JPH09509609A - 液体試料中の生物学的材料の定量化装置および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 物品（Ａ）は、液体試料中の生物学的材料を定量するために、液体試料を保持するために適用される。この物品は、その中に容積を封入する上面シー（１）および下面シー（２）とを有するバッグを含む。このバッグは、バッグの中の上記容積に、そこを通って液体試料を流し込むことができる上部入口を有する。また、バッグは、バッグの中の適当な試料の、１またはそれ以上の部分（３）を分離するために形成された複数の仕切（９）を有する。また、そこを通って液体試料がバッグ中の容積に分配されることができる通路が提供される。バッグは、液体試料の分離されたアリコートを保持するための区分された非透過性の区画を形成することができる材料からなる。

Description

【発明の詳細な説明】 液体試料中の生物学的材料の定量化装置および方法発明の分野 本発明は、液体試料中の生物学的材料の定量化方法、および定量化中に液体試 料を保持するための物品に関する。発明の背景 液体試料中の生物学的材料の濃度および水準の検出および定量化には、多くの 勤勉が必要である。例えば、水中のバクテリアの濃度の定量は、水質検査の本質 的な部分である。ＥＰＡ調整は、飲料水中に、いかなる大腸菌またはエシェリヒ ア菌も存在しないことを必要とする。エシェリヒア菌および大腸菌型バクテリア の試験媒体として用いられるコリラートまたはコリラート−１８化学混同物（イ デックス研究所、ＭＥ）のような化学混同物の”存在／不存在”形式は、この定 量化には大変有用である。コリラート化学混同物は、米国特許Ｎｏ．４，９２５ ，７８９のエドベルグの”多分汚染されているであろう材料の標本試料中の目的 微生物のその場検出に用いるための方法および媒体”に記載された明瞭に記載さ れた基板技術に基づく。 しかしながら、検出ではなく、バクテリア濃度の定量が重要な領域もある。例 えば、汚水、水浄化装置に入ってくる水、地表水の領域である。 生物学的材料の定量の古典的な方法は、膜ろ過および最確数法（ｍｏｓｔ ｐ ｒｏｂａｂｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｍｅｔｈｏｄ）である。 膜ろ過では、必要な体積の試料が、バクテリアを特定しないで捕獲する大変小 さい穴のサイズのろ紙を通って、ろ過される。それから、膜は、目的のバクテリ アの成長を支持する媒体上に置かれる。その媒体は、特定の温度で、特定濃度時 間培養され、結果のコロニーが数えられる。膜ろ過の欠点は、（例えば、汚水試 料のように）バクテリア以外の粒子を含む試料が、膜をつまらせ、使用できなく することである。他の欠点は、膜が目的以外のバクテリアを捕獲することである 。 最確数法は、レクレスらの”食物の微生物学的実験方法概論”（第３版、１９ ９２年）の１０５−１９９頁の”最確数技術”や、グリーンベルグらの”水およ び汚水の実験の標準的方法”（第８版、１９９２年）に述べられている。この方 法は、水の試料が、多くの管（例えば、１０×１０、１０の管がそれぞれ１０ｍ ｌを含む）に分配され、各管の中のバクテリアは成長することを許容される。一 定の温度で、一定の時間培養された後、陽性の管の数が数えられる。最確数は、 以下の式で定義される。： ＭＰＮ／１００ｍｌ＝（Ｐ×１００）／ＮＴの平方根 ここで、Ｐは陽性の管の数、Ｎは陰性の管の試料のｍｌ、Ｔは全管の試料のｍｌ 、ＭＰＮは最確数である。本方法の最大の欠点は、ほんの少しの管が用いられた 場合、９５％信頼限界の領域が大きいということである。このような信頼限界は 、おおざっぱには、次のように計算される。： Ｌｏｇ（ＭＰＮ）±１．９６・（０．５８／ｎの平方根） ここで、ｎは試験の回数である。発明の概要 本発明は、液体試料中のバクテリアの数をより正確に定量するための方法、ま たは、試料中の他のタイプの区分された、特別の生物学的材料を定量するための 方法である。そのような生物学的材料は、酵素のようなたん白質の集合体、また は当業者に良く知られた混合物の反応を用いた補足因子と同様に、菌や他の生き ている有機体を含んでも良い。本発明は、一般に、化学的および／または微生物 学的反応体がその中で供給される液体試料を保持するために設計された新しい物 品を使用する。例えば、そのような化学的反応体は、コリラートやコリラート− １８のようなバクテリアのための特定の生物学的検出媒体でも良く、またはエン テロラート化学混合物のような腸球菌のための特定の生物学的検出媒体でも良い 。