JPH093019A - アミド誘導体およびそれを含有する医薬製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】２−（２,５−ジメトキシシンナモイルアミ
ノ）チアゾールなどの下記一般式（１）で示されるアミ
ド誘導体およびそれを含有する医薬製剤。 【化１】 式１中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、同一または異なって、水
素、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、アリール
オキシ基を示し、Ａｒは、アリール基、ｎは０または１
の整数を示す。 【効果】平滑筋細胞に対する増殖抑制作用を有し、血管
壁肥厚防止薬として有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、平滑筋細胞、腎メサン
ジウム細胞、線維芽細胞等の数種の中胚葉系細胞の増殖
抑制作用を有し、ＰＴＣＡ後の再狭窄、慢性糸球体腎炎
等に代表される炎症性並びに細胞増殖性線維硬化症を有
効に治療しうるアミド誘導体、およびそれを含有する医
薬製剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】狭心症、心筋梗塞等における病態の発症
は、それに先行して生じる冠動脈硬化症が大きな原因で
あることが知られている。動脈硬化によって生じる内腔
の狭小化や血管の弾性消失が、心筋組織への栄養および
酸素不足をもたらし、上記病態を誘導する。血管内腔の
狭小化は、泡沫化マクロファージやコレステロールの内
壁への蓄積に加え、血管中膜平滑筋細胞の内膜への遊
走、内膜での増殖によって生じる細胞繊維性内膜肥厚が
その大きな原因であると言われている。近年、狭窄像を
呈する動脈硬化血管を外科的に治療する方法として、経
皮的冠動脈拡張術（Percutaneous Transluminal Corona
ry Angioplasty:PTCA)が普及しつつある。ＰＴＣＡ術は
大腿動脈などからバルーンカテーテルを遠隔的に挿入し
てゆき、狭窄部でバルーンを膨らませ、物理的に血管を
拡張させるものである。

【０００３】しかし、この治療法の最大の問題点は、施
行後３〜６ヶ月で、施行例の３０〜５０％に再び狭窄が
起きることである（Spencer B.King;Am.J.Candiol,198
7,60(3),1B）。この再狭窄は、コレステロールの沈着は
観察されず、むしろそのほとんどを平滑筋細胞やこの細
胞が産生する細胞間マトリックスによって構成された、
いわゆる細胞線維性内膜肥厚である。従って、ＰＴＣＡ
術後の再狭窄防止、ひいては動脈硬化の治療法として
は、血管内腔で生じる平滑筋細胞の遊走、増殖を抑制す
ることが有効である。現在のところ、そのような従来技
術としては特許公報特開平６−１３５８２９号、特許公
報特開平６−３０５９６６号が報告されているが、平滑
筋細胞の増殖をより強く抑制する活性物質の出現が強く
望まれている。

【０００４】同様に慢性腎炎においても糸球体内でメサ
ンジウム細胞の増殖並びに細胞間マトリックス増生が腎
硬化をもたらし、腎機能低下を引き起こす原因であるこ
とが知られている。そのほか、肝線維症では間葉系細胞
の星細胞の増殖並びにコラーゲンの異常産生が、肺線維
症、腹膜透析時に生じる腹膜肥厚においても炎症後に生
じる線維芽細胞の異常増殖並びに細胞間マトリックス増
生が病態の原因であると言われている。そのためこれら
細胞の異常増殖並びに細胞間マトリックス増生を有効に
治療しうる薬剤の開発が切望されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、ＰＴ
ＣＡ術後の再狭窄防止薬、自家血管および人工血管移植
後の再狭窄防止薬ひいては動脈硬化の治療薬および予防
薬として有用である化合物およびこれを有効成分とする
血管壁肥厚防止薬を提供することを目的とする。加えて
同様に炎症によって誘導される細胞増殖並びに細胞間マ
トリックスの増生に起因する線維症あるいは線維性硬化
症治療に有効な化合物としても提供する。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、新規のア
ミド誘導体に関し、それらの薬理活性を鋭意検討した結
果、驚くべくことに本発明のアミド化合物が、ＰＤＧＦ
によって惹起される培養平滑筋細胞の増殖作用を特異的
に抑制することを見い出し、本発明を完成させた。前記
本発明とは以下の通りである。

