JPH0977657A - 薬物の遅延放出型マイクロスフイア - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 投与の所定期間経過後に薬物の主要量を放出
できるマイクロスフィアの提供。 【解決手段】 薬物を含む水性相と生体内分解性重合体
を含む油性相とから乳化処理によりＷ／Ｏ型エマルショ
ンを得、次いでこのエマルションを、さらなる連続相を
形成する水性相と混合撹拌してＷ／Ｏ／Ｗ型のエマルシ
ョンを形成することにより製造できるマイクロスフィ
ア。特に、脳内への埋め込みに適する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、薬物を所定期間後
に放出するマイクロスフィアに関し、特に、脳血管攣縮
を抑制するための脳内埋め込み用に向けられるマイクロ
スフィアに関する。

【０００２】

【従来の技術】薬剤の長期間にわたる徐放性を目的とし
たマイクロカプセルまたはマイクロスフィアとして、各
種担体や高分子マトリックスに薬物を担持させた多種多
様なものが提案されている。

【０００３】例えば、それらの調製法の代表的なものと
しては、特開昭６２−２０１８１６号公報に記載される
ようなＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの形成を経るものや、
さらにこれらの調製法に随伴する短所、例えば薬物の高
分子マトリックスへの取り込み率の低さやマイクロスフ
ィアからの薬物の初期バースト等を改善することを目的
としたものが提案されている（特開平６−１４５０４６
号公報、同６−３２７３２号公報参照）。

【０００４】しかし、これらは共通して、担体からの薬
物の長期間にわたる定常的な放出を目的とし、またその
ような放出に成功した例を公表している。

【０００５】一方、特殊な疾患の治療を目的に特定器官
への埋め込み用の徐放性製剤も提案されている。このよ
うな製剤の具体的なものとしては、特願平６−５０９５
３号明細書に記載されるような水溶性高分子と油脂と脂
肪酸等の複合体を担体とし、脳血管攣縮を抑制するため
の製剤が提案されており、そして薬物放出のタイミング
が調節できることも示唆している。

【０００６】すなわち、脳動脈瘤破裂の所定期間後にみ
られる脳血管の異常収縮を随伴する脳血管攣縮を初めと
する疾患は、それらの効果的な予防または治療を行うに
は、単に定常的な薬剤の放出性を有するよりは、その放
出のタイミングを調節することも重要である。例えば、
前記脳血管攣縮では、脳動脈瘤の破裂後２４時間以内に
みられる早期攣縮と、４日〜２週間後にみられる遅発性
攣縮とがあるが、臨床上問題となるのは、特に遅発性攣
縮であると考えられている。

【０００７】このような背景の下では、特に、前記特願
平６−５０９５３号明細書に記載されるような、薬物放
出のタイミングが調節できる、すなわち薬物の主要量を
一定期間の経過後に集中して放出できる（本明細書では
「薬物の遅延放出型」という）製剤を提出する意義があ
る。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】前述のとおり、薬物の
遅延放出型の製剤は、既に提供されているものの、この
ような放出様式をもつさらに改良された製剤または薬物
送達システムの提供に対する要望は依然として存在す
る。したがって本発明は、定常的な薬物の放出よりは、
むしろ所定期間の経過後に集中して薬物を放出しうる遅
延放出型のデリバリー系を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、生体に対
する親和性や副作用の少ない点との観点から、α−ヒド
ロキシカルボン酸重合体を薬物担持マトリックスとして
使用し、しかも薬物の遅延放出型の送達システムが提供
可能であるか否かについて検討してきた。その結果、以
外なことに、本発明者らは重合体そのものはインビボ
（in vivo）で放物線形の分解性を示すが、一定の生体
内分解性α−ヒドロキシカルボン酸重合体を油性相と
し、薬物を水性相として乳化処理によりＷ／Ｏ型のエマ
ルションを形成する工程を経る、いわゆる液中乾燥Ｗ／
Ｏ／Ｗ型法により調製することのできるマイクロスフィ
アは、前述のような薬物の遅延放出挙動を示すことを見
い出した。

