JPH09508099A

JPH09508099A - 細胞中に少なくとも一つの分子を導入できる化合物

Info

Publication number: JPH09508099A
Application number: JP7517056A
Authority: JP
Inventors: シェル，ジャン−マリーリュイッス; ロベルフック，
Original assignee: ユニヴェルシテリブルドゥブリュッセル
Priority date: 1993-12-20
Filing date: 1994-12-19
Publication date: 1997-08-19
Also published as: DE69430321T2; DE69430321D1; EP0736002B9; EP0736002A1; AU1103995A; WO1995017378A1; ES2173944T3; EP0736002B1; CA2179385A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、細胞中に少なくとも一つの分子を導入することができる化合物及び式（Ｉ）：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の化合物に関する。又、本発明は膜がこの化合物を含む正に帯電した小胞（vesicle ）、前記小胞と結合した少なくとも一つの分子を含むベクター、前記化合物又は前記ベクターによって型質転換（transform）された細胞、動物及び／又は植物のみならず前記ベクターによって型質転換された細胞及び／又は前記ベクターを含有する薬理又は美容組成物に関する。本発明は又前記化合物の合成方法及び前記ベクターの製造方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】細胞中に少なくとも一つの分子を導入できる化合物発明の分野本発明は、細胞中に少なくとも一つの分子を導入できる化合物に関する。本発明は又膜がこの化合物を含有する正に帯電した小胞（vesicle）、本発明による小胞を含有するベクター；前記化合物又はベクターによって型質転換（tr ansform）された細胞、動物及び／又は植物のみならず前記ベクター及び／又は前記ベクターで型質転換された細胞を含む薬理又は美容組成物に関する。本発明は又前記化合物の合成方法及び前記ベクターの製造方法に関する。本発明の別の目的は、インビトロ及び／又はインビボで、細胞中に少なくとも一つの分子の導入をするための化合物及び／又はベクターの用途に関する。本発明の基礎を形成する技術的背景及び先行技術細胞中に核酸又は活性治療剤の如き分子を導入するため、種々の方法が遺伝子工学及び薬学において使用されている。トランスフェクションは、遺伝子材料を細胞中に導入するため、遺伝子の発現を研究するため、及び遺伝子療法のための戦略を開発するため広く使用されている方法である。膜の化学的変換（デキストランホスフェート、リン酸カルシウム等）又は物理的変換（マイクロインジェクション、電気穿孔法等）を用いる多数の実験方法が開発されており、この方法を用いて細胞中に核酸を導入するために種々成功している。研究の別の中心は、インビトロで細胞中に遺伝子材料を侵入させるため、それらの有効性及び使用の容易さを証明した新規な両親媒性カチオンベクターの開発に関係している（米国のProc．Natl．Acad．Sci.８４，７４１３〜７４１７頁、１９８７年のP．L．Felgner等の論文参照）。 GIBCO BRLからのＮ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ− トリメチルアンモニウムクロライド（DOTMA）であるLipofectin（登録商標）、B oehringer Mannheim GmbHからのＮ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル− Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルサルフェート（DOTAP）であるTrans fection-reagent（登録商標）の如きこれらのベクターの幾つかが市販されている。又特許出願ＷＯ９１／１５５０１（YALE UNIVERSITY）には、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンの如き中性リン脂質及びステアリルアミン、三級アミン又はベンゾトリウム塩の如きカチオン脂質からなる正に帯電した試薬が核酸のトランスフェクションのために記載されている。それにも拘らず、これらの製品は細胞の有効トランスフェクションを得るため大量の試薬を必要とし、従って製品の細胞毒性及びそれらのコストを増大させている〔例えばLipofectin（登録商標）（DOTMA）の代価は１ｍｌについて米ドルで１４５ドルであり、トランスフェクション（transfection）あたり米ドルで１０ドルに等しい）。