【０００７】下記一般式（１）で示されるアミド誘導体
である。

【０００８】

【化２】

【０００９】（式１中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃は、同一または
異なって、水素、アルキル基、アルコキシ基、アリール
基、アリールオキシ基を示し、Ａｒは、アリール基、ｎ
は０または１の整数を示す。）

【００１０】また、本発明は上記のアミド誘導体を含有
してなる医薬製剤である。また、本発明は上記のアミド
誘導体を含有してなる血管壁肥厚防止薬である。

【００１１】本明細書において「アルキル」とは、直鎖
状または分岐鎖基を意味し、これにはメチル基、エチル
基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｓｅｃ−
ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチ
ル基、イソペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オク
チル基、ノニル基、デシル基などが含まれるが、これら
に限定されるものではない。

【００１２】本明細書において「アルコキシ」とは、−
ＯＲ₄（ Ｒ₄はアルキル基）を意味し、これには、メト
キシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ
基、ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、イソブトキシ
基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基などが含まれるが、これらに
限定されるものではない。

【００１３】本明細書において「アリール」とは、置換
または非置換の炭素環式または複素環式芳香族基（置換
基は、ハロゲノ基、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、
アルコキシ基、およびハロゲン置換アルキル基から選ば
れる）を意味し、これにはフェニル基、１−または２−
ナフチル基、２−、３−または４−ピリジル基、２−ま
たは３−フリル基、２−４−または５−チアゾリル基な
どが含まれるが、これらに限定されるものではない。

【００１４】本明細書において「アリールオキシ」と
は、−ＯＲ₅（Ｒ₅はアリール基）を意味し、これにはフ
ェノキシ基、１−ナフトキシ基、２−ナフトキシ基など
が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【００１５】本明細書において「ハロゲン」とは、フッ
素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子に由来する基
を意味する。

【００１６】本明細書において「ハロゲン置換アルキ
ル」とは、１またはそれ以上のハロゲンで置換された上
記アルキル基を意味し、これにはクロロメチル基、トリ
フルオロメチル基、２,２−ジフルオロエチル基などが
含まれるが、これらに限定されるものではない。

【００１７】本発明の化合物は、いずれも文献未載の新
規化合物であり、一般式（１）で表される化合物は、例
えば下記一般式（２）で表されるカルボン酸誘導体に、
カルボン酸活性化剤を反応させてカルボキシル基におけ
る反応性誘導体に導き、ついで、下記一般式（３）で表
されるアミン誘導体と反応させることによって製造する
ことができる。

【００１８】

【化３】

【００１９】（式２中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、ｎは前記一般
式（１）と同じ意味を持つ。）

【００２０】

【化４】

【００２１】（式３中、Ａｒは前記一般式（１）と同じ
意味を持つ。）

【００２２】カルボン酸誘導体（２）とカルボン酸活性
化剤との反応において、カルボン酸活性化剤としては、
例えば塩化チオニル、五塩化リン、クロロギ酸エステル
（クロロギ酸メチル、クロロギ酸エチル）、塩化オキサ
リル、カルボジイミド類（例えば、Ｎ,Ｎ′−ジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳ
Ｃ））などがあげられるが、カルボジイミド類とＮ−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール、４−ジメチルアミノピリ
ジンまたはヒドロキシコハク酸イミドを併用してもよ
い。この反応は通常、例えば塩化メチレン、クロロホル
ムなどのハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン
（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジメチルエーテル、ジエチル
エーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類、
Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセト
アミドまたはこれらの混合溶媒などの存在下に行われ
る。反応温度は通常−１０℃〜５０℃である。

【００２３】この反応において、カルボン酸活性化剤と
して、塩化チオニル、塩化オキサリルまたは五塩化リン
を用いた場合は反応性誘導体として酸ハロゲン化物が得
られ、カルボン酸活性化剤としてクロロギ酸エステルを
用いた場合には反応性誘導体とした混合酸無水物が得ら
れ、またカルボン酸活性化剤としてカルボジイミド類を
用いた場合には反応性誘導体として活性エステルが得ら
れる。

