JPH09291032A - 急性および慢性の炎症性疾病の治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 特定のＮ−置換ニコチンアミドを投与するこ
とにより、ホスホジエステラーゼＩＶ型または腫瘍壊死
因子の産生を阻害して、ヒトを含む、哺乳類の急性慢性
炎症性疾病を治療すること。 【解決手段】 炎症を抑える量の下記式Ｉ 〔式中、Ｒ³は１−ピペリジル、１−（３−インドリ
ル）エチルなどを、Ｒ⁴はビシクロ〔２．２．１〕ヘプ
ト−２−イルなどを示す〕の化合物またはその医薬とし
て受け入れうる酸付加塩を哺乳動物に投与して、哺乳動
物、特にヒト、の炎症性疾病を治療する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトを含む、哺乳
類の急性慢性炎症性疾病を治療するために、あるＮ−置
換ニコチンアミド化合物とそれらの医薬として受け入れ
うる酸付加塩を用いることに関する。

【０００２】

【従来の技術】以下の構造式を持つＮ−３−（４−メト
キシベンジル）−２−［４−フルオロフェノキシ］ニコ
チンアミド

【化７】 およびその他のＮ−置換ニコチンアミド化合物は、米国
特許第４，８６１，８９１号、１９８９年８月２９日発
行、に示されている。本特許は、ホスホジエステラーゼ
ＩＶ型（ＰＤＥ−ＩＶ）の選択的阻害剤としてそのよう
な化合物を用いることについて示している。本特許は、
その全体を、ここに参照として取り入れる。

【０００３】Ｎ−３−メトキシベンジル−２−フェノキ
シニコチンアミドを含む、「式Ｉ化合物」として以下に
示すＮ−置換ニコチンアミド化合物は、Ｕ−９３７細胞
内でのＰＧＥ₁の誘発するｃＡＭＰ上昇の増強、ヒト好
酸球内でのロイコトリエンの合成阻害および仲介物質の
放出に有用である。また、これらの化合物は、ケナガイ
タチ内では、催吐性応答を減少させる。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、炎症を抑える
量の式Ｉ

【化８】 の化合物またはその医薬として許容しうる酸付加塩［式
中、 Ｒ³は，１−ピペリジル、１−（３−インドリ
ル）エチル、（Ｃ₁−Ｃ₄）−アルキル、フェニル、ベン
ジル、１−（１−フェニルエチル）、または置換基がク
ロロ、フルオロ、メチルまたはメトキシであり、該置換
基は芳香族環上にある、一置換ベンジルであり、Ｒ
⁴は、ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルまたは
式ＩＩ

【化９】 の基であり、（式中，Ｙは水素、フルオロまたはクロロ
であり、さらにＸは、水素、フルオロ、クロロ、メトキ
シ、トリフルオロメチル、シアノ、カルボキシ、メチル
カルバモイル、ジメチル−カルバモイルまたはカルボ
（Ｃ₁−Ｃ₄）アルコキシである）の基である］を哺乳類
に投与することからなる、哺乳動物、特にヒト、でのホ
スホジエステラーゼＩＶ型または腫瘍壊死因子の産生を
阻害する方法に関する。

【０００５】

【発明の実施の形態】本発明の望ましい実施態様は、Ｒ
³が１−ピペリジルまたは１−（３−インドイル）エチ
ルである化合物を投与する、炎症性疾病を治療する上記
の方法に関する。

【０００６】本発明のその他の望ましい実施態様は、Ｒ
³が１−（３−インドリル）エチルであり、Ｒ⁴がビシク
ロ［２．２．１］ヘプト−２−イルである化合物を投与
する、上記の望ましい実施態様に関する。

【０００７】本発明のその他の望まし実施態様は、Ｒ⁴
が式ＩＩ

【化１０】 （式中、Ｙは水素であり、かつＸはカルボ（Ｃ₁−Ｃ₄）
アルコキシである）である化合物を投与する、前述の望
ましい実施態様に関する。

【０００８】本発明のその他の望ましい実施態様は、Ｒ
³が１−ピペリジルであり、Ｒ⁴が

【化１１】 である化合物を投与する、前述の望まし実施態様に関す
る。

【０００９】本発明のその他の望ましい実施態様は、有
効な量の式Ｉ

【化１２】 の化合物およびその医薬として受け入れうる酸付加塩
［式中、Ｒ³は１−ピペリジル、１−（３−インドリ
ル）エチル、（Ｃ₁−Ｃ₄）−アルキル、フェニル、ベン
ジル，１−（１−フェニルエチル）または置換基がクロ
ロ、フルオロ、メチルまたはメトキシであり、該置換が
芳香族環上にあり、Ｒ⁴は、ビシクロ［２．２．１］ヘ
プト−２−イル、または式ＩＩ