【００１０】したがって、前記課題を解決するための一
手段として、本発明は、（Ａ） 薬物を含む水性溶液と
生体内分解性α−ヒドロキシカルボン酸重合体を含む水
非混和性溶液とを乳化処理してＷ／Ｏ型のエマルション
を形成する工程、ならびに（Ｂ） 工程（Ａ）で得られ
たエマルションを水性溶液中で乳化処理してＷ／Ｏ／Ｗ
型のエマルションを形成する工程を介して得ることがで
きる薬物の遅延放出型マイクロスフィアを提供する。

【００１１】また、本発明では、脳内埋め込み用とする
前記マイクロスフィア、特に、脳血管攣縮を抑制するた
めの脳内埋め込み用の前記マイクロスフィアを提供す
る。

【００１２】本発明のマイクロスフィアは、仮りに、使
用するα−ヒドロキシカルボン酸重合体そのものが、生
体内で放物線形の分解性を示す場合であっても、薬物の
放出は初期バーストを伴うことなく、一定期間の経過後
から薬物の必要量を放出し始めるという特異な作用効果
を発揮する。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明に従うマイクロスフィアを
製造するための薬物を含む水性溶液は、薬物を単に滅菌
精製水に溶解して調製することができる。また、この溶
液に薬物の溶液内安定性を高めるために、緩衝剤（例え
ば、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤等）、浸透圧調整剤
（例えば、グルコース、ラクトース、マンニトール、ソ
ルビトール等の糖類、塩化ナトリウム等の無機塩）、ゼ
ラチン、アルギニン、アラビアゴム等の水溶性高分子を
加えて水性溶液を調製してもよい。

【００１４】かかる水性溶液に含められる薬物は、本発
明の目的に沿うものであれば、いずれの種類または生理
活性を示すものであってもよい。本発明での使用を意図
している具体的な薬物を例示すれば、アドレナリン、ア
ブシジン酸、アルギニンバソトシン、アンギオテンシノ
ーゲン、アンギオテンシン、アンギオテンシンＩ変換酵
素、胃液抑制ポリペプチド、インシュリン、インシュリ
ン様成長因子、Ｓ因子、エリスロポエチン、黄体形成ホ
ルモン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、黄体ホルモ
ン、オキシトシン、２−オクチル−γ−ブロモアセトア
セテート、オータコイド、ガストリン、ガストリン分泌
促進ペプチド、ガストロン、活性型ビタミンＤ₃、カリ
ジン、カルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド
（ＣＧＲＰ）、マキサディラン類、キニノーゲン、胸腺
ホルモン、グルカゴン、グルココルチコイド、血管作用
性小腸ペプチド、血漿カリクレイン、血清因子、血糖上
昇ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン
放出ホルモン、甲状腺ホルモン、黒色素胞刺激ホルモ
ン、黒色素胞刺激ホルモン放出ホルモン、黒色素胞刺激
ホルモン放出抑制ホルモン、コルチコトロピン様中葉ペ
プチド、ウロキナーゼ、コレシストキニンオクタペプチ
ド、コレシストキニンテトラペプチド、コレシストキニ
ンバリアント、コレシストキニン−１２、コレシストキ
ニンパンクレオチミン、コレシストキニン、細胞増殖因
子、サブスタンスＰ、雌性ホルモン、脂肪動員ホルモ
ン、繊毛膜性生殖腺刺激ホルモン、神経成長因子、膵ポ
リペプチド、生殖巣刺激物質、生殖腺刺激ホルモン、成
長ホルモン、成長ホルモン放出因子、セクレチン、セル
レイン、セロトニン、腺維芽細胞成長因子、腺性カリク
レイン、ソマトスタチン、ソマトメジンＡ、Ｂ、体色黒
化・赤化ホルモン、胎盤性ラクトゲン、チモシン、チモ
ポイエチン、チログロブリン、トラウマチン酸、内皮細
胞成長因子、軟体動物性心臓興奮性神経ペプチド、ニュ
ーロテンシン、妊馬血清性生殖腺刺激ホルモン、脳ホル
モン、ノルアドレナリン、バソプレッシン、発情ホルモ
ン、ヒスタミン、表皮細胞成長因子、副甲状腺ホルモ
ン、副甲状腺刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出
因子、副腎皮質ホルモン、ＰＡＣＡＰ、ブラジキニン、
ブラジキニン様ペプチド、プロインシュリン、プロオピ
オメラノコルチン、プロスタグランジン、プロＰＴＨ、
プロラクチン、プロラクチン放出ホルモン、プロラクチ
ン放出抑制ホルモン、フロリゲン、閉経婦人尿生殖腺刺
激ホルモン、ボンベジン、マキサディラン、ミネラルコ
ルチコイド、明順応ホルモン、メチオニルリジルブラジ
キニン、１−メチルアデニン、メラトニン、モチリン、
雄性ホルモン、利尿ホルモン、リポトロピン、レニン、
レラクシン、濾胞成熟ホルモン等が挙げられる。