更にLipofectin（登録商標）（DOTMA）は、血清に加えることのできない追加の欠点を有する。文献“Vesicle Formation by double longchain Amidines（Fabienne D efrise - Quertain等による）（J．Chem．Soc．，Chem．Commun．，１９８６年、１０６０頁〜１０６２頁参照）には３−テトラデシルアミノ−Ｎ−ｔ−ブチル −Ｎ′−テトラデシルプロピオンアミジンからなる小胞の形成が記載されている。しかしながら、この文献には、これらの化合物の製造のための充分な説明が含まれていない。事実この文献には、式（式中ＯＲは式ＲＯＨのアルコールの残基であり、Ｒ²は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖、及び置換アルキル鎖を含む群から選択される）の化合物を形成するため塩基性水性溶液を使用することが必要であるという事、又は使用すべき反応温度、及び本発明による化合物の製造のため必要である中間体化合物については示されていない。発明の目的本発明の目的は、先行技術の欠点を示さないで、細胞中に少なくとも一つの分子を導入できる新規なベクター及び／又は新規な化合物を製造することにある。本発明は又、前記ベクター及び／又は前記ベクターで型質変換された前記細胞を含む薬理又は美容組成物を製造することにある。本発明の別の目的は血清中で使用できるベクターを製造することにある。発明の特徴的要素本発明は一般式：の化合物に関する、式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含む基からなる群から選択される；ｎは正の整数であり、好ましくはｎ＞１である；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される。好ましくはＡは式 −Ｘ−Ｒ¹ の基を表し、式中Ｒ¹は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択され、Ｘは炭素及び／又は酸素誘導体：硫黄誘導体：窒素誘導体：からなる群から選択された原子の２価基又は２価原子を表す。有利にはＲ¹及びＲ³又はＲ¹及びＲ⁴は１２個以上の炭素原子、好ましくは１２〜１８個の炭素原子を含有する炭化水素鎖からなる群から選択される。本発明の好ましい実施態様によれば、化合物は下記式に相当する：式中ｍは１２〜１８である。本発明は又、本発明による化合物を含む膜を有する正に帯電した小胞のみならず、細胞、抗原、ポリペプチド又は所望によりグリコシル化蛋白質及び／又は活性治療又は美容剤を遺伝的に型質変換できる核酸例えばプラスミド、メッセンジャーＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ，ｃＤＮＡ合成オリゴヌクレオチド等からなる群から選択した少なくとも一つの分子と結合した前記小胞からなるベクターに関する。本発明の別の目的は、核酸、抗原、ポリペプチド又は所望によりグリコシル化蛋白質及び／又は活性治療又は美容剤からなる群から選択した少なくとも一つの分子を、細胞中に導入するための方法に関し、この方法においては、前記細胞を、前記分子及び化合物及び／又は本発明による小胞と接触状態にもたらす。同様に、この導入法は、前記細胞を、本発明によるベクターと接触状態にもたらすことによって達成できる。本発明の方法の第一の実施態様によれば、トランスジェニックである植物又は動物を作るため又は遺伝子治療のため、特にウイルス又はバクテリア感染等の如き感染又は癌の如き細胞障害の処理のため、細胞をインビトロで処理する。本発明の方法の第二の好ましい実施態様によれば、トランスジェニックである組変え微生物、植物及び／又は動物を作るため又は遺伝子治療のため、細胞をインビトロで処理する。本発明は又、本発明によるベクターによって型質変換された細胞、本発明によるベクター又は前記細胞によって型質変換された動物及び／又は植物、及び本発明によるベクター及び／又は本発明による型質変換された細胞を含有するワクチンの如き美容又は薬理組成物に関する。本発明の別の目的は、式ＣＨ₂＝ＣＨＣ≡Ｎ及びＲ²−Ｃｌの化合物を無水塩化第二鉄と反応させて式ＣＨ₂＝ＣＨＣ≡Ｎ⁺−Ｒ²の化合物のテトラクロロ鉄（II ）酸塩を形成するようにし、このテトラクロロ鉄（II）酸塩を式ＲＯＨのアルコールと反応させ、次いで塩基性水性溶液中で反応させて、式の化合物を形成するようにし、これを式Ｒ³−ＮＨ−Ｒ⁴のアミンで処理して式の化合物形成するようにする化合物の合成法に関する。本発明は又、核酸、抗原、ポリペプチド、及び所望によりグリコシル化蛋白質及び／又は活性治療もしくは美容剤からなる群から選択した少なくとも一つの分子を、本発明による小胞と反応させる本発明によるベクターの製造法に関する。