【００２４】カルボン酸誘導体（２）のカルボキシル基
における反応性誘導体とアミン誘導体（３）との反応
は、該反応誘導体が酸ハロゲン化物である場合は例えば
塩化メチレン、テトラヒドロフラン、アセトンなどの溶
媒中、脱酸剤（ピリジン、トリエチルアミン、炭酸カリ
ウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウムなど）の
存在下に無水または含水条件下に行なわれる。反応温度
は−５０℃〜１００℃、好ましくは−１０℃〜３０℃で
ある。該反応性誘導体が活性エステルまたは混合酸無水
物である場合はカルボン酸誘導体（３）のカルボン酸活
性化剤との反応で用いた溶媒と同様な溶媒中で行うこと
ができる。この場合の反応温度は通常０〜３０℃で反応
時間は通常１〜５時間である。このように製造されるア
ミド誘導体（１）は、自体公知の分離、精製手段（例え
ば、クロマトグラフィー、再結晶）などにより単離採取
することができる。

【００２５】本発明のアミド誘導体は場合によっては薬
学的に許容しうるその塩であっても良く、例えばナトリ
ウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム
塩やマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アンモ
ニウム塩、有機塩基との塩、例えばトリエチルアミン
塩、ピリジン塩、トロメタミン塩、ジシクロヘキシルア
ミン酸塩、ギ酸塩、トルエンスルホン酸塩、トリフルオ
ロ酢酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩等や、アルギニン、
リジン、アスパラギン酸などのアミノ酸塩等が挙げられ
る。

【００２６】本発明のアミド誘導体は、血管壁肥厚防止
薬として経口的にも非経口的（例えば、静脈内、筋肉
内、皮下）にも投与するこができる。本発明の有効成分
化合物の投与量は、患者の年齢、体重、症状によって異
なるが、通常、１日当たり約０.１〜１０００mg／kg、
好ましくは１〜１００mg／kgを１〜３回に分けて投与す
る。

【００２７】本発明の化合物は有効成分もしくは有効成
分の１つとして単独または製剤担体と共に公知の製剤技
術によって錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ
剤、水剤、懸濁剤、注射剤、点眼剤、もしくは座剤等の
投与に適した任意の製剤形態をとることができる。具体
的な製剤担体としては、でんぷん類、ショ糖、乳糖、メ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロース、結晶セ
ルロース、アルギン酸ナトリウム、リン酸水素カルシウ
ム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、無水ケイ酸、
および合成ケイ酸アルミニウム等の賦形剤、ヒドロキシ
プロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ース、ゼラチンおよびポリビニルピロリドン等の結合
剤、カルボキシメチルセルロースカルシウム、架橋カル
ボキシメチルセルロースナトリウムおよび架橋ポリビニ
ルピロリドン等の崩解剤、ステアリン酸マグネシウムお
よびタルク等の滑沢剤、セルロースアセテートフタレー
ト、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサ
クシネート、メタアクリル酸およびメタアクリル酸メチ
ルコーポリマー等の被覆剤、ポリエチレングリコール等
の溶解補助剤、ラウリル硫酸ナトリウム、レシチン、ソ
ルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンセチルエ
ーテル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬
化ヒマシ油およびグリセリルモノステアレート等の乳化
剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、緩衝剤、保湿剤、防腐
剤、カカオ脂およびウイテブゾールＷ３５等の基剤をあ
げることが出来る。

【００２８】

【実施例】次に実施例、試験例をあげて本発明をさらに
詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例、試験例に
限定されるべきものではない。

【００２９】（実施例１）２−（２,５−ジメトキシシンナモイルアミノ）チアゾ
ールの合成 ２−アミノチアゾール（１.２０ｇ，１２mmol）のＮ,Ｎ
−ジメチルホルムアミド（２０ml）溶液に、２,５−ジ
メトキシけい皮酸（２.０８ｇ，１０mmol）を加える。
さらに１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド塩酸塩（１.９１ｇ，１０mmol）と
ジメチルアミノピリジン（１２２mg，１mmol）を加え、
室温で２４時間攪拌した。反応液に水を加え酢酸エチル
で抽出した。酢酸エチル層は水および飽和塩化ナトリウ
ム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶
媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルクロマトグ
ラフィーに付し、１％メタノール−クロロホルムの溶出
画分より下記式（４）にその構造を示し、下記の性質を
示す淡黄色固体（再結晶：ＴＨＦ）の目的化合物（１.
３４ｇ，４６％）を得た。