【化１３】 （式中、Ｙは水素、フルオロまたはクロロであり、かつ
Ｘは、水素、フルオロ、クロロ、メトキシ、トリフルオ
ロメチル、シアノ、カルボキシ、メチルカルバモイル、
ジメチル−カルバモイルまたはカルボ（Ｃ₁−Ｃ₄）アル
コキシである）の基である］を、患者に投与することか
らなる、ぜん息、慢性気管支炎、アトピー性皮膚炎、じ
んま疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季
結膜炎、好酸球肉芽腫、乾セン、慢性関節リウマチ、敗
血症性ショック、潰瘍性大腸炎、心筋層および脳のクロ
ーン病再灌流損傷、慢性糸球体腎炎、内毒素性ショッ
ク、成人呼吸促進症候群、尿崩症、多発性硬化症および
中枢神経系障害、ならびにＴＮＦの産生を含むその他の
病気、からなる群より選択された症状を治療または予防
する上記の方法に関する。

【００１０】式Ｉ化合物およびそれらの医薬として受け
入れうる酸付加塩は、上記の米国特許第４，８６１，８
９１号に記載の方法に従って、製造した。

【００１１】ホスホジエステラーゼＩＶインヒビター
は、ぜん息、慢性気管支炎、アトピー性皮膚炎、じんま
疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季結膜
炎、好酸球肉芽腫、乾セン、慢性関節リウマチ、敗血症
性ショック、潰瘍性大腸炎、心筋層および脳のクローン
病再灌流損傷、慢性糸球体腎炎、内毒素性ショック、成
人呼吸促進症候群：を含む様々なアレルギー性および炎
症性の疾病の治療に有効である。さらに、ＰＤＥ−ＩＶ
インヒビターは、尿崩症、多発性硬化症ならびに、うつ
病および多発脳梗塞性痴呆のような中枢神経系障害の治
療に有用である。

【００１２】ホスホジエステラーゼＩＶ型インヒビター
は、腫瘍壊死因子の生成を阻害することが示された。ま
た、式Ｉ化合物は、ＴＮＦによるアップレギュレーショ
ンに感受性、または生体内で（ｉｎ ｖｉｖｏ）ＴＮＦ
生成を促進するようなウイルスによるウイルス感染症の
治療にも有用である。ここで治療の期待されるウイルス
とは、感染の結果としてＴＮＦを生産するようなウイル
ス、または、式ＩのＴＮＦインヒビターによって直接的
あるいは間接的に複製が減少することよる、阻害に感受
性なウイルスである。そのようなウイルスには、これら
に制限されるわけではないが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２
およびＨＩＶ−３、シトメガロウイルス（ＣＭＶ）、イ
ンフルエンザ、アデノウイルス、ならびに、これらに制
限されるわけではないが、帯状疱疹、単純疱疹のよう
な、ヘルペスウイルス群が含まれる。

【００１３】より具体的には、本発明は、ＴＮＦを阻害
するに有効な量の式Ｉ化合物を哺乳動物に投与すること
からなる、ヒト免疫欠損ウイルス（ＨＩＶ）に苦しむ哺
乳動物を治療する方法に関する。

【００１４】また、式Ｉ化合物は、ＴＮＦ生成を阻害す
る必要のある、ヒトというよりむしろ、動物の獣医学治
療に関連して用いられても良い。治療的にまたは予防的
に、治療される動物のＴＮＦ仲介疾病には、上記のよう
な疾病、その他には特定のウイルス感染による疾病状態
が含まれる。そのようなウイルスの例としては、これに
限定されるわけではないが、ネコの免疫不全ウイルス
（ＦＩＶ）、またはウマの感染性貧血ウイルス、ヤギの
関節炎ウイルス、ビスナウイルス、マエディウイルスお
よびその他のレンチウイルスのような、その他のレトロ
ウイルス感染が含まれる。