本発明の別の目的は、式（式中ＯＲは式ＲＯＨのアルコールの残基であり、Ｒ²は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖、及び置換アルキル鎖からなる群から選択する）の中間体化合物に関する。本発明の最後の目的は、インビトロで細胞中に一つ以上の分子の導入のため本発明によるベクター及び／又は化合物の使用のみならずインビボで細胞中に一つ以上の分子を導入するため本発明によるベクターの使用に関する。発明の好ましい実施態様の説明本発明は一般式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含む基からなる群から選択され、ｎは正の整数、好ましくは＞１であり、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の化合物が、小胞を形成し、他の分子と結合して、動物又は植物細胞又は微生物中に前記分子を導入できるベクターを形成できるという意外な事実に基づいている。 “他の分子”によって、前記細胞の状態、特に前記細胞の物理化学的状態又はゲノムを変性することができる核酸、抗原、ポリペプチド又は所望によりグリコシル化蛋白質又は活性治療もしくは美容剤の如き分子構造と理解する。１）３−アルキルアミノ−Ｎ−ｔ−ブチル−Ｎ′−アルキルプロピオンアミジン（８）の合成アクリロニトリルをニトリリウム塩（４）に変換する、これは現場でニタノール（５）によってエチル−Ｎ−ｔ−ブチルプロペンイミデート（７）に変える、この無色液体は冷温（冷蔵庫中で）数週間安定である。それにも拘らず室温に出すと、化合物（７）は重合によって徐々に劣化するようになる。アルキルアミン（５）（２当量）で６５℃で処理したイミデート（７）（１当量）は、全ての場合において、６０〜６５％の収率（表１参照）で二重長鎖アミジン（８）を与える。 −２５℃で３００ｍｌの無水ジクロロメタン中の無水塩化第二鉄６５ｇ（０．４モル）の攪拌懸濁液に、２８ｍｌ（０．４２モル）のアクリロニトリル（１）を加える。５分後赤い懸濁液を−３５℃に冷却し、次に４６ｍ℃（０．４２モル）のｔ−ブチルクロライド（２）を加える。色は赤から黄銅となり、かくしてＮ −ｔ−ブチルアクリロニトリリウムテトラクロロ鉄酸塩（４）を形成する。懸濁液を−８０℃に冷却し、攪拌しながらそれに４６．８ｇ（１０．８モル）の無水エタノール（マグネシウム上で乾燥し、蒸溜した）を加える。混合物の温度を− ２０℃まで上昇させ、次いでそれを０℃に冷却した１．５Ｍ水性水酸化ナトリウム８００ｍｌに加える。混合物は、室温で沈降が生じた後分離する。水性相を３回１００ｍｌのジクロロメタンで抽出する。一緒にした有機相を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、次いで濾過する。スパチユラ片上の少量のハイドロキノンを加えた後、回転蒸発器を用いて溶液を蒸発させる、浴は３０℃を越えてはならない。次に液体残渣をデフレグメータを備えた小さいカラムで、５６℃で３０トルの下に減圧下に蒸溜する。収量：（７）の６６％に等しい４１．０１ｇ。アクリルアミド（７）の１当量中のアルキルアミン（５）の２当量の懸濁液を、水流ポンプで作った減圧下に攪拌し、６５℃に加熱する。６時間後、混合物を冷却させる。それをヘキサン中に抽出し、γ−Tonerdeアルミナカラム上で濾過する。濾液を真空下に蒸発させ、次いで攪拌し、ポンプ乾燥し、溶融し、固化し、アミジン（８）を得る（表１参照）。物理特性、分光分析特性及び分析特性を表２に示す。２）３−テトラデシルアミノ−Ｎ−ｔ−ブチル−Ｎ′−テトラデシルプロピオンアミジン〔純粋ジ−Ｃ₁₄−アミジン（１ｍｇ／ｍｌ）〕からなる小胞の形成ジ−Ｃ₁₄−アミジンの溶液をエタノール（１００ｍｇ／ｍｌ）中で作り、この溶液３０μｌ（３ｍｇ）を、Hamilton注入器によって、３０℃に加熱した３ｍｌのトリス／ＨＣｌ緩衝液（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に急速に注入する。操作中、溶液は磁気棒でゆるやかに攪拌する。小胞が直ちに形成する。３）３−テトラデシルアミノ−Ｎ−ｔ−ブチル−Ｎ′−テトラデシルプロピオンアミジン〔（８）、ｍ＝１４〕及びホスファチジルエタノールアミン〔ジ−Ｃ₁₄ −アミジン／ＰＥ（１ｍｇ／１ｍｌ）〕からなる小胞の形成クロロホルム（１０ｍｇ／ｍｌ）中に溶解した１．２５ｍｇのジ−Ｃ₁₄−アミジン及び１．７５ｍｇのＰＥ（牛の脳）を、試験管の壁上に薄いフィルムを形成するように窒素流下に乾燥する；溶媒の痕跡量を一夜真空下で除去する。次にフィルムを３ｍｌのトリス／ＨＣｌ緩衝液（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）の存在下に機械的に攪拌する。