用いられる装置は、一般に、修正されたバッグの形状である。バッグは、試験 される液体試料を受け入れ、その内部の容積を通して試料が分配され、バッグ内 の 分割された区画に（多くの手段のいずれか１つにより）分けられことが許容され るように設計される。一般に、そのような区画は、分割された化学反応が、試料 される液体の複数のアリコート中で起こることを許容するであろう。そのような 区画は、また、１つの液体のアリコートが、他の臨設したアリコートの反応に影 響することを防ぐ。簡単な具体例では、本発明は、液体試料が導入され、元の液 体試料のアリコートを夫々含む小さなバッグを形成するために、バッグの２つの 対向した表面の簡単な加熱封止により、液体試料が分割されるように、プラステ ィックバッグを特徴とする。 このように、第１の見地では、本発明は、液体試料中の生物学的材料の定量の ための液体試料を保持するために改造された物品が特徴である。その物品は、そ の間に容積を有する上面シートと下面シートを有するバッグを含む。バッグは、 バッグ内部の容積に、そこを通って液体試料を入れることができる、上面の入口 を有する。バッグは、また、その中に、液体試料の１またはそれ以上の部分を分 離するために形成された複数の仕切を有する。また、液体試料を、バッグの中の 容積に分配することができる通路も提供される。バッグは、液体試料の分割され たアリコートを保持するための、区分された非透過性の区画を形成することがで きるための材料から形成される。バッグはいくらか特別な形状を有している一方 、バッグは、一般に、バッグのより狭い端部で上面開口部を有する四角形で、液 体を内部の容積にたやすく入れることを許容するのに十分なサイズに形成される ことが好ましい。上面シートおよび下面シートは、バッグの内部の簡単な対向し た表面であり、以下に述べるように改造されている。 ”仕切”により、試料が、１またはそれ以上の部分に分割されるように、物品 が形成される。そのような仕切の例を以下で述べる。仕切られた液体は、バッグ の他の部分の液体の部分と通じないことは言うまでもない。 ”通路”がバッグ内に供給されることにより、液体試料のバッグ中および仕切 りの回りへのたやすい分配が許容される。そのような通路の例を以下で提供し、 その用語は通常の意味に用いられる。 ”個々に”により、バッグ内に形成された区画は、隣接した区画中の反応に重 要な影響を与えることなく、それらの区画内で、分離した化学反応が起きること を許容する。 ”重要でない効果”より通常の使用で、バッグ内の区画間のいくらかの流通に もかかわらず、陽性の試料を、陰性の試料からたやすく区別することができる。 ”液体試料”により、試料は（水のように）自然の状態で液体である試料、ま たは（食物粉のように）液体化された試料を含む。 好ましい具体例では、上述のように、バッグは、一般には、バッグの１の狭い 辺に沿った上部入口と、それらの辺を通って液体が通過することを防ぐためにシ ールされた残りの３つの辺を有する四角形である。即ち、物品は、液体試料を保 持するのに十分な方法で形成され、一方、使用中に物品に区分された区画が形成 される。１の具体例では、バッグの下面シートは、試料を保持するための複数の 空所を形成するために仕切られている。下面および上面シートは、合わされて、 仕切りのラインに沿ってヒートシールされ、例えば、区画の数が約４０から６０ 、好ましくは約５０で、区画は基本的には同じサイズで、おおよそ０．１から２ ｍｌのアリコートを保持するように、液体試料を保持するための複数の区画が形 成され、バッグは、ポリ塩化ビニル（ポリビニルクロライド）のような適当な材 料から形成される。 他の好ましい具体例では、複数の仕切りは、互いに平行に、入口からバッグの 末端の方向に並ぶ。仕切は、液体試料がそこを通ってあふれることができ、仕切 りの間への液体試料の分配を容易にするために入口と仕切の間に通路が存在する ような長さに、複数の通路を形成する。更に、通路は、仕切の間の液体の分配を 容易にするために、仕切とバッグの末端の間に供給されてもよい。また、バッグ は、ポリエチレン・テレフタレート（ＰＥＴ）のようなＭＹＬＡＲ型プラスティ ックとともにポリエチレンの同時押出でも形成される。 他の好ましい具体例では、第１の複数の区画は１のサイズ（例えば２ｍｌ）、 第２の複数のおよび／または第３の複数の区画は、例えば、第１のサイズより小 さい（例えば、０．０２および０．２ｍｌ）、異なったサイズで供給される。仕 切は、（以下に示すように）、上面および下面シートの一方、または双方に空所 として形成される。