JPH09511233A

JPH09511233A - 細胞接着インヒビターとしての置換ラクトース誘導体

Info

Publication number: JPH09511233A
Application number: JP7520706A
Authority: JP
Inventors: サイードエイ．アブバス，; ファルグニダスガプタ，; アサ，ダーウィン; ジョンエイチ．ムッサー，; ミナエイ．ナッシュド，
Original assignee: グライコメッドインコーポレイテッド
Priority date: 1994-02-01
Filing date: 1995-02-01
Publication date: 1997-11-11
Also published as: US5591835A; AU681010B2; US5728685A; EP0743951A4; CA2182007A1; EP0743951A1; WO1995021180A1; AU1738495A

Abstract

(57)【要約】セレクチンレセプターに結合し、そして細胞−細胞接着事象を調節することにより、炎症、ガン、および関連する疾患の進行を調節する、式(I)を有する化合物およびそれらの製造方法を記載する。該式において、R¹は、それぞれ独立して、Hまたは低級アルキル（1-4C）であり；R²は、H、OHまたは低級アルキル(1-4C)または高級アルキル基(5-15C)のような親油基、アルキルアリール、あるいは１つまたはそれ以上のさらなる糖残基であり；R³は、SO₄ ^2-、PO₄ ^2-、または関連する基を含む、負に荷電した部分であり；Yは、Hまたは低級アルキル（1-4C）であり；そしてXは、Hまたは-CHR⁴(CHOR¹)₂CHR⁵OR¹であり、ここで、R⁴およびR⁵は、それぞれ独立して、H、低級アルキル(1-4C)、あるいは一緒になって、O、S、およびNR¹からなる群から選択されるヘテロ原子を必要に応じて含む、５員環または６員環を形成し；該５員環または６員環は、R¹、CH₂OR¹、OR¹、OOCR¹、NR¹ ₂、NHCOR¹、およびSR¹からなる群より選択される１つの置換基で必要に応じて置換され、ただし、Xが、ヘキソース置換基を表す際には、R³およびR⁴は一緒になっても、ヘキソース置換基を提供し得ない。

Description

【発明の詳細な説明】細胞接着インヒビターとしての置換ラクトース誘導体本願は、1992年６月29日に提出された米国特許出願第07/910,709号の一部継続出願である。技術分野本発明は、炎症、アレルギー反応、自己免疫疾患、および関連する病態の治療に有用な化合物に関する。より詳細には、本発明は、セレクチンレセプターに結合する置換されたラクトース、およびそれらを含む薬学的組成物に関する。本発明はまた、これらのアナログおよび他のラクトース誘導体を得るに有用な合成方法に関する。背景技術細胞の相互作用が、少なくとも一部はレセプター／リガンド相互作用により仲介されていることは、現在十分に確立されている。レセプターの１つのクラスは、ペプチド部分配列「RGD」を認識することが知られており、他のレセプターは、炭水化物リガンドを認識することが知られている。炭水化物ベースのリガンドを認識するレセプターの１つのクラスは、刺激された血管内皮への、循環好中球の接着を仲介する。これは炎症反応の最初の事象であり、そしてこれはアレルギーおよび自己免疫応答にも包含されているようである。数種のレセプターが、この相互作用に関与しており、１群の推定レクチンを包含する。このレクチン群には、gp90^MEL(Leu8)、ELAM-1、およびGMP-140（PADG EM）、ならびに(Gong，J.-G.ら、Nature(1990)343:757；Johnston,G.I.ら、Cell (1989)56:1033；Geoffrey,J.S.およびRosen,S.D.、J.Cell Biol.(1989)109:2463 ；Lasky,L.A.ら、Cell(1989)56:1045)が包含される。これらのレクチンは、L-セレクチン、E-セレクチン、およびP-セレクチンと呼ばれている。 E-セレクチンは、おそらく、これら３種のセレクチンのうち、最も特徴付けられている。これは、IL-1またはTNFに応答する内皮細胞での一過性発現である(Be vilacqua,M.P.ら、Science(1989)243:1160)ため、特に興味深い。この誘導された発現期間（２〜８時間）により、感染および外傷に応答する初期の好中球溢出におけるこのレセプターの役割が示唆される。さらに、Bevilacquaら(Bevilacqu a,M.P.ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1987)84:9238を参照のこと)は、ヒト好中球またはHL-60細胞が、E-セレクチンレセプターをコードするcDNAを含むプラスミドを用いてトランスフェクトされたCOS細胞に接着することを示した。内皮細胞 −白血球接着分子をコードするDNA配列に関する情報は、1990年11月15日に公開された、PCT出願公開第WO90/13300号で開示されている。最近、いくつかの異なるグループが、E-セレクチンに対するリガンドに関する論文を発表した。Loweら、(1990)Cell、63:475-484では、シアリルルイスｘ(sLe x)オリゴ糖、Neu Nac α2-3-Gal-β1-4(Fuc α1-3)-G1cNAcの発現を用いて、HL- 60細胞変異物のE-セレクチン依存性接着と、トランスフェクトされた細胞株(lin e)との間の正の相関が報告された。α(1,3/1,4)フコシルトランスフェラーゼを含むプラスミドで細胞をトランスフェクトすることにより、非骨髄性COSまたはC HO系を、E-セレクチンに依存して結合するsLex陽性細胞に変換し得た。抗sLex抗体を用いてE-セレクチン依存性接着をブロックする試みは、該抗体による試験細胞の凝集反応のために解釈不可能であった。シアリル化フコシル化ラクトサミノグリカンからなるオリゴ糖の群のうちの１種またはそれ以上のメンバーが、E-セレクチンのレクチンドメインに対するリガンドであると結論された。Phillipsら、(1990)Sclence,250:1130-1132は、sLexに対して報告された特異性を有する抗体を用いて、HL-60またはLEC11 CHO細胞の、活性化内皮細胞へのE-セレクチン依存性接着を阻害した。非シアリル化Lex構造を有するリポソームは、部分的に阻害性であったが、末端sLex構造を有するジフコシル化糖脂質を含むリポソームは、接着を阻害した。Walzら、(1990)Science,250:1132-1135は、sLexに対するモノクローナル抗体を用いて、またはsLex構造を有する糖タンパク質によって、HL -60細胞へのE-セレクチン−IgGキメラの結合を阻害し得たが、CD65またはCD15抗体を用いた阻害は示され得なかった。両グループは、sLex構造がE-セレクチンに対するリガンドであると結論した。本譲渡人に譲渡され、そして本明細書中で参考として援用される、1991年４月11日に提出された米国特許出願第07/683,458号は、上記の最小の四糖類構造を開示し、そして請求の範囲に記載しており、そして ELAM-1レセプターと相互作用を有すると推定される基を同定している。 E-セレクチンとは対照的に、L-セレクチンおよびP-セレクチンに結合するリガンドの特性は、充分解明されていない。L-セレクチンは、L-セレクチン認識を阻害する、末梢リンパ節の高内皮性小静脈(high endothelial venule)のノイラミニダーゼ処理に基づいて、シアル酸を有するリガンドに結合するようである。Tr ueら、1990,J.Cell Biol.111,2757-2764。さらに、直接的結合／阻害アッセイで可溶性L-セレクチンを用いる他の研究では、特定の炭水化物部分が、(特に硫酸化またはリン酸化されるとき)マンノースおよびフコースを含む重要なリガンド構成要素であり得ることが示唆されている。Imaiら、1990,J.Cell Biol.111,122 5-1232。より最近の研究では、L-セレクチンは、シアリルルイスxに結合することが示唆されている。Foxall,C.ら、Cell(1992)117:895-902。 P-セレクチンに対するリガンドは、シアリルルイスｘに関連したエピトープを有すると考えられる。この結論は、活性化された血小板またはP-セレクチンを発現するCOS細胞への、HL-60細胞のP-セレクチン仲介接着をブロックするという、この特異性を有する抗体を用いる研究に基づいている。Larsenら、(1990)Cell 6 3,467-474。他の実験では、P-セレクチンでトランスフェクトされた細胞へのHL- 60細胞の接着は、ルイス^xエピトープを有する、乳から単離された五糖類によりブロックされることが示された。最近、P-セレクチンは、スルファチドに結合することが示された。Aruffo,A.ら、(1991)Cell,67:35-44。疾患（特に、ある一定の細胞タイプにおいて、セレクチン−リガンド結合を介して起こる、所望されない細胞−細胞接着を含む疾患）でのセレクチンの役割のために、このようなセレクチン−リガンド結合の制御を可能にする、新規なリガンドの同定および単離が非常に必要とされている。細胞-細胞接着事象の調節を包含する本発明の化合物の作用の形態の１つは、セレクチン-リガンド結合によると考えられる。しかし、本発明の化合物、ならびにそれらの誘導体および塩の無数の医療活性を説明する、作用のさらなる生物学的メカニズムが知られていないことは注目すべきである。発明の目的本発明は、セレクチンレセプターに結合し、従って、細胞−細胞接着事象を調節することにより、炎症、ガン、および関連した応答の経過を調節するアゴニストおよびアンタゴニストを提供する。この局面において、本発明は以下の式の化合物に関する：ここで、R¹は、それぞれ独立して、Hまたは低級アルキル（1-4C）であり； R²は、H、低級アルキル（1-4C）、高級アルキル基(5-15C)のような親油基、アルキルアリール、あるいは１つまたはそれ以上の他の糖残基であり； R³は、SO₄ ^2-、PO₄ ^2-、または関連する基を含む、負に荷電した部分であり； Yは、H、OHまたは低級アルキル（1-4C）であり；そして Xは、Hまたは-CHR⁴(CHOR¹)₂CHR⁵OR¹であり、ここで、R⁴およびR⁵は、それぞれ独立して、H、低級アルキル（1-4C）、あるいは一緒になって、O、S、およびNR¹ よりなる群から選択されるヘテロ原子を必要に応じて含む５員環または６員環を形成し；該５員環または６員環は、R¹、CH₂OR¹、OR¹、OOCR¹、NR¹ ₂、NHCOR¹、およびSR¹ からなる群から選択される１つの置換基で必要に応じて置換され、ただし、Xがヘキソース置換基を表す際には、R⁴およびR⁵は一緒になっても、ヘキソース置換基を提供し得ない。他の局面において、本発明はラクトース誘導体を合成する方法に関する。その方法は、以下の式の中間体：ここで、R⁶は、それぞれ独立して、H、低級アルキル（1-4C）、または保護基であり；そしてここで、Y¹は、H、OH、OOCR⁶、またはSR⁶であり；ここで、少なくとも１つのR⁶は、置換されるべき位置にあり、そして、多くても１つの近接したR⁶がHであり、その他の全てのR⁶が保護基であり；そして R⁷は保護基または高級アルキル基(5-15C)のような親油基である；を求電子試薬供給部分と接触して生成物を得る工程を包含し、ここで、求電子試薬は、置換されるべき位置で、OHのHに対して置換されている。他の局面において、本発明は、式１の化合物を含有する薬学的組成物に関し、そしてこれらの組成物を用いて炎症を治療する方法に関する。他の局面において、本発明は、式２の化合物、およびセレクチン結合リガンドまたは他の有用なラクトシル残基含有部分の合成におけるさらなる中間体に関する。図面図１は、急性肺損傷モデルのウサギにおける化合物13bの効果を示す。