次いで得られた曇った懸濁液を、透明懸濁液が作られるまで（約１０分）窒素流の下で氷浴上で超音波処理する（Branson Ｂ−１２ Sonif ier、６０Ｗ）。各種のインビトロトランスフェクション法を下記実施例に示す、しかしこれは本発明の例示にのみ示すものである。実施例Ｉ１）ベクター小胞−プラスミドＤＮＡの形成５０μｇのプラスミドＤＮＡ及び１１μｇ（１１μｌ）の純水ジ−Ｃ₁₄−アミジン懸濁液〔又は２５μｇ（２５μｌ）のジ−Ｃ₁₄−アミジン／ＰＥ懸濁液〕を蒸溜水で別々に最終容量５０μｌに稀釈し、滅菌する。次に両溶液を混合し、室温で１５分間培養する。２）付着細胞のトランスフェクション細胞を６ウエル培養皿中で、それらが８０〜９０％密集するまで培養する。錯体（ジ−Ｃ₁₄−アミジン−ＤＮＡ又はジ−Ｃ₁₄−アミジン／ＰＥ−ＤＮＡ）を含有する懸濁液を、２ｍｌの培地とゆるやかに混合する。トランスフェクション操作のため使用する培地は、型質転換されるべき細胞のための通常の培地と同じである。培地中に所望によって存在させる血清はトランスフェクション法に阻害作用は有せず、多くの細胞系（cell lines）に対して必要なことが証明できる（特に懸濁液中で）。かくして形成される混合物はトランスフェクション培地を構成する。細胞（約１０⁶）は培地で洗い、トランスフェクション培地を加える。培地は所望の時間培養する。この時間はトランスフェクトされる細胞系によって決めることができるが、一般には２〜３時間の培養が使用される。培養後、トランスフェクション培地は新しい培地で交換し、６時間後、細胞を１００ｍｍ培養皿に移すことができる。３）懸濁液中の細胞のトランスフェクション錯体（ジ−Ｃ₁₄−アミジン−ＤＮＡ又はジ−Ｃ₁₄−アミジン／ＰＥ−ＤＮＡを含有する懸濁液を、ゆるやかに１０ｍｌの培地と混合する。かくして形成された混合物はトランスフェクション培地を構成する。１０⁶細胞の部分を遠心分離し、ペレットをトランスフェクション培地に再懸濁する。細胞懸濁液を１００ｍｍ培養皿に分布させる。懸濁液を所望時間培養する；培養後、細胞を遠心分離し、１０ｍｌの新しい培地中に再懸濁し、次いで通常の如く培養する。ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞を、１％のグルタミン及び１％のペニシリンを補充し、１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清）を含有するＦ１２培地中で培養する。Ｋ５６２（ヒト骨髄）細胞を、抗生物質及び非必須アミノ酸を補い、１０％ＦＣＳ（０．５〜１×１０⁶細胞／ｍｌ）を含有するＲＦＭＩ培地中で培養する。両細胞系をＣＯ₂雰囲気（３７℃、５％ＣＯ₂）の下で培養する。使用したプラスミドは、バクテリア複製基点Ｓ１、アンピシリン抵抗遺伝子及びバクテリア起原のＣＡＴ遺伝子を挿入した市販のプラスミドｐＣＭＶ５から誘導する。それはサイズにおいて約５０００塩基対であり、１ｍｇ／ｍｌの濃度で貯蔵する。上述した一般法に従った；前述した如く作った１１μｇ（１１μｌ）の純粋なジ−Ｃ₁₄−アミジン懸濁液〔又は２５μｇ（２５μｌ）のジ−Ｃ₁₄−アミジン／ＰＥ懸濁液〕及び５μｇ（５μｌ）のプラスミドＤＮＡを使用する。ＣＨＯ細胞（付着細胞）を６ウエル培養皿に植える、実験前日には１０⁶細胞／ウエルの量である；一方１回の実験について１０⁶細胞の量でＫ５６２細胞（懸濁液中）を使用する。培養は二つの細胞系に対して３時間行った。トランスフェクション培地は、一般法で説明した条件の下で小胞ベクター（純粋ジ−Ｃ₁₄−アミジン又はジ−Ｃ₁₄ −アミジン／ＰＥ／ＤＮＡ）を混合した通常の培地（血清を使用）である。培養後、細胞を前述した如く処理する；ＣＨＯ細胞を６時間後１００ｍｍ培養皿に移す。二つの細胞系は、Gorman等によって、B．H．（１９８２年）、Mol．C ell．Biol.２、１０４４〜１０５１頁に発表された如く行ったＣＡＴ分析前に、３６時間生長を継続する；概説すると、細胞溶解質（lysates）を３７℃で〔¹⁴ Ｃ〕クロラムフェニコール及びアセチルＣｏＡを用い２時間培養し、酢酸エチルで抽出する。有機相を、クロロホルム／メタノール９５：５で、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ）で溶離する。クロラムフェニルコールのアセチル化は、クロマトグラム上でオートラジオグラフィによって及びプレート上の点を計数して測定する。実施例 II 下表３は、同じ実験条件下で、細胞抽出物中のアセチル化クロラムフェニコールの百分率として表した、Boehringer Mannheimによって市販されている製品DO TAP（登録商標）及びジ−Ｃ₁₄に対するＣＡＴ遺伝子のトランスフェクション効率の比較を示す。本実施例の細胞系は、ＣＨＯ細胞（付着細胞）及びＫ５６２細胞（懸濁細胞）である。ベクターの組成物は：μｇ量のプラスミドＤＮＡ及びμ ｇ量のカチオン小胞を含有する。