【００１５】また、式Ｉの化合物は、酵母や真菌の感染
の治療にも有用であり、そのような酵母および真菌は、
ＴＮＦによるアップレギュレーションに感受性である
か、または生体内でＴＮＦ生成を促進するであろう。治
療するに望ましい疾病状態は、真菌性髄膜炎である。さ
らに、式Ｉの化合物は、全身的な酵母真菌感染のために
選択されたその他の薬品と共に投与されて良い。真菌感
染のために選択された薬品には、これに制限されるわけ
ではないが、ポリマイシン（Ｐｏｌｙｍｙｃｉｎ）Ｂの
様なポリミキシンと呼ばれる化合物類；クロトリマゾー
ル、エコナゾール、ミコナゾールおよびケトコナゾール
の様なイミダゾールと呼ばれる化合物類；フルコナゾー
ルおよびイトラナゾールの様なトリアゾールと呼ばれる
化合物類；並びに、アンホテリシン、特にアンホテリシ
ンＢおよびリポゾームのアンホテリシンＢと呼ばれる化
合物類、が含まれる。

【００１６】式Ｉ化合物と共に共投与される坑真菌剤
は、当業者に熟知されているように、例えば様々なアン
ホテリシンＢ調合物のような、その化合物に望ましい任
意の組成物中にあって良い。式Ｉ化合物と共に投与され
る坑真菌剤は、同時に投与する、または実際問題として
は、連続方式であるが哺乳動物へ薬剤を分別投与する、
予定であってよい。特に、式Ｉ化合物は、特に全身的な
真菌感染では、アンホテリシンＢ調合物と共に共投与さ
れて良い。治療に適した生物体は、カンジダ（Ｃａｎｄ
ｉｄａ）生物体である。式Ｉ化合物は、同様の方式で、
坑ウイルス剤または坑細菌剤と共に、共投与されて良
い。

【００１７】また、式Ｉの化合物は、有効量の式Ｉ化合
物を、そのような治療を必要とする哺乳動物に投与する
ことによって、坑真菌剤、坑細菌剤または坑ウイルス剤
の毒性を阻害する、および／または、減少させるために
用いられても良い。望ましくは、式Ｉ化合物は、アンホ
テリシン類の化合物、特にアンホテリシンＢ、の毒性を
阻害するまたは減少させるために投与される。

【００１８】本発明の方法は、式Ｉ化合物ならびにそれ
らの医薬として受け入れ可能な酸塩およびその化合物の
溶剤およびその塩（下文では、まとめて「治療剤」と呼
ぶ）を、哺乳動物に投与することからなる。治療剤は、
該動物に、単独で、または望ましくは、医薬組成物中の
医薬として受け入れうる担体または希釈剤と共に組み合
わせて、標準的な薬学的操作に従って、投与することが
出来る。そのような投与は、経口、非経口および局所を
含む、様々な経路で行うことが出来る。ここで用いられ
る非経口投与には、制限するつもりはないが、筋肉内、
腹腔内、皮下および経皮投与が含まれる。一般的には、
治療薬の経口投与が望ましい。

【００１９】急性慢性の炎症性疾病の治療に用いるため
に、治療薬は、本発明に従って、約５ｍｇから約２５０
ｍｇ／日、望ましくは約２０ｍｇから約１２０ｍｇ／
日、の範囲の投薬量を、一度にまたは分割して、投与す
るのが最も望ましい。鼻腔内または呼吸器への投与で
は、投与量は、一般的に、０．１から１％（Ｗ／Ｖ）の
溶液として調合される。実際問題としては、医者が、患
者個人に最も適しているであろう正確な投与量を決定す
るであろう。その投与量は、年齢、体重、個々の患者に
よる応答により、変わるであろう。上記の投与量は平均
的な場合の典型であり、もちろん、より高いまたはより
低い投与量の範囲が正当である個体例もあり、それらの
投与量のすべては、本発明の態様の内にある。

【００２０】いくつかの例では、平均投与量範囲の下限
より少ない量を投与する場合が、適当な量を投与する場
合よりも数多いことがあり、反対に、他の場合には、よ
り多い量を投与することもあるが、一日を通しての投与
量がより少なくなるように最初に分割して投与されるの
で、いかなる有害な副反応をも起こす原因とはならな
い。