図２は、急性肺損傷モデルのウサギにおける化合物31の効果を示す。図３は、再灌流アッセイにおける化合物13bの用量応答の結果を示す。結果を、放射性標識ヒト好中性球数/心臓の乾燥重量のmgとして表す。発明の実施の形態本願は、1992年６月29日に提出された米国特許出願第07/910,709号の一部継続出願である。本明細書中で論じられるかまたは記載されるすべての特許、特許出願、および刊行物は、それぞれ個々の刊行物または特許出願が特別にかつ個々に記載されるのと同程度に、その全体が参考として援用されることが理解される。本発明は、セレクチンレセプターに結合する能力によって、炎症を治療するに有用な化合物を提供する。例えば、炎症を仲介するときにセレクチンレセプターの１つであるELAM-1によって行われると考えられている役割は、以下のように記載され得る。血管には、ELAM-1表面レセプターを産生し得る内皮細胞が並んでいる。血管内を循環しているリンパ球は、その表面にELAM-1レセプターと結合し得る炭水化物リガンドを含む。これにより、血管壁を通って周囲の組織にリンパ球が移動する。これはいくつかの状況において有用な効果を有し得るが、周囲の組織が感染している場合のように、血管壁を通り組織にリンパ球が過度に移動することはまた、過度であり得、所望でない炎症を引き起こし得る。いかなる特定の理論によっても制限されることは望まないが、セレクチンレセプターを結合する本発明の化合物は、循環しているリンパ球の表面リガンドの作用を拮抗し、従って、周囲の組織内で炎症を引き起こすそれらの血管壁を通る移動を妨げると考えられる。特定のガンが患者の身体のいたるところに拡散するには(このプロセスは転移と呼ばれる)、細胞-細胞接着が起こるに違いない。特に、ガン細胞はそれらの発生部位から移動し、血管に侵入して、遠位でのコロニー化を容易にするに違いない。このプロセスの最も重要な局面は、周囲の組織に移動する前のステップである血管壁に並ぶ内皮細胞へのガン細胞の接着である。このプロセスは、一般的に細胞-細胞接着のブロックを促進する本発明の化合物の投与により妨害され得る。従って、本発明の化合物は、式１または２の化合物に接着するレセプターを示すガン細胞の拡散を遅延させるために使用され得る。リガンドを同定するアッセイセレクチンリガンドとして作用するラクトース誘導体を同定するためのアッセイは、最も一般的な形態では、適切なセレクチン、L-セレクチン、E-セレクチン、またはP-セレクチンを推定リガンドと接触させ、そしてその結合特性を測定することを包含する。いくつかのアッセイから、L-セレクチン、E-セレクチン、またはP-セレクチンに結合する化合物の能力を測定することが可能であり、そしてこのようなアッセイは、当該分野で周知である。例えば、セレクチンおよび推定リガンドの両方を、充分な時間、溶液中において、セレクチンおよびリガンドからなる複合体を形成させ、次いで複合体を形成していないセレクチンおよびリガンドからこの複合体を分離し、そして形成された複合体の量を測定し得る。あるいは、複合体を形成していないセレクチンまたは化合物の量を測定し得る。第２の、そして好ましいアッセイ形式は、セレクチンまたは推定リガンドのいずれかを固体表面上に固定化する工程、および固定化した反応物を固定化していない反応物と接触させることにより、固体表面上にセレクチン−リガンド複合体を形成する工程からなる。このセレクチン−リガンド複合体を、複合体を形成していない反応物から分離し、そして複合体中に存在する固定化していない反応物の量を測定することにより、形成された複合体の量を測定し得る。例えば、推定リガンドは、マイクロタイターウェルに固相化され得、次いで所望のセレクチンをウェルに添加し、そしてリガンドに結合したセレクチンの量を測定し得る。上記アッセイの変法は、遺伝子工学的に細胞を操作して、細胞表面に高レベルのL-セレクチン、E-セレクチン、またはP-セレクチンを発現させ、そしてその細胞を精製したセレクチンの代わりに用いることである。放射性標識したCOS細胞が、このタイプのアッセイに用いられており、そしてL-セレクチン、E-セレクチン、またはP-セレクチンをコードするcDNAを用いてトランスフェクトされ得る。この細胞を、充分な時間、リガンドをコートしたマイクロタイターウェルに接着させた後、非接着細胞を除去し、そして接着細胞の数を測定する。接着細胞の数は、セレクチンに結合するリガンドの能力を反映する。このタイプのアッセイの代表的適用は、E-セレクチンリガンドの同定である。例えば、ELAM-1レセプターの完全なcDNAは、IL-1刺激ヒト臍静脈内皮から単離した全RNAを用いて開始するPCRによって得られた。得られたcDNAを、CDM8プラスミド（Aruffo,A.およびSeed,B.、Proc．Natl．Acad．Sci．USA(1987)84:8573を参照）中に挿入し、そしてこのプラスミドをE.coli内で増幅した。個別のコロニーから得たプラスミドDNAを単離し、そしてこれを用いてCOS細胞をトランスフェクトした。ポジティブなプラスミドを、それらがHL-60細胞接着を支持するCOS細胞を生成する能力により選択した。DNA塩基配列決定により、これらのクローンの１つがELAM-1をコードするものとして、ポジティブに同定された（Bevilacqua,M .P.ら、Science、(1989)243:1160；Polte，T.ら、Nucleic Acids Res.(1990)18: 1083；Hession，C.ら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA(1990)87:1673）。これらの刊行物は、ELAM-1およびその生産物をコードする遺伝物質の開示に関し、本明細書中で参考として援用される。ELAM-1 cDNAの完全なヌクレオチド配列およびELA M-1タンパク質の予測アミノ酸配列は、上記のBevilacquaらの論文中に掲載されている。これらのDNAおよびアミノ酸配列は、本明細書中で参考として援用される（本明細書中で参考として援用される、1990年11月15日に公開されたPCT特許出願公開WO90/13300号も参照のこと）。 ELAM-1をコードする完全長cDNAは、非翻訳のフランキング配列に対して相補的なプライマーを用いて、IL-1刺激ヒト膳静脈内皮細胞から抽出した全RNA１μgを用いた、35サイクルのポリメラーゼ連鎖反応によって得られた。上記配列は以下の通りである：生成した２Kb挿入物をゲル精製し、ポリリンカーへのSalI部位の挿入により改変された噛乳動物発現ベクターCDM8に複製方向にクローン化し、E.coli(MC1061/p3 )中で増殖した。プラスミドを個別のコロニーから単離し、そしてこれを用いてC OS細胞をトランスフェクトした。推定E-セレクチンをコードするプラスミドを、これらのトランスフェクトされたCOS細胞の、トランスフェクト後72時間におけるHL-60細胞接着を支持する能力に基づいて選択した。 E-セレクチンの発表された配列（ここでは２つの核酸置換を有する）に対応するポジティブcDNAを、全ての実験で用いた。COS細胞を、3.5〜5.0×10⁵個の細胞当たりこのプラスミドDNA１μｇ、DEAE-デキストラン400μg/ml、およびクロロキン100μＭを用いて、４時間トランスフェクトし、次いで、PBS中の10％DMSOに短時間曝した。細胞を、代謝的に、キャリアを含まない³²PO₄で一晩放射性標識し、そしてトランスフェクション後72時間で、細胞接着の研究で使用するために 0.02％のアジドおよび２mMのEDTAを追加したPBS中に回収した。上記方法により産生された、E-セレクチンでトランスフェクトされたCOS細胞を用いて、グルクロニル糖脂質リガンドについてアッセイし得る。同様に、COS 細胞は、L-セレクチンおよび／またはP-セレクチンをコードするcDNAを用いてトランスフェクトされ得る。L-セレクチン-IgGキメラ構造体の産生および特徴付けは、Watson，S.R.ら、(1990)J.Cell Biol．110:2221-2229により以前に記載されている。このキメラは、天然での発現と同様に、２個の補体結合ドメインを含む。Watson，S.R.ら、(1991)J.CellBiol．115:235-243を参照のこと。P-セレクチンキメラを、Walz,G.,ら、(1990)Science 250,1132-1135およびAruffo,A.ら、(1 991)Cell,67,35-44にそれぞれ記載の方法と同様の手段で構築した。これらのキメラは、適切な宿主細胞、例えば、293細胞中で発現され、そして精製され得る。プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーが、好ましい精製方法である。E-セレクチンおよびP-セレクチンは、キメラのサイズを標準化し、そしてこれらの分泌を促進する短縮形補体結合ドメインを用いて構築され得る。上記アッセイの１つの変法は、細胞を遺伝子工学的に操作して、高レベルのL-セレクチン、 E-セレクチン、またはP-セレクチンを細胞表面に発現させ、そして精製したセレクチンの代わりにこれらの細胞を用いることである。放射性標識したCOS細胞が、このタイプのアッセイで用いられており、そしてL-セレクチン、E-セレクチン、またはP-セレクチンをコードするcDNAを用いてトランスフェクトされ得る。これらの細胞を充分な時間、リガンドをコートしたマイクロタイターウェルに接着させた後、非接着細胞を除去し、そして接着細胞の数を測定する。接着細胞の数は、リガンドがセレクチンに結合する能力を反映する。従って、式１のいかなる候補化合物も、上述のアッセイにおける陽性の結果により、セレクチンレセプターを結合することが証明され得る。これらのアッセイにより、式１の化合物からなる群の種々のメンバーの相対的な効果を決定するための簡単なスクリーニングが提供される。式１の化合物の非治療的使用以下にさらに記載するように、式１の化合物は、炎症の治療または予防における使用に加えて、インビトロおよびインビボの両方の診断および予備の手順に有用である。式１の化合物は、固体基質に結合され得、そして生物学的試料からのセレクチンレセプタータンパク質の精製に使用され得る。これは、アフィニティークロマトグラフィーカラムとして結合した基質を配置して、セレクチンレセプタータンパク質が吸着するが不純物質は吸着しないという条件下で、セレクチンレセプタータンパク質を含有していると推定される試料をアフィニティーカラムにかけることによって、最も首尾良く行われる。次いで、セレクチンレセプタータンパク質は、例えば、式１の化合物の競合量を含むように溶離液を調節することによって、あるいは、pHまたは塩のパラメーターを調節することによって、続けて溶出される。アフィニティー精製のための技法は充分理解されており、そして定型の最適化された実験により、この手順を行うための適切な条件が作り出される。式１の化合物はまた、セレクチンまたは関連の炭水化物結合レセプターリガンドの有無を決定するための検出試薬としても有用である。こうした診断アッセイでの使用に対して、セレクチンレセプタータンパク質、またはそれに非常に関連のあるレセプタータンパク質を含有すると予想される生体試料は、レセプタータンパク質および式１の化合物の間で複合体形成が起こる条件下において、式１の化合物で処理されて、複合体の形成が検出される。広範な種々のプロトコルは、免疫アッセイに用いられるプロトコルと類似の手順で有用であり得る。従って、形成された複合体の量が直接測定される直接アッセイが有用であり得；あるいは、標識したセレクチンレセプタータンパク質が生体試料と共に供給され、そして生体試料と競合する、競合アッセイが使用され得る。いくつかの形態のアッセイでは、複合体が直接検出されるように、標識した形で式１の化合物を供給することが好都合である；それに代わる手順では、複合体は、サイズ分離、２次標識試薬、またはそれに代わる他の手段によって検出され得る。