JPH08193997A - 活性型ＴＧＦ−β１の吸着剤、活性型ＴＧＦ−β１の検査法及び癌の検査法 - Google Patents
活性型ＴＧＦ−β１の吸着剤、活性型ＴＧＦ−β１の検査法及び癌の検査法Info
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Abstract
(57)【要約】
【構成】水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部がＣＯ
3基で置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有効成分
とする活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤、この吸着剤に、活
性型ＴＧＦ−β1含有液を接触させて活性型ＴＧＦ−β1
を選択的に吸着させた後、吸着された活性型ＴＧＦ−β
1を緩衝液により溶出させ、前記活性型ＴＧＦ−β1含有
液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を測定する活性型ＴＧＦ
−β1の検査法、及びこの検査法を利用した癌の検査
法。 【効果】前記吸着剤では、活性型ＴＧＦ−β1を選択的
に吸着することができる。また前記検査法では、測定す
る溶液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を、例えば濃度が微
量である場合にも有効に測定することができる。更に前
記癌の検査法では、直接動物から採取した体液中の活性
型ＴＧＦ−β1濃度を測定することができる。
3基で置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有効成分
とする活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤、この吸着剤に、活
性型ＴＧＦ−β1含有液を接触させて活性型ＴＧＦ−β1
を選択的に吸着させた後、吸着された活性型ＴＧＦ−β
1を緩衝液により溶出させ、前記活性型ＴＧＦ−β1含有
液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を測定する活性型ＴＧＦ
−β1の検査法、及びこの検査法を利用した癌の検査
法。 【効果】前記吸着剤では、活性型ＴＧＦ−β1を選択的
に吸着することができる。また前記検査法では、測定す
る溶液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を、例えば濃度が微
量である場合にも有効に測定することができる。更に前
記癌の検査法では、直接動物から採取した体液中の活性
型ＴＧＦ−β1濃度を測定することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、癌細胞の自己分泌増殖
の際にその原因物質の主体であることが知られている活
性型ＴＧＦ−β1の吸着剤、活性型ＴＧＦ−β1の検査法
及び活性型ＴＧＦ−β1の検査を利用した癌の検査法に
関する。
の際にその原因物質の主体であることが知られている活
性型ＴＧＦ−β1の吸着剤、活性型ＴＧＦ−β1の検査法
及び活性型ＴＧＦ−β1の検査を利用した癌の検査法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】癌治療薬については種々研究開発がなさ
れているが、癌治療においては化学療法や癌そのものに
よる免疫抑制が問題になっている。また治療前の早期発
見や治療中、治療後の癌の転移、再発の早期発見、即ち
癌診断法も癌治療の重要な要因である。従来癌を検査す
るには、通常患部組織を切除した細胞の形態を直接判定
する方法が用いられており、場合によっては手術時まで
良性、悪性の判定が困難であることもある。また癌の特
異的免疫血清学的には、癌特異糖蛋白を検査用マーカー
として測定する方法が提案されている（例えば特公昭６
２−１００６６１号公報等）。
れているが、癌治療においては化学療法や癌そのものに
よる免疫抑制が問題になっている。また治療前の早期発
見や治療中、治療後の癌の転移、再発の早期発見、即ち
癌診断法も癌治療の重要な要因である。従来癌を検査す