【００１５】本発明の目的との関連上、特に使用を意図
する薬物としては、脳血管攣縮抑制作用をもつもの、Ｃ
ＧＲＰ、マキサディラン類、デフェロキサミン、メチル
プレドニソロン、ニコランジル、ニカラベン、硫酸マグ
ネシウム、アクチノマイシンＤ、２１−アミノステロイ
ド、イソプロテレノール、ｔＰＡ、ウロキナーゼニモジ
ピン、ヒドロコルチゾン、ニカルジピン、ニフェジピ
ン、ジルチアゼム、ジルアゼプ、テプロチド、ＡＡ８６
１、バパベリン、ＯＫＹ１５８１、アミルニトリット
（Amyl nitrite）、エリスリチルテトラニトレート（Er
ythrityl tetranitrate）、イソソルビドジニトレート
（Isosorbide dinitrate）、ニトログリセリン、ペンタ
エリスリトールテトロニトレート（Pentaerythritol te
tronitrate）、ＶＩＰ、バソプレッシン、ブラジキン、
ＰＡＣＡＰ、ＳＯＤ、カタラーゼ、ベプリジル（Beprid
il）、ナドロロール（Nadololol）、フェロジピン（Fel
odipine）、イスラジピン（Isradipine）、ベラパミル
（Verapamil）、アテノロール（Atenolol）、メトプロ
ロール（Metoprolol）、プロプラノロール（Propranolo
l）等が挙げられる。

【００１６】さらに、本発明での使用を強く意図してい
る薬物としては、ＣＧＲＰおよびマキサディラン類が挙
げられる。これらのペプチド（またはタンパク質）は、
本発明に従うマイクロスフィアに調製した場合、使用す
るα−ヒドロキシカルボン酸重合体の生体内分解性と薬
物自体の体液への溶解性と相俟って、本発明の目的とす
る特異な放出挙動をもたらす上で、有利に使用できる。
なお、本発明に使用するマキサディラン類とは、例えば
E. A. Lerner ら、J. Bio. Chem., ２６７，１０６２
−１０６６ページ（１９９２）に記載されるスナバエ
（Lutzomyia longipalpic）の唾液腺に存在するタンパ
ク質や国際公開第９５／０４８２９号パンフレットに記
載されるような類縁のタンパク質を意味する。

【００１７】水性溶液中の薬物濃度は、使用する薬物の
種類、処置対象の疾患の種類および症状によって左右さ
れるので限定できないが、使用時にマイクロスフィアか
らの過剰な初期放出（バースト）を引き起さない濃度で
使用するのが好ましい。限定されるものでないが、ＣＧ
ＲＰを使用する場合には、通常、１×１０^-8〜１００ｍ
ｇ／ｌ、好ましくは１×１０^-5〜１ｍｇ／ｌとするのが
よい。

【００１８】本発明のマイクロスフィアのポリマーマト
リックスを形成するのに使用する生体内分解性α−ヒド
ロキシカルボン酸重合体としては、例えば、グリコール
酸、乳酸、２−ヒドロキシ酪酸、２−ヒドロキシ吉草
酸、２−ヒドロキシ−３−メチル酪酸、などの１種から
誘導される単独重合体またはこれらの２種以上から誘導
される共重合体が挙げられる。これらのうち、乳酸の単
独重合体、乳酸とグリコール酸の共重合体は、薬物を担
持するためのポリマーマトリックスとしての特性がよく
調べられており、多種多様な重合度のものが市販品とし
ても入手できることから都合よく使用することができ
る。市販品としても提供されているが、単量体としての
乳酸は、Ｄ−体、Ｌ−体またはいずれかの比率でＤ−体
とＬ−体を含む混合物を使用したものであってもよい。