適切な標識は、当業者に公知であり、そして放射性標識、蛍光標識、酵素標識、色素原標識またはこれらのアプローチを複合したものを包含する。式１の化合物はまた、競合的診断試薬としても使用され得、生体液中の表面リガンドのようなセレクチンレセプター結合成分の量を検出する。このようなアッセイを行うには、式１の化合物を上記のように標識し、生体試料と混合し、そして適切なレセプタータンパク質と接触させる；生体試料中の存在下でのセレクチンレセプターへの標識した式１の化合物の結合の減少が、次いで測定される。式１の化合物はまた、インサイチュでのセレクチンレセプターの場所を決定するためのインビボでのイメージング研究で使用され得る。このようなアッセイで使用するために、式１の化合物は、インジウム111、テクネチウム99、ヨウ素131 などを包含するシンチグラフィー標識のような、インビボでのイメージング技法によって検出され得る標識と共に供給される。式１の化合物のような化合物を標識、クロマトグラフィーの支持体、または関連する手順において化合物を使用するのに有用な他の部分に結合するための技法は、当該分野において充分理解される。抗体もまた、適切な担体にこれらの化合物を結合させて、アジュバントを適切に含有させる標準免疫プロトコルにおいて咄乳類または他の脊椎動物被験体に結合した物質を投与することよって、式１の化合物に対して調製され得る。適切な免疫原性担体には、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)、破傷風トキソイド、ウシ血清アルブミン(BSA)のような種々の血清アルブミン、およびロタウイルスのVP6プロテインのような特定のウイルスタンパク質が包含される。次いで、これらの結合した物質を、ウサギ、ラット、またはマウスのような被験体に繰り返し注射して投与し、そして抗体力価を標準免疫アッセイ技法によってモニターする。得られた抗血清がそれ自体で使用され得るか、または免疫によって生産された抗体分泌細胞が標準技法を用いて不死化され得、そして式１の化合物と免疫反応性であるモノクローナル調製物の供給源として使用され得る。得られた抗体は、関連する式１の化合物の存在および／または量を決定するためのアッセイ系において有用である。このようなアッセイは、以下に記載のような治療処置において、式１の化合物の循環レベルをモニターするのに有用である。抗炎症性プロトコルでの投与本発明の化合物は、炎症を予防的に妨げるかまたは炎症が起こった後に緩和するのに必要である場合、被験体に投与される。本明細書中に用いられる「治療」は、炎症および／または炎症に伴う症候を予防または改善することを意味する。化合物は、好ましくは、薬学的に受容可能な担体とともに投与され、その担体の性質は、例えば、通常は固体担体を用いる経口投与、および液体の塩溶液担体を用いる静脈内投与の投与の形態で異なる。代表的には、注射可能な組成物は、液体溶液または懸濁液として調製される；注射前に液体媒体に溶解するのに、または懸濁するのに適切な固体形態もまた調製され得る。化合物はまた乳化され得るか、または活性成分がリポソーム媒体中にカプセル化され得る。適切な媒体は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびそれらの組み合わせである。さらに、もし所望であれば、上記媒体は、湿潤剤または乳化剤、あるいはpH緩衝剤などの補助物質を少量含み得る。このような用量形態の実際的な調製方法は、当業者には公知であるか、または明らかである。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publ ishing Company，Easton，PA，17版、1985年を参照のこと。処方物は、薬剤グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンセルロースナトリウム、炭酸マグネシウムなどを含む種々の賦形剤を使用し得る。経口用組成物は、溶剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性処方物、または散剤の形態をとり得る。DMSOのような浸透増強剤を含む経皮用処方物として本発明のリガンド分子を直接投与することが特に有用である。他の局所用処方物は、皮膚の炎症を治療するために投与され得る。さらに、経粘膜投与は、必要に応じてさらなる洗浄剤分子と組合せて、胆汁酸塩またはフシジン酸誘導体のような浸透剤を使用して効果的になり得る。これらの処方物は、例えば、坐剤、または鼻腔噴霧剤の調製に有用である。坐剤として、媒体組成物は、従来の結合剤および担体（ポリアルキレングリコールまたはトリグリセリドなど）を含む。このような坐剤は、約0.5％から約10％（w/w）、好ましくは約１％から約２％の範囲の活性成分を含有する混合物から形成され得る。鼻腔内用処方物は、通常、鼻の粘膜に対する刺激を引き起こさないか、または繊毛の機能をほとんど妨害しない媒体を含有する。水、生理食塩水溶液、または他の公知の物質のような希釈剤が本発明に用いられ得る。鼻腔用処方物もまた、クロロブタノールおよび塩化ベンザルコニウムのような保存剤を含有するが、これらに限定されるものではない。界面活性剤が鼻の粘膜によって対象のタンパク質の吸収を高めるために存在し得る。代表的には、本発明の組成物は、１％未満から約95％まで、好ましくは約10％から約50％までの活性成分を含む。好ましくは、約10mgと50mgとの間で子供に投与され、そして約50mgと1000mgとの間で成人に投与される。投与の頻度は、患者の応答性に基づいて与えられる配慮(care)によって決定される。他の効果的な用量は、通常の治験で確立する用量応答曲線から、当業者によって容易に決定され得る。投与すべき用量を決定する上で、特定のタイプの全てのセレクチンレセプターを完全にブロックすることが望ましいものであり得ないことに注意すべきである。正常な治癒プロセスが進行するためには、少なくともいくつかの白血球または好中球が、あらゆる創傷、感染、または病状が生じている患部組織へ運び込まれなければならない。ブロッキング剤として投与されるセレクチンリガンドの量は、治療されている疾患のタイプのような種々のファクターを考慮しながら、患者個々の必要性に基づいて、注意深く調節されなければならない。本発明の化合物は、広範な疾患、例えば、リウマチ様関節炎および多発性硬化症のような自己免疫疾患の治療に有用である。本発明の組成物は、免疫系が組織損傷、腫脹、炎症、および／または疼痛を引き起こす程度にまで組織内に白血球を蓄積させる身体に対して向けられている、いかなる病状の治療にも適応し得る。再灌流損傷は臨床心臓学における主要な問題である。虚血心筋において白血球接着を減少させる治療薬は、顕著に血栓溶解剤の治療効率を増強させ得る。組織プラスミノーゲンアクチベーターまたはストレプトキナーゼのような薬剤を用いる血栓溶解療法は、逆転不可能な心筋細胞死の前の重篤な心筋虚血を有する多くの患者において、冠状動脈障害を緩和し得る。しかし、このような患者の多くは依然、血流の回復にもかかわらず心筋神経症を患っている。この「再灌流損傷」は虚血領域の血管内皮への白血球の接着に関連することが知られており、おそらく一部は、血小板および内皮を白血球に対して接着性にするトロンビンおよびサイトカインによる血小板および内皮の活性化によるものである(Romsonら、Circu lation 67:1016-1023、1983)。これらの接着性白血球は内皮を通じて移動し、そして虚血心筋に入り込み得、それにより虚血心筋が血流の回復によりレスキューされる。虚血および再灌流が、白血球の血管表面への接着により仲介される器官損傷を生じさせる多くの他の一般的な臨床的障害がある。これは発作、腸間膜および末梢血管疾患、臓器移植、ならびに循環性ショック（この場合多くの器官が血流の回復後に損傷を受け得る)を包含する。本発明の処方物はまた、心臓発作に起因する組織損傷の望ましくない後遺症を予防するためにも投与され得る。心臓発作が起こり、例えば抗凝血薬または血栓溶解剤（例えば、tPA）の適用によって患者が回復した場合、凝血塊が形成された内皮内層はしばしば損傷を受ける。抗血栓剤が凝血塊を除去した場合、凝血塊の下の損傷を受けた組織、および内皮内層中の酸素が欠如していた他の損傷を受けた組織が活性化される。次いで、活性化された内皮細胞は、細胞が損傷を受けてから数時間以内にセレクチンレセプター、例えば、ELAM-1レセプターを合成する。このレセプターは血管中にまで達し、白血球表面の糖脂質リガンド分子に接着する。大量の白血球が素早く捕獲され、そして活性化された内皮細胞の領域の周囲の組織中へもたらされて、炎症、腫脹、および壊死が起こり、これによって患者の回復の見込みが減少する。心臓発作から生じる傷害を受けた患者を治療することに加えて、身体のある領域が重傷を負った後に通常生じる炎症および腫脹の量を軽減するために、本発明の処方物を用いて実際に物理的な外傷を受けた患者を治療し得た。本発明の処方物を用いて治療し得るその他の状態は、種々のタイプの関節炎、および成人呼吸促進症候群を包含する。本開示を読んだ後、当業者により、本発明の処方物を投与することによって治療および／または緩和され得る他の疾患の状態および／または症状が理解される。式２の化合物の適用式２の化合物は、ラクシトル単位を含む化合物を調製する際の中間体である。式２の化合物は、顕著に本明細書中でその使用が上述されている式１の化合物の調製に有用である。式１の化合物に加えて、ラクトース残基を含む他の化合物もまた調製され得、それは、例えば、 4-O-(3-O-カルボニメチル-β-D-ガラクトピラノシル)-3-O-[(2R,S)-グリセリル]-D-グルコピラノース； 4-O-(3-O-カルボニメチル-β-D-ガラクトピラノシル]-3-O-[(2R,S)-2,3-ジデオキシ-2,3-ジフルオロ-プロピル]-D-グルコピラノース； 4-O-[3-O-{(1R,S)-1-(カルボキシ)エチル}-β-D-ガラクトピラノシル]-3-O-[( 2R,S)-グリコシル]-D-グルコピラノース； 4-O-[3-O-{(1R,S)-1-(カルボキシ)エチル}-β-D-ガラクトピラノシル]-3-O-( α-L-フコピラノシル)-D-グルコピラノース； 4-O-[3-O-(α-Neu5Ac)-β-D-ガラクトピラノシル]-3-O-[(2R,S)-グリセリル]-D -グルコピラノース； 4-O-[3-O-(α-Neu5Ac)-β-D-ガラクトピラノシル]-3-O-[(2R,S)-2,3-ジデオキシ-2,3-ジフルオロ-プロピル]-D-グルコピラノースである。レセプター結合リガンドの多価性形態レセプターに対する本発明のリガンドの親和性は、好ましくは、担体部分によって提供される土台を用いて、リガンドの非常に近い多数のコピーを提供することにより強化され得る。この部分間の最適な間隔を有するこのような多価性を与えることにより、レセプターに対する結合が劇的に改善することが示された。例えば、Lee，R.ら、Biochem（1984）23:4255には、ラクトースが多価性物として供給されるとき、ラクトースの多価性形態を与えることにより、標識したASORが哺乳類の肝細胞になおさら効果的に結合するのを阻害することを示した；IC₅₀は、１価のラクトースについての500μMから、２価のラクトシル化合物については９まで、３価のラクトシル化合物については４まで、そして理想ではまたは３つのラクトース部分間の最適な間隔では0.007μMまで減少した。多価性および間隔は、適切な担体部分を選択することによって制御し得る。このような部分は、本発明のリガンドと会合した官能基と反応し得る官能基の多価性を有する、分子支持体を包含する。特に好ましいアプローチは、本発明のラクトース誘導リガンドが、還元的アミノ化によって担体のアミノ基にカップリングすることを包含する。還元的アミノ化は、最初にシッフ塩基を形成し、次いで、水素化物還元剤のような還元剤で複合体を処理することにより、遊離アミノ基にアルデヒド部分を結合させる、特に好適な方法である。