JPH10104137A - 顕微鏡標本の封入方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 薄切した試料８をスライドガラス１０に貼着
し、封入材９を介してカバーガラス１２を、試料を覆っ
て、スライドガラスに貼着する顕微鏡標本の封入方法に
おいて、カバーガラス１２の下に気泡が生じないように
する。 【解決手段】 薄切した試料８を貼着し、封入材９で覆
ったスライドガラス１０をチャンバ１５で気密に囲み、
カバーガラス１２を吸着パッド３で吸着してチャンバ内
に保持し、チャンバ１５内を排気し真空にしてカバーガ
ラス１２をスライドガラス１０の上に落下させる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明の顕微鏡標本の封入
方法は、例えば生体から採取した組織片等を顕微鏡標本
に作製するための方法に関し、特に、薄切してスライド
ガラスに貼着した組織片を接着剤である封入材で覆い、
これにカバーガラスを重ねて、組織片が空気に曝露しな
いようにして顕微鏡標本を作製する封入操作を良好に行
ない得させる顕微鏡標本の封入方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】病院、研究所等で診断、研究のため、病
人や動物の患部その他から採取した組織片を顕微鏡で観
察することが行なわれているが、それには顕微鏡標本
（以下、単に標本という）を作製しなければならない。

【０００３】標本を作製するには、生物組織片を薄切し
た試料をスライドガラスに貼着し、見易いために染色
し、その上に試料を覆ってカバーガラスを重ねて取り付
ける。カバーガラスを取り付けるには、スライドガラス
に貼着した試料の上に、粘稠な接着剤である封入材を滴
下し、封入材を試料全体に広げ、この上からカバーガラ
スをスライドガラスに重ね、封入材を固化させて行な
う。スライドガラスは１mm程度の厚さを持つが、カバー
ガラスの厚さは、ＪＩＳ Ｒ３７０２−１９７８に規定
されているように、０．０６〜０．２５mmの極めて薄い
ものである。

【０００４】カバーガラスを試料に重ねる際に、カバー
ガラスの下に空気が入り、気泡を生じると、顕微鏡観察
が妨げられるので、カバーガラスをスライドガラスに重
ねるときは、空気の介入を阻止しなければならない。試
料の上に滴下した粘稠な封入材は、次第に広がって試料
を覆うに到るが、カバーガラスを重ねるには、この広が
り方とタイミングを合せると共にカバーガラスを精度よ
く動かして行なわなければならない。封入材の広がり速
度より早くカバーガラスを動かしたり、試料に対する位
置関係がずれたりすると標本に空気が介入して気泡とな
って顕微鏡観察が阻害される。そのためにカバーガラス
の取り付け方法には従来も種々の工夫がなされていた。

【０００５】図９〜図１１は気泡を介入させることなく
カバーガラスをスライドガラスに重ねようとする従来の
方法を行なう装置の１例を示し、特公平３−４０３６７
号公報に記載されたものである。この装置を図９〜図１
１により説明すると、保持体１の左端に、真空源に接続
される管２を取り付ける。その下端には吸着パッド３が
取り付けられている。保持体１の右端には押圧棒４を縦
動自在に設け、その下端の押圧体５と保持体１との間に
圧縮スプリング６を介在させて、押圧体５を下方に押し
出している。７は押圧棒４の下方突出を制限するために
押圧棒４に螺着したナットである。試料８を貼着し封入
材９を滴下したスライドガラス１０は載置台１１に載せ
られる。

【０００６】図９（第一段階）のようにカバーガラス１
２の左端を吸着パッド３により吸着する。カバーガラス
の右端は、スプリング６に押されて下方に突出する押圧
体５に押されて吸着パッド３より下降するので、カバー
ガラス１２は傾斜して吸着パッド３に吸着される。

【０００７】この状態で保持体１を下降させると、図１
０（第二段階）のように、先ずカバーガラス１２の右端
がスライドガラス１０に接近し、封入材９を左方へ押
す。

【０００８】更に保持体１を下降させると、図１１（第
三段階）のように、封入材９が左方へ押し広げられて試
料８を覆うに到り、更に保持体１を下降させると、封入
材９がカバーガラスの下面全体に広がると共にカバーガ
ラスが吸着パッド３と押圧体５とによりスライドガラス
に押し付けられてカバーガラスの貼着が終る。

