JPH0980042A - 活性型ＴＧＦ−β１検査用カートリッジカラム及び癌の検査法 - Google Patents
活性型ＴＧＦ−β１検査用カートリッジカラム及び癌の検査法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】活性型ＴＧＦ−β1の簡便かつ有効な検査のた
めのカートリッジカラム及びそれを用いて癌細胞の自己
分泌増殖の際の原因物質の主体である活性型ＴＧＦ−β
1を検出することによる明瞭性に優れた癌の検査法を提
供すること。 【解決手段】検体液の導入口及び排出口を備え、導入口
に注射器先端部と連結しうる連結手段を設け、導入口側
に限外濾過膜、排出口側に吸着剤分散防止用フィルター
を有し、水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部が炭酸
基で置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有効成分と
する活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤を限外濾過膜及びフィ
ルターの間に介在させた活性型ＴＧＦ−β1検査用カー
トリッジカラム、及び前記カートリッジカラムの導入口
から体液を導入・流通し、活性型ＴＧＦ−β1を選択的
に吸着させた後、緩衝液により溶出させ、活性型ＴＧＦ
−β1を検出することを特徴とする癌の検査法。
めのカートリッジカラム及びそれを用いて癌細胞の自己
分泌増殖の際の原因物質の主体である活性型ＴＧＦ−β
1を検出することによる明瞭性に優れた癌の検査法を提
供すること。 【解決手段】検体液の導入口及び排出口を備え、導入口
に注射器先端部と連結しうる連結手段を設け、導入口側
に限外濾過膜、排出口側に吸着剤分散防止用フィルター
を有し、水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部が炭酸
基で置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有効成分と
する活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤を限外濾過膜及びフィ
ルターの間に介在させた活性型ＴＧＦ−β1検査用カー
トリッジカラム、及び前記カートリッジカラムの導入口
から体液を導入・流通し、活性型ＴＧＦ−β1を選択的
に吸着させた後、緩衝液により溶出させ、活性型ＴＧＦ
−β1を検出することを特徴とする癌の検査法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、癌細胞の自己分泌
増殖の際にその原因物質の主体であることが知られてい
る活性型ＴＧＦ−β1の特定の吸着剤を用いた活性型Ｔ
ＧＦ−β1検査用カートリッジカラム、及び前記カート
リッジカラムを用いた癌の検査法に関する。
増殖の際にその原因物質の主体であることが知られてい
る活性型ＴＧＦ−β1の特定の吸着剤を用いた活性型Ｔ
ＧＦ−β1検査用カートリッジカラム、及び前記カート
リッジカラムを用いた癌の検査法に関する。
【０００２】
【従来の技術】癌治療薬については種々研究開発がなさ
れているが、癌治療においては化学療法や癌そのものに
よる免疫抑制が問題になっている。また治療前の早期発
見や治療中、治療後の癌の転移、再発の早期発見、即ち
癌診断法も癌治療の重要な要因である。従来癌を検査す
るには、通常患部組織を切除した細胞の形態を直接判定
する方法が用いられており、場合によっては手術時まで
良性、悪性の判定が困難であることもある。また癌の特
異的免疫血清学的には、癌特異糖蛋白を検査用マーカー
として測定する方法が提案されている（例えば特公昭６
２−１００６６１号公報等）。
れているが、癌治療においては化学療法や癌そのものに
よる免疫抑制が問題になっている。また治療前の早期発
見や治療中、治療後の癌の転移、再発の早期発見、即ち
癌診断法も癌治療の重要な要因である。従来癌を検査す