代表的には、担体を有するアミノ基は、約pH９で炭水化物部分と混合し、そしてシッフ塩基を形成し得る；溶媒を代表的にはエバポレートし、そして高pHで、還元剤を添加することにより、反応を完了させる。本発明のリガンドの多価性形態を得るための特に好適な担体部分は、タンパク質およびペプチド、特に、結合に利用可能なε-アミノ基を有するリシル残基を含むものを包含する。また少なくとも１つのチロシン残基をペプチドまたはタンパク質中に有することが有用である。なぜなら、これは、例えば放射性ヨウ素で標識するのに好適な部位を提供するからである。３価結合を得るための特に好適な担体は、ペプチドLys-Tyr-Lysである。このペプチド上での本発明のリガンドと遊離アミノ基との完全な反応は、３価部分をもたらす。従って、次式の本発明の化合物：（ここで、Ｘ、Ｙ）ならびにR¹およびR³は上記に定義された通りである）は本発明の多価性化合物を例示する。確かに、BSAまたはHSAのようなタンパク質、例えばペンタペプチド、デカペプチド、ペンタデカペプチドなどを包含する、ペプチドの多価性を包含する、種々の担体が用いられ得る。好ましくは、ペプチドまたはタンパク質は、それらの側鎖に遊離アミノ基を有する所望の数のアミノ酸残基を含む；しかし、スルフヒドリル基またはヒドロキシル基のような他の官能基もまた、安定な結合を得るために用いられ得る。例えば、本発明の炭水化物リガンドは、アミドを形成する遊離アミノ基またはエステルを形成するヒドロキシル基のいずれかで誘導体化され得る還元末端で、カルボキシル基を含有するように酸化され得る。式１の化合物の調製式１の本発明の化合物は、式２の中間体を用いて合成され得る。１つの実施態様では、式２の中間体は、標準的な手順を用いてD-ラクトースから直接調製され得る。この変換では、D-ラクトースは、Hudson，C.,およびKuns，A.,J Am Chem Soc (1925)47:2052に記載の方法で、95％を上回る収率で、結晶形でオクタアセテートに変換される。オクタアセテートは、順次、Hudson，C.の方法（上記）、または、Fischer，E.およびFischer，H.,Ber(1910)43;2521の方法によって、90％より多い収率で、対応する臭化ラクトシルに変換され、これもまた結晶性化合物である。保護された臭化ラクトシルは、Jansson，K.,ら,J Org Chem(1988)53:56 29の方法によって、60％を上回る収率で対応するアシル化トリメチルシリルエチルラクトースに変換され、これは定量的収率で脱アシル化によって脱保護され得、2-（トリメチルシリル）エチルラクトシド、すなわち、2-（トリメチルシリル）エチルβ-D-ガラクトピラノシル-β-D-グルコピラノシドを得る。二糖の１位の他の保護基もまた、使用され得る。式２の化合物のこの前駆体は、以下の式の通りであり：ここでR⁷は保護基、好ましくはSEまたはBnまたは高級アルキル基（５〜15Ｃ）のような親油基であって、ここでSEは-CH₂CH₂SiMe₃を表し、そしてBnはベンジルを表す。反応スキーム１は、この中間体由来の式２の化合物の１つの実施態様の形成を概略し、ここでBzはベンゾイルを表す。反応スキームの工程１において、保護されたラクトース、例えばトリメチルシリルエチル誘導体は、過剰の2,2-ジメトキシプロパンで処理し、そして乾燥カンファースルホン酸を反応混合物に添加し、それをおよそ室温で2〜3日間撹拌する。トリエチルアミンのような適切な塩基を添加し、そして10〜20分間撹拌し続ける；次いで、混合物を、乾燥するまで濃縮し、そして塩基を除去する。ベンジルラクトシドの場合、用いられる方法は、D.Beith-Halahmiら、Carbohydr．Res.， (1967)5:25の方法であり、この方法では、ベンジルラクトシドを、4-トルエンスルホン酸を含有する大過剰の乾燥アセトン中で３〜４時間煮沸する。この反応混合物を標準的な手法を用いて処理し、生成物6a,b（または19）を回収する。この中間体を、次いで適切な条件下で、例えば、塩化ベンゾイルを用いて、ベンゾイル化し、反応スキームに7a,b（または20）として示される中間体化合物を得る。中間体7a,b（または20）は、次いでグルコシド残基の３位の遊離ヒドロキシル基でさらに誘導体化され得るか、またはこの位置が保護され得、そして化合物はガラクトシル残基の３位および４位で脱保護され、そして３位でさらに誘導体化される。ガラクトシル残基の４位は相対的に非反応性である。この鍵となる中間体7a,b（または20）の利用に対する代表的なスキームを、反応スキーム2Aに示す。（このスキームにおいて、Bzはベンゾイル（PhCO-）であり、そしてBnはベンジル（PhCH₂-）である）。反応スキーム2Aに示すように、中間体7a,b（または20）は、適切な条件下で保護されたメチル１-チオ-L-フコシドで処理することにより、２つの工程で中間体10a,b （または22）に変換される。この反応は、臭化第二銅、臭化テトラブチルアンモニウム、およびモレキュラーシーブの存在下で、非水溶非プロトン性溶媒中で行う。（S.Satoら、Carbohydr．Res.(1986)155:C6）。次いで、10a,bとして示される、得られた化合物を、文献の手順に従って、中間体を単離することなく、3,4-オルトエステルを経ることによって、D-ガラクトピラノシル残基の４位を選択的にアセチル化（R.U.LemieuxおよびH.Drigwez、J.Amer.Chem.Soc.,(1975)9 7 :4069)して、中間体11a,b（または23）を得る。中間体11a,b（または23）の硫酸化により、中間体12a,b（または24）を生成し、これを脱アセチル化し、そして水素化して、最終生成物13a,b（または26）、セレクチンリガンドを生成する。反応スキーム2Bに示される、本発明の他の実施態様では、中間体11a,bまたは2 3 をリン酸化して中間体14a,bまたはcをそれぞれ生成し得、脱アセチル化および水素化により最終生成物15a,bまたはcを生成する。これらの化合物は、セレクチンリガンドとして作用すると予想される。反応スキーム３に示される、本発明の他の実施態様では、19から中間体27および28を経て生成する中間体29を硫酸化またはリン酸化して、中間体30aまたはbをそれぞれ生成し、これを脱アシル化および水素化することにより、最終生成物31 aまたはb をそれぞれ生成する。これらの化合物は、セレクチンリガンドとして作用すると予想される。本発明の化合物および好ましい実施態様本明細書中に使用しているように、アルキル（1-6C）は、1-6Cを含む飽和直鎖または分枝鎖あるいは環式ヒドロカルビル残基を示し；低級アルキルは、同様に定義されるが1-4Cしか含まず、高級アルキルは、同様に定義されるか5-15Cしか含まない。本明細書中に使用しているように、アルキルアリールは式(CH₂)_m-Arであり、ここでｍは1〜10であり、そしてArは単環式または二環式芳香族残基であり、１種またはそれ以上のヘテロ原子を任意に含む。Arの代表的な実施態様は、フェニル、ナフチル、キノリル、ピリジル、ピリミジニル、ベンズチアゾイル、ベンズイミダゾイルなどを包含する。 R⁷は、糖残基に適切な保護基または親油基である。代表的な保護基は、ベンジル、ベンゾイル、トリメチルシリルエチル（SE）のような種々のシリルアルキル基など、および上記で定義された高級アルキル基（5-15C）のような親油基を包含する。本発明の式１の化合物の例は、R³がSO₄ ^2-、PO₄ ^2-、または他の類似の荷電した部分である化合物である。式１の化合物の他の例は、Xが以下であるものを包含する： 6-メチル-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-アセチル-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-プロピルアミド-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-プロピルアミド-2,3,4-トリメトキシピラン-2-イル、 6-エチル-2,3-ジヒドロキシ-4-メトキシピラン-2-イル、 6-N-エチルアミノ-2-ヒドロキシ-3,4-エトキシピラン-2-イル、 3,4,5-トリ-n-プロピルオキシピラン-2-イル、 3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 2,3,4-トリメトキシフラン-2-イル、 2,3-ジヒドロキシ-4-メトキシフラン-2-イル、 2-ヒドロキシ-3,4-エトキシフラン-2-イル、 3,4,5-トリ-n-プロピルオキシフラン-2-イル、および 3,4,5-トリヒドロキシフラン-2-イル；または、ここでR⁵およびR⁶の両方がＨであり、そしてＸ中の全てのR¹がＨまたはメチルであり；または、ここで、Ｘが2,3,4-トリヒドロキシベンゾイルであり；または、ここで、ＸがＨである。従って、式１の特に好ましい化合物は、全てのR^lがＨまたはメチルであり、ＹがＨ、OH、OCH₃、またはOAcであり；および／または、Ｘが-CH₂(CHOH)₃H、3,4,5 -トリヒドロキシピラン-2-イル、3,4,5-トリヒドロキシ-6-メチルピラン-2-イル、3,4,5-トリメトキシピラン-2-イル、3,4,5-トリメトキシ-6-メチルピラン-2- イル、3,4,5-トリヒドロキシフラン-2-イル、3,4,5,-トリメトキシフラン-2-イル、2,3,4-トリヒドロキシベンゾイル、または2,3,4-トリヒドロキシナフトイルであり；そして、R₃がSO₄ ^2-、PO₄ ^2-、または他の類似の荷電した部分である。式１の最も好ましい化合物は、全てのR¹がＨであり、R²がＨ、または-CH₂(CH₂ )₆CH₃であり、ＹがＨ、OR¹、または低級アルキルである。中間体を表す式２の化合物については、好ましい形態は、R⁶によって表される保護基が、ベンジルまたはベンゾイルであり、R⁷によって表される保護基が、トリメチルシリルエチルまたはベンジル、あるいは高級アルキル基（5-15C）のような親油基であり、そしてここでY₁が、Ｈ、OR⁶であり、ここでR⁶が上述のようにベンジルまたはベンゾイルであり、そして、ここで遊離ヒドロキシル基が、グルコシル部分の３位、またはガラクトシル部分の３位および４位にある。ガラクトシル部分の３位および４位に対する他の好ましい保護基は、イソプロピリデンである。次の実施例は、本発明の例示を意図しており、本発明を限定することを意図していない。実施例１ 2-(トリメチルシリル)エチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3 ,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-グルコピラノシド（7a）の調製 2-(トリメチルシリル)エチル4-O-(3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（K.Janssonら、J.Org.Chem.(1988)53:5629-5 647；6.6g、13.75ミリモル）を乾燥ピリジン(120mL)に溶解した。この混合物を- 45℃まで冷却し、そして塩化ベンゾイル（9.07mL、77.4ミリモル）を滴下しなから撹拌し、そして-45℃で４時間撹拌し続けた。 T.1.c(8.5:1.5トルエン−酢酸エチル）により、出発アセタールよりも移動が速い主生成物の存在が明らかになった。少量の、さらに移動が速い生成物（ペンタベンゾエート）も、t.l.c.により明らかになった。この混合物を、氷水に注ぎ、そしてジクロロメタンを用いて抽出した。このジクロロメタン溶液を、引き続いて、水、NaHCO₃水溶液、および水で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、そして濃縮した。濃縮物を、9:1 トルエン−酢酸エチルを溶離液とするシリカゲルカラムにかけ、そして固体を得、これをメタノールから結晶化して7a（5.2g、42.3％）を得た。