JPH09249698A - ヒトカルシトニン誘導体 - Google Patents
ヒトカルシトニン誘導体Info
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Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】活性が高く副作用の少ないヒトカルシトニン誘
導体を提供する。 【解決手段】下記化１で表されるヒトカルシトニン誘導
体またはその薬学的に許容される塩。 【化１】
導体を提供する。 【解決手段】下記化１で表されるヒトカルシトニン誘導
体またはその薬学的に許容される塩。 【化１】
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は生物学的活性を有す
る新規なヒトカルシトニン誘導体に関する。
る新規なヒトカルシトニン誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】既知の天然型カルシトニンは鰻、鮭、
鶏、豚、ヒト、ウシ、羊、ラット等の由来のものが知ら
れており、すべて３２個のアミノ酸により構成されてい
る。これらヒトや動物が本来有しているカルシトニンを
天然型カルシトニンという。
鶏、豚、ヒト、ウシ、羊、ラット等の由来のものが知ら
れており、すべて３２個のアミノ酸により構成されてい
る。これらヒトや動物が本来有しているカルシトニンを
天然型カルシトニンという。
【０００３】一方、特開昭６３−２７７６９８、特開昭
６３−２８４１９８、特開昭６３−２８７８００、J.Bi
ochem.Vol.159 P125(1986)、Endocrinology Vol.117 P8
0(1987) 、J.Biochem. Vol.162 P399(1987) などには、
天然型カルシトニンの少なくとも１つのアミノ酸残基を
他のアミノ酸残基に置換してなる誘導体が開示されてい
る。
６３−２８４１９８、特開昭６３−２８７８００、J.Bi
ochem.Vol.159 P125(1986)、Endocrinology Vol.117 P8
0(1987) 、J.Biochem. Vol.162 P399(1987) などには、
天然型カルシトニンの少なくとも１つのアミノ酸残基を
他のアミノ酸残基に置換してなる誘導体が開示されてい
る。
【０００４】天然型ヒトカルシトニンに代表される哺乳
類の甲状腺由来のカルシトニンは、天然型サケカルシト
ニンや天然型ウナギカルシトニンに代表される鰓後腺由
来のカルシトニンに比較して血中カルシウム低下作用が
低いことが一般に知られている。血中カルシウム低下作
用が強いことより、天然型サケカルシトニンおよびウナ
ギカルシトニン誘導体が骨粗鬆症または疼痛改善の治療
薬として用いられているが、抗原性および吐き気等の副
作用が問題となっている。天然型ヒトカルシトニンには
これら副作用の問題は生じないが、血中カルシウム低下
作用が低いことより多量の薬剤投与が必要となる。
類の甲状腺由来のカルシトニンは、天然型サケカルシト
ニンや天然型ウナギカルシトニンに代表される鰓後腺由
来のカルシトニンに比較して血中カルシウム低下作用が
低いことが一般に知られている。血中カルシウム低下作
用が強いことより、天然型サケカルシトニンおよびウナ
ギカルシトニン誘導体が骨粗鬆症または疼痛改善の治療
薬として用いられているが、抗原性および吐き気等の副
作用が問題となっている。天然型ヒトカルシトニンには
これら副作用の問題は生じないが、血中カルシウム低下
作用が低いことより多量の薬剤投与が必要となる。
【０００５】したがって、天然型ヒトカルシトニンと同
様に副作用が少なく、かつより高活性であるカルシトニ
ンが求められている。なお、天然型ヒトカルシトニンの
アミノ酸配列を下記化１に示す。
様に副作用が少なく、かつより高活性であるカルシトニ
ンが求められている。なお、天然型ヒトカルシトニンの
アミノ酸配列を下記化１に示す。
【０００６】
【化１】
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は天然型ヒトカル
シトニンに比較して高活性であるヒトカルシトニン誘導
体にかかわる下記発明である。
シトニンに比較して高活性であるヒトカルシトニン誘導
体にかかわる下記発明である。
【０００８】天然型ヒトカルシトニンの１７位、２２位