るには、通常患部組織を切除した細胞の形態を直接判定
する方法が用いられており、場合によっては手術時まで
良性、悪性の判定が困難であることもある。また癌の特
異的免疫血清学的には、癌特異糖蛋白を検査用マーカー
として測定する方法が提案されている（例えば特公昭６
２−１００６６１号公報等）。
【０００３】従来癌の検査に用いられている腫瘍マーカ
ーは、生体内に多数存在する生理活性物質等で、その含
有量と疾患の間に、ある程度の相関が見られるものであ
ったが、実際には正常細胞でも発見されているものや、
質的に正常細胞由来のものと見分けが付き難いものが多
く、特に癌マーカーにおいては、定量的、定性的に有効
なマーカーは見出されていないのが実状である。
ーは、生体内に多数存在する生理活性物質等で、その含
有量と疾患の間に、ある程度の相関が見られるものであ
ったが、実際には正常細胞でも発見されているものや、
質的に正常細胞由来のものと見分けが付き難いものが多
く、特に癌マーカーにおいては、定量的、定性的に有効
なマーカーは見出されていないのが実状である。
【０００４】一方、健常人の血液中には、不活性型ＴＧ
Ｆ−β1が存在しており、癌細胞に接触すると活性化さ
れ、自己分泌、次いで増殖を促す。また癌細胞が活性型
ＴＧＦ−β1を産生したり、不活性型ＴＧＦ−β1が酵素
等により活性化され、更に血液中の活性型ＴＧＦ−β1
濃度が増加し、癌に対する免疫が抑制されることが知ら
れている。しかし、血液等の体液中における微量のＴＧ
Ｆ−β1濃度を測定することは容易ではなく、しかも活
性型ＴＧＦ−β1濃度を選択的に測定するのは更に困難
であるのが実状である。
Ｆ−β1が存在しており、癌細胞に接触すると活性化さ
れ、自己分泌、次いで増殖を促す。また癌細胞が活性型
ＴＧＦ−β1を産生したり、不活性型ＴＧＦ−β1が酵素
等により活性化され、更に血液中の活性型ＴＧＦ−β1
濃度が増加し、癌に対する免疫が抑制されることが知ら
れている。しかし、血液等の体液中における微量のＴＧ
Ｆ−β1濃度を測定することは容易ではなく、しかも活
性型ＴＧＦ−β1濃度を選択的に測定するのは更に困難
であるのが実状である。
【０００５】現在、血液中のＴＧＦ−β1濃度を測定す
ることによる癌検査法としては、ＥＬＩＳＡ法(enzyme-
linked immunosorbentassay（酵素免疫測定法）特開平
５−３３６９９０号公報に記載されている）が実用化さ
れている。しかしながら、前記ＥＬＩＳＡ法では、操作
が煩雑で、最低３日もの時間を要し、高価である上に、
検体中のＴＧＦ−β1を前処理工程で全て活性化させて
しまうため、検査法としての明瞭性に欠けるという問題
点がある。
ることによる癌検査法としては、ＥＬＩＳＡ法(enzyme-
linked immunosorbentassay（酵素免疫測定法）特開平
５−３３６９９０号公報に記載されている）が実用化さ
れている。しかしながら、前記ＥＬＩＳＡ法では、操作
が煩雑で、最低３日もの時間を要し、高価である上に、
検体中のＴＧＦ−β1を前処理工程で全て活性化させて
しまうため、検査法としての明瞭性に欠けるという問題
点がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、活性
型ＴＧＦ−β1の簡便かつ有効な検査のためのカートリ
ッジカラムを提供することにある。本発明の別の目的
は、前記カートリッジカラムを用いて癌細胞の自己分泌
増殖の際の原因物質の主体である活性型ＴＧＦ−β1を
検出することによる、検査法としての明瞭性に優れた癌
の検査法を提供することにある。
型ＴＧＦ−β1の簡便かつ有効な検査のためのカートリ
ッジカラムを提供することにある。本発明の別の目的
は、前記カートリッジカラムを用いて癌細胞の自己分泌
増殖の際の原因物質の主体である活性型ＴＧＦ−β1を
検出することによる、検査法としての明瞭性に優れた癌
の検査法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、検体液