【００２１】経口投与のためには、クエン酸ナトリウ
ム、炭酸カルシウムおよびリン酸二カルシウムのような
賦形剤を含む錠剤が、デンプンおよび望ましくはジャガ
イモまたはタピオカのデンプン、アルギン酸ならびにあ
る複合ケイヒ酸のような様々な崩壊剤を加えて、ポリビ
ニルピロリドン、スクロース、ゼラチンおよびアカシア
のような結合剤と共に、用いて良い。さらに、これに制
限されるわけではないが、ステアリン酸マグネシウム、
ラウリル硫酸ナトリウムおよび滑石のような潤滑剤は、
時として、錠剤化のために非常に有用である。また、同
型の個体組成物は、柔らかく弾性のある、および硬く増
量されたゼラチンカプセル内で、増量剤として用いられ
ても良い。また、この結合物中の望ましい物質として
は、例として、制限するわけではないが、ラクトースま
たは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコールが
含まれる。水性懸濁液および／またはエリキシルが経口
投与に所望される場合、重要な活性成分は、水、エタノ
ール、プロピレングリコール、グリセリンおよびその様
々な組み合わせの様な希釈剤と共に、様々な甘味剤また
は香味剤、着色剤または染料および、所望されるなら
ば、乳化剤および／または懸濁剤、と組み合わせも良
い。

【００２２】非経口投与のためには、ゴマ油あるいはピ
ーナツ油または水性プロピレングリコール中の治療剤溶
液は、前に列挙した関連する水可溶性塩基塩の無菌水溶
液と同様に、用いられて良い。必要であれば、そのよう
な水溶液は適当な緩衝液であるべきであり、液体希釈剤
は、十分な塩類溶液またはグルコースで等張にした。こ
れらの特別な水溶液は、静脈内、筋肉内および皮下注射
の目的に特に適している。用いた無菌水性媒体は、当業
者に熟知されている標準的技術によって、容易に得られ
る。例えば、蒸留水は、通常、液体希釈剤として用いら
れ、最終調製物は、ガラスろ過器またはケイソウ土ある
いは上薬を用いない磁気フィルターの様な適当な細菌フ
ィルターを通す。この型の望ましいフィルターには、ベ
ルクフェルド（Ｂｅｒｋｅｆｅｌｄ）、チャンベルラン
ド（Ｃｈａｍｂｅｒｌａｎｄ）およびアスベストディッ
ク−メタルセイツ（ＡｓｂｅｓｔｏｓＤｉｓｋ−Ｍｅｔ
ａｌＳｅｉｔｚ）フィルターが含まれ、液体は、吸引ポ
ンプの助けを貸りて、無菌容器内へ吸引される。最終生
成物が無菌状態で得られることを保証するための必要な
手段は、これらの注射溶液を調製する間中、取られなけ
ればならない。

【００２３】経皮投与のためには、特定の治療剤の投与
形としては、例として、溶液、ローション、軟膏、クリ
ーム、ゲル、坐薬、速度制限支持遊離調合物および装置
が含まれて良い。そのような投与形は、特定の化合物か
らなり、エタノール、水、浸透強化剤およびゲル生成物
質のような不活性担体、鉱油、乳化剤、ベンジルアルコ
ール、ならびにその類似物が含まれて良い。具体的な経
皮流動強化組成物は、欧州特許出願第２７１，９８３号
および３３１、３８２号、それぞれ１９８８年６月２２
日および１９８９年９月６日公告、に開示されている。
これらの出願は、それらの全体をここに参照として取り
入れる。

【００２４】ＰＤＥ−ＩＶを阻害し、催吐性活性を減少
させる、式Ｉ化合物の能力は、それぞれ、以下のプロト
コールに記載の方法に従って、決定されて良い。

【００２５】

【実施例】ホスホジエステラーゼＩＶ型（ＰＤＥ−ＩＶ）の阻害 ヒト組換えＰＤＥ−ＩＶは、バクロウイルス（Ｂａｃｕ
ｌｏｖｉｒｕｓ）／ＳＦ−９細胞システム（Ｐｏｌｌｏ
ｋ，Ｂ．，Ｆｕｏｇ，Ｅ．，Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｍ．，Ｆ
ｉｓｈｅｒ，Ｄ．，Ｕｍｌａｎｄ，Ｊ．，Ｐｉｌｌａ
ｒ，Ｊ．およびＣｈｅｎｇ，Ｊ．：ヒトのホスホジエス
テラーゼ（ＰＤＥ）ＩＶイソ酵素のバクロウイルスでの
発現：哺乳動物および細菌発現システム内でのｒＰＤＥ
−ＩＶの比較。バクロウイルスおよび昆虫細胞での遺伝
子発現会議、Ｐｉｎｅｈｕｒｓｔ，Ｎ．Ｃ．，１９９５
年３月２６ー３０日）内で発現させた。ＳＦ−９細胞溶
菌物は、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）を加水分解す
る能力を持ち、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）には効
果がない。これらの酵素の反応速度論分析では、ｃＡＭ
Ｐを加水分解するミカエリス定数、Ｋｍ、は、０．５−
４μＭの範囲であることが示された。酵素は、塩化マグ
ネシウムに感受性であり、標準的ＰＤＥ−ＩＶ阻害剤
（ｒｏｌｉｐｒａｍ）によって阻害された。これらの調
製物は、ＰＤＥ−ＩＶを阻害する試験化合物の能力を高
めるために用いた。

