JPH09315997A - 徐放性製剤およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】生理活性ポリペプチドを含有する実用的な徐放
性製剤およびその製造法を提供する。 【解決手段】生理活性ポリペプチドと界面活性剤とを含
む急速乾燥品を油相に分散させ、成型することを特徴と
する徐放性製剤およびその製造法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、生理活性ポリペプ
チドを持続して放出するのに適した徐放性製剤の製造方
法に関する。

【０００２】

【従来の技術】生理活性ポリペプチドまたはその誘導体
は、生体において種々の薬理作用を示すことが知られて
おり、一方で最近の遺伝子工学あるいは細胞工学技術の
進歩により純度の高いものを大量に生産することが可能
となって、医薬品として臨床応用されているものが増え
ている。しかしながら、これらの生理活性ポリペプチド
を経口投与する場合は、消化管内で酵素によって容易に
分解されるので、その吸収率はきわめて低い。また生体
内半減期が短いものも多い。このため通常、筋肉内や皮
下に反復して注射する方法、あるいは静脈内に点滴注射
する方法が取られているが、これらの方法は限られた回
数の投与を必要とする場合には忍容しうるが、慢性疾患
を対象として頻回投与する場合には、患者の肉体的負担
は非常に大きい。例えば、Ｃ型肝炎患者の場合にはイン
ターフェロンα（ＩＦＮα）が４週以上にわたり連日投
与されており、また下垂体性小人症の場合には乳幼児あ
るいは若年患者に対して数カ月から１０年以上の長期に
わたり連日あるいは隔日に皮下あるいは筋肉内投与され
ている。しかもこれらの疾患で、症状の緩解、完治ある
いは身長増加の効果を得るためには、臨床上有用な量の
有効成分を長期間にわたって持続させることが必要と云
われている。この問題を解決するために、生理活性ポリ
ペプチドを含有する徐放性製剤の開発が数多く試みられ
ている〔クリニカル リビューズ イン セラピュティ
ック ドラッグ キャリヤー システムス（Critical R
eviews in Therapeutic Drug Carrier Systems）, １２
号，第１〜９９頁（１９９５年）〕。

【０００３】ＷＯ９４／１９０２０には、ポリペプチド
とポリオールの混合物を有機溶媒に溶解させることによ
るポリペプチドの安定化法が開示されている。ＷＯ９４
／１２１５８には、ポリマーと成長ホルモンとの混合物
を有機溶媒に加えて急速冷凍することによって得られる
徐放性製剤が開示されている。特開昭６３−２９３０に
は、ポリペプチドをポリラクチドに分散させてなるマト
リックスが開示されている。特開平４−４６１１６およ
び特開平６−６５０６３には、生体内分解性ポリマーお
よび脂肪酸塩を有機溶媒に溶解し、Ｏ／Ｗ型エマルショ
ンとすることによる徐放性製剤の製造法が開示されてい
る。特公平６−５７６５８には、生理活性ポリペプチド
をアテロコラーゲンやアテロコラーゲンとゼラチンとの
混合物からなる担体中に均一に含有させた徐放性製剤が
開示されている。ファーマシューティカル リサーチ
（Pharmaceutical Research），第９巻、１号、３７〜
３９頁（１９９２）、ファーマシューティカル リサー
チ（Pharmaceutical Research），第１１巻、２号、３
３７〜３４０頁（１９９４）およびジャーナル オブコ
ントロールド リリース（Journal of Controlled Rele
ase），第３３巻、４３７〜４４５頁（１９９５年）に
は、界面活性剤とポリマーの有機溶媒溶液にポリペプチ
ドの水溶液を添加して得られるＷ／Ｏ／Ｗエマルション
から得られる徐放性製剤が記載されている。このよう
に、従来技術では、そのほとんどが界面活性剤と生体内
分解性ポリマーとを有機溶媒に溶解し、その油相に生理
活性ポリペプチドの水溶液を添加するＷ／Ｏ／Ｗ法が採
用されている。また、生体内分解性ポリマーと界面活性
剤とを含有する油相に生理活性ポリペプチドの粉末を直
接添加するＳ／Ｏ／Ｗ法も報告されている。しかしなが
ら、いずれの方法においても生理活性ポリペプチドの安
定性が損なわれるため収率に多大の影響を及ぼしたり、
あるいは得られた徐放性製剤の品質が劣るため、ＬＨＲ
Ｈアナログなどの若干のペプチドを除いて医薬品として
臨床上実用化されているものはない。前記のように、生
理活性ポリペプチドの生理活性を保持しながら徐放性製
剤を製造する試みは種々報告されているが、ＬＨＲＨア
ナログなどの若干のペプチドを除いて、特に高次構造を
有するポリペプチドの場合生体内適合性ポリマーへの生
理活性ポリペプチドの取り込み率、初期放出の抑制ある
いは長期にわたる一定した徐放性などの点で未だ臨床上
満足すべき製剤は得られていない。すなわち、投与初期
の血中濃度が予想外に高くなったり、薬物放出速度が徐
放期間中に一定でなかったりあるいは製造工程中に生理
活性ポリペプチドが変性し十分な収率、効果が得られて
いない。また徐放性埋め込み剤の場合には、投与部位で
の疼痛により十分なコンプライアンスが得られないこと
や、基剤として用いられる異種動物コラーゲンに由来す
る抗原性が危惧される。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】生理活性ポリペプチド
の生理活性を保持しながら、長期にわたる一定した徐放
性を有する臨床上有用な徐放性製剤およびその製造法の
開発が望まれている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは前記の問題
点を解決するため鋭意研究を進めたところ、あらかじめ
生理活性ポリペプチドと界面活性剤とを混合し、これを
急速乾燥することによって得られた微粒子を、油相に分
散させてから徐放性製剤に成型すると、予想外にも生理
活性ポリペプチドのポリマーへの取り込み率が向上し、
初期放出が飛躍的に抑制され、かつ長期間にわたる一定
した放出速度を示す優れた徐放性製剤が得られることを
見出し、これらの知見に基づいて本発明を完成した。す
なわち、本発明は（１）生理活性ポリペプチドと界面活
性剤とを含む急速乾燥品を油相に分散させ、成型するこ
とを特徴とする徐放性製剤の製造法；（２）油相に分散
した急速乾燥品の平均粒子径が約０．０５μｍないし約
５０μｍである前記(1)記載の製造法；（３）生理活性
ポリペプチドと界面活性剤との重量比が約１：０.００
１ないし約１：１０００である前記(1)記載の製造法；
（４）油相が生体内適合性ポリマーを含む有機溶媒相で
ある前記(1)記載の製造法；（５）有機溶媒中の生体内
適合性ポリマーの濃度が約０.０１％（Ｗ／Ｗ）ないし
約８０％（Ｗ／Ｗ）である前記(4)記載の製造法；
（６）生理活性ポリペプチド、界面活性剤および生体内
適合性ポリマーの全量に対する界面活性剤の使用割合が
約０.００２％（Ｗ／Ｗ）ないし約５０％（Ｗ／Ｗ）で
ある前記(4)記載の製造法；

【０００６】（７）生理活性ポリペプチドが水溶性であ
る前記(1)記載の製造法；（８）生理活性ポリペプチド
がホルモン類である前記(1)記載の製造法；（９）ホル
モン類が成長ホルモン類である前記(8)記載の製造法；
（１０）ホルモン類がインスリン類である前記(8)記載
の製造法；（１１）生理活性ポリペプチドがサイトカイ
ン類である前記(1)記載の製造法；（１２）サイトカイ
ン類がインターフェロン類またはインターロイキン類で
ある前記(11)記載の製造法；（１３）生体内適合性ポリ
マーが生体内分解性ポリマーである前記(4)記載の製造
法；（１４）生体内分解性ポリマーが脂肪酸ポリエステ
ルである前記(13)記載の製造法；（１５）脂肪酸ポリエ
ステルが乳酸−グリコール酸共重合体である前記(14)記
載の製造法；（１６）乳酸−グリコール酸共重合体の分
子量が約３，０００ないし７０，０００で、この乳酸／
グリコール酸の組成比が約１００／０ないし約３０／７
０である前記(14)記載の製造法；（１７）脂肪酸ポリエ
ステルがヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体である
前記(14)記載の製造法；（１８）ヒドロキシ酪酸−グリ
コール酸共重合体の分子量が約３,０００ないし約７０,
０００で、このヒドロキシ酪酸／グリコール酸の組成比
が約１００／０ないし約４０／６０である前記(17)記載
の製造法；