の導入口及び排出口を備えたカートリッジカラムであっ
て、前記導入口側に配置した限外濾過膜と、前記排出口
側に配置した吸着剤分散防止用フィルターとを有し、水
酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部が炭酸基で置換さ
れたＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有効成分とする活性型
ＴＧＦ−β1の吸着剤を、前記限外濾過膜及び前記フィ
ルターの間に介在させたことを特徴とする活性型ＴＧＦ
−β1検査用カートリッジカラムが提供される。
の導入口及び排出口を備えたカートリッジカラムであっ
て、前記導入口側に配置した限外濾過膜と、前記排出口
側に配置した吸着剤分散防止用フィルターとを有し、水
酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部が炭酸基で置換さ
れたＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有効成分とする活性型
ＴＧＦ−β1の吸着剤を、前記限外濾過膜及び前記フィ
ルターの間に介在させたことを特徴とする活性型ＴＧＦ
−β1検査用カートリッジカラムが提供される。
【０００８】また本発明によれば、検体液の導入口に、
注射器先端部と連結しうる連結手段を設けたことを特徴
とする前記活性型ＴＧＦ−β1検査用カートリッジカラ
ムが提供される。
注射器先端部と連結しうる連結手段を設けたことを特徴
とする前記活性型ＴＧＦ−β1検査用カートリッジカラ
ムが提供される。
【０００９】更に本発明によれば、前記カートリッジカ
ラムの導入口から体液を導入・流通し、活性型ＴＧＦ−
β1の吸着剤に接触させて、活性型ＴＧＦ−β1を選択的
に吸着させた後、吸着された活性型ＴＧＦ−β1を緩衝
液により溶出させ、前記体液中の活性型ＴＧＦ−β1を
検出することを特徴とする癌の検査法が提供される。
ラムの導入口から体液を導入・流通し、活性型ＴＧＦ−
β1の吸着剤に接触させて、活性型ＴＧＦ−β1を選択的
に吸着させた後、吸着された活性型ＴＧＦ−β1を緩衝
液により溶出させ、前記体液中の活性型ＴＧＦ−β1を
検出することを特徴とする癌の検査法が提供される。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明の活性型ＴＧＦ−β1検査
用カートリッジカラムの一例を、図１に示す。図１にお
いて、１はカートリッジカラムを示す。カートリッジカ
ラム１は、その上部に検体液導入口２、下部に検体液排
出口３を備えた管であり、ポリプロピレン等の通常の材
料により作成することができる。検体液導入口２は、導
入口２と検体液を導入するための注射器先端とを連結し
うる連結手段７を備えることができる。連結手段７は、
カートリッジカラム１と一体化していても、また着脱自
在に連結されるものでも良い。この連結手段７は、ルア
ーロック等の公知の形状をとることができる。
用カートリッジカラムの一例を、図１に示す。図１にお
いて、１はカートリッジカラムを示す。カートリッジカ
ラム１は、その上部に検体液導入口２、下部に検体液排
出口３を備えた管であり、ポリプロピレン等の通常の材
料により作成することができる。検体液導入口２は、導
入口２と検体液を導入するための注射器先端とを連結し
うる連結手段７を備えることができる。連結手段７は、
カートリッジカラム１と一体化していても、また着脱自
在に連結されるものでも良い。この連結手段７は、ルア
ーロック等の公知の形状をとることができる。
【００１１】カートリッジカラム１の内部には、検体液
導入口２の下部に限外濾過膜４、検体液排出口３の上部
にフィルター５を設けている。限外濾過膜４を設けるこ
とにより、検体中の、ＴＧＦ−β1より分子量の大きい
夾雑物を除くことができる。限外濾過膜４は、分子量約
２５０００であるＴＧＦ−β1が通過できるものであれ
ば特に限定されないが、通常通過分子サイズ３０ｋＤａ
