素添加によって除去するのが有利であ
る。反応は、反応に悪影響を与えない溶媒中で行なうこ
とができる。該溶媒としては、例えば、アミド類（例、
N,N-ジメチルホルムアミド，アセトアミドなど）、アル
コール類（例、メタノール，エタノールなど）、環状エ
ーテル（例、テトラヒドロフランなど）、有機カルボン
酸（例、酢酸，プロピオン酸など）、水等またはこれら
の適宜の割合の混合物が用いられる。Ｎ−９−フルオレ
ニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）基は、例えばジエ
チルアミン，ピペリジン，モルホリン，４−ジメチルア
ミノピリジン，ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミ
ン類を用いて除去するのが有利である。反応は、反応に
悪影響を与えない溶媒中で行われる。該溶媒としては、
例えばアミド類（例、N,N-ジメチルホルムアミド，アセ
トアミドなど）、アルコール類（例、メタノール，エタ
ノールなど）等、またはこれらの適宜の割合の混合物が
用いられる。Ｎ−２，２，２−トリクロロエチルオキシ
カルボニル基は、有機カルボン酸（例、酢酸，プロピオ
ン酸など）と共に、金属（例、亜鉛など）を用いて除去
するのが有利である。反応は、反応に悪影響を与えない
溶媒中で行われる。該溶媒としては、上記有機カルボン
酸、アルコール類（例、メタノール，エタノールな
ど）、水等またはこれらの適宜の割合の混合物が用いら
れる。

【００２９】アシル化ヒドロキシ基の脱保護基反応（脱
アシル化反応）は、反応に悪影響を与えない溶媒中で、
酸と接触することにより行われる。該溶媒としては、ハ
ロゲン化炭化水素類（例、ジクロロメタン，クロロホル
ム，１，２−ジクロロエタンなど）、アルコール類
（例、メタノール，エタノールなど）、水およびこれら
の適宜の割合の混合物が用いられる。酸としては、例え
ば、ハロ酢酸（例、トリフルオロ酢酸など）、ハロゲン
化水素酸（例、塩化水素酸，臭化水素酸など）等が用い
られる。Ｏ−ベンジル（Bzl）基は、例えば、パラジウ
ム触媒（例、パラジウム／硫酸バリウム、パラジウム活
性炭素，パラジウム黒）又はロジウム触媒を用いて接触
水素添加によって除去するのが有利である。その際文献
から公知の溶剤、例えば、環状エーテル（例、テトラヒ
ドロフランなど）を場合により他の不活性溶剤〔例、低
級脂肪族酸アミド（例、N,N-ジメチルホルムアミドな
ど）等〕と混合して使用する。

【００３０】Ｏ−テトラヒドロピラニル基またはＯ−te
rt−ブチル基は、上記脱アシル化反応と同様に、酸によ
る加水分解により行うことができる。カルボキシル保護
基の脱離は、上記と同様に、酸による加水分解により行
うことができる。また、例えば、ベンジルエステルは、
前記のＯ−ベンジル基脱離の場合と同様に接触水素添加
によって脱離することができる。さらに、 例えば、メチ
ルエステル，エチルエステルは、反応に悪影響を与えな
い条件で、塩基と接触することによって脱離することが
できる。該溶媒としては、アルコール類（例、メタノー
ル，エタノールなど）、環状エーテル類（例、テトラヒ
ドロフラン），水およびこれらの適宜の割合の混合物が
用いられる。塩基としては、例えば水酸化ナトリウム，
水酸化カリウム，炭酸ナトリウム，炭酸カリウム等が用
いられる。 ２−（トリメチルシリル）エチル基は、中性条件下
に、例えば弗化水素酸の塩、例えば特に第四級窒素塩基
と弗化水素酸の塩（例、テトラエチルアンモニウムフル
オリドなど）を適当な溶剤中で作用させることによって
脱離させることができる。このようにして製造され得る
本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩は、反応終了後、ペ
プチドの分離手段、例えば、抽出，分配，再沈殿，結晶
化，再結晶，各種クロマトグラフィー，高速液体クロマ
トグラフィーなどによって採取される。

【００３１】本発明の化合物〔Ｉ〕を製造する際に原料
として用いられる化合物〔II〕またはその塩は、化合物
〔IV〕またはその塩と式

【化１５】 〔式中、Ｒ³は前記と同意義を、Ｒ⁵は保護されたカルボ
キシル基を示す〕で表される化合物またはその塩とを、
前述と同様なペプチド合成の常套手段を用いて縮合さ
せ、カルボキシル基の保護基を脱保護することにより製
造することができる。

【００３２】Ｒ⁵で表される保護されたカルボキシル基
におけるカルボキシル基の保護基としては、例えば、 （１）炭素数１ないし６のアルキル基（例、メチル，エ
チル，プロピル，イソプロピル，ブチル，イソブチル，
sec-ブチル，tert-ブチル，ペンチル，イソペンチル，s
ec-ペンチル，ネオペンチル，tert-ペンチル，ヘキシル
等）、 （２）(a)ニトロ基、(b)ハロゲン原子（例、フッ素，塩
素，臭素，ヨウ素等）、(c)炭素数１ないし４のアルコ
キシ基（例、メトキシ，エトキシ，プロポキシ，イソプ
ロポキシ，ブトキシ，イソブトキシ，sec-ブトキシ，te
rt-ブトキシ等）から選ばれる１ないし３個の置換基を
有していてもよい炭素数６ないし１４のアリール基
（例、フェニル，ナフチル等）、 （３）(a)ニトロ基、(b)ハロゲン原子（例、フッ素，塩
素，臭素，ヨウ素等）、(c)炭素数１ないし４のアルコ
キシ基（例、メトキシ，エトキシ，プロポキシ，イソプ
ロポキシ，ブトキシ，イソブトキシ，sec-ブトキシ，te
rt-ブトキシ等）から選ばれる１ないし３個の置換基を
有していてもよい炭素数７ないし１２のアラルキル基
（例、ベンジル，フェネチル等）、 （４）トリ−Ｃ_1-4アルキルシリル基（例、トリメチル
シリル，トリエチルシリル等）等が用いられる。

【００３３】上記の化合物〔Ｖ〕またはその塩は、式

【化１６】 〔式中、Ｒ³は前記と同意義を、Ｒ⁶は保護されたアミノ
基を示す〕で表される化合物またはその塩と、化合物
〔III〕またはその塩とを、前述と同様なペプチド合成
の常套手段を用いて縮合させ、アミノ基の保護基を脱保
護することにより製造することができる。

【００３４】Ｒ⁶で表される保護されたアミノ基におけ
るアミノ基の保護基は、上述したＲ²¹で表されるアミノ
基の保護基と同意義を示す。化合物〔IV〕において、Ｒ
¹がエチル基でエステル化されたカルボキシル基、Ｒ²が
メチル基またはエチル基である化合物またはその塩は、
ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Jour
nal of Medicinal Chemistry）、38巻、3078頁（1995
年）記載の(2R,3R)-アジリジン-2,3-ジカルボン酸ジエ
チルエステルを前述と同様の置換反応に付し、得られた
化合物を加水分解反応に付すことにより製造することが
できる。加水分解反応は、水の存在下、反応に悪影響を
与えない溶媒中で、塩基と接触することによって行なわ
れる。該溶媒としては，例えばアルコール類（例、メタ
ノール，エタノール等）、環状エーテル類（例、テトラ
ヒドロフラン等）、アミド類（例、N,N-ジメチルホルム
アミド，アセトアミド等）およびこれらの適宜の割合の
混合物が用いられる。塩基としては、例えば水酸化アル
カリ金属塩（例、水酸化ナトリウム，水酸化カリウム
等）または炭酸アルカリ金属塩（例、炭酸ナトリウム，
炭酸カリウム等）等が用いられる。

【００３５】塩基は、原料化合物１モルに対して、通常
１モル程度用いる。反応温度は、反応が進行する限り特
に限定されないが，通常−５０℃ないし１５０℃，好ま
しくは−１０℃ないし８０℃で行なわれる。反応時間
は、用いられる原料，塩基，反応温度，溶媒の種類によ
り異なるが，通常数十分から数十時間反応させる。化合
物〔IV〕において、Ｒ¹がエチル基でエステル化された
カルボキシル基、Ｒ²が水素原子である化合物またはそ
の塩は、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリ
ー（Journal of Medicinal Chemistry）、38巻、3078頁
（1995年）記載の合成法により製造できる。上記した化
合物〔Ｉ〕の製造のための中間体である化合物〔II〕〜
〔VIII〕の塩としては、前述した化合物〔Ｉ〕の塩と同
様なものが用いられる。例えば、アルカリ金属（例、ナ
トリウム，カリウム等）との塩、アルカリ土類金属
（例、カルシウム，マグネシウム等）との塩などの塩基
塩などが用いられる。