および２４位から選ばれる少なくとも一つの位置および
任意に１５位のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基に置換
してなるヒトカルシトニン誘導体であって、その１５位
の置換がグルタミン酸残基への置換、その１７位の置換
がヒスチジン残基への置換、その２２位の置換がチロシ
ン残基への置換、およびその２４位の置換がアルギニン
残基への置換であることを特徴とするヒトカルシトニン
誘導体またはその薬学的に許容される塩。
および２４位から選ばれる少なくとも一つの位置および
任意に１５位のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基に置換
してなるヒトカルシトニン誘導体であって、その１５位
の置換がグルタミン酸残基への置換、その１７位の置換
がヒスチジン残基への置換、その２２位の置換がチロシ
ン残基への置換、およびその２４位の置換がアルギニン
残基への置換であることを特徴とするヒトカルシトニン
誘導体またはその薬学的に許容される塩。
【０００９】
【発明の実施の形態】前記天然型ヒトカルシトニンのア
ミノ酸配列に示されるように、天然型ヒトカルシトニン
の１５位、１７位、２２位、２４位のアミノ酸残基はそ
れぞれ Asp（アスパラギン酸）、Asn （アスパラギ
ン）、 Phe（フェニルアラニン）、 Gln（グルタミン）
の残基である。本発明のヒトカルシトニン誘導体は、こ
の１７位のアスパラギン残基をヒスチジン残基に置換し
たもの、２２位のフェニルアラニン残基をチロシン残基
に置換したもの、または２４位のグルタミン残基をアル
ギニン残基に置換したものである。さらにこの１つの置
換に加えて、１５位がグルタミン酸残基に置換したもの
であってもよい。
ミノ酸配列に示されるように、天然型ヒトカルシトニン
の１５位、１７位、２２位、２４位のアミノ酸残基はそ
れぞれ Asp（アスパラギン酸）、Asn （アスパラギ
ン）、 Phe（フェニルアラニン）、 Gln（グルタミン）
の残基である。本発明のヒトカルシトニン誘導体は、こ
の１７位のアスパラギン残基をヒスチジン残基に置換し
たもの、２２位のフェニルアラニン残基をチロシン残基
に置換したもの、または２４位のグルタミン残基をアル
ギニン残基に置換したものである。さらにこの１つの置
換に加えて、１５位がグルタミン酸残基に置換したもの
であってもよい。
【００１０】さらに本発明のヒトカルシトニン誘導体
は、これらの置換を同時に２〜４つ行ったものである。
すなわち、１７位をヒスチジン残基にかつ２２位をチロ
シン残基に置換したもの（加えて、１５位がグルタミン
酸残基に置換したものであってもよい）、１７位をヒス
チジン残基にかつ２４位をアルギニン残基に置換したも
の（加えて、１５位がグルタミン酸残基に置換したもの
であってもよい）、２２位をチロシン残基にかつ２４位
をアルギニン残基に置換したもの（加えて、１５位がグ
ルタミン酸残基に置換したものであってもよい）、およ
び、１７位をヒスチジン残基に、２２位をチロシン残基
にかつ２４位をアルギニン残基に置換したもの（加え
て、１５位がグルタミン酸残基に置換したものであって
もよい）、である。
は、これらの置換を同時に２〜４つ行ったものである。
すなわち、１７位をヒスチジン残基にかつ２２位をチロ
シン残基に置換したもの（加えて、１５位がグルタミン
酸残基に置換したものであってもよい）、１７位をヒス
チジン残基にかつ２４位をアルギニン残基に置換したも
の（加えて、１５位がグルタミン酸残基に置換したもの
であってもよい）、２２位をチロシン残基にかつ２４位
をアルギニン残基に置換したもの（加えて、１５位がグ
ルタミン酸残基に置換したものであってもよい）、およ
び、１７位をヒスチジン残基に、２２位をチロシン残基
にかつ２４位をアルギニン残基に置換したもの（加え
て、１５位がグルタミン酸残基に置換したものであって
もよい）、である。
【００１１】下記化２にこれら１７位、２２位、２４位
の置換を同時に３つ行って得られる本発明のヒトカルシ
トニン誘導体のアミノ酸配列を示す。本発明のヒトカル
シトニン誘導体としては、この下記化２のアミノ酸配列
で表されるヒトカルシトニン誘導体が好ましく、このヒ
トカルシトニン誘導体は天然型ヒトカルシトニンの１０
倍程度高い血中カルシウム低下作用を有し、かつ副作用
も低いという顕著な効果を有する。