るには、通常患部組織を切除した細胞の形態を直接判定
する方法が用いられており、場合によっては手術時まで
良性、悪性の判定が困難であることもある。また癌の特
異的免疫血清学的には、癌特異糖蛋白を検査用マーカー
として測定する方法が提案されている（例えば特公昭６
２−１００６６１号公報等）。
【０００３】従来癌の検査に用いられている腫瘍マーカ
ーは、生体内に多数存在する生理活性物質等で、その含
有量と疾患の間に、ある程度の相関が見られるものであ
ったが、実際には正常細胞でも発見されているものや、
質的に正常細胞由来のものと見分けが付き難いものが多
く、特に癌マーカーにおいては、定量的、定性的に有効
なマーカーは見出されていないのが実状である。
ーは、生体内に多数存在する生理活性物質等で、その含
有量と疾患の間に、ある程度の相関が見られるものであ
ったが、実際には正常細胞でも発見されているものや、
質的に正常細胞由来のものと見分けが付き難いものが多
く、特に癌マーカーにおいては、定量的、定性的に有効
なマーカーは見出されていないのが実状である。
【０００４】一方、健常人の血液中には、不活性型ＴＧ
Ｆ−β1が存在しており、癌細胞に接触すると活性化さ
れ、自己分泌、次いで増殖を促す。また癌細胞が活性型
ＴＧＦ−β1を産生したり、不活性型ＴＧＦ−β1が酵素
等により活性化され、更に血液中の活性型ＴＧＦ−β1
濃度が増加し、癌に対する免疫が抑制されることが知ら
れている。しかし、血液等の体液中における微量のＴＧ
Ｆ−β1濃度を測定することは容易ではなく、しかも活
性型ＴＧＦ−β1濃度を選択的に測定するのは更に困難
であるのが実状である。
Ｆ−β1が存在しており、癌細胞に接触すると活性化さ
れ、自己分泌、次いで増殖を促す。また癌細胞が活性型
ＴＧＦ−β1を産生したり、不活性型ＴＧＦ−β1が酵素
等により活性化され、更に血液中の活性型ＴＧＦ−β1
濃度が増加し、癌に対する免疫が抑制されることが知ら
れている。しかし、血液等の体液中における微量のＴＧ
Ｆ−β1濃度を測定することは容易ではなく、しかも活
性型ＴＧＦ−β1濃度を選択的に測定するのは更に困難
であるのが実状である。
【０００５】現在、血液中のＴＧＦ−β1濃度を測定す
ることによる癌検査法としては、ＥＬＩＳＡ法(enzyme-
linked immunosorbentassay（酵素免疫測定法）特開平
５−３３６９９０号公報に記載されている）が実用化さ
れている。しかしながら、前記ＥＬＩＳＡ法では、操作
が煩雑で、最低３日もの時間を要し、高価である上に、
検体中のＴＧＦ−β1を前処理工程で全て活性化させて
しまうため、検査法としての明瞭性に欠けるという問題
点がある。
ることによる癌検査法としては、ＥＬＩＳＡ法(enzyme-
linked immunosorbentassay（酵素免疫測定法）特開平
５−３３６９９０号公報に記載されている）が実用化さ
れている。しかしながら、前記ＥＬＩＳＡ法では、操作
が煩雑で、最低３日もの時間を要し、高価である上に、
検体中のＴＧＦ−β1を前処理工程で全て活性化させて
しまうため、検査法としての明瞭性に欠けるという問題
点がある。
【０００６】また水酸アパタイト(Ca10(PO4)6(OH)2)の
(OH)サイトの一部が、(CO3)で置換された炭酸水酸アパ
タイト(Ca10(PO4)6(CO3)x(OH)2_2x)の存在が知られてお
り、ＯＨ基炭酸水酸アパタイトという。このＯＨ基炭酸
水酸アパタイトが、ＴＧＦ−β1の吸着剤として使用で
きることについては従来知られていない。
(OH)サイトの一部が、(CO3)で置換された炭酸水酸アパ
タイト(Ca10(PO4)6(CO3)x(OH)2_2x)の存在が知られてお
り、ＯＨ基炭酸水酸アパタイトという。このＯＨ基炭酸
水酸アパタイトが、ＴＧＦ−β1の吸着剤として使用で
きることについては従来知られていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、活性型ＴＧＦ−β1を選択的に吸着する吸着剤及び
この吸着剤を用いた活性型ＴＧＦ−β1の有効な検査法
を提供することにある。本発明の別の目的は、癌細胞の
自己分泌増殖の際の原因物質の主体である活性型ＴＧＦ
