JPH09275977A - 新規リパーゼおよび洗浄剤組成物 - Google Patents
新規リパーゼおよび洗浄剤組成物Info
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- JPH09275977A JPH09275977A JP8096995A JP9699596A JPH09275977A JP H09275977 A JPH09275977 A JP H09275977A JP 8096995 A JP8096995 A JP 8096995A JP 9699596 A JP9699596 A JP 9699596A JP H09275977 A JPH09275977 A JP H09275977A
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- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
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- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
- C11D3/38627—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing lipase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 低温における洗浄、漂白剤配合の洗浄剤によ
る洗浄など現在および未来の洗浄に適した洗浄剤用酵素
として使用できるリパーゼの提供。該洗浄に適した洗浄
剤組成物の提供。該リパーゼの製造方法の提供。 【解決手段】 低温特性を有するリパーゼ、漂白剤存在
下の活性が高いリパーゼ、漂白剤存在下の安定性が高い
リパーゼ、高濃度ＬＡＳ存在下の活性が高いリパーゼ。
該リパーゼを含有する洗浄剤組成物。該リパーゼ生産菌
を培養することを特徴とする該リパーゼの製造方法。
る洗浄など現在および未来の洗浄に適した洗浄剤用酵素
として使用できるリパーゼの提供。該洗浄に適した洗浄
剤組成物の提供。該リパーゼの製造方法の提供。 【解決手段】 低温特性を有するリパーゼ、漂白剤存在
下の活性が高いリパーゼ、漂白剤存在下の安定性が高い
リパーゼ、高濃度ＬＡＳ存在下の活性が高いリパーゼ。
該リパーゼを含有する洗浄剤組成物。該リパーゼ生産菌
を培養することを特徴とする該リパーゼの製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規なリパーゼ、
それを生産する微生物、該リパーゼの製造方法、および
用途に関する。さらに詳しく言えば漂白剤の存在下また
は低温における洗浄剤溶液中で有効な活性を有するリパ
ーゼ、その製造方法、およびそのリパーゼを含む洗浄剤
組成物に関する。
それを生産する微生物、該リパーゼの製造方法、および
用途に関する。さらに詳しく言えば漂白剤の存在下また
は低温における洗浄剤溶液中で有効な活性を有するリパ
ーゼ、その製造方法、およびそのリパーゼを含む洗浄剤
組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】洗浄剤にリパーゼを配合して被洗浄物に
付着した脂質を分解除去し洗浄効率を向上出来ることは
従来より知られている。この用途は、アンドレー（H.An
dree）らによる「洗浄剤成分としてのリパーゼ」（Lipa
se as detergent components）と題する報文（Journal
of Applied Biochemistry, 2, 218-229 (1980)）等に記
載されている。好ましい洗浄剤配合用のリパーゼは洗浄
条件下の洗浄剤溶液中で充分にリパーゼ活性が機能する
ものである。通常の洗浄条件では洗浄液のｐＨがアルカ
リ側領域にあるため、アルカリ性ｐＨで機能するリパー
ゼが求められる。また、一般に脂質汚れは高温高アルカ
リ条件下では比較的除去されやすいが、日本のように低
温（水道水温度〜４０℃以下）の洗浄では充分に除去出
来ないことが知られている。
付着した脂質を分解除去し洗浄効率を向上出来ることは
従来より知られている。この用途は、アンドレー（H.An
dree）らによる「洗浄剤成分としてのリパーゼ」（Lipa
se as detergent components）と題する報文（Journal
of Applied Biochemistry, 2, 218-229 (1980)）等に記
載されている。好ましい洗浄剤配合用のリパーゼは洗浄
条件下の洗浄剤溶液中で充分にリパーゼ活性が機能する
ものである。通常の洗浄条件では洗浄液のｐＨがアルカ
リ側領域にあるため、アルカリ性ｐＨで機能するリパー
ゼが求められる。また、一般に脂質汚れは高温高アルカ
リ条件下では比較的除去されやすいが、日本のように低
温（水道水温度〜４０℃以下）の洗浄では充分に除去出
来ないことが知られている。
【０００３】従来より主として低温洗浄が行われている
日本はもとより、欧米においても洗浄温度は低温化する
傾向にあり、従って好ましい洗浄剤配合用リパーゼは低
温でも充分に機能するものである。また、好ましい洗浄
剤配合用リパーゼは、界面活性剤等の洗浄剤成分や、多
くの洗浄剤に含有されているプロテアーゼや漂白剤存在
下において阻害されることがなく、また洗浄時に十分機
能を発揮し、１回の洗浄で十分な効果を有するものであ
る。さらに、好ましい洗浄剤配合用リパーゼは、洗浄剤
に配合した状態で保存する時にも安定であるものであ
る。以上のような好ましい特性を有するリパーゼを配合
してなる脂質汚れに対して高い洗浄効果を有する洗浄剤
組成物の開発が望まれている。
日本はもとより、欧米においても洗浄温度は低温化する
傾向にあり、従って好ましい洗浄剤配合用リパーゼは低
温でも充分に機能するものである。また、好ましい洗浄
剤配合用リパーゼは、界面活性剤等の洗浄剤成分や、多
くの洗浄剤に含有されているプロテアーゼや漂白剤存在
下において阻害されることがなく、また洗浄時に十分機
能を発揮し、１回の洗浄で十分な効果を有するものであ
る。さらに、好ましい洗浄剤配合用リパーゼは、洗浄剤
に配合した状態で保存する時にも安定であるものであ
る。以上のような好ましい特性を有するリパーゼを配合
してなる脂質汚れに対して高い洗浄効果を有する洗浄剤
組成物の開発が望まれている。
【０００４】微生物の生産するリパーゼはシュードモナ
ス（Pseudomonas ）属、アルカリゲネス（Alcaligenes
）属、アクロモバクター（Achromobacter ）属、アシ
ネトバクター（Acinetobacter ）属、ムコール（Mucor
）属、キャンディダ（Candida）属、フミコーラ（Humi
cola）属、アスペルギルス（Aspergillus ）属等に由来
することが知られている。しかしながら、これらの菌株
から得られる大部分のリパーゼはその至適ｐＨが中性か
ら微アルカリ性にあるため、アルカリ性の洗浄剤溶液中
で充分にリパーゼが機能せず、また洗浄剤溶液中での安
定性も低い。さらには、アクロモバクター（Achromobac
ter ）属、ムコール（Mucor ）属、キャンディダ（Cand
ida ）属、フミコーラ（Humicola）属、アスペルギルス
（Aspergillus ）属の各リパーゼは、界面活性剤の共存
下においてその活性を強く阻害される。
ス（Pseudomonas ）属、アルカリゲネス（Alcaligenes
）属、アクロモバクター（Achromobacter ）属、アシ
ネトバクター（Acinetobacter ）属、ムコール（Mucor
）属、キャンディダ（Candida）属、フミコーラ（Humi
cola）属、アスペルギルス（Aspergillus ）属等に由来
することが知られている。しかしながら、これらの菌株
から得られる大部分のリパーゼはその至適ｐＨが中性か
ら微アルカリ性にあるため、アルカリ性の洗浄剤溶液中
で充分にリパーゼが機能せず、また洗浄剤溶液中での安
定性も低い。さらには、アクロモバクター（Achromobac
ter ）属、ムコール（Mucor ）属、キャンディダ（Cand
ida ）属、フミコーラ（Humicola）属、アスペルギルス
（Aspergillus ）属の各リパーゼは、界面活性剤の共存
下においてその活性を強く阻害される。
【０００５】WO87/00859号公報においてシュードモナス
（Pseudomonas ）属、アシネトバクター（Acinetobacte
r ）属のリパーゼの中には、アニオン系及びノニオン系
洗剤による洗浄試験において効果を発揮するものが有
り、それらのリパーゼは漂白剤入りノニオン系洗剤によ
る洗浄試験でも効果を有することが記載されているが、
漂白剤入りアニオン系洗剤による洗浄試験での効果につ
いては記載されていない。また米国特許US4,769,173 号
公報において漂白剤入りアニオン系洗剤溶液中で安定性
が高く同洗剤での洗浄試験で効果を有するリパーゼを含
む洗剤組成物が記載されているが、これらは３回繰り返
し洗浄して効果が出るものであり、その効果も小さい。
（Pseudomonas ）属、アシネトバクター（Acinetobacte
r ）属のリパーゼの中には、アニオン系及びノニオン系
洗剤による洗浄試験において効果を発揮するものが有
り、それらのリパーゼは漂白剤入りノニオン系洗剤によ
る洗浄試験でも効果を有することが記載されているが、
漂白剤入りアニオン系洗剤による洗浄試験での効果につ
いては記載されていない。また米国特許US4,769,173 号
公報において漂白剤入りアニオン系洗剤溶液中で安定性
が高く同洗剤での洗浄試験で効果を有するリパーゼを含
む洗剤組成物が記載されているが、これらは３回繰り返
し洗浄して効果が出るものであり、その効果も小さい。
【０００６】さらに特表平７−５０８６５９号公報には
漂白剤入りアニオン系洗剤による洗浄試験でも効果を示
すリパーゼが記載されている。しかし、その効果は、従
来型の漂白剤耐性の不十分な酵素と比較して効果がある
ということであり、充分なものではない。また、水道水
温度でそのまま洗浄するような地域、たとえば日本の場
合冬季の水道水温度が５℃以下になることもある。しか
しながら、前記例を含め、低温で充分洗浄効果を示すリ
パーゼについては知られておらず、そのようなリパーゼ
を含む洗浄剤組成物を用いた例もない。
漂白剤入りアニオン系洗剤による洗浄試験でも効果を示
すリパーゼが記載されている。しかし、その効果は、従
来型の漂白剤耐性の不十分な酵素と比較して効果がある
ということであり、充分なものではない。また、水道水
温度でそのまま洗浄するような地域、たとえば日本の場
合冬季の水道水温度が５℃以下になることもある。しか
しながら、前記例を含め、低温で充分洗浄効果を示すリ
パーゼについては知られておらず、そのようなリパーゼ
を含む洗浄剤組成物を用いた例もない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、現在及び将
来の洗浄において十分な洗浄効果を有するリパーゼを提
供することを目的とする。より具体的には、漂白剤が洗
浄剤に配合されている場合、または低温における洗浄の
際に、これまでに知られているリパーゼには無い優れた
洗浄効果を発揮してくれるリパーゼを提供することを目
的とする。また、そのリパーゼの製造方法及び用途を提
供することを目的とする。更にそのリパーゼを生産する
微生物を提供することを目的とする。
来の洗浄において十分な洗浄効果を有するリパーゼを提
供することを目的とする。より具体的には、漂白剤が洗
浄剤に配合されている場合、または低温における洗浄の
際に、これまでに知られているリパーゼには無い優れた
洗浄効果を発揮してくれるリパーゼを提供することを目
的とする。また、そのリパーゼの製造方法及び用途を提
供することを目的とする。更にそのリパーゼを生産する
微生物を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
達成すべく多数の微生物を分離、培養して検索した結
果、ＳＤ７１１株、ＳＤ７１２株、ＳＤ７１３株、ＳＤ
７１４株、ＳＤ７１５株、ＳＤ７１６株、ＳＤ７１７
株、ＳＤ７１８株に代表される菌株が、上記条件を満た
す新規なリパーゼを生産することを見いだした。更にそ
れらのリパーゼの全部もしくは一部に共通する性質であ
って、洗浄効果に寄与するものであり、既知のリパーゼ
には無い性質を発見し、本発明を完成させるに至った。
達成すべく多数の微生物を分離、培養して検索した結
果、ＳＤ７１１株、ＳＤ７１２株、ＳＤ７１３株、ＳＤ
７１４株、ＳＤ７１５株、ＳＤ７１６株、ＳＤ７１７
株、ＳＤ７１８株に代表される菌株が、上記条件を満た
す新規なリパーゼを生産することを見いだした。更にそ
れらのリパーゼの全部もしくは一部に共通する性質であ
って、洗浄効果に寄与するものであり、既知のリパーゼ
には無い性質を発見し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】すなわち本発明は以下のものを提供するも
のである。 ＜１＞ 至適温度が４０℃以上にあり、１℃での活性が
３０℃における活性の２０％以上あるリパーゼ。 ＜２＞ オリーブ油エマルジョンを基質とし、０．０２
％の直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム（ＬＡ
Ｓ）を含む溶液中で測定した場合の活性がＬＡＳ無添加
時の活性の２０％以上であるリパーゼであって、下記の
性質１）〜３）のうち少なくとも１つを有することを特
徴とするリパーゼ。 １）ＬＡＳ０．０４６％を含む２５℃の溶液中におい
て、過酸化水素０．５％存在下のパラニトロフェニルパ
ルミテートの分解速度が、過酸化水素非存在下の分解速
度の８０％以上である。 ２）ＬＡＳ０．０５％, 過酸化水素０．５５％を含む溶
液中で２５℃, １時間保持したとき、保持前に比べ５０
％以上の活性を有する。 ３）ＬＡＳ０．２％を含む２５℃の溶液中におけるパラ
ニトロフェニルパルミテートの分解速度が、ＬＡＳ０．
０２％を含む溶液中における分解速度の５０％以上であ
る。 ＜３＞ 下記性質１）および／または２）を有する細菌
由来のリパーゼ。 １）ＬＡＳ０．０４６％を含む２５℃の溶液中におい
て、過酸化水素０．５％存在下のパラニトロフェニルパ
ルミテートの分解速度が、過酸化水素非存在下の分解速
度の８０％以上である。 ２）ＬＡＳ０．０５％, 過酸化水素０．５５％を含む溶
液中で２５℃, １時間保持したとき、保持前に比べ５０
％以上の活性を有する。 ＜４＞ 至適ｐＨが１１以上であるリパーゼ。
のである。 ＜１＞ 至適温度が４０℃以上にあり、１℃での活性が
３０℃における活性の２０％以上あるリパーゼ。 ＜２＞ オリーブ油エマルジョンを基質とし、０．０２
％の直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム（ＬＡ
Ｓ）を含む溶液中で測定した場合の活性がＬＡＳ無添加
時の活性の２０％以上であるリパーゼであって、下記の
性質１）〜３）のうち少なくとも１つを有することを特
徴とするリパーゼ。 １）ＬＡＳ０．０４６％を含む２５℃の溶液中におい
て、過酸化水素０．５％存在下のパラニトロフェニルパ
ルミテートの分解速度が、過酸化水素非存在下の分解速
度の８０％以上である。 ２）ＬＡＳ０．０５％, 過酸化水素０．５５％を含む溶
液中で２５℃, １時間保持したとき、保持前に比べ５０
％以上の活性を有する。 ３）ＬＡＳ０．２％を含む２５℃の溶液中におけるパラ
ニトロフェニルパルミテートの分解速度が、ＬＡＳ０．
０２％を含む溶液中における分解速度の５０％以上であ
る。 ＜３＞ 下記性質１）および／または２）を有する細菌
由来のリパーゼ。 １）ＬＡＳ０．０４６％を含む２５℃の溶液中におい
て、過酸化水素０．５％存在下のパラニトロフェニルパ
ルミテートの分解速度が、過酸化水素非存在下の分解速