【０００７】（１９）界面活性剤が非イオン性である前
記(1)記載の製造法；（２０）非イオン性界面活性剤の
親水性親油性比（ＨＬＢ）が１０以上である前記(19)記
載の製造法；（２１）界面活性剤がポリオキシエチレン
−ポリオキシプロピレン共重合物、ポリオキシエチレン
硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、
およびポリビニルピロリドンから選ばれた１種または２
種以上の非イオン性界面活性剤からなる前記(1)記載の
製造法；（２２）非イオン性界面活性剤がポリオキシエ
チレン−ポリオキシプロピレン共重合物である前記(19)
記載の製造法；（２３）徐放性製剤がマイクロカプセル
である前記(1)記載の製造法；（２４）マイクロカプセ
ルの平均粒子径が約１.０ないし約２００μm である前
記(23)記載の製造法；（２５）徐放性製剤が注射剤であ
る前記(1)記載の製造法；（２６）生理活性ポリペプチ
ドと界面活性剤とを含む急速乾燥品が油相に分散した分
散液；（２７）油相に分散した急速乾燥品の平均粒子径
が約０．０５μｍないし５０μｍである前記(26)記載の
分散液；（２８）生理活性ポリペプチドと界面活性剤と
を含む水溶液または懸濁液の急速乾燥品が生体内適合性
ポリマー含有の油相に分散した徐放性製剤用原料；およ
び（２９）前記(1)記載の製造法により製造される医薬
用徐放性製剤；（３０）生理活性ポリペプチドが成長ホ
ルモン類である前記(29)記載の製剤；（３１）成長ホル
モン分泌不全症、下垂体性小人症、ターナー症候群、慢
性腎疾患、軟骨異栄養症、成人性下垂体不全症、ダウン
症候群、シルバー症候群、骨形成不全症、骨粗鬆症、又
は若年性慢性関節症の予防又は治療用である前記(30)の
製剤などに関する。

【０００８】本明細書においてアミノ酸、ペプチドなど
に関して略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ コ
ミッション・オン・バイオケミカル・ノーメンクレーチ
ャー（Commission on Biochemical Nomenclature）によ
る略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくもの
とする。またアミノ酸に光学異性体がありうる場合は、
特に明示しない限りＬ体を示すものとする。本発明の構
成成分である生理活性ポリペプチドとしては、哺乳動物
にとって有用な生理活性を有し、臨床上用いることがで
きる種々のペプチドまたはタンパク質が挙げられる。該
「生理活性ポリペプチド」は、その分子量が、モノマー
として、例えば約２，０００ないし約２００，０００の
ものが用いられ、好ましくは約５，０００ないし約５
０，０００、特に約５，５００ないし約３０，０００の
ものが汎用される。好ましい生理活性ポリペプチドに
は、生化学の分野で高次構造を有すると云われるタンパ
ク質に分類される高分子が含まれる。本発明で用いられ
る生理活性ポリペプチドの種類は、本発明の目的が達成
される限り特に限定されないが、その代表的なものとし
ては、例えば成長因子類、ホルモン類、サイトカイン類
および酵素類などが挙げられる。より具体的には、例え
ば以下の高分子ペプチド、タンパク質などが挙げられ
る。

【０００９】（１）成長因子類としては、例えば神経成
長因子（ＮＧＦ−１，ＮＧＦ−１など）、神経栄養因子
（ＮＴＦ）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来
増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ
−１，ＩＧＦ−２，ＩＧＦ−３など）、繊維芽細胞増殖
因子（ａＦＧＦ，ｂＦＧＦ）、骨形成原成長因子（ＢＭ
Ｐ−１，ＢＭＰ−２，ＢＭＰ−３，ＢＭＰ−４など）、
心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＰ）、軟骨誘導因子な
どが挙げられる。 （２）サイトカイン類としては、例えばインターフェロ
ン類（ＩＦＮ−α，−β，−γなど）、インターロイキ
ン類（ＩＬ−１〜ＩＬ−１１など）、カケクチン、オン
コスタチン、コロニー刺激因子類（Ｇ−，Ｍ−，ＧＭ−
ＣＳＦなど）、トロンボポエチン（ＴＰＯ），エリスロ
ポエチン（ＥＰＯ）などが挙げられる。 （３）酵素類としては、例えば組織プラスミノーゲン・
アクチベータ（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ（ＵＫ）、スト
レプトキナーゼ、プロテインＣ、メタロプロテアーゼ
類、スーパーオキシド・ディスムターゼ（ＳＯＤ）、第
ＶＩＩＩ及びＩＸ因子などが挙げられる。 （４）ホルモン類としては、例えば成長ホルモン（Ｇ
Ｈ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、インスリン、
グルカゴン、ガストリン、プロラクチン、副腎皮質刺激
ホルモン（ＡＣＴＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳ
Ｈ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン
（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、カル
シトニンなどが挙げられる。

【００１０】本発明で用いられる生理活性ポリペプチド
は、ある一定の水溶性を有するものが好ましく、その溶
解度は水に対して、２０℃で約１ｍｇ／１００ｍｌ以
上、好ましくは約１００ｍｇ／１００ｍｌ以上であるも
のが汎用される。該「生理活性ポリペプチド」の好まし
い例としては、例えばホルモン類〔例えば、成長ホルモ
ン類（ヒト成長ホルモン類など）、インスリン類（ヒト
インスリン類など）など〕、サイトカイン類（例えば、
インターフェロン類、インターロイキン類など）などが
挙げられる。本発明で用いられる生理活性ポリペプチド
は、天然由来あるいは遺伝子組換え技術によって得られ
たもの〔例えば、遺伝子組換えヒト成長ホルモン（以
下、rhＧＨと略称することがある）〕いずれでもよい。
これらは糖鎖を有していてもよく、また糖鎖構造が異な
っていてもよい。さらに、これらはムテイン、誘導体、
類縁体および活性フラグメントなども含む。以下におい
て「生理活性ポリペプチド」、「成長ホルモン類」、
「インスリン類」、「インターフェロン類」、「インタ
ーロイキン類」などと言う場合は、それぞれこれら糖鎖
を有しているものムテイン、誘導体、類縁体および活性
フラグメントを含む。

【００１１】また、本発明で用いられる生理活性ポリペ
プチドとしては、金属塩であってもよい。かかる金属塩
としては、生体に悪影響をおよぼさない金属塩であれば
特に限定されないが、生理活性ポリペプチドと水溶性多
価金属塩との接触により得られる生理活性ポリペプチド
金属塩が好ましい。本明細書では、これら金属塩になっ
ているものも含めて、単に「生理活性ポリペプチド」と
称する。該「水溶性多価金属塩」における多価金属とし
ては、例えばアルカリ土類金属（例えば、カルシウム、
マグネシウムなど）、亜鉛（II価）、鉄（II価、III
価）、銅（II価）、スズ（II価、IV価）、アルミニウム
（II価、III価）などが挙げられ、亜鉛、カルシウムな
どが汎用される。該「水溶性多価金属塩」としては、多
価金属と酸との塩、例えば多価金属と無機酸との塩また
は多価金属と有機酸との塩が挙げられる。該「多価金属
と酸との塩」は、例えば常温（２０℃）で水に対する溶
解度が約２０ｍｇ／ｍｌ以上の塩が好ましく、より好ま
しくは溶解度が約１００ｍｇ／ｍｌ以上の塩であり、特
に溶解度が約２００ｍｇ／ｍｌ以上の塩が汎用される。
該「多価金属と無機酸」との塩における無機酸として
は、例えば塩酸、硫酸、硝酸、チオシアン酸などが挙げ
られる。該「多価金属と有機酸との塩」における有機酸
としては、例えば脂肪族カルボン酸、芳香族酸などが挙
げられる。該「脂肪族カルボン酸」としては、例えば炭
素数２ないし９の脂肪族カルボン酸（例えば脂肪族モノ
カルボン酸、脂肪族ジカルボン酸、脂肪族トリカルボン
酸など）などが挙げられる。これらの脂肪族カルボン酸
は、飽和あるいは不飽和のいずれであってもよい。該
「脂肪族モノカルボン酸」としては、例えば炭素数２な
いし９の飽和脂肪族モノカルボン酸（例えば、酢酸、プ
ロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、
カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸など）および炭
素数２ないし９の不飽和脂肪族モノカルボン酸（例え
ば、アクリル酸、プロピオール酸、メタクリル酸、クロ
トン酸、イソクロトン酸など）などが挙げられる。該
「脂肪族ジカルボン酸」としては、例えば炭素数２ない
し９の飽和脂肪族ジカルボン酸（例えば、マロン酸、コ
ハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸など）お
よび炭素数２ないし９の不飽和脂肪族ジカルボン酸（例
えば、マレイン酸、フマル酸、シトラコン酸、メサコン
酸など）などが挙げられる。該「脂肪族トリカルボン
酸」としては、例えば炭素数２ないし９の飽和脂肪族ト
リカルボン酸（例えば、トリカルバリル酸、１，２，３
−ブタントリカルボン酸など）が挙げられる。該「脂肪
族カルボン酸」は、水酸基を１または２個有していても
よく、このような例としては、例えばグリコール酸、乳
酸、グリセリン酸、タルトロン酸、リンゴ酸、酒石酸、
クエン酸などが挙げられる。該「脂肪族カルボン酸」
は、脂肪族モノカルボン酸である場合が好ましく、より
好ましくは炭素数２ないし９の脂肪族モノカルボン酸で
あり、特に酢酸などが汎用される。該「芳香族酸」とし
ては、例えば安息香酸、サリチル酸などが挙げられ、特
に安息香酸が汎用される。多価金属と無機酸との塩、す
なわち無機酸多価金属塩としては、例えばハロゲン化塩
（例えば、塩化亜鉛、塩化カルシウムなど）、硫酸塩、
硝酸塩、チオシアン酸塩などが挙げられる。多価金属と
脂肪族カルボン酸との塩、すなわち脂肪族カルボン酸多
価金属塩としては、例えば酢酸カルシウム、酢酸亜鉛、
プロピオン酸カルシウム、グリコール酸亜鉛、乳酸カル
シウム、乳酸亜鉛、酒石酸亜鉛などが挙げられ、例えば
酢酸カルシウム、酢酸亜鉛などが好ましく、特に酢酸亜
鉛が汎用される。多価金属と芳香族酸との塩、すなわち
芳香族酸多価金属塩としては、例えば安息香酸塩、サリ
チル酸塩などが挙げられ、特に安息香酸亜鉛が汎用され
る。