−β1を検出することによる、検査法としての明瞭性に
優れた癌の検査法を提供することにある。
は、活性型ＴＧＦ−β1を選択的に吸着する吸着剤及び
この吸着剤を用いた活性型ＴＧＦ−β1の有効な検査法
を提供することにある。本発明の別の目的は、癌細胞の
自己分泌増殖の際の原因物質の主体である活性型ＴＧＦ
−β1を検出することによる、検査法としての明瞭性に
優れた癌の検査法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、水酸ア
パタイトのＯＨ基の一部又は全部がＣＯ3基で置換され
たＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有効成分とする活性型Ｔ
ＧＦ−β1の吸着剤（以下吸着剤Ａという）が提供され
る。また本発明によれば、前記吸着剤Ａに、活性型ＴＧ
Ｆ−β1含有液を接触させて活性型ＴＧＦ−β1を選択的
に吸着させた後、吸着された活性型ＴＧＦ−β1を緩衝
液により溶出させ、前記活性型ＴＧＦ−β1含有液中の
活性型ＴＧＦ−β1濃度を測定することを特徴とする活
性型ＴＧＦ−β1の検査法が提供される。更に本発明に
よれば、前記吸着剤Ａに、体液を接触させて活性型ＴＧ
Ｆ−β1を選択的に吸着させた後、吸着された活性型Ｔ
ＧＦ−β1を緩衝液により溶出させ、前記体液中の活性
型ＴＧＦ−β1を検出することを特徴とする癌の検査法
が提供される。
パタイトのＯＨ基の一部又は全部がＣＯ3基で置換され
たＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有効成分とする活性型Ｔ
ＧＦ−β1の吸着剤（以下吸着剤Ａという）が提供され
る。また本発明によれば、前記吸着剤Ａに、活性型ＴＧ
Ｆ−β1含有液を接触させて活性型ＴＧＦ−β1を選択的
に吸着させた後、吸着された活性型ＴＧＦ−β1を緩衝
液により溶出させ、前記活性型ＴＧＦ−β1含有液中の
活性型ＴＧＦ−β1濃度を測定することを特徴とする活
性型ＴＧＦ−β1の検査法が提供される。更に本発明に
よれば、前記吸着剤Ａに、体液を接触させて活性型ＴＧ
Ｆ−β1を選択的に吸着させた後、吸着された活性型Ｔ
ＧＦ−β1を緩衝液により溶出させ、前記体液中の活性
型ＴＧＦ−β1を検出することを特徴とする癌の検査法
が提供される。
【０００９】以下本発明を更に詳細に説明する。本発明
の吸着剤Ａは、水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部
がＣＯ3基で置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイト(Ca10
(PO4)6(CO3)x(OH)2_2x）を有効成分とするものであっ
て、具体的にはＣＯ3含有量が、ＯＨ基炭酸水酸アパタ
イト全量に対して２．０重量％以上のものが特に好まし
い。
の吸着剤Ａは、水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部
がＣＯ3基で置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイト(Ca10
(PO4)6(CO3)x(OH)2_2x）を有効成分とするものであっ
て、具体的にはＣＯ3含有量が、ＯＨ基炭酸水酸アパタ
イト全量に対して２．０重量％以上のものが特に好まし
い。
【００１０】このＯＨ基炭酸水酸アパタイトは、活性型
ＴＧＦ−β1のみを選択的に吸着するものであって、そ
の吸着の主要因は、非常に多孔質であるＯＨ基炭酸水酸
アパタイト表面と、活性型ＴＧＦ−β1の分子局所表面
における微細な立体的構造差にあり、その分子局所構造
の差に基づいて独特の吸着が実現すると考えられる。
ＴＧＦ−β1のみを選択的に吸着するものであって、そ
の吸着の主要因は、非常に多孔質であるＯＨ基炭酸水酸
アパタイト表面と、活性型ＴＧＦ−β1の分子局所表面
における微細な立体的構造差にあり、その分子局所構造
の差に基づいて独特の吸着が実現すると考えられる。
【００１１】前記ＯＨ基炭酸水酸アパタイトの形状は、
好ましくはカラム等に充填しやすい粒状又は粉状等であ
るのが望ましく、その平均粒径は３〜２０μｍの範囲で
あるのが好ましい。平均粒径が３μｍ未満の場合には、