[α]_D＋17.5（c、1.1、クロロホルム）であった。実施例２ベンジル2,6-ジ-O-ベンゾイル-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（7b）の調製撹拌しそして冷却（-45℃、浴）した、ベンジル4-O-(3,4-O-イソプロピリデン -β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（5g、10.6ミリモル；D.Bei th-Halahmiら、Carbohydr Res.(1967)5:25)の乾燥ピリジン(120mL)溶液を、塩化ベンゾイル(6mL、51.8ミリモル)を滴下して処理し、そして-45℃で４時間撹拌し続けた。t.l.c(8.5:1.5トルエン−酢酸エチル）により、出発アセタールよりも移動の速い主生成物の存在が明らかになった。少量の、さらに移動の速い生成物（ペンタベンゾエート）も、t.l.c.により明らかになった。この混合物を、氷水に注ぎ、そしてジクロロメタンを用いて抽出した。このジクロロメタン溶液を、引き続いて、水、NaHCO₃水溶液、および水で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、そして濃縮した。次いで、濃縮物を、シリカゲルカラムにかけ、そして9:1 トルエン −酢酸エチルを用いて溶出した。濃縮で、主生成物に対応する画分は、固体残渣を与え、これを熱メタノールから結晶化して7b(5.53g、59％)を得た；融点159〜 161℃;[α]_D -4.2°（c,．1.3、クロロホルム）。実施例３ベンジル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（9b）の調製湿気から保護した5:1 ジクロロエタン-N,N-ジメチルホルムアミド(120mL)中の、化合物7b(4g、4.5ミリモル)、メチル2,3,4-トリ-O-ベンジル-1-チオ-α-L-フコピラノシド８(3.6g、7.75ミリモル)、および粉末状4Aモレキュラーシーブ(10g )の混合物を室温で２時間撹拌した。臭化第二銅(2g、9ミリモル)および臭化テトラブチルアンモニウム（0.29g、0.9ミリモル）を添加し、そして室温で35時間撹拌し続けた。さらにドナー８(1.2g、2.6ミリモル、5:1ジクロロエタン-N,N-ジメチルホルムアミド14.4mL中)、臭化第二銅(0.67g、0.3ミリモル)、およびモレキュラーシーブ4A(2g)を添加し、そして室温で16時間撹拌し続けた。次いで、t.l. c(9:1 トルエン−酢酸エチル）により、7bよりも移動の速い主生成物の存在が示された；痕跡量の未変化の7bも、t.l.c.により明らかになった。この混合物を濾過し（セライト床）、そして固体をクロロホルムで徹底的に洗浄した。濾液および洗浄液を合わせ、そしてNaHCO₃水溶液および水を用いて洗浄し、乾燥し、そして濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムにかけ、そして9.5:0.5 トルエン−酢酸エチルを用いて溶出した。主生成物に対応する画分の濃縮により固体が得られ、これをエーテルから結晶化して反応した7bに基づく9b(3.68g、76％)を得た。化合物9bは、融点180〜181℃；[α]_D-８°（c、1.1、クロロホルム）を有していた。実施例４ 2-(トリメチルシリル)エチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル -α-L-フコピラノシル)-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β -D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（9a）の調製湿気から保護された5:1ジクロロエタン-N,N-ジメチルホルムアミド(135mL)中の、化合物7a(5.2g、5.78ミリモル)、化合物８(4.68g、10.17ミリモル)、および粉末状4Aモレキュラーシーブ(6g)の混合物を室温で２時間撹拌した。臭化第二銅 (2.6g、11.7ミリモル)および臭化テトラブチルアンモニウム(3.77g、11.7ミリモル)を添加し、そして室温で合計48時間撹拌し続け、24時間後にさらなる量の８( 2.34g、5.09ミリモル、5:1ジクロロエタン-N,N-ジメチルホルムアミド60mL中）、臭化第二銅(1.3g、5.85ミリモル)、臭化テトラブチルアンモニウム(1.9g、5.8 5ミリモル)、および4Aモレキュラーシーブ(3g)を添加した。t.l.c(9:1 トルエン −酢酸エチル）により、7aよりも移動の速い主生成物の存在が明らかになり、いくらかの未反応の7aもt.l.c.により明らかになった。7b（9bを与えた）について記載したように処理した後、カラムクロマトグラフィーにかけ、非結晶性固体として化合物9a(6.7g、88％)を得た；陽イオンLSIMS：1442.6(M+Na)⁺、1340.8(M-N aSO₃)⁺、陰イオンLSIMS：1396.2(M-Na)^-。実施例５ベンジル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（10b）の調製 70％酢酸水溶液(600mL)中の化合物9b(1.0g)を、85〜90℃で撹拌し、t.l.c.(4: 1トルエン−酢酸エチル)により反応の進行をモニターした。2.5時間後、出発アセタール9bのほとんどは、移動のより遅い生成物に変換された。t.l.c.により、 α-L-フコシル結合の幾分かの開裂も示された。これは、２種の副生成物の存在によって証拠づけられ、これらのうち一方は、生成物（トリベンジルフコース）よりも移動が速く、そして他方は、硝酸化がより遅い（二糖生成物）。酢酸を減圧下で（約40℃）エバポレートし、最終痕跡量を、幾分か添加したトルエンとの共蒸発（co-evaporation）により除去した。このようにして得た残渣を、溶離液として9:1トルエン−酢酸エチルを用いて、シリカゲルのカラムで精製し、非結晶性固体として10b(0.6g、61.8％)を得た。実施例６ 2-(トリメチルシリル)エチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル -α-L-フコピラノシル)-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル)- β-D-グルコピラノシド（10a）の調製化合物9a(3g、2.3ミリモル)を70％酢酸水溶液(300mL)中に取り、そして混合物を85〜90℃(浴)で撹拌しながら２時間加熱した。t.l.c.(4:1トルエン−酢酸エチル)により、10bに相当するクロマトグラフィー移動度を有する主生成物の存在が示された。9b（10bを与えた）について記載したように処理し、次いでカラムクロマトグラフィーにかけることにより、非結晶性固体として三糖ジオール10a(2. 3g、79％)を得た；[α]_D -20,6°（c、1.1、クロロホルム）。実施例７ベンジル2,6-ジ-O-ベンゾイル-4-O-(4-O-アセチル-2,6-ジ-O-ベンゾイル-β-D- ガラクトピラノシル)-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-β-D -グルコピラノシド（11b）の調製化合物10b(0.56g)を、4-トルエンスルホン酸(0.15g)を含有する、ベンゼン(30 mL)とトリエチルオルト酢酸(30mL)との混合物に溶解し、そしてこの混合物を室温で１時間撹拌した。酸を少量のトリエチルアミンで中和し、そしてこの混合物をエバポレートして乾燥した。次いで、これを80％酢酸水溶液(50mL)に取り、そして室温で40分間撹拌した。t.l.c.(4:1トルエン−酢酸エチル）により、ジオール10bよりも移動の速い主生成物の存在が示された。酢酸を減圧下で除去し、そして少量のトルエンを添加し、そして残渣からエバポレートして、非結晶性固体として11b(0.56g、96.6％)を得た。[α]_D-14.3°（c、1.1、クロロホルム）であった。実施例８ 2-(トリメチルシリル)エチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-4-O-(4-O-アセチル-2,6-ジ-O -ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル)-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-β-D-ガラクトピラノシド（11a）の調製化合物10a(1.87g)の、4-トルエンスルホン酸(0.25g)を含有するベンゼン(50mL )とトリエチルオルト酢酸(50mL)との混合物溶液を、室温で１時間撹拌した。次いで、酸を数滴のトリエチルアミンで中和し、そしてこの混合物をエバポレートして乾燥した。残渣を80％酢酸水溶液(100mL)と混合し、そしてこの混合物を室温で40分間撹拌した。10b（11bを与えた）について記載したように処理して、標題の化合物11a(1.86g、89％)を得た；白色の非結晶性固体;[α]_D-2.7°（c、1.1 、クロロホルム）。実施例９ベンジル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-4-O-(ナトリウム4-O-アセチル-2,6-ジ-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル3-スルフェート)-β-D-グルコピラノシド（12b）の調製乾燥ピリジン(50mL)中の、化合物11b(0.6g、0.46ミリモル)および三酸化イオウ−ピリジン複合体(0.6g、6.3ミリモル)の混合物を、55〜60℃（浴）で２時間撹拌し、次いで室温で16時間撹拌した。t.l.c．（6:1クロロホルム−メタノール）により、11bの消失および移動のより遅い単一の生成物の存在が示された。メタノール（５mL）を添加し、そしてこの混合物を15分間撹拌し（過剰の試薬を分解し）た。次いで、これを濃縮し、そして10:1、次いで6:1のクロロホルム−メタノールを用いた溶離により、シリカゲルのカラムで精製した。濃縮で、生成物に対応する画分により、固体残渣を得、これを1:1クロロホルム−メタノール (30mL)に溶解し、そしてAmberlite IR 120(Na⁺)カチオン交換樹脂を用いて処理し、そして混合物を室温で１時間撹拌した。次いでこれを濾過し、そしてエバポレートして乾燥し、非結晶性固体として12b(0.58g、89％)を得た，[α]_D -5.1° （c、1.8、1:1クロロホルム−メタノール）；陽イオンLSIMS：1433(M+Na)⁺、141 1.1(M+H)⁺、陰イオンLSIMS：1563.9(M+mNBA)^-、1386.7(M-Na)^-。実施例10 2-(トリメチルシリル)エチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル -α-L-フコピラノシル)-4-O-(ナトリウム4-O-アセチル-2,6-ジ-O-ベンゾイル-β -D-ガラクトピラノシル3-スルフェート)-β-D-グルコピラノシド（12a）の調製乾燥ピリジン(25mL)中の、化合物11a(0.45g、0.39ミリモル)および三酸化イオウ−ピリジン複合体(0.45g)4.7ミリモル)の混合物を、55〜60℃で２時間撹拌し、次いで、室温で１晩撹拌した。上記と同様の方法で処理および精製した後、非結晶性固体として化合物12a(0.46g、95.8％)を得た；[α]_D+2.2°(c、1.5、1:1 クロロホルム−メタノール)；陽イオンLSIMS：1442.6(M+Na)⁺、1341.1(M-NaSO₃)^- 、陰イオンLSIMS：1395.5(M-Na)^-。