【００１２】本発明で用いられる生理活性ポリペプチド
は、あらかじめ界面活性剤と接触させてから油相に添加
される。あらかじめ界面活性剤と生理活性ポリペプチド
とを混合することによって、生理活性ポリペプチドは、
その生理活性を臨床上有用な範囲で、例えば、少なくと
も５０％以上を維持し、しかも安定で微細な粒子とな
り、油相への分散性が非常によくなる。これにより、薬
物への取り込み率が良好で、投与後の初期放出が抑制さ
れ、放出速度の一定した徐放性製剤が得られる。該「油
相」としては、例えば生体内適合性ポリマーを含む有機
溶媒相などが用いられる。

【００１３】該「界面活性剤」としては、イオン性およ
び非イオン性界面活性剤が用いられるが、特に非イオン
性界面活性剤が好ましい。とりわけ、親水性親油性比
（ＨＬＢ）が１０以上（好ましくは１２ないし３０）の
非イオン性界面活性剤が好ましい。例えば、ポリオキシ
エチレン−ポリオキシプロピレン共重合物〔ポロクサマ
ー類（旭電化工業）：プルロニックＦ−６８，Ｆ−８
７，Ｆ−１０８，Ｆ−１２７，Ｌ−４４など〕、ポリオ
キシエチレンソルビタン脂肪酸エステル〔ポリソルベー
ト類（日光ケミカルズ）：Tween ８０，６０，４０，２
０など〕、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類〔日光ケ
ミカルズ：ＨＣＯ−６０，−５０，−４０など〕、ポリ
オキシエチレンアルキルエーテル類〔日光ケミカルズ：
ポリオキシエチレンラウリルエーテルなど〕、ソルビタ
ン脂肪酸エステル〔スパン類（日光ケミカルズ）：スパ
ン８０，６０，４０，２０，セスキオレイン酸ソルビタ
ンなど〕、ショ糖脂肪酸エステル〔ＤＫエステル類（第
一工業）：ＳＳ，Ｆ５０，Ｆ１０など〕、ポリビニルア
ルコール類、ポリビニルピロリドン類が挙げられる。好
ましくはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共
重合物、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシ
エチレンアルキルエーテル、ポリビニルピロリドンなど
が挙げられ、特にポロクサマー類（例えば、プルロニッ
クＦ−６８）などのポリオキシエチレン−ポリオキシプ
ロピレン共重合物などが汎用される。またこれらの非イ
オン性界面活性剤は、適当な親水性親油性比（ＨＬＢ：
hydrophile-lipophile balance）を得るために二種以上
のものを適宜混合して用いてもよい。非イオン性界面活
性剤を二種以上用いる場合、そのＨＬＢは１０以上（好
ましくは１２ないし３０）である場合が好ましい。該
「油相」で用いられる有機溶媒としては、例えば沸点が
１２０℃以下で、かつ水と混和しない性質のもので、高
分子重合物を溶解するものであればよい。その具体例と
しては、例えばハロゲン化炭化水素類（例えば、ジクロ
ロメタン、クロロホルム、四塩化炭素など）、脂肪酸エ
ステル類（例えば、酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、エ
ーテル類（例えば、エチルエーテル、イソプロピルエー
テルなど）、芳香族炭化水素類（例えば、ベンゼン、ト
ルエン、キシレンなど）などが挙げられる。これらは二
種以上適宜の割合で混合して用いてもよい。

【００１４】界面活性剤と生理活性ポリペプチドとの混
合操作は、ふつう生理活性ポリペプチド水溶液中で行わ
れる。この際、その水溶液は水溶性成分を含んでいても
よく、例えばｐＨ調節剤（例えば、炭酸アンモニウム、
炭酸水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、酢酸、塩酸、
水酸化ナトリウムなど）、安定化剤（例えば、血清アル
ブミン、ゼラチンなど）、保存剤（例えば、パラオキシ
安息香酸類など）、塩類（例えば、塩化ナトリウムな
ど）、糖類（例えば、マンニトール、トレハロース、デ
キストロースなど）、アミノ酸（例えば、グリシン、ア
ラニンなど）などが挙げられる。生理活性ポリペプチド
に対する界面活性剤の割合は、その生理活性ポリペプチ
ドの生理活性が臨床上有用である（例えば、５０％以
上）と判断される限り特に限定されない。例えば、生理
活性ポリペプチドと界面活性剤とを水中で混合する際の
重量比は、例えば約１：０．００１ないし約１：１００
０、好ましくは約１：０．０１ないし約１：５０、より
好ましくは約１：０．０５ないし約１：２０である。ま
た、本発明の徐放性製剤の製造時における、生体内分解
性ポリマー、生理活性ポリペプチドおよび界面活性剤の
全量に対する界面活性剤の使用割合は、一般的に約０．
００２％（Ｗ／Ｗ）ないし約５０％（Ｗ／Ｗ）、好まし
くは約０．０５％（Ｗ／Ｗ）ないし約２０％（Ｗ／Ｗ）
である。該「急速乾燥品」とは、例えば生理活性ポリペ
プチドと界面活性剤とを含む混合物を急速に乾燥して得
られる調製品を示し、急速乾燥の方法としては、例えば
凍結乾燥、噴霧乾燥、真空乾燥あるいはこれらを組み合
わせた処理などがあげられる。急速乾燥とは、混合物中
の生理活性ポリペプチドの生理活性が臨床上有用な範囲
（例えば、５０％以上）に維持され、かつ油相に分散し
た急速乾燥品の平均粒子径が約０．０５μｍないし約５
０μｍ、好ましくは約０．１μｍないし約３０μｍであ
ればその条件は特に問わない。特に好ましくは約０．１
μｍないし約１０μｍである。一般に、例えば生理活性
ポリペプチドが熱変性による失活を起こさないような温
度範囲で実施することが好ましい。

【００１５】該「生体内適合性ポリマー」としては、生
体内に投与後、生体組織に適合して生体への障害反応な
どを示さないものであれば特に限定されない。例えば、
生体内で代謝分解されて、最終的に体外に排泄されるも
のが好ましい。なかでも、水に難溶または不溶である高
分子重合物などが汎用される。例えば脂肪酸ポリエステ
ル類〔例えば、α−ヒドロキシカルボン酸類（例えば、
グリコール酸、乳酸、ヒドロキシ酪酸など）、ヒドロキ
シジカルボン酸類（例えば、リンゴ酸など）、ヒドロキ
シトリカルボン酸類（例えば、クエン酸など）などの一
種以上から合成された重合体、共重合体あるいはこれら
の混合物など〕、ポリ−α−シアノアクリル酸エステル
類、ポリアミノ酸類（例えば、ポリ−γ−ベンジル−Ｌ
−グルタミン酸など）などが挙げられる。これらは、適
宜の割合で混合して用いてもよい。重合の形式はランダ
ム、ブロック、グラフトのいずれでもよい。生体内分解
性ポリマーは、脂肪酸ポリエステル類〔例えば、α−ヒ
ドロキシカルボン酸類（例えば、グリコール酸、乳酸、
ヒドロキシ酪酸など）、ヒドロキシジカルボン酸類（例
えば、リンゴ酸など）、ヒドロキシトリカルボン酸類
（例えば、クエン酸など）などの一種以上から合成され
た重合体、共重合体あるいはこれらの混合物など〕が汎
用される。前記した脂肪酸ポリエステル類中、α−ヒド
ロキシカルボン酸類（例えば、グリコール酸、乳酸、ヒ
ドロキシ酪酸など）の一種以上から合成された単重合体
又は共重合体が生体内分解性および生体適合性の観点か
ら好ましい。また、これらの重合体は適宜混合して使用
してもよい。