【００３０】Ｍｐ：２２０.０−２２１.０℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＤＭＳＯ₄） δ（ppm）：
３.７９（３Ｈ，ｓ），３.８５（３Ｈ，ｓ），７.００
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５.９３Hz），７.０１（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝２.７５），７.０２（１Ｈ，ｓ），７.１１（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.７５Hz），７.２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３.６６Hz），７.４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３.６６Hz），
７.８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５.９３Ｈｚ） ＭＳ（ＦＡＢ）：２９２（Ｍ＋１）

【００３１】

【化５】

【００３２】（実施例２）４′−シアノ−４−フェニルベンズアニリドの合成 ４−ビフェニルカルボクロライド（１.０８ｇ，５mmo
l）の塩化メチレン（３０ml）溶液に、ジメチルアミノ
ピリジン（７３３mg，６mmol）と４−シアノアニリン
（５９１mg，５mmol）を加え、室温で１２時間攪拌し
た。反応溶液を塩化メチレンで希釈し、１規定塩酸水溶
液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和塩化ナト
リウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥
後、溶媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルクロ
マトグラフィーに付し、１％メタノール−クロロホルム
の溶出画分より下記式（５）にその構造を示し、下記の
性質を示す無色固体（再結晶：酢酸エチル−ヘキサン）
の目的化合物（９９０mg，６６％）を得た。

【００３３】Ｍｐ：２１５.０−２１６.０℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＣＤＣｌ₃） δ（ppm）：
７.４１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.８０Hz），７.４５（２
Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.８０Hz），７.６２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７.８０Hz），７.６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４０Hz），
７.７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.１０Hz），７.８１（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４０Hz），７.９３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８.１０Hz），８.０３（１Ｈ，ｂｓ） ＭＳ（ＦＡＢ）：２９９（Ｍ＋１）

【００３４】

【化６】

【００３５】（実施例３）２′,５′−ジメトキシ−４−フェニルベンズアニリド
の合成 実施例１の方法に準じて、下記式（６）にその構造を示
し、下記の性質を示す目的化合物を製造した。

【００３６】Ｍｐ：１３９.０−１４０.０℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＣＤＣｌ₃） δ（ppm）：
３.８２（３Ｈ，ｓ），３.９０（３Ｈ，ｓ），６.６１
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.８０Hz），６.８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝８.８０Hz），７.４０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.３０H
z），７.４７（２Ｈ，Ｊ＝７.３０Hz），７.６３（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.３０Hz），７.７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８.６０Hz），７.９７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６０Hz），
８.３１（１Ｈ，ｓ），８.６２（１Ｈ，ｂｓ） ＭＳ（ＦＡＢ）：３３４（Ｍ＋１）

【００３７】

【化７】

【００３８】（実施例４）２−（２,５−ジメトキシシンナモイルアミノ）−６−
メチルピリジンの合成 実施例２の方法に準じて、下記式（７）にその構造を示
し、下記の性質を示す目的化合物を製造した。

【００３９】¹Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＣＤＣｌ₃）
δ（ppm）：２.４６（３Ｈ，ｓ），３.７８（３Ｈ，
ｓ），３.８２（３Ｈ，ｓ），６.６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
１５.６Hz），６.８３−６.９１（３Ｈ，ｍ），７.００
（１Ｈ，ｓ），７.６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.４，７.
６Hz），７.９５（１Ｈ．ｄ．Ｊ＝１５.６Hz），８.１
７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４Hz），８.５３（１Ｈ，ｂｓ） ＭＡ（ＦＡＢ）：２９９（Ｍ＋１）

【００４０】

【化８】

【００４１】（実施例５）２−（２,４−ジメトキシシンナモイルアミノ）−６−
メチルピリジンの合成 実施例２の方法に準じて、下記式（８）にその構造を示
し、下記の性質を示す目的化合物を製造した。