の置換を同時に３つ行って得られる本発明のヒトカルシ
トニン誘導体のアミノ酸配列を示す。本発明のヒトカル
シトニン誘導体としては、この下記化２のアミノ酸配列
で表されるヒトカルシトニン誘導体が好ましく、このヒ
トカルシトニン誘導体は天然型ヒトカルシトニンの１０
倍程度高い血中カルシウム低下作用を有し、かつ副作用
も低いという顕著な効果を有する。
【００１２】
【化２】
【００１３】本発明のヒトカルシトニン誘導体を合成す
るにあたっては、ポリマー樹脂を利用したペプチド固相
合成法や一般的な有機合成法である液相合成法が利用で
きる。ペプチド固相合成に用いる樹脂には、たとえば、
ベンズヒドリルアミン樹脂、４−（２，４−ジメトキシ
フェニル−アミノメチル）−フェノキシアセトアミド−
アミノメチル樹脂、４−（２，４−ジメトキシフェニル
−アミノメチル）−フェノキシアセトアミド−４−メチ
ルベンズヒドリルアミン樹脂や４−（２，４−ジメトキ
シフェニル−アミノメチル）−フェノキシ樹脂等が利用
できる。
るにあたっては、ポリマー樹脂を利用したペプチド固相
合成法や一般的な有機合成法である液相合成法が利用で
きる。ペプチド固相合成に用いる樹脂には、たとえば、
ベンズヒドリルアミン樹脂、４−（２，４−ジメトキシ
フェニル−アミノメチル）−フェノキシアセトアミド−
アミノメチル樹脂、４−（２，４−ジメトキシフェニル
−アミノメチル）−フェノキシアセトアミド−４−メチ
ルベンズヒドリルアミン樹脂や４−（２，４−ジメトキ
シフェニル−アミノメチル）−フェノキシ樹脂等が利用
できる。
【００１４】アミノ酸は必要に応じて官能基を保護した
アミノ酸誘導体が利用できる。アミノ酸のα−アミノ保
護基としては、ベンジルオキシカルボニル基（Ｚ）、９
−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏ
ｃ）、第３ブチルオキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ホル
ミル基（ＨＣ０）、アセチル基（Ａｃ）等が利用でき
る。アミノ酸のα−カルボキシ保護基としては、ベンジ
ル基（Ｂｚｌ）、第３ブチル基（ｔＢｕ）、メチル基
（Ｍｅ）、エチル基（Ｅｔ）、フェナシル基（Ｐａｃ）
等が利用できる。なお、（ ）内は通常使用されている
基の略号を示し、以下の基においても同様である。
アミノ酸誘導体が利用できる。アミノ酸のα−アミノ保
護基としては、ベンジルオキシカルボニル基（Ｚ）、９
−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏ
ｃ）、第３ブチルオキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ホル
ミル基（ＨＣ０）、アセチル基（Ａｃ）等が利用でき
る。アミノ酸のα−カルボキシ保護基としては、ベンジ
ル基（Ｂｚｌ）、第３ブチル基（ｔＢｕ）、メチル基
（Ｍｅ）、エチル基（Ｅｔ）、フェナシル基（Ｐａｃ）
等が利用できる。なお、（ ）内は通常使用されている
基の略号を示し、以下の基においても同様である。
【００１５】またアミノ酸側鎖官能基保護基としては、
ベンジル基（Ｂｚｌ）、ｐ−トルエンスホニル基（Ｔｏ
ｓ）、ｐ−ニトロフェノキシ基（ＮＯｐ）、ベンズヒド
リル基（Ｂｚｈ）、アセトアミド基（Ａｃｍ）、第３ブ
チル基（ｔＢｕ）、第３ブチルオキシカルボニル基（Ｂ
ｏｃ）、シクロヘキシル基（ｃＨｅｘ）、ベンジルオキ
シメチル基（Ｂｏｍ）、第３ブトキシメチル基（Ｂｕ
ｍ）、第３ブチルチオ基（ｔＢｕｔｈｉｏ）、ジニトロ
フェニル基（Ｄｎｐ）、９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル基（Ｆｍｏｃ）、２，２，５，７，８−ペン
タメチルクロマン−６−スルホニル基（Ｐｍｃ）、トリ
チル基（Ｔｒｔ）等が利用できる。これらの保護基は目
的に応じて１つまたは２つ以上を任意に選択して利用で
きる。
ベンジル基（Ｂｚｌ）、ｐ−トルエンスホニル基（Ｔｏ
ｓ）、ｐ−ニトロフェノキシ基（ＮＯｐ）、ベンズヒド
リル基（Ｂｚｈ）、アセトアミド基（Ａｃｍ）、第３ブ
チル基（ｔＢｕ）、第３ブチルオキシカルボニル基（Ｂ
ｏｃ）、シクロヘキシル基（ｃＨｅｘ）、ベンジルオキ
シメチル基（Ｂｏｍ）、第３ブトキシメチル基（Ｂｕ
ｍ）、第３ブチルチオ基（ｔＢｕｔｈｉｏ）、ジニトロ