【００１６】本発明で用いられる生体内適合性ポリマー
は、自体公知の方法により製造される。前記α−ヒドロ
キシカルボン酸類はＤ−体、Ｌ−体およびＤ，Ｌ−体の
何れでもよいが、Ｄ−体／Ｌ−体（モル／モル％）が約
７５／２５ないし約２５／７５の範囲のものが好まし
い。このＤ−体／Ｌ−体（モル／モル％）は、特に約６
０／４０ないし約３０／７０の範囲のものが汎用され
る。前記α−ヒドロキシカルボン酸類の重合体（単重合
体及び共重合体を含む。以下、単に共重合体と称する）
の例としては、例えばグリコール酸と他のα−ヒドロキ
シカルボン酸類との共重合体が挙げられ、該「α−ヒド
ロキシカルボン酸類」としては、例えば乳酸、２−ヒド
ロキシ酪酸などが好ましい。α−ヒドロキシカルボン酸
類の共重合体は、例えば乳酸−グリコール酸共重合体、
２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体などが好ま
しく、特に乳酸−グリコール酸共重合体が汎用される。
該「乳酸−グリコール酸共重合体」の組成比（乳酸／グ
リコール酸）（モル／モル％）は本発明の目的が達成さ
れる限り特に限定されないが、約１００／０ないし約３
０／７０のものが用いられる。該組成比の好ましい例と
しては、約９０／１０ないし約４０／６０であり、特に
約８０／２０ないし約４５／５５のものが汎用される。
該「乳酸−グリコール酸共重合体」は、重量平均分子量
が例えば約３，０００ないし約７０，０００のものなど
が用いられ、約３，０００ないし約２０，０００のもの
が好ましい。特に約５，０００ないし１５，０００のも
のが汎用される。また、該「乳酸−グリコール酸共重合
体」は、分散度（重量平均分子量／数平均分子量）が約
１．２ないし約４．０のものが好ましく、特に約１．５
ないし約３．５のものが汎用される。該「乳酸−グリコ
ール酸共重合体」は、自体公知の製造法、例えば特開昭
６１−２８５２１号公報に記載の方法などに従って合成
できる。該共重合体は無触媒脱水重縮合で合成されたも
のが好ましい。

【００１７】該「２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共
重合体」としては、本発明の目的が達成される限り特に
限定されないが、例えばグリコール酸が約１０ないし約
７５モル％、残りが２−ヒドロキシ酪酸である場合が好
ましい。さらに好ましくは、グリコール酸が約２０ない
し約７５モル％の場合である。特に、グリコール酸が約
３０ないし約７０モル％のものが汎用される。該「２−
ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体」は、重量平均
分子量が、例えば約２，０００ないし約２０，０００の
ものが好ましい。該「２−ヒドロキシ酪酸−グリコール
酸共重合体」は、分散度（重量平均分子量／数平均分子
量）が、例えば約１．２ないし４．０のものが好まし
く、特に約１．５ないし３．５のものが汎用される。該
「２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体」は、自
体公知の製造法、例えば特開昭６１−２８５２１号公報
に記載の方法などに従って合成できる。該共重合体は無
触媒脱水重縮合で合成されたものが好ましい。該「α−
ヒドロキシカルボン酸類」としては、本発明の目的が達
成される限り特に限定されないが、その重合体の好まし
い例としては乳酸の重合体が挙げられる。該「乳酸重合
体すなわちポリ乳酸」は、重量平均分子量が、例えば約
３，０００ないし約２０，０００のものが好ましく、特
に約５，０００ないし約１５，０００のものが汎用され
る。該「乳酸重合体」は、自体公知の製造法、例えば特
開昭６１−２８５２１号公報に記載の方法などに従って
合成できる。該重合体は無触媒脱水重縮合で合成された
ものが好ましい。

【００１８】該「２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共
重合体」は、さらにポリ乳酸と混合して使用してもよ
い。該「ポリ乳酸」としては、Ｄ−体、Ｌ−体およびこ
れらの混合物の何れでもよいが、例えばＤ−体／Ｌ−体
（モル／モル％）が約７５／２５ないし約２０／８０の
範囲のものが用いられる。Ｄ−体／Ｌ−体（モル／モル
％）は、約６０／４０ないし約２５／７５であるものが
好ましく、特に約５５／４５ないし約２５／７５である
ものが汎用される。該「ポリ乳酸」は、重量平均分子量
が、例えば約１，５００ないし約２０，０００のものが
用いられ、約１，５００ないし約１０，０００のものが
好ましい。また、該「ポリ乳酸」は、分散度が約１．２
ないし約４．０のものが用いられ、特に約１．５ないし
約３．５のものが汎用される。該「ポリ乳酸」の製造法
については、乳酸の二量体であるラクタイドを開環重合
する方法と乳酸を脱水重縮合する方法などが知られてい
る。本発明で使用する比較的低分子のポリ乳酸を得るた
めには、例えば特開昭６１−２８５２１に記載されてい
るような乳酸を直接脱水重縮合する方法などが好まし
い。２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体とポリ
乳酸とを混合して使用する場合、その混合比が、例えば
約１０／９０ないし約９０／１０（重量％）であるもの
が用いられる。その混合比は、約２０／８０ないし約８
０／２０の場合が好ましく、特に約３０／７０ないし約
７０／３０の場合が汎用される。

【００１９】本明細書中、重量平均分子量とは、重量平
均分子量が１２０，０００、５２，０００、２２，００
０、９，２００、５，０５０、２，９５０、１，０５
０、５８０、１６２の９種類のポリスチレンを基準物質
としてゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰ
Ｃ）で測定したポリスチレン換算の分子量をいう。ＧＰ
Ｃ測定により数平均分子量も計算される。分散度は重量
平均分子量と数平均分子量とから計算される。ＧＰＣ測
定はＧＰＣカラムＫＦ８０４Ｌｘ２（昭和電工製）、Ｒ
ＩモニターＬ−３３００（日立製作所製）を使用し、移
動相としてクロロホルムを用いた。本発明で用いられる
生体内適合性ポリマーは、金属塩となっていてもよい。
該「生体内適合性ポリマー」を金属塩にするために用い
られる金属塩は、生体に悪影響をおよぼさない金属塩で
あれば特に限定されない。該「金属塩」としては、例え
ば単価金属または多価金属と無機酸あるいは有機酸との
塩が用いられる。該「単価金属」としては、例えばアル
カリ金属（例えば、ナトリウム、カリウムなど）などが
挙げられる。該「多価金属」としては、例えばアルカリ
土類金属（例えば、カルシウム、マグネシウムなど）、
亜鉛（II価）、鉄（II価、III価）、銅（II価）、スズ
（II価、IV価）、アルミニウム（II価、III価）塩など
が挙げられる。該「金属」の中では、多価金属が好まし
い。さらに好ましくはアルカリ土類金属、亜鉛であり、
特にカルシウム、亜鉛などが汎用される。該「無機酸」
としては、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、フ
ッ化水素酸、硫酸、硝酸、チオシアン酸などが挙げられ
る。該「有機酸」としては、例えば脂肪族カルボン酸、
芳香族酸などが挙げられる。該「脂肪族カルボン酸」と
しては、例えば炭素数１ないし９の脂肪族カルボン酸
（例えば、脂肪族モノカルボン酸、脂肪族ジカルボン
酸、脂肪族トリカルボン酸など）などが挙げられる。該
「脂肪族カルボン酸」は、飽和あるいは不飽和のいずれ
であってもよい。該「脂肪族モノカルボン酸」として
は、例えば炭素数１ないし９の飽和脂肪族モノカルボン
酸（例えば、炭酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草
酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン
酸、カプリン酸など）および炭素数２ないし９の不飽和
脂肪族モノカルボン酸（例えば、アクリル酸、プロピオ
ール酸、メタクリル酸、クロトン酸、イソクロトン酸な
ど）などが挙げられる。該「脂肪族ジカルボン酸」とし
ては、例えば炭素数２ないし９の飽和脂肪族ジカルボン
酸（例えば、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピ
ン酸、ピメリン酸など）および炭素数２ないし９の不飽
和脂肪族ジカルボン酸（例えば、マレイン酸、フマル
酸、シトラコン酸、メサコン酸など）などが挙げられ
る。該「脂肪族トリカルボン酸」としては、例えば炭素
数２ないし９の飽和脂肪族トリカルボン酸（例えば、ト
リカルバリル酸、１，２，３ーブタントリカルボン酸な
ど）などが挙げられる。該「脂肪族カルボン酸」は、水
酸基を１または２個有していてもよく、このような例と
しては、例えばグリコール酸、乳酸、グリセリン酸、タ
ルトロン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸などが挙げら
れる。該「脂肪族カルボン酸」は、脂肪族モノカルボン
酸である場合が好ましく、より好ましくは炭素数２ない
し９の脂肪族モノカルボン酸であり、特に酢酸などが汎
用される。該「芳香族酸」としては、例えば安息香酸、
サリチル酸、フェノールスルホン酸などが挙げられる。
生体内適合性ポリマーを金属塩とするために用いられる
金属塩は、多価金属と無機酸または有機酸との塩（以
下、多価金属塩と略称する）が好ましい。該「多価金属
塩」としては、例えば亜鉛と無機酸との塩〔例えば、ハ
ロゲン化亜鉛（例えば、塩化亜鉛、臭化亜鉛、ヨウ化亜
鉛、フッ化亜鉛など）、硫酸亜鉛、硝酸亜鉛、チオシア
ン酸亜鉛など〕、亜鉛と有機酸との塩〔例えば、脂肪族
カルボン酸亜鉛塩（例えば、炭酸亜鉛、酢酸亜鉛、グリ
コール酸亜鉛、乳酸亜鉛、酒石酸亜鉛など）、芳香族酸
亜鉛塩（例えば、安息香酸亜鉛、サリチル酸亜鉛、フェ
ノールスルホン酸亜鉛など）など〕、カルシウムと無機
酸との塩〔例えば、ハロゲン化カルシウム（例えば、塩
化カルシウム、臭化カルシウム、ヨウ化カルシウム、フ
ッ化カルシウムなど）、硫酸カルシウム、硝酸カルシウ
ム、チオシアン酸カルシウムなど〕、カルシウムと有機
酸との塩〔例えば、脂肪族カルボン酸カルシウム塩（例
えば、炭酸カルシウム、酢酸カルシウム、プロピオン酸
カルシウム、シュウ酸カルシウム、酒石酸カルシウム、
乳酸カルシウム、クエン酸カルシウム、グルコン酸カル
シウムなど）、芳香族酸カルシウム塩（例えば、安息香
酸カルシウム、サリチル酸カルシウムなど）など〕など
が用いられる。該「多価金属塩」は、酢酸亜鉛、酢酸カ
ルシウムなどが汎用される。本明細書においては、金属
塩になっているものも含めて単に「生体適合性ポリマ
ー」と称することがある。

