JPH09246A - 機能の完全なＨＩＶ−２ ｇｐ１６０を分泌するＨＩＶ−２感染ヒトＴ細胞系 - Google Patents

機能の完全なＨＩＶ−２ ｇｐ１６０を分泌するＨＩＶ−２感染ヒトＴ細胞系

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JPH09246A
JPH09246A JP8048902A JP4890296A JPH09246A JP H09246 A JPH09246 A JP H09246A JP 8048902 A JP8048902 A JP 8048902A JP 4890296 A JP4890296 A JP 4890296A JP H09246 A JPH09246 A JP H09246A
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マンガラーセリル・ゴパラン・サーンガドハラン
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バニアンバデイ・スリニベイサン・カリアナレイマン
Irene Larue-Kalisz
アイリーン・ラルー・カリツツ
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 ヒトのＨＩＶ−２に対するワクチンの開発に
有用なｇｐ１６０及び該ｇｐ１６０を分泌するＨＩＶ−
２NIHZ感染ＨＵＴ７８ Ｔ細胞系を提供する。 【解決手段】 ＨＵＴ７８ Ｔ細胞系由来の細胞をＨＩ
Ｖ−２NIHZに感染させ、天然ｇｐ１６０を産生する感染
ＨＵＴ７８細胞を選択し、細胞増殖を促進する条件下に
て無血清培地中で前記ｇｐ１６０の産生細胞系をインキ
ュベートし、前記培地から天然ｇｐ１６０を単離するこ
とにより得られる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はヒト免疫不全ウイル
スＩＩ型ｇｐ１６０の産生及び特性分析に関する。
【０００２】
【従来の技術】このウイルスは世界の様々な地域のヒト
に感染したことが判明しており、ＨＩＶ−２感染個体が
ＨＩＶ−１によって発病する後天性免疫不全症候群（Ａ
ＩＤＳ）と同様の症状を示すことも分かっている。ＨＩ
Ｖ−２感染個体での疾病進行の過程は、ＨＩＶ−１によ
って生ずる病理状態の過程よりもかなり遅い。
【０００３】ＨＩＶ−２は正にＨＩＶ−１と同様にＴ細
胞向性（tropic）であり、Ｔ細胞表面上のＣＤ４抗原が
ウイルスセレプターとして作用する。ウイルスエンベロ
ープとＣＤ４抗原との相互作用によりウイルス感染過程
が開始する。ＨＩＶ−２のエンベロープ糖タンパク質が
前駆体ｇｐ１６０としてウイルス感染細胞内で合成さ
れ、次いで開裂して外側エンベロープ糖タンパク質ｇｐ
１２０及びトランスメンブランｇｐ４１タンパク質とな
った後に、ウイルスエンベロープ内にパッケージングさ
れる。このトランスメンブランタンパク質は、ＨＩＶ−
１のｇｐ４１とは異なり、完全なｇｐ４１として又は端
を切り取ったｇｐ３１としてＨＩＶ−２ビリオン内に存
在する。更には、端を切り取ったｇｐ３１を有するＨＩ
Ｖ−２ビリオンは感染性が高いが、対応する不完全ＨＩ
Ｖ−１は非感染性である。このため、エンベロープタン
パク質の生物学的及び生化学的特性は容易には比較でき
ない。
【０００４】エンベロープタンパク質ｇｐ１２０及びｇ
ｐ４１は、その位置から考えて、ＨＩＶ−２感染ヒトの
免疫応答の一次標的である。これは、ＨＩＶ−１感染個
体でのＨＩＶ−１に対する免疫応答と同様である。しか
しながら、２種のウイルスのエンベロープタンパク質の
相同性は５０％未満であり、従ってＨＩＶ−１系で行っ
た観察をＨＩＶ−２に対する応答に当てはめることは困
難である。例えば少なくとも動物モデル系では、免疫応
答の一次標的はＨＩＶ−１系内のｇｐ１２０のＶ３ルー
プであり、非常に異なるＨＩＶ−１単離物でもそうであ
る。他方、ＨＩＶ−２エンベロープタンパク質ではこの
ような主免疫ドメインは同定されなかった。しかしなが
ら、２種のウイルスの１つの類似点は、ＨＩＶ−１及び
ＨＩＶ−２の多数の単離物によってエンベロープ糖タン
パク質が非常に異なることである。このため、ヒトでの