【００３６】以上の製造法によって製造し得る本発明の
化合物〔Ｉ〕またはその塩は、チオール基を活性中心に
有する物質、例えばカテプシン類（例、カテプシンＬ，
カテプシンＢ、カテプシンＫ等）、カルパイン類（例、
カルパインI、カルパインII等）等のチオールプロテア
ーゼに対する阻害作用を有しており、チオールプロテア
ーゼ阻害剤、特にカテプシンＬ阻害剤として有用であ
る。さらに、チオールプロテアーゼに由来する疾患、例
えば、筋ジストロフィー症，空胞型ジスタールミオパチ
ー、心筋梗塞、脳梗塞、血栓、白内障、アルツハイマー
病、筋萎縮症、癌転移等の予防・治療剤として有用であ
る。また、チオールプロテアーゼの活性を阻害する物質
は抗炎症作用を有するので、本発明のチオールプロテア
ーゼ阻害剤は、抗炎症剤としても用いられる。さらに、
本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩は、骨吸収抑制作用
を有し、例えば、骨粗鬆症、悪性高カルシウム血症、ペ
ージェット病等の骨疾患の予防・治療剤として用いられ
る。本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩は、毒性も低
く、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モ
ルモット、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ウシ、サ
ル、チンパンジー、マントヒヒなど）に対し、安全に用
いられる。

【００３７】本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩を、例
えばヒトに投与する場合は、それ自体あるいは適宜の薬
理学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤と混合し、医
薬組成物として経口的または非経口的に安全に投与する
ことができる。上記医薬組成物としては、経口剤とし
て、例えば散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤等、非経口
剤として、例えば注射剤、点滴剤、外用剤（例、経鼻投
与製剤、経皮製剤等）、坐剤（例、直腸坐剤、膣坐剤
等）等が挙げられる。これらの製剤は、製剤工程におい
て通常一般に用いられる自体公知の方法により製造する
ことができる。経口剤は、本発明の化合物〔Ｉ〕または
その塩に、例えば賦形剤（例、乳糖、白糖、デンプン、
マンニトールなど）、崩壊剤（例、炭酸カルシウム、カ
ルボキシメチルセルロースカルシウムなど）、結合剤
（例、α化デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチル
セルロース、ポリビニールピロリドン、ヒドロキシプロ
ピルセルロースなど）または滑沢剤（例、タルク、ステ
アリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール６００
０など）などを添加して圧縮成形し、次いで必要によ
り、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のた
め自体公知の方法でコーティングすることにより製造さ
れる。コーティング剤としては、例えばエチルセルロー
ス、ヒドロキシメチルセルロース、ポリオキシエチレン
グリコール、セルロースアセテートフタレート、ヒドロ
キシプロピルメチルセルロースフタレートおよびオイド
ラギット（ローム社製、ドイツ，メタアクリル酸・アク
リル酸共重合物）などが用いられる。

【００３８】注射剤は、本発明の化合物〔Ｉ〕またはそ
の塩を分散剤（例、ツイーン(Tween)８０（アトラスパ
ウダー社製、米国）、ＨＣＯ ６０（日光ケミカルズ
製）、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセル
ロース、アルギン酸ナトリウムなど）、保存剤（例、メ
チルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコー
ル、クロロブタノールなど）、等張化剤（例、塩化ナト
リウム、グリセリン、ソルビトール、ブドウ糖など）な
どと共に水性注射剤として、あるいはオリーブ油、ゴマ
油、綿実油、コーン油などの植物油、プロピレングリコ
ールなどに溶解、懸濁あるいは乳化して油性注射剤とし
て成形することにより製造することができる。外用剤
は、本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩を固状、半固状
または液状の組成物とすることにより製造される。例え
ば、上記固状の組成物は、本発明化合物をそのまま、あ
るいは賦形剤（例、ラクトース、マンニトール、デンプ
ン、微結晶セルロース、白糖など）、増粘剤（例、天然
ガム類、セルロース誘導体、アクリル酸重合体など）な
どを添加、混合して粉状とすることにより製造される。
上記液状の組成物は、注射剤の場合とほとんど同様で、
油性あるいは水性懸濁剤とすることにより製造される。
半固状の組成物は、水性または油性のゲル剤、あるいは
軟骨状のものがよい。また、これらの組成物は、いずれ
もｐＨ調節剤（例、炭酸、リン酸、クエン酸、塩酸、水
酸化ナトリウムなど）、防腐剤（例、パラオキシ安息香
酸エステル類、クロロブタノール、塩化ベンザルコニウ
ムなど）などを含んでいてもよい。

【００３９】坐剤は、本発明の化合物〔Ｉ〕またはその
塩を油性または水性の固状、半固状あるいは液状の組成
物とすることにより製造される。該組成物に用いる油性
基剤としては、例えば高級脂肪酸のグリセリド〔例、カ
カオ脂、ウイテプゾル類（ダイナマイトノーベル社製）
など〕、中級脂肪酸〔例、ミグリオール類（ダイナマイ
トノーベル社製）など〕、あるいは植物油（例、ゴマ
油、大豆油、綿実油など）などが挙げられる。水性基剤
としては、例えばポリエチレングリコール類、プロピレ
ングリコールなどが挙げられる。また、水性ゲル基剤と
しては、例えば天然ガム類、セルロース誘導体、ビニー
ル重合体、アクリル酸重合体などが挙げられる。本発明
の化合物〔Ｉ〕またはその塩を、骨疾患の予防・治療剤
としてヒトに用いる場合の投与量は、対象の疾患、投与
経路、治療する患者個々の年齢及び疾病の程度によって
変動し得るが、通常、体重５０ｋｇの成人患者に経口投
与する場合、有効成分１日約１ｍｇないし２ｇ、好まし
くは約１０ｍｇないし２ｇ、さらに好ましくは約２０ｍ
ｇないし１ｇが疾患の治療に用いられる。本発明の化合
物〔Ｉ〕またはその塩を、チオールプロテアーゼ阻害剤
としてヒトに用いる場合の投与量は、上記した骨疾患の
予防・治療剤の場合と同様である。

【００４０】

【実施例】以下に、参考例、実施例、製剤例および試験
例を挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、これに
よって本発明が限定されるものではない。なお、パーセ
ント（％）は、特に断りのない限り、重量／容量パーセ
ントを表す。混合溶媒において混合比を示した数値は各
溶媒の容量混合比である。ＮＭＲスペクトルは、ブルカ
ーＤＰＸ−３００型スペクトルメーターを用いて測定し
た。内部基準として、重水中で ３-(トリメチルシリル)
プロピオン酸-ｄ４・ナトリウム塩、他の溶媒中でテトラ
メチルシランを用い、全δ値をppmで示した。また、本
明細書中の記号は次のような意味を有する。s：シング
レット，d：ダブレット，t：トリプレット，q：カルテ
ット，dd：ダブルダブレット，dt：ダブルトリプレッ
ト，m：マルチプレット，br.：幅広い

【００４１】

【参考例１】ヒト腎臓由来カテプシンＬのｃＤＮＡクロ
ーニング ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法によってヒトカテプ
シンＬ ｃＤＮＡを増幅させるため、既報のヒト腎臓由
来カテプシンＬの塩基配列〔エス・ガル（S. Gal）とエ
ム・エム・ゴッテスマン（M. M. Gottesman），バイオケ
ミカル・ジャーナル（Biochem. J.）, 253巻, 303頁 (1
988)〕を参考にして、以下に示す４種類のプライマーを
合成した。 センス・プライマーＮｏ.１： 5'-TTTTCAGGGGGCAGTAAGAT-3' （配列番号：１） センス・プライマーＮｏ.２： 5'-pCCGGATCCGGCTTTTTAGGATTGGTCTA-3' （配列番号：２） アンチセンス・プライマーＮｏ.３： 5'-GGGGGCTGGTAGACTGAAGA-3' （配列番号：３） アンチセンス・プライマーＮｏ.４： 5'-pCCGGATCCATTCCTCCCATGCATGCGCC-3' （配列番号：４）