【００２０】本発明の徐放性製剤は、生理活性ポリペプ
チドと界面活性剤とを混合して得られる固形または半固
形成分を、生体内適合性ポリマーを含む油相中に分散さ
せることによって製剤化される。生理活性ポリペプチド
と界面活性剤とを混合する場合、これらを含む混合物
（例えば、水溶液または懸濁液が好ましい）を急速乾燥
することによって得られた急速乾燥品が好ましい。本発
明の急速乾燥品は、油相に分散させた後、より微細な粒
子として油相中に均一に分散させることが好ましいの
で、この時、例えば超音波照射あるいはホモゲナイザー
による微粒化操作などに付すことが好ましい。該「徐放
性製剤」の製造法としては、例えば水中乾燥法、相分離
法、噴霧乾燥法あるいはこれらに準ずる方法などが挙げ
られる。以下に徐放性製剤として、例えばマイクロカプ
セルを製造する場合の製造方法について記述する。

【００２１】（ａ）水中乾燥法（Ｓ／Ｏ／Ｗ法） 本方法においては、まず生理活性ポリペプチドと界面活
性剤とを混合し、ついで急速乾燥（例えば、凍結乾燥、
真空乾燥など）に付し、急速乾燥品を得る。一方で、生
体内適合性ポリマーを含む有機溶媒溶液を作製する。本
発明の徐放性製剤の製造に使用する有機溶媒は、例えば
沸点が１２０℃以下であることが好ましい。該「有機溶
媒」としては、例えばハロゲン化炭化水素類（例えば、
ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素など）、脂
肪酸エステル類（例えば、酢酸エチル、酢酸ブチルな
ど）などが挙げられる。これらは適宜の割合で混合して
用いてもよい。該「有機溶媒」は、ジクロロメタン、酢
酸エチルなどが好ましく、特にジクロロメタンが汎用さ
れる。生体内適合性ポリマーの有機溶媒溶液中の濃度
は、生体内適合性ポリマーの分子量や有機溶媒の種類な
どによって異なるが、ふつう約０.０１％（Ｗ／Ｗ）な
いし約８０％（Ｗ／Ｗ）の範囲のものから選ばれる。好
ましくは約０.１％（Ｗ／Ｗ）ないし約７０％（Ｗ／
Ｗ）のものが選ばれ、特に約１％（Ｗ／Ｗ）ないし約６
０％（Ｗ／Ｗ）のものが汎用される。

【００２２】このようにして得られた生体内適合性ポリ
マー含有の有機溶媒溶液中に、前記の生理活性ポリペプ
チドと界面活性剤との急速乾燥品を添加し、分散させ
る。Ｓ／Ｏ懸濁液は、例えばポリトロン（キネマチカ社
製）のようなホモゲナイザーを用いた乳化操作あるいは
超音波照射などにより、分散性を向上させることができ
る。次いでこのＳ／Ｏエマルションを、さらに必要によ
り、界面活性剤（例えば、ポリビニルアルコール、ポリ
ビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなど）
を含有する水相中に加えて、タービン型撹拌機などを用
いてＳ／Ｏ／Ｗエマルションを作成したのち、油相溶媒
を蒸発させマイクロカプセルを製造する。このときの水
相体積は、例えば油相体積の約１倍ないし約１０,００
０倍から選ばれる。好ましくは、約２倍ないし約５,０
００倍、特に約５倍ないし約２,０００倍から選ばれ
る。またこの際、該「水相」に pＨ調節剤（例えば、酢
酸、塩酸、水酸化ナトリウムなど）、安定化剤（例え
ば、血清アルブミン、ゼラチンなど）、保存剤（例え
ば、パラオキシ安息香酸類など）あるいは浸透圧調整剤
として、例えば塩類（例えば、塩化ナトリウムなど）、
糖類（例えば、マンニトールなど）などを加えてもよ
い。このようにして得られたマイクロカプセルは、遠心
分離あるいは濾過操作により分取した後、マイクロカプ
セル表面に付着する乳化剤などを蒸留水で数回繰り返し
洗浄除去し、再び蒸留水などに分散し、また必要であれ
ばマンニトールなどの添加物を加えて凍結乾燥する。そ
の後、必要であれば、減圧下加温してマイクロカプセル
中の水分および有機溶媒を除去する。加温条件として
は、例えばマイクロカプセルを毎分１０ないし２０℃の
昇温速度で示差走査熱量計で求めた生体内適合性ポリマ
ーの中間点ガラス転移温度よりも約５℃以上高い温度ま
で加温し、マイクロカプセル自体が所定の温度に達した
後、１週間以内、好ましくは２、３日以内、より好まし
くは約１時間ないし２４時間、同温度で保持する。

【００２３】（ｂ）相分離法（コアセルベーション法） 本法によりマイクロカプセルを製造する場合には、前記
（ａ）の生理活性ポリペプチド、界面活性剤および生体
内適合性ポリマーを含むＳ／Ｏ懸濁液にコアセルベーシ
ョン剤を撹拌下徐々に加えてマイクロカプセルを析出固
化させる。該「コアセルベーション剤」は、エマルショ
ン体積の約０.０１倍ないし約２,０００倍の体積量が加
えられる。さらに好ましくは約０.０５倍ないし約５０
０倍、特に約０.１倍ないし約２００倍の体積量である
場合が好ましい。また該「コアセルベーション剤」は、
生体内適合性ポリマーの溶剤として用いた有機溶媒と混
和する高分子、鉱物油または植物油等で、該「生体内適
合性ポリマー」を溶解しない化合物であれば特に限定さ
れない。具体的には、例えばシリコン油、ゴマ油、大豆
油、コーン油、綿実油、ココナッツ油、アマニ油、鉱物
油、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタンなどが用いられる。こ
れらは２種以上混合して用いてもよい。このようにして
得られたマイクロカプセルは、遠心分離あるいは濾過操
作により分取した後、ヘプタンなどで繰り返し洗浄し、
コアセルベーション剤を除去する。さらに（ａ）と同様
にして洗浄を行い、次いで凍結乾燥する。該「水中乾燥
法」および「相分離法」でのマイクロカプセルの製造で
は、粒子どうしの凝集を防ぐために凝集防止剤を加えて
もよい。該「凝集防止剤」としては、例えばマンニトー
ル、ラクトース、ブドウ糖、デンプン類（例えば、コー
ンスターチなど）、ヒアルロン酸あるいはそのアルカリ
金属塩などの水溶性多糖類；フィブリノーゲンやコラー
ゲンなどの蛋白；塩化ナトリウムやリン酸水素ナトリウ
ムなどの無機塩類などが適量用いられる。

【００２４】（ｃ）噴霧乾燥法 本法によりマイクロカプセルを製造する場合には、前記
（ａ）の生理活性ポリペプチド、界面活性剤および生体
内適合性ポリマーを含むＳ／Ｏ懸濁液を、ノズルを用い
てスプレードライヤー（噴霧乾燥器）の乾燥室内へ噴霧
し、きわめて短時間に微粒化液滴内の有機溶媒を揮発さ
せ、微粒子を調製する。該「ノズル」としては、例えば
二流体ノズル型、圧力ノズル型、回転ディスク型などが
ある。所望により凝集防止を目的として前記（ｂ）記載
の凝集防止剤を別ノズルより噴霧することも可能であ
る。このようにして得られたマイクロカプセルは、必要
であれば前記（ａ）と同様に減圧下加温してマイクロカ
プセル中の水分および有機溶媒を除去する。