充填剤をカラムに充填し、通液した際の圧力損失が大き
過ぎ、一方２０μｍを超えるものであると、単位体積当
たりの表面積が少なくなり、分離能が低下するので好ま
しくない。
好ましくはカラム等に充填しやすい粒状又は粉状等であ
るのが望ましく、その平均粒径は３〜２０μｍの範囲で
あるのが好ましい。平均粒径が３μｍ未満の場合には、
充填剤をカラムに充填し、通液した際の圧力損失が大き
過ぎ、一方２０μｍを超えるものであると、単位体積当
たりの表面積が少なくなり、分離能が低下するので好ま
しくない。
【００１２】前記ＯＨ基炭酸水酸アパタイトを調製する
には、例えば常圧で、水酸アパタイトを炭酸ガス中にお
いて約１０００℃に加熱する方法等の公知の方法により
製造することができる。また形状を粒状又は粉状等にす
るには、公知の噴霧乾燥による造粒、破砕造粒等の方
法、回転転動造粒法等により行うことができる。
には、例えば常圧で、水酸アパタイトを炭酸ガス中にお
いて約１０００℃に加熱する方法等の公知の方法により
製造することができる。また形状を粒状又は粉状等にす
るには、公知の噴霧乾燥による造粒、破砕造粒等の方
法、回転転動造粒法等により行うことができる。
【００１３】本発明の吸着剤Ａを使用するには、例えば
吸着剤Ａをカラム等の筒状物に充填し、活性型ＴＧＦ−
β1含有液を該筒状物内に流し込み、通過させる方法等
により選択的に活性型ＴＧＦ−β1を吸着させることが
できる。
吸着剤Ａをカラム等の筒状物に充填し、活性型ＴＧＦ−
β1含有液を該筒状物内に流し込み、通過させる方法等
により選択的に活性型ＴＧＦ−β1を吸着させることが
できる。
【００１４】本発明の活性型ＴＧＦ−β1の検査法で
は、まず前記吸着剤Ａに、活性型ＴＧＦ−β1含有液を
接触させて、活性型ＴＧＦ−β1を選択的に吸着させ
る。この吸着は、前記カラム等を利用した方法、遠心器
の遠心間中央に吸着剤Ａを充填し、遠心器を作動させな
がら、活性型ＴＧＦ−β1含有液を流し込む方法等によ
り行うことができる。
は、まず前記吸着剤Ａに、活性型ＴＧＦ−β1含有液を
接触させて、活性型ＴＧＦ−β1を選択的に吸着させ
る。この吸着は、前記カラム等を利用した方法、遠心器
の遠心間中央に吸着剤Ａを充填し、遠心器を作動させな
がら、活性型ＴＧＦ−β1含有液を流し込む方法等によ
り行うことができる。
【００１５】次に本発明の検査法では、吸着された活性
型ＴＧＦ−β1を緩衝液により吸着剤Ａから溶出させ
る。該緩衝液としては、KH3PO4緩衝液等のリン酸緩衝液
等を挙げることができ、その濃度は、活性型ＴＧＦ−β
1が吸着剤Ａから溶出する濃度であれば特に限定される
ものではないが、具体的にはリン酸濃度が２００〜３５
０ｍＭの範囲が好ましい。また前記溶出を行うには、活
性型ＴＧＦ−β1が吸着した吸着剤Ａを充填したカラム
等の筒状物中に、緩衝液を流し込み通過させる方法等に
より実施できる。この際緩衝液の濃度を変化させながら
行うリニアグラジェント法により溶出させ、流出する画
分をそれぞれ回収して後述する濃度測定を行うことによ
り、活性型ＴＧＦ−β1含有液中の活性型ＴＧＦ−β1の
明瞭な濃度を定量することができる。
型ＴＧＦ−β1を緩衝液により吸着剤Ａから溶出させ
る。該緩衝液としては、KH3PO4緩衝液等のリン酸緩衝液
等を挙げることができ、その濃度は、活性型ＴＧＦ−β
1が吸着剤Ａから溶出する濃度であれば特に限定される
ものではないが、具体的にはリン酸濃度が２００〜３５
０ｍＭの範囲が好ましい。また前記溶出を行うには、活
性型ＴＧＦ−β1が吸着した吸着剤Ａを充填したカラム
等の筒状物中に、緩衝液を流し込み通過させる方法等に
より実施できる。この際緩衝液の濃度を変化させながら
行うリニアグラジェント法により溶出させ、流出する画
分をそれぞれ回収して後述する濃度測定を行うことによ
り、活性型ＴＧＦ−β1含有液中の活性型ＴＧＦ−β1の
明瞭な濃度を定量することができる。
【００１６】次いで本発明の検査法では、前記回収した
緩衝液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を測定して、前記活
性型ＴＧＦ−β1含有液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を測