のもの等を用いることができる。またフィルター５を設
けることにより、後述する吸着剤の分散を防止すること
ができる。フィルター５としては、通常のカラム作成に
用いるものを使用することができる。
導入口２の下部に限外濾過膜４、検体液排出口３の上部
にフィルター５を設けている。限外濾過膜４を設けるこ
とにより、検体中の、ＴＧＦ−β1より分子量の大きい
夾雑物を除くことができる。限外濾過膜４は、分子量約
２５０００であるＴＧＦ−β1が通過できるものであれ
ば特に限定されないが、通常通過分子サイズ３０ｋＤａ
のもの等を用いることができる。またフィルター５を設
けることにより、後述する吸着剤の分散を防止すること
ができる。フィルター５としては、通常のカラム作成に
用いるものを使用することができる。
【００１２】さらにカートリッジカラム１、限外濾過膜
４、及びフィルター５によって区切られた空間中に、吸
着剤層６を設ける。即ち限外濾過膜４とフィルター５と
の間に吸着剤層６を介在させる。前記空間の容積、即ち
カートリッジカラムの容量は特に限定されないが、通常
１．５〜４ｍｌである。図１では吸着剤層６中に吸着剤
が間隙なく充填されているが、吸着剤はカートリッジカ
ラム１内の、限外濾過膜４とフィルター５の間に介在し
ていれば良く、間隙なく充填されていなくても良い。
４、及びフィルター５によって区切られた空間中に、吸
着剤層６を設ける。即ち限外濾過膜４とフィルター５と
の間に吸着剤層６を介在させる。前記空間の容積、即ち
カートリッジカラムの容量は特に限定されないが、通常
１．５〜４ｍｌである。図１では吸着剤層６中に吸着剤
が間隙なく充填されているが、吸着剤はカートリッジカ
ラム１内の、限外濾過膜４とフィルター５の間に介在し
ていれば良く、間隙なく充填されていなくても良い。
【００１３】吸着剤層６内に設けられる吸着剤として
は、水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部が炭酸基で
置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイト(Ca10(PO4)6(CO3)
x(OH)2 -2x）を有効成分とする活性型ＴＧＦ−β1の吸着
剤（以下、吸着剤Ａと略す）が用いられる。具体的には
炭酸基含有量が、ＯＨ基炭酸水酸アパタイト全量に対し
て２．０重量％以上のものが特に好ましい。
は、水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部が炭酸基で
置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイト(Ca10(PO4)6(CO3)
x(OH)2 -2x）を有効成分とする活性型ＴＧＦ−β1の吸着
剤（以下、吸着剤Ａと略す）が用いられる。具体的には
炭酸基含有量が、ＯＨ基炭酸水酸アパタイト全量に対し
て２．０重量％以上のものが特に好ましい。
【００１４】このＯＨ基炭酸水酸アパタイトは、活性型
ＴＧＦ−β1のみを選択的に吸着するものであって、そ
の吸着の主要因は、非常に多孔質であるＯＨ基炭酸水酸
アパタイト表面と、活性型ＴＧＦ−β1の分子局所表面
における微細な立体的構造差にあり、その分子局所構造
の差に基づいて独特の吸着が実現すると考えられる。
ＴＧＦ−β1のみを選択的に吸着するものであって、そ
の吸着の主要因は、非常に多孔質であるＯＨ基炭酸水酸
アパタイト表面と、活性型ＴＧＦ−β1の分子局所表面
における微細な立体的構造差にあり、その分子局所構造
の差に基づいて独特の吸着が実現すると考えられる。
【００１５】前記ＯＨ基炭酸水酸アパタイトの形状は、
好ましくは前記カートリッジカラムに充填しやすい粒状
又は粉状等であるのが望ましく、その平均粒径は３〜２
０μｍの範囲であるのが好ましい。平均粒径を３μｍ以
上とすることにより、充填剤を前記カートリッジカラム
に充填し通液した際の圧力損失が過大となることを防ぐ
ことができる。一方平均粒径を２０μｍ以下とすること
により、単位体積当たりの表面積が広くなり、良好な分