診断用途又は候補ワクチンとしてのＨＩＶ−２のｇｐ１
２０又はｇｐ４１サブユニットの使用は制限された。
【０００５】不完全形態のＨＩＶ−１に慢性感染して完
全ｇｐ１６０を分泌するある種のヒトＴ細胞系が入手で
きることが、米国特許第５，１１６，７４０号及び第
５，１２２，４６８号に記載されている。しかしなが
ら、このような細胞系の入手の可能性はＨＩＶ−１のあ
らゆる変異体に一様に適用することはできない。ＨＩＶ
−２はＨＩＶ−１より遥かに細胞変性が低く、ＨＩＶ−
２は端を切り取った形態のｇｐ３１でまだ感染するの
で、ＨＩＶ−２の場合はＨＩＶ−の場合よりも更に予測
が困難である。更には、エンベロープ前駆体タンパク質
ｇｐ１６０を分泌するＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２感染細
胞系の成長は一般に、これら２種のウイルスの様々な変
異体すべてには適用できない。経験上、各個々のウイル
ス単離物が独特であり、今のところ成功には至っていな
い培養系の選択的取り扱いや様々な操作が必要となるこ
とが判明した。最終的には分泌現象をおこすウイルスを
特徴付ける特性はまだ明確には解明されていない。例え
ば、多数の単離物（例えばＨＩＶ−２の他の変異体：Ｈ
ＩＶ−２ ＳＢＬ6669）からｇｐ１６０を分泌する細胞
系を開発する試みが繰り返し行われたが、成功には至ら
なかった。本発明の６Ｄ５NIHZの開発には明確な成功の
見込みがなく、３年以上の開発研究を要したが、大規模
の単離に適した量でＨＩＶ−２ ｇｐ１６０を分泌する
細胞系が得られた。
【０００６】ＨＩＶ−１型ウイルスに関しては、この７
年間の研究開発の間に、米国特許第５，１１６，７４０
号及び第５，１２２，４６８号に記載のＨＩＶ−１IIIB
単離物及び６Ｄ５451系でのみ成功に達した。何年もの
研究の後に、大半のＨＩＶ単離物（例えばＨＩＶ−
１MN、ＨＩＶ−１CDC71、ＨＩＶ−１WOM、ＨＩＶ−１Z6
及びＨＩＶ−１Ba1）からｇｐ１６０を分泌する細胞系
を開発することはできなかった。ＳＩＶmac251ｇｐ１６
０（ＳＩＶmac251は明らかにＨＩＶ−２に関連し、エン
ベロープタンパク質の相同性は７０％以上である）を分
泌するＳＩＶmac251感染細胞の細胞系の開発も繰り返し
試みられたが、失敗に終わった。各ウイルス及び各個々
のウイルス株が独特であることを考えれば、また機能の
完全なｇｐ１６０を分泌する細胞系を開発できる場合が
非常に少ないことを考えれば、任意のウイルスに感染し
てｇｐ１６０を分泌する細胞系の開発に成功する可能
性、特に機能の完全なＨＩＶ−２ ｇｐ１６０を分泌す
る細胞系の開発の可能性は低い。
【０００７】本発明以前はＨＩＶ−２ ｇｐ１６０は組
換え技術でのみ産生されていた。しかしながら、組換え
タンパク質のグリコシル化はＨＩＶ−２感染細胞に由来
する天然（ｎａｔｉｖｅ）タンパク質とは質的にも量的
にもかなり異なる。このため、天然ウイルス培養物由来
のｇｐ１６０と組換え体ｇｐ１６０との間にはコンホメ
ーションの相違がある。これらは、ＡＩＤＳに対する診
断及びワクチン戦略にとって重要な問題となった。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】ＨＩＶ−２NIHZ単離物
に慢性感染すると、細胞外培地内に機能の完全な天然ウ
イルス糖タンパク質ｇｐ１６０を放出するＨＵＴ７８細
胞の単一クローンを提供することが本発明の目的であ
る。
【０００９】本発明の他の目的は、細胞系が細胞外培地
内に天然ｇｐ１６０を放出するような条件下にて無血清
培地内で増殖した不滅化ＨＩＶ−２NIHZ感染ＨＵＴ７８
細胞の単一クローンを提供することである。
【００１０】本発明の他の目的は、機能の完全な精製Ｈ
ＩＶ−２ ｇｐ１６０を天然形態で提供することであ
る。
【００１１】本発明の別の目的は、（１）ＥＬＩＳＡ、
（２）ウエスタンブロット、（３）代謝性標識細胞及び
調整培地の放射性免疫沈殿、並びに（４）抗原−抗体相
互作用を用いる他の任意の方法によって感染ヒトのＨＩ
Ｖ−２に対する抗体を検出するための天然形態の精製Ｈ
ＩＶ−２ ｇｐ１６０を提供することである。
【００１２】本発明の別の目的は、オリゴマータンパク