これらの具体例は、試料中で定量される生物学的材料の濃度 が高い時に用いる特別な仕様である。区画の様々なサイズは、試料の希釈工程を 削除し、それゆえに時間と希釈中に起こりうる誤差を少なくし、検出範囲を広く する。 関連した見地から、本発明は、液体試料中の生物学的材料の定量に用いるため のキットとして特徴がある。このキットは、上述の物品およびコリラートやコリ ラート−１８化学混合物のような特定の生物学的検出媒体を含む。加えて、関連 した見地から、本発明は、バッグが液体試料を保持するためにシールされた後の 、および上述のように、バッグの中の区画が区分された、交流のない区画に形成 された後の液体試料を含む上述の物品としても特徴がある。 更に、関連した見地から、本発明は、液体試料中の生物学的材料の定量方法と しても特徴がある。この方法は、上述のような物品を供給する工程、およびバッ グ内に配置されている液体試料に試験媒体を加える工程を含む。この方法は、更 に、バッグ中の試料を分配し、バッグの複数の区分された非透過性の区画を形成 し、これにより、区画中に分離された複数のアリコート中で、試験媒体と試料の 混合が確実に行なわれる。この方法は、最後に、例えば以下に述べるような、標 準的手段の数のいずれかにより、各区画中の生物学的材料の存在または不存在の 検出を含む。 好ましい具体例では、定量される生物学的材料はエシェリヒアおよび大腸菌型 バクテリアであり、試験媒体は、コリラートやコリラート−１８化学混合物のよ うな特定の生物学的検出媒体である。区画を形成する方法は、液体試料、試験媒 体，上で検討したような幾つかの得られる反応物のための非透過性の区画の間の シールにより区画の形成するための、バッグのヒートシールを含む。ヒートシー ルは、温度が約２５０−３５０度Ｆのヒートシール装置を用いて、約５秒間、バ ッグに熱を供給することを含む。他の好ましい具体例では、上記方法は、バクテ リアの成長、または液体試料および試験媒体中のいずれかの化学存在物の反応を 許容するために、所望の温度、所望の時間、バッグを培養することを含む。 当業者は、この発明の新しい物品、およびその使用方法は、本質的に、上で述 べた構成要素からなる。これらの用語は、通常の意味に用いられ、即ち、物品は 単に構成要素と名付けられたものからなり、または物品の有用性に重要な影響を 与えない他の構成要素を本質的に含んでも良く、本発明のより洗練された見地で 、有用かどうか特別に記載されていない他の構成要素を含んでもよい。 このように、本発明は、液体試料中の生物学的材料の定量のための新しい方法 である。この方法は、伝統的方法である膜ろ過および最確数法より、より信頼で き、より速い結果を供給する。本方法は、一般に、以下の工程を含む。：試料へ の試験媒体の添加工程。試料を保持し、多くのサブサンプルへの迅速な分配を許 容するために設計された物品への、試料の移動工程。試料を、物品の複数の区分 された非透過性の区画に十分均等に分ける分配工程。区画中での試料媒体および 試料の混合を確実にするための区画のシール工程。物品の培養工程。結果の記録 および解析工程。 本発明は、定量方法中に試料を保持するための新しい物品をも特徴とする。物 品は、一般的に、そこを通って、液体試料を物品に流し込むことができる入口と 、液体試料を分離するように形成され構成された複数の仕切と、液体試料が物品 を通って基本的に均等に分配されることを許容する通路とを本質的に含む。物品 は、仕切られ、シールされることができる材料から形成され、液体試料は、区分 された非透過性の区画に分離され閉じ込められる。 物品およびその使用は、複数の区画の存在に依存し、それらはシールされて、 本質的には、試料や用いられる試験媒体に対して、および得られる反応生成物に 対して非透過性である。区画の数は変化させることができるが、要求された正確 さを伴った解析のためのいずれか１つの試験で十分であろう。好ましい具体例で は、試料が入れられる前にバッグ内に空所を形成することによって、あるいは試 料が入れられた後で、予め存在する仕切を区画に分割することによって、複数の 区画が形成される。この区画の形成を成し遂げるための他の手段としては、その 中に試料バッグが配置された堅いわくを供給し、複数の交線でわくからの圧力に より試料の分割に影響するようにわくを閉じるような手段でも可能である。その ようなわくは試料の結果が読まれるまで残され、その後の除去され、他の試料と ともに用いられる。 本発明のそれらの見地から、本発明は、いくつかの個別的に分配された生物学 的材料、例えばバクテリア、寄生虫、酵母、ウイルスまたは試料中に一定のレベ ルで存在するたん白質にも応用され、検出することができる材料の１または複数 の単位を提供する。