離能を得ることができる。しかしながら、平均粒径が前
記範囲から外れた場合でも、許容されうる結果を得るこ
とができる。
好ましくは前記カートリッジカラムに充填しやすい粒状
又は粉状等であるのが望ましく、その平均粒径は３〜２
０μｍの範囲であるのが好ましい。平均粒径を３μｍ以
上とすることにより、充填剤を前記カートリッジカラム
に充填し通液した際の圧力損失が過大となることを防ぐ
ことができる。一方平均粒径を２０μｍ以下とすること
により、単位体積当たりの表面積が広くなり、良好な分
離能を得ることができる。しかしながら、平均粒径が前
記範囲から外れた場合でも、許容されうる結果を得るこ
とができる。
【００１６】前記ＯＨ基炭酸水酸アパタイトを調製する
には、例えば常圧で、水酸アパタイトを炭酸ガス中にお
いて約１０００℃に加熱する方法等の公知の方法により
製造することができる。また形状を粒状又は粉状等にす
るには、公知の噴霧乾燥による造粒、破砕造粒等の方
法、回転転動造粒法等により行うことができる。
には、例えば常圧で、水酸アパタイトを炭酸ガス中にお
いて約１０００℃に加熱する方法等の公知の方法により
製造することができる。また形状を粒状又は粉状等にす
るには、公知の噴霧乾燥による造粒、破砕造粒等の方
法、回転転動造粒法等により行うことができる。
【００１７】本発明の癌の検査方法では、まず前記カー
トリッジカラムの導入口から排出口へ体液を導入・流通
し、活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤に接触させて、活性型
ＴＧＦ−β1を選択的に吸着させる。具体的には、例え
ば前記体液を注射器に取り、その注射器の先に前記カー
トリッジカラムを取付け、注射器のピストンを押し、体
液を圧力をかけて流し込み、前記限外濾過膜と吸着剤Ａ
とを連続して通過させる方法により、前記体液中の活性
型ＴＧＦ−β1の濃縮と吸着とを同時に行うことができ
る。前記体液としては、ヒトを含む動物から採取した血
液等を挙げることができるが、好ましくは血清及び／又
は血漿等を用いることが望ましい。
トリッジカラムの導入口から排出口へ体液を導入・流通
し、活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤に接触させて、活性型
ＴＧＦ−β1を選択的に吸着させる。具体的には、例え
ば前記体液を注射器に取り、その注射器の先に前記カー
トリッジカラムを取付け、注射器のピストンを押し、体
液を圧力をかけて流し込み、前記限外濾過膜と吸着剤Ａ
とを連続して通過させる方法により、前記体液中の活性
型ＴＧＦ−β1の濃縮と吸着とを同時に行うことができ
る。前記体液としては、ヒトを含む動物から採取した血
液等を挙げることができるが、好ましくは血清及び／又
は血漿等を用いることが望ましい。
【００１８】次に、吸着された活性型ＴＧＦ−β1を、
緩衝液により溶出させる。前記緩衝液としては、ＫＨ3
ＰＯ4緩衝液（ｐＨ７．４）等のリン酸緩衝液等を挙げ
ることができ、その濃度は、活性型ＴＧＦ−β1が吸着
剤Ａから溶出する濃度であれば特に限定されないが、具
体的には２００〜３５０ｍＭの範囲が好ましい。また、
前記緩衝液の注入量及び注入方法は特に限定されず、例
えば３５０ｍＭの前記ＫＨ3ＰＯ4緩衝液であれば約０．
５ｍｌを注射器により注入し通過させることにより、溶
出を行うことができる。また、溶出を行う前に、イオン
強度のより低い濃度約８０ｍＭ程度のＫＨ3ＰＯ4緩衝液
を注入し、活性型ＴＧＦ−β1より弱く吸着されている
他の蛋白質等を除去することができる。
緩衝液により溶出させる。前記緩衝液としては、ＫＨ3
ＰＯ4緩衝液（ｐＨ７．４）等のリン酸緩衝液等を挙げ
ることができ、その濃度は、活性型ＴＧＦ−β1が吸着
剤Ａから溶出する濃度であれば特に限定されないが、具
体的には２００〜３５０ｍＭの範囲が好ましい。また、
前記緩衝液の注入量及び注入方法は特に限定されず、例
えば３５０ｍＭの前記ＫＨ3ＰＯ4緩衝液であれば約０．
