JPH0987184A - 採卵鳥類の免疫感作法 - Google Patents
採卵鳥類の免疫感作法Info
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- JPH0987184A JPH0987184A JP7264691A JP26469195A JPH0987184A JP H0987184 A JPH0987184 A JP H0987184A JP 7264691 A JP7264691 A JP 7264691A JP 26469195 A JP26469195 A JP 26469195A JP H0987184 A JPH0987184 A JP H0987184A
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Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 採卵鳥類への目的抗原の免疫感作法に関す
る。 【解決手段】 目的抗原を経口投与することを特徴とす
る採卵鳥類の免疫感作法であつて、前記目的抗原を鉱物
油と乳脂肪球皮膜又は乳脂肪球皮膜由来乳化蛋白質で乳
化して作成する。
る。 【解決手段】 目的抗原を経口投与することを特徴とす
る採卵鳥類の免疫感作法であつて、前記目的抗原を鉱物
油と乳脂肪球皮膜又は乳脂肪球皮膜由来乳化蛋白質で乳
化して作成する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は採卵鳥類への目的
抗原の免疫感作法に関する。
抗原の免疫感作法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年鳥類の卵黄成分の研究が進み、血清
中に産生された抗体が卵黄に移行し、蓄えられることが
明らかにされている。この卵黄中に存在する移行抗体の
抗体価や蛋白質性状は血清中に存在するものと同一であ
ることから、これを医薬品や食品に積極的に利用しよう
との試みが高まり、簡便な卵黄からの抗体調整法が確立
されている（Bade, H. et. al.:J. Immunol. Methods,
72,421(1984), Polson,A. et. al.:Immunol. Commun.,
9,475(1980), Jensenius, J. C. et. al.:J.Immunol. M
ethods, 46,63(1981), Hatta, H. et. al.:Agric. Bio
l. Chem.,54(10), 2531(1990), 谷元孝他、日本食品科
学工学会誌、42,225(1995)。
中に産生された抗体が卵黄に移行し、蓄えられることが
明らかにされている。この卵黄中に存在する移行抗体の
抗体価や蛋白質性状は血清中に存在するものと同一であ
ることから、これを医薬品や食品に積極的に利用しよう
との試みが高まり、簡便な卵黄からの抗体調整法が確立
されている（Bade, H. et. al.:J. Immunol. Methods,
72,421(1984), Polson,A. et. al.:Immunol. Commun.,
9,475(1980), Jensenius, J. C. et. al.:J.Immunol. M
ethods, 46,63(1981), Hatta, H. et. al.:Agric. Bio
l. Chem.,54(10), 2531(1990), 谷元孝他、日本食品科
学工学会誌、42,225(1995)。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし目的抗原の免疫
感作法は従来一般的に用いられている目的抗原をアジュ
バンド化し、皮下又は筋肉中に投与する方法である。こ
のような方法での採卵鳥類への免疫は、特殊技能や器具
を有する施設が必要であるばかりでなく、抗原感作採卵
鳥類の感染確率の上昇、抗原の卵への移行など種々の問
題がある。
感作法は従来一般的に用いられている目的抗原をアジュ
バンド化し、皮下又は筋肉中に投与する方法である。こ
のような方法での採卵鳥類への免疫は、特殊技能や器具
を有する施設が必要であるばかりでなく、抗原感作採卵
鳥類の感染確率の上昇、抗原の卵への移行など種々の問
題がある。
【０００４】哺乳動物での抗原の経口感作は、経口ワク
チンやPoly(lactide-co-glycolide)microparticlesをキ
ャリア−として用いる方法(O'Hagan, D.T., Rahaman,