試験媒体の選択は、検出される生物学的材料に依存する。試 験媒体は、定量するために求められる生物学的材料の存在を検出し、媒体中にあ りそうな他の生物学的材料の存在を検出しないことが好ましい。また、検出すべ き生物学的材料が試料中に存在した場合、色の変化または蛍光のようないくらか の視覚的または他の感覚的変化を引き起こす材料でなければならない。 上述のように、本発明に用いられるバッグは、ポリエチレン、ポリエチレン・ テレフタレート（ＰＥＴ）のようなＭＹＬＡＲ−型プラスティックとして供給さ れるのような、非透過性の区画に形成できる材料から作られる。選択された材料 は、基板または化学的変化の生成物に応じて変化する。例えば、コリラート製品 では、特定のバクテリアの存在が、オルソニトロフェニール（ＯＮＰ）の生成に より表示され、この生成物の重要な量は、ヒートシール後はバッグの材料を通り ぬけることができない。もし、この反応がガスを生成する場合、ガスの存在の検 出が望まれる以外は、材料はガス透過性であり、液体不透過性であることが好ま しい。 本発明は、また、上で検討した５０−１００の袋または管に試料を分配するた めに、水平にバッグをシールするために設計された新しいヒートシール装置であ ることを特徴とする。それを行うために、シール部分は、互いにむしろ平行な角 度に供給され、空気はバッグの中には捕獲されず、排気される。ヒートシール機 は、本質的に、トースタであり、試料を伴ったバッグは、一片のパンをトースタ に入れるように、ヒートシール機中に配置される。このように、０度より大きく 約４５度より小さい角度で、歯の長手方向にそってヒートシール歯が互いに接す る従来のヒートシール機とは違い、一般に、その角度はシールが進行する間、１ 度から１５度の間であり、本質的に、２つの歯は互いに平行に配置される。 他のヒートシール装置の具体例では、装置は物品をシールするための加熱され たローラ状のシール機である。物品は、物品の仕切の各列に、約３２０−３７０ 度Ｆで、おおよそ１−２秒間熱を供給するための固定されたローラに対して動く 、皿に乗せられる。 他の具体例では、ヒートシール機械が複数のヒートシールエレメントとともに 提供され、ヒートシールと本発明の物品の試料の仕切りが同時に達成できる。 異なったサイズの区画が提供される上述の具体例では、そのようなバッグが、 １つのサイズの区画のみを有するバッグより重要な利点を有することは、当業者 にとっては明らかである。それらのバッグでは、試料の希釈なしに、更に正確な 定量が許容される。このように、そのようなバッグの利点は、希釈工程が削除で き（これによって、時間と希釈による誤差の可能性が低減され）、また分析を行 うのに必要な材料も少なくできることである。 本発明は、例えば、食物中のバクテリアの定量のような他の分野への応用も有 する。食物中のバクテリアの存在を特定するための現在の方法は、食物およびバ ッファが加えられるプラスティックバッグが用いられる。バッグはバクテリアの 解放が行なわれる装置に配置される。本方法の他の仕様では、例えば、ストマッ カフィルタのような、裏に配置されたフィルタを伴ったバッグが用いられる。食 物は、裏の内部に配置され、バクテリアが、外部のバッグの中に解放される。こ のバッグは上述のように仕切られ、区画化されている。代わりに、工程の後に、 材料の所望の量がストマッカバッグの外部に取り出され、ここで述べた物品の具 体例の１つの中に配置され、ここで述べたように試験される。 本発明の他の特徴および利点は、好ましい具体例の以下の記述、および請求項 から明らかになるであろう。図の簡単な説明 図１、２および３は、液体試料中の生物学的材料の定量方法に用いる液体を保 持するために取り付けられた物品の、夫々、等倍図、上面図、側面図である。 図４および５は、本発明に有用な物品の他の具体例の、夫々、側面図および上 面図である。 図６は、本発明の物品の第３の具体例の上面図である。 図７および８は、本発明の物品の第４の具体例の、夫々、側面図および上面図 である。 図９は、本発明の物品の第５の具体例の等倍図である。 図１０および１１は、本発明の物品の第６の具体例の、夫々、上面図および側 面図である。発明の詳細な説明 液体試料中の生物学的材料の定量方法に用いる物品の多くの具体例を以下に示 す。 この具体例では、定量される生物学的材料は、エシェリヒアおよび大腸菌型バ クテリアであり、試験媒体は、コリラート化学混合物である。エシェリヒアおよ び大腸菌型バクテリアを特定するための本具体例の使用およびコリラート化学混 合物の使用は、例として用いるのみである。