定することができる。この活性型ＴＧＦ−β1濃度の測
定は、例えば紫外線吸光度測定法、タンパク質発色試薬
等を用いた発色による定量法等により行うことができ
る。
緩衝液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を測定して、前記活
性型ＴＧＦ−β1含有液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を測
定することができる。この活性型ＴＧＦ−β1濃度の測
定は、例えば紫外線吸光度測定法、タンパク質発色試薬
等を用いた発色による定量法等により行うことができ
る。
【００１７】本発明の癌の検査法では、前記活性型ＴＧ
Ｆ−β1の検査法を利用して行うことができ、前記検査
法における、吸着剤Ａに活性型ＴＧＦ−β1含有液を接
触させる代わりに、体液を接触させる以外は同様な方法
によって行うことができる。前記体液としては、ヒトを
含む動物から採取した血液等を挙げることができ、好ま
しくは血清及び／又は血漿からアルブミンを除いたもの
等とし接触させるのが望ましい。
Ｆ−β1の検査法を利用して行うことができ、前記検査
法における、吸着剤Ａに活性型ＴＧＦ−β1含有液を接
触させる代わりに、体液を接触させる以外は同様な方法
によって行うことができる。前記体液としては、ヒトを
含む動物から採取した血液等を挙げることができ、好ま
しくは血清及び／又は血漿からアルブミンを除いたもの
等とし接触させるのが望ましい。
【００１８】
【発明の効果】本発明の吸着剤では、ＯＨ基炭酸水酸ア
パタイトを有効成分とするので、活性型ＴＧＦ−β1を
選択的に吸着することができる。また本発明の検査法で
は前記吸着剤を利用し、緩衝液により吸着された活性型
ＴＧＦ−β1を溶出させるので、測定する溶液中の活性
型ＴＧＦ−β1濃度を、例えば濃度が微量である場合に
も有効に測定することができる。更に本発明の癌の検査
法では、前記検査法を利用し、直接動物から採取した体
液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を測定することができる
ので、従来のＥＬＩＳＡ法等による前処理を必要とせず
に、容易にしかも短時間で明瞭な癌の検査を行うことが
できる。
パタイトを有効成分とするので、活性型ＴＧＦ−β1を
選択的に吸着することができる。また本発明の検査法で
は前記吸着剤を利用し、緩衝液により吸着された活性型
ＴＧＦ−β1を溶出させるので、測定する溶液中の活性
型ＴＧＦ−β1濃度を、例えば濃度が微量である場合に
も有効に測定することができる。更に本発明の癌の検査
法では、前記検査法を利用し、直接動物から採取した体
液中の活性型ＴＧＦ−β1濃度を測定することができる
ので、従来のＥＬＩＳＡ法等による前処理を必要とせず
に、容易にしかも短時間で明瞭な癌の検査を行うことが
できる。
【００１９】
【実施例】以下実施例及び比較例により更に詳細に説明
するが本発明はこれらに限定されるものではない。
するが本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２０】
【実施例１】水酸アパタイトのＯＨ基が、３．４重量％
（水酸アパタイト全量に対して）ＣＯ3基で置換された
粒径１２．３μｍのＯＨ基炭酸水酸アパタイト２ｇを、
活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤として、純水１５ｍｌ中に
懸濁し、２０００kg/cm2、約４．５ｍｌ／分の条件で流
し込む湿式法により、１５０ｍｍ×４ｍｍφのステンレ
ス製のカラムに充填した。標準試料として、活性型ＴＧ
Ｆ−β1 １μｇを５ｍＭ ＨＣｌ ３０μｌに溶解し、活
性型ＴＧＦ−β1溶液を調製した。この活性型ＴＧＦ−
β1溶液２０μｌを、サンプルインジェクタから前記Ｏ
Ｈ基炭酸水酸アパタイトを充填したカラムに注入した
後、０．４ｍｌ／分で純水を流し、２０分間定着処理を
行った。次いで０Ｍ〜０．３５Ｍ KH3PO4(pH7.4)緩衝液
各６ｍｌを前記カラムに流し、リニアグラジェント法に
より吸着物を溶出させた。得られた溶出液中の吸着物を
紫外線（ＵＶ）検出器（２８０ｎｍ）により検出した。
その結果を図１に示す。