【００１９】本発明の目的上、限定されるものではない
が、薬物としてＣＧＲＰを選択する場合、特に、Ｌ−乳
酸とグリコール酸とのモル比が７：３〜３：７の組み合
わせからなる単量体から製造され、ゲルパーミエーショ
ンクロマトグラフイー法（ＧＰＣ）で測定した場合に約
４,０００〜１１,０００の分子量をもつ共重合体を好ま
しく使用することができる。

【００２０】以上のような重合体を含む水非混合性溶液
は、通常、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタ
ン等のハロゲン化炭化水素に重合体を溶解することによ
り調製するが、溶媒の蒸発が容易であることから塩化メ
チレンを使用して調製することが好ましい。溶液中の重
合体濃度は、一般には１０〜１００重量／重量％、好ま
しくは５０〜８０重量／重量％とするのがよい。

【００２１】本発明によれば、上記薬物を含む水性溶液
と水非混和性の重合体溶液を乳化処理にかける。この処
理は、Ｗ／Ｏ型のエマルションを形成する油滴の大きさ
が、それらの平均直径として約０．５μｍ〜５μｍのも
のを多く含むような条件下で行うのが好ましい。小さす
ぎるものは所望の遅延放出挙動を示さない場合があり、
また大きすぎるものは、油滴の安定性が低い場合がある
からである。

【００２２】乳化方法として、例えば超音波を照射する
場合には、混合系を氷冷下で、市販の超音波ホモジナイ
ザー（例えば、Sonifier−２５０；ＢＲＡＮＳＯＮ社
製）を使用して１分〜数分間行えばよい。また、超音波
の照射は、機械的撹拌と同時に行ってもよい。この際の
機械的撹拌は、約１０,０００ｒｐｍ以上の撹拌速度で
行うことが良好な結果をもたらすであろう。

【００２３】なお、この乳化操作を行うに際し、Ｗ／Ｏ
型エマルションの安定化に寄与する界面活性剤および水
溶性高分子から選ばれる１種以上を混合系に加えてもよ
い。加えることのできる界面活性剤としては、オレイン
酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウムおよびラウリル
硫酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル等の非イオン界面活性
剤が、そして水溶性高分子としては、ポリビニールアル
コール、ポリビニールピロリドン、カルボキシメチルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルセルロースおよびゼラチ
ン等を挙げることができる。これらを使用する場合に
は、０.０１〜１０（重量／重量）％水溶液となるよう
な濃度で使用するのがよい。

【００２４】以上の方法に従って調製したＷ／Ｏ型エマ
ルションを用い、次に、外水性相として水性溶液中で乳
化処理し、Ｗ／Ｏ／Ｗ型のエマルションを形成する。こ
の外水性相には、特に、前述のエマルション安定化剤を
前記濃度で添加することが好ましい。この乳化操作は、
室温下で、強力撹拌（例えば、約１０,０００ｒｐｍ以
上の撹拌速度）下に数分行うと、重合体用の溶媒に塩化
メチレンを使用した場合には、その溶媒を水中蒸発する
ことができ、水中にポリマーマトリックス中に薬物を含
むマイクロスフィアが形成する。なお、溶媒の蒸発を促
進するために、前記操作を減圧下で行ってもよい。

【００２５】さらに必要により、より弱い撹拌（例え
ば、約５００ｒｐｍ）下で数時間撹拌してマイクロスフ
ィアを安定化した後、沈降（もしくは遠心）または濾過
によりマイクロスフィアを分離・洗浄し、次いで減圧乾
燥または凍結乾燥することにより本発明に従うマイクロ
スフィアを得ることができる。また、これらのマイクロ
スフィアは場合により、篩い分けることにより分級して
もよい。

【００２６】こうして得られるマイクロスフィアは、薬
物の初期バーストを伴うことなく、体液または模擬体液
［例えば、ハルトマン液（ミドリ十字社製）］への遅延
放出挙動を示す。例えば、薬物としてＣＧＲＰを用い、
乳酸−グリコール酸の共重合体［乳酸：グリコール酸の
モル比（７／３〜３／７）、ＧＰＣ測定による分子量約
４,０００〜１１,０００］を重合体として用いた、本発
明に従うマイクロスフィアは、模擬体液に対し、３７℃
で数日から１０数日目に薬物の主要放出を示し、また実
験動物の脳内へ埋め込んだ場合には、２〜８日後に薬物
の主要放出を示す。以上のような放出挙動を示すマイク
ロスフィアとしては粒径が約３０μｍ〜３００μｍのも
のが好ましい。