５ｍｌを注射器により注入し通過させることにより、溶
出を行うことができる。また、溶出を行う前に、イオン
強度のより低い濃度約８０ｍＭ程度のＫＨ3ＰＯ4緩衝液
を注入し、活性型ＴＧＦ−β1より弱く吸着されている
他の蛋白質等を除去することができる。
【００１９】次に、前記溶出のためカートリッジカラム
を通過させた前記緩衝液を回収し、その中に含まれる活
性型ＴＧＦ−β1を検出し、その濃度を測定する。この
活性型ＴＧＦ−β1濃度の測定は、例えば紫外線吸光度
測定法、タンパク質発色試薬等を用いた発色による定量
法等により行うことができる。
を通過させた前記緩衝液を回収し、その中に含まれる活
性型ＴＧＦ−β1を検出し、その濃度を測定する。この
活性型ＴＧＦ−β1濃度の測定は、例えば紫外線吸光度
測定法、タンパク質発色試薬等を用いた発色による定量
法等により行うことができる。
【００２０】
【発明の効果】本発明のカートリッジカラムは、ＯＨ基
炭酸水酸アパタイトを有効成分とする吸着剤を備え、か
つ限外濾過膜を導入口に備えるので、動物から採取した
体液等の検体液を、前処理を経ずに直接活性型ＴＧＦ−
β1の選択的吸着に供することができる。また本発明の
癌の検査法では、前記カートリッジカラムを用い、動物
から採取した体液中のＴＧＦ−β1を、前処理を経ずに
直接選択的に吸着させることができ、その後、緩衝液に
より吸着された活性型ＴＧＦ−β1を溶出させるので、
動物から採取した体液等の活性型ＴＧＦ−β1濃度を、
例えば濃度が微量である場合にも簡便な操作で有効に測
定することができる。従って、従来のＥＬＩＳＡ法等と
は異なり前処理を必要とせずに、容易にしかも短時間で
明瞭な癌の検査を行うことができる。
炭酸水酸アパタイトを有効成分とする吸着剤を備え、か
つ限外濾過膜を導入口に備えるので、動物から採取した
体液等の検体液を、前処理を経ずに直接活性型ＴＧＦ−
β1の選択的吸着に供することができる。また本発明の
癌の検査法では、前記カートリッジカラムを用い、動物
から採取した体液中のＴＧＦ−β1を、前処理を経ずに
直接選択的に吸着させることができ、その後、緩衝液に
より吸着された活性型ＴＧＦ−β1を溶出させるので、
動物から採取した体液等の活性型ＴＧＦ−β1濃度を、
例えば濃度が微量である場合にも簡便な操作で有効に測
定することができる。従って、従来のＥＬＩＳＡ法等と
は異なり前処理を必要とせずに、容易にしかも短時間で
明瞭な癌の検査を行うことができる。
【００２１】
【実施例】以下実施例及び比較例により更に詳細に説明
するが本発明はこれらに限定されるものではない。
するが本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２２】
【実施例１】水酸アパタイトのＯＨ基が、３．４重量％
（水酸アパタイト全量に対して）ＣＯ3基で置換された
粒径１２．３μｍのＯＨ基炭酸水酸アパタイト０．５ｇ
を、活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤として、純水５ｍｌ中
に懸濁し、自然沈降法により、図１に示すカートリッジ
カラム１（３０ｍｍ×８ｍｍφ）に充填した。なお、限
外濾過膜は、通過分子サイズ３０ｋＤａのものを用い
た。癌患者の血清３検体と健常人の血清３検体とを、各
々２００μｌずつ、注射器を用いて前記カートリッジカ
ラム１に注入した。次いで８０ｍＭ ＫＨ3ＰＯ4（ｐＨ
７．４）緩衝液で活性型ＴＧＦ−β1以外の蛋白質等を
除去した後、３５０ｍＭ ＫＨ3ＰＯ4（ｐＨ７．４）緩
衝液０．５ｍｌを注入し、吸着物を溶出させた。得られ
た溶出液中の吸着物を紫外線検出器（２８０ｎｍ）によ
り検出した。これらの溶出液は回収し、以下の分析に供
した。
（水酸アパタイト全量に対して）ＣＯ3基で置換された
粒径１２．３μｍのＯＨ基炭酸水酸アパタイト０．５ｇ
を、活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤として、純水５ｍｌ中
に懸濁し、自然沈降法により、図１に示すカートリッジ