実施例11 O-α-L-フコピラノシル-(1→3)-O-[ナトリウムβ-D-ガラクトピラノシル3-スルフェート-(1→4)]-D-グルコピラノース(13b)の調製触媒量のナトリウムメトキシドを含有するメタノール(50mL)中の化合物12b(0. 58g)を、45〜50で１晩撹拌した。t.l.c.(13:6:1クロロホルム−メタノール−水）により、移動のより遅い単一の生成物の存在が示された。室温まで冷却した後、この混合物が中性になるまで（pH試験紙）、Amberlite IR 120(H⁺)カチオン交換樹脂を添加した。次いで、この混合物を、Amberlite IR 120(Na⁺)カチオン交換樹脂を含むフラスコ中に直接濾過し、そして混合物を45分間撹拌した。次いで、これを濃縮し、そしてヘキサン−エーテル混合物で繰り返し抽出して安息香酸メチルを除去した。そのようにして得られた、部分的に保護された中間体(0.3 8g)は、充分に純粋であり、次の工程に直接使用した；陰イオンLSIMS：928.1(M- Na)^-。一部分(0.35g)を、さらに精製せずに、10％パラジウム炭素(0.35g)を含有する80％メタノール水溶液(30mL)に取った。この混合物を、室温で１晩、H₂のわずかな過圧下で撹拌した。このときt.l.c.(5:4:1または13:6:1クロロホルム−メタノール−水）により、移動のより遅い生成物の存在が、痕跡量の、移動のより速い数種の夾雑物（恐らく、不完全な加水分解による）と共に示された。この混合物を、直接、Amberlite IR 120(Na⁺)カチオン交換樹脂上に濾過し（セライト床）、そして固体をメタノール水溶液で徹底的に洗浄した。樹脂と共に１時間撹拌した後、混合物を濾過し、そして濃縮して小容量にし、これをシリカゲルのカラムにかけ、そして5:4:1クロロホルム−メタノール−水で溶出した。生成物に対応する画分をプールし、濃縮して小容量にし、そしてAmberlite IR 120(Na⁺) カチオン交換樹脂を用いて処理した。樹脂を濾去し、そして水で洗浄し、そして濾液および洗浄液を合わせて、再濾過し（0.2μM 酢酸セルロースシリンジフィルター）、そして凍結乾燥して13bを得た(183mg、84.3％；[α]_D-20.5°(c、0.6 、水)。実施例12 2-(トリメチルシリル)エチルO-α-L-フコピラノシル-(1→3)-O-[ナトリウムβ-D -ガラクトピラノシル3-スルフェート-(1→4)]-β-D-グルコピラノシド(13a)の調製化合物12a(0.45g)を、正確に10について記載した通りにして、メタノール性ナトリウムメトキシド(50ml)中で0-脱アセチル化し、対応する部分的にベンジル化された中間体(0.29g)を得た。この中間体は、陽イオンLSIMS：983.9(M+Na)⁺、88 2.1(M-NaSO₃)、陰イオンLSIMS：938.0(M-Na)^-を示した。この化合物(0.24g)を、さらに精製せずに、80％メタノール水溶液(30mL)中、10％パラジウム炭素(0.24g )の存在下で、触媒的加水分解にかけ、次いで上記と類似の方法で処理して、白色の綿毛状物質として化合物13a(125mg、72.7％)を得た，[α]_D-49.2°（c、0.6、水)。実施例13 多価リガンド、N,6N,6N'トリス（20）Ｌys-Tyr-Lysの調製実施例12で調製した化合物13aまたは13bを、ペプチドLys-Tyr-Lysに誘導体化して、ペプチドの２つのε-アミノリジン基およびα-アミノＮ末端において誘導体化された３価の複合体を得る。この３価の化合物を得るために、100mMの炭酸ナトリウム（pH9）中の2mMのペプチドLys-Tyr-Lys50μl（100ナノモル）を、200 mMの20を５μl（1ミリモル）含む小さいエッペンドルフチューブに入れ、そして試料を約30分間スピードバック（SpeedVac）中でエバポレートして乾燥する。エバポレートした後、100mMの炭酸ナトリウム（pH9）中の800mMのNaCN・BH₃ 5 0μl（再結晶化、40マイクロモル）を添加し、そして混合物を55℃で48時間インキュベートする。インキュベートして得られた混合物を、GPCペプチドHPLCサイジングカラムにかけて、画分を収集し、そしてBCAタンパク質アッセイによってタンパク質含量についてアッセイする。タンパク質含有画分をプールし、凍結乾燥し、そして質量分析を行う。化合物13aまたは13bを１、２、または３個含む、誘導体化されたペプチドの生成の結果を示す。この３価誘導体は、Lee,R.ら、Biochem（1984）23:4255に記載のように行ったアッセイにおいて、肝細胞に対するラクトースの結合を阻害することに、特に効果的である。実施例14 オクチル4-O-(2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-β-D-ガラクトピラノシル)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β-Dグルコピラノシド（17）の調製 1:1ベンゼン-エーテル（250ml）中のn-オクタノール（20ml）、酸化銀(10g)、ドライライト（dririte）（25g）の混合物を、無水条件下で、室温にて１時間撹拌した。アセトブロモラクトース（16、25g、35.7ミリモル）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、固体をセライト床で濾過し、クロロホルムで洗浄した。濾液を濃縮し、ヘキサン（4×50ml）を生成物に加え、残渣からデカントし、粗生成物をシリカゲルカラム（3:1続いて2:1のヘキサン-酢酸エチル）で精製して、17（15.8g、59％）を非結晶性白色固体として得た。分析用の試料を、ジクロロメタン-エーテル-ヘプタンから結晶化した；融点83〜85℃；[α]_D-14.7 °（c、1.1、クロロホルム）、t.l.c．（1:1 酢酸エチル-ヘキサン）。実施例15 オクチル4-O-β-D-ガラコピラノシル-β-D-グルコピラノシド（18）の調製化合物17（30g）を触媒量のナトリウムメトキシドを含む乾燥メタノール（150 ml）に溶解し、この混合物を室温で撹拌した。約30分間で、脱アセチル化物質の結晶化が確実となり、この混合物を室温で一晩撹拌した。塩基を氷酢酸で中和し、結晶物質を濾過し、メタノール-エタノールの混合物で洗浄し、そして空気中、次いで減圧下で乾燥して、18（15.2g、83.5％）を得た；融点179〜181℃；[α ]_D -10.9°(c、1.0、メタノール)、t.l.c．（13:6:1 クロロホルム-メタノール- 水または3:2:1酢酸エチル-プロパノール-水）。脱イオン化および母液の濃縮後、さらなる量の18（1.6g）を得た（全収率92％）。実施例16 オクチル4-O-(3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（19）の調製方法（ａ）：2,2-ジメトキシプロパン（200mL）中、18（5g）およびカンファースルホン酸（0.2g）の混合物を、室温で48時間撹拌した。酸をトリエチルアミンで中和し、混合物を濃縮した。残渣をトルエンと混合し、そしてエバポレートして、微量のトリエチルアミンを除去した。残渣を10:1メタノール-水（200mL）中に取り、一晩煮沸した。この混合物を濃縮し、残渣をエタノールと共に共蒸発した。アセトン-ヘプタンからの結晶化により、化合物19（3.6g、66.2％）を得た；融点145〜147℃；[α]_D+6.4°（c、1.25、クロロホルム）、t.l.c．（9:1クロロホルム-メタノール）。方法（ｂ）：アセトン（500mL）中の18（5g）および4-トルエンスルホン酸（1 g）の混合物を約４時間煮沸した。酸をトリエチルアミンの添加によって中和し、混合物を濃縮した。アセトン-ヘプタンを添加して、19（4g、73.5％）を結晶化させた。実施例17 オクチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-4-O(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（20）の調製ピリジン（35mL）中の塩化ベンゾイル（8.1mL、67.5ミリモル）の溶液を、-45 ℃でピリジン（140mL）中の19（7.5g、15.2ミリモル）の溶液に滴下し、この混合物を-40〜-45℃で3〜4時間撹拌した。この混合物を氷水に注ぎ、ジクロロメタン（３×50ml）で抽出した。ジクロロメタン溶液を、水、氷冷した５％H₂SO₄水溶液、NaHCO₃水溶液、水で連続的に洗浄し、乾燥し（Na₂SO₄）、そして濃縮した。粗生成物をメタノール-2-プロパノール（3:1 v/v）から結晶化し、所望のテトラベンゾエート20（8.2g、59.4％）を得た。分析用の試料を、ジクロロメタン-メタノールからの再結晶によって得た。融点133〜134℃；[α]_D+16.9°（c、0.9、クロロホルム）、t.l.c．（8.5:1.5 トルエン-酢酸エチル）。実施例18 オクチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（21）の調製湿気から保護された、5:1ジクロロエタン-N,N-ジメチル-ホルムアミド（150mL ）中の化合物20（7g、7.7ミリモル）、メチル2,3,4-トリ-O-ベンジル-1-チオ-L- フコピラノシド（８、6.5g、14.1ミリモル）および粉末状4Aモレキュラーシーブ（10g）の混合物を、室温で２時間撹拌した。臭化第二銅（4g、18ミリモル）および臭化テトラブチルアンモニウム（2g、6.2ミリモル）を添加し、そしてこの混合物を室温で一晩撹拌した。さらにドナー８（5:1ジクロロエタン-N,N-ジメチルホルムアミド12mL中、2g、4.3ミリモル）および臭化第二銅（1.2g、2.6ミリモル）を加え、撹拌を室温で16時間続けた。混合物をセライトを通して濾過し、固体をジクロロメタンで徹底的に洗浄した。濾液および洗浄液を合わせて、10％ N a EDTA溶液と共に15分間撹拌した。有機溶液を分離し、このプロセスを繰り返した（２×10％ Na EDTA、続いて２×５％ Na EDTA溶液）。有機相を水で洗浄し、乾燥し（Na₂SO₄）、減圧下で濃縮して濃密なシロップを得た。残渣をエーテル- ヘプタンから結晶化し、21（8.5g、83％）を得た。21の分析的に純粋な試料を、ジクロロメタン-エーテルからの結晶化によって得た。融点152〜153℃；[α]_D+2.5 °（c、1.1、クロロホルム）、t.l.c．（8.5:1.5 トルエン-酢酸エチル）。実施例19 オクチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド（22）の調製トリフルオロ酢酸（18mL）および水（3〜4mL）を含むクロロホルム（300mL）中の21（8g）の溶液を、室温で10時間激しく撹拌し、反応をt.l.c．（19:1または9:1クロロホルム-アセトン）でモニターした。これにより移動のより遅いジオール22の増加と同時に21の連続的な減少が示された。22よりもわずかに移動の速いスポット（トリベンジルフコースと同一のクロマトグラフ移動度）、および移動のより遅い生成物（おそらく、ラクトシドトリオール）のt.l.c.における存在によって示されるように、フコピラノシル残渣のいくらかの除去も起こった。t. l.c.はまた、少量の未反応の21の存在も示したが、過剰の脱フコシル化を避けるために、反応を終結した。混合物を氷冷した飽和NaHCO₃水溶液に注ぎ、15分間撹拌した。クロロホルム溶液を分離し、再びNaHCO₃溶液、続いて水で洗浄し、乾燥し（Na₂SO₄）、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（トルエン中の5〜20％酢酸エチル）を用いて精製し、未反応の21（0.8g）、トリベンジルフコース、および22 （5.4g、69.6％）が発泡体として得た；[α]_D-20.2°（c、1.1、クロロホルム）。