【００２７】このような薬物放出のタイミングは、一般
的に、共重合体を製造するのに用いる乳酸含有比を高め
ることにより遅延させることができ、当業者は、使用す
る薬物に応じて、小実験を繰り返すことで、所望の薬物
放出タイミングをもつマイクロスフィアを調製すること
ができるであろう。

【００２８】本発明に従うマイクロスフィアは、そのま
ま脳内埋め込み、もしくは経口投与剤として、あるいは
それらの懸濁液を注射剤として使用できる。投与経路に
応じて、さらに他の剤形へ導くこともできる。例えば、
脳内埋め込み剤としては、脳内埋め込みに支障をきたさ
ない大きさ（例えば、厚さが５ｍｍ以下で、内筒状の場
合、その直径が８ｍｍ以下）の錠剤に成形することがで
きる。錠剤の成形は、それ自体既知の方法に従い、賦形
剤として、乳糖、結晶セルロース、トウモロコシデンプ
ン等のデンプン類、その他、常用されている崩壊剤（例
えば、カルボキシメチルデンプンナトリウム、カルボキ
シメチルセルロースカルシウム等）、結合剤（例えば、
ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム、デキス
トリン、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロー
ス、ポリビニルピロリドン等）または滑沢剤（例えば、
タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリ
コール６０００等）を用いて成形することができる。

【００２９】

【実施例】以下、本発明をより具体的に説明する目的
で、薬物としてＣＧＲＰを用いた具体例を示す。

【００３０】薬物の放出試験例１：マイクロスフィアの製造 ＣＧＲＰ６ｍｇを注射用蒸留水０.５ｍｌに溶解させ
た。一方、Ｌ−乳酸−グリコール酸（モル比：１：１）
から製造された共重合体［ＧＰＣ測定による分子量：約
４,５００；国産化学株式会社より市販されているＰＬ
Ｇ１６００ＭＬに相当］１０ｇを塩化メチレン１０ｇに
溶解させた。それぞれ得られた溶液を混合し、氷冷下で
混合液を超音波ホモジナイザー［Sonifier−２５０（Ｂ
ＲＡＮＳＯＮ社製）］を用い１分間処理し、Ｗ／Ｏ型エ
マルションを形成した。

【００３１】別に調製した０.１（重量／重量）％のポ
リビニルアルコール水溶液２５００ｍｌ中へ前記エマル
ションを移し、氷冷下（約１５℃）、約１０,０００ｒ
ｐｍ［ホモジナイザーＤ−７８０１（Ｙｓｔｒａｌ Ｇ
ｍｂＨ社製）］で５分間撹拌混合してＷ／Ｏ／Ｗ型のエ
マルションを形成し、さらに、室温（約２５℃）で、約
５００ｒｐｍ［スリーワンモーター（新東科学株式会社
製）］で３時間撹拌した。遠心して上清を捨てた後、
０.４μｍの細孔径をもつメンブランフィルター（ミリ
ポア社製）上で、蒸留水を用いマイクロスフィアを洗浄
した。得られた洗浄済みマイクロスフィアを真空乾燥器
中（室温）で減圧下に４８時間乾燥した。これらのマイ
クロスフィアは、主として粒径が約４０μｍ〜１００μ
ｍを有するものであり、総重量５ｇであった。

【００３２】これらは、マイクロスフィア６０ｍｇ当
り、ＣＧＲＰ３６μｇを含んでいた（以下、ＭＳ−１６
という）。

【００３３】これらを、ステンレス製標準ふるいを用い
て分級したところ、平均粒径が、１５０μｍを超えるも
の（以下、ＭＳ−１６（Ｌ）という）が１５％、１５０
〜３２μｍのもの（以下、ＭＳ−１６（Ｍ）という）が
５３％、３２μｍ未満のもの（以下、ＭＳ−１６（Ｓ）
という）が３２％であった。これらの電子顕微鏡写真を
図１にまとめて示す。