【００２５】本発明の徐放性製剤は、例えば前記で得ら
れたマイクロカプセルをそのまま、あるいはこのマイク
ロカプセルを原料物質として種々の剤型、例えば非経口
剤（例えば、筋肉内、皮下、臓器、骨周縁部、関節部な
どへの注射剤または埋め込み剤、鼻腔、直腸、子宮など
への経粘膜剤など）、経口剤〔例えば、カプセル剤（例
えば、硬カプセル剤、軟カプセル剤など）、顆粒剤、散
剤などの固形製剤、懸濁剤などの液剤など〕などとして
投与することができる。本発明の徐放性製剤は、特に注
射剤であることが好ましい。前記方法で得られたマイク
ロカプセルを注射剤とするには、マイクロカプセルを分
散剤（例えば、Tween ８０、ＨＣＯ−６０などの界面活
性剤、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリ
ウム、ヒアルロン酸ナトリウムなどの多糖類、硫酸プロ
タミン、ポリエチレングリコール４００など）、保存剤
（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベンなど）、
等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソ
ルビトール、ブドウ糖など）、局所麻酔剤（例えば、塩
酸キシロカイン、クロロブタノールなど）などとともに
水性懸濁剤としたもの、ゴマ油、コーン油などの植物油
またはこれにレシチンなどのリン脂質を混合したもの、
あるいは中鎖脂肪酸トリグリセリド（例えば、ミグリオ
ール８１２など）とともに分散して油性懸濁剤としたも
のを徐放性注射剤とする。

【００２６】徐放性製剤が、例えばマイクロカプセルで
ある場合、微粒子であることが特に好ましい。マイクロ
カプセルの粒子径は、懸濁注射剤として使用する場合に
はその分散度、通針性を満足する範囲であればよく、例
えば、平均粒子径として約０.１ないし３００μｍの範
囲が挙げられる。該「微粒子」は、平均粒子径が約１な
いし２００μｍのものが好ましく、特に約２ないし１０
０μｍの範囲の粒子径を有するものが汎用される。前記
したマイクロカプセルを無菌製剤にするには、製造全工
程を無菌にする方法、ガンマ線で滅菌する方法、防腐剤
を添加する方法などが挙げられるが、特に限定されな
い。本発明の徐放性製剤は、低毒性で哺乳動物（例え
ば、ヒト、牛、豚、犬、ネコ、マウス、ラット、ウサギ
など）に対して各生理活性ポリペプチドに応じた適応症
の予防および／または治療に安全に用いることができ
る。本徐放性製剤の適応は、使用する生理活性ポリペプ
チドにより異なる。徐放性製剤は、該「生理活性ポリペ
プチド」が、例えばインスリンである場合には糖尿病な
ど、成長ホルモンである場合には、成長ホルモン分泌不
全症、ターナー症候群、下垂体性小人症、慢性腎疾患、
軟骨異栄養症、成人性下垂体不全症、ダウン症候群、シ
ルバー症候群、骨形成不全症、骨粗鬆症、あるいは若年
性慢性関節症など、インターフェロン−αである場合に
はウイルス性肝炎（例えば、Ｃ型肝炎、ＨＢe抗原陽性
活動性肝炎など）や癌（例えば、腎癌、多発性骨髄腫な
ど）など、エリスロポエチンあるいはトロンボポエチン
の場合には貧血（例えば、腎透析時貧血など）など、Ｇ
−ＣＳＦの場合には好中球減少症（例えば、制ガン剤治
療時）や感染症など、ＩＬ−２の場合には癌（例えば、
血管内皮腫、腎臓癌など）など、ＦＧＦの場合には消化
管潰瘍など、ＦＧＦ−９の場合には血小板減少症など、
ＮＧＦの場合には老人性痴呆や神経病（ニューロパシ
ー）など、ｔＰＡの場合には血栓症など、腫瘍壊死因子
の場合には癌などのそれぞれ治療または予防に有効であ
る。

【００２７】徐放性製剤の投与量は、生理活性ポリペプ
チドの種類と含量、放出の持続時間、対象疾患、対象動
物などによって種々異なるが、該「生理活性ポリペプチ
ド」の有効濃度が体内で保持される量であればよい。該
「生理活性ポリペプチド」の投与量としては、例えば徐
放性製剤が１週間型製剤である場合、好ましくは、成人
１人当たり約０.０００１ないし１０ｍｇ／ｋｇ体重の
範囲から適宜選ぶことができる。さらに好ましくは約
０.０００５ないし１ｍｇ／ｋｇ体重の範囲から適宜選
ぶことができる。投与回数は、１週間に１回、２週間に
１回、あるいは１ケ月に１回など、該「生理活性ポリペ
プチド」の種類と含量、剤型、放出の持続時間、対象疾
患、対象動物などによって適宜選ぶことができる。徐放
性製剤の有効成分である生理活性ポリペプチドが、例え
ばヒト成長ホルモンで、２週間型製剤を下垂体性小人症
の患者に投与する場合には、有効成分として通常、約
０.０１ないし約５ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０.０
３ないし約１ｍｇ／ｋｇ体重の範囲から適宜選び、２週
間に１回投与するのがよい。また生理活性ポリペプチド
がインスリンの場合、糖尿病患者に対する投与量は、有
効成分として通常、約０.００１ないし約１ｍｇ／ｋｇ
体重、好ましくは約０.０１ないし約０.２ｍｇ／ｋｇの
範囲から適宜選び、１週間に１回投与するのがよい。徐
放性製剤は、常温あるいは冷所に保存されるが、好まし
くは冷所である。ここでいう常温あるいは冷所とは日本
薬局方において定義されるものである。すなわち、常温
とは１５ないし２５℃、冷所とは１５℃以下を意味す
る。

【００２８】

【発明の実施の形態】以下に実施例および試験例を挙げ
て、さらに具体的に説明するが、これらは本発明を限定
するものではない。

【実施例】

実施例１ ヒト成長ホルモン（rhＧＨ）６０ｍｇおよびプルロニッ
クＦ−６８ ２０ｍｇを蒸留水６ｍｌに溶解後、凍結乾
燥した。得られた粉末を乳酸−グリコール酸共重合体
（乳酸／グリコール酸＝７５／２５；ポリスチレン換算
平均分子量８４００）１９２０ｍｇの塩化メチレン２.
５ｍｌ溶液に分散し、ポリトロンで微粒化した後、１５
℃に冷却した０.１％ ＰＶＡ水溶液８００ｍｌ中でホ
モジナイザーを使用してＳ／Ｏ／Ｗ型エマルションとし
た。この後、通常のプロペラ撹拌機で３時間ゆっくり撹
拌し、塩化メチレンの揮散と共にマイクロカプセルが固
化するのを待って遠心分離機で捕集し、同時に精製水で
水洗した。捕集されたマイクロカプセルは、一昼夜凍結
乾燥することによって粉末として得られた。

【００２９】比較例１ rhＧＨ ６０mgを蒸留水６ｍｌに溶解後、凍結乾燥し
た。得られた粉末を乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸
／グリコール酸＝７５／２５；ポリスチレン換算平均分
子量８４００）１９４０ｍｇの塩化メチレン２.５ｍｌ
溶液に分散し、ポリトロンで微粒化した後、１５℃に冷
却した０.１％ ＰＶＡ水溶液８００ｍｌ中でホモジナ
イザーを使用してＳ／Ｏ／Ｗ型エマルションとした。以
下実施例１の方法と同様の操作によりマイクロカプセル
粉末を得た。〔表１〕に実施例１および比較例１の方法
で得られたマイクロカプセルの特性を示す。

【表１】 製法 界面活性剤 rhＧＨ取り込み率 １日放出量 (In vitr o 溶出試験) 実施例１ プルロニックＦ−６８ １０５％ ３８％ 比較例１ 無 添 加 ６３％ ６８％ 〔表１〕の結果より、界面活性剤（プルロニックＦ−６
８）の添加により、マイクロカプセル中へのrhＧＨ取り
込み率が向上し、in vitro 溶出試験での初期放出（１
日放出量）を抑制することが可能となった。

【００３０】比較例２ rhＧＨ ６０mgを蒸留水６mlに溶解後、凍結乾燥した。
得られた粉末を、予めプルロニックＦ−６８ ２０mgと
乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝７
５／２５，ポリスチレン換算平均分子量８４００）１９
２０mgとを塩化メチレン２.５mlに溶解した液に分散
し、ポリトロンで微粒化した。次いで１５℃に冷却した
０.１％ＰＶＡ水溶液８００ml中でホモジナイザーを使
用してＳ／Ｏ／Ｗ型エマルションとした。以下実施例１
の方法と同様の操作によりマイクロカプセル粉末を得
た。〔表２〕に実施例１および比較例２の方法で得られ
たマイクロカプセルの特性を示す。

【表２】 製法 界面活性剤 rhGH取り込み率 １日放出量 （In vitro 溶出試験) 実施例１ プルロニックF-68凍結乾燥 １０５％ ３８％ 比較例２ プルロニックF-68油相溶解 ６９％ ６２％ 〔表２〕の結果より、界面活性剤（プルロニックＦ−６
８）を予め rhＧＨに添加し得られた凍結乾燥粉末を用
いる実施例１の方法により調製されたマイクロカプセル
は、同量の界面活性剤を溶解した油相（ジクロロメタ
ン）を用いる比較例２の方法により調製されたマイクロ
カプセルより、マイクロカプセル中への rhＧＨ取り込
み率が向上し、in vitro 溶出試験での初期放出（１日
放出量）を抑制することが可能となった。