度の８０％以上である。 ２）ＬＡＳ０．０５％, 過酸化水素０．５５％を含む溶
液中で２５℃, １時間保持したとき、保持前に比べ５０
％以上の活性を有する。 ＜４＞ 至適ｐＨが１１以上であるリパーゼ。
【００１０】＜５＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜
＜４＞のいずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは8.5 〜12の範囲内にある。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は45〜65℃の範囲内にある。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は30,000±3,500 の範囲内である。 ＜６＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜＜４＞のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約54℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は２９，５００±３，０００である。
＜４＞のいずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは8.5 〜12の範囲内にある。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は45〜65℃の範囲内にある。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は30,000±3,500 の範囲内である。 ＜６＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜＜４＞のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約54℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は２９，５００±３，０００である。
【００１１】＜７＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜
＜４＞のいずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約50℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は２９，５００±３，０００である。 ＜８＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜＜４＞のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約10〜11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約52℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。
＜４＞のいずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約50℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は２９，５００±３，０００である。 ＜８＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜＜４＞のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約10〜11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約52℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。
【００１２】＜９＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜
＜４＞のいずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約51℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。 ＜１０＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜＜４＞のい
ずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約9 〜10.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約60℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，５００±３，０００である。
＜４＞のいずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約51℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。 ＜１０＞ 下記の性質を有する前記＜１＞〜＜４＞のい
ずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約9 〜10.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約60℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，５００±３，０００である。
【００１３】＜１１＞ 下記の性質を有する前記＜１＞
〜＜４＞のいずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約 9.5〜11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約55℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。 ＜１２＞ 下記の性質を有する前記＜１＞記載のリパー
ゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約10〜10.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約46℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，５００±３，０００である。
〜＜４＞のいずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約 9.5〜11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約55℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。 ＜１２＞ 下記の性質を有する前記＜１＞記載のリパー
ゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約10〜10.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約46℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，５００±３，０００である。
【００１４】＜１３＞ シュードモナス（Pseudomonas
）属細菌またはアシネトバクター（Acinetobacter ）
属細菌の培養物より得られる前記＜１＞〜＜１２＞のい
ずれか記載のリパーゼ。 ＜１４＞ シュードモナス（Pseudomonas ）属細菌がシ
ュードモナス・ステュツエリ（Pseudomonas stutzer
i）、または少なくともＳＤ７１４〜７１７のいずれか
一つとＤＮＡハイブリダイゼーションにおいて７０％以
上のＤＮＡ相同性を示す細菌である前記＜１３＞記載の
リパーゼ。 ＜１５＞ アシネトバクター（Acinetobacter ）属細菌
がアシネトバクター・バウマニイ（Acinetobacter baum
anni）である前記＜１３＞記載のリパーゼ。 ＜１６＞ シュードモナス・ステュツエリ（Pseudomona
s stutzeri）ＳＤ７１１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４
４）、ＳＤ７１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４５）、Ｓ
Ｄ７１３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４６）、シュードモ
ナスｓｐ．（Pseudomonas sp. ）ＳＤ７１４株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５４４７）、ＳＤ７１５株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１５４４８）、ＳＤ７１６株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４
９）、ＳＤ７１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４５０）、ま
たはアシネトバクター・バウマニイ（Acinetobacter ba
umanni）ＳＤ７１８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５５４）の
いずれかの培養物より得ることのできる前記＜１＞〜＜
１２＞のいずれか記載のリパーゼ。 ＜１７＞ 前記＜１＞〜＜１１＞のいずれか記載のリパ
ーゼを生産するシュードモナス（Pseudomonas ）属細
菌。 ＜１８＞ 少なくともＳＤ７１４〜７１７のいずれか一
つとＤＮＡハイブリダイゼーションにおいて７０％以上
のＤＮＡ相同性を示すことを特徴とする前記＜１７＞記
載のシュードモナス（Pseudomonas ）属細菌。 ＜１９＞ 前記＜１＞または＜１２＞記載のリパーゼを
生産するアシネトバクター（Acinetobacter ）属細菌。 ＜２０＞ シュードモナス・ステュツエリ（Pseudomona
s stutzeri）ＳＤ７１１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４
４）、ＳＤ７１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４５）、Ｓ
Ｄ７１３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４６）、もしくはシ
ュードモナスｓｐ．（Pseudomonas sp. ）ＳＤ７１４株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４７）、ＳＤ７１５株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５４４８）、ＳＤ７１６株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１５４４９）、ＳＤ７１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４５
０）、またはこれら７株のいずれかと菌学的に同等な菌
株もしくはそれらの変異株。
）属細菌またはアシネトバクター（Acinetobacter ）
属細菌の培養物より得られる前記＜１＞〜＜１２＞のい
ずれか記載のリパーゼ。 ＜１４＞ シュードモナス（Pseudomonas ）属細菌がシ
ュードモナス・ステュツエリ（Pseudomonas stutzer
i）、または少なくともＳＤ７１４〜７１７のいずれか
一つとＤＮＡハイブリダイゼーションにおいて７０％以
上のＤＮＡ相同性を示す細菌である前記＜１３＞記載の
リパーゼ。 ＜１５＞ アシネトバクター（Acinetobacter ）属細菌
がアシネトバクター・バウマニイ（Acinetobacter baum
anni）である前記＜１３＞記載のリパーゼ。 ＜１６＞ シュードモナス・ステュツエリ（Pseudomona
s stutzeri）ＳＤ７１１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４
４）、ＳＤ７１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４５）、Ｓ
Ｄ７１３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４６）、シュードモ
ナスｓｐ．（Pseudomonas sp. ）ＳＤ７１４株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５４４７）、ＳＤ７１５株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１５４４８）、ＳＤ７１６株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４
９）、ＳＤ７１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４５０）、ま
たはアシネトバクター・バウマニイ（Acinetobacter ba
umanni）ＳＤ７１８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５５４）の
いずれかの培養物より得ることのできる前記＜１＞〜＜
１２＞のいずれか記載のリパーゼ。 ＜１７＞ 前記＜１＞〜＜１１＞のいずれか記載のリパ
ーゼを生産するシュードモナス（Pseudomonas ）属細
菌。 ＜１８＞ 少なくともＳＤ７１４〜７１７のいずれか一
つとＤＮＡハイブリダイゼーションにおいて７０％以上
のＤＮＡ相同性を示すことを特徴とする前記＜１７＞記
載のシュードモナス（Pseudomonas ）属細菌。 ＜１９＞ 前記＜１＞または＜１２＞記載のリパーゼを
生産するアシネトバクター（Acinetobacter ）属細菌。 ＜２０＞ シュードモナス・ステュツエリ（Pseudomona
s stutzeri）ＳＤ７１１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４
４）、ＳＤ７１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４５）、Ｓ
Ｄ７１３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４６）、もしくはシ
ュードモナスｓｐ．（Pseudomonas sp. ）ＳＤ７１４株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４７）、ＳＤ７１５株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５４４８）、ＳＤ７１６株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１５４４９）、ＳＤ７１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４５
０）、またはこれら７株のいずれかと菌学的に同等な菌
株もしくはそれらの変異株。
【００１５】＜２１＞ 前記＜１７＞〜＜２０＞のいず
れか記載の微生物を培養することを特徴とするリパーゼ
の製造方法。 ＜２２＞ 前記＜１＞記載のリパーゼを含むことを特徴
とする洗浄剤組成物。 ＜２３＞ 前記＜２＞または＜３＞記載のリパーゼを含