（水酸アパタイト全量に対して）ＣＯ3基で置換された
粒径１２．３μｍのＯＨ基炭酸水酸アパタイト２ｇを、
活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤として、純水１５ｍｌ中に
懸濁し、２０００kg/cm2、約４．５ｍｌ／分の条件で流
し込む湿式法により、１５０ｍｍ×４ｍｍφのステンレ
ス製のカラムに充填した。標準試料として、活性型ＴＧ
Ｆ−β1 １μｇを５ｍＭ ＨＣｌ ３０μｌに溶解し、活
性型ＴＧＦ−β1溶液を調製した。この活性型ＴＧＦ−
β1溶液２０μｌを、サンプルインジェクタから前記Ｏ
Ｈ基炭酸水酸アパタイトを充填したカラムに注入した
後、０．４ｍｌ／分で純水を流し、２０分間定着処理を
行った。次いで０Ｍ〜０．３５Ｍ KH3PO4(pH7.4)緩衝液
各６ｍｌを前記カラムに流し、リニアグラジェント法に
より吸着物を溶出させた。得られた溶出液中の吸着物を
紫外線（ＵＶ）検出器（２８０ｎｍ）により検出した。
その結果を図１に示す。
【００２１】図１は、活性型ＴＧＦ−β1のみを含有す
る標準試料から得られた検出結果であるので、図１に表
れるピークが活性型ＴＧＦ−β1に相当するピークであ
る。
る標準試料から得られた検出結果であるので、図１に表
れるピークが活性型ＴＧＦ−β1に相当するピークであ
る。
【００２２】
【実施例２】３０ｋＤａの限外濾過膜により濾過した健
常人の血清及び血漿３検体と、癌患者の血清３検体を、
各々２０μｌずつサンプルインジェクタから、実施例１
で調製したＯＨ基炭酸水酸アパタイト吸着剤を充填した
カラムに注入した。次いで実施例１と同様に溶出液中の
吸着物を検出した。その結果を図２及び図３に示す。
常人の血清及び血漿３検体と、癌患者の血清３検体を、
各々２０μｌずつサンプルインジェクタから、実施例１
で調製したＯＨ基炭酸水酸アパタイト吸着剤を充填した
カラムに注入した。次いで実施例１と同様に溶出液中の
吸着物を検出した。その結果を図２及び図３に示す。
【００２３】図２及び図３より、表れているピーク位置
が、図１と一致していることからこれらのピークが活性
型ＴＧＦ−β1であることが確認できた。また図２と図
３とのピークの大きさを比較すると、図３のピークが図
２のピークの約６〜１０倍あり、癌患者血清から検出さ
れたピークが健常人血清及び血漿から検出されたピーク
より大きいことが確認できた。このことより癌の検査に
極めて明瞭な結果を示すことが判った。
が、図１と一致していることからこれらのピークが活性
型ＴＧＦ−β1であることが確認できた。また図２と図
３とのピークの大きさを比較すると、図３のピークが図
２のピークの約６〜１０倍あり、癌患者血清から検出さ
れたピークが健常人血清及び血漿から検出されたピーク
より大きいことが確認できた。このことより癌の検査に
極めて明瞭な結果を示すことが判った。
【００２４】
【比較例１】湿式合成、乾燥造粒した粒径１２．３μｍ
の水酸アパタイト粉末を９００℃で３時間焼成し、水酸
アパタイト吸着剤を調製した。得られた吸着剤を実施例
１と同様にカラムに充填し、実施例１と同様な標準試
料、実施例２と同様な健常人の血清及び血漿３検体、並
びに癌患者の血清３検体を２０μｌずつ、各々をカラム
に注入して実施例１及び２と同様な検出測定を行った。
その結果を図４〜６に示す。
の水酸アパタイト粉末を９００℃で３時間焼成し、水酸
アパタイト吸着剤を調製した。得られた吸着剤を実施例
１と同様にカラムに充填し、実施例１と同様な標準試
料、実施例２と同様な健常人の血清及び血漿３検体、並
びに癌患者の血清３検体を２０μｌずつ、各々をカラム
に注入して実施例１及び２と同様な検出測定を行った。
その結果を図４〜６に示す。
【００２５】図４より水酸アパタイト吸着剤も、活性型
ＴＧＦ−β1を検出することができることが判った。し
かし図５及び図６の結果を図２及び図３の結果と比較す
ると、実施例２で確認されたような健常人と癌患者との
ピークの差が表れておらず、水酸アパタイトでは、ＯＨ
基炭酸水酸アパタイトのように活性型ＴＧＦ−β1の定
量はできず、癌の検査を明確に行うことはできないこと
が判った。
ＴＧＦ−β1を検出することができることが判った。し
かし図５及び図６の結果を図２及び図３の結果と比較す