本発明は、液体試料中にあるレベル で存在する（１またはそれ以上の単位の上記材料を検出することができるように 供給された）いくつかの生物学的材料、および適用できる試験媒体に適用するこ とができる。例えば、本発明は、腸球菌および全生存するバクテリアの検出に適 用することができる。実施例１ 定量中の試料を保持する物品の第１の具体例を図１−３に示す。まず図１を参 照して、物品Ａは、一般的に、バッグと製氷皿の組み合わせのような形状である 。物品Ａは、一般的に、ポリ塩化ビニルからなる上面シート１および下面シート ２の２つの四角いシートから形成される。上面シート１は本質的に平坦である。 図１−３について、下面シート２は、上面シートから離れる方向にシートの一 方が突き出した多くの空所３を有するように形成されている。（各部分の寸法は 、インチで図中に示される。）この具体例では、液体約２ｍｌを夫々保持する等 しい大きさの１５の空所３を有する。上面シート１および下面シート２は、長さ 方 向に沿った２つの長い辺４、５と、１の狭い辺６で互いにシールされている。第 ４の辺７は、そこを通って物品に試料が入れられるような入口を形成するように 、シールされずに残される、３つのシールされた辺以外では、上面シート１およ び下面シート２はシールおよび接続されず、試料が物品を通って全ての空所の周 囲に分配されることを許容するように上面シート１および下面シート２の間に通 路８を残す。 第１の具体例を用いて、試料中のエシェリヒアおよび大腸菌型バクテリアのレ ベルの定量方法について以下のように完成する。第１に、試験する試料とコリラ ート化学混合物１００ｍｌを、入口７を通して物品に流し込む。混合物は、基本 的に、１５の空所３に均等に分配される。１００ｍｌとともに、各空所３には、 混合物約２ｍｌが入る。 入口７はそれから閉じられる。上面シート１および下面シート２は、それから 空所の間の、縦、横の仕切に沿ってシールされ、試料および試験媒体２ｍｌを含 む１５の個別的にシールされた区画を形成する。 シールが試料、試験媒体および得られた生成物のために非透過性であるかぎり 、また、シールが、定量する生物学的材料を破壊し、重大な損傷を負わせない限 り、またはその試験に影響をおよぼさない限り、シールは異なった方法で行うこ とが可能である。この具体例では、シールはヒートシールにより形成される。ヒ ートシールは、２９０度から３７０度Ｆの間の温度のヒートシール装置を用いて 、５秒間、仕切に沿って物品に熱を供給することにより行なわれる。液体試料の 結果的な温度は、約５−１０度Ｆ程度以上には上がらない。 物品は、それから、約３５℃で約２４時間培養される。 結果は、エシェリヒアおよび大腸菌型バクテリアの存在を示す区画の数を数え ることにより解析する。それらの有機体の存在は、試料の色の変化から判断され る、エシェリヒアおよび大腸菌型バクテリアの量は、型通りの統計的な分析で特 定することができる。実施例２ 再度、図１−３より、仕切のヒートシールが少し異なった方法で完成できる。 デュポンＮｏ．５、リッド・ストック・コーティングのような、熱活性化粘着物 が、上面１および下面２の接着を促進するために上面１に供給される。ヒートシ ールは２８０度から３１０度Ｆの間の温度のヒートシール装置を用いて、５秒間 、仕切に沿って物品に熱を供給することにより行なわれる。この方法の利点は、 良い接着、および低温の利用である。実施例３ 物品の第２の具体例を、図４および５に示す。図４を参照して、物品Ｂは、一 般に、物品の中に所望の量の試料を入れることを許容する物品の上端の入口１０ を備えたバッグの形状をしている。物品は、例えばポリエチレン・テレフタレー ト（ＰＥＴ）のようなＭＹＬＡＲ−型のプラスティックとともにポリエチレン（ ＰＥ）の同時押出でも形成される。物品の３つの辺１１、１２、１３は、一般に 四角いバッグ型の物品を形成するためにシールされている。 物品Ｂは、入口１０と反対側の先端１２の間に、バッグの長手方向に沿って延 びた、９つの縦の仕切を有する。仕切１４もまた、シールされている。物品の中 に試料を入れるのを促進し、試料が仕切の間に分配されるのを保証するために、 第１のチャネル１５が、入口近くに形成されるように、仕切が配置される。第２ のチャネルは、試料が物品の中を移動して空気を追い出すのを保証するために、 物品の底に残される。 図４を参照して、ひと続きの、予め形成された通路１７が、仕切の間の試料の 通過を保証するために縦の仕切１４の間に形成されている。 