フェニル基（Ｄｎｐ）、９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル基（Ｆｍｏｃ）、２，２，５，７，８−ペン
タメチルクロマン−６−スルホニル基（Ｐｍｃ）、トリ
チル基（Ｔｒｔ）等が利用できる。これらの保護基は目
的に応じて１つまたは２つ以上を任意に選択して利用で
きる。
【００１６】ペプチドの伸長反応、すなわちアミノ酸ま
たはアミノ酸誘導体の逐次付加反応にはカルボジイミド
を用いた脱水縮合法や、活性エステル法が利用できる。
たはアミノ酸誘導体の逐次付加反応にはカルボジイミド
を用いた脱水縮合法や、活性エステル法が利用できる。
【００１７】脱水縮合法には、縮合剤として、ジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳ
Ｃ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−
１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフル
オロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−
イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウ
ム ヘキサフルオロリン酸塩（ＢＯＰ）等が利用でき
る。活性エステル法では、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステル（ＨＯＮＳｕ）、ペンタフルオロフェニルエ
ステル（ＯＰｆｐ）、ジヒドロキシベンズトリアジンエ
ステル（ＯＤｈｂｔ）等が利用できる。なお、（ ）内
は通常使用されている化合物の略号を示す。
ヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳ
Ｃ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−
１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフル
オロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−
イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウ
ム ヘキサフルオロリン酸塩（ＢＯＰ）等が利用でき
る。活性エステル法では、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステル（ＨＯＮＳｕ）、ペンタフルオロフェニルエ
ステル（ＯＰｆｐ）、ジヒドロキシベンズトリアジンエ
ステル（ＯＤｈｂｔ）等が利用できる。なお、（ ）内
は通常使用されている化合物の略号を示す。
【００１８】反応溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、テトラヒド
ロフラン、クロロホルム、塩化メチレン、酢酸エチル、
１，４−ジオキサン、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチ
ルピロリドン、ピリジン、水等が利用できる。
ムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、テトラヒド
ロフラン、クロロホルム、塩化メチレン、酢酸エチル、
１，４−ジオキサン、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチ
ルピロリドン、ピリジン、水等が利用できる。
【００１９】アミノ酸またはペプチドの官能基保護基の
脱離剤としては、目的に応じてフッ化水素、トリフルオ
ロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、アンモニア／
メタノール、臭化水素／酢酸、水素／パラジウム炭素、
酢酸水銀、酢酸／亜鉛粉末、アルカリ／水／メタノール
等が利用できる。
脱離剤としては、目的に応じてフッ化水素、トリフルオ
ロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、アンモニア／
メタノール、臭化水素／酢酸、水素／パラジウム炭素、
酢酸水銀、酢酸／亜鉛粉末、アルカリ／水／メタノール
等が利用できる。