実施例20 オクチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-4-O-(4-O-アセチル-2,6-ジ-O-ベンゾイル-β-D- ガラクト-ピラノシル)-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-β- D-グルコピラノシド（23）の調製化合物22（5g）を、4-トルエンスルホン酸（0.2g）を含む、ベンゼンとトリエチルオルト酢酸（110mL）の1:1混合物に溶解し、そしてこの混合物を室温で１時間撹拌した。酸をトリエチルアミンで中和し、混合物をエバポレートして、乾燥した。残渣を80％酢酸水溶液（75mL）に溶解し、室温で40分間撹拌した。酢酸を減圧下でエバポレートし、残りの微量をトルエンとの共蒸発によって除去し、23 （4.7g、91.3％）を得た。[α]_D-4.5°（c、0.8、クロロホルム）、t.l.c．（5: 1酢酸エチル-トルエン）。実施例21 オクチル2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-4-O-(ナトリウム4-O-アセチル-2,6-ジ-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル3-スルフエート)-β-グルコピラノシド（24）の調製乾燥ピリジン（65mL）中の23（4.5g）と三酸化イオウ-ピリジン複合体（4.5g ）との混合物を55〜60℃で約40分間撹拌した。室温まで冷却した後、メタノール（5mL）を加え、混合物を20分間撹拌し、濃縮し、残渣をトルエンと共に共蒸発した。残渣を、シリカゲルカラム（19:1続いて9:1クロロホルム-メタノール）で精製した。生成物に対応する画分のエバポレートの際、このようにして得られた残渣を1:1クロロホルム-メタノールに溶解し、Amberlite IR 120(Na⁺)カチオン交換樹脂を用いて室温で１時間撹拌した。樹脂を濾過し、クロロホルム-メタノールで洗浄し、溶液をエバポレートし、24（3.2g、84.7％）を非結晶性固体として得た；[α]_D+5.3°（c、1.1、クロロホルム-メタノール1:1 v/v）、t.l.c. （9:1クロロホルム-メタノール）。実施例22 オクチルO-α-L-フコピラノシル-(1→3)-O-[ナトリウムβ-D-ガラクトピラノシル3-スルフェート-(1→4)]-β-D-グルコピラノシド（26）の調製触媒量のナトリウムメトキシドを含むメタノール（100mL）中の化合物24（4.4 g）を、45〜50℃で一晩撹拌した（t.l.c．6:2:1酢酸エチル-2-プロパノール-水）。この混合物を室温まで冷却し、Amberlite IR 120(H⁺)カチオン交換樹脂で中和し（pH試験紙）、Amberlite IR 120(Na⁺)カチオン交換樹脂を含むフラスコ内に直接濾過し、室温で45分間撹拌した。樹脂を濾過し、メタノールで洗浄し、濾液および洗浄液を合わせ、濃縮した。ヘキサンを数回に分けて加え、残渣からデカントし、部分的に保護された中間体25（2.7g、90％）を得た；[α]_D -54.1° （c、0.8、メタノール）、t.l.c．（6:2:1酢酸エチル-2-プロパノール-水）；陽イオンLSMIS：995.6（M+Na）⁺、陰イオンLSIMS：949.7（M−Na）。 10％パラジウム炭素（2.6g）を含む、4:1メタノール-水（100mL）中の25（2.6 g）の溶液を、水素雰囲気下で、室温にて一晩撹拌した。この混合物をセライトで、Amberlite IR 120(Na⁺)カチオン交換樹脂上に直接濾過し、固体をメタノール水溶液で徹底的に洗浄した。この混合物を樹脂と共に約１時間撹拌し、濾過し、そして濃縮した。マススペクトロメトリーでこの物質を検討すると、783（M-N a＋Bz）の質量を有するイオンによって示されるように、ベンゾイル基を有する少量の化合物が混入していることが示された。この物質を再び、正確に前述されるようなZemplenトランス-エステル化にかけた。通常のプロセスの後、この物質をシリカゲルカラム（13:6:1クロロホルム-メタノール-水）で精製した。生成物に対応する画分をプールし、濃縮して、残渣を得、これを水に再溶解し、濾過し（0.2μMセルロースアセテートシリンジフィルター）、そして凍結乾燥し、26（ 1.68g、89.8％）を白色の綿毛状固体として得た；[α]_D-58.6°（c、0.7、メタノール）、t.l.c．（13:6:1クロロホルム-メタノール-水）；陰イオンLSIMS：67 9.6(M-Na)^-、701.7(M-H)^-。実施例23 オクチルO-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-2,3,6-トリ-O-ベンゾイル-β-D-グルコピラノシド（27）の調製 19（2.5g、5ミリモル）のピリジン溶液（50mL）を塩化ベンゾイル（4.5mL、37 .5ミリモル）で処理し、この混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を氷水中に注ぎ、ジクロロメタン（３×30mL）で抽出した。合わせた有機層を水、冷5%H₂SO₄ 、冷飽和NaHCO₃、および水で洗浄し、乾燥し、そして濃縮して、シロップを得、これをメタノールから結晶化し、27（4.7g、91.6％）を得た；融点156〜157℃； [α]_D+40.5°（c、1.3、クロロホルム）、t.l.c．（8.5:1.５トルエン-酢酸エチル）。実施例24 オクチルO-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-ベンゾイル-β-グルコピラノシド（28）の調製化合物27（4.5g）のクロロホルム溶液（200mL）をトリフルオロ酢酸（25mL）および水（３mL）で処理し、この混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を氷冷した飽和NaHCO₃および水て洗浄し、乾燥し、そして濃縮して、非結晶性の28（4. 15g、96％）を得た；[α]_D+38.6°（c、1.6、クロロホルム）、t.l.c．（4:1トルエン-酢酸エチル）。実施例25 オクチルO-(4-O-アセチル-2,6-ジ-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル-(1→ 4)-2,3,6-トリ-O-ベンゾイル-β-D-グルコピラノシド（29）の調製 4-トルエンスルホン酸（200mg）を含む、ベンゼンとトリエチルオルト酢酸との1:1混合物（100mL）中の28（4g）の溶液を、室温で１時間撹拌した。酸をトリエチルアミンで中和し、混合物を濃縮し、80％酢酸水溶液に溶解し、そして室温で40分間撹拌した。酢酸を減圧下でエバポレートし、トルエンと共に共蒸発し、29 （4g、95.9％）を得た；[α]_D+17.85°（c、1.35、クロロホルム）。実施例26 オクチル4-O-（ナトリウムβ-D-ガラクトピラノシル3-スルフェート）-β-グルコピラノシド（31）の調製ピリジン（60mL）中の29（3.8g）と三酸化イオウ-ピリジン複合体（3.8g）との混合物を、55〜60℃で約40分間撹拌した。この混合物を室温まで冷却し、メタノール（5mL）を加え、混合物を室温で20分間撹拌した。これを濃縮し、トルエンと共に共蒸発した。残渣をシリカゲルカラム（19:1および9:1（v/v）クロロホルムーメタノール）で精製し、30（3.5g、83.3％）を得た；陰イオンLSIMS：109 5.2(M-Na)^-。化合物30を、触媒量のナトリウムメトキシドを含むメタノール（100mL）に溶解し、そしてこの混合物を約45〜50℃で一晩撹拌した。通常の方法のプロセスの後、残渣をシリカゲルカラム（13:6:1クロロホルム-メタノール-水）で精製し、31 （1.65g、94.8％）を得た；[α]_D-4.5°（c、1.5、メタノール）；陰イオンLS IMS：533.4（M＋Na)^-、555.4(M−H)^-。実施例27 ラクトース誘導体のセレクチンリガンド特性化合物13a、13b、26および31を、Ｅ、ＬおよびＰセレクチンに結合する能力について試験した。使用したELISAアッセイは、2,3sLex糖脂質を１ウェル当たり25 ピコモルで、ミクロタイターウェル上にエバポレートし、次いで過剰分を水で洗い流す工程からなる。このウェルは、室温で１時間5%BSAで保護され、次いで1mM Caを含むPBSで洗浄する。プレートを保護する一方、ビオチンで標識したヤギの F(ab')₂IgG（Fc特異的）および1% SA-PBS（1mM Ca）中で1:1500に希釈されたストレプトアビジン-アルカリホスファターゼを、200ng/mLでＥ、ＬまたはＰセレクチンIgGキメラ（L91-10）のいずれかと合わせ、37℃で15分間インキュベートし、複合体を形成する。これは、可溶性の「多価」レセプターを提供する。化合物13aおよび13bを1.5〜5.0mMの範囲の最終濃度で、可溶性のレセプターに加え、 37℃で45分間反応させた。次いで、この溶液を保護された後で洗浄されたミクロタイターウェル内に置き、このプレートを37℃で45分間インキュベートし、公知の天然のリガンド、2,3sLex糖脂質に結合させた。陽性のコントロールは、ミクロタイターウェルにエバポレートされたリガンドのみと反応した可溶性の「多価」レセプターによって生産されるシグナルであった。これは、「100％結合」と考えられた。以前インヒビターと反応したレセプターによって生産されたシグナルを、陽性のコントロールによって生産されたシグナルで割り、100を掛け、インヒビターの存在下で結合したレセプターの％を計算した。これの逆数が％阻害である。表１から、化合物13a、13bおよび26がEセレクチンの2,3sLex糖脂質への結合を阻害することは明らかである。試験した３つの濃度では、13bが5mMの濃度で明らかに最も大きな差異を有するより優れたインヒビターであった。この濃度で、13 b は、13aの48％に比較して82.5％の阻害を示した。表２から、13aおよび13bの両化合物もまた、Ｌセレクチンの2,3sLex糖脂質への結合を阻害することは明らかである。しかし、ここでの差異は、Ｅセレクチンへの結合に対する阻害の％における差異よりもかなり大きかった。例えば、1.25 mMで、13bは、驚くことに90％阻害を示した。2mMおよび5mMでは、100％阻害を観察した。著しく対照的に、13bは1.25mMでは13％阻害しか示さす、5mMでは47％の最大阻害を示した。化合物26は、試験したすべての濃度で30％阻害を示した。化合物31は、Ｅ-およびＬ-セレクチンのsLexへの結合の阻害において不活性である。表３は、化合物26がＰ-セレクチン（Ｌ−セレクチンと比較して）の2,3sLex糖脂質への結合のより優れたインヒビターであることを示している。実施例28 急性肺損傷アッセイ酸吸入損傷に続く肺内皮および肺胞上皮への好中球依存性損傷を減少させる能力において、化合物13bまたは31の有効性を決定するために、実験を行った。ニュージーランド白色ウサギの雌（群当たり各１匹、各々約２KG）にハロタンで麻酔をかけ、酸素を補充した陽圧換気で換気した。血管カテーテルを頸動脈において、内頸動脈につなげて配し、陽圧換気のために気管切開を行った。低pH溶液（HCl、pH 1.5）を、乳酸加リンガー液（浸透圧＝約100）中で3ml/kgの用量で気管内に点滴注入し、胃吸入によって誘導される肺の損傷を刺激した。低pH溶液の気管内点滴注入を行う５分前に、化合物13bまたは31を注射した（10mg/kg/時間静脈内）。この点滴注入は、１時間毎の注射を行うことにより実験の終わりまで続けた。適切なコントロールを用いた。血管内および肺胞内の放射性標識タンパク質トレーサーを、肺内皮および肺胞上皮のタンパク質透過性を定量するために注射した。動脈血中ガス、体血圧、および気道をモニターした。６時間後に肺を摘出し、エアスペース（airspace）中の天然タンパク質の濃度および放射性標識タンパク質の濃度を測定するために、両肺から肺胞液をサンプリングし、肺血管および肺上皮の透過性を計算した。