【００４２】ヒト腎臓由来ｃＤＮＡライブラリーλgt１
１溶液〔クローンテク・ラボラトリーズ・インコーポレー
テッド（CLONTECH Laboratories, Inc.)〕３μｌと蒸留
水５０μｌとを混合し、９５℃で５分間保温した後、氷
中で急冷した。２種類のプライマー（上記Ｎｏ.１とＮ
ｏ.３；各50pmol）を加え、シータス／パーキンエルマ
ー(Cetus/Perkin-Elmer)より供給されたキットの指示書
に従い、９４℃，１分間、５５℃，２分間、７２℃，３
分間の反応を５０回繰り返す反応を行なった。さらに、
その反応液に別の２種類のプライマー（上記Ｎｏ.2とＮ
ｏ.4；各50pmol）を加え、同様に反応を行った。ＰＣＲ
産物を１.２％アガロースゲル電気泳動で分離したとこ
ろ、ヒト腎臓由来カテプシンＬ塩基配列から予想される
大きさ(1132bp)に相当する位置に、増幅されたＤＮＡ断
片を確認した。このＤＮＡ断片をゲルから回収し、プラ
スミドベクター pBluescriptＲ II SK＋〔ストラタジー
ン（STRATAGENE）社製〕にサブクローニングした。ｃＤ
ＮＡ部分の塩基配列をジデオキシヌクレオチド合成鎖停
止法〔ジェイ・メシング（J. Messing）ら、ヌクレイッ
ク・アシッド・リサーチ（Nucleic Acid Res.）, 9巻,
309頁, (1981)〕により決定し、既報の配列と同一のも
のであることを確認した。このcDNA断片を含むプラスミ
ドをｐＨＣＬ−５と命名した。

【００４３】

【参考例２】ヒトカテプシンＬの大腸菌ＭＭ２９４（Ｄ
Ｅ３）における発現 参考例１のｃＤＮＡを制限酵素EcoRIで切断し、798bpの
断片（ヒトカテプシンＬのプロ体の一部分と成熟体のす
べてをコードする断片）を回収した。この断片の両側に
BamHIのリンカー（5'-pCCCGGATCCGGG-3'）を結合させ、
大腸菌発現用プラスミドベクター pET-3c〔メソッズ・
イン・エンザイモロジー(Methods in Enzymology, ed.
D. V. Goeddel), 185巻、68頁、アカデミック・プレス
(AcademicPress), 1990〕に挿入した。構築したプラス
ミドをｐＥＴ−ＨＣＬαと命名した。大腸菌ＭＭ２９４
（ＤＥ３）をｐＥＴ−ＨＣＬαで形質転換し、Ｔ７プロ
モターの支配下でヒトカテプシンＬの発現を行った〔メ
ソッズ・イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymol
ogy）, 185巻, 60頁 (1990)〕。形質転換した大腸菌
〔プラスミドpTBN-HCLneoを保持するエシェリヒア・コ
リ（Escherichia coli）ＪＭ１０９／ｐＴＢＮ−ＨＣＬ
ｎｅｏは、平成４年６月１２日から財団法人発酵研究所
（ＩＦＯ）に受託番号ＩＦＯ １５３４１として、平成
４年６月２２日から通商産業省工業技術院生命工学工業
技術研究所（ＮＩＢＨ）に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ３８
９７として寄託されている。〕を培養し、得られた菌体
を超音波破砕したものをSDS-PAGEに供したところ、３０
ｋＤａｌ付近にヒトカテプシンＬに相当する特異的なバ
ンドが検出された。また、発現した産物はインクルージ
ョンボディを形成したので、形質転換体の超音波破砕物
の沈澱画分からヒトカテプシンＬを粗精製した。

【００４４】

【参考例３】組換え体ヒトカテプシンＬに対する抗血清
の作製 参考例２で記載した粗精製の組換え体ヒトカテプシンＬ
を等量の完全フロイントアジュバントと混合し、約１ｍ
ｌをウサギに接種した。その後、粗精製ヒトカテプシン
Ｌ標品と等量の不完全フロイントアジュバントとを混合
したものを１０日おきに３回注射し、最後の注射後の７
日目に採血した。得られた血液を３７℃で３０分間、続
いて４℃で一晩静置した後、遠心分離法によってヒトカ
テプシンＬ抗血清を調製した。

【００４５】

【参考例４】ヒトカテプシンＬ遺伝子を動物細胞で発現
させるための組換えＤＮＡの作製 参考例１に記載のプラスミドｐＨＣＬ−５を制限酵素Ba
mHIで消化した後、ヒトカテプシンＬ ｃＤＮＡの断片を
アガロースゲル電気泳動法により回収した。次に、動物
細胞における一過性発現用のベクターpTB551〔オノ（On
o）ら、サイエンス（Science）, 236巻, 1116頁 (1989)
に記載のプラスミドpTB389のEcoRI部位をBglII部位に変
換したもの〕の制限酵素BglII部位に、Ｔ４ ＤＮＡリガ
ーゼとＡＴＰとの作用によって上述のｃＤＮＡ断片を挿
入し、発現プラスミドｐＴＢ−ＨＣＬを作製した。ｐＴ
Ｂ−ＨＣＬの制限酵素HindIII部位とClaI部位の間にＭ
ｕＬＶ−ＬＴＲを挿入し、発現プラスミドｐＴＢＮ−Ｈ
ＣＬを作製した。

【００４６】

【参考例５】ヒトカテプシンＬ遺伝子を動物細胞で発現
させるための組換えＤＮＡの作製 ヒトカテプシンＬの動物細胞における安定発現株を得る
ために、参考例４に記載した組換えベクターｐＴＢＮ−
ＨＣＬに薬剤耐性マーカーｎｅｏの遺伝子（ネオマイシ
ン耐性遺伝子）を以下のように組み込んだ。まず、プラ
スミドｐＴＢＮ−ＨＣＬの制限酵素ClaI部位とSalI部位
の間に、SV40初期プロモーターとｎｅｏの遺伝子から成
る断片を挿入し、プラスミドｐＴＢＮ−ＨＣＬｎｅｏを
作製した。

【００４７】

【参考例６】ヒトカテプシンＬ遺伝子の動物細胞におけ
る発現 参考例５記載のプラスミド（ｐＴＢＮ−ＨＣＬｎｅｏ）
を用いて、マウスミエローマＳｐ２／０細胞の形質転換
を以下のように行なった。５％ ウシ胎児血清（FCS）を
添加したASF104 (5％ FCS/ASF)培地で培養したＳｐ２／
０細胞をリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）(-)〔ドウル
ベコ（Dullbecco）のＰＢＳからCaCl₂とMgCl₂を除いた
もの〕で1×10⁷ cells/mlになるように調整した。この
細胞懸濁液500μlをキュベットに注入し、１０μｇの該
プラスミドＤＮＡを加えて５分間氷上に静置した。この
液にジーンパルサー（バイオラッド社製）を用いて１２
５μＦ、３００Ｖの条件下でパルスを加えた後、氷上に
戻して１０分間静置した。この液を１０mlの５％ FCS/A
SF104培地に移植し、５％二酸化炭素の存在下、３７℃
で培養した。４８時間後、選択培地(200μg/ml G418を
含む５％ FCS/ASF104培地)に移植し、２４穴プレートで
２週間培養した。複数のコロニーの形成を確認し、それ
ぞれを200μg/ml G418を含むASF104培地に植え継いで培
養した後、培養上清を参考例３で作製したヒトカテプシ
ンＬ抗血清を用いるウェスタンブロット分析に供したと
ころ、該抗血清と反応する分子量約４０,０００〜約３
０,０００およびそれらよりも小さい分子量の特異的な
バンドが検出され、その分子量からヒトカテプシンＬの
プロ体とそのプロセスされた産物と推測された。培養上
清におけるカテプシンＬの活性をエー・ジェー・バレッ
ト（A. J. Barrett）とエイチ・キルシュケ（H. Kirsch
ke）の方法〔メソッズ・イン・エンザイモロジー（Meth
ods in Enzymology）, 80巻，535頁(1981)〕に従って測
定したところ、ヒトカテプシンＬの活性が検出された。
これらの結果から、カテプシンＬを発現する形質転換マ
ウスミエローマ細胞が得られたことを確認し、マウスミ
エローマＳｐ-ＨＣＬ２６と命名した。