【００２０】合成途中のまたは最終の精製法として逆相
クロマトグラフィ、順相クロマトグラフィ、イオン交換
クロマトグラフィ、ゲル濾過等各種のクロマトグラフィ
や再結晶が利用できる。また、ジスルフィド結合形成法
として、空気酸化による方法、フェリシアン化カリウム
やヨウ素等を使用する方法などが利用できる。
クロマトグラフィ、順相クロマトグラフィ、イオン交換
クロマトグラフィ、ゲル濾過等各種のクロマトグラフィ
や再結晶が利用できる。また、ジスルフィド結合形成法
として、空気酸化による方法、フェリシアン化カリウム
やヨウ素等を使用する方法などが利用できる。
【００２１】
【実施例】以下本発明を実施例により具体的に説明する
が、本発明はこれらに限定されない。
が、本発明はこれらに限定されない。
【００２２】［例１］［１７−ヒスチジン、２２−チロ
シン、２４−アルギニン］−ヒトカルシトニン（前記化
２のアミノ酸配列を有するヒトカルシトニン誘導体）の
合成：合成は自動ペプチド合成機によりペプチド固相合
成法により行った。
シン、２４−アルギニン］−ヒトカルシトニン（前記化
２のアミノ酸配列を有するヒトカルシトニン誘導体）の
合成：合成は自動ペプチド合成機によりペプチド固相合
成法により行った。
【００２３】（１）ベンズヒドリルアミン樹脂へのプロ
リンの導入：ベンズヒドリルアミン樹脂５ｇ（−ＮＨ
2 ：０．５ｍｍｏｌ／ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）５０ｍｌに懸濁し、膨潤させた。上澄を
除去した後、さらにＤＭＦ５０ｍｌを加えた後、Ｂｏｃ
プロリン１０ｍｍｏｌ（２．１５ｇ）、ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド２０ｍｍｏｌ、Ｎ−ヒドロキシベンゾ
トリアゾール１２ｍｍｏｌ（１．６２ｇ）をそれぞれ加
え、終夜室温で撹拌した。樹脂をガラスフィルタで濾過
した後、塩化メチレンでよく洗浄した。
リンの導入：ベンズヒドリルアミン樹脂５ｇ（−ＮＨ
2 ：０．５ｍｍｏｌ／ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）５０ｍｌに懸濁し、膨潤させた。上澄を
除去した後、さらにＤＭＦ５０ｍｌを加えた後、Ｂｏｃ
プロリン１０ｍｍｏｌ（２．１５ｇ）、ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド２０ｍｍｏｌ、Ｎ−ヒドロキシベンゾ
トリアゾール１２ｍｍｏｌ（１．６２ｇ）をそれぞれ加
え、終夜室温で撹拌した。樹脂をガラスフィルタで濾過
した後、塩化メチレンでよく洗浄した。
【００２４】次に無水酢酸の塩化メチレン溶液（１０ｖ
／ｖ％）２００ｍｌを加え、室温で１時間撹拌し、未反
応のアミノ基をブロックした。反応終了後、塩化メチレ
ンで洗浄し減圧乾燥した。乾燥後、トリフルオロ酢酸の
塩化メチレン溶液（５０ｖ／ｖ％）５０ｍｌを加え、室
温で１時間撹拌した。ガラスフィルタで濾過し、塩化メ
チレン、メタノール、塩化メチレン、トリエチルアミン
の順で洗浄した後、減圧乾燥した。
／ｖ％）２００ｍｌを加え、室温で１時間撹拌し、未反
応のアミノ基をブロックした。反応終了後、塩化メチレ
ンで洗浄し減圧乾燥した。乾燥後、トリフルオロ酢酸の
塩化メチレン溶液（５０ｖ／ｖ％）５０ｍｌを加え、室
温で１時間撹拌した。ガラスフィルタで濾過し、塩化メ
チレン、メタノール、塩化メチレン、トリエチルアミン
の順で洗浄した後、減圧乾燥した。
【００２５】（２）アミノ酸の逐次付加反応：（１）で
得た樹脂１ｇを自動合成機のカラムに充填し以下の条件
で逐次アミノ酸を付加した。
得た樹脂１ｇを自動合成機のカラムに充填し以下の条件
で逐次アミノ酸を付加した。
【００２６】１）反応：室温３０分、溶媒；ＤＭＦ、 ２）洗浄：室温１０分、溶媒；ＤＭＦ、 ３）脱Ｆｍｏｃ：室温１０分、溶媒；ピペリジンのＤＭ
Ｆ溶液（２０ｖ／ｖ％）、 ４）洗浄：室温１０分 溶媒；ＤＭＦ。
Ｆ溶液（２０ｖ／ｖ％）、 ４）洗浄：室温１０分 溶媒；ＤＭＦ。
【００２７】１）〜４）を繰り返してプロリン以降の３
１個のアミノ酸を順次付加した。使用したアミノ酸誘導
体は下記表１、表２のとおりである。
１個のアミノ酸を順次付加した。使用したアミノ酸誘導
体は下記表１、表２のとおりである。
【００２８】
【表１】
【００２９】
【表２】
【００３０】反応終了後、フッ化水素でペプチドを樹脂