【００４２】Ｍｐ：１３８−１４３℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＣＤＣｌ₃） δ（ppm）：
２.４７（３Ｈ，ｓ），３.８４（３Ｈ，ｓ），３.８６
（３Ｈ，ｓ），６.４６（１Ｈ，ｓ），６.５１（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８.４Hz），６.６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５.８H
z），６.８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.６Hz），７.４１（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４Hz），７.６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
８.０，７,６Hz），７.９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５.８H
z），８.１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.０Hz），８.１９（１
Ｈ，ｓ） ＭＳ（ＦＡＢ）：２９９（Ｍ＋１）

【００４３】

【化９】

【００４４】（実施例６）２−（３,５−ジメトキシシンナモイルアミノ）−６−
メチルピリジンの合成 実施例１の方法に準じて、下記式（９）にその構造を示
し、下記の性質を示す目的化合物を製造した。

【００４５】Ｍｐ：１３６−１３８℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＣＤＣｌ₃） δ（ppm）：
２.４６（３Ｈ，ｓ），３.７９（３Ｈ，ｓ），６.４８
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５.４Hz），６.４８（１Ｈ，ｓ），
６.６３（１Ｈ，ｓ），６.９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.６H
z），７.６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.０，７.６Hz），
７.６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５.４Hz），８.１６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.０Hz），８.６９（１Ｈ，ｓ） ＭＳ（ＦＡＢ）：２９９（Ｍ＋１）

【００４６】

【化１０】

【００４７】（実施例７）２−（４−ビフェニルカルボニルアミノ）ピリジンの合
成 実施例１の方法に準じて、下記式（１０）にその構造を
示し、下記の性質を示す目的化合物を製造した。

【００４８】Ｍｐ：１６４−１６５℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＣＤＣｌ₃） δ（ppm）：
７.０２−７.０６（１Ｈ，ｍ），７.３７−７.４１（１
Ｈ，ｍ），７.４４−７.４９（２Ｈ，ｍ），７.６１−
７.６３（２Ｈ，ｍ），７.７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.８
０Hz），７.７３−７.７７（１Ｈ，ｍ），８.００（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.８０Hz），８.２１−８.２３（１Ｈ，
ｍ），８.４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４０Hz），９.０２
（１Ｈ，ｓ） ＭＳ（ＦＡＢ）：２７５（Ｍ＋１）

【００４９】

【化１１】

【００５０】（実施例８）２−（４−ビフェニルカルボニルアミノ）−４,６−ジ
メチルピリジンの合成 実施例１の方法に準じて、下記式（１１）にその構造を
示し、下記の性質を示す目的化合物を製造した。

【００５１】Ｍｐ：１５６−１５９℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＣＤＣｌ₃） δ（ppm）：
２.３８（３Ｈ，ｓ），２.４３（３Ｈ，ｓ），６.７８
（１Ｈ，ｓ），７.４０（１Ｈ，ｍ），７.４７（２Ｈ，
ｍ），７.６３（２Ｈ，ｍ），７.７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８.６Hz），８.００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ），８.
０７（１Ｈ，ｓ），８.６０（１Ｈ，ｓ） ＭＳ（ＦＡＢ）：３０３（Ｍ＋１）

【００５２】

【化１２】

【００５３】（実施例９）２−（５−（３,４,５−（トリメトキシ）フェニル）−
ペンタ−２,４−ジエノイル）アミノ−６−メチルピリ
ジンの合成 実施例１の方法に準じて、下記式（１２）にその構造を
示し、下記の性質を示す目的化合物を製造した。

【００５４】Ｍｐ：１６９−１７１℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００MHz，ＣＤＣｌ₃） δ（ppm）：
２.４６（３Ｈ，ｓ），３.８８（６Ｈ，ｓ），３.９０
（３Ｈ，ｓ），６.０７−８.１５（９Ｈ，ｍ），８.２
７（１Ｈ，ｂｓ） ＭＳ（ＦＡＢ）：３７７（Ｍ＋１）