【００４８】

【参考例７】ヒトカテプシンＬの精製 参考例６で得られたカテプシンＬ高発現株（プラスミド
ｐＴＢＮ−ＨＣＬｎｅｏで形質転換体されたマウスミエ
ローマＳｐ−ＨＣＬ２６は、平成４年６月１６日から財
団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に受託番号ＩＦＯ ５０３
７１として、 平成４年６月２４日から通商産業省工業技
術院生命工学工業技術研究所（ＮＩＢＨ）に受託番号Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ３９０２として寄託されている。）を１０
％ ＦＣＳと200μg/ml G418とを添加したASF104培地２
０ｍｌ中で培養した後、無血清の選択培地（200μg/ml
G418を添加したASF104培地）５０ｍｌに移植して５日間
培養した。培養上清をCM-Sephadex C-50カラム(25×4.4
cm)に負荷した後、緩衝液Ａ(20mM 酢酸ナトリウム、1mM
EDTA, pH5.5)でカラムを洗浄した。続いて、０Ｍから
１Ｍまでの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）の濃度勾配で溶
出したところ、ヒトカテプシンＬは約０.４ＭのＮａＣ
ｌ濃度付近で溶出された。この画分をＦＰＬＣシステム
（ファルマシア社製）のモノ・エス（Mono S)(HR5/5）
に負荷し、カラムの洗浄とヒトカテプシンＬの溶出を上
記と同様に行なった。約０.３６MのＮａＣｌ濃度付近で
溶出されたヒトカテプシンＬ画分を濃縮して精製標品を
調製した。

【００４９】

【実施例１】N-(N-((2R,3R)-3-エトキシカルボニルアジ
リジン-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)-1-アミ
ノ-3-メトキシプロパン

【化１７】

【００５０】3-メトキシプロピルアミン（1.27ml、和光
純薬社製）、Boc-L-フェニルアラニン（3.00g，ペプチ
ド研究所製）をジクロロメタン（60ml）に溶解後、氷冷
下でＨＯＢＴ(1.68g)、ＷＳＣ(2.38g) を加え、室温で
１５時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢酸エチル（200m
l）を加え、１０％クエン酸水、飽和炭酸水素ナトリウ
ム水、２％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗
浄した。得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥
後、濃縮乾固して、N-(Boc-(2S)-フェニルアラニル)-1-
アミノ-3-メトキシプロパン（3.79 g）を得た（収率 定
量的）。得られた化合物の一部（354mg）をトリフルオ
ロ酢酸（TFA，3.5ml）に溶解後、室温で１時間放置し
た。反応液を濃縮後、クロロホルムを加え、飽和炭酸水
素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を
無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固して、N-((2S)-
フェニルアラニル)-1-アミノ-3-メトキシプロパン（211
mg）を得た（収率８５％）。

【００５１】得られた化合物の一部（207mg）をN,N-ジ
メチルホルムアミド（DMF,7ml）に溶解後、氷冷下、ジ
ャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Journa
l of Medicinal Chemistry）、38巻、3078頁（1995年）
記載の(2R,3R)-エチル・ハイドロゲン・アジリジン-2,3
-ジカルボキシレート（145mg）、アジ化ジフェニルホス
ホリル（268mg、東京化成社製），トリエチルアミン（1
40μl）を加え、室温で１７時間撹拌した。反応液を濃
縮後、酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水、
２％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄し
た。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカゲル
カラムクロマトグラフィー (キーゼルゲル６０, 20ml、
メルク社製）に付した。ヘキサン中酢酸エチルを順次添
加した溶出液、次いで酢酸エチル中メタノールを順次添
加した溶出液で溶出し、９０〜１００％(v/v)酢酸エチ
ル含有ヘキサン溶出画分および０〜５％(v/v)メタノー
ル含有酢酸エチル液溶出画分から標記化合物（化合物
１；245mg）を白色粉末として得た（収率７４％）。 〔α〕Ｄ²³-53.9゜ (c 1.01, CHCl₃) 元素分析値 C₁₉H₂₇N₃O₅・0.6H₂Oとして 計算値 C; 58.78, H; 7.32, N; 10.82（％） 実験値 C; 58.53, H; 7.02, N; 10.73（％）¹ H NMR δppm (CDCl₃) 1.30(3H,t,J=7.1Hz), 1.45-1.85(3H,m), 2.62(1H,br
s), 2.80(1H,br s), 3.00(1H,dd,J=13.5,8.1Hz), 3.09
(1H,dd,J=13.5,6.3Hz), 3.18-3.38(4H,m), 3.23(3H,s),
4.23(2H,q,J=7.1Hz), 4.48(1H,m), 6.06(1H,br), 6.93
(1H,d,J=8.0Hz), 7.16-7.36(5H,m)

【００５２】

【実施例２】N-(N-((2R,3R)-3-カルボキシアジリジン-2
-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)-1-アミノ-3-メ
トキシプロパン・モノナトリウム塩

【化１８】

【００５３】実施例１で得られた化合物１（128mg）を
メタノール（8ml）に溶解後、氷冷下1N 水酸化ナトリウ
ム水（380μl）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液
をｐＨ７.０に調整後、濃縮し、水を加え酢酸エチルで
洗浄した。水層を濃縮後、ダイヤイオンＨＰ-２０（２
０〜５０メッシュ、10ml、三菱化成社製）のカラムクロ
マトグラフィ−に付した。水洗（20ml）後、水（20ml）
および２０％(v/v) メタノ−ル水（40ml）で溶出した。
溶出液を濃縮後、凍結乾燥して標記化合物（化合物２；
110mg）を白色粉末として得た（収率 87％）。 〔α〕Ｄ²³-68.4゜ (c 1.01, H₂O) 元素分析値 C₁₇H₂₂N₃O₅Na・1.3H₂O として 計算値 C; 51.72, H; 6.28, N; 10.64, Na; 5.82（％） 実験値 C; 51.78, H; 6.27, N; 10.68 Na; 6.01（％）¹ H NMR δppm (D₂O) 1.52-1.69(2H,m), 2.39-2.50(1H), 2.68-2.80(1H), 2.9
8-3.34(6H,m), 3.30(3H,s), 4.52(1H,t,J=7.4Hz), 7.24
-7.45(5H,m)

【００５４】

【実施例３】N-(N-((2R,3R)-3-エトキシカルボニルアジ
リジン-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)-1-アミ
ノ-2-フェニルエタン

【化１９】

【００５５】2-フェニルエチルアミン（947μl，和光純
薬社製）、Boc-L-フェニルアラニン（2.00g）をジクロ
ロメタン（50ml）に溶解後、氷冷下でHOBT（1.02g）、W
SC（1.45g）を加え、室温で１４時間撹拌した。反応液
を濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水、水、
飽和炭酸水素ナトリウム水、２％炭酸水素ナトリウム
水、水、飽和食塩水で順次洗浄した。得られた有機層を
無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチル-ヘキサンよ
り結晶化し、N-(Boc-(2S)-フェニルアラニル)-1-アミノ
-2-フェニルエタン（2.23g）を得た（収率80％）。得ら
れた化合物の一部（806mg）をTFA（4ml）に溶解後、室
温で１時間放置した。反応液を濃縮後、酢酸エチルを加
え、飽和炭酸水素ナトリウム水、２％炭酸水素ナトリウ
ム水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナ
トリウムで乾燥後、濃縮乾固して、N-((2S)-フェニルア
ラニル)-1-アミノ-2-フェニルエタン（551mg）を得た
（収率９４％）。得られた化合物の一部（５４４ｍｇ）
をＤＭＦ（10ml）に溶解後、氷冷下、ジャーナル・オブ
・メディシナル・ケミストリー（Journal of Medicinal
Chemistry）、38巻、3078頁（1995年）記載の (2R,3R)
-エチル・ハイドロゲン・アジリジン-2,3-ジカルボキシ
レート（295mg）, シアノりん酸ジエチル (330μl, 和
光純薬社製), トリエチルアミン（290μl）を加え、室
温で１２時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを加え、１
０％クエン酸水、飽和炭酸水素ナトリウム水、２％炭酸
水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄した。有機層
を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（キーゼルゲル６０，30ml）に付した。
クロロホルム中メタノールを順次添加した溶出液で溶出
し、１〜２％(v/v)メタノール含有クロロホルム液溶出
画分から標記化合物 (化合物３；555mg) を白色粉末と
して得た（収率73％）。 〔α〕Ｄ ²³ -51.7 ゜ (c 1.01, CHCl₃) 元素分析値 C₂₃H₂₇N₃O₄として 計算値 C; 67.46, H; 6.65, N; 10.26（％） 実験値 C; 67.59, H; 6.63, N; 10.20（％）¹ H NMR δppm (CDCl₃) 1.31(3H,t,J=7.1Hz), 1.56-1.80(1H,m,H₂O overlappe
d), 2.48(1H,br s), 2.51-2.74(2H,m), 2.77(1H,br s),
2.98(1H,dd,J=13.5,8.1Hz), 3.07(1H,dd,J=13.5,6.4H
z), 3.29-3.51(2H,m), 4.16-4.30(2H,m), 4.42(1H,m),
5.58(1H,br s), 6.89(1H,d,J=8.1Hz), 6.97-7.04(2H,
m), 7.14-7.35(8H,m)