ジ−Ｃ₁₄は、市場で入手できる製品、即ちBoehringer MannheimからのDOTAP（登録商標）及びGibco BRLからのLipofectin（登録商標）より２倍〜３倍少ない量でトランスフェクション効率を可能にする；更にトランスフェクション効率は有利に使用した製品の細胞毒性を制限する。実施例 III 遺伝子材料のトランスフェクション１００μｇのＢＬＶ（ウシ白血病ウイルス）ゲノム及び２００μｇのアミジン −Ｃ₁₄を羊に皮下注射した。１月後、ウイルスエンベロープ蛋白質５１ｋＤ）は羊の血清中に免疫化学的に検出される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 8615−4ＣＡ６１Ｋ 45/00 45/00 7433−4Ｃ 47/48 Ｚ 47/48 9051−4Ｃ 48/00 48/00 7106−4ＨＣ０７Ｃ 327/30 Ｃ０７Ｃ 327/30 8615−4ＣＣ０７Ｈ 21/04 ＢＣ０７Ｈ 21/04 9282−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 ＡＣ１２Ｎ 5/10 9282−4Ｂ 5/00 Ｂ 15/09 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】 1. 式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の化合物。 2. Ａが式−Ｘ−Ｒ¹の残基を表し、Ｒ¹は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択され、Ｘはからなる群から選択される請求の範囲第１項記載の化合物。 3. Ｒ¹及びＲ³が少なくとも１２個の炭素原子を含む炭化水素鎖からなる群から選択される請求の範囲第１項記載の化合物。 4. Ｒ¹及びＲ³が１２〜１８個の炭素原子を含む炭化水素鎖からなる群から選択される請求の範囲第１項記載の化合物。 5. Ｒ¹及びＲ⁴が少なくとも１２個の炭素原子を含む炭化水素鎖からなる群から選択される請求の範囲第１項記載の化合物。 6. Ｒ¹及びＲ⁴が１２〜１８個の炭素原子を含む炭化水素鎖からなる群から選択される請求の範囲第１項記載の化合物。 7. ｎが１より大なる整数である請求の範囲第１項記載の化合物。 8. 前記化合物が、式：（式中ｍは１２〜１８の整数である）に相当する請求の範囲第２項記載の化合物。 9. 式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含む膜を有する正に帯電した小胞。 10. 膜が、式：（式中ｍは１２〜１８の整数であり、Ｘはからなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含有する請求の範囲第９項記載の小胞。 11. 式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電した小胞からなり、前記小胞が、核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択される少なくとも一つの分子と結合していることを特徴とするベクター。 12. 小胞が、式：（式中ｍは１２〜１８の整数であり、Ｘはからなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含有する請求の範囲第１１項記載のベクター。 13. 細胞中に、核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した少なくとも一つの分子を導入する方法であり、前記細胞を、前記分子及び式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の化合物と接触状態にもたらすことを特徴とする方法。 14. 前記細胞を、前記分子及び式（式中Ａは式−Ｘ−Ｒ¹の基を表し、Ｒ¹は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択され、Ｘはからなる群から選択される）の化合物と接触状態にもたらす請求の範囲第１３項記載の方法。 15. 前記細胞を、前記分子及び膜が式の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電した小胞と接触状態にもたらす請求の範囲第１３項記載の方法。 16. 小胞が、式：（式中ｍは１２〜１８の整数である）の少なくとも１種の化合物を含有する請求の範囲第１５項記載の方法。 17. 前記細胞を、膜が式：の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電した小胞からなるベクターと接触状態にもたらし、前記小胞が、核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤から選択した分子と結合している請求の範囲第１３項記載の方法。 