【００５５】

【化１３】

【００５６】（試験例）培養平滑筋細胞の増殖抑制作用 ６週齢Wistar系雄性ラット（日本チャールズリバー社
製）の胸部大動脈から中膜平滑筋層を取り出し、１mm²
の切片にした後、２５cm³の培養フラスコ（コーニング
社製）にはりつけ、１０％血清を含む Dulbecco modifi
ed eagle medium（以下ＤＭＥＭと略す：日水社製）中
で、２〜３週間３７℃、９５％Ｏ₂＋５％ＣＯ₂の条件下
にてインキュベーターで培養した。切片から伸長し、分
裂した細胞を初代培養平滑筋細胞として採取した。初代
培養平滑筋細胞は、直径9cmのシャーレ（コーニング社
製）にて１０％牛胎児血清（ギブコ社製）を含むＤＭＥ
Ｍ中で培養し、コンフルエントに達する３〜４日目に３
倍量に継代した。この操作を４〜８回繰り返す間の、す
なわち、継代数５〜９代の間の細胞を用いて試験を行っ
た。上記培養平滑筋細胞は２４穴プレート（ファルコン
社製）に８×１０⁴個の平滑筋細胞／穴／７００μl Ｄ
ＭＥＭの割合で播種した。オーバーナイト後、無血清に
し、２日間インキュベーターで培養した。この条件下で
は、培養平滑筋細胞は細胞周期がＧ₀期（休止期）にな
り、分裂しなくなる。

【００５７】試験に供したヒドロキサム酸誘導体は dim
ethylsulfoxide（ＤＭＳＯ）に溶解後、４％ bovine se
rum albuminを含むＤＭＥＭによりまず１００倍に希釈
し、さらにＤＭＥＭで２０倍に希釈した。つまり２００
０倍希釈試験溶液を増殖刺激因子とともに上記条件下の
細胞に添加した。使用した増殖因子は、１０％牛胎児血
清, １０ng/ml血小板増殖因子（ＰＤＧＦ），５ng/ml線
維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ），５ng/ml上皮細胞増殖因
子（ＥＧＦ），２０ng/mlインスリン様増殖因子−１
（ＩＧＦ−１）をそれぞれ使用した。刺激１８時間後に
０.５μCi/ml/穴の割合で [3H]-methyl thymidine（ア
マシャム社製）を添加し、６時間後に培地を除去した。
細胞は１mlのリン酸緩衝液（Ｃａ²⁺，Ｍｇ²⁺−ｆｒｅ
ｅ）で２回洗浄後、５００μlの０.１％ＳＤＳを含むト
リス塩酸緩衝液で溶出した。十分に撹拌後５００μlの
うち１００μlをろ紙に染み込ませ風乾させた。ろ紙は
４℃下、５％トリクロロ酢酸（含１００mMピロリン酸ナ
トリウム）溶液で１５分ずつ３回、エタノールで１５分
ずつ２回洗浄後風乾し、トルエン系シンチレーター１０
mlを含むバイアル瓶底に沈めた。これを液体シンチレー
ションカウンター(パッカード社製)にて５分間測定し
た。表１には１０％牛胎児血清と１０ng/ml血小板増殖
因子（ＰＤＧＦ）刺激による薬物の５０％平滑筋細胞増
殖阻害活性濃度（ＩＣ₅₀）を示す。

【００５８】

【表１】

【００５９】（急性毒性）ＩＣＲ系雄性マウス（５週
齢）を用いて経口および静脈内投与により急性毒性試験
を行った結果、本発明のアミド誘導体のＬＤ₅₀値はいず
れも３２０mg/kg以上であり、有効性に比べて高い安全
性が確認された。

【００６０】

【発明の効果】本発明に係る新規なアミド誘導体および
これを含有する医薬製剤は、平滑筋細胞に代表される腎
メサンジウム細胞、線維芽細胞等の数種の中胚葉系細胞
の増殖抑制作用を有し、ＰＴＣＡ後の再狭窄、慢性糸球
体腎炎等に代表される炎症性並びに細胞増殖性線維硬化
症を有効に治療しうる医薬品として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｃ 231/02 9547−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 231/02 233/02 9547−4Ｈ 233/02 233/64 9547−4Ｈ 233/64 233/88 9547−4Ｈ 233/88 255/60 9357−4Ｈ 255/60 Ｃ０７Ｄ 213/75 Ｃ０７Ｄ 213/75 277/46 277/46

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記一般式（１）で示されるアミド誘導
   体。 【化１】 （式１中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃は、同一または異なって、水
   素、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、アリール
   オキシ基を示し、Ａｒは、アリール基、ｎは０または１
   の整数を示す。）
2. 【請求項２】請求項１記載のアミド誘導体を含有してな
   る医薬製剤。