【００３１】実施例２ rhＧＨ １００ｍｇおよびプルロニックＦ−６８ １０
０ｍｇを蒸留水２０ｍｌに溶解後、凍結乾燥した。得ら
れた粉末を乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グリコ
ール酸＝５０／５０；ポリスチレン換算平均分子量１０
１００）１８００ｍｇの酢酸エチル２.５ｍｌ溶液に分
散し、ポリトロンで微粒化した後、１５℃に冷却した
０.５％ ＰＶＡ水溶液８００ｍｌ中でホモジナイザーを
使用してＳ／Ｏ／Ｗ型エマルションとした。この後、通
常のプロペラ撹拌機で３時間ゆっくり撹拌し、酢酸エチ
ルの揮散と共にマイクロカプセルが固化するのを待って
遠心分離機で捕集し、同時に精製水で水洗した。捕集さ
れたマイクロカプセルは、一昼夜凍結乾燥することによ
って粉末として得られた。

【００３２】実施例３ rhＧＨ ５０ｍｇ、プルロニックＦ−６８ ５０ｍｇお
よびＨＣＯ−６０ １０ｍｇを蒸留水１０ｍｌに溶解
後、凍結乾燥した。得られた粉末をヒドロキシ酪酸−グ
リコール酸共重合体（ヒドロキシ酪酸／グリコール酸＝
７５／２５；ポリスチレン換算平均分子量１２，００
０）１８９０ｍｇの塩化メチレン５ｍｌ溶液に分散し、
ポリトロンで微粒化した後、１５℃に冷却した５％のマ
ンニトールを含有する０.２％ ＰＶＡ水溶液１０００
ｍｌ中でホモジナイザーを使用してＳ／Ｏ／Ｗ型エマル
ションとした。この後、通常のプロペラ撹拌機で３時間
ゆっくり撹拌し、塩化メチレンの揮散とともにマイクロ
カプセルが固化するのを待って遠心分離機で捕集し、同
時に精製水で水洗した。捕集されたマイクロカプセル
は、一昼夜凍結乾燥することによって粉末として得られ
た。

【００３３】実施例４ インターフェロン−α １０ｍｇおよびプルロニックＦ
−６８ ３０ｍｇを蒸留水１０ｍｌに溶解後、凍結乾燥
した。凍結乾燥した得た粉末をヒドロキシ酪酸−グリコ
ール酸共重合体（ヒドロキシ酪酸／グリコール酸＝７５
／２５；ポリスチレン換算平均分子量１２，０００）１
９６０ｍｇの塩化メチレン５ｍｌ溶液に分散し、ポリト
ロンで微粒化した後、１５℃に冷却した０.２％ ＰＶ
Ａ水溶液１０００ｍｌ中でホモジナイザーを使用してＳ
／Ｏ／Ｗ型エマルションとした。この後、通常のプロペ
ラ撹拌機で３時間ゆっくり撹拌し、塩化メチレンの揮散
とともにマイクロカプセルが固化するのを待って遠心分
離機で捕集し、同時に精製水で水洗した。捕集されたマ
イクロカプセルは、一昼夜凍結乾燥することによって粉
末として得られた。

【００３４】実施例５ rhＧＨ ６０mgとプルロニックＦ−６８ ２mgとを含む
水溶液４.７mlに、サケ由来遊離プロタミン１００mgを
含む水溶液０.５mlを加え、２５℃で２０分間ゆっくり
撹拌し不溶性複合体を形成後、凍結乾燥した。得られた
粉末をカルボキシル基末端を完全にエチルエステル化し
たポリ乳酸重合体（乳酸１００％，ポリスチレン換算平
均分子量９０００）１８３８mgの塩化メチレン５ml溶液
に分散し、まずポリトロンを用いて１５,０００ rpm で
１分間、さらに超音波照射２分間により微粒化した。次
いで１５℃に冷却した５％マンニトール含有０.１％ Ｐ
ＶＡ水溶液８００ml中でホモジナイザーを使用してＳ／
Ｏ／Ｗ型エマルションとした。この後、通常のプロペラ
撹拌機で３時間ゆっくり撹拌し、塩化メチレンの揮散と
共にマイクロカプセルが固化するのを待って遠心分離機
で捕集し、同時に精製水で水洗した。捕集されたマイク
ロカプセルは、一昼夜凍結乾燥することによって粉末と
して得られた。

【００３５】実施例６ rhＧＨ ７５mgとポリオキシエチレン硬化ヒマシ油ＨＣ
Ｏ−６０ １５mgとを５mＭ炭酸水素アンモニウム緩衝
液（pＨ７.８）１５mlに溶解後、酢酸亜鉛水溶液（５mg
／ml）を徐々に添加し（rhＧＨ：Ｚn＝１：７モル比）
不溶性複合体を形成した。遠心分離後、沈渣を少量の蒸
留水に再分散し凍結乾燥した。得られた粉末を乳酸−グ
リコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５０／５
０，ポリスチレン換算平均分子量１５０００）１４２５
mgの塩化メチレン２ml溶液に分散し、まず超音波照射に
て５分間、さらにポリトロンを用いて１５,０００ rpm
で１分間処理し微粒化した。次いで１５℃に冷却した１
０％マンニトール含有０.１％ＰＶＡ水溶液８００ml中
でホモジナイザーを使用してＳ／Ｏ／Ｗ型エマルション
とした。この後、実施例５と同様の方法によりマイクロ
カプセルを作製した。

【００３６】実施例７ Ａ法：rhＧＨ ７５mgとプルロニックＦ−６８ １５mg
とを蒸留水６mlに溶解後、凍結乾燥した。得られた粉末
を乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝
５０／５０，ポリスチレン換算平均分子量１５０００）
１４１０mgの塩化メチレン３ml溶液に分散し、ボルテッ
クスミキサーで約３０秒間混合した。このＳ／Ｏ分散液
０.１mlを塩化メチレンで希釈後、レーザ回折式粒度分
布測定装置に供し rhＧＨの粒径を測定した。上記Ｓ／
Ｏ分散液を、１５℃に冷却した１０％マンニトール含有
０.１％ＰＶＡ水溶液８００ml中でホモジナイザーを使
用してＳ／Ｏ／Ｗ型エマルションとした。この後、実施
例５と同様の方法によりマイクロカプセルを作製した。 Ｂ法：rhＧＨ ７５mgとプルロニックＦ−６８ １５mg
とを蒸留水６mlに溶解後、凍結乾燥した。得られた粉末
を乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝
５０／５０，ポリスチレン換算平均分子量１５０００）
１４１０mgの塩化メチレン３ml溶液に分散し、まず超音
波照射にて５分間、さらにポリトロンを用いて１５,０
００ rpm で１分間処理し十分に微粒化した。このＳ／
Ｏ分散液０.１mlを塩化メチレンで希釈後、レーザ回折
式粒度分布測定装置に供し rhＧＨの粒径を測定した。
上記Ｓ／Ｏ分散液を実施例７−Ａ法と同様の方法により
処理し、マイクロカプセルを作製した。

【００３７】比較例３ rhＧＨ ７５mgを蒸留水６mlに溶解後、凍結乾燥した。
得られた粉末を乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グ
リコール酸＝５０／５０，ポリスチレン換算平均分子量
１５０００）１４１０mgの塩化メチレン３ml溶液に分散
し、ボルテックスミキサーで約３０秒間混合した。この
Ｓ／Ｏ分散液０.１mlを塩化メチレンで希釈後、レーザ
回折式粒度分布測定装置に供し rhＧＨの粒径を測定し
た。上記Ｓ／Ｏ分散液を実施例７Ａ法と同様の方法によ
り処理し、マイクロカプセルを作製した。〔表３〕に実
施例７のＡ法、Ｂ法および比較例３の方法で得られたマ
イクロカプセルの特性を示す。

【表３】 製法 Ｓ／Ｏ 分散液中の rhＧＨ平均粒子径 rhＧＨ取り込み率 実施例７のＡ法 １２.１μm ９７％ 実施例７のＢ法 ６.２μm １０３％ 比較例３ ４０.３μm ７１％ 〔表３〕の結果より、本発明に従って、液中 rhＧＨ平
均粒子径が２０μｍ以下のＳ／Ｏ分散液を使用し調製し
たマイクロカプセルは、rhＧＨを界面活性剤とともに急
速乾燥せず、かつ平均粒子径が３０μｍ以上のＳ／Ｏ分
散液を使用し調製したマイクロカプセルよりも rhＧＨ
取り込み率が向上した。