【０００９】図１２は、実開昭６１−５６６２０号公報
に記載された従来装置の別例を示し、カバーガラス１２
の中央部を吸着パッド３で吸着して管２を下降させ、カ
バーガラスを水平状態のまま下降させる。カバーガラス
の左端は、下降の途中で係止片１３に引掛るので、カバ
ーガラス１２は下降と共に傾斜して右端をスライドガラ
ス１０に当接させる。更に吸着パッド３を下降させる
と、カバーガラス１２は湾曲しながら封入材９を左方へ
押し広げる。次に係止片１３を矢印１４の方向に引込め
ると支えを失ったカバーガラス左端は、スライドガラス
１０に重なり、吸着パッド３に押されてスライドガラス
１０に貼着される。

【００１０】以上に例示したように、従来は、スライド
ガラスとカバーガラスとの間に空気が介入しないように
カバーガラスを傾けたり湾曲させつつスライドガラスに
重ねるようにしていた。上記の従来例は、カバーガラス
の片側を開いた状態でスライドガラスに重ねるものであ
るが、カバーガラスの中央部を保持し、両端部を開いた
状態で湾曲させつつカバーガラスをスライドガラスに重
ねる装置も考えられている。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】上記したような従来の
方法は、カバーガラスを微妙に変形させつつ動かさなけ
ればならないため、装置が複雑になり、又、大気中で封
入を行なうため、封入材の広がり方によっては空気が介
入する危険があった。空気介入を避けるためには、カバ
ーガラスとスライドガラスとの位置関係を精度よく合わ
せつつ両ガラスを重ねる必要がある。即ち、粘稠性の封
入材の広がる速さに対してカバーガラスを動かす速さが
速すぎたり、両ガラスの位置関係がずれたりすると空気
が介入し気泡を発生し易い。カバーガラスとスライドガ
ラスとの相対的動きを精度よく行なうことは機構設計や
装置組立の上での困難性が大きい。

【００１２】

【課題を解決する為の手段】本発明は、封入材を介して
カバーガラスをスライドガラスに重ね、試料を封入する
操作を真空中で行なって、空気の存在自体をなくすこと
により空気の介入による気泡発生を防止したものであ
る。カバーガラスの貼着を２００トル以下程度の真空中
で行なえば、気泡の害を十分除くことができる。

【００１３】

【作用】真空中でカバーガラスをスライドガラスに重ね
るから、カバーガラスとスライドガラスとの間に空気が
進入することがなく、カバーガラスをスライドガラスに
重ねる操作の自由度が大きくなる。従ってこの操作を行
なわせるための装置として特別な機構を考慮する必要が
なく、機構設計や組立において精度を著しく高める必要
がない。

【００１４】

【発明の実施の形態】図１〜図３は、本発明の実施の態
様を封入動作に従って原理的に略示したもので、図１
（第一段階）のように、下方を開いた可動のチャンバ１
５に、真空源（真空ポンプ、真空タンク等）に通じる管
２が支持されており、チャンバ１５内は排気口１６によ
り真空源に通じている。管２の先端の吸着パッド３は、
カバーガラス１２を吸着している。チャンバ１５は、試
料８を貼着し封入材９で覆って台１７の上に置いたスラ
イドガラス１０の上方に位置させる。

【００１５】次に図２（第二段階）のように、チャンバ
１５を降下させ、チャンバ１５の下端と台１７の上面と
を気密に当接させ、排気口１６からチャンバ１５内を排
気し、チャンバ内の真空度を高める。