むことを特徴とする洗浄剤組成物。 ＜２４＞ 前記＜４＞記載のリパーゼを含むことを特徴
とする洗浄剤組成物。 ＜２５＞ 前記＜５＞〜＜１２＞のいずれか記載のリパ
ーゼを含むことを特徴とする洗浄剤組成物。 ＜２６＞ 前記＜１３＞〜＜１６＞のいずれか記載のリ
パーゼを含むことを特徴とする洗浄剤組成物。 ＜２７＞ 漂白剤を含むことを特徴とする前記＜２２＞
〜＜２６＞のいずれか記載の洗浄剤組成物。
れか記載の微生物を培養することを特徴とするリパーゼ
の製造方法。 ＜２２＞ 前記＜１＞記載のリパーゼを含むことを特徴
とする洗浄剤組成物。 ＜２３＞ 前記＜２＞または＜３＞記載のリパーゼを含
むことを特徴とする洗浄剤組成物。 ＜２４＞ 前記＜４＞記載のリパーゼを含むことを特徴
とする洗浄剤組成物。 ＜２５＞ 前記＜５＞〜＜１２＞のいずれか記載のリパ
ーゼを含むことを特徴とする洗浄剤組成物。 ＜２６＞ 前記＜１３＞〜＜１６＞のいずれか記載のリ
パーゼを含むことを特徴とする洗浄剤組成物。 ＜２７＞ 漂白剤を含むことを特徴とする前記＜２２＞
〜＜２６＞のいずれか記載の洗浄剤組成物。
【００１６】以下本発明について詳細に説明する （リパーゼ生産微生物）本発明のリパーゼを製造するた
めに使用する微生物は、特に限定されない。この様な微
生物は、保存微生物株中から、または自然界から新たに
分類した微生物中から選択することが出来る。またこれ
らの微生物の自然または人工変異株であっても、後記の
性質を有するリパーゼの生産能を有する限り、当然包含
されるものである。
めに使用する微生物は、特に限定されない。この様な微
生物は、保存微生物株中から、または自然界から新たに
分類した微生物中から選択することが出来る。またこれ
らの微生物の自然または人工変異株であっても、後記の
性質を有するリパーゼの生産能を有する限り、当然包含
されるものである。
【００１７】本発明のリパーゼを生産するシュードモナ
ス（Pseudomonas ）属に属する菌株の例として、本発明
者らが土壌より分離した、ＳＤ７１１〜ＳＤ７１７株が
挙げられる。これらの株の菌学的性質について、文献
（ Bergey's Manual of Determinative Bacteriology
Ninth Edition (1994) Bergey's Manual of Sy
stematic Bacteriology Vol.1 (1984)）を参考にして本
菌と類似のシュードモナス・ステュツエリ（Pseudomona
s stutzeri）、シュードモナス・メンドシナ（Pseudomo
nas mendocina ）、シュードモナス・アルカリゲネス
（Pseudomonas alkaligenes ）、シュードモナス・シュ
ードアルカリゲネス（Pseudomonas pseudoalkaligenes
）と比較して表１に記載した。
ス（Pseudomonas ）属に属する菌株の例として、本発明
者らが土壌より分離した、ＳＤ７１１〜ＳＤ７１７株が
挙げられる。これらの株の菌学的性質について、文献
（ Bergey's Manual of Determinative Bacteriology
Ninth Edition (1994) Bergey's Manual of Sy
stematic Bacteriology Vol.1 (1984)）を参考にして本
菌と類似のシュードモナス・ステュツエリ（Pseudomona
s stutzeri）、シュードモナス・メンドシナ（Pseudomo
nas mendocina ）、シュードモナス・アルカリゲネス
（Pseudomonas alkaligenes ）、シュードモナス・シュ
ードアルカリゲネス（Pseudomonas pseudoalkaligenes
）と比較して表１に記載した。
【００１８】
【表１】
【００１９】表１に示したようにＳＤ７１１〜ＳＤ７１
７株は極鞭毛を有する非発酵性のグラム陰性桿菌で、キ
ノン系がQ-9 であることからシュードモナス（Pseudomo
nas）属に属する細菌であり、鞭毛が単毛であり、蛍光
色素を生成しないことから、これらは、シュードモナス
・ステュツエリ（Pseudomonas stutzeri）、シュードモ
ナス・メンドシナ（Pseudomonas mendocina ）、シュー
ドモナス・アルカリゲネス（Pseudomonas alkaligenes
）、シュードモナス・シュードアルカリゲネス（Pseud
omonas pseudoalkaligenes ）、あるいはこれらの近縁
種であると考えられる。ＳＤ７１１〜ＳＤ７１７株の性
状はシュードモナス・ステュツエリ（Pseudomonas stut
zeri）、シュードモナス・メンドシナ（Pseudomonas me
ndocina ）、シュードモナス・アルカリゲネス（Pseudo
monas alkaligenes ）、シュードモナス・シュードアル
カリゲネス（Pseudomonas pseudoalkaligenes ）これら
いずれの性状とも完全に一致するものはない。しかし、
ＳＤ７１１株は、シュードモナス・ステュツエリ（Pseu
domonas stutzeri）およびシュードモナス・メンドシナ
（Pseudomonas mendocina ）に比較的近い性状を示し、
澱粉分解が陽性であることからシュードモナス・ステュ
ツエリ（Pseudomonas stutzeri）と同定した。ＳＤ７１
２、ＳＤ７１３株は、澱粉分解が陽性であり、シュード
モナス・ステュツエリ（Pseudomonas stutzeri）に比較
的近い性状を示したことからシュードモナス・ステュツ
エリ（Pseudomonas stutzeri）と同定した。ＳＤ７１４
〜ＳＤ７１７株は、シュードモナス・ステュツエリ（Ps
eudomonas stutzeri）、シュードモナス・メンドシナ
（Pseudomonas mendocina ）、シュードモナス・アルカ
リゲネス（Pseudomonas alkaligenes ）、シュードモナ
ス・シュードアルカリゲネス（Pseudomonas pseudoalka
ligenes ）、これら４種の中ではシュードモナス・ステ
ュツエリ（Pseudomonas stutzeri）に最も近い性状を示
すが、澱粉分解が陰性であることからシュードモナス・
ステュツエリ（Pseudomonas stutzeri）の近縁種と同定
した。なお、ＳＤ７１４〜ＳＤ７１７に関してＤＮＡ相
同性をＤＮＡハイブリダイゼーションにより調べた結
果、すべて互いに７０％以上であった。一般に７０％以
上が同種とされている。本発明のリパーゼを生産する菌
は好ましくは、少なくともＳＤ７１４〜７１７のいずれ
か一つとＤＮＡハイブリダイゼーションにおいて７０％
以上のＤＮＡ相同性を示す菌である。
７株は極鞭毛を有する非発酵性のグラム陰性桿菌で、キ
ノン系がQ-9 であることからシュードモナス（Pseudomo
nas）属に属する細菌であり、鞭毛が単毛であり、蛍光
色素を生成しないことから、これらは、シュードモナス
・ステュツエリ（Pseudomonas stutzeri）、シュードモ
ナス・メンドシナ（Pseudomonas mendocina ）、シュー
ドモナス・アルカリゲネス（Pseudomonas alkaligenes
）、シュードモナス・シュードアルカリゲネス（Pseud
omonas pseudoalkaligenes ）、あるいはこれらの近縁
種であると考えられる。ＳＤ７１１〜ＳＤ７１７株の性
状はシュードモナス・ステュツエリ（Pseudomonas stut
zeri）、シュードモナス・メンドシナ（Pseudomonas me
ndocina ）、シュードモナス・アルカリゲネス（Pseudo
monas alkaligenes ）、シュードモナス・シュードアル
カリゲネス（Pseudomonas pseudoalkaligenes ）これら
いずれの性状とも完全に一致するものはない。しかし、
ＳＤ７１１株は、シュードモナス・ステュツエリ（Pseu
domonas stutzeri）およびシュードモナス・メンドシナ
（Pseudomonas mendocina ）に比較的近い性状を示し、
澱粉分解が陽性であることからシュードモナス・ステュ
ツエリ（Pseudomonas stutzeri）と同定した。ＳＤ７１
２、ＳＤ７１３株は、澱粉分解が陽性であり、シュード
モナス・ステュツエリ（Pseudomonas stutzeri）に比較
的近い性状を示したことからシュードモナス・ステュツ
エリ（Pseudomonas stutzeri）と同定した。ＳＤ７１４
〜ＳＤ７１７株は、シュードモナス・ステュツエリ（Ps
eudomonas stutzeri）、シュードモナス・メンドシナ
（Pseudomonas mendocina ）、シュードモナス・アルカ
リゲネス（Pseudomonas alkaligenes ）、シュードモナ
ス・シュードアルカリゲネス（Pseudomonas pseudoalka
ligenes ）、これら４種の中ではシュードモナス・ステ
ュツエリ（Pseudomonas stutzeri）に最も近い性状を示
すが、澱粉分解が陰性であることからシュードモナス・
ステュツエリ（Pseudomonas stutzeri）の近縁種と同定
した。なお、ＳＤ７１４〜ＳＤ７１７に関してＤＮＡ相
同性をＤＮＡハイブリダイゼーションにより調べた結
果、すべて互いに７０％以上であった。一般に７０％以
上が同種とされている。本発明のリパーゼを生産する菌
は好ましくは、少なくともＳＤ７１４〜７１７のいずれ
か一つとＤＮＡハイブリダイゼーションにおいて７０％
以上のＤＮＡ相同性を示す菌である。
【００２０】また、本発明のリパーゼを生産するアシネ
トバクター（Acinetobacter ）属に属する菌株の例とし
て、本発明者らが土壌より分離したＳＤ７１８株が挙げ
られる。このＳＤ７１８株の菌学的性質について、文献
（ Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Vo
l.1(1984) 、 Bergey's Manual of DeterminativeBac
teriology Ninth Edition (1994) 、 P.J.M.Bouvet a
nd P.A.D.Grimont ：Int.J.Syst.Bacteriol.,36,228(19
86) ）を参考にして本菌と類似のアシネトバクター・バ
ウマニイ（Acinetobacter baumanni）、アシネトバクタ
ー・ヘモリティカス（Acinetobacter haemolyticus）と
比較して表２に記載した。
トバクター（Acinetobacter ）属に属する菌株の例とし
て、本発明者らが土壌より分離したＳＤ７１８株が挙げ
られる。このＳＤ７１８株の菌学的性質について、文献
（ Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Vo
l.1(1984) 、 Bergey's Manual of DeterminativeBac
teriology Ninth Edition (1994) 、 P.J.M.Bouvet a
nd P.A.D.Grimont ：Int.J.Syst.Bacteriol.,36,228(19
86) ）を参考にして本菌と類似のアシネトバクター・バ
ウマニイ（Acinetobacter baumanni）、アシネトバクタ
ー・ヘモリティカス（Acinetobacter haemolyticus）と
比較して表２に記載した。
【００２１】
【表２】 上に示したように形態観察、生理的性状試験、およびキ
ノン系から、同定した結果、ＳＤ７１８株はアシネトバ
クター・バウマニイ（Acinetobacter baumanni）と同定
された。
ノン系から、同定した結果、ＳＤ７１８株はアシネトバ
クター・バウマニイ（Acinetobacter baumanni）と同定
された。
【００２２】ＳＤ７１１、ＳＤ７１２、ＳＤ７１３、Ｓ
Ｄ７１４、ＳＤ７１５、ＳＤ７１６、ＳＤ７１７、ＳＤ
７１８株は工業技術院生命工学工業技術研究所にそれぞ
れFERM P-15444,FERM P-15445,FERM P-15446,FERM P-15
447,FERM P-15448,FERM P-15449,FERM P-15450,FERM P-
15554 として寄託されている。本発明のリパーゼを製造
するために使用する微生物は、前記例のように、シュー
ドモナス（Pseudomonas ）属のシュードモナス・ステュ
ツエリ（Pseudomonasstutzeri）、シュードモナス sp.
(Pseudomonas sp.）、アシネトバクター（Acinetobacte
r)属のアシネトバクター・バウマニイ（Acinetobacter
baumanni）などが挙げられ、特定の種や属に限定される
ものではない。
Ｄ７１４、ＳＤ７１５、ＳＤ７１６、ＳＤ７１７、ＳＤ
７１８株は工業技術院生命工学工業技術研究所にそれぞ
れFERM P-15444,FERM P-15445,FERM P-15446,FERM P-15
447,FERM P-15448,FERM P-15449,FERM P-15450,FERM P-
15554 として寄託されている。本発明のリパーゼを製造
するために使用する微生物は、前記例のように、シュー
ドモナス（Pseudomonas ）属のシュードモナス・ステュ
ツエリ（Pseudomonasstutzeri）、シュードモナス sp.
(Pseudomonas sp.）、アシネトバクター（Acinetobacte
r)属のアシネトバクター・バウマニイ（Acinetobacter
baumanni）などが挙げられ、特定の種や属に限定される
ものではない。
【００２３】また上記菌株に自然突然変異が起こること
により、または突然変異を起こさせることにより、上記
菌株が生産する後記の性質を有するリパーゼを生産する
変異株を得ることができ、また遺伝子操作によっても本
発明のリパーゼを生産する微生物を得ることができ、本
発明によるリパーゼ生産菌として用いることができる。
変異株を調製する慣用の方法としては、例えば原菌株を
紫外線照射あるいはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジン等の薬剤による人工突然変異処理を施
して、オリーブオイル等の油を含む寒天培地に広げ、生
育してくる菌株の中からコロニーのまわりに形成される
クリアゾーンが、より大きいコロニーを選抜し、生産性
の優れた菌株を選別する方法がある。
により、または突然変異を起こさせることにより、上記
菌株が生産する後記の性質を有するリパーゼを生産する
変異株を得ることができ、また遺伝子操作によっても本
発明のリパーゼを生産する微生物を得ることができ、本
発明によるリパーゼ生産菌として用いることができる。
変異株を調製する慣用の方法としては、例えば原菌株を
紫外線照射あるいはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジン等の薬剤による人工突然変異処理を施
して、オリーブオイル等の油を含む寒天培地に広げ、生
育してくる菌株の中からコロニーのまわりに形成される
クリアゾーンが、より大きいコロニーを選抜し、生産性
の優れた菌株を選別する方法がある。
【００２４】遺伝子操作による方法としては、例えば、
該リパーゼをコードするＤＮＡ配列が宿主生物での酵素
発現機能を有する適当なプロモーター、オペレーター及
びターミネーターＤＮＡ配列と共に、宿主生物中で複製
するＤＮＡベクターに挿入されたプラスミドを用いて形
質転換された宿主細胞、または該リパーゼをコードする
ＤＮＡ配列が宿主生物での酵素発現機能を有する適当な
プロモーター、オペレーター及びターミネーターＤＮＡ
配列と共に、宿主細胞ＤＮＡにインテグレーションされ
ることで形質転換された宿主細胞を、リパーゼの発現で
きる条件のもとに培養し、さらにリパーゼを培養液から