【００３８】試験例１ 前記実施例１及び比較例１で得られた２種のマイクロカ
プセルをＳＤラット（雄性、６週齢）に１５ｍｇ／ｋｇ
で皮下投与し、その血清中濃度をラジオイムノアッセイ
（Ａb ビーズＨＧＨ：栄研化学）により測定した。これ
によって得られた結果を〔図１〕に示す。プルロニック
Ｆ−６８の添加により、Ｓ／Ｏ／Ｗ型マイクロカプセル
で頻繁に観察される投与後初期のrhＧＨ血清中濃度の上
昇を抑制し、より安定して長期間薬物の放出を持続させ
ることが可能となった。その結果、in vivo での初期放
出の指標である、１８日間のＡＵＣ（Area Under the C
oncentration）に対する最初の１日間のＡＵＣの比は、
界面活性剤無添加時の９４％に対し、プルロニックＦ−
６８添加時は５６％に抑制された。

【００３９】試験例２ 前記実施例１の方法および比較例２の方法で得られた２
種のマイクロカプセルをＳＤラット（雄性、６週齢）に
１５mg／kgで皮下投与し、その血清中濃度を試験例１記
載のラジオイムノアッセイにより測定した。これによっ
て得られた結果を[図２]に示す。プルロニックＦ−６８
を予め rhＧＨに添加し得られた凍結乾燥粉末を用いる
実施例１の方法により調製されたマイクロカプセルは、
同量の界面活性剤を溶解した油相（ジクロロメタン）を
用いる比較例２の方法により調製されたマイクロカプセ
ルより、投与後初期の rhＧＨ血清中濃度の上昇が小さ
く、より安定した持続性を発揮した。その結果、投与１
時間後の血清中濃度は比較例２のマイクロカプセルでは
５７４ng／mlであったが、実施例１のマイクロカプセル
では１８８ng／mlであった。また in vivo での初期放
出の指標である、１８日間のＡＵＣに対する最初の１日
間のＡＵＣの比は、プルロニックＦ−６８油相添加の比
較例２の方法の６７％に対し、プルロニックＦ−６８／
rhＧＨ凍結乾燥の実施例１の方法は５６％に抑制され
た。

【００４０】試験例３ 前記実施例７のＡ，Ｂ法および比較例３の方法で得られ
た３種のマイクロカプセルをＳＤラット（雄性、６週
齢）に１５mg／kgで皮下投与し、その血清中濃度を試験
例１記載のラジオイムノアッセイにより測定した。これ
によって得られた結果を〔図３〕に示す。 プルロニッ
クＦ−６８の添加により、Ｓ／Ｏ／Ｗ型マイクロカプセ
ルで頻繁に観察される投与後初期のrhＧＨ血清中濃度の
上昇を抑制し、より安定して長期間薬物の放出を持続さ
せることが可能となった。その結果、in vivo での初期
放出の指標である、１４日間のＡＵＣに対する最初の１
日間のＡＵＣの比は、界面活性剤無添加時の７９％に対
し、プルロニックＦ−６８添加でボルテックス混合の場
合には４１％、プルロニックＦ−６８添加で超音波−ポ
リトロン処理の場合には４９％に抑制された。

【００４１】

【発明の効果】本発明によればあらかじめ生理活性ポリ
ペプチドと界面活性剤とを混合し、ついで急速乾燥した
ものを油相に均一に分散させてから徐放性製剤に成型す
ることによって、初期放出が抑制され、長期間にわたる
一定した放出速度を示す優れた徐放性製剤を得ることが
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】は実施例１及び比較例１により得られた２種の
マイクロカプセルをＳＤラットに皮下投与した試験例１
の結果であり、rhＧＨ血清中濃度の経時変化を示す。

【図２】は、試験例２結果であり、実施例１及び比較例
２で得られた２種のマイクロカプセルをＳＤラットに皮
下投与したときの rhＧＨ血清中濃度の経時変化を示す。

【図３】は、試験例３の結果であり、実施例７のＡ法、
Ｂ法及び比較例３により得られた３種のマイクロカプセ
ルをＳＤラットに皮下投与したときの rhＧＨ血清中濃
度の経時変化を示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 9/52 Ａ６１Ｋ 31/765 31/765 31/785 31/785 47/14 Ｈ 38/22 ＡＥＦ 47/26 Ｈ 38/28 ＡＣＶ 47/32 Ｈ 38/27 ＡＢＧ 47/34 Ｄ 38/21 ＡＢＪ Ｈ 47/14 37/02 ＡＤＴ 47/26 37/24 ＡＥＦ 47/32 37/26 ＡＣＶ 47/34 37/36 ＡＢＧ 37/66 ＡＢＪＨ

Claims (31)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】生理活性ポリペプチドと界面活性剤とを含
   む急速乾燥品を油相に分散させ、成型することを特徴と
   する徐放性製剤の製造法。
2. 【請求項２】油相に分散した急速乾燥品の平均粒子径が
   約０．０５μｍないし約５０μｍである請求項１記載の
   製造法。
3. 【請求項３】生理活性ポリペプチドと界面活性剤との重
   量比が約１：０.００１ないし約１：１０００である請
   求項１記載の製造法。
4. 【請求項４】油相が生体内適合性ポリマーを含む有機溶
   媒相である請求項１記載の製造法。
5. 【請求項５】有機溶媒中の生体内適合性ポリマーの濃度
   が約０.０１％（Ｗ／Ｗ）ないし約８０％（Ｗ／Ｗ）で
   ある請求項４記載の製造法。
6. 【請求項６】生理活性ポリペプチド、界面活性剤および
   生体内適合性ポリマーの全量に対する界面活性剤の使用
   割合が約０.００２％（Ｗ／Ｗ）ないし約５０％（Ｗ／
   Ｗ）である請求項４記載の製造法。
7. 【請求項７】生理活性ポリペプチドが水溶性である請求
   項１記載の製造法。
8. 【請求項８】生理活性ポリペプチドがホルモン類である
   請求項１記載の製造法。
9. 【請求項９】ホルモン類が成長ホルモン類である請求項
   ８記載の製造法。
10. 【請求項１０】ホルモン類がインスリン類である請求項
    ８記載の製造法。
11. 【請求項１１】生理活性ポリペプチドがサイトカイン類
    である請求項１記載の製造法。
12. 【請求項１２】サイトカイン類がインターフェロン類ま
    たはインターロイキン類である請求項１１記載の製造
    法。
13. 【請求項１３】生体内適合性ポリマーが生体内分解性ポ
    リマーである請求項４記載の製造法。
14. 【請求項１４】生体内分解性ポリマーが脂肪酸ポリエス
    テルである請求項１３記載の製造法。
15. 【請求項１５】脂肪酸ポリエステルが乳酸−グリコール
    酸共重合体である請求項１４記載の製造法。
16. 【請求項１６】乳酸−グリコール酸共重合体の分子量が
    約３,０００ないし７０,０００で、この乳酸／グリコー
    ル酸の組成比が約１００／０ないし約３０／７０である
    請求項１４記載の製造法。
17. 【請求項１７】脂肪酸ポリエステルがヒドロキシ酪酸−
    グリコール酸共重合体である請求項１４記載の製造法。
18. 【請求項１８】ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体
    の分子量が約３,０００ないし約７０,０００で、このヒ
    ドロキシ酪酸／グリコール酸の組成比が約１００／０な
    いし約４０／６０である請求項１７記載の製造法。
19. 【請求項１９】界面活性剤が非イオン性である請求項１
    記載の製造法。
20. 【請求項２０】非イオン性界面活性剤の親水性親油性比
    （ＨＬＢ）が１０以上である請求項１９記載の製造法。
21. 【請求項２１】界面活性剤がポリオキシエチレン−ポリ
    オキシプロピレン共重合物、ポリオキシエチレン硬化ヒ
    マシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、および
    ポリビニルピロリドンから選ばれた１種または２種以上
    の非イオン性界面活性剤からなる請求項１記載の製造
    法。
22. 【請求項２２】非イオン性界面活性剤がポリオキシエチ
    レン−ポリオキシプロピレン共重合物である請求項１９
    記載の製造法。
23. 【請求項２３】徐放性製剤がマイクロカプセルである請
    求項１記載の製造法。
24. 【請求項２４】マイクロカプセルの平均粒子径が約１.
    ０ないし約２００μm である請求項２３記載の製造法。
25. 【請求項２５】徐放性製剤が注射剤である請求項１記載
    の製造法。
26. 【請求項２６】生理活性ポリペプチドと界面活性剤とを
    含む急速乾燥品が油相に分散した分散液。
27. 【請求項２７】油相に分散した急速乾燥品の平均粒子径
    が約０．０５μｍないし５０μｍである請求項２６記載
    の分散液。
28. 【請求項２８】生理活性ポリペプチドと界面活性剤とを
    含む水溶液または懸濁液の急速乾燥品が生体内適合性ポ
    リマー含有の油相に分散した徐放性製剤用原料。
29. 【請求項２９】請求項１記載の製造法により製造される
    医薬用徐放性製剤。
30. 【請求項３０】生理活性ポリペプチドが成長ホルモン類
    である請求項２９記載の製剤。
31. 【請求項３１】成長ホルモン分泌不全症、下垂体性小人
    症、ターナー症候群、慢性腎疾患、軟骨異栄養症、成人
    性下垂体不全症、ダウン症候群、シルバー症候群、骨形
    成不全症、骨粗鬆症、又は若年性慢性関節症の予防又は
    治療用である請求項３０の製剤。