【００５６】

【実施例４】N-(N-((2R,3R)-3-カルボキシアジリジン-2
-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)-1-アミノ-2-フ
ェニルエタン ・モノナトリウム塩

【化２０】

【００５７】実施例３で得られた化合物３（202mg）を
メタノール（10ml）に溶解後、氷冷下、１Ｎ 水酸化ナ
トリウム水（550μl）を加え、室温で１.５時間撹拌し
た。反応液をｐＨ７.０に調整後、水を加え濃縮し、酢
酸エチルで洗浄した。水層を濃縮後、ダイヤイオン HP-
20（２０〜５０メッシュ, 20ml）のカラムクロマトグラ
フィーに付した。水洗（80ml）後、５０％(v/v)メタノ
−ル水（80ml）で溶出した。溶出液を濃縮後、凍結乾燥
して標記化合物（化合物４；184mg）を白色粉末として
得た（収率93％）。 〔α〕Ｄ ²³ -65.7 ゜ (c 1.02, H₂O) 元素分析値 C₂₁H₂₂N₃O₄Na・1.0H₂O として 計算値 C; 59.85, H; 5.74, N; 9.97, Na; 5.46（％） 実験値 C; 60.03, H; 5.84, N; 10.11, Na; 5.55（％）¹ H NMR δppm (D₂O) 2.31-2.43(1H,m), 2.61-2.82(3H,m), 2.89(1H,dd,J=13.
7,8.3Hz), 3.01(1H,m),3.30-3.52(2H,m), 4.48(1H,m),
7.17-7.41(10H,m)

【００５８】

【実施例５】N-(N-((2R,3R)-3-エトキシカルボニルアジ
リジン-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)-1-アミ
ノ-3-メチルブタン

【化２１】

【００５９】イソアミルアミン（2.30ml，和光純薬社
製），Boc-L-フェニルアラニン（5.01g）をＤＭＦ（50m
l）に溶解後、氷冷下でHOBT（2.90g），WSC（4.13g）を
加え、室温で２.５時間撹拌した。反応液を濃縮後、酢
酸エチルを加え、１０％クエン酸水、飽和炭酸水素ナト
リウム水、２％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順
次洗浄した。得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾
燥後、酢酸エチル-ヘキサンより結晶化し、N-(Boc-(2S)
-フェニルアラニル)-1-アミノ-3-メチルブタン（5.99
g）を得た（収率95％）。得られた化合物の一部（850m
g）をTFA（4ml）に溶解後、室温で１時間放置した。反
応液を濃縮後、酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリ
ウム水、２％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次
洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮
乾固して、N-((2S)-フェニルアラニル)-1-アミノ-3-メ
チルブタン（512mg）を得た（収率86％）。得られた化
合物の一部（507mg）をDMF（10ml）に溶解後、氷冷下、
ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Jour
nal of Medicinal Chemistry）、38巻、3078頁（1995
年）記載の (2R,3R)-エチル・ハイドロゲン・アジリジ
ン-2,3-ジカルボキシレート（315mg），シアノりん酸ジ
エチル（350μl），トリエチルアミン（310μl）を加
え、室温で１２時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを加
え、１０％クエン酸水、飽和炭酸水素ナトリウム水、２
％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄した。
有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（キーゼルゲル６０，30ml）に付
した。ヘキサン中酢酸エチルを順次添加した溶出液で溶
出し、７０〜８０％(v/v)酢酸エチル含有ヘキサン液溶
出画分から標記化合物（化合物５；529mg）を白色粉末
として得た（収率 71％）。 〔α〕Ｄ ²³ -59.4 ゜ (c 1.05, CHCl₃) 元素分析値 C₂₀H₂₉N₃O₄ として 計算値 C; 63.98, H; 7.79, N; 11.19（％） 実験値 C; 63.87, H; 7.89, N; 11.12（％）¹ H NMR δppm (CDCl₃) 0.83(3H,d,J=6.6Hz), 0.84(3H,d,J=6.6Hz), 1.19(2H,q,
J=7.2Hz), 1.30(3H,t,J=7.1Hz), 1.40(1H,m), 1.76(1H,
t,J=8.3Hz), 2.52-2.60(1H,m), 2.76-2.86(1H,m), 2.93
-3.23(4H,m), 4.23(2H,q,J=7.1Hz), 4.44(1H,m), 5.54
(1H,br s), 6.97(1H,d,J=8.0Hz), 7.17-7.35(5H,m)

【００６０】

【実施例６】N-(N-((2R,3R)-3-カルボキシアジリジン-2
-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)-1-アミノ-3-メ
チルブタン・モノナトリウム塩

【化２２】

【００６１】実施例２と同様にして、化合物５（204m
g）をアルカリ加水分解し、標記化合物（化合物６；192
mg）を白色粉末として得た（収率96％）。 〔α〕Ｄ ²⁴ -60.0 ゜ (c 1.03, H₂O) 元素分析値 C₁₈H₂₄N₃O₄Na・1.5H₂O として 計算値 C; 54.54, H; 6.87, N; 10.60, Na; 5.80（％） 実験値 C; 54.42, H; 6.95, N; 10.54, Na; 5.96（％）¹ H NMR δppm (D₂O) 0.81(3H,d,J=6.4Hz), 0.82(3H,d,J=6.4Hz), 1.16-1.41
(3H,m), 2.37-2.52(1H,m), 2.66-2.81(1H,m), 2.98-3.2
3(4H,m), 4.52(1H,t,J=7.3), 7.23-7.44(5H,m)

【００６２】

【実施例７】N-(N-((2R,3R)-3-エトキシカルボニルアジ
リジン-2-カルボニル)-(2R)-フェニルアラニル)-1-アミ
ノ-3-メトキシプロパン

【化２３】

【００６３】3-メトキシプロピルアミン（769μl），Bo
c-D-フェニルアラニン（2.00g，ペプチド研究所製）をD
MF（20ml）に溶解後、氷冷下でHOBT（1.02g），WSC（1.
45g）を加え、室温で６時間撹拌した。反応液を濃縮
後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水、水、飽和炭
酸水素ナトリウム水、２％炭酸水素ナトリウム水、水、
飽和食塩水で順次洗浄した。得られた有機層を無水硫酸
ナトリウムで乾燥後、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー (キーゼルゲル６０，100ml）に付した。ヘキサン
中酢酸エチルを順次添加した溶出液で溶出し、４０〜５
０％(v/v)酢酸エチル含有ヘキサン液溶出画分を酢酸エ
チル-ヘキサンより結晶化し、N-(Boc-(2R)-フェニルア
ラニル)-1-アミノ-3-メトキシプロパン（2.37g）を得た
（収率93％）。得られた化合物の一部（1.00g）をTFA
（5ml）に溶解後、室温で１時間放置した。反応液を濃
縮後、クロロホルムを加え、飽和炭酸水素ナトリウム
水、２％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄
した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固
して、N-((2R)-フェニルアラニル)-1-アミノ-3-メトキ
シプロパン（618mg）を得た（収率88％）。得られた化
合物の一部（532mg）をDMF（5ml）に溶解後、氷冷下、
ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Jour
nal of Medicinal Chemistry）、38巻、3078頁（1995
年）記載の (2R,3R)-エチル・ハイドロゲン・アジリジ
ン-2,3-ジカルボキシレート（320mg），シアノりん酸ジ
エチル（360μl），トリエチルアミン（315μl）を加
え、室温で１３時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを加
え、１０％クエン酸水、飽和炭酸水素ナトリウム水、２
％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄した。
有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（キーゼルゲル６０，30ml）に付
した。ヘキサン中酢酸エチルを順次添加した溶出液で溶
出し、８０〜１００％(v/v)酢酸エチル含有ヘキサン液
溶出画分から標記化合物（化合物７；554mg）を白色粉
末として得た（収率73％）。 〔α〕Ｄ ²³ -40.4 ゜ (c 1.03, CHCl₃) 元素分析値 C₁₉H₂₇N₃O₅ として 計算値 C; 60.46, H; 7.21, N; 11.13（％） 実験値 C; 60.20, H; 7.27, N; 11.06（％）¹ H NMR δppm (CDCl₃) 1.30(3H,t,J=7.1Hz), 1.57-1.80(3H,m,H₂O overlappe
d), 2.21(1H,br s), 2.77(1H,br s), 2.90-3.14(2H,m),
3.23-3.42(4H,m), 3.26(3H,s), 4.21(2H,q,J=7.1Hz),
4.51(1H,m), 6.26(1H,br s), 6.89(1H,d,J=8.2Hz), 7.1
4-7.35(5H,m)