ると、実施例２で確認されたような健常人と癌患者との
ピークの差が表れておらず、水酸アパタイトでは、ＯＨ
基炭酸水酸アパタイトのように活性型ＴＧＦ−β1の定
量はできず、癌の検査を明確に行うことはできないこと
が判った。
【図１】実施例１で得られた溶出液の紫外線検出器（２
８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマトグラムであ
る。
８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマトグラムであ
る。
【図２】図２（ａ）〜（ｃ）は、実施例２における健常
人の血清及び血漿３検体を用いて得られた溶出液の紫外
線検出器（２８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマト
グラムである。
人の血清及び血漿３検体を用いて得られた溶出液の紫外
線検出器（２８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマト
グラムである。
【図３】図３（ａ）〜（ｃ）は、実施例２における癌患
者の血清３検体を用いて得られた溶出液の紫外線検出器
（２８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマトグラムで
ある。
者の血清３検体を用いて得られた溶出液の紫外線検出器
（２８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマトグラムで
ある。
【図４】比較例１で合成した水酸アパタイト吸着剤を用
いて、実施例１で用いた標準試料からの溶出液を紫外線
検出器（２８０ｎｍ）によって検出した結果を示すクロ
マトグラムである。
いて、実施例１で用いた標準試料からの溶出液を紫外線
検出器（２８０ｎｍ）によって検出した結果を示すクロ
マトグラムである。
【図５】図５（ａ）〜（ｃ）は、比較例１における健常
人の血清及び血漿３検体を用いて得られた溶出液の紫外
線検出器（２８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマト
グラムである。
人の血清及び血漿３検体を用いて得られた溶出液の紫外
線検出器（２８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマト
グラムである。
【図６】図６（ａ）〜（ｃ）は、比較例１における癌患
者の血清３検体を用いて得られた溶出液の紫外線検出器
（２８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマトグラムで
ある。
者の血清３検体を用いて得られた溶出液の紫外線検出器
（２８０ｎｍ）による検出結果を示すクロマトグラムで
ある。
Claims (3)
- 【請求項１】 水酸アパタイトのＯＨ基の一部又は全部
がＣＯ3基で置換されたＯＨ基炭酸水酸アパタイトを有
効成分とする活性型ＴＧＦ−β1の吸着剤。 - 【請求項２】 請求項１記載の吸着剤に、活性型ＴＧＦ
−β1含有液を接触させて活性型ＴＧＦ−β1を選択的に
吸着させた後、吸着された活性型ＴＧＦ−β1を緩衝液
により溶出させ、前記活性型ＴＧＦ−β1含有液中の活
性型ＴＧＦ−β1濃度を測定することを特徴とする活性
型ＴＧＦ−β1の検査法。 - 【請求項３】 請求項１記載の吸着剤に、体液を接触さ
せて活性型ＴＧＦ−β1を選択的に吸着させた後、吸着
された活性型ＴＧＦ−β1を緩衝液により溶出させ、前
記体液中の活性型ＴＧＦ−β1を検出することを特徴と
する癌の検査法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7005761A JPH08193997A (ja) | 1995-01-18 | 1995-01-18 | 活性型ＴＧＦ−β１の吸着剤、活性型ＴＧＦ−β１の検査法及び癌の検査法 |