カラム１（３０ｍｍ×８ｍｍφ）に充填した。なお、限
外濾過膜は、通過分子サイズ３０ｋＤａのものを用い
た。癌患者の血清３検体と健常人の血清３検体とを、各
々２００μｌずつ、注射器を用いて前記カートリッジカ
ラム１に注入した。次いで８０ｍＭ ＫＨ3ＰＯ4（ｐＨ
７．４）緩衝液で活性型ＴＧＦ−β1以外の蛋白質等を
除去した後、３５０ｍＭ ＫＨ3ＰＯ4（ｐＨ７．４）緩
衝液０．５ｍｌを注入し、吸着物を溶出させた。得られ
た溶出液中の吸着物を紫外線検出器（２８０ｎｍ）によ
り検出した。これらの溶出液は回収し、以下の分析に供
した。
【００２３】標準試料として、活性型ＴＧＦ−β1を５
ｍＭ ＨＣｌに溶解した濃度０．３ｇ／ｌの活性型ＴＧ
Ｆ−β1溶液を用い、前記回収した溶出液を、０〜３５
０ｍＭＫＨ3ＰＯ4（ｐＨ７．４）緩衝液（０−３０分）
のリニアグラジェント法によるＨＰＬＣ測定によって分
析した。なお、ＨＰＬＣ用カラムとしては、前記ＯＨ基
炭酸水酸アパタイト２ｇを１５０ｍｍ×４ｍｍφのカラ
ムに充填したものを使用した。その結果、前記溶出液中
のピークが活性型ＴＧＦ−β1のものであることを確認
した。癌患者検体及び健常人検体の溶出結果をそれぞれ
図２（ａ）及び図２（ｂ）に示す。
ｍＭ ＨＣｌに溶解した濃度０．３ｇ／ｌの活性型ＴＧ
Ｆ−β1溶液を用い、前記回収した溶出液を、０〜３５
０ｍＭＫＨ3ＰＯ4（ｐＨ７．４）緩衝液（０−３０分）
のリニアグラジェント法によるＨＰＬＣ測定によって分
析した。なお、ＨＰＬＣ用カラムとしては、前記ＯＨ基
炭酸水酸アパタイト２ｇを１５０ｍｍ×４ｍｍφのカラ
ムに充填したものを使用した。その結果、前記溶出液中
のピークが活性型ＴＧＦ−β1のものであることを確認
した。癌患者検体及び健常人検体の溶出結果をそれぞれ
図２（ａ）及び図２（ｂ）に示す。
【００２４】図２（ａ）と図２（ｂ）とのピークの大き
さを比較すると、図２（ａ）のピークが図２（ｂ）のピ
ークの約５倍あり、癌患者血清から検出されたピークが
健常人血清から検出されたピークより大きいことが確認
できた。このことより癌の検査に極めて明瞭な結果を示
すことが判った。
さを比較すると、図２（ａ）のピークが図２（ｂ）のピ
ークの約５倍あり、癌患者血清から検出されたピークが
健常人血清から検出されたピークより大きいことが確認
できた。このことより癌の検査に極めて明瞭な結果を示
すことが判った。
【図１】図１は、本発明によるカートリッジカラムの一
実施例を示す断面図である。
実施例を示す断面図である。
【図２】図２（ａ）及び図２（ｂ）はそれぞれ、実施例
１における癌患者及び健常人の血清３検体を用いて得ら
れた溶出液の紫外線検出器（２８０ｎｍ）による検出結
果を示すグラフである。
１における癌患者及び健常人の血清３検体を用いて得ら
れた溶出液の紫外線検出器（２８０ｎｍ）による検出結
果を示すグラフである。
Claims (3)
- 【請求項１】 検体液の導入口及び排出口を備えたカー
トリッジカラムであって、前記導入口側に配置した限外
濾過膜と、前記排出口側に配置した吸着剤分散防止用フ
ィルターとを有し、水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は
全部が炭酸基で置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイトを
有効成分とする活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤を、前記限
外濾過膜及び前記フィルターの間に介在させたことを特
徴とする活性型ＴＧＦ−β1検査用カートリッジカラ
ム。 - 【請求項２】 検体液の導入口に、注射器先端部と連結
しうる連結手段を設けたことを特徴とする請求項１記載
の活性型ＴＧＦ−β1検査用カートリッジカラム。 - 【請求項３】 請求項１又は２記載のカートリッジカラ
ムの導入口から体液を導入・流通し、活性型ＴＧＦ−β
1の吸着剤に接触させて、活性型ＴＧＦ−β1を選択的に