この第２の具体例を用いて、試料中のエシェリヒアおよび大腸菌型バクテリア のレベルの定量方法が以下のようにして完成した。第１に、試験される試料、お よびコリラート化学混合物のような試験媒体約１００ｍｌが、入口１１を通って 、物品の中に流し込まれる。混合物は物品の中へ、チャネル１５および１６、通 路１７により仕切の回りに分配される。入口１１はそれからシールされる。物品 は、それから９つの水平な仕切に沿ってシールされ、存在する仕切１４に沿った 新し い９つの仕切は、ほぼ等しいサイズの分割された区画を形成する。シールは、試 料と試験媒体の混合物を、十分に均等に、１００の区画の中および周辺に分配す る方法で行なわれる。各区画には、試料および試験媒体がおおよそ１ｍｌ入って いる。 物品の仕切およびシールは、シールが試料、試験媒体および得られた反応物に とって非透過性である限り、シールが定量される生物学的材料を重要な破壊を行 わず、それらの試験に影響を与えない限り、異なった方法で行なうことが可能で ある。この具体例では、シールは、ヒートシールにより行なわれる。ヒートシー ルは、３００−３５０度Ｆ周辺の温度の加熱ワイアを用いて、２秒間、仕切に沿 って物品に熱を供給することにより行なわれる。 シールの後、物品は約３５℃でおおよそ２４時間、培養される。結果は、エシ ェリヒアや大腸菌型バクテリアが存在することを示す区画の数を数えるにより、 解析される。実施例４ 図６は、第３の具体例を示したものであり、試料中の定量される生物学的材料 の濃度が高い場合に用いられる特別な仕様を有している。異なったサイズの区画 は、試料を希釈する工程を省略し、これにより時間と希釈による誤差の可能性を 減らしている。加えて、この”自動希釈”は、定量できる範囲を増加させること ができる。 図６を参照すると、物品Ｃおよびその使用は、異なった３つのサイズの区画３ ０、３１、３２が存在することを除けば、上述の第１の具体例と類似している。 １５の区画３０が存在し、それらは試料をおおよそ２ｍｌ保持できる。１５の区 画３１が存在し、それらは試料をおおよそ０．２ｍｌ保持できる。１５の区画３ ２が存在し、それらは試料をおおよそ０．０２ｍｌ保持できる。実施例５ 図７および８は、第４の具体例であり、特に、定量される生物学的材料の濃度 の高い場合に用いられる使用を有している。区画の異なったサイズは、試料を希 釈する工程を省略し、これにより時間と希釈による誤差の可能性を減らし、定量 できる範囲を増加させることができる。 図７、８を参照して、物品Ｄおよびその使用は、１のサイズの通路５０を形成 する９つの仕切４０があること、より小さいサイズの通路５１を形成する９つの 仕切４１があること、更に小さいサイズの通路５２を形成する９つの仕切４２が あることを除けば、上述の第２の具体例に類似している。物品は、上述の第２の 具体例で述べたように、９つの水平な仕切に沿ってシールされる。このシールは ３００の区画となる。仕切４０の存在と共に、この新しい９つの仕切は、夫々お およそ１ｍｌの試料を保持するための１００の分離した区画を形成する。仕切４ １の存在と共に、この新しい９つの仕切は、夫々おおよそ０．１ｍｌの試料を保 持するための１００の分離した区画を形成する。仕切４２の存在と共に、９つの 新しい仕切は、夫々おおよそ０．０１ｍｌの試料を保持するための１００の分離 した区画を形成する。実施例６ 図９に、第５の具体例であり、特に、定量される生物学的材料の濃度の高い場 合に用いられる使用を有している。２つ異なったサイズの区画は、試料を希釈す る工程を省略し、これにより時間と希釈による誤差の可能性を減らし、定量でき る範囲を増加させることができる。加えて、この”自動希釈”は、定量できる範 囲を増加させることができる。 図１１を参照して、物品Ｅおよびその使用は、２つの異なったサイズの区画４ ３および４４を有している除いて、上述の第３の具体例、物品Ｃと類似している 。それぞれがおおよそ２ｍｌの試料を保持する１５の区画４３を有する。それぞ れがおおよそ０．２ｍｌの試料を保持する１５の区画４４を有する。実施例７ 物品の第６の具体例、物品Ｆを図１０および１１に示す。図１０、１１を参照 して、物品Ｆは、大体、図１−３に示す物品Ａに似た形状に、５１番目の空所４ ５を付け加えたものである。この５１番目の空所４５は、他の５０の空所３から のオーバーフローを保持し、シール工程中に物品の外部に液体がオーバーフロー する危険性を除去または減少させる。このように、この空所は、物品の中の液体 の汚染を防止することができる。 結果が、エシェリヒアおよび大腸菌型バクテリアの存在を示す、５１の区画の 数を数えることにより、または、（５１番目の空所を除いた）５０の区画の数を 数えることにより解析できることを除いて、物品Ｆの使用は、物品Ａと同じであ る。