【００３４】例２：マイクロスフィアからの錠剤の成型 例１で得られたＭＳ−１６の６０ｍｇをヒドロキシプロ
ピルセルロース１．８ｍｇおよびステアリン酸マグネシ
ウム０．６ｍｇと十分に混合した後、コレクトＣｏｒｒ
ｅｃｔ Ｎ−３０Ｅ型単発打錠機（岡田精工株式会社
製）で加圧成型した（６ｍｍφ×２ｍｍ）。

【００３５】薬物の放出試験 （１） インビトロ（in vitro）試験 ハルトマン液（ミドリ十字株式会社製）５ｍｌを１５ｍ
ｌ容のチューブに無菌的に入れ、次いで、例１で得たＭ
Ｓ−１６（Ｌ）、ＭＳ−１６（Ｍ）およびＭＳ−１６
（Ｓ）を、それぞれ６０ｍｇずつ、各チューブに無菌的
に入れた。３７℃で静置し、ハルトマン液に放出される
ＣＧＲＰの量を、０時間、１日〜１４日目に経日でそれ
ぞれサンプリングして、高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）で定量した。放出量を経時的にプロット
し、薬物の放出パターンを示すグラフを、それぞれ図
２、３および４に示す。

【００３６】なお、ＨＰＬＣの条件は、次のとおりであ
った： 移動相： Ａ液：０．１％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）水溶液 Ｂ液：０．０８５％ＴＦＡ／ＣＨ₃ＣＮ溶液 ２０％Ｂ液を２０分間で６０％となるように直線的に濃
度勾配をかける。

【００３７】カラム：カプセルパックＣ₈ＳＧ３００
（株式会社資生堂：６ｍｍφ×３５ｍｍ） 流速：１．５ｌ／ｍｉｎ 検出：２１４ｎｍ それぞれの図からみられるように、特に、粒径が３２μ
ｍ以上のマイクロスフィアでは、薬物の初期バーストを
伴うことなく、試験開始後、１０〜１１日目からＣＧＲ
Ｐが放出されることがわかる。

【００３８】（２） インビボ（in vivo）試験 製剤の脳への埋め込み：ペントバルビタール（各動物に
対し５０ｍｇ／ｋｇ）を使用して麻酔した後のウサギ
（２.５〜３.０ｋｇ）をうつ伏せに固定し、切開により
後頭骨膜（硬膜）を暴露し、後頭骨をドリルで削り、硬
膜をさらに広く暴露した、その後、硬膜、クモ膜を８ｍ
ｍ程度切開して、５匹の内各２匹に、それぞれ例１のＭ
Ｓ−１６（６０ｍｇ）と例２の錠剤（１個）を、そして
１匹にプラセボの錠剤（ＭＳ−１６を含まない）を埋め
込み、硬膜、筋肉、皮膚を縫合し、抗生物質を切開部位
に適量投与した。

【００３９】上記ウサギより下記採取方法にて毎日脳脊
髄液を採取し、下記測定方法にて脳脊髄液中のＣＧＲＰ
濃度（ｎＭ）を測定した。

【００４０】脳脊髄液採取方法：ペントバルビタール麻
酔後の上記ウサギをうつ伏せに固定し、切開により後頭
骨膜（硬膜）を暴露し、後頭骨膜を切開し、そこより脳
脊髄液（ＣＳＦ）を採取した。

【００４１】脳脊髄液中のＣＧＲＰ濃度の測定方法：下
記ラジオイムノアッセイ法による。

【００４２】測定用チューブにラベル化合物［２−（
¹²⁵Ｉ−iodohistidyl¹⁰）CGRP］４０００ｃｐｍを入
れ、これとは別に合成ＣＧＲＰ（Bachcm 社製）を標準
物質として１、２、５、１０、５０、１００、５００、
１０００ｆｍｏｌの標準溶液を１００μｌずつ作製し
た。試験サンプル、標準溶液、水１００μｌの入ったチ
ューブに抗体（アマシャム社製ＲＰＮ１８４１を２ｍｌ
に溶かし、更に１２.５ｍｌに希釈したもの）を１００
μｌと、分析用緩衝液［５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐ
Ｈ７.４）、０.３％ウシ血清アルブミン、１０ｍＭＥＤ
ＴＡ］６００μｌを入れ、チューブのカバーを閉じて４
℃にて５日間静置した。チューブにデキストラン／活性
炭溶液［５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７.４）、０.
２５％ゼラチン、１０ｍＭＥＤＴＡ］２５０μｌを加
え、即座に２０分間、２０００×ｇで遠心分離を行っ
た。沈殿と上清の両方をγ−カウンターで２００秒間測
定し、標準物質溶液から得た標準曲線よりＣＳＦ中の生
理活性物質（ＣＧＲＰ）の濃度を測定した。結果を、Ｍ
Ｓ−１６について図５に、錠剤について図６に示す。