質として、従ってヒトのワクチン試薬として使用するた
めの天然形態の精製ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０を提供する
ことである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】ＨＵＴ７８細胞の単細胞
クローンがヒト免疫不全ウイルス型Ｉ（ＨＩＶ−１）に
感染すると、感染細胞系はウイルス連続産生体となっ
た。クローン６Ｄ５は、Ｇｅｔｃｈｅｌｌ等が記載した
ようにＨＩＶ−１に慢性感染しやすい（Ｊ．Ｃｌｉｎ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２３；７３７−７４２，１９８
６）。本発明では、６Ｄ５クローンは多数の異なるＨＩ
Ｖ−２単離物に非常に感染しやすいことが知見されてい
る。ＨＩＶ−１とＨＩＶ−２とは生物学的に異なるが、
６Ｄ５細胞をＨＩＶ−２単離物（ＨＩＶ−２NIHZ）に感
染させて、培地中にｇｐ１６０を分泌させる方法が今日
知見された。慢性感染細胞系を６Ｄ５NIHZと称する。こ
の細胞系の単細胞クローン（クローン１１）を単離する
と、培地中に多量のＨＩＶ−２ｇｐ１６０を分泌するこ
とが知見された。重要なことに、クローン化した細胞系
はＩｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ．（Ｃａ
ｌｉｆｏｒｎｉａ）から市販されている無血清ＨＢ１０
４培地のような無血清培地で増殖し得る。無血清培地で
の細胞増殖は、６Ｄ５NIHZ（クローン１１）細胞の調整
培地からＨＩＶ−２ ｇｐ１６０を濃縮精製する主要段
階である。無血清培地を使用する場合にのみ、糖タンパ
ク質ｇｐ１６０を培地中の他のタンパク質から容易に分
離することができる。血清含有培地を使用すると、ｇｐ
１６０は他の培地成分から容易には分離できない。
【００１４】
【発明の実施の形態】好ましい実施態様では、ＨＢ１０
４血清補足物はヒトトランスフェリン、ヒトインシュリ
ン、ヒト血清アルブミン及びセレニウムを成長促進因子
として含んでいる。ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０の最適な増
殖や産生を達成するために、６Ｄ５NIHZ（クローン１
１）細胞を無血清培地中で３〜４世代増殖させた。細胞
を35Ｓ−メチオニンで一晩代謝性標識し、培地中の標識
タンパク質をＨＩＶ−２抗体陽性ヒト血清で放射性免疫
沈殿させて、培地中にＨＩＶ−２ ｇｐ１６０が存在す
るかを検出した。
【００１５】無細胞調整培地をＨＩＶ−２NIHZ ｇｐ１
６０のソースとして使用した。通常、５０〜１００リッ
トルの細胞バッチを回転瓶の無血清培地で増殖させる。
培地から細胞を取り出して、リン酸ナトリウムｐＨ７．
５、塩化ナトリウム、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００及びＰ
ＭＳＦを調整培地に添加して、最終濃度をそれぞれ２０
ｍＭ，４００ｍＭ，０．５％及び０．１ｍＭとし、感染
ウイルスを不活性化した。室温で１時間インキュベート
した後に、１０Ｋ分子量カットオフフィルター（Ｍｉｌ
ｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を備えたＰｅ
ｌｌｉｃｏｎＣａｓｓｅｔｔｅを用いて不活性化培地を
約５０倍に濃縮した。ＨＩＶ−２ ｇｐ４１に対するマ
ウスモノクローナル抗体を用いたイムノアフィニティー
クロマトグラフィーにより、不活性化して濃縮した調整
培地からＨＩＶ−２NIHZｇｐ１６０を精製した。部分精
製ＨＩＶ−２NIHZ ｇｐ１６０を用いて、モノクローナ
ル抗体をＡＢＬにより産生した。製造業者の指示に従っ
て、モノクローナル抗体の精製免疫グロブリンを５ｍｇ
／ｍｌの濃度でＣＮＢｒ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ製）に結合した。６Ｄ５NIHZ（クロー
ン１１）細胞の濃縮調整培地を５０ｍｌの上記抗体のカ
ラムに４℃で通した。カラムをリン酸緩衝食塩水、次い
で食塩水で洗浄した後に、カラムからの結合タンパク質