回収する方法が挙げられる。また、本発明のリパーゼ
は、該リパーゼをコードするＤＮＡ配列等を元に得られ
る該リパーゼのアミノ酸配列に関する知見を元に、従来
のリパーゼのＤＮＡを改変するタンパク質工学の手法に
よって生産されるものであってもよい。本発明のリパー
ゼをコードするＤＮＡ断片の取得のためには、例えば本
発明の微生物からのＤＮＡまたはゲノムライブラリィを
分離源とし、本発明のリパーゼのアミノ酸配列もしくは
既知のリパーゼのアミノ酸配列に基づいて合成されたオ
リゴヌクレオチドをプローブとして目的のＤＮＡ断片を
特定するか、または酵素活性を発現するクローンを選択
するか、または該リパーゼに対する抗体と反応する蛋白
質を生産するクローンを選択するといった常法によって
行うことができる。
該リパーゼをコードするＤＮＡ配列が宿主生物での酵素
発現機能を有する適当なプロモーター、オペレーター及
びターミネーターＤＮＡ配列と共に、宿主生物中で複製
するＤＮＡベクターに挿入されたプラスミドを用いて形
質転換された宿主細胞、または該リパーゼをコードする
ＤＮＡ配列が宿主生物での酵素発現機能を有する適当な
プロモーター、オペレーター及びターミネーターＤＮＡ
配列と共に、宿主細胞ＤＮＡにインテグレーションされ
ることで形質転換された宿主細胞を、リパーゼの発現で
きる条件のもとに培養し、さらにリパーゼを培養液から
回収する方法が挙げられる。また、本発明のリパーゼ
は、該リパーゼをコードするＤＮＡ配列等を元に得られ
る該リパーゼのアミノ酸配列に関する知見を元に、従来
のリパーゼのＤＮＡを改変するタンパク質工学の手法に
よって生産されるものであってもよい。本発明のリパー
ゼをコードするＤＮＡ断片の取得のためには、例えば本
発明の微生物からのＤＮＡまたはゲノムライブラリィを
分離源とし、本発明のリパーゼのアミノ酸配列もしくは
既知のリパーゼのアミノ酸配列に基づいて合成されたオ
リゴヌクレオチドをプローブとして目的のＤＮＡ断片を
特定するか、または酵素活性を発現するクローンを選択
するか、または該リパーゼに対する抗体と反応する蛋白
質を生産するクローンを選択するといった常法によって
行うことができる。
【００２５】（リパーゼ製造方法）本発明のリパーゼ
は、本発明のリパーゼ生産能を有する微生物を培養して
得られた培養物中から得られる。例えばシュードモナス
（Pseudomonas ）属またはアシネトバクター（Acinetob
acter ）属に属する本リパーゼ生産菌の培養物中から得
られる。培地の栄養源としては、通常培養に用いられて
いるものが広く利用できる。炭素源としては同化できる
炭素化合物またはこれを含有するものであればよく、例
えば油脂、コーンスティープリカー、脂肪酸エステル系
界面活性剤などが用いられる。窒素源としては同化可能
な窒素化合物またはこれを含有するものであればよく、
例えばアンモニウム塩、硝酸塩、大豆粉、肉エキス、コ
ーンスティープリカー、ファーマメディアなどが用いら
れる。また、無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウム
塩などの塩類が使用される。
は、本発明のリパーゼ生産能を有する微生物を培養して
得られた培養物中から得られる。例えばシュードモナス
（Pseudomonas ）属またはアシネトバクター（Acinetob
acter ）属に属する本リパーゼ生産菌の培養物中から得
られる。培地の栄養源としては、通常培養に用いられて
いるものが広く利用できる。炭素源としては同化できる
炭素化合物またはこれを含有するものであればよく、例
えば油脂、コーンスティープリカー、脂肪酸エステル系
界面活性剤などが用いられる。窒素源としては同化可能
な窒素化合物またはこれを含有するものであればよく、
例えばアンモニウム塩、硝酸塩、大豆粉、肉エキス、コ
ーンスティープリカー、ファーマメディアなどが用いら
れる。また、無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウム
塩などの塩類が使用される。
【００２６】培養条件は培地組成により多少異なるが、
生産の目的である本リパーゼの生産が可能な条件を選択
する。シュードモナス属細菌の場合は通常、培養温度は
５〜４２℃、好ましくは１０〜３０℃の範囲であり、培
養時間は６時間から３００時間程度であり、本リパーゼ
の生産が最高に達したときに培養を終了するのが望まし
い。培地のｐＨは７〜１２が好ましく、８〜１０が本リ
パーゼ生産に好適である。また、アシネトバクター（Ac
inetobacter ）属細菌の場合は通常、培養温度は１０〜
４０℃、好ましくは２０〜３７℃の範囲であり、培養時
間は８時間から１００時間程度であり、本リパーゼの生
産が最高に達したときに培養を終了するのが望ましい。
培地のｐＨは５〜１２が好ましく、７〜９が本リパーゼ
生産に好適である。この様な培養により、目的とするリ
パーゼは主として菌体外（培養液中）に得られる。
生産の目的である本リパーゼの生産が可能な条件を選択
する。シュードモナス属細菌の場合は通常、培養温度は
５〜４２℃、好ましくは１０〜３０℃の範囲であり、培
養時間は６時間から３００時間程度であり、本リパーゼ
の生産が最高に達したときに培養を終了するのが望まし
い。培地のｐＨは７〜１２が好ましく、８〜１０が本リ
パーゼ生産に好適である。また、アシネトバクター（Ac
inetobacter ）属細菌の場合は通常、培養温度は１０〜
４０℃、好ましくは２０〜３７℃の範囲であり、培養時
間は８時間から１００時間程度であり、本リパーゼの生
産が最高に達したときに培養を終了するのが望ましい。
培地のｐＨは５〜１２が好ましく、７〜９が本リパーゼ
生産に好適である。この様な培養により、目的とするリ
パーゼは主として菌体外（培養液中）に得られる。
【００２７】（リパーゼの分離精製法）この様にして得
られた培養液からの本リパーゼの採取は、リパーゼを採
取するための常法にしたがって分離、精製することによ
り行うことが出来る。すなわち、第一ステップとして培
養液から濾過法や遠心分離法などの公知の適当な方法に
より菌体や培地固形物を分離して上澄液または濾液を取
得し、これらの液を濃縮し、または濃縮することなく次
のステップに進む。第二ステップとしては、可溶性塩類
を添加して酵素を沈澱させる塩析法、親水性有機溶剤を
添加し酵素あるいは夾雑物を沈澱させる有機溶剤沈澱
法、イオン交換樹脂等を用いた吸着脱離法、ゲル濾過
法、安定補助剤を加えてまたは安定補助剤なしに噴霧乾
燥する方法、凍結乾燥法、などの分離もしくは精製手段
を単独または複数組み合わせて用いることができる。こ
うして本発明のリパーゼを得ることができる。
られた培養液からの本リパーゼの採取は、リパーゼを採
取するための常法にしたがって分離、精製することによ
り行うことが出来る。すなわち、第一ステップとして培
養液から濾過法や遠心分離法などの公知の適当な方法に
より菌体や培地固形物を分離して上澄液または濾液を取
得し、これらの液を濃縮し、または濃縮することなく次
のステップに進む。第二ステップとしては、可溶性塩類
を添加して酵素を沈澱させる塩析法、親水性有機溶剤を
添加し酵素あるいは夾雑物を沈澱させる有機溶剤沈澱
法、イオン交換樹脂等を用いた吸着脱離法、ゲル濾過
法、安定補助剤を加えてまたは安定補助剤なしに噴霧乾
燥する方法、凍結乾燥法、などの分離もしくは精製手段
を単独または複数組み合わせて用いることができる。こ
うして本発明のリパーゼを得ることができる。
【００２８】（酵素力価の測定）リパーゼ活性（酵素力
価）の測定は、本発明においてはオリーブ油／ポリビニ
ルアルコールエマルジョンを基質とする測定法を用いて
実施した。具体的には以下の通りである。オリーブ油／
ポリビニルアルコールエマルジョンとしては、ポリビニ
ルアルコール２％水溶液（ポバールPVA117（( 株) クラ
レ商品名）：ポバールPVA205（(株) クラレ商品名）＝
9:1 ）100gに10g のオリーブ油を加え、氷冷しながら3
0,000rpm 、10分間ホモジナイズしたものを用いた。こ
のエマルジョン3ml 、３６．７ｍＭ塩化ナトリウム／１
３．８ｍＭ塩化カルシウム溶液30ml、酵素液0.1ml の混
合物を30℃にて反応せしめ、200mM 水酸化ナトリウム水
溶液を用いたｐＨスタット滴定法によりｐＨを９に保っ
た。このとき１分間に１マイクロモルの水酸化ナトリウ
ムが滴定される速度を与える酵素量を１ユニット（１
Ｕ）とした。
価）の測定は、本発明においてはオリーブ油／ポリビニ
ルアルコールエマルジョンを基質とする測定法を用いて
実施した。具体的には以下の通りである。オリーブ油／
ポリビニルアルコールエマルジョンとしては、ポリビニ
ルアルコール２％水溶液（ポバールPVA117（( 株) クラ
レ商品名）：ポバールPVA205（(株) クラレ商品名）＝
9:1 ）100gに10g のオリーブ油を加え、氷冷しながら3
0,000rpm 、10分間ホモジナイズしたものを用いた。こ
のエマルジョン3ml 、３６．７ｍＭ塩化ナトリウム／１
３．８ｍＭ塩化カルシウム溶液30ml、酵素液0.1ml の混
合物を30℃にて反応せしめ、200mM 水酸化ナトリウム水
溶液を用いたｐＨスタット滴定法によりｐＨを９に保っ
た。このとき１分間に１マイクロモルの水酸化ナトリウ
ムが滴定される速度を与える酵素量を１ユニット（１
Ｕ）とした。
【００２９】（本発明の酵素の性質［１］）本発明のリ
パーゼは、既知のリパーゼには無い優れた洗浄効果を示
すが、それと密接に関連して次の１）〜４）のうちの少
なくとも一つの条件を充たし、好ましくは２つ以上、３
つ以上の条件を充たし、より好ましくは１）〜４）すべ
ての条件を充たす。また、好ましくは５）の条件も充た
す。 １）低温特性 至適温度が４０℃以上にあり、１℃での活性が３０℃に
おける活性の２０％以上ある。なお、好ましくは３０％
以上である。 ２）漂白剤存在下の活性 直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム（ＬＡＳ）
０．０４６％を含む２５℃の溶液中において、過酸化水
素０．５％存在下のパラニトロフェニルパルミテートの
分解速度が、過酸化水素非存在下の分解速度の８０％以
上である。 ３）漂白剤存在下の安定性 ＬＡＳ０．０５％, 過酸化水素０．５５％を含む溶液中
で２５℃, １時間保持したとき、保持前に比べ５０％以
上の活性を有する。なお、好ましくは６０％以上、より
好ましくは７０％以上である。 ４）高濃度ＬＡＳ存在下の活性 ＬＡＳ０．２％を含む２５℃の溶液中におけるパラニト
ロフェニルパルミテートの分解速度が、ＬＡＳ０．０２
％を含む溶液中における分解速度の５０％以上である。 ５）ＬＡＳの有無による活性の違い オリーブ油エマルジョンを基質とし、０．０２％のＬＡ
Ｓを含む溶液中で測定した場合の活性がＬＡＳ無添加時
の活性の２０％以上である。
パーゼは、既知のリパーゼには無い優れた洗浄効果を示
すが、それと密接に関連して次の１）〜４）のうちの少
なくとも一つの条件を充たし、好ましくは２つ以上、３
つ以上の条件を充たし、より好ましくは１）〜４）すべ
ての条件を充たす。また、好ましくは５）の条件も充た
す。 １）低温特性 至適温度が４０℃以上にあり、１℃での活性が３０℃に
おける活性の２０％以上ある。なお、好ましくは３０％
以上である。 ２）漂白剤存在下の活性 直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム（ＬＡＳ）
０．０４６％を含む２５℃の溶液中において、過酸化水
素０．５％存在下のパラニトロフェニルパルミテートの
分解速度が、過酸化水素非存在下の分解速度の８０％以
上である。 ３）漂白剤存在下の安定性 ＬＡＳ０．０５％, 過酸化水素０．５５％を含む溶液中
で２５℃, １時間保持したとき、保持前に比べ５０％以
上の活性を有する。なお、好ましくは６０％以上、より
好ましくは７０％以上である。 ４）高濃度ＬＡＳ存在下の活性 ＬＡＳ０．２％を含む２５℃の溶液中におけるパラニト
ロフェニルパルミテートの分解速度が、ＬＡＳ０．０２
％を含む溶液中における分解速度の５０％以上である。 ５）ＬＡＳの有無による活性の違い オリーブ油エマルジョンを基質とし、０．０２％のＬＡ
Ｓを含む溶液中で測定した場合の活性がＬＡＳ無添加時
の活性の２０％以上である。
【００３０】（本発明の酵素の性質［２］）本発明の代
表例であるＳＤ７１１〜ＳＤ７１８株の生産するリパー
ゼ（以下、個々のリパーゼの名称はそれを生産する株の
名称におけるＳＤをＳＤＬに替えたものとする）につい
て、その性質を記載する。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用し、その
エステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。
表例であるＳＤ７１１〜ＳＤ７１８株の生産するリパー
ゼ（以下、個々のリパーゼの名称はそれを生産する株の
名称におけるＳＤをＳＤＬに替えたものとする）につい
て、その性質を記載する。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用し、その
エステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。
【００３１】（３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ 前記のエマルジョンを基質とする力価測定法により測定
した。ただし、反応時のｐＨは、８から１２の範囲にお
ける種々のｐＨで測定した。反応ｐＨと相対活性の関係
は図１〜図８に示す通りであり、ｐＨ8.0 〜12.0の範囲
で測定した場合の作用ｐＨは各酵素とも8.0 〜12.0であ
る。また、至適ｐＨは8.5 〜12の範囲内にあり、リパー
ゼＳＤＬ７１１は約9 〜10.5、ＳＤＬ７１２及びＳＤＬ
７１３は約 9.5〜11、ＳＤＬ７１４及びＳＤＬ７１５は
約11.5、ＳＤＬ７１６は約10〜11、ＳＤＬ７１７は約1
1、ＳＤＬ７１８は約10〜10.5である。なお、誤差は±
0.5程度である。
した。ただし、反応時のｐＨは、８から１２の範囲にお
ける種々のｐＨで測定した。反応ｐＨと相対活性の関係
は図１〜図８に示す通りであり、ｐＨ8.0 〜12.0の範囲
で測定した場合の作用ｐＨは各酵素とも8.0 〜12.0であ
る。また、至適ｐＨは8.5 〜12の範囲内にあり、リパー
ゼＳＤＬ７１１は約9 〜10.5、ＳＤＬ７１２及びＳＤＬ
７１３は約 9.5〜11、ＳＤＬ７１４及びＳＤＬ７１５は
約11.5、ＳＤＬ７１６は約10〜11、ＳＤＬ７１７は約1
1、ＳＤＬ７１８は約10〜10.5である。なお、誤差は±
0.5程度である。
【００３２】（４）作用温度および至適温度 前記のエマルジョンを基質とする力価測定法により測定
した。ただし、反応温度は1 〜65℃の範囲における種々
の温度にて測定した。反応温度と相対活性の関係は図９
〜図１６及び表３に示した。なお表３中の１℃における
相対活性は３０℃における活性を１００としている。
した。ただし、反応温度は1 〜65℃の範囲における種々
の温度にて測定した。反応温度と相対活性の関係は図９
〜図１６及び表３に示した。なお表３中の１℃における
相対活性は３０℃における活性を１００としている。
【００３３】
【表３】
【００３４】各酵素とも、1 〜65℃の範囲で測定した場
合の作用温度は1 〜65℃である。また、至適温度は45〜
65℃の範囲内にあり、リパーゼＳＤＬ７１１は約60℃、
ＳＤＬ７１２、ＳＤＬ７１３は約55℃、ＳＤＬ７１４は
約54℃、ＳＤＬ７１５は約50℃、ＳＤＬ７１６は約52
℃、ＳＤＬ７１７は約51℃、ＳＤＬ７１８は約46℃であ
る。なお、誤差は±３℃程度である。また、リパーゼＳ
ＤＬ７１２〜ＳＤＬ７１８は、１℃における活性が３０
℃における活性の２０％以上であり、特にＳＤＬ７１４
〜ＳＤ７１８は、３０％以上である。