および保護基から脱離し、エーテルで洗浄した。沈澱物
を酢酸水溶液（５０ｖ／ｖ％）に溶解し、不純物を濾去
した後、濾液を凍結乾燥し、粗ペプチド約６００ｍｇを
得た。
および保護基から脱離し、エーテルで洗浄した。沈澱物
を酢酸水溶液（５０ｖ／ｖ％）に溶解し、不純物を濾去
した後、濾液を凍結乾燥し、粗ペプチド約６００ｍｇを
得た。
【００３１】（３）精製とジスルフィド結合の形成：粗
ペプチド約５００ｍｇをトリフルオロ酢酸水溶液（０．
１ｖ／ｖ％）に溶解し、ＯＤＳカラムを用いたＨＰＬＣ
により精製した。Ａ液／Ｂ液＝２０％、Ａ液／Ｂ液＝３
０％、Ａ液／Ｂ液＝４０％の順で溶出し、３０％溶出の
分画を集め凍結乾燥した。
ペプチド約５００ｍｇをトリフルオロ酢酸水溶液（０．
１ｖ／ｖ％）に溶解し、ＯＤＳカラムを用いたＨＰＬＣ
により精製した。Ａ液／Ｂ液＝２０％、Ａ液／Ｂ液＝３
０％、Ａ液／Ｂ液＝４０％の順で溶出し、３０％溶出の
分画を集め凍結乾燥した。
【００３２】凍結乾燥したペプチド４６ｍｇを酢酸水溶
液（０．０５ｖ／ｖ％）５０ｍｌに溶解し、３Ｍのアン
モニア水でｐＨ８．５に調整した。次に０．１ＭのＫ3
Ｆｅ（ＣＮ）6 を１．５ｍｌ加え室温で３０分間撹拌
し、ジスルフィド結合を形成させた。５０％酢酸でｐＨ
５．０に調整した後、陰イオン交換樹脂（Ｃｌ- 型）を
加え２０分間撹拌した後、樹脂を濾去した。
液（０．０５ｖ／ｖ％）５０ｍｌに溶解し、３Ｍのアン
モニア水でｐＨ８．５に調整した。次に０．１ＭのＫ3
Ｆｅ（ＣＮ）6 を１．５ｍｌ加え室温で３０分間撹拌
し、ジスルフィド結合を形成させた。５０％酢酸でｐＨ
５．０に調整した後、陰イオン交換樹脂（Ｃｌ- 型）を
加え２０分間撹拌した後、樹脂を濾去した。
【００３３】濾液を濃縮した後、再びＯＤＳカラムを用
いた高速液体クロマトグラフィに添加し、前述と同様の
方法で再度精製を行った。３０％溶出の分画を集め、凍
結乾燥し標記のペプチド２８ｍｇを得た。
いた高速液体クロマトグラフィに添加し、前述と同様の
方法で再度精製を行った。３０％溶出の分画を集め、凍
結乾燥し標記のペプチド２８ｍｇを得た。
【００３４】［例２］生物活性の測定：例１で得られた
ヒトカルシトニン誘導体を０. １％ＢＳＡ（牛血清アル
ブミン）を含む１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４. ２）に溶
解し、Ｔ４７Ｄ細胞（ヒト乳ガン細胞）を用いたｃＡＭ
Ｐ量測定（アマシャム：ｃＡＭＰ測定キット）により活
性を求めた。その測定結果を図１のグラフに示す。グラ
フにおいて、ｈＣＴは天然型ヒトカルシトニンを表す。
測定結果が示すように、実施例１で得られたヒトカルシ
トニン誘導体は天然型ヒトカルシトニンの１０倍の活性
を有する。
ヒトカルシトニン誘導体を０. １％ＢＳＡ（牛血清アル
ブミン）を含む１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４. ２）に溶
解し、Ｔ４７Ｄ細胞（ヒト乳ガン細胞）を用いたｃＡＭ
Ｐ量測定（アマシャム：ｃＡＭＰ測定キット）により活
性を求めた。その測定結果を図１のグラフに示す。グラ
フにおいて、ｈＣＴは天然型ヒトカルシトニンを表す。
測定結果が示すように、実施例１で得られたヒトカルシ
トニン誘導体は天然型ヒトカルシトニンの１０倍の活性
を有する。
【００３５】［例３］生物活性の測定：例１で得られた
ヒトカルシトニン誘導体を生理食塩水に溶解して、４０
００μｇ／ｋｇのヒトカルシトニン誘導体をラット筋肉
内に投与し、投与後のラットの食餌摂取量および体重を
測定した。同様にヒトカルシトニン誘導体の代わりに天
然型サケカルシトニンを投与し（投与量１００μｇ／ｋ
ｇ）、また対照群として生理食塩水のみを投与した。結
果を図２（食餌摂取量）と図３（体重）のグラフに示
す。グラフにおいて、ｓＣＴは天然型サケカルシトニン
を表す。天然型サケカルシトニンの場合には食餌摂取量
および体重の低下が認められたが、ヒトカルシトニン誘
導体では対照群との差は認められなかった。
ヒトカルシトニン誘導体を生理食塩水に溶解して、４０
００μｇ／ｋｇのヒトカルシトニン誘導体をラット筋肉
内に投与し、投与後のラットの食餌摂取量および体重を
測定した。同様にヒトカルシトニン誘導体の代わりに天
然型サケカルシトニンを投与し（投与量１００μｇ／ｋ
ｇ）、また対照群として生理食塩水のみを投与した。結