【００６４】

【実施例８】N-(N-((2R,3R)-3-カルボキシアジリジン-2
-カルボニル)-(2R)-フェニルアラニル)-1-アミノ-3-メ
トキシプロパン・モノナトリウム塩

【化２４】

【００６５】実施例２と同様にして、化合物７（201m
g）をアルカリ加水分解し、標記化合物（化合物８；173
mg）を白色粉末として得た（収率87％）。 〔α〕Ｄ ²⁴ -62.3 ゜ (c 1.02, H₂O) 元素分析値 C₁₇H₂₂N₃O₅Na・0.8H₂O として 計算値 C; 52.93, H; 6.17, N; 10.89, Na; 5.96（％） 実験値 C; 53.05, H; 6.21, N; 10.94, Na; 6.08（％）¹ H NMR δppm (D₂O) 1.61(2H,m), 2.40(1H,br s), 2.73(1H,br s), 3.03-3.3
3(6H,m), 3.30(3H,s), 4.51(1H,t,J=7.7Hz), 7.25-7.45
(5H,m)

【００６６】

【実施例９】N-(N-((2R,3R)-3-エトキシカルボニルアジ
リジン-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)モルホ
リン

【化２５】

【００６７】実施例７と同様にして、モルホリン（660
μl，東京化成社製），Boc-L-フェニルアラニン（2.00
g）とを縮合し、N-(Boc-(2S)-フェニルアラニル)モルホ
リン（2.49g）を得た（収率99％）。Boc基をTFAで脱保
護して得られた化合物のうち520mgを、実施例７と同様
にして、(2R,3R)-エチル・ハイドロゲン・アジリジン-
2,3-ジカルボキシレート（320mg）と縮合し、標記化合
物（化合物９；486mg）を白色粉末として得た（収率64
％）。 〔α〕Ｄ ²³ -33.4 ゜ (c 1.02, CHCl₃) 元素分析値 C₁₉H₂₅N₃O₅・0.2H₂O として 計算値 C; 60.21, H; 6.75, N; 11.09（％） 実験値 C; 60.09, H; 6.76, N; 11.05（％）¹ H NMR δppm (CDCl₃) 1.30(3H,t,J=7.1Hz), 1.55-1.88(1H,m,H₂O overlappe
d), 2.66(1H,br s), 2.77-3.10(5H,m), 3.19-3.30(1H,
m), 3.35-3.65(5H,m), 4.17-4.29(2H,m), 5.05(1H,m),
7.12(1H,d,J=8.3Hz), 7.17-7.35(5H,m)

【００６８】

【実施例１０】N-(N-((2R,3R)-3-カルボキシアジリジン
-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)モルホリン・
モノナトリウム塩

【化２６】

【００６９】実施例２と同様にして、化合物９（211m
g）をアルカリ加水分解し、標記化合物（化合物１０；1
88mg）を白色粉末として得た（収率91％）。 〔α〕Ｄ ²⁴ -59.1 ゜ (c 1.02, H₂O) 元素分析値 C₁₇H₂０N₃O₅Na・0.9H₂O として 計算値 C; 52.96, H; 5.70, N; 10.90, Na; 5.96（％） 実験値 C; 52.95, H; 5.91, N; 11.11, Na; 6.24（％）¹ H NMR δppm (D₂O) 2.45(1H,br s), 2.78(1H,br s), 2.92-3.14(3H,m), 3.2
1-3.31(1H,m), 3.38-3.72(6H,m), 5.05(1H,m), 7.25-7.
45(5H,m)

【００７０】

【実施例１１】N-(N-((2R,3R)-3-エトキシカルボニルア
ジリジン-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)-1-ア
ミノ-3-メチルチオプロパン

【化２７】

【００７１】実施例７と同様にして、3-メチルチオプロ
ピルアミン（826μl，東京化成社製），Boc-L-フェニル
アラニン（2.00g）とを縮合し、N-(Boc-(2S)-フェニル
アラニル)-1-アミノ-3-メチルチオプロパン（2.13g）を
得た（収率80％）。得られた化合物の一部（850mg）を
４Ｎ 塩酸-酢酸エチル溶液（10ml，国産化学社製）に溶
解後、室温で２時間放置した。反応液をメタノール-ジ
エチルエーテルから濃縮し、析出物を濾取し、N-((2S)-
フェニルアラニル)-1-アミノ-3-メチルチオプロパン・
塩酸塩（694mg）を白色粉末として得た（収率 定量
的）。得られた化合物のうち639mgを、実施例７と同様
にして、(2R,3R)-エチル・ハイドロゲン・アジリジン-
2,3-ジカルボキシレート（320mg）と縮合し、標記化合
物 (化合物１１；460mg）を白色粉末として得た（収率5
8％）。 〔α〕Ｄ ²³ -55.1 ゜ (c 1.01, CHCl₃) 元素分析値 C₁₉H₂₇N₃O₄S として 計算値 C; 57.99, H; 6.92, N; 10.68, S; 8.15（％） 実験値 C; 57.82, H; 6.86, N; 10.82, S; 8.18（％）¹ H NMR δppm (CDCl₃) 1.30(3H,t,J=7.1Hz), 1.55-1.82(3H,m,H₂O overlappe
d), 2.03(3H,s), 2.24-2.41(2H,m), 2.54-2.63(1H,m),
2.75-2.85(1H,m), 2.94-3.35(4H,m), 4.16-4.29(2H,m),
4.46(1H,m), 5.84(1H,br s), 6.95(1H,d,J=8.0Hz), 7.
17-7.35(5H,m)

【００７２】

【実施例１２】N-(N-((2R,3R)-3-カルボキシアジリジン
-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)-1-アミノ-3-
メチルチオプロパン・モノナトリウム塩

【化２８】

【００７３】実施例２と同様にして、化合物１１（160m
g）をアルカリ加水分解し、標記化合物（化合物１２；1
46mg）を白色粉末として得た（収率93％）。 〔α〕Ｄ ²⁴ -62.3 ゜ (c 1.04, H₂O) 元素分析値 C₁₇H₂₂N₃O₄SNa・0.5H₂O として 計算値 C; 51.50, H; 5.85, N; 10.60, S; 8.09, Na; 5.80（％） 実験値 C; 51.33, H; 5.86, N; 10.57, S; 8.12, Na; 5.93（％）¹ H NMR δppm (D₂O) 1.61(2H,m), 2.06(3H,s), 2.25(2H,t,J=7.4), 2.38-2.5
3(1H,m), 2.67-2.82(1H,m), 3.02-3.16(3H,m), 3.20-3.
31(1H,m), 4.52(1H,t,J=7.6Hz), 7.25-7.44(5H,m)

【００７４】

【実施例１３】N-(N-((2R,3R)-3-エトキシカルボニルア
ジリジン-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニル)アミ
ノ-(1-ナフチル)メタン

【化２９】

【００７５】実施例７と同様にして、1-ナフタレンメチ
ルアミン（1.10ml，アルドリッチ社製, 米国），Boc-L-
フェニルアラニン（2.00g）とを縮合し、N-(Boc-(2S)-
フェニルアラニル)アミノ-(1-ナフチル)メタン（2.20
g）を得た（収率72％）。Boc基をTFAで脱保護して得ら
れた化合物のうち631mgをDMF（3ml）に溶解後、氷冷
下、(2R,3R)-エチル・ハイドロゲン・アジリジン-2,3-
ジカルボキシレート（300mg），シアノりん酸ジエチル
（315μl），トリエチルアミン（289μl）を加え、室温
で１４時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを加え、１０
％クエン酸水、２％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水
で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥
し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（キーゼルゲ
ル６０，50ml）に付した。クロロホルム中メタノールを
順次添加した溶出液で溶出し、１％(v/v)メタノール含
有クロロホルム液溶出画分を濃縮し、白色粉末（610m
g）を得た。このうちの400mgをシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（キーゼルゲル６０，40ml）に付し、ヘキ
サン中酢酸エチルを順次添加した溶出液で溶出し、７０
％(v/v)酢酸エチル含有ヘキサン液溶出画分を濃縮し、
白色粉末（255mg）を得た。これを分取高速液体クロマ
トグラフィー〔カラム；YMC-Pack SH-363-15, ワイエム
シイ社製, 移動相；５０％(v/v)アセトニトリル／0.01
Ｍ リン酸緩衝液（pH 6.3），流速；20ml／分〕に付
し、２４〜３４分の溶出画分を濃縮し、酢酸エチルにて
抽出した。有機層を水洗後、無水硫酸ナトリウムで乾燥
し、標記化合物（化合物１３；194mg）を白色粉末とし
て得た（収率23％）。 〔α〕Ｄ ²² -51.6 ゜ (c 1.03, CHCl₃) 元素分析値 C₂₆H₂₇N₃O₄ として 計算値 C; 70.10, H; 6.11, N; 9.43（％） 実験値 C; 69.93, H; 6.09, N; 9.49（％）¹ H NMR δｐｐｍ （ＣＤＣｌ_３） １．３０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）， １．６２−
１．８２（１Ｈ，ｍ，Ｈ_２Ｏ ｏｖｅｒｌａｐｐｅ
ｄ）， ２．４９（１Ｈ，ｂｒ ｓ）， ２．７４（１
Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ）， ２．９６−３．１
２（２Ｈ，ｍ）， ４．１１−４．２９（２Ｈ，ｍ），
４．５３（１Ｈ，ｍ）， ４．６７−４．８２（２
Ｈ，ｍ）， ６．００（１Ｈ，ｂｒ ｔ）， ７．０２
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）， ７．０６−７．２４
（６Ｈ，ｍ）， ７．３５（１Ｈ，ｍ），７．４３−
７．５５（２Ｈ，ｍ）， ７．７２−７．９０（３Ｈ，
ｍ）