【００２６】試験化合物の調製：化合物は、メチルスル
ホキシド中に濃度が１０^-2Ｍになるように溶解し、次い
で水で１：２５に希釈した（４Ｘ１０^-4Ｍ化合物、４％
メチルスルホキシド）。さらに、一連の希釈を４％メチ
ルスルホキシドで行い、所望の濃度にする。アッセイチ
ューブ内での最終的なメチルスルホキシド濃度は、１％
であった。

【００２７】以下の物を、４゜Ｃで１２Ｘ７５ｍｍガラ
ス管中に順々に加えた。試料はそれぞれ３通りづつ作っ
た：（濃度はすべて、アッセイチューブ中の最終濃度で
示されている） ２５μＭ 化合物またはメチルスルホキシド（１％、対
照およびブランク用） ２５μｌ アッセイバッファー（５０ｍＭトリス、１０
ｍＭ塩化マグネシウム，ｐＨ７．５） ２５μｌ ［３Ｈ］−ｃＡＭＰ（１μＭ） ２５μｌ ＰＤＥ−ＩＶ酵素（ブランク用には、酵素は
沸騰水浴中で１０分間前もってインキュベーションす
る） 反応チューブは、１０から３０分間水浴（３７゜Ｃ）中
に置いてしんとうし、沸騰水浴中に２分間置くことによ
って反応を停止させた。洗浄用バッファー（０．５ｍ
ｌ、０．１Ｍ−ＨＥＰＥＳ／０．１Ｍ塩化ナトリウム、
ｐＨ８．５）は、氷浴中のチューブのそれぞれに加え
た。それぞれのチューブの含有物は、前もって洗浄用バ
ッファーで平衡化したＡｆｆｉ−Ｇｅｌ６０カラム（ホ
ウ酸塩アフィニティーゲル、１．２ｍｌベッド容量）に
適用した。［³Ｈ］ｃＡＭＰは、２Ｘ６ｍｌの洗浄用バ
ッファーで洗浄し、次いで［³Ｈ］５’ＡＭＰは、０．
２５Ｍ酢酸６ｍｌで溶出した。渦巻きかくはん後、溶出
物１ｍｌは、適当なバイアル中のアトムライト（Ａｔｏ
ｍｌｉｇｈｔ）シンチレーション用液体３ｍｌに加え、
渦巻きかくはんし、［³Ｈ］を計数した。

【００２８】阻害％は、次式により決定した：

【００２９】

【式１】 ＩＣ₅₀は、［³Ｈ］ｃＡＭＰから［³Ｈ］５’ＡＭＰへの
加水分解の５０％を阻害する化合物の濃度と定義する。

【００３０】ある実験では、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（Ｔｈ
ｏｍｐｓｏｎ ＪＷ、Ｂｒｏｋｋｅｒ ＧおよびＡｐｐ
ｌｅｍａｎ ＭＭ：「放射活性基質を用いたサイクリッ
クヌクレオチドホスホジエステラーゼのアッセイ」、Ｍ
ｅｃｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｕｍｏｌｏｇｙ，３８：２
０５−２１２、１９７４）によって報告された方法と同
様の一段階からなる酵素アッセイを用いることによっ
て、ＰＤＥ−ＩＶ阻害について試験化合物を評価した。