吸着させた後、吸着された活性型ＴＧＦ−β1を緩衝液
により溶出させ、前記体液中の活性型ＴＧＦ−β1を検
出することを特徴とする癌の検査法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7234354A JPH0980042A (ja) | 1995-09-12 | 1995-09-12 | 活性型ＴＧＦ−β１検査用カートリッジカラム及び癌の検査法 |
| EP96113163A EP0762124A3 (en) | 1995-09-12 | 1996-08-16 | Cartridge column for detecting active tgf-beta1, and method for detecting cancer using this column |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7234354A JPH0980042A (ja) | 1995-09-12 | 1995-09-12 | 活性型ＴＧＦ−β１検査用カートリッジカラム及び癌の検査法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0980042A true JPH0980042A (ja) | 1997-03-28 |
Family
ID=16969693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7234354A Withdrawn JPH0980042A (ja) | 1995-09-12 | 1995-09-12 | 活性型ＴＧＦ−β１検査用カートリッジカラム及び癌の検査法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0762124A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0980042A (ja) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3639949A1 (de) * | 1986-11-22 | 1988-06-09 | Diagen Inst Molekularbio | Verfahren zur trennung von langkettigen nukleinsaeuren |
| JPH01135792A (ja) * | 1987-11-20 | 1989-05-29 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 核酸の分離・精製方法 |
| JPH0731875A (ja) * | 1993-07-19 | 1995-02-03 | Mitsubishi Materials Corp | ＴＧＦ−▲β１▼の吸着剤及びＴＧＦ−▲β１▼の検査方法 |
| JPH08193997A (ja) * | 1995-01-18 | 1996-07-30 | Mitsubishi Materials Corp | 活性型ＴＧＦ−β１の吸着剤、活性型ＴＧＦ−β１の検査法及び癌の検査法 |
-
1995
- 1995-09-12 JP JP7234354A patent/JPH0980042A/ja not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-08-16 EP EP96113163A patent/EP0762124A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0762124A2 (en) | 1997-03-12 |
| EP0762124A3 (en) | 1998-07-22 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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