合の作用温度は1 〜65℃である。また、至適温度は45〜
65℃の範囲内にあり、リパーゼＳＤＬ７１１は約60℃、
ＳＤＬ７１２、ＳＤＬ７１３は約55℃、ＳＤＬ７１４は
約54℃、ＳＤＬ７１５は約50℃、ＳＤＬ７１６は約52
℃、ＳＤＬ７１７は約51℃、ＳＤＬ７１８は約46℃であ
る。なお、誤差は±３℃程度である。また、リパーゼＳ
ＤＬ７１２〜ＳＤＬ７１８は、１℃における活性が３０
℃における活性の２０％以上であり、特にＳＤＬ７１４
〜ＳＤ７１８は、３０％以上である。
【００３５】（５）温度安定性 異なる温度でpH9 にて30分間保温処理した後の残存活性
を、前記のエマルジョンを基質とする力価測定法で測定
した。各酵素とも30℃の温度の処理で90％以上,50 ℃の
温度の処理で50％以上の残存活性を有する。 （６）活性の温度係数 表２に示したように、リパーゼＳＤＬ７１２〜ＳＤＬ７
１８は、温度安定性が９０％以上の値を示す温度範囲に
おいて活性の温度係数が５．５％／℃以下である。それ
に対し、既知の酵素リポマックス（ギストブロカーディ
ス社、商品名）は８．０％／℃である。 （７）ｐＨ安定性 ｐＨ5 〜12の範囲の異なるｐＨで30℃にて30分間処理し
た後の残存活性を前記のエマルジョンを基質とする力価
測定法で測定した。各酵素ともｐＨ5 〜10で50％以上の
残存活性を有する。 （８）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は各酵素とも30,000±3,500 の範囲内であ
り、ＳＤＬ７１１は30,500±3,000 、ＳＤＬ７１２は3
0,000±3,000 、ＳＤＬ７１３は30,000±3,000 、ＳＤ
Ｌ７１４は29,500±3,000 、ＳＤＬ７１５は29,500±3,
000 、ＳＤＬ７１６は30,000±3,000 、ＳＤＬ７１７は
30,000±3,000 、ＳＤＬ７１８は30,500±3,000 であ
る。
を、前記のエマルジョンを基質とする力価測定法で測定
した。各酵素とも30℃の温度の処理で90％以上,50 ℃の
温度の処理で50％以上の残存活性を有する。 （６）活性の温度係数 表２に示したように、リパーゼＳＤＬ７１２〜ＳＤＬ７
１８は、温度安定性が９０％以上の値を示す温度範囲に
おいて活性の温度係数が５．５％／℃以下である。それ
に対し、既知の酵素リポマックス（ギストブロカーディ
ス社、商品名）は８．０％／℃である。 （７）ｐＨ安定性 ｐＨ5 〜12の範囲の異なるｐＨで30℃にて30分間処理し
た後の残存活性を前記のエマルジョンを基質とする力価
測定法で測定した。各酵素ともｐＨ5 〜10で50％以上の
残存活性を有する。 （８）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は各酵素とも30,000±3,500 の範囲内であ
り、ＳＤＬ７１１は30,500±3,000 、ＳＤＬ７１２は3
0,000±3,000 、ＳＤＬ７１３は30,000±3,000 、ＳＤ
Ｌ７１４は29,500±3,000 、ＳＤＬ７１５は29,500±3,
000 、ＳＤＬ７１６は30,000±3,000 、ＳＤＬ７１７は
30,000±3,000 、ＳＤＬ７１８は30,500±3,000 であ
る。
【００３６】（９）洗浄剤溶液中での性質 １）漂白剤存在下の活性（SDL712〜SDL717） 過酸化水素０．５％を含む、合成洗剤，（組成は実
施例５に記載）またはタイドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商
品名）溶液中で、実施例６記載の方法で測定した場合の
活性が過酸化水素を含まない場合の活性の８０％以上で
ある（合成洗剤の場合が、LAS ０．０４６％に相
当）。 ２）漂白剤存在下の安定性（SDL711,SDL714 〜SDL717） 過酸化水素０．５５％を含む、合成洗剤，またはタ
イドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商品名）溶液中で、実施例
７記載の方法で測定した場合の安定性が５０％以上であ
る（合成洗剤の場合がLAS ０．０５％に相当する）。 ３）高濃度ＬＡＳ存在下の活性（SDL714〜SDL717） 実施例８記載の方法で測定した場合、LAS ０．２％を含
む２５℃の溶液におけるパラニトロフェニルパルミテー
トの分解速度が、LAS ０．０２％を含む溶液中における
分解速度の50% 以上である。 ４）ＬＡＳの有無による活性の違い 実施例５記載の方法で測定した場合の活性は、合成洗剤
〜、市販洗剤のタイドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商品
名），ウルトラアリエール（Ｐ＆Ｇ商品名），新コンパ
クトアタック（花王（株）商品名，以下「アタック」と
略記），または濃縮酵素トップ（ライオン（株）商品
名，以下「トップ」と略記）の洗浄剤溶液中で２０％以
上である。使用したこれらの洗浄剤溶液中には、アニオ
ンおよび／またはノニオン界面活性剤が終濃度で０．０
２〜０．０４％含まれると考えられる（合成洗剤の場
合がＬＡＳ０．０２％に相当）。 （10）等電点 等電点電気泳動により測定したリパーゼＳＤＬ７１１〜
７１８の等電点は６．０±２．０の範囲内にある。
施例５に記載）またはタイドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商
品名）溶液中で、実施例６記載の方法で測定した場合の
活性が過酸化水素を含まない場合の活性の８０％以上で
ある（合成洗剤の場合が、LAS ０．０４６％に相
当）。 ２）漂白剤存在下の安定性（SDL711,SDL714 〜SDL717） 過酸化水素０．５５％を含む、合成洗剤，またはタ
イドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商品名）溶液中で、実施例
７記載の方法で測定した場合の安定性が５０％以上であ
る（合成洗剤の場合がLAS ０．０５％に相当する）。 ３）高濃度ＬＡＳ存在下の活性（SDL714〜SDL717） 実施例８記載の方法で測定した場合、LAS ０．２％を含
む２５℃の溶液におけるパラニトロフェニルパルミテー
トの分解速度が、LAS ０．０２％を含む溶液中における
分解速度の50% 以上である。 ４）ＬＡＳの有無による活性の違い 実施例５記載の方法で測定した場合の活性は、合成洗剤
〜、市販洗剤のタイドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商品
名），ウルトラアリエール（Ｐ＆Ｇ商品名），新コンパ
クトアタック（花王（株）商品名，以下「アタック」と
略記），または濃縮酵素トップ（ライオン（株）商品
名，以下「トップ」と略記）の洗浄剤溶液中で２０％以
上である。使用したこれらの洗浄剤溶液中には、アニオ
ンおよび／またはノニオン界面活性剤が終濃度で０．０
２〜０．０４％含まれると考えられる（合成洗剤の場
合がＬＡＳ０．０２％に相当）。 （10）等電点 等電点電気泳動により測定したリパーゼＳＤＬ７１１〜
７１８の等電点は６．０±２．０の範囲内にある。
【００３７】（洗浄剤組成物）本発明により、前記の性
質を有するリパーゼを配合した洗浄剤組成物が提供され
る。本発明の洗浄剤組成物に配合されるリパーゼの量に
特に限定はないが、一般には洗浄剤組成物１グラム当り
50〜50,000ユニット、好ましくは100 〜10,000ユニット
の割合で配合する。この配合量が少なすぎると十分な洗
浄効果の向上が得られず、また逆に多すぎた場合には酵
素配合量に比して洗浄効果の向上が小さく、経済性の点
で好ましくない。本発明に従えば、前記リパーゼは従来
公知の任意の洗浄剤組成物に洗浄剤組成物の組成を何等
変更することなく配合することができ、本発明の洗浄剤
組成物の成分については特に限定はない。そのような洗
浄剤組成物の代表例を挙げれば、洗浄剤組成物重量当り
10〜50重量％の界面活性剤、0 〜50重量％のビルダー、
1〜50重量％のアルカリ剤あるいは無機電解質、0.1 〜5
重量％の再汚染防止剤、酵素、漂白剤、蛍光染料、ケ
ーキング防止剤及び酸化防止剤からなる群より選ばれる
少なくとも１種以上の配合成分からなる洗浄剤組成物が
挙げられる。
質を有するリパーゼを配合した洗浄剤組成物が提供され
る。本発明の洗浄剤組成物に配合されるリパーゼの量に
特に限定はないが、一般には洗浄剤組成物１グラム当り
50〜50,000ユニット、好ましくは100 〜10,000ユニット
の割合で配合する。この配合量が少なすぎると十分な洗
浄効果の向上が得られず、また逆に多すぎた場合には酵
素配合量に比して洗浄効果の向上が小さく、経済性の点
で好ましくない。本発明に従えば、前記リパーゼは従来
公知の任意の洗浄剤組成物に洗浄剤組成物の組成を何等
変更することなく配合することができ、本発明の洗浄剤
組成物の成分については特に限定はない。そのような洗
浄剤組成物の代表例を挙げれば、洗浄剤組成物重量当り
10〜50重量％の界面活性剤、0 〜50重量％のビルダー、
1〜50重量％のアルカリ剤あるいは無機電解質、0.1 〜5
重量％の再汚染防止剤、酵素、漂白剤、蛍光染料、ケ
ーキング防止剤及び酸化防止剤からなる群より選ばれる
少なくとも１種以上の配合成分からなる洗浄剤組成物が
挙げられる。
【００３８】界面活性剤としては石鹸、例えば直鎖また
は分岐アルキルあるいはアルケニル硫酸塩、アミド硫酸
塩、直鎖または分岐鎖のアルキル基またはアルケニル基
を有し、エチレンオキサイド、プロピレンオキサイド及
びブチレンオキサイドのうちの単独あるいは複数成分が
付加したアルキルまたはアルケニルエーテル硫酸塩のよ
うな脂肪族硫酸化物、アルキルスルホン酸塩、アミドス
ルホン酸塩、ジアルキルスルホコハク酸塩、α−オレフ
ィン、ビニリデン型オレフィン及び内部オレフィンの各
スルホン酸塩のような脂肪族スルホン酸塩、直鎖または
分岐鎖のアルキルベンゼンスルホン酸塩のような芳香族
スルホン酸塩、直鎖または分岐鎖のアルキル基またはア
ルケニル基を有し、エチレンオキサイド、プロピレンオ
キサイド及びブチレンオキサイドのうちの単独あるいは
複数成分が付加したアルキルまたはアルケニルエーテル
カルボン酸塩またはアミド、α−スルホ脂肪酸塩または
エステル、アミノ酸型界面活性剤、アルキルまたはアル
ケニル酸性リン酸エステル、アルキルまたはアルケニル
リン酸塩のごときリン酸エステル系界面活性剤、スルホ
ン酸型両性界面活性剤、ベタイン型両性界面活性剤、直
鎖または分岐鎖のアルキルベンゼンスルホン酸塩のよう
な芳香族スルホン酸塩、直鎖または分岐鎖のアルキル基
またはアルケニル基を有し、エチレンオキサイド、プロ
ピレンオキサイド及びブチレンオキサイドのうちの単独
あるいは複数成分が付加したポリオキシエチレンアルキ
ルフェニルエーテル、高級脂肪酸アルカノールアミドま
たはそのアルキレンオキサイド付加物、ショ糖脂肪酸エ
ステル、脂肪酸グリセリンモノエステル、アルキルまた
はアルケニルアミンオキサイド、テトラアルキルアンモ
ニウム塩型カチオン界面活性剤など洗浄剤組成物として
通常配合される界面活性剤であればいずれも使用可能で
あり、陰イオン性界面活性剤の場合の対イオンとしては
ナトリウムイオンまたはカリウムイオンであることが好
ましい。これらの界面活性剤は、単独または２種以上の
混合物として使用される。
は分岐アルキルあるいはアルケニル硫酸塩、アミド硫酸
塩、直鎖または分岐鎖のアルキル基またはアルケニル基
を有し、エチレンオキサイド、プロピレンオキサイド及
びブチレンオキサイドのうちの単独あるいは複数成分が
付加したアルキルまたはアルケニルエーテル硫酸塩のよ
うな脂肪族硫酸化物、アルキルスルホン酸塩、アミドス
ルホン酸塩、ジアルキルスルホコハク酸塩、α−オレフ
ィン、ビニリデン型オレフィン及び内部オレフィンの各
スルホン酸塩のような脂肪族スルホン酸塩、直鎖または
分岐鎖のアルキルベンゼンスルホン酸塩のような芳香族
スルホン酸塩、直鎖または分岐鎖のアルキル基またはア
ルケニル基を有し、エチレンオキサイド、プロピレンオ
キサイド及びブチレンオキサイドのうちの単独あるいは
複数成分が付加したアルキルまたはアルケニルエーテル
カルボン酸塩またはアミド、α−スルホ脂肪酸塩または
エステル、アミノ酸型界面活性剤、アルキルまたはアル
ケニル酸性リン酸エステル、アルキルまたはアルケニル
リン酸塩のごときリン酸エステル系界面活性剤、スルホ
ン酸型両性界面活性剤、ベタイン型両性界面活性剤、直
鎖または分岐鎖のアルキルベンゼンスルホン酸塩のよう
な芳香族スルホン酸塩、直鎖または分岐鎖のアルキル基
またはアルケニル基を有し、エチレンオキサイド、プロ
ピレンオキサイド及びブチレンオキサイドのうちの単独
あるいは複数成分が付加したポリオキシエチレンアルキ
ルフェニルエーテル、高級脂肪酸アルカノールアミドま
たはそのアルキレンオキサイド付加物、ショ糖脂肪酸エ
ステル、脂肪酸グリセリンモノエステル、アルキルまた
はアルケニルアミンオキサイド、テトラアルキルアンモ
ニウム塩型カチオン界面活性剤など洗浄剤組成物として
通常配合される界面活性剤であればいずれも使用可能で
あり、陰イオン性界面活性剤の場合の対イオンとしては
ナトリウムイオンまたはカリウムイオンであることが好
ましい。これらの界面活性剤は、単独または２種以上の
混合物として使用される。
【００３９】ビルダー及びアルカリ剤あるいは無機電解
質としてはオルソリン酸塩、ピロリン酸塩、トリポリ酸
塩、メタリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、フィチン酸塩
などのリン酸塩、エタン−1,1 −ジホスホン酸及びその
誘導体、エタンヒドロキシ−1,1,2 −トリホスホン酸、
エタン−1,2 −ジカルボキシ−1,2 −ジホスホン酸、メ
タンヒドロキシホスホン酸などのホスホン酸塩、2 −ホ
スホノブタン−1,2 −ジカルボン酸、1 −ホスホノブタ
ン−2,3,4 −トリカルボン酸、α−メチルホスホノコハ
ク酸などのホスホノカルボン酸塩、アスパラギン酸、グ
ルタミン酸などのアミノ酸塩、ニトリロ三酢酸塩、エチ
レンジアミン四酢酸塩、ジエチレントリアミン五酢酸塩
などのアミノポリ酢酸塩、ポリアクリル酸、ポリイタコ
ン酸、ポリマレイン酸、無水マレイン酸共重合体、カル
ボキシメチルセルロース塩などの高分子電解質、ポリエ
チレングリコール、ポリビニルアルコールなどの非解離
高分子、ジグリコール酸、オキシジコハク酸、カルボキ
シメチルオキシコハク酸、グルコン酸、クエン酸、乳
酸、酒石酸、ショ糖、ラクトースなどのカルボキシメチ
ル化物、ペンタエリスリトールのカルボキシメチル化
物、グルコン酸のカルボキシメチル化物、ベンゼンポリ
カルボン酸、シュウ酸、リンゴ酸、オキシジコハク酸、
グルコン酸などの有機酸塩、ゼオライトなどのアルミノ
ケイ酸塩、炭酸塩、セスキ炭酸塩、硫酸塩、メタケイ酸
塩などの無機塩をアルカリ金属塩として用いることがで
き、またデンプン、尿素などの有機物質及び塩化ナトリ
ウム、ベントナイトなどの無機化合物を用いることがで
き、更には有機アルカリ剤としてトリエタノールアミ
ン、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、トリ
イソプロパノールアミンなどを用いることができる。
質としてはオルソリン酸塩、ピロリン酸塩、トリポリ酸
塩、メタリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、フィチン酸塩
などのリン酸塩、エタン−1,1 −ジホスホン酸及びその
誘導体、エタンヒドロキシ−1,1,2 −トリホスホン酸、
エタン−1,2 −ジカルボキシ−1,2 −ジホスホン酸、メ
タンヒドロキシホスホン酸などのホスホン酸塩、2 −ホ
スホノブタン−1,2 −ジカルボン酸、1 −ホスホノブタ
ン−2,3,4 −トリカルボン酸、α−メチルホスホノコハ
ク酸などのホスホノカルボン酸塩、アスパラギン酸、グ
ルタミン酸などのアミノ酸塩、ニトリロ三酢酸塩、エチ