| EP96100242A EP0722773A1 (en) | 1995-01-18 | 1996-01-10 | Adsorbent for activated TGF-beta1, method for detecting activated TGF-beta1, and method for detecting cancer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7005761A JPH08193997A (ja) | 1995-01-18 | 1995-01-18 | 活性型ＴＧＦ−β１の吸着剤、活性型ＴＧＦ−β１の検査法及び癌の検査法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08193997A true JPH08193997A (ja) | 1996-07-30 |
Family
ID=11620117
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7005761A Withdrawn JPH08193997A (ja) | 1995-01-18 | 1995-01-18 | 活性型ＴＧＦ−β１の吸着剤、活性型ＴＧＦ−β１の検査法及び癌の検査法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0722773A1 (ja) |
| JP (1) | JPH08193997A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0980042A (ja) * | 1995-09-12 | 1997-03-28 | Mitsubishi Materials Corp | 活性型ＴＧＦ−β１検査用カートリッジカラム及び癌の検査法 |
| JP2001218840A (ja) * | 2000-02-14 | 2001-08-14 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | トランスフォーミング増殖因子βの吸着材、吸着除去方法および吸着器 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62100661A (ja) | 1985-10-27 | 1987-05-11 | Tsuneo Kobayashi | 癌の発見方法 |
| JPH01135792A (ja) * | 1987-11-20 | 1989-05-29 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 核酸の分離・精製方法 |
| JPH0743358B2 (ja) * | 1988-05-16 | 1995-05-15 | 三井東圧化学株式会社 | 液体クロマトグラフィー用充填材及びカラム |
| JP3452946B2 (ja) | 1992-02-19 | 2003-10-06 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗ＴＧＦ−βマスキングプロテインモノクローナル抗体 |
| CA2119090A1 (en) * | 1993-03-26 | 1994-09-27 | Wayne R. Gombotz | Compositions for controlled release of biologically active tgf-.beta. |
| JPH0731875A (ja) * | 1993-07-19 | 1995-02-03 | Mitsubishi Materials Corp | ＴＧＦ−▲β１▼の吸着剤及びＴＧＦ−▲β１▼の検査方法 |
-
1995
- 1995-01-18 JP JP7005761A patent/JPH08193997A/ja not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-01-10 EP EP96100242A patent/EP0722773A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0722773A1 (en) | 1996-07-24 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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