を、０．１ｍＭ ＰＭＳＦを含む１００ｍＭ炭酸ナトリ
ウムで溶離した。記録装置に接続したＬＫＢ ＵＶＩＣ
ＯＲＤを用いて２８０ｎｍで吸光度測定して、カラムか
らのタンパク質の溶離を監視した。溶離したタンパク質
を２Ｎ ＨＣｌを用いて中和し、リン酸ナトリウム（ｐ
Ｈ７．５）を添加して最終濃度を１０ｍＭとした。この
画分は汚染物質としてのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）
と共にＨＩＶ−２NIHZｇｐ１６０を含んでいた。ＨＳＡ
を除去するために、試料をＳｅｐｈａｒｏｓｅに結合し
たＨＳＡ（Ｃａｐｐｅｌ ｌａｂｓ製）（Ｓｅｐｈａｒ
ｏｓｅ １ｍｌ当たり５ｍｇ）に対するヤギ抗体のカラ
ムに通した。結合した画分を１０〜２０ｍｌに濃縮し、
適切なアリコート中にて−７０℃で保存した。図１は精
製ＨＩＶ−２NIHZ ｇｐ１６０のＳＤＳ−ＰＡＧＥプロ
フィールを示す。精製タンパク質を７．５％ＳＤＳゲル
中で泳動させ、クーマシーブルーで染色し、脱色し、写
真を撮った。
【００１６】本明細書に記載する６Ｄ５NIHZ（クローン
１１）細胞の寄託をブダペスト条約の要件で行った。Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），１２３０１ Ｐａｒｋｌａ
ｗｎ Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａ
ｎｄ ２０８５２，ＵＳＡ，１９９５年１月２５日，Ａ
ＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１１８２６。
【００１７】
【実施例】実施例１ ２％透析ウシ胎児血清及び１００μＣ／ｍｌの35Ｓ−メ
チオニン（ＮＥＮ ＤｕＰｏｎｔ）を含む５ｍｌの無メ
チオニンＲＰＭＩ １６４０培地中の５百万個の６Ｄ５
NIHZ（クローン１１）細胞を３７℃で１５時間インキュ
ベートした。細胞を遠心分離により除去し、同一容量の
２×ＰＢＳ−ＴＤ緩衝液（２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１０
０、１Ｍナトリウムデオキシコレート及び０．１ｍＭ
ＰＭＳＦを含む２×ＰＢＳ）を添加した。この混合物１
ｍｌに、ＨＩＶ−２抗体陽性ヒト血清１０μｌ又はＨＩ
Ｖ−２ ｇｐ１２０又はｇｐ４１に対するマウスモノク
ローナル抗体５０μｇを添加した。更には、２００μｌ
の１０％タンパク質Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（モノクロ
ーナル抗体の場合、タンパク質Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
はマウスＩｇＧに対するウサギ抗体で予備飽和させた）
も試料に添加した。この混合物を室温で１時間インキュ
ベートした。Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機で試料を１
０，０００ｒｐｍにて２分間遠心分離し、ペレットをＰ
ＢＳ−ＴＤ緩衝液で３度洗浄した。Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
ペレットを、２％ＳＤＳ、２％β−メルカプトエタノー
ル、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）及び２０
％グリセロールを含む緩衝液で２分間沸騰させた。可溶
化した標識タンパク質を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
中で分離し、Ａｍｐｌｉｆｙ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で処
理し、乾燥し、Ｘ線フィルムに暴露した。図２は、培地
が、上記３種全ての抗体で免疫沈殿した約１４０ｋＤの
タンパク質バンドを含んでいたことを示しており、この
ことは端を切り取った形態のＨＩＶ−２ ｇｐ１６０で
あることを示している。
【００１８】実施例２ 35 Ｓ−メチオニンで標識した６Ｄ５NIHZ（クローン１
１）細胞の細胞外培地中のウイルスタンパク質を、上述