【００４３】これらの図より、ＭＳ−１６およびそれよ
り調製した錠剤は、動物の脳内に埋め込まれた場合、そ
れらの移植後の一定期間経過後にＣＧＲＰの主要量を集
中的に放出することがわかる。

【００４４】

【発明の効果】本発明によれば、製剤投与後における薬
物の初期バーストを伴うことなくその投与の一定期間経
過後に薬物の主要量を放出するマイクロスフィアが提供
される。したがって、本発明のマイクロスフィアは、例
えば脳血管攣縮抑制作用を示す薬物について適用される
と、該疾患を都合よく処置できる。また、このような処
置において、より有効な脳内埋め込み用製剤も提供され
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明に従うマイクロスフィアの粒径の異なる
粒子構造を示す図に代わる電子顕微鏡写真である。

【図２】本発明に従うマイクロスフィア（粒径：１５０
μｍ超）からの薬物のイン ビトロ放出挙動を示すグラ
フである。

【図３】本発明に従うマイクロスフィア（粒径：３２〜
１５０μｍ）からの薬物のインビトロ放出挙動を示すグ
ラフである（試行２回）。

【図４】本発明に従うマイクロスフィア（平均粒径：３
２μｍ未満）からの薬物のインビトロ放出挙動を示すグ
ラフである（試行２回）。

【図５】本発明に従うマイクロスフィアからの薬物のイ
ン ビボ放出挙動を示すグラフである。

【図６】本発明に従うマイクロスフィアより調製した錠
剤からの薬物のイン ビボ放出挙動を示すグラフであ
る。

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【手続補正書】

【提出日】平成８年９月２７日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３８

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３８】（２） インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）試験 製剤の脳への埋め込み：ペントバルビタール（各動物に
対し５０ｍｇ／ｋｇ）を使用して麻酔した後のウサギ
（２．５〜３．０ｋｇ）をうつ伏せに固定し、切開によ
り後頭骨膜（硬膜）を暴露し、後頭骨をドリルで削り、
硬膜をさらに広く暴露した、その後、硬膜、クモ膜を８
ｍｍ程度切開して、５匹の内各２匹に、それぞれ例１の
ＭＳ−１６（６０ｍｇ）と例２の錠剤（１個）を、そし
て１匹にプラセボの錠剤（ＣＧＲＰを含まない）を埋め
込み、硬膜、筋肉、皮膚を縫合し、抗生物質を切開部位
に適量投与した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 47/34 Ａ６１Ｋ 37/30 // Ｂ０１Ｊ 13/12 Ｂ０１Ｊ 13/02 Ｊ

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （Ａ） 薬物を含む水性溶液と生体内分
   解性α−ヒドロキシカルボン酸重合体を含む水非混和性
   溶液とを乳化処理してＷ／Ｏ型のエマルションを形成す
   る工程、ならびに（Ｂ） 工程（Ａ）で得られたエマル
   ションを水性溶液中で乳化処理してＷ／Ｏ／Ｗ型のエマ
   ルションを形成する工程を介して得ることができる薬物
   の遅延放出型マイクロスフィア。
2. 【請求項２】 脳内埋め込み用である請求項１記載のマ
   イクロスフィア。
3. 【請求項３】 脳血管攣縮を抑制するための脳内埋め込
   み用である請求項２記載のマイクロスフィア。
4. 【請求項４】 薬物が脳血管攣縮抑制作用を有するペプ
   チドである請求項３記載のマイクロスフィア。
5. 【請求項５】 ペプチドがカルシトニン遺伝子関連ペプ
   チドおよびマキサディラン類からなる群より選ばれた請
   求項４記載のマイクロスフィア。
6. 【請求項６】 生体内分解性α−ヒドロキシカルボン酸
   重合体が乳酸の重合体または乳酸とグリコール酸の共重
   合体である請求項１〜５のいずれかに記載のマイクロス
   フィア。