レンジアミン四酢酸塩、ジエチレントリアミン五酢酸塩
などのアミノポリ酢酸塩、ポリアクリル酸、ポリイタコ
ン酸、ポリマレイン酸、無水マレイン酸共重合体、カル
ボキシメチルセルロース塩などの高分子電解質、ポリエ
チレングリコール、ポリビニルアルコールなどの非解離
高分子、ジグリコール酸、オキシジコハク酸、カルボキ
シメチルオキシコハク酸、グルコン酸、クエン酸、乳
酸、酒石酸、ショ糖、ラクトースなどのカルボキシメチ
ル化物、ペンタエリスリトールのカルボキシメチル化
物、グルコン酸のカルボキシメチル化物、ベンゼンポリ
カルボン酸、シュウ酸、リンゴ酸、オキシジコハク酸、
グルコン酸などの有機酸塩、ゼオライトなどのアルミノ
ケイ酸塩、炭酸塩、セスキ炭酸塩、硫酸塩、メタケイ酸
塩などの無機塩をアルカリ金属塩として用いることがで
き、またデンプン、尿素などの有機物質及び塩化ナトリ
ウム、ベントナイトなどの無機化合物を用いることがで
き、更には有機アルカリ剤としてトリエタノールアミ
ン、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、トリ
イソプロパノールアミンなどを用いることができる。
【００４０】本発明の洗浄剤組成物は、前述のごとく、
界面活性剤、リパーゼ、アルカリ剤または無機電解質を
必須の構成成分として含むが、その必要に応じて両性界
面活性剤、例えば過炭酸ソーダ、過ホウ酸ソーダなどの
漂白剤、色素、ビルダー、例えばポリエチレングリコー
ル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カ
ルボキシメチルセルロースなどの再汚染防止剤、ケーキ
ング防止剤、酸化防止剤、プロテアーゼなどのその他の
酵素を必要に応じて含ませることができる。本発明の洗
浄剤組成物にプロテアーゼあるいはセルラーゼ、リパー
ゼなどのその他の酵素を配合するには如何なる方法をも
って行ってもよいが、微粉末状で配合することは、洗浄
剤取扱い時の発塵による洗浄剤使用者や洗浄剤工業にお
ける作業者の安全衛生上好ましいことではなく、溶液状
態あるいはあらかじめ発塵性をおさえた形状に賦形して
おくことが好ましい。この賦形は通常よく用いられるマ
ルメ造粒、押し出し造粒、流動造粒、遠心流動造粒やそ
の他の方法のいずれによるものであってもよく、本発明
の洗浄剤組成物に配合するプロテアーゼあるいはセルラ
ーゼ、リパーゼなどのその他の酵素の形状は特にこれら
の方法によって賦形されたものに限定されるものではな
い。
界面活性剤、リパーゼ、アルカリ剤または無機電解質を
必須の構成成分として含むが、その必要に応じて両性界
面活性剤、例えば過炭酸ソーダ、過ホウ酸ソーダなどの
漂白剤、色素、ビルダー、例えばポリエチレングリコー
ル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カ
ルボキシメチルセルロースなどの再汚染防止剤、ケーキ
ング防止剤、酸化防止剤、プロテアーゼなどのその他の
酵素を必要に応じて含ませることができる。本発明の洗
浄剤組成物にプロテアーゼあるいはセルラーゼ、リパー
ゼなどのその他の酵素を配合するには如何なる方法をも
って行ってもよいが、微粉末状で配合することは、洗浄
剤取扱い時の発塵による洗浄剤使用者や洗浄剤工業にお
ける作業者の安全衛生上好ましいことではなく、溶液状
態あるいはあらかじめ発塵性をおさえた形状に賦形して
おくことが好ましい。この賦形は通常よく用いられるマ
ルメ造粒、押し出し造粒、流動造粒、遠心流動造粒やそ
の他の方法のいずれによるものであってもよく、本発明
の洗浄剤組成物に配合するプロテアーゼあるいはセルラ
ーゼ、リパーゼなどのその他の酵素の形状は特にこれら
の方法によって賦形されたものに限定されるものではな
い。
【００４１】
【実施例】次に本発明を実施例を挙げて説明するが、本
発明は下記の実施例に限定されるものではない。なお、
下記の説明中、特に記載がない限り％は重量を基準とす
るものである。 ＜実施例１＞リパーゼ生産菌（SD711 〜SD717 株）の培
養 Tween80 0.5%、硝酸アンモニウム 0.1% 、リン酸水素二
カリウム 1% 、リン酸二水素カリウム 0.4% 、塩化カル
シウム・2 水和物 0.05%、硫酸マグネシウム・7 水和物
0.3% 、塩化第二鉄・6 水和物 0.004% 、硫酸マンガン
・4 〜5 水和物0.0003% 炭酸ナトリウム 0.5% の濃度
の液体培地 2mlを18ｍｍ径の試験管にとり、121 ℃、20
分間高圧蒸気滅菌した後、SD711 〜SD717 株のうちどれ
か一つを１白金耳接種し、25℃で20時間、300rpmで培養
した。培養後、遠心分離により菌体を除去しリパーゼ液
を得た。この液のリパーゼ活性は、SD711 株約8U/ml 、
SD712,SD713 株約0.2U/ml 、SD714 〜SD717 株約0.1U/m
l であった。
発明は下記の実施例に限定されるものではない。なお、
下記の説明中、特に記載がない限り％は重量を基準とす
るものである。 ＜実施例１＞リパーゼ生産菌（SD711 〜SD717 株）の培
養 Tween80 0.5%、硝酸アンモニウム 0.1% 、リン酸水素二
カリウム 1% 、リン酸二水素カリウム 0.4% 、塩化カル
シウム・2 水和物 0.05%、硫酸マグネシウム・7 水和物
0.3% 、塩化第二鉄・6 水和物 0.004% 、硫酸マンガン
・4 〜5 水和物0.0003% 炭酸ナトリウム 0.5% の濃度
の液体培地 2mlを18ｍｍ径の試験管にとり、121 ℃、20
分間高圧蒸気滅菌した後、SD711 〜SD717 株のうちどれ
か一つを１白金耳接種し、25℃で20時間、300rpmで培養
した。培養後、遠心分離により菌体を除去しリパーゼ液
を得た。この液のリパーゼ活性は、SD711 株約8U/ml 、
SD712,SD713 株約0.2U/ml 、SD714 〜SD717 株約0.1U/m
l であった。
【００４２】＜実施例２＞リパーゼ生産菌（SD711 〜SD
717 株）の培養およびリパーゼの取得 実施例１の濃度の液体培地2 リットルを5 リットル培養
槽にとり、121 ℃、20分間高圧蒸気滅菌した後、SD711
〜SD717 株のうちどれか一つを接種し、25℃で40時間、
1,000rpmで通気撹拌培養した。培養後、遠心分離により
菌体を除去しリパーゼ液を得た。この液のリパーゼ活性
はSD711 株約20U/ml、SD712,SD713 株約1U/ml 、SD714
〜SD717 株約0.5U/ml であった。このようにして得られ
たリパーゼ液から、SD711 株では硫安沈澱法にて飽和硫
安20〜50％画分の沈澱を得、これを脱塩後、凍結乾燥に
よりリパーゼ原末を得た。SD712,SD713 株では濃縮し、
硫安沈澱法にて飽和硫安20〜50％画分の沈澱を得、これ
を脱塩後、凍結乾燥によりリパーゼ原末を得た。SD714
〜SD717 株では濃縮、脱塩し、アセトン沈澱法にてアセ
トン20〜50％画分の沈澱を得た。これを真空乾燥により
リパーゼ原末を得た。
717 株）の培養およびリパーゼの取得 実施例１の濃度の液体培地2 リットルを5 リットル培養
槽にとり、121 ℃、20分間高圧蒸気滅菌した後、SD711
〜SD717 株のうちどれか一つを接種し、25℃で40時間、
1,000rpmで通気撹拌培養した。培養後、遠心分離により
菌体を除去しリパーゼ液を得た。この液のリパーゼ活性
はSD711 株約20U/ml、SD712,SD713 株約1U/ml 、SD714
〜SD717 株約0.5U/ml であった。このようにして得られ
たリパーゼ液から、SD711 株では硫安沈澱法にて飽和硫
安20〜50％画分の沈澱を得、これを脱塩後、凍結乾燥に
よりリパーゼ原末を得た。SD712,SD713 株では濃縮し、
硫安沈澱法にて飽和硫安20〜50％画分の沈澱を得、これ
を脱塩後、凍結乾燥によりリパーゼ原末を得た。SD714
〜SD717 株では濃縮、脱塩し、アセトン沈澱法にてアセ
トン20〜50％画分の沈澱を得た。これを真空乾燥により
リパーゼ原末を得た。
【００４３】＜実施例３＞リパーゼ生産菌（SD718 株）
の培養およびリパーゼの取得 Tween80 2%、硫酸アンモニウム 0.4% 、リン酸- 水素二
カリウム 1% 、リン酸二水素カリウム 0.4% 、塩化カル
シウム・2 水和物 0.05%、硫酸マグネシウム・7 水和物
0.3% 、硫酸鉄（II）・7 水和物 0.03%、硫酸マンガン
・4 〜5 水和物0.005% 炭酸ナトリウム 0.1% の濃度
の液体培地 2 リットルを5 リットル培養槽にとり、12
1 ℃、20分間高圧蒸気滅菌した後、アシネトバクター・
バウマニイ（Acinetobacter baumanni）SD718 株を接種
し、30℃で24時間、1,000rpmで通気撹はん培養した。培
養後、遠心分離により菌体を除去しリパーゼ液を得た。
この液のリパーゼ活性は約500U/ml であった。このよう
にして得られたリパーゼ液から硫安沈澱法にて飽和硫安
20〜30％画分の沈澱を得た。これを脱塩後、凍結乾燥に
よりリパーゼ原末を得た。
の培養およびリパーゼの取得 Tween80 2%、硫酸アンモニウム 0.4% 、リン酸- 水素二
カリウム 1% 、リン酸二水素カリウム 0.4% 、塩化カル
シウム・2 水和物 0.05%、硫酸マグネシウム・7 水和物
0.3% 、硫酸鉄（II）・7 水和物 0.03%、硫酸マンガン
・4 〜5 水和物0.005% 炭酸ナトリウム 0.1% の濃度
の液体培地 2 リットルを5 リットル培養槽にとり、12
1 ℃、20分間高圧蒸気滅菌した後、アシネトバクター・
バウマニイ（Acinetobacter baumanni）SD718 株を接種
し、30℃で24時間、1,000rpmで通気撹はん培養した。培
養後、遠心分離により菌体を除去しリパーゼ液を得た。
この液のリパーゼ活性は約500U/ml であった。このよう
にして得られたリパーゼ液から硫安沈澱法にて飽和硫安
20〜30％画分の沈澱を得た。これを脱塩後、凍結乾燥に
よりリパーゼ原末を得た。
【００４４】＜実施例４＞リパーゼ精製 実施例２または３で得られた各々のリパーゼ原末を3 ％
トライトンＸ−１００を含む10mMトリスー 塩酸緩衝液(p
H8) に溶解させ、DEAE-Cellulofine A-500（生化学工業
( 株) 商品名）でイオン交換クロマトグラフィー、Buty
l-Toyopearl 650M（東ソー( 株) 商品名）で疎水クロマ
トグラフィー、DEAE-Cellulofine A-500でイオン交換ク
ロマトグラフィー、さらにShodex RSpak RP18-415 （昭
和電工(株) 商品名）で逆相クロマトグラフィーを順次
行い精製酵素を得た。これらの精製品はＳＤＳポリアク
リルアミドゲル電気泳動法によりほぼ単一であることが
確認された。
トライトンＸ−１００を含む10mMトリスー 塩酸緩衝液(p
H8) に溶解させ、DEAE-Cellulofine A-500（生化学工業
( 株) 商品名）でイオン交換クロマトグラフィー、Buty
l-Toyopearl 650M（東ソー( 株) 商品名）で疎水クロマ
トグラフィー、DEAE-Cellulofine A-500でイオン交換ク
ロマトグラフィー、さらにShodex RSpak RP18-415 （昭
和電工(株) 商品名）で逆相クロマトグラフィーを順次
行い精製酵素を得た。これらの精製品はＳＤＳポリアク
リルアミドゲル電気泳動法によりほぼ単一であることが
確認された。
【００４５】＜実施例５＞洗浄剤溶液中での活性 実施例２で得られたリパーゼを用いて洗浄剤溶液中での
活性測定を行い、クロモバクター・ビスコサム（Chromo
bacter viscosum ）由来の市販リパーゼ、ムコール・ミ
エヘイ（Mucor miehei）由来の市販リパーゼ、洗浄剤用
リパーゼのリポマックス（ギストブロカーディス社、商
品名）、及び市販洗剤配合リパーゼ（濃縮酵素トップ
（ライオン（株）商品名）中より取得）と比較した。前
記力価測定と同様の方法で洗浄剤溶液中での活性を測定
した。ただし、塩溶液の替わりに洗浄剤溶液を用い、３
５℃、ｐＨ１０で反応を行った。洗浄剤は、合成洗浄剤
〜，市販の洗剤タイドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商品
名），ウルトラアリエール（Ｐ＆Ｇ商品名），新コンパ
クトアタック（花王( 株) 商品名、以下「アタック」と
略記），または濃縮酵素トップ（ライオン( 株)商品
名、以下「トップ」と略記）を用いた。なお洗浄剤溶液
の濃度と組成を以下に示した。これらは0.54mM塩化カル
シウム水溶液に溶解した。
活性測定を行い、クロモバクター・ビスコサム（Chromo
bacter viscosum ）由来の市販リパーゼ、ムコール・ミ
エヘイ（Mucor miehei）由来の市販リパーゼ、洗浄剤用
リパーゼのリポマックス（ギストブロカーディス社、商
品名）、及び市販洗剤配合リパーゼ（濃縮酵素トップ
（ライオン（株）商品名）中より取得）と比較した。前
記力価測定と同様の方法で洗浄剤溶液中での活性を測定
した。ただし、塩溶液の替わりに洗浄剤溶液を用い、３
５℃、ｐＨ１０で反応を行った。洗浄剤は、合成洗浄剤
〜，市販の洗剤タイドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商品
名），ウルトラアリエール（Ｐ＆Ｇ商品名），新コンパ
クトアタック（花王( 株) 商品名、以下「アタック」と
略記），または濃縮酵素トップ（ライオン( 株)商品
名、以下「トップ」と略記）を用いた。なお洗浄剤溶液
の濃度と組成を以下に示した。これらは0.54mM塩化カル
シウム水溶液に溶解した。
【００４６】合成洗剤（LAS26%, 洗剤ベース74% ）:
0.169％ 合成洗剤（LAS15%, 洗剤ベース85% ）:0.147％ 合成洗剤（LAS19%,POEAE7%, 洗剤ベース74% ）:0.169
％ タイドウィズブリーチ（アニオン系界面活性剤, 漂白
剤, 酵素を含む）:0.159％ ウルトラアリエール（アニオン／ノニオン系界面活性剤
35%,漂白剤, 酵素を含む）：0.11％ アタック（アニオン／ノニオン系界面活性剤39%,酵素を
含む）:0.073％ トップ（アニオン系界面活性剤39%,酵素を含む）:0.073
％
0.169％ 合成洗剤（LAS15%, 洗剤ベース85% ）:0.147％ 合成洗剤（LAS19%,POEAE7%, 洗剤ベース74% ）:0.169
％ タイドウィズブリーチ（アニオン系界面活性剤, 漂白
剤, 酵素を含む）:0.159％ ウルトラアリエール（アニオン／ノニオン系界面活性剤
35%,漂白剤, 酵素を含む）：0.11％ アタック（アニオン／ノニオン系界面活性剤39%,酵素を
含む）:0.073％ トップ（アニオン系界面活性剤39%,酵素を含む）:0.073
％
【００４７】ただし、ここで洗浄剤ベース，POEAE は以
下の通りである。 洗浄剤ベース：ゼオライト 20%, 硫酸ナトリウム69.4%,
炭酸ナトリウム3.5%, ケイ酸ナトリウム5.9%, カルボキ
シメチルセルロース1.2% POEAE = polyoxyethylene alkyl ether 洗剤を添加しないときの活性を100 としたときの相対活
性を表４に示した。
下の通りである。 洗浄剤ベース：ゼオライト 20%, 硫酸ナトリウム69.4%,
炭酸ナトリウム3.5%, ケイ酸ナトリウム5.9%, カルボキ
シメチルセルロース1.2% POEAE = polyoxyethylene alkyl ether 洗剤を添加しないときの活性を100 としたときの相対活
性を表４に示した。
【００４８】
【表４】
【００４９】＜実施例６＞活性に及ぼす漂白剤の影響 実施例２で得られたリパーゼを用いて漂白剤溶液中での
活性測定を行い、実施例５で比較したリパーゼと比較し
た。結果を表５に示した。ただし、クロモバクター・ビ