【００３１】化合物のサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）
上昇の評価 連続培養で増殖させたヒトＵ９３７細胞を得、Ｓｏｒｖ
ａｌｌＲＴ６０００Ｂを用い、１４００ｒｐｍ、２２゜
Ｃで５分間、回転させた。上澄み液をデカンテーション
で除き、細胞ペレットをＲＰＭＩ１６４０細胞培養液＋
２％ウシ胎児血清（以下ＦＢＳと表す）に再懸濁した。
細胞を計数し、生存度は血球計数器を用いて調べた。適
当な容量のＲＰＭＩ＋２％ＦＢＳを細胞懸濁液に加え、
細胞濃度を１０⁶細胞／ｍｌにした。５００μｌ（５Ｘ
１０⁵細胞）の懸濁液を、１つの試験化合物（５μｌ）
を含む１２Ｘ７５ｍｍのガラス管に加えた（試験は同様
の物を２通りまたは３通り作製して行った）。この混合
液は３７゜Ｃに１５分間インキュベートした。１μｌの
ＰＧＥ１を加え、さらに１５分間インキュベートした
後、試験管は沸騰水浴中に１０分間置いた。

【００３２】試験管は、ＳｏｒｖａｌｌＲＴ６０００Ｂ
を用いて３７００ｒｐｍで１０分間回転させた。１０μ
ｌの上澄み液を注意深くサンプリングし、ラジオイムノ
アッセイ（以下ＲＩＡと表す）に用いた。ｃＡＭＰ−Ｒ
ＩＡキット（ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ
ｃａｔ ｎｏ．ＮＥＫ−０３３）を用いて、それぞれ
の試験管中のｃＡＭＰを定量した。実験は、キットに付
けられているＲＩＡマニュアルに記載されている、非ア
セチル化アッセイの方法に従って、行った。

【００３３】ｃＡＭＰ値は、希釈度および細胞濃度で補
正して、１Ｘ１０⁶細胞当たり生産されるｃＡＭＰ（ピ
コモル）で表した。また、それぞれのサンプルの平均値
＋／−標準誤差（適用可能な場合）も計算した。化合物
力価は、二種類の測定値（ＥＣ５０またはＰＣ５０）の
内のどちらかを計算した。ＥＣ５０は、ベースライン応
答消去後の任意の最大応答の５０％を生成する化合物濃
度（例えば、１０μＭのロリプラムによって生成される
ｃＡＭＰ濃度）である。ＰＣ５０は、ベースライン応答
消去後のその化合物の最大応答の５０％を生成する化合
物濃度である。ＰＣ５０計算のためには、試験化合物の
最大応答は、ベースライン応答の少なくとも１５０％な
くてはならない。

【００３４】化合物によるＥＤＮ／ＬＴＥ₄生成の阻害 １００ｍｌの血液を、健康なドナーから得、バクテナー
チューブ（Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ ｔｕｂｅ）＃６４８
０（１４３ＵＳＰユニットヘパリンナトリウム、１０ｍ
ｌドロー）に入れた。ヘパリン化した全血液を、室温
で、シリコン化ガラスビーカーまたは５０ｍｌのコニカ
ル遠心管にプールした。全血液スメアは、ディッフクイ
ック（Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ）法を用いて作製し、全単
核白血球と比較した好酸球％を定量した。１ｍｌの全血
液は、１μｌのメチルスルホキシドまたは１μｌの１０
００Ｘ試験化合物を含む１２Ｘ７５ｍｍのポリプロピレ
ンまたはシリコン化ガラスチューブ中に置いた（サンプ
ルは同様の物を３通り作製した）。渦巻き攪拌した後、
チューブは３７゜Ｃの振とう水浴中に１５分間置いた。
メチルスルホキシド中の１μｌのＰＧＥ１は、ＰＧＥ１
の最終濃度が１μＭまたは０．１μＭになるように、全
チューブに加えた。渦巻き攪拌した後、１００μｌのＰ
ＢＳ（負対照）またはセファデックスＧ−１５ビーズ／
ＰＢＳ（最終濃度８．２５から１６．５ｍｇ／ｍｌ）を
チューブに加えた。渦巻き攪拌した後、全チューブを３
７゜Ｃの振とう水浴中に１から２時間インキュベートし
た。

【００３５】インキュベーション終了後、２０μｌの１
５％エチレンジアミンテトラ酢酸／ＰＢＳをそれぞれの
アッセイチューブに加え、最終濃度を０．３％とした。
渦巻き攪拌した後、全アッセイチューブを２０００ｒｐ
ｍ、２２゜Ｃで５分間、遠心分離した。