D.Jeffery, H., Sharif, S. and Challacombe, S.J.:In
ternational J. Pharmaceutics, 108,133-139(1994))で
既に立証されている。この経口感作による免疫は抗原が
生体内に輸送されて生じるのではなく、腸管に存在する
パイエル板で非自己認識を受け、抗体が産生されること
が明らかにされている。しかし採卵鳥類での経口感作に
よる免疫の報告はなく、その手法の開発が急がれてい
た。
チンやPoly(lactide-co-glycolide)microparticlesをキ
ャリア−として用いる方法(O'Hagan, D.T., Rahaman,
D.Jeffery, H., Sharif, S. and Challacombe, S.J.:In
ternational J. Pharmaceutics, 108,133-139(1994))で
既に立証されている。この経口感作による免疫は抗原が
生体内に輸送されて生じるのではなく、腸管に存在する
パイエル板で非自己認識を受け、抗体が産生されること
が明らかにされている。しかし採卵鳥類での経口感作に
よる免疫の報告はなく、その手法の開発が急がれてい
た。
【０００５】
【課題を解決するための手段】これらの問題点を解決す
るために抗原の腸管感作法を試み、抗原を鉱物油と乳脂
肪球皮膜又は乳脂肪球皮膜由来乳化蛋白質で乳化し、飼
料に混入し摂取させることでこの発明を確立したもので
ある。
るために抗原の腸管感作法を試み、抗原を鉱物油と乳脂
肪球皮膜又は乳脂肪球皮膜由来乳化蛋白質で乳化し、飼
料に混入し摂取させることでこの発明を確立したもので
ある。
【０００６】
Ａ．抗原の調製及び採卵鶏への免疫 抗原は虫歯の原因菌であるストレプトコッカスミュ−タ
ンス(JCM 5705T株)を用いた。この菌株をチオグリコレ
−トブロス培地（メルク社製）で37℃、48時間培養し、
100℃、10分間の加熱で菌体の不活化処理を行なつた。
菌体を遠心分離(5,000g×10分間)で集め、生理的食塩水
で３回洗浄し、これを抗原とした用いた。10g(湿潤重
量)の抗原に10gの鉱物油と20mlの１％乳脂肪球皮膜又は
乳脂肪球皮膜由来乳化蛋白質を加え、ホモゲナイザ−で
乳化した。この乳化物を粉末飼料に0.1%濃度になるよう
に添加（抗原添加粉末飼料）し、３日間毎に１羽当たり
15gを12週間自由摂取させた。この間、採卵は毎日行な
つた。
ンス(JCM 5705T株)を用いた。この菌株をチオグリコレ
−トブロス培地（メルク社製）で37℃、48時間培養し、
100℃、10分間の加熱で菌体の不活化処理を行なつた。
菌体を遠心分離(5,000g×10分間)で集め、生理的食塩水
で３回洗浄し、これを抗原とした用いた。10g(湿潤重
量)の抗原に10gの鉱物油と20mlの１％乳脂肪球皮膜又は
乳脂肪球皮膜由来乳化蛋白質を加え、ホモゲナイザ−で
乳化した。この乳化物を粉末飼料に0.1%濃度になるよう
に添加（抗原添加粉末飼料）し、３日間毎に１羽当たり
15gを12週間自由摂取させた。この間、採卵は毎日行な
つた。
【０００７】Ｂ．抗体の調製 谷元らの方法（谷元孝他、日本食品科学工学会誌、42,2
25-229(1995))に準じ、卵黄を脱イオン水で２倍に希釈
し、均質化した。この溶液に最終カゼインナトリウム濃
度が0.6%になるように１％カゼインナトリウム溶液を加
え、30分間室温に放置し、生じた凝集物を遠心分離（1
0,000g×30分間)で除去した。得られた上清液を脱イオ
ン水に対して透析した後、凍結乾燥し、抗体調製物とし
て用いた。
25-229(1995))に準じ、卵黄を脱イオン水で２倍に希釈
し、均質化した。この溶液に最終カゼインナトリウム濃
度が0.6%になるように１％カゼインナトリウム溶液を加
え、30分間室温に放置し、生じた凝集物を遠心分離（1
0,000g×30分間)で除去した。得られた上清液を脱イオ
ン水に対して透析した後、凍結乾燥し、抗体調製物とし
て用いた。
【０００８】Ｃ．抗体価の測定 菌体の凝集反応と生菌の増殖抑制で抗体価を測定した。 １．凝集反応 抗体溶液(5mg/ml.PBS)をPBSで２n倍希釈
を調製し、それぞれの100ulと抗原液100ulをＵ字底マイ
クロプレ−トに入れ、混合した後、室温下で３時間又は
低温下で16時間反応させた。凝集抗体価は最大希釈倍数
率の逆数で表示した。 ２．増殖抑制 チオグリコレ−トブロス培地で37℃、24