【００７６】

【実施例１４】Ｎ−（Ｎ−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−カル
ボキシアジリジン-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラニ
ル)アミノ-(1-ナフチル)メタン・モノナトリウム塩

【化３０】

【００７７】実施例２と同様にして、化合物１３（200m
g）をアルカリ加水分解し、標記化合物（化合物１４；1
47mg）を白色粉末として得た（収率75％）。 〔α〕Ｄ ²⁴ -69.8 ゜ (c 0.51, H₂O) 元素分析値 C₂₄H₂₂N₃O₄Na・2.8H₂O として 計算値 C; 58.84, H; 5.68, N; 8.58, Na; 4.69（％） 実験値 C; 58.90, H; 5.51, N; 8.49, Na; 4.77（％）¹ H NMR δppm (D₂O, 60℃) 2.45(1H,br s), 2.74(1H,br s), 2.97-3.12(2H,m), 4.6
1(1H,t,J=7.5Hz), 4.71(1H,d,J=15.1Hz), 4.83(1H,d,J=
15.1Hz), 7.09-7.25(5H,m), 7.29(1H,d,J=7.0Hz), 7.45
-7.53(1H,m), 7.57-7.67(2H,m), 7.87-8.04(3H,m)

【００７８】

【実施例１５】N-(N-((2R,3R)-3-エトキシカルボニルア
ジリジン-2-カルボニル)-3-(2-ナフチル)-(2S)-アラニ
ル)-1-アミノ-3-メトキシプロパン

【化３１】

【００７９】実施例７と同様にして、3-メトキシプロピ
ルアミン（323μl）、Boc-3-(2-ナフチル)-L-アラニン
（1.00g，バッケム社製, スイス）とを縮合し、N-(Boc-
3-(2-ナフチル)-(2S)-アラニル)-1-アミノ-3-メトキシ
プロパン（1.14g）を得た（収率93％）。Boc基をTFAで
脱保護して得られた化合物のうち655mgを、実施例７と
同様にして、(2R,3R)-エチル・ハイドロゲン・アジリジ
ン-2,3-ジカルボキシレート（320mg）と縮合し、標記化
合物（化合物１５；643mg）を白色粉末として得た（収
率75％）。 〔α〕Ｄ ²³ -55.5 ゜ (c 1.02, CHCl₃) 元素分析値 C₂₃H₂₉N₃O₅ として 計算値 C; 64.62, H; 6.84, N; 9.83（％） 実験値 C; 64.38, H; 6.85, N; 9.91（％）¹ H NMR δppm (CDCl₃) 1.29(3H,t,J=7.1Hz), 1.40-1.64(2H,m), 1.64-1.83(1H,
m,H₂O overlapped), 2.61(1H,br s), 2.80(1H,br s),
2.98-3.32(6H,m), 3.01(3H,s), 4.15-4.30(2H,m),4.57
(1H,m), 6.05(1H,br t), 7.01(1H,d,J=8.1Hz), 7.35(1
H,dd,J=8.4,1.6Hz),7.40-7.52(2H,m), 7.66(1H,s), 7.7
4-7.85(3H,m)

【００８０】

【実施例１６】N-(N-((2R,3R)-3-カルボキシアジリジン
-2-カルボニル)-3-(2-ナフチル)-(2S)-アラニル)-1-ア
ミノ-3-メトキシプロパン・モノナトリウム塩

【化３２】

【００８１】実施例２と同様にして、化合物１５（207m
g）をアルカリ加水分解し、標記化合物（化合物１６；1
95mg）を白色粉末として得た（収率96％）。 〔α〕Ｄ ²³ -66.7 ゜ (c 1.02, H₂O) 元素分析値 C₂₁H₂₄N₃O₅Na・1.0H₂O として 計算値 C; 57.40, H; 5.96, N; 9.56, Na; 5.23（％） 実験値 C; 57.39, H; 5.96, N; 9.58, Na; 5.59（％）¹ H NMR δppm (D₂O) 1.28-1.50(2H,m), 2.46(1H,br s), 2.70-3.01(4H,m),
3.04(3H,s), 3.08-3.29(3H,m), 4.58(1H,t,J=7.8Hz),
7.43(1H,dd,J=8.4,1.5Hz), 7.50-7.61(2H,m), 7.73(1H,
s), 7.86-7.97(3H,m)

【００８２】

【実施例１７】N-(N-((2R,3R)-N-エチル-3-エトキシカ
ルボニルアジリジン-2-カルボニル)-(2S)-フェニルアラ
ニル)-1-アミノ-3-メトキシプロパン

【化３３】

【００８３】ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミス
トリー（Journal of Medicinal Chemistry）、38巻、30
78頁（1995年）記載の (2R,3R)-アジリジン-2,3-ジカル
ボン酸ジエチルエステル（1.71g）をDMF（34.2ml）に溶
解後、炭酸水素ナトリウム（13.8g），ジエチル硫酸（2
1.5ml，東京化成社製）を加え、８０℃にて２時間撹拌
した。反応液を氷水中に入れた後、pH 7.5に調整し、酢
酸エチル（3x40ml）で抽出した。有機層は、飽和食塩水
で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。これをシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（キーゼルゲル６０，
200ml）に付し、ヘキサン中酢酸エチルを順次添加した
溶出液で溶出し、１０〜１５％(v/v)酢酸エチル含有ヘ
キサン溶出画分から (2R,3R)-N-エチルアジリジン-2,3-
ジカルボン酸ジエチルエステル（1.30g）を無色油状物
として得た（収率66％）。得られた化合物のうち1.25g
をエタノール（41.7ml）に溶解し、氷冷下、1N 水酸化
ナトリウム水（5.81ml）を加え、氷冷下で0.5時間、室
温で１時間撹拌した。反応液を pH 7.0に調整後、水を
加え濃縮し、酢酸エチルで洗浄した。水層をpH 3.0に補
正後、飽和食塩水を加え、酢酸エチル（4x50ml）で抽出
した。有機層は、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、濃縮乾固して、(2R,3R)-N-エチルアジリ
ジン-2,3-ジカルボン酸モノエチルエステル（630mg）を
白色粉末として得た（収率58%）。このうち300mgを、実
施例７と同様にして、実施例１記載の N-((2S)-フェニ
ルアラニル)-1-アミノ-3-メトキシプロパン（361mg）と
縮合し、標記化合物（化合物１９；552mg）を白色粉末
として得た(収率89％)。 〔α〕Ｄ ²³ +34.0 ゜ (c 1.03, CHCl₃) 元素分析値 C₂₁H₃₁N₃O₅ として 計算値 C; 62.20, H; 7.71, N; 10.36（％） 実験値 C; 61.99, H; 7.75, N; 10.40（％）¹ H NMR δｐｐｍ （ＣＤＣｌ_３） １．０５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）， １．２８
（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）， １．５７−１．６８
（２Ｈ，ｍ）， ２．６７−２．９２（４Ｈ，ｍ），
２．９７−３．１３（２Ｈ，ｍ）， ３．２０−３．３
８（４Ｈ，ｍ）， ３．２３（３Ｈ，ｓ）， ４．１８
（２Ｈ，ｍ）， ４．４８（１Ｈ，ｍ），６．１４（１
Ｈ，ｂｒ ｓ）， ６．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈ
ｚ）， ７．１５−７．３３（５Ｈ，ｍ）