また、肺のエアスペース内に存在する好中球数を計数するために、一方の肺を洗浄した。洗浄しなかった肺で、血管外の肺の水分の測定を行った。この肺の選択部分から、組織試料を採取した。化合物13bまたは31のどちらかで処理した動物は、コントロールの動物と比較して、肺胞の動脈血酸素勾配の減少を示した。図１および２は、急性肺損傷モデルのウサギに対する化合物13bおよび31それぞれの効果を示す。化合物31（実施例27を参照）は、Ｅ-セレクチンおよびＬ-セレクチンのsLexへの結合の阻害において、インビトロで不活性であったが、急性肺損傷モデルにおいて、酸吸入損傷に続く肺内皮および肺胞上皮への好中球依存性損傷を効果的に減少させたことは注目すべきである。化合物31はインビボでフコシル化され、それによって急性肺損傷モデルにおける化合物31の正の活性を説明することが可能である。実施例29 再灌流損傷アッセイウサギの分離した心臓におけるヒト好中球の接着の減少における化合物13bの有効性を決定するために実験を行った。ヒト血漿をウサギの分離した心臓に加えると、血漿内に見出される補体成分が活性化し、これが次に好中球の蓄積の増加を促進する。このモデルは、補体によって誘導される好中球の接着を阻害するラクトース誘導体の効果を決定するために使用される。ニュージーランド白色ウサギ由来の心臓を切除し、改変されたLangendorff装置に取り付け、Krebs-Heinseleit緩衝液で灌流した。心臓の機能的パラメーターを、Grass Model 79Dポリグラフ機械でモニターした。4%の通常ヒト血漿（NHP）を、再循環緩衝液に加えた。血漿の添加10分後、13b（0.1mg/ml）を灌流液に加えた。血漿を用いた灌流の15分後、51-クロムで標識したヒト好中球（１×10⁵/m l）を灌流液に加え、さらに15分間再循環させた。この時間の終わりに、心臓を新鮮な緩衝液で洗浄して非特異的に結合した好中球を除去し、乾燥し、ウェルタイプのガンマカウンターで計数した。0.001、0.01、および0.1mg/mlの濃度を用いて、濃度応答曲線を作成した。６つの心臓をこれらの濃度のそれぞれで用いた。表４は、好中球の蓄積の阻害％として表した結果を記載する。濃度-応答研究の結果を、図３に示す。これらの結果は、放射性標識ヒト好中球数/心臓の乾燥重量のmgとして表される。化合物13bの0.001mg/mlの濃度で見られる好中球の数が、コントロールの数と同様であることは注目すべきである。化合物13bは、濃度依存様式で好中球の接着を阻害し、0.1mg/mlの用量を用いるとき最も有意な阻害度が生じた。これらのデータは、化合物13bがこのモデルにおいて好中球の接着を減少させることに成功した証拠を提供する。Ｐ-セレクチンに由来する多くのペプチドおよびＰ-セレクチンに対する抗体およびCD11b/CD18複合体（Ma,Xin-liangら、Circulation（1 993）88-2:649）を含む、薬理学的物質を用いて見られる最大阻害度が40％であったことも注目すべきである。化合物13bは、今まで試験されたいかなる薬理学的物質にも類似の阻害度を提供する。上記の結果に基づき、本発明の化合物が、疾患、好ましくは炎症成分を有する疾患、成人呼吸促進症候群（ARDS）、虚血、ならびに発作、腸間膜血管疾患および末梢血管疾患、臓器移植、および循環性ショック（この場合、多くの器官は血流の回復後、損傷を受け得る）を包含する再灌流損傷を治療するのに有用であることは明らかである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/70 ＡＤＵＡ６１Ｋ 31/70 ＡＤＵＣ０７Ｈ 17/04 8615−4ＣＣ０７Ｈ 17/04 (72)発明者アサ，ダーウィンアメリカ合衆国ミシガン 49053，ゲイレスバーグ，サウス 35ティーエイチ 3608 (72)発明者ムッサー，ジョンエイチ. アメリカ合衆国カリフォルニア 94070, サンカルロス，マイケルコート 23 (72)発明者ナッシュド，ミナエイ. アメリカ合衆国カリフォルニア 94501, アラメダ，ナンバー３，セントラルアベニュー 600

Claims

【特許請求の範囲】１．下式の化合物およびその塩：ここで、R¹は、それぞれ独立して、Hまたは低級アルキル（1-4C）であり； R²は、高級アルキル基(5-15C)であり； R³は、-SO₃ ^1-および-PO₃ ^1-よりなる群から選択される負に荷電した部分であり； Yは、H、OH、または低級アルキル（1-4C）であり；そして Xは、H、-CHR⁴(CHOR¹)₂CHR⁵OR¹、ここでR⁴およびR⁵はそれぞれ独立してHまたは低級アルキル(l-4C)であり、 6-メチル-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-アセチル-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-プロピルアミド-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-プロピルアミド-2,3,4-トリメトキシピラン-2-イル、 6-エチル-2,3-ジヒドロキシ-4-メトキシピラン-2-イル、 6-N-エチルアミノ-2-ヒドロキシ-3,4-エトキシピラン-2-イル、 3,4,5-トリ-n-プロピルオキシピラン-2-イル、 3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 2,3,4-トリメトキシフラン-2-イル、 2,3-ジヒドロキシ-4-メトキシフラン-2-イル、 2-ヒドロキシ-3,4-エトキシフラン-2-イル、 3,4,5-トリ-n-プロピルオキシフラン-2-イル、 3,4,5-トリヒドロキシフラン-2-イル、または2,3,4-トリヒドロキシベンゾイルである。２．すべてのR¹がHである、請求項１に記載の化合物。３．R³が-SO₃ ^1-である、請求項１に記載の化合物。４．R²が-CH₂(CH₂)₆CH₃である、請求項１に記載の化合物。５．YがHまたはOHである、請求項１に記載の化合物。６．Xが、-CH₂(CHOH)₃H、2,3,4-トリヒドロキシベンゾイル、3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、3,4,5-トリヒドロキシフラン-2-イル、3,4,5-トリメトキシピラン-2-イル、または3,4,5-トリメトキシフラン-2-イルである、請求項１に記載の化合物。７．R⁴およびR⁵のうち一方がHであり、そして他方がH、低級アルキル（1-4C）またはフェニルである、請求項１に記載の化合物。８．R⁴またはR⁵のうち一方がメチル基である、請求項７に記載の化合物。９．R⁴およびR⁵が共にHである、請求項７に記載の化合物。１０．R³が-SO₃ ^1-であり、そしてXがフコシル残基である、請求項１に記載の化合物。１１．すべてのR¹がHであり、R³がSO₃ ^1-であり、そしてXがフコシル残基である、請求項１に記載の化合物。１２．すべてのR¹がHであり、R²が-CH₂(CH₂)₆CH₃であり、R³がSO₃ ^1-であり、そしてXがフコシル残基である、請求項１に記載の化合物。１３．すべてのR¹がHであり、R²が-CH₂(CH₂)₆CH₃であり、R³がSO₃ ^1-であり、そしてXがHである、請求項１に記載の化合物。１４．ラクトース誘導体を合成する方法であって、下式の化合物：ここで、R⁶は、それぞれ独立して、H、低級アルキル(1-4C)、または保護基であり；ここで、Y¹は、H、OH、OR⁶OOCR⁶、またはSR⁶であり；ここで、少なくとも１つのR⁶は、置換されるべき位置にあり、そして、多くても１つの近接したR⁶はHであり、そしてその他の全てのR⁶は保護基であり；ここで、R⁷は高級アルキル基(5-15C)であり；を求電子試薬供与部分と接触して生成物を得る工程を包含し、ここで該求電子試薬は、置換されるべき位置で、OHのHに対して置換される、方法。１５．前記式の化合物が、オクチル-6-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル )-4-O-(6-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド；オクチル-6-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-d-L-フコピラノシル）-4-O-(6-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデンβ-D-ガラクトピラノシル)-β -D-グルコピラノシド；オクチル-3-O-(2,3,-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-4-O-(3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド；オクチル-2,6-ジ-O-ベンゾイル-3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド；オクチル-2,6-ジ-O-ベンゾイル-4-O-(2,6-ジ-O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-β-D-グルコピラノシド；およびオクチル-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-α-L-フコピラノシル)-(1-3-[O-(2,6-ジ -O-ベンゾイル-3,4-O-イソプロピリデン-β-D-ガラクトピラノシル)-(1-4)]-2,6 -ジ-O-ベンゾイル-β-D-グルコピラノシドよりなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。１６．請求項１に記載の化合物を含有する、薬学的組成物。１７．治療を必要とする患者における疾患の治療方法であって、該患者に治療有効量の以下の構造式を有する化合物およびその塩を投与する工程を包含し、ここで、R¹は、それぞれ独立してHまたは低級アルキル基(1-4C)であり； R²は、高級アルキル基(5-15C)であり； R³は-SO₃ ^1-および-PO₃ ^1-よりなる群から選択される負に荷電された部分であり； Yは、H、OH、または低級アルキル(1-4C)であり；そして Xは、H、-CHR⁴(CHOR¹)₂CHR₅OR¹、ここで、R⁴およびR⁵は、それぞれ独立してH または低級アルキル(1-4)であり、 6-メチル-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-アセチル-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-プロピルアミド-3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 6-プロピルアミド-2,3,4-トリメトキシピラン-2-イル、 6-エチル-2,3-ジヒドロキシ-4-メトキシピラン-2-イル、 6-N-エチルアミノ-2-ヒドロキシ-3,4-エトキシピラン-2-イル、 3,4,5-トリ-n-プロピルオキシピラン-2-イル、 3,4,5-トリヒドロキシピラン-2-イル、 2,3,4-トリメトキシフラン-2-イル、 2,3-ジヒドロキシ-4-メトキシフラン-2-イル、 2-ヒドロキシ-3,4-エトキシフラン-2-イル、 3,4,5-トリ-n-プロピルオキシフラン-2-イル、 3,4,5-トリヒドロキシフラン-2-イル、または2,3,4-トリヒドロキシベンゾイルである、方法。１８．前記疾患が、炎症、自己免疫疾患、リウマチ様関節炎、虚血および再灌流損傷、発作、およびガンよりなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。