時間予備培養したストレプトコッカスミュ−タンスを96
穴マイクロプレ−トの各穴104個/mlの菌体溶液0.2mlを
注入し、各濃度の抗体溶液をそれぞれ0.1mlずつ添加し
た。５％CO2、37℃で24時間培養し、生育の状態を濁度
(660nmの吸光度)と肉眼的判定法で測定した。生育が認
められない最少抗体濃度を最少育成阻止濃度(MTC)とし
て表示した。
を調製し、それぞれの100ulと抗原液100ulをＵ字底マイ
クロプレ−トに入れ、混合した後、室温下で３時間又は
低温下で16時間反応させた。凝集抗体価は最大希釈倍数
率の逆数で表示した。 ２．増殖抑制 チオグリコレ−トブロス培地で37℃、24
時間予備培養したストレプトコッカスミュ−タンスを96
穴マイクロプレ−トの各穴104個/mlの菌体溶液0.2mlを
注入し、各濃度の抗体溶液をそれぞれ0.1mlずつ添加し
た。５％CO2、37℃で24時間培養し、生育の状態を濁度
(660nmの吸光度)と肉眼的判定法で測定した。生育が認
められない最少抗体濃度を最少育成阻止濃度(MTC)とし
て表示した。
【０００９】Ｄ．結果 抗体調製物のストレプトコッカスミュ−タンスに対する
凝集抗体価と増殖抑制作用を表１と図１に示した。表１
に示したように、凝集抗体価は２週目頃から徐々に上昇
し始め、４週目から実験終了時の12週目まで256で安定
していた。ポジティブコントロ−ル(アジュバンド化抗
原を筋肉中に１週間間隔で投与し、抗原無添加飼料で飼
育）でも同様に４週目からの凝集抗体価は256であつ
た。
凝集抗体価と増殖抑制作用を表１と図１に示した。表１
に示したように、凝集抗体価は２週目頃から徐々に上昇
し始め、４週目から実験終了時の12週目まで256で安定
していた。ポジティブコントロ−ル(アジュバンド化抗
原を筋肉中に１週間間隔で投与し、抗原無添加飼料で飼
育）でも同様に４週目からの凝集抗体価は256であつ
た。
【００１０】
【表１】
【００１１】これは抗原の経口投与による腸管感作法で
も筋肉中に投与する従来法と同じように免疫できること
を示しており、抗原を一切投与していないネガティブコ
ントロ−ルの抗体価が認められないことから、用いた抗
原に特異的な抗体が産生されていると考えられる。また
実験開始後４週目の卵から調製した抗体による菌の増殖
抑制作用も、図１に示したように、実験群とポジティブ
コントロ−ル群に差異を認めることができず、それぞれ
添加抗体濃度0.08%で50%、0.3%で100%菌の増殖が抑制さ
れ、MICは3,000ppmであつた。またネガティブコントロ
−ルの卵から調製した抗体によるストレプトコッカスミ
ュ−タンスの増殖抑制効果は全く認められなかつた。
も筋肉中に投与する従来法と同じように免疫できること
を示しており、抗原を一切投与していないネガティブコ
ントロ−ルの抗体価が認められないことから、用いた抗
原に特異的な抗体が産生されていると考えられる。また
実験開始後４週目の卵から調製した抗体による菌の増殖
抑制作用も、図１に示したように、実験群とポジティブ
コントロ−ル群に差異を認めることができず、それぞれ
添加抗体濃度0.08%で50%、0.3%で100%菌の増殖が抑制さ
れ、MICは3,000ppmであつた。またネガティブコントロ
−ルの卵から調製した抗体によるストレプトコッカスミ
ュ−タンスの増殖抑制効果は全く認められなかつた。
【００１２】これらのことから、本発明法による採卵鳥
類への抗原の経口投与による免疫感作法は、従来行なわ
れている皮下又は筋肉内投与による免疫感作法に比して
何ら遜色はなく、従来法よりも５〜10倍量の抗原量を必
要とするものの、より簡便な手法で、安全性、経済性に
も優れた特異抗体を製造することが可能になつた。
類への抗原の経口投与による免疫感作法は、従来行なわ
れている皮下又は筋肉内投与による免疫感作法に比して
何ら遜色はなく、従来法よりも５〜10倍量の抗原量を必
要とするものの、より簡便な手法で、安全性、経済性に
も優れた特異抗体を製造することが可能になつた。
【００１３】上記した本発明の実施の形態においては、
抗原としてストレプトコッカスミュ−タンスを用いた
が、これは本発明を説明するためだけのものであり、抗
原の種類を特に規定するものではない。また本発明法に
より、鳥類の伝染病に対するワクチネ−ションも非常に
簡単に行なうことができる。
抗原としてストレプトコッカスミュ−タンスを用いた
が、これは本発明を説明するためだけのものであり、抗
原の種類を特に規定するものではない。また本発明法に