【００１６】チャンバ１５は、スライドガラス１０を覆
う程度の小さなもので済むから、チャンバ内の真空度を
迅速に高めることができる。チャンバ内の真空度が高ま
ると、カバーガラス１２を吸着パッド３に押し付ける力
が弱くなり、カバーガラス１２は図３（第三段階）のよ
うにスライドガラス１０に向けて落下し、試料８、封入
材９を覆うに到る。封入材９はカバーガラスの落下前に
広がり、又はカバーガラスの落下後に広がって試料８の
全体を覆うから、試料８はカバーガラス１２とスライド
ガラス１０との間に空気を介在させることなく封入され
ることになる。

【００１７】上記のようにしてカバーガラスが落下した
後、管２から空気を吹き込み、風圧によりカバーガラス
をスライドガラスに押しつけることができる。この押し
つけを一層強くしたいときは、図３に鎖線で示したよう
に、管２の壁を気密に貫通する押棒１８を押し下げて、
カバーガラス１２をスライドガラス１０に押し付けるこ
とができる。管２と押棒１８との摺動部を耐圧性ベロー
ズ３４で覆うようにすれば、この摺動部の気密を良好に
保つことができる。又は管２をチャンバ内に向けて気密
的に摺動させてもよい。

【００１８】図４のように、吸着パッド３の吸着面積を
Ｓ、吸着パッド内の圧力をＰ₁ 、チャンバ１５内の圧力
をＰ₂ 、カバーガラス１２の質量をｍ、重力の加速度を
ｇ、鉛直下向き方向を正にした長さをｘとすれば、次の
運動方程式ができる。

【００１９】

【数１】

【００２０】

【数２】 の場合にカバーガラスは落下するのでカバーガラスが落
下するときは ｍｇ＋Ｐ₁ Ｓ−Ｐ₂ Ｓ≧０

【００２１】即ち、チャンバ内の圧力が

【数３】 のときカバーガラスは落下することになる。

【００２２】このように、圧力Ｐ₁ 、Ｐ₂ を調整するこ
とにより真空にしたチャンバ１５内でカバーガラス１２
を吸着パッド３から離して落下させることができる。

【００２３】管２、排気口１６を同じ真空源に接続する
と、Ｐ₁ ＝Ｐ₂ になり、この場合もカバーガラス１２
は、自身の重さで落下する訳であるが、薄くて軽いカバ
ーガラスが吸着パッド３に付着して落下し難い場合は、
前記した押棒１８を真空中で縦動させてカバーガラスを
落下させるようにすることもできる。

【００２４】図５〜図７は上記本発明の方法を実施する
ための装置を更に具体化した装置を略示し、図５はカバ
ーガラスを吸着する第一段階の状態を、図６はチャンバ
をスライドガラス上に移動させた第二段階の状態を、図
７はカバーガラスを落下させた第三段階の状態を略示す
る各縦断面図である。

【００２５】図５において、基板１９の左部には上面に
凹凸のある第一の載置台２０が取り付けてあり、カバー
ガラス１２は１枚ずつこれに載せられる。チャンバ１５
には前述の排気口１６がなく、吸着パッド３のついた管
２がチャンバ１５をベローズ３４により気密に且つ縦動
自在に貫通している。管２は可撓耐圧管により真空源２
７に接続される。チャンバ１５を第一の載置台２０を覆
って基板１９に載せたときチャンバ内に空気が進入でき
るように基板１９のチャンバ下端が当る部分には突起２
１を設ける。基板１９の右部には、試料８、封入材９を
添着したスライドガラス１０を載せる第二の載置台２２
を定置し、その周囲にチャンバ１５の下端に当接する環
状の気密保持用のパッキン２３を設ける。基板１９に
は、パッキン２３内に位置する排気口２４を開口させ、
これを管２５により真空源２７に通じさせる。管２５に
は排気口２４を真空源及び大気に切換えて通じさせる第
一の三方弁２６を設ける。管２には、チャンバ１５内
を、真空源２７又は通気抵抗体２８を介して大気に切換
え通じさせる第二の三方弁２９を設ける。この装置によ
り封入作業を行なうには、次のように操作する。