果を図２（食餌摂取量）と図３（体重）のグラフに示
す。グラフにおいて、ｓＣＴは天然型サケカルシトニン
を表す。天然型サケカルシトニンの場合には食餌摂取量
および体重の低下が認められたが、ヒトカルシトニン誘
導体では対照群との差は認められなかった。
【００３６】
【発明の効果】本発明のヒトカルシトニン誘導体は、天
然型ヒトカルシトニンに比較して高い活性を有し、しか
も従来の活性の高いカルシトニンに比較して副作用が少
ないという効果を有する。
然型ヒトカルシトニンに比較して高い活性を有し、しか
も従来の活性の高いカルシトニンに比較して副作用が少
ないという効果を有する。
【００３７】
配列番号：１ 配列の長さ：３２ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴： １、７位Cys 間がジスルフィド結合。 ３２位Pro のカルボキシル基がアミド化。 配列： Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe 1 5 10 15 His Lys Phe His Thr Tyr Pro Arg Thr Ala Ile Gly Val Gly Ala Pro 20 25 30
【図１】実施例２におけるヒトカルシトニン誘導体と天
然型ヒトカルシトニンとの生物活性の測定の結果を示す
グラフ。
然型ヒトカルシトニンとの生物活性の測定の結果を示す
グラフ。
【図２】実施例３におけるヒトカルシトニン誘導体と天
然型サケカルシトニンとの生物活性（副作用）の測定の
結果（食餌摂取量）を示すグラフ。
然型サケカルシトニンとの生物活性（副作用）の測定の
結果（食餌摂取量）を示すグラフ。
【図３】実施例３におけるヒトカルシトニン誘導体と天
然型サケカルシトニンとの生物活性（副作用）の測定の
結果（体重）を示すグラフ。
然型サケカルシトニンとの生物活性（副作用）の測定の
結果（体重）を示すグラフ。
Claims (2)
- 【請求項１】天然型ヒトカルシトニンの１７位、２２位
および２４位から選ばれる少なくとも１つの位置および
任意に１５位のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基に置換
してなるヒトカルシトニン誘導体であって、その１５位
の置換がグルタミン酸残基への置換、その１７位の置換
がヒスチジン残基への置換、その２２位の置換がチロシ
ン残基への置換、およびその２４位の置換がアルギニン
残基への置換であることを特徴とするヒトカルシトニン
誘導体またはその薬学的に許容される塩。 - 【請求項２】天然型ヒトカルシトニンの１７位のアミノ
酸残基をヒスチジン残基に、２２位のアミノ酸残基をチ
ロシン残基に、および２４位のアミノ酸残基をアルギニ
ン残基に置換してなるヒトカルシトニン誘導体またはそ
の薬学的に許容される塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8056370A JPH09249698A (ja) | 1996-03-13 | 1996-03-13 | ヒトカルシトニン誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8056370A JPH09249698A (ja) | 1996-03-13 | 1996-03-13 | ヒトカルシトニン誘導体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09249698A true JPH09249698A (ja) | 1997-09-22 |
Family
ID=13025380
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8056370A Withdrawn JPH09249698A (ja) | 1996-03-13 | 1996-03-13 | ヒトカルシトニン誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09249698A (ja) |
-
1996
- 1996-03-13 JP JP8056370A patent/JPH09249698A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20030603 |