【００３６】全血漿上澄み液は、ＥＤＮレベルについて
試験した。ＥＰＸ−ＲＩＡは、キット製造者の説明書
（Ｋａｂｉ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉ
ｃｓ）に従って、勧告された量（例えば、１０μｌの未
知サンプル量）より少ない５倍全量で、行った。ＥＤＮ
およびＥＰＸは、同一タンパク質であることが示された
（Ｄａｈｌら、Ａｓｔｈｍａ：Ｂａｓｉｃ Ｍｅｃｈａ
ｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍａｎａｇｅ
ｍｅｎｔ、第二版、１１２頁、１９９２）。ＥＤＮレベ
ルは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌまたはその他の
適当なソフトウェアを用いて、標準曲線と比較して計算
され、ｎｇ／ｍｌで表される。対照ＥＤＮ放出％は、次
式： 対照ＥＤＮ％＝（サンプルＥＤＮ−ブランクＥＤＮ）／
（全ＥＤＮ−ブランクＥＤＮ） 式中、ブランクＥＤＮは、セファデックスＧ−１５非存
在下での放出ＥＤＮであり、全ＥＤＮは、セファデック
スＧ−１５存在下でのＥＤＮ放出である：によって計算
される。適応できる範囲で、試験化合物についてのＩＣ
３０は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌまたはその他
の適当なソフトウェアを用いて、決定する。

【００３７】ＬＴＥ４酵素イムノアッセイ（ＥＴＡ） 全血漿上澄み液は、ＬＴＥ４レベルについて試験した。
ＬＴＥ４ ＥＩＡは、キット製造者の説明書（Ｃａｙｍ
ａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）に従って、未知の血漿サンプ
ルを１０倍のＥＩＡバッファーで希釈して、行った。キ
ットに提供された以外のＬＴＥ４標準を用いても良い
（例えば、Ｂｉｏｍｏｌ）。ＬＴＥ４レベルは、Ｍｉｃ
ｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌまたはその他の適当なソフト
ウェアを用いて、標準曲線と比較することによって計算
し、ｎｇ／ｍｌで表した。対照ＬＴＥ４放出％は、次
式： 対照ＬＴＥ４（％）＝（サンプルＬＴＥ４−ブランクＬ
ＴＥ４）／（全ＬＴＥ４−ブランクＬＴＥ４） 式中、ブランクＬＴＥ４は、セファデックスＧ−１５非
存在下で放出されたＬＴＥ４であり、全ＬＴＥ４は、セ
ファデックスＧ−１５存在下で放出されたＬＴＥ４であ
る：によって計算される。適応できる範囲で、試験化合
物についてのＩＣ５０は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃ
ｅｌまたはその他の適当なソフトウェアを用いて、決定
する。

【００３８】化合物の嘔吐活性の評価 ５匹の雄のケナガイタチに試験化合物を投与（経口また
は静脈内のいずれか）し、次に、一匹づつプレクシグラ
スの檻に入れた。経口投与用のベヒクルは、蒸留水３ｍ
ｌ中の２％Ｔｗｅｅｎ８０であった。静脈内投与用のベ
ヒクルは、３ｍｌの蒸留水であった。

【００３９】研究期間中（典型的には６０分間）、動物
を継続的に観察した。次の行動を得点として記録した：
（１）嘔吐発生、（２）むかつき（声門閉鎖に対して周
期的腹部収縮が起こらない）、（３）むかつき、動物は
開口して声門を閉鎖して声を振り絞る（周期的腹部収縮
を含まない）。個々の動物について、それぞれの行為
数、および嘔吐発生時間を記録した。その他の行為も同
様に記録して良い。

【００４０】ケナガイタチは、７日間は再び研究に用い
なかった。ＰＤＥ−ＩＶ阻害剤、ロリプラム、を用いて
の研究は、ケナガイタチは、毎週、３回嘔土刺激にさら
したが、４週目に塩類溶液に対して嘔土を示さないこと
が、示された。週１度、４週間ロリプラムにさらした
後、ケナガイタチは、５週目に、塩類溶液テストに対し
て予想された嘔吐を示した。それ故、このスクリーニン
グに用いられた動物は、３回嘔吐刺激にさらされただけ
で、その後、それらの動物はコロニーから除かれた。

【００４１】血漿中の薬剤レベルが必要な場合には、動
物にＲｏｍｐｕｍ ａｎｄ Ｋａｔａｍｉｎｅで麻酔を
かけ、次いで、標準心臓穿刺技術を用いて、心臓から１
ｍｌの血液を吸引した。