【００８４】

【実施例１８】Ｎ−（Ｎ−（（２Ｒ，３Ｒ）−Ｎ−エチ
ル-3-カルボキシアジリジン-2-カルボニル)-(2S)-フェ
ニルアラニル)-1-アミノ-3-メトキシプロパン・モノナ
トリウム塩

【化３４】

【００８５】実施例２と同様にして、化合物１９（150m
g）をアルカリ加水分解し、標記化合物（化合物２０；1
26mg）を白色粉末として得た（収率85％）。 〔α〕Ｄ ²³ +11.3 ゜ (c 1.02, H₂O) 元素分析値 C₁₉H₂₆N₃O₅Na・0.3H₂O として 計算値 C; 56.37, H; 6.62, N; 10.38, Na; 5.68（％） 実験値 C; 56.29, H; 6.63, N; 10.20, Na; 5.63（％）¹ H NMR δppm (D₂O) 1.00-1.16(3H,m), 1.57-1.72(2H,m), 2.55-2.90(4H,m),
2.97-3.37(9H,m), 4.55(1H,t,J=7.8Hz), 7.26-7.47(5
H,m)

【００８６】

【製剤例１】実施例１によって得た化合物１を用いて、
下記に示す処方の全成分を混和し、ゼラチンカプセルに
充填し、カプセル１個当たり、３０ｍｇの化合物１を含
有するカプセル剤を製造した。 化合物１ ３０ｍｇ 乳糖 １００ｍｇ コーンスターチ ４０ｍｇステアリン酸マグネシウム １０ｍｇ 合計 １８０ｍｇ

【００８７】

【試験例１】カテプシンＬ阻害活性の測定 （１）カテプシンＬ阻害活性測定 本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩は、強いチオールプ
ロテアーゼ阻害作用（例えば、カテプシンＬ、カテプシ
ンＢなどの阻害作用）を示す。本発明の化合物〔Ｉ〕ま
たはその塩のカテプシンＬに対する阻害活性を下記の方
法により測定した。ヒト組換え体カテプシンＬ（参考例
１〜７により製造したものを用いた）１ｎｇ、２μＭの
ジチオスレイトール（以下、ＤＴＴと略す）、１ｍＭの
エチレンジアミンテトラアセテート２ナトリウム塩、
０.１Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５.５）および種
々の濃度の検体を含む反応液７５μｌに２０μＭのベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ア
ルギニン−４−メチルクマリル−７−アミド（以下、Ｚ
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−７ＭＣＡと略す、ペプチド研究所
製）２５μｌを加えて反応を開始し、３７℃で２０分間
保温した後、１００ｍＭのモノクロロ酢酸ナトリウムを
含む反応停止液１００μｌを加えた。遊離した４−メチ
ル−７−アミノクマリンの量を蛍光光度計（ＦＣＡ：バ
クスター社製）を用いて励起波長３６５ｎｍ、蛍光波長
４５０ｎｍで測定した。なお、検体を加えないで同様に
反応させたものの蛍光測定値を１００％とし、５０％阻
害に必要な検体の濃度をＩＣ₅₀値とした。結果を〔表
２〕に示す。

【００８８】

【表２】 〔表２〕から、本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩が優
れたカテプシンＬ阻害活性を有することが分かった。

【００８９】

【発明の効果】本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩は、
チオール基を活性中心に有する物質、例えばカテプシン
類（例、カテプシンＬ，カテプシンＢ、カテプシンＫ
等）、カルパイン類（例、カルパインI、カルパインII
等）等のチオールプロテアーゼに対する阻害作用を有し
ており、チオールプロテアーゼ阻害剤、特にカテプシン
Ｌ阻害剤として有用である。また、本発明の化合物
〔Ｉ〕またはその塩は、チオールプロテアーゼに由来す
る疾患、例えば、筋ジストロフィー症，空胞型ジスター
ルミオパチー、心筋梗塞、脳梗塞、血栓、白内障、アル
ツハイマー病、筋萎縮症、癌転移等の予防・治療剤とし
て有用である。チオールプロテアーゼの活性を阻害する
物質は、抗炎症作用を有しているので、本発明のチオー
ルプロテアーゼ阻害剤は、抗炎症剤としても有用であ
る。さらに、本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩は、骨
吸収抑制作用を有し、例えば、骨粗鬆症、悪性高カルシ
ウム血症、ページェット病等の骨疾患の予防・治療剤と
して用いられる。本発明の化合物〔Ｉ〕またはその塩
は、毒性も低く、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラッ
ト、マウス、モルモット、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ヒ
ツジ、ウシ、サル、チンパンジー、マントヒヒなど）に
対し、安全に用いられる。

【００９０】

【配列表】

【配列番号：１】 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＴＴＴＴＣＡＧＧＧＧ ＧＣＡＧＴＡＡＧＡＴ ２０

【００９１】

【配列番号：２】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ｐＣＣＧＧＡＴＣＣＧＧ ＣＴＴＴＴＴＡＧＧＡ ＴＴＧＧＴＣＴＡ
２８

【００９２】

【配列番号：３】 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GGGGGCTGGT AGACTGAAGA 20

【００９３】

【配列番号：４】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ｐＣＣＧＧＡＴＣＣＡＴ ＴＣＣＴＣＣＣＡＴＧ ＣＡＴＧＣＧＣＣ
２８

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ０７Ｍ 7:00 (72)発明者 白▲さき▼ 幹雄 茨城県つくば市並木４丁目16番地１号 ガ ーデンヒルズ並木503号

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式 【化１】 〔式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化されていてもよい
   カルボキシル基を、Ｒ²は水素原子、メチル基またはエ
   チル基を、Ｒ³はフェニル基またはナフチル基を、Ｒ⁴は
   ３−メトキシプロピルアミノ基、２−フェニルエチルア
   ミノ基、ナフチルメチルアミノ基、イソペンチルアミノ
   基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ基またはモルホ
   リノ基を、（Ｒ）は当該記号が付された炭素原子がＲ配
   位であることを示す〕で表わされる化合物またはその
   塩。
2. 【請求項２】Ｎ-（Ｎ-（（２Ｒ,３Ｒ）-３-エトキシカ
   ルボニルアジリジン-２-カルボニル）-（２Ｓ）-フェニ
   ルアラニル）-１-アミノ-３-メトキシプロパンである請
   求項１記載の化合物。
3. 【請求項３】Ｎ-（Ｎ-（（２Ｒ,３Ｒ）-３-カルボキシ
   アジリジン-２-カルボニル）-（２Ｓ）-フェニルアラニ
   ル）-１-アミノ-３-メトキシプロパン・モノナトリウム
   塩である請求項１記載の化合物。
4. 【請求項４】（１）式 【化２】 〔式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化されていてもよい
   カルボキシル基を、Ｒ²¹は水素原子、メチル基、エチル
   基またはアミノ基の保護基を、Ｒ³はフェニル基または
   ナフチル基を、（Ｒ）は当該記号が付された炭素原子が
   Ｒ配位であることを示す〕で表わされる化合物、その反
   応性誘導体またはその塩と、式 Ｒ⁴Ｈ 〔III〕 〔式中、Ｒ⁴は３−メトキシプロピルアミノ基、２−フ
   ェニルエチルアミノ基、ナフチルメチルアミノ基、イソ
   ペンチルアミノ基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ
   基またはモルホリノ基を示す〕で表わされる化合物また
   はその塩とを反応させ、所望により脱保護基反応に付す
   か、または（２）式 【化３】 〔式中、Ｒ¹はエチル基でエステル化されていてもよい
   カルボキシル基を、Ｒ²¹は水素原子、メチル基、エチル
   基またはアミノ基の保護基を、（Ｒ）は当該記号が付さ
   れた炭素原子がＲ配位であることを示す〕で表わされる
   化合物、その反応性誘導体またはその塩と、式 【化４】 〔式中、Ｒ³はフェニル基またはナフチル基を、Ｒ⁴は３
   −メトキシプロピルアミノ基、２−フェニルエチルアミ
   ノ基、ナフチルメチルアミノ基、イソペンチルアミノ
   基、３−（メチルチオ）プロピルアミノ基またはモルホ
   リノ基を示す〕で表わされる化合物またはその塩とを反
   応させ、所望により脱保護基反応に付すことを特徴とす
   る請求項１記載の化合物の製造法。
5. 【請求項５】請求項１記載の化合物またはその塩を含有
   してなる医薬。
6. 【請求項６】請求項１記載の化合物またはその塩を含有
   してなるカテプシンＬ阻害剤。
7. 【請求項７】骨疾患の予防・治療剤である請求項５記載
   の医薬。
8. 【請求項８】骨疾患が骨粗鬆症である請求項７記載の医
   薬。