したように（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．から
入手した）１２種のＨＩＶ−２抗体陽性ヒト血清で免疫
沈殿させた。標識した培地を、１０μｌのＨＩＶ−２抗
体陰性正常ヒト血清及び２００μｌの１０％タンパク質
Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅと共に室温で１時間プレインキ
ュベートして、遠心分離した。透明になった上清は特異
抗体陽性血清と反応性であった。図３に示すように、全
てのＨＩＶ−２抗体陽性ヒト血清は、標識した調製培地
由来のｇｐ１６０タンパク質を多量に沈殿させた。
【００１９】実施例３ 実施例２では、６Ｄ５NIHZ（クローン１１）細胞によっ
て分泌された標識ｇｐ１６０タンパク質が、全てのＨＩ
Ｖ−２抗体陽性ヒト血清によって特異的かつ高い感受性
でもって免疫沈殿した。全てのＨＩＶ−２抗体陽性ヒト
血清が更にイムノブロット法では図１に示す精製ＨＩＶ
−２ ｇｐ１６０と高い特異性でもって反応することも
判明した。この目的のために、精製ＨＩＶ−２ ｇｐ１
６０を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル中で分離し、エレ
クトロブロッティングによりニトロセルロースに移し
た。ニトロセルロースを脱脂粉乳でブロックし、４ｍｍ
のストリップにカットした。５ｍｌの緩衝液（１０ｍＭ
Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＮａＣｌ
及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０）中で２時間インキュ
ベートする間に、ストリップを２０μｌのＨＩＶ−２抗
体陽性ヒト血清又は陰性対照血清で処理した。ストリッ
プを洗浄し、アルカリ性ホスファターゼ結合ヤギ抗ヒト
ＩｇＧを用いて、結合した抗体を可視化した。図４に示
すように、陰性対照血清ではなく、ＨＩＶ−２抗体の陽
性血清全てが精製ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０と反応した。
【００２０】実施例４ ヒト血清中での特定の病原体に対する抗体の質量検出で
使用した好都合な方法の一つはＥＬＩＳＡである。従っ
て、６Ｄ５NIHZ（クローン１１）細胞由来の精製ＨＩＶ
−２ ｇｐ１６０によりこの方式でウイルス特異抗体を
検出できるかどうかを試験した。この目的のために、９
６ウェルＥＬＩＳＡプレートを１００ｎｇ／ウェルの精
製ｇｐ１６０でコーティングし、ウェルを１：２５に希
釈した１００μｌのヒト血清で処理した。結合した抗体
を標準的な技術により、ペルオキシダーゼ結合二次抗体
で検出した。４５０ｎｍでのウェル中の吸光度をＥＬＩ
ＳＡリーダーで測定した。図６に示すように、試料対カ
ットオフ比で測定すると、精製ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０
が特異的かつ高い感受性でもって検出された。
【００２１】図５は、２種のヒト血清中のＨＩＶ−２に
対する抗体の検出の感受性を示す。この目的のために、
２倍系列希釈の血清をＥＬＩＳＡプレートでＨＩＶ−２
ｇｐ１６０と反応させ、４５０ｎｍで吸光度を測定し
た。図面から明白なように、精製ＨＩＶ−２ ｇｐ１６
０は上記血清と高い感受性でもって反応し、恐らくは精
製タンパク質の種々のエピトープと反応する。
【図面の簡単な説明】
【図１】親和性精製ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０のＳＤＳ−
ＰＡＧＥ電気泳動プロフィールを示す写真である。
【図２】（ｉ）ＨＩＶ−２抗体陽性ヒト血清（レーン
１）、（ｉｉ）ＨＩＶ−２ ｇｐ１２０に対する２種の
異なるマウスモノクローナル抗体（レーン２、３）及び
（ｉｉｉ）ＨＩＶ−２ ｇｐ４１に対する３種の別個の
マウスモノクローナル抗体（レーン４、５、６）で免疫
沈殿させた調整培地及び６Ｄ５NIHZ（クローン１１）細
胞の35Ｓ−メチオニン標識タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ電気泳動プロフィールを示す写真である。