18. 細胞をインビボで処理する請求の範囲第１３項記載の方法。 19. 細胞をインビトロで処理する請求の範囲第１３項記載の方法。 20. 細胞を、核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した分子、及び式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の化合物と接触状態にもたらす方法によって型質転換された細胞。 21. 膜が、式：の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電された小胞からなるベクターと細胞を接触させるようにもたらすことによって細胞が型質転換されており、前記小胞が核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤から選択した分子と結合している請求の範囲第２０項記載の細胞。 22. 式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電した小胞からなるベクターであり、前記小胞が核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した少なくとも一つの分子と結合しており、細胞を、核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した分子及び前述した如き式の化合物と接触状態にもたらす方法によって型質転換された細胞からなる群から選択した製品で型質転換されたヒトでない動物。 23. 式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電された小胞からなるベクターであり、前記小胞が核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した少なくとも一つの分子と結合しており、細胞を、核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した分子及び前述した如き式の化合物と接触状態にもたらす方法によって型質転換された細胞からなる群から選択した製品で型質転換された植物。 24. 式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電された小胞からなるベクターであり、前記小胞が核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択された少なくとも一つの分子と結合しており、細胞を、核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した分子及び前述した如き式の化合物と接触状態にもたらす方法によって型質転換された細胞からなる群から選択された製品を含有する薬剤。 25. 式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電された小胞からなるベクターであり、前記小胞が核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した少なくとも一つの分子と結合しており、細胞を、核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した分子及び前述した如き式の化合物と接触状態にもたらすことによって型質転換された細胞からなる群から選択した製品を含有する美容組成物。 26. 式ＣＨ₂＝ＣＨ≡Ｎ及びＲ²−Ｃｌの化合物を無水塩化第二鉄と反応させて式ＣＨ₂＝ＣＨＣ≡Ｎ⁺−Ｒ²の化合物のテトラクロロ鉄酸塩を形成し、このテトラクロロ鉄酸塩を式ＲＯＨのアルコールと、次いで塩基性水性溶液と反応させて、式の化合物を形成し、これを式Ｒ³−ＮＨ−Ｒ⁴のアミンで処理して式の化合物を形成することを特徴とする式（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の化合物の合成方法。 27. 式：（式中Ａは親水性基又はＣＨ₂基及び疎水性基を含有する基からなる群から選択され；ｎは正の整数であり；Ｒ²、Ｒ³、及びＲ⁴は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の少なくとも１種の化合物を含有する正に帯電した小胞を核酸、抗原、ポリペプチド、グリコシル化ポリペプチド、蛋白質、グリコシル化蛋白質、治療剤及び美容剤からなる群から選択した分子と接触状態にもたらすことを特徴とするベクターの製造方法。 28.式：（式中ＯＲは、式ＲＯＨのアルコールの残基であり、Ｒ²は水素原子、飽和アルキル鎖、不飽和アルキル鎖及び置換アルキル鎖からなる群から選択される）の化合物。