より、鳥類の伝染病に対するワクチネ−ションも非常に
簡単に行なうことができる。
【００１４】
【発明の効果】上述したようにこの発明の免疫感作法に
よると、採卵鳥類の免疫感作を極めて容易に行なうこと
ができ、これによつて鳥類卵黄からの特異抗体の製造や
伝染病に対するワクチネ−ションを簡便に行なえるよう
になつた。
よると、採卵鳥類の免疫感作を極めて容易に行なうこと
ができ、これによつて鳥類卵黄からの特異抗体の製造や
伝染病に対するワクチネ−ションを簡便に行なえるよう
になつた。
【図１】この発明によるストレプトコッカスミュ−タン
スの生育阻害状況を示すグラフである。
スの生育阻害状況を示すグラフである。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成７年９月２６日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００８】Ｃ．抗体価の測定 菌体の凝集反応と生菌の増殖抑制で抗体価を測定した。 １．凝集反応 抗体溶液（５ｍｇ／ｍｌ．ＰＢＳ）をＰ
ＢＳで２ｎ倍希釈を調製し、それぞれの１００ｕｌと抗
原液１００ｕｌをＵ字底マイクロプレートに入れ、混合
した後、室温下で３時間又は低温下で１６時間反応させ
た。凝集抗体価は最大希釈倍数率の逆数で表示した。 ２．増殖抑制 チオグリコレートブロス培地で３７℃、
２４時間予備培養したストレプトコッカスミュータンス
を９６穴マイクロプレートの各穴１０４個／ｍｌの菌体
溶液０．２ｍｌを注入し、各濃度の抗体溶液をそれぞれ
０．１ｍｌずつ添加した。５％ＣＯ２、３７℃で２４時
間培養し、生育の状態を濁度（６６０ｎｍの吸光度）と
肉眼的判定法で測定した。生育が認められない最少抗体
濃度を最少育成阻止濃度（ＭＩＣ）として表示した。
ＢＳで２ｎ倍希釈を調製し、それぞれの１００ｕｌと抗
原液１００ｕｌをＵ字底マイクロプレートに入れ、混合
した後、室温下で３時間又は低温下で１６時間反応させ
た。凝集抗体価は最大希釈倍数率の逆数で表示した。 ２．増殖抑制 チオグリコレートブロス培地で３７℃、
２４時間予備培養したストレプトコッカスミュータンス
を９６穴マイクロプレートの各穴１０４個／ｍｌの菌体
溶液０．２ｍｌを注入し、各濃度の抗体溶液をそれぞれ
０．１ｍｌずつ添加した。５％ＣＯ２、３７℃で２４時
間培養し、生育の状態を濁度（６６０ｎｍの吸光度）と
肉眼的判定法で測定した。生育が認められない最少抗体
濃度を最少育成阻止濃度（ＭＩＣ）として表示した。
Claims (3)
- 【請求項１】 目的抗原を経口投与することを特徴とす
る採卵鳥類の免疫感作法。 - 【請求項２】 目的抗原を鉱物油と乳脂肪球皮膜で乳化
して作成することを特徴とする請求項１記載の免疫感作
法。 - 【請求項３】 目的抗原を鉱物油と乳脂肪球皮膜由来乳
化蛋白質で乳化して作成することを目的とする請求項１
記載の免疫感作法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7264691A JPH0987184A (ja) | 1995-09-20 | 1995-09-20 | 採卵鳥類の免疫感作法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7264691A JPH0987184A (ja) | 1995-09-20 | 1995-09-20 | 採卵鳥類の免疫感作法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0987184A true JPH0987184A (ja) | 1997-03-31 |
Family
ID=17406862
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7264691A Pending JPH0987184A (ja) | 1995-09-20 | 1995-09-20 | 採卵鳥類の免疫感作法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0987184A (ja) |
-
1995
- 1995-09-20 JP JP7264691A patent/JPH0987184A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051220 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060411 |