【図３】ＨＩＶ−２感染ヒト由来の１３種の血清によ
る、６Ｄ５NIHZ（クローン１１）の35Ｓ−メチオニン標
識調整培地の放射性免疫沈殿を示すＸ線写真である。
【図４】ウエスタンブロット分析によるＨＩＶ−２抗体
陽性ヒト血清（図３と同一血清）と精製ＨＩＶ−２ ｇ
ｐ１６０との反応性を示す電気泳動写真である。
【図５】ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０の、ＨＩＶ−２感染ヒ
トに由来する２種の血清の系列希釈との反応を示す。
【図６】ＥＬＩＳＡでのＨＩＶ−２抗体陽性ヒト血清と
精製ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０との強い反応性を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｈ // Ａ６１Ｋ 39/21 ＡＤＹ Ａ６１Ｋ 39/21 ＡＤＹ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:92） (72)発明者 バニアンバデイ・スリニベイサン・カリア ナレイマン アメリカ合衆国、メリイランド・20874、 ジヤーマンタウン、スピニング・ホイー ル・プレイス・20821 (72)発明者 アイリーン・ラルー・カリツツ アメリカ合衆国、メリイランド・21704、 フレデリツク、ホープランド・ロード・ 3553

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 機能の完全な天然ＨＩＶ−２ ｇｐ１６
    ０を分泌するＨＩＶ−２NIHZ感染ＨＵＴ７８ Ｔ細胞
    系。
  2. 【請求項２】 前記細胞系が６Ｄ５NIHZ、ＡＴＣＣ受託
    番号ＣＲＬ−１１８２６である請求項１に記載の細胞
    系。
  3. 【請求項３】 無血清培地中のＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ
    −１１８２６から選択される６Ｄ５NIHZ。
  4. 【請求項４】 ＨＵＴ７８ Ｔ細胞系由来の細胞をＨＩ
    Ｖ−２NIHZに感染させ、天然ｇｐ１６０を産生する感染
    ＨＵＴ７８細胞を選択し、細胞増殖を促進する条件下に
    て無血清培地中で前記ｇｐ１６０の産生細胞系をインキ
    ュベートし、前記培地から天然ｇｐ１６０を単離するこ
    とからなる天然ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０の産生方法。
  5. 【請求項５】 Ｔ細胞系をＨＩＶ−２に感染させ、細胞
    増殖を促進して糖タンパク質が前記培地中に分泌される
    ような条件下にて培地中でインキュベートするＨＩＶ−
    ２由来のエンベロープタンパク質の産生方法であって、
    ｇｐ１６０を産生する６Ｄ５NIHZ感染Ｔ細胞系に由来す
    る細胞を無血清培地中でインキュベートし、天然ＨＩＶ
    −２エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１６０に対応する約
    １４０ｋＤタンパク質を前記培地から単離することから
    なる前記方法。
  6. 【請求項６】 天然ウイルス培養物から精製した機能の
    完全な天然形態のＨＩＶ−２ ｇｐ１６０。
  7. 【請求項７】 感染ヒトのＨＩＶ−２に対する抗体を検
    出することができる請求項６に記載のＨＩＶ−２ ｇｐ
    １６０。
  8. 【請求項８】 請求項６に記載のＨＩＶ−２ ｇｐ１６
    ０と該ＨＩＶ−２ ｇｐ１６０に対する抗体との抗原−
    抗体相互作用を用いたＨＩＶ−２ ｇｐ１６０に対する
    抗体の検出方法。
  9. 【請求項９】 オリゴマータンパク質としての請求項６
    に記載のＨＩＶ−２ｇｐ１６０をヒトのワクチン試薬と
    して用いた、ＨＩＶ−２感染に対するヒトの免疫方法。
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