【００４２】データは、５匹の動物群中の嘔吐およびむ
かつきを示した動物の数で表した。動物総数対嘔吐また
はむかつきを示した動物の比率は、［（嘔吐数／試験群
中の総数）Ｘ１００］として計算した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/455 ＡＢＭ Ａ６１Ｋ 31/455 ＡＢＭ ＡＢＮ ＡＢＮ ＡＣＤ ＡＣＤ ＡＣＦ ＡＣＦ ＡＣＪ ＡＣＪ ＡＣＶ ＡＣＶ ＡＤＡ ＡＤＡ ＡＥＤ ＡＥＤ // Ｃ０７Ｄ 213/82 Ｃ０７Ｄ 213/82 401/12 ２０９ 401/12 ２０９ (Ｃ０７Ｄ 401/12 209:08 213:82） (72)発明者 アンソニー・マーファット アメリカ合衆国コネチカット州06355，ミ スティック，ランターン・ヒル・ロード 333 (72)発明者 ジョン・ダブリュー・ワトソン アメリカ合衆国コネチカット州06339，レ ッドヤード，クランウッド・ロード 13

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 炎症を抑える量の式Ｉ 【化１】 の化合物またはその医薬として受け入れうる酸付加塩
   ［式中、Ｒ³は、１−ピペリジル、１−（３−インドリ
   ル）エチル、（Ｃ₁−Ｃ₄）−アルキル、フェニル、ベン
   ジル、１−（１−フェニルエチル）、または、置換基が
   クロロ、フルオロ、メチルあるいはメトキシであり、該
   置換基が芳香族環上にある、一置換ベンジルであり、 Ｒ⁴は、ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルまた
   は式ＩＩ 【化２】 （式中、Ｙは、水素、フルオロまたはクロロであり、か
   つＸは、水素、フルオロ、クロロ、メトキシ、トリフル
   オロメチル、シアノ、カルボキシ、メチルカルバモイ
   ル、ジメチル−カルバモイルまたはカルボ（Ｃ₁−Ｃ₄）
   アルコキシである）の基である］を、哺乳動物に投与す
   ることからなる、哺乳動物、特にヒト、でのホスホジエ
   ステラーゼＩＶ型または腫瘍壊死因子の産生を阻害する
   方法。
2. 【請求項２】投与される化合物のＲ³が１−ピペリジル
   または１−（３−インドリル）エチルである、請求項１
   記載の方法。
3. 【請求項３】投与される化合物のＲ³が１−（３−イン
   ドリル）エチルであり、Ｒ⁴がビシクロ［２．２．１］
   ヘプト−２−イルである、請求項１記載の方法。
4. 【請求項４】投与される化合物のＲ⁴が式ＩＩ 【化３】 （式中、Ｙは水素であり、Ｘはカルボ（Ｃ₁ーＣ₄）アル
   コキシである）である、請求項１記載の方法。
5. 【請求項５】投与される化合物のＲ³が１−ピペリジル
   であり、Ｒ⁴が 【化４】 である、請求項１記載の方法。
6. 【請求項６】有効量の式Ｉ 【化５】 の化合物およびその医薬として受け入れうる酸付加塩
   ［式中、Ｒ³は１−ピペリジル、１−（３−インドリ
   ル）エチル、（Ｃ₁−Ｃ₄）−アルキル、フェニル、ベン
   ジル、１−（１−フェニルエチル）または置換基がクロ
   ロ、フルオロ、メチルまたはメトキシであり、該置換基
   が芳香族環上にある一置換ベンジルであり、 Ｒ⁴は、ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルまた
   は式ＩＩ 【化６】 （式中、Ｙは水素、フルオロ、またはクロロであり、か
   つＸは水素、フルオロ、クロロ、メトキシ、トリフルオ
   ロメチル、シアノ、カルボキシ、メチルカルバモイル、
   ジメチル−カルバモイルまたはカルボ（Ｃ₁−Ｃ₄）アル
   コキシである）の基である］を患者に投与することから
   なる、ぜん息、慢性気管支炎、アトピー性皮膚炎、じん
   ま疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季結
   膜炎、好酸球肉芽腫、乾セン、慢性関節リウマチ、敗血
   症性ショック、潰瘍性大腸炎、心筋層および脳のクロー
   ン病再灌流損傷、慢性糸球体腎炎、内毒素性ショック、
   成人呼吸促進症候群、尿崩症、多発性硬化症および中枢
   神経系障害ならびにＴＮＦの生成を含むその他の病気か
   らなる群より選択された症状を治療または予防する、請
   求項１記載の方法。