実施例８ 具体例のバリエーションについてここで述べるが、上面シート１は、ポリエチ レンのようなプラスティックに覆われた紙片補強の薄から形成されても良く、下 面シート２は、ポリ塩化ビニルから形成されても良い。実施例９ 具体例の小さなバリエーションをここに述べるが、物品はトータルで１０ｍｌ を保持するために形成されても良い。このバリエーションは、食物や他の産業の ための特別な応用であり、ここでは、より少ない単位の試料の使用が可能になり 、許容される。製造 上記具体例は、例えば、当業者に良く知られたモールディング技術のような標 準工程により製造することができる。使用 本発明の、比較実験の具体例では、エシェリヒアの定量のための伝統的な技術 と同等の結果を提供できる。実際、いくつかの場合では、本発明の具体例が、他 の技術より、あたかも良いエシェリヒアの回復を提供できるように思える。 他の具体例は、以下の請求項に含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ピアーソン、マーク・ダブリュー アメリカ合衆国04072メイン州、サコ、ブ ラッドリー・ストリート316番 (72)発明者 ウェシュラー、トーマス・アール アメリカ合衆国04107メイン州、ケープ・ エリザベス、パーク・サークル・ロード25 番 (72)発明者 ワードロー、スティーブン・シー アメリカ合衆国06475コネチカット州、オ ールド・セイブルック、ノース・カバー・ ロード191番 (72)発明者 フィナーティー、マイケル・ピー アメリカ合衆国04210メイン州、オーバー ン、ミノット・アヴェニュー309番 (72)発明者 カーペンター、チャールズ・アール アメリカ合衆国04074メイン州、スカーボ ロウ、ホームズ・ロード175番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．液体試料中の生物学的材料の定量のための液体試料の保持に適した物品であ って、 その間にある容積を封入する上面シートおよび下面シートとを有するバッグを 含み、該バッグはその中の上記容積に、そこを通って液体試料を流し込むことが できる上部入口を有し、 更に、上記バッグの中の液体試料の１またはそれ以上の部分を分離するために 形成された、上記バッグ中の複数の仕切と、 そこを通って液体試料が上記バッグ中の容積に分配することができる通路とを 含み、 上記バッグが、液体試料の分離されたアリコートを保持するための区分された 非透過性の区画を形成することができる材料からなる物品。 ２．上記バッグが、大略四角形で、上記上部入口がバッグの１辺に沿って設けら れており、残りの３辺が、液体がそこを通過しないようにシールされている請求 項１の物品。 ３．上記区画が、上記バッグの上面および下面シートに沿った複数のラインをヒ ートシールすることにより形成される請求項１の物品。 ４．上記複数の仕切が、液体試料を保持するために、バッグ中に、複数の区分さ れた空所を形成するために設けられた請求項１の物品。 ５．上記空所の数が、４０と６０を含み、その間にある請求項４の物品。 ６．上記空所が、大体等しいサイズである請求項４の物品。 ７．上記区画が、おおよそ２ｍｌの液体を保持するサイズである請求項４の物品 。 ８．上記区画が、おおよそ０．２ｍｌの液体を保持するサイズである請求項４の 物品。 ９．上記バッグが、ポリ塩化ビニルから形成される請求項１の物品。 １０．上記バッグの上面シートが、ポリエチレンで覆われた紙片補強の箔から形 成され、上記下面シートがポリ塩化ビニルから形成される請求項１の物品。 １１．複数の仕切は、互いに平行に、上記入口からバッグの遠位端部の方向に走 り、 しかも、液体試料がそこを通って流れることができる複数の通路を形成し、 更に、上記仕切が、上記仕切の間の液体試料の分配を促進するために、上記入 口と上記仕切の間に上記通路が形成される長さである請求項１の物品。 １２．更に、仕切の間の液体試料の分配を促進するために、仕切と上記入口から 遠位の端部との間に第２の通路を含む請求項１１の物品。 １３．上記仕切が、上記バッグの上記上面および下面に沿った複数の線をヒート シールすることにより形成される請求項１１の物品。 １４．上記バッグが、ポリエチレンテレフタレートとともに同時押出されたポリ エチレンから形成される請求項１の物品。 １５．第１の複数の空所が１のサイズであり、第２の複数の空所がより小さいサ イズである請求項４の物品。 １６．