スコサム（Chromobacter viscosum ）、ムコール・ミエ
ヘイ（Mucor miehei）由来のリパーゼ、 および市販洗剤
配合のリパーゼは洗剤中でほとんど活性を示さないので
本実施例から除外した。活性測定法は、酵素溶液0.1ml
、洗浄剤溶液2.5ml 、0.2%ｐ−ニトロフェニルパルミ
テートの２−プロパノール溶液0.25mlを混合し、25℃で
反応させ、ｐ−ニトロフェニルパルミテートが酵素反応
により分解されることによって生じる吸光度(A405)の増
加速度より活性を求めた。洗浄剤溶液は、洗浄剤として
合成洗剤，合成洗剤，タイドウィズブリーチを用
い、洗浄剤濃度2,000ppm，塩化カルシウム0.27mM, CHES
(2-(Cyclohexylamino)ethanesulfonic acid)10mM, 過酸
化水素0.57% になるようにそれぞれ溶解し、pH9.3 に調
製した溶液を用いた。活性は、合成洗剤，の場合は
過酸化水素未添加の同洗浄剤溶液を用いて測定した活性
を100 とし、また、タイドウィズブリーチを用いた場合
は漂白剤を分解し過酸化水素未添加の同洗浄剤溶液を用
いて測定した活性を100 とし、それぞれ相対活性を求め
た。
活性測定を行い、実施例５で比較したリパーゼと比較し
た。結果を表５に示した。ただし、クロモバクター・ビ
スコサム（Chromobacter viscosum ）、ムコール・ミエ
ヘイ（Mucor miehei）由来のリパーゼ、 および市販洗剤
配合のリパーゼは洗剤中でほとんど活性を示さないので
本実施例から除外した。活性測定法は、酵素溶液0.1ml
、洗浄剤溶液2.5ml 、0.2%ｐ−ニトロフェニルパルミ
テートの２−プロパノール溶液0.25mlを混合し、25℃で
反応させ、ｐ−ニトロフェニルパルミテートが酵素反応
により分解されることによって生じる吸光度(A405)の増
加速度より活性を求めた。洗浄剤溶液は、洗浄剤として
合成洗剤，合成洗剤，タイドウィズブリーチを用
い、洗浄剤濃度2,000ppm，塩化カルシウム0.27mM, CHES
(2-(Cyclohexylamino)ethanesulfonic acid)10mM, 過酸
化水素0.57% になるようにそれぞれ溶解し、pH9.3 に調
製した溶液を用いた。活性は、合成洗剤，の場合は
過酸化水素未添加の同洗浄剤溶液を用いて測定した活性
を100 とし、また、タイドウィズブリーチを用いた場合
は漂白剤を分解し過酸化水素未添加の同洗浄剤溶液を用
いて測定した活性を100 とし、それぞれ相対活性を求め
た。
【００５０】
【表５】
【００５１】＜実施例７＞漂白剤入り洗浄剤溶液中での
安定性 実施例２で得られたリパーゼを用いて漂白剤溶液中での
安定性測定を行い、実施例６で比較したリパーゼと比較
した。結果を表６に示した。安定性測定法は、酵素溶液
0.1ml 、洗浄剤溶液2.5ml を混合し、混合直後と、２５
℃で１時間保持後の活性を測定し、安定性＝（混合１時
間後の活性）／（混合直後の活性）とした。洗浄剤溶液
は、過酸化水素を添加した実施例６で用いたものを使用
した。
安定性 実施例２で得られたリパーゼを用いて漂白剤溶液中での
安定性測定を行い、実施例６で比較したリパーゼと比較
した。結果を表６に示した。安定性測定法は、酵素溶液
0.1ml 、洗浄剤溶液2.5ml を混合し、混合直後と、２５
℃で１時間保持後の活性を測定し、安定性＝（混合１時
間後の活性）／（混合直後の活性）とした。洗浄剤溶液
は、過酸化水素を添加した実施例６で用いたものを使用
した。
【００５２】
【表６】
【００５３】＜実施例８＞高濃度アニオン洗浄剤中での
活性 実施例２で得られたリパーゼを用いて高濃度アニオン洗
浄剤溶液中での活性測定を行い、実施例４で比較したリ
パーゼと比較した。結果を表７に示した。ただし、クロ
モバクター・ビスコサム（Chromobacter viscosum ）、
ムコール・ミエヘイ（Mucor miehei）由来のリパーゼ，
および市販洗剤配合のリパーゼは洗浄剤中でほとんど活
性を示さないので本実施例から除外した。活性測定法
は、酵素溶液0.1ml ，洗浄剤溶液2.5ml ，0.2%ｐ−ニト
ロフェニルパルミテートの２−プロパノール溶液0.25ml
を混合し、25℃で反応させ、ｐ−ニトロフェニルパルミ
テートが酵素反応により分解されることによって生じる
吸光度(A405)の増加速度より活性を求めた。洗浄剤溶液
は、洗浄剤として合成洗剤0.87％，合成洗剤0.15％
となるように、塩化カルシウム0.27mM, CHES10mMを含む
水溶液にそれぞれ溶解し、pH9.3 に調整した溶液を用い
た。活性は、合成洗剤を用いて測定した活性を100 と
し、合成洗剤を用いた場合の相対活性を求めた。
活性 実施例２で得られたリパーゼを用いて高濃度アニオン洗
浄剤溶液中での活性測定を行い、実施例４で比較したリ
パーゼと比較した。結果を表７に示した。ただし、クロ
モバクター・ビスコサム（Chromobacter viscosum ）、
ムコール・ミエヘイ（Mucor miehei）由来のリパーゼ，
および市販洗剤配合のリパーゼは洗浄剤中でほとんど活
性を示さないので本実施例から除外した。活性測定法
は、酵素溶液0.1ml ，洗浄剤溶液2.5ml ，0.2%ｐ−ニト
ロフェニルパルミテートの２−プロパノール溶液0.25ml
を混合し、25℃で反応させ、ｐ−ニトロフェニルパルミ
テートが酵素反応により分解されることによって生じる
吸光度(A405)の増加速度より活性を求めた。洗浄剤溶液
は、洗浄剤として合成洗剤0.87％，合成洗剤0.15％
となるように、塩化カルシウム0.27mM, CHES10mMを含む
水溶液にそれぞれ溶解し、pH9.3 に調整した溶液を用い
た。活性は、合成洗剤を用いて測定した活性を100 と
し、合成洗剤を用いた場合の相対活性を求めた。
【００５４】
【表７】
【００５５】＜実施例９＞洗浄評価 実施例２または３で得られたリパーゼ、クロモバクター
・ビスコサム（Chromobacter viscosum ）由来の市販リ
パーゼ、ムコール・ミエヘイ（Mucor miehei）由来の市
販リパーゼ、市販洗剤配合リパーゼ（市販洗剤トップ
（ライオン（株）商品名）中より取得）について、市販
の漂白剤入り洗剤タイドウィズブリーチ，ウルトラアリ
エール，アタック，トップ，合成洗剤で洗浄試験を行
った。結果を表８に示した。洗浄評価は次のようにして
行った。本実施例で用いた水は、カルシウムイオンとし
て20ppm を加えた蒸留水を使用した。これに市販洗剤を
標準使用濃度、合成洗剤は1.5g/Lになるように溶解し
た。リパーゼはこの洗浄液に1U/ml となるように添加し
た。汚染布は、脱脂した綿布に、口紅を10mg/cm2となる
ように塗布し、乾燥（75℃・30分間、その後室温で一
晩）させたものを用いた。洗浄装置は、Terg-O-Tometer
を用いた。12cm×12cmの前記汚染布３枚を洗浄液１Ｌ
で、25℃，80rpm で20分間洗浄した。洗浄後、25℃の水
１Ｌで３分間ずつ２回すすぎを行った後、室温で乾燥さ
せた。酵素効果は、酵素添加，未添加でのΔＺの差ΔΔ
Ｚ（＝酵素添加のΔＺ値−酵素未添加のΔＺ値）で評価
した。また、比較的酵素効果の少ないアタックを用い、
漬け置き洗いでも評価した。漬け置きは、Terg-O-Tomet
er内で標準使用濃度の６倍濃度の洗浄剤溶液167ml に汚
染布を入れ、25℃に保ち、１時間後に６倍希釈し、以後
他と同様に洗浄を行った。なお、ΔＺは洗浄前後の汚染
布のＺ値の差（＝洗浄後のＺ値−洗浄前のＺ値）であ
る。また、Ｚ値はＣＩＥ色表系のＺ値であり、色彩色差
計を用いて測定した。また、標準使用濃度とは各々以下
の濃度を指す。 タイドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商品名） ０．１４％ ウルトラアリエール（Ｐ＆Ｇ商品名） ０．１０％ アタック（花王（株）商品名） ０．０６７％ トップ（ライオン（株）商品名） ０．０６７％
・ビスコサム（Chromobacter viscosum ）由来の市販リ
パーゼ、ムコール・ミエヘイ（Mucor miehei）由来の市
販リパーゼ、市販洗剤配合リパーゼ（市販洗剤トップ
（ライオン（株）商品名）中より取得）について、市販
の漂白剤入り洗剤タイドウィズブリーチ，ウルトラアリ
エール，アタック，トップ，合成洗剤で洗浄試験を行
った。結果を表８に示した。洗浄評価は次のようにして
行った。本実施例で用いた水は、カルシウムイオンとし
て20ppm を加えた蒸留水を使用した。これに市販洗剤を
標準使用濃度、合成洗剤は1.5g/Lになるように溶解し
た。リパーゼはこの洗浄液に1U/ml となるように添加し
た。汚染布は、脱脂した綿布に、口紅を10mg/cm2となる
ように塗布し、乾燥（75℃・30分間、その後室温で一
晩）させたものを用いた。洗浄装置は、Terg-O-Tometer
を用いた。12cm×12cmの前記汚染布３枚を洗浄液１Ｌ
で、25℃，80rpm で20分間洗浄した。洗浄後、25℃の水
１Ｌで３分間ずつ２回すすぎを行った後、室温で乾燥さ
せた。酵素効果は、酵素添加，未添加でのΔＺの差ΔΔ
Ｚ（＝酵素添加のΔＺ値−酵素未添加のΔＺ値）で評価
した。また、比較的酵素効果の少ないアタックを用い、
漬け置き洗いでも評価した。漬け置きは、Terg-O-Tomet
er内で標準使用濃度の６倍濃度の洗浄剤溶液167ml に汚
染布を入れ、25℃に保ち、１時間後に６倍希釈し、以後
他と同様に洗浄を行った。なお、ΔＺは洗浄前後の汚染
布のＺ値の差（＝洗浄後のＺ値−洗浄前のＺ値）であ
る。また、Ｚ値はＣＩＥ色表系のＺ値であり、色彩色差
計を用いて測定した。また、標準使用濃度とは各々以下
の濃度を指す。 タイドウィズブリーチ（Ｐ＆Ｇ商品名） ０．１４％ ウルトラアリエール（Ｐ＆Ｇ商品名） ０．１０％ アタック（花王（株）商品名） ０．０６７％ トップ（ライオン（株）商品名） ０．０６７％
【００５６】
【表８】
【００５７】本発明のリパーゼまたは本発明の洗浄剤組
成物を用いた洗浄では、洗浄剤溶液中での洗浄効果がリ
パーゼ無添加と従来のリパーゼ添加に比べて高い。実施
例５〜７の結果と比較すると、過酸化水素０．５％を含
む洗浄剤溶液中におけるパラニトロフェニルパルミテー
トの分解速度が過酸化水素を含まない洗浄剤溶液中に比
べて高いか、あるいは過酸化水素０．５５％を含む洗浄
剤溶液中での安定性が高いリパーゼであれば、洗浄剤溶
液中での洗浄効果が高い。さらに、実施例８の結果と比
較することにより高濃度の界面活性剤を含む洗浄剤溶液
中で活性の高い酵素は、特に漬置き洗いで顕著な洗浄効
果のあることが判った。
成物を用いた洗浄では、洗浄剤溶液中での洗浄効果がリ
パーゼ無添加と従来のリパーゼ添加に比べて高い。実施
例５〜７の結果と比較すると、過酸化水素０．５％を含
む洗浄剤溶液中におけるパラニトロフェニルパルミテー
トの分解速度が過酸化水素を含まない洗浄剤溶液中に比
べて高いか、あるいは過酸化水素０．５５％を含む洗浄
剤溶液中での安定性が高いリパーゼであれば、洗浄剤溶
液中での洗浄効果が高い。さらに、実施例８の結果と比
較することにより高濃度の界面活性剤を含む洗浄剤溶液
中で活性の高い酵素は、特に漬置き洗いで顕著な洗浄効
果のあることが判った。
【００５８】＜実施例１０＞５℃での洗浄評価 実施例９と同様に洗浄試験を行った。ただし、洗浄温度
を５℃とした。なお、クロモバクター・ビスコサム（Ch
romobacter viscosum ）由来の市販リパーゼ、ムコール
・ミエヘイ（Mucor miehei）由来の市販リパーゼ、市販
洗剤配合リパーゼについては、２５℃でも酵素効果がは
っきり見られないので本実施例から除外した。結果を表
９に示した。
を５℃とした。なお、クロモバクター・ビスコサム（Ch
romobacter viscosum ）由来の市販リパーゼ、ムコール
・ミエヘイ（Mucor miehei）由来の市販リパーゼ、市販
洗剤配合リパーゼについては、２５℃でも酵素効果がは
っきり見られないので本実施例から除外した。結果を表
９に示した。
【００５９】
【表９】
【００６０】５℃での洗浄では、リポマックスを用いた
場合はほとんど有効な活性が無くなっているが、ＳＤＬ
７１１〜ＳＤＬ７１８を用いたものでは有効な活性を有
している。また、活性の温度係数の小さいＳＤＬ７１２
〜ＳＤＬ７１８、特にＳＤＬ７１４〜ＳＤＬ７１８は２
５℃での洗浄と比べてΔΔＺ値の低下が少ない。
場合はほとんど有効な活性が無くなっているが、ＳＤＬ
７１１〜ＳＤＬ７１８を用いたものでは有効な活性を有
している。また、活性の温度係数の小さいＳＤＬ７１２
〜ＳＤＬ７１８、特にＳＤＬ７１４〜ＳＤＬ７１８は２
５℃での洗浄と比べてΔΔＺ値の低下が少ない。
【００６１】実施例５〜１０の結果より、本発明の酵素
は、洗浄剤溶液中の活性が高いリパーゼであり、且つ漂
白剤の影響を受けにくく、洗浄剤溶液中での洗浄効果が
高い。さらに、活性の温度係数の低い本発明の酵素が低
温での洗浄に有利であることが判った。
は、洗浄剤溶液中の活性が高いリパーゼであり、且つ漂
白剤の影響を受けにくく、洗浄剤溶液中での洗浄効果が
高い。さらに、活性の温度係数の低い本発明の酵素が低
温での洗浄に有利であることが判った。
【００６２】
【発明の効果】本発明の低温特性を有するリパーゼ、漂
白剤存在下の活性が高いリパーゼ、漂白剤存在下の安定
性が高いリパーゼ、高濃度ＬＡＳ存在下の活性が高いリ
パーゼは、漂白剤存在下において、低温でも油脂汚れを
分解除去でき、該リパーゼを含有する洗浄剤組成物を使
用することにより洗浄時の洗浄力増強を図ることが出来
る。また、本発明の至適ｐＨが１１以上のリパーゼ（Ｓ
ＤＬ７１４、ＳＤＬ７１５に代表される）は特に、それ
を配合した洗浄剤組成物の洗浄効果が高い。さらにま
た、本発明のシュードモナス・ステュツエリ（Pseudomo
nas stutzeri）SD711 株，SD712 株，SD713 株、シュー
ドモナス ｓｐ．（Pseudomonas sp.）SD714 株，SD715
株，SD716 株，SD717 株、アシネトバクター・バウマ
ニイ（Acinetobacter baumanni）SD718 株またはこれら
８株と菌学的に同等な菌株、及びこれらの変異株は、本
発明のリパーゼを効果的に生産するために有用であり、
これらを培養することを特徴とする本発明のリパーゼ生
産方法により、本発明のリパーゼを効率良く生産するこ
とができる。
白剤存在下の活性が高いリパーゼ、漂白剤存在下の安定
性が高いリパーゼ、高濃度ＬＡＳ存在下の活性が高いリ
パーゼは、漂白剤存在下において、低温でも油脂汚れを
分解除去でき、該リパーゼを含有する洗浄剤組成物を使
用することにより洗浄時の洗浄力増強を図ることが出来
る。また、本発明の至適ｐＨが１１以上のリパーゼ（Ｓ
ＤＬ７１４、ＳＤＬ７１５に代表される）は特に、それ
を配合した洗浄剤組成物の洗浄効果が高い。さらにま
た、本発明のシュードモナス・ステュツエリ（Pseudomo
nas stutzeri）SD711 株，SD712 株，SD713 株、シュー
ドモナス ｓｐ．（Pseudomonas sp.）SD714 株，SD715
株，SD716 株，SD717 株、アシネトバクター・バウマ
ニイ（Acinetobacter baumanni）SD718 株またはこれら
８株と菌学的に同等な菌株、及びこれらの変異株は、本
発明のリパーゼを効果的に生産するために有用であり、
これらを培養することを特徴とする本発明のリパーゼ生
産方法により、本発明のリパーゼを効率良く生産するこ
とができる。
【図１】ＳＤＬ７１１のｐＨプロファイル。
【図２】ＳＤＬ７１２のｐＨプロファイル。
【図３】ＳＤＬ７１３のｐＨプロファイル。
【図４】ＳＤＬ７１４のｐＨプロファイル。
【図５】ＳＤＬ７１５のｐＨプロファイル。
【図６】ＳＤＬ７１６のｐＨプロファイル。
【図７】ＳＤＬ７１７のｐＨプロファイル。
【図８】ＳＤＬ７１８のｐＨプロファイル。
【図９】ＳＤＬ７１１の温度プロファイル。
【図１０】ＳＤＬ７１２の温度プロファイル。
【図１１】ＳＤＬ７１３の温度プロファイル。
【図１２】ＳＤＬ７１４の温度プロファイル。
【図１３】ＳＤＬ７１５の温度プロファイル。
【図１４】ＳＤＬ７１６の温度プロファイル。
【図１５】ＳＤＬ７１７の温度プロファイル。
【図１６】ＳＤＬ７１８の温度プロファイル。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１１Ｄ 3/60 3:386 3:395） (Ｃ１１Ｄ 7/60 7:42 7:54） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (27)
- 【請求項１】 至適温度が４０℃以上にあり、１℃での
活性が３０℃における活性の２０％以上あるリパーゼ。 - 【請求項２】 オリーブ油エマルジョンを基質とし、
０．０２％の直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウ
ム（ＬＡＳ）を含む溶液中で測定した場合の活性がＬＡ
Ｓ無添加時の活性の２０％以上であるリパーゼであっ
て、下記の性質１）〜３）のうち少なくとも１つを有す
ることを特徴とするリパーゼ。 １）ＬＡＳ０．０４６％を含む２５℃の溶液中におい
て、過酸化水素０．５％存在下のパラニトロフェニルパ
ルミテートの分解速度が、過酸化水素非存在下の分解速
度の８０％以上である。 ２）ＬＡＳ０．０５％, 過酸化水素０．５５％を含む溶
液中で２５℃, １時間保持したとき、保持前に比べ５０
％以上の活性を有する。 ３）ＬＡＳ０．２％を含む２５℃の溶液中におけるパラ
ニトロフェニルパルミテートの分解速度が、ＬＡＳ０．
０２％を含む溶液中における分解速度の５０％以上であ
る。 - 【請求項３】 下記性質１）および／または２）を有す
る細菌由来のリパーゼ。 １）ＬＡＳ０．０４６％を含む２５℃の溶液中におい
て、過酸化水素０．５％存在下のパラニトロフェニルパ
ルミテートの分解速度が、過酸化水素非存在下の分解速
度の８０％以上である。 ２）ＬＡＳ０．０５％, 過酸化水素０．５５％を含む溶
液中で２５℃, １時間保持したとき、保持前に比べ５０
％以上の活性を有する。 - 【請求項４】 至適ｐＨが１１以上であるリパーゼ。
- 【請求項５】 下記の性質を有する請求項１〜４のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは8.5 〜12の範囲内にある。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は45〜65℃の範囲内にある。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は30,000±3,500 の範囲内である。 - 【請求項６】 下記の性質を有する請求項１〜４のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約54℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は２９，５００±３，０００である。 - 【請求項７】 下記の性質を有する請求項１〜４のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約50℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は２９，５００±３，０００である。 - 【請求項８】 下記の性質を有する請求項１〜４のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約10〜11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約52℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。 - 【請求項９】 下記の性質を有する請求項１〜４のいず
れか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約51℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。 - 【請求項１０】 下記の性質を有する請求項１〜４のい
ずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約9 〜10.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約60℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，５００±３，０００である。 - 【請求項１１】 下記の性質を有する請求項１〜４のい
ずれか記載のリパーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約 9.5〜11である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約55℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，０００±３，０００である。 - 【請求項１２】 下記の性質を有する請求項１記載のリ
パーゼ。 （１）作用 トリグリセリド等の高級脂肪酸エステルに作用して、そ
のエステルを加水分解する。 （２）基質特異性 各種グリセリド、エステルなどを広範囲にわたり加水分
解する。 （３）作用ｐＨおよび至適ｐＨ ｐＨ8.0 〜12.0の範囲で測定した場合の作用ｐＨは8.0
〜12.0であり、至適ｐＨは約10〜10.5である。 （４）作用温度および至適温度 1 〜65℃の範囲で測定した場合の作用温度は1 〜65℃、
至適温度は約46℃である。 （５）分子量 ＳＤＳー ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により得ら
れた分子量は３０，５００±３，０００である。 - 【請求項１３】 シュードモナス（Pseudomonas ）属細
菌またはアシネトバクター（Acinetobacter ）属細菌の
培養物より得られる請求項１〜１２のいずれか記載のリ
パーゼ。 - 【請求項１４】 シュードモナス（Pseudomonas ）属細
菌がシュードモナス・ステュツエリ（Pseudomonas stut
zeri）、または少なくともＳＤ７１４〜７１７のいずれ
か一つとＤＮＡハイブリダイゼーションにおいて７０％
以上のＤＮＡ相同性を示す細菌である請求項１３記載の
リパーゼ。 - 【請求項１５】 アシネトバクター（Acinetobacter ）
属細菌がアシネトバクター・バウマニイ（Acinetobacte
r baumanni）である請求項１３記載のリパーゼ。 - 【請求項１６】 シュードモナス・ステュツエリ（Pseu
domonas stutzeri）ＳＤ７１１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５
４４４）、ＳＤ７１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４
５）、ＳＤ７１３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４６）、シ
ュードモナスｓｐ．（Pseudomonas sp. ）ＳＤ７１４株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４７）、ＳＤ７１５株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５４４８）、ＳＤ７１６株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１５４４９）、ＳＤ７１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４５
０）、またはアシネトバクター・バウマニイ（Acinetob
acter baumanni）ＳＤ７１８株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５
５４）のいずれかの培養物より得ることのできる請求項
１〜１２のいずれか記載のリパーゼ。 - 【請求項１７】 請求項１〜１１のいずれか記載のリパ
ーゼを生産するシュードモナス（Pseudomonas ）属細
菌。 - 【請求項１８】 少なくともＳＤ７１４〜７１７のいず
れか一つとＤＮＡハイブリダイゼーションにおいて７０
％以上のＤＮＡ相同性を示すことを特徴とする請求項１
７記載のシュードモナス（Pseudomonas ）属細菌。 - 【請求項１９】 請求項１または１２記載のリパーゼを
生産するアシネトバクター（Acinetobacter ）属細菌。 - 【請求項２０】 シュードモナス・ステュツエリ（Pseu
domonas stutzeri）ＳＤ７１１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５
４４４）、ＳＤ７１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４
５）、ＳＤ７１３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４６）、も
しくはシュードモナスｓｐ．（Pseudomonas sp. ）ＳＤ
７１４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４７）、ＳＤ７１５株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１５４４８）、ＳＤ７１６株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５４４９）、ＳＤ７１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１５４５０）、またはこれら７株のいずれかと菌学的に
同等な菌株もしくはそれらの変異株。 - 【請求項２１】 請求項１７〜２０のいずれか記載の微
生物を培養することを特徴とするリパーゼの製造方法。 - 【請求項２２】 請求項１記載のリパーゼを含むことを
特徴とする洗浄剤組成物。 - 【請求項２３】 請求項２または３記載のリパーゼを含
むことを特徴とする洗浄剤組成物。 - 【請求項２４】 請求項４記載のリパーゼを含むことを
特徴とする洗浄剤組成物。 - 【請求項２５】 請求項５〜１２のいずれか記載のリパ
ーゼを含むことを特徴とする洗浄剤組成物。 - 【請求項２６】 請求項１３〜１６のいずれか記載のリ
パーゼを含むことを特徴とする洗浄剤組成物。 - 【請求項２７】 漂白剤を含むことを特徴とする請求項
２２〜２６のいずれか記載の洗浄剤組成物。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8096995A JPH09275977A (ja) | 1996-04-18 | 1996-04-18 | 新規リパーゼおよび洗浄剤組成物 |
| EP97919291A EP0917565A1 (en) | 1996-04-18 | 1997-04-17 | Alkaline lipase and detergent composition active at low temperature |
| CN97193788.5A CN1216062A (zh) | 1996-04-18 | 1997-04-17 | 低温下有活性的碱性脂酶和洗涤剂组合物 |
| AU23815/97A AU2381597A (en) | 1996-04-18 | 1997-04-17 | Alkaline lipase and detergent composition active at low temperature |
| PCT/DK1997/000168 WO1997040144A1 (en) | 1996-04-18 | 1997-04-17 | Alkaline lipase and detergent composition active at low temperature |
| JP9537611A JP2000508903A (ja) | 1996-04-18 | 1997-04-17 | 低温で活性なアルカリ性リパーゼ及び洗剤組成物 |
| US09/142,785 US6306813B1 (en) | 1996-04-18 | 1997-04-17 | Alkaline lipase and detergent composition active at low temperature |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8096995A JPH09275977A (ja) | 1996-04-18 | 1996-04-18 | 新規リパーゼおよび洗浄剤組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09275977A true JPH09275977A (ja) | 1997-10-28 |
Family
ID=14179784
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8096995A Pending JPH09275977A (ja) | 1996-04-18 | 1996-04-18 | 新規リパーゼおよび洗浄剤組成物 |
| JP9537611A Pending JP2000508903A (ja) | 1996-04-18 | 1997-04-17 | 低温で活性なアルカリ性リパーゼ及び洗剤組成物 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9537611A Pending JP2000508903A (ja) | 1996-04-18 | 1997-04-17 | 低温で活性なアルカリ性リパーゼ及び洗剤組成物 |
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|---|---|
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| EP (1) | EP0917565A1 (ja) |
| JP (2) | JPH09275977A (ja) |
| CN (1) | CN1216062A (ja) |
| AU (1) | AU2381597A (ja) |
| WO (1) | WO1997040144A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105802749A (zh) * | 2016-03-17 | 2016-07-27 | 中创宏远（北京）环保科技有限公司 | 一种含有微生物菌株的油污清洗剂及制备方法 |
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|---|---|---|---|---|
| EP2295555A3 (en) * | 2004-09-30 | 2011-08-10 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encodig same |
| DE102005037659A1 (de) | 2005-08-05 | 2007-02-22 | Henkel Kgaa | Verwendung von Esterasen zur Spaltung von Kunststoffen |
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