上記第１および第２の複数の空所とサイズの異なった第３の複数の空所を 含む請求項１５の物品。 １７．上記仕切が、上記上面および下面シートの一方または双方の中の空所を含 む請求項１の物品。 １８．液体試料中の生物学的材料の定量に用いるためのキットであって、 請求項１に列挙した物品と、 一定の生物学的検出媒体とを含むキット。 １９．更に、上記上面および下面シートの一方または双方の内面に、熱活性な接 着剤が適用されることを含む請求項１のキット。 ２０．液体試料中の生物学的材料の定量方法であって、 その間に容積を封入する上面シートと下面シートを有するバッグを提供し、上 記バッグが、液体試料を上記バッグ中の容積に、そこを通って流し込むことがで きる上部入口を有している工程と、 上記バッグが、液体試料の分離されたアリコートを保持するための区分された 非透過性な区画を形成することができる材料から形成される工程と、 液体試料に試験媒体を添加する工程と、 試料を上記バッグ中に配置する工程と、 複数の区分された非透過性な区画をバッグ中に形成し、区画中の複数の分離さ れたアリコート中での試験媒体および液体試料の混合を確実にする工程と、 上記各区画中の上記生物学的材料の存在または不存在を検出する工程とを含む 方法。 ２１．上記バッグが、バッグ中の上記液体試料の１またはそれ以上の部分を分離 するために形成された、複数の仕切を備えている請求項２０の方法。 ２２．複数の仕切が、液体試料を保持するためのバッグ中の複数の区分された空 所を形成するために設けられる請求項２１の方法。 ２３．上記空所の数が４０および６０を含んでこの間にある請求項２２の方法。 ２４．上記空所が、大体同じサイズである請求項２２の方法。 ２５．定量化される上記生物学的材料が、エシェリヒアおよび大腸菌型バクテリ アであり、試験媒体が一定の生物学的検出媒体である請求項２０の方法。 ２６．上記仕切を形成する工程が、 仕切を形成するためにバッグをヒートシールする工程を含み、 仕切の間のシールが、液体試料、試験媒体および得られる反応物にとって非透 過性である請求項２０の方法。 ２７．上記ヒートシールが、 おおよそ２９０および３７０度Ｆの間の温度のヒートシール装置を用いて、約 ５秒間、バッグに熱を加えることを含む請求項２６の方法。 ２８．上記ヒートシールが、 上記物品の内面に熱活性な接着剤を適用し、 おおよそ２８０および３１０度Ｆの間の温度のヒートシール装置を用いて、約 ５秒間、バッグに熱を加えることを含む請求項２６の方法。 ２９．上記ヒートシールが、 上記物品の内面に熱活性な接着剤を適用し、 おおよそ３２０および３７０度Ｆの間の温度を、物品の中の仕切の各列に、約 １−２秒間加えて、バッグに熱を加えることを含む請求項２６の方法。 ３０．上記検出工程が、所望の温度で、所望の時間、上記バッグを培養する工程 を含む請求項２０の方法。 ３１．バッグ中の複数の区分された非透過性の区画を形成する工程が、 １のサイズの、第１の複数の区画を形成する工程と、 より小さいサイズの、第２の複数の区画を形成する工程とを含む請求項２０の 方法。 ３２．更に、上記第１および第２の複数の区画と異なったサイズの第３の複数の 区画を形成する工程を含む請求項２７の方法。 ３３．生物学的材料の濃度が高い場合に、液体試料中の生物学的材料の定量のた めに、液体試料を保持するのに応用する物品であって、 その中に容積を封入する上面シートおよび下面シートとを有するバッグと、上 記バッグの中の上記容積に、そこを通って液体試料を流し込むことができる上部 入口を有する上記バッグと、 液体試料を保持するために、バッグ中に、複数の区分された空所を形成するた めに設けられた上記バッグ中の複数の仕切であって、第１の複数の空所が１のサ イズであり、第２の複数の空所がより小さいサイズである仕切と、 そこを通って液体試料がバッグ中の容積に分配することができる通路とを含み 、 バッグが、液体試料の分離されたアリコートを保持するための区分された非 透過性の区画を形成することができる材料からなる物品。 ３４．更に、上記第１および第２の複数の空所と異なった第３のサイズの、第３ の複数の空所を含む請求項３３の物品。 ３５．上記仕切が、上記バッグの上面および下面シートに沿った複数の線をヒー トシールすることにより上記区画が形成される請求項３３の物品。 ３６．第１の複数の空所の数が４０および６０の間であり、 第２の複数の空所の数が４０および６０の間である請求項３３の物品。 ３７．第１の複数の空所が、おおよそ２ｍｌの液体を保持するサイズであり、 第２の複数の空所が、おおよそ０．２ｍｌの液体を保持するサイズである請求 項３３の物品。