【００２６】(1) 図５のように、第一の載置台２０に１
枚のカバーガラス１２を載せ、この載置台を覆ってチャ
ンバ１５を突起２１に載せる。第二の三方弁２９を真空
源２７に通じさせ、管２を下降させて吸着パッド３をカ
バーガラス１２に近づけると、カバーガラス１２はパッ
ド３に吸着される。チャンバ１５内は、突起２１の間か
ら進入する空気のため大気圧になっている。

【００２７】(2) 次に、図６のように、チャンバ１５
を、スライドガラス１０を載せた第二の載置台２２を覆
う位置に移動させ、気密用パッキン２３に載せる。第一
の三方弁２６を真空源２７に通じさせる。チャンバ１５
の下端は環状のパッキン２３の上に載っているから、チ
ャンバ１５内は真空になる。この状態において管２を下
降させ、カバーガラス１２をスライドガラス１０に近づ
ける。吸着パッド３内とチャンバ１５内とは同じ真空源
２７に通じているので、カバーガラス１２の両面に同じ
真空圧が作用しているから、カバーガラスはその重さの
ためスライドガラス上に落下する訳であるが、吸着パッ
ド３との付着力のためカバーガラスが落下しないおそれ
があるから、更に、図７のように、第二の三方弁２９を
通気抵抗体２８側に通じさせると、微量の空気がパッド
３内に入り、カバーガラスの落下を助長する。更に管２
を下降させれば、カバーガラス１２をスライドガラス１
０に押し付けて、封入材９を一層圧扁し、カバーガラス
をスライドガラスに一層密着させることができる。

【００２８】カバーガラスの取り付けが終ったならば、
第一の三方弁２６を大気側に切換えてチャンバ１５内を
大気圧にすれば、チャンバ１５を第二の載置台２２の上
から離して再び第一の載置台２０の上に移動させること
ができ、更に上記と同様に管２の縦動、両三方弁２６、
２９の切り換え等を行なって、次のカバーガラス貼着を
行なえる。

【００２９】上記の例は、吸着パッド３とチャンバ１５
との真空源を同一にした場合であるが、別個の真空源を
使用し吸着パッドに使用する真空圧を少し高く（Ｐ₁ ＞
Ｐ₂）しておけば、第二の三方弁２９、通気抵抗体２８
は不要になる。

【００３０】上記の例は、吸着パッドによりカバーガラ
スを保持してスライドガラスの上方へ移動させ、真空圧
の変化によりこれを落下させるものであるが、図８に示
す第２例は、カバーガラスを機械的に落下させるもので
ある。即ち、基板１９に四角筒状の気密室３０を固定
し、これに枢軸３１の囲りに回動して開閉される気密蓋
３２を設ける。気密室３０の対向する側壁に、気密室外
からの操作により回動する支持板３３、３３を設ける。
気密室３０内には載置台２２があり、気密室内は管２
５、三方弁２６により真空源２７又は大気に通じさせ
る。

【００３１】この装置により封入を行なうには、先ず載
置台２２に試料を貼着し封入材を滴下したスライドガラ
ス１０を載せ、支持板３３、３３にカバーガラス１２を
載せて気密蓋３２を閉じる。次に三方弁２６を真空源２
７に通じさせて気密室３０内を真空にすると共に支持板
３３を矢印方向に回動させると、カバーガラス１２はス
ライドガラス１０の上に落下して封入が行なわれる。

【００３２】

【発明の効果】本発明は、真空中でカバーガラスをスラ
イドガラスに重ね貼着するものであるから、気泡が介入
するおそれが絶無である。従って、顕微鏡観察の際に気
泡のため観察が妨げられることのない良好な標本を得る
ことができる。機構設計も容易になる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の封入方法の第一段階を原理的に示す縦
断面略図。

【図２】同じく第二段階を示す縦断面略図。

【図３】同じく第三段階を示す縦断面略図。

【図４】吸着パッド内とチャンバ内との圧力によるカバ
ーガラス吸着状態を示す縦断面略図。

【図５】本発明の方法の実施に使用する装置の第１例に
よる封入の第一段階を示す縦断面略図。

【図６】同じく第二段階を示す同様の略図。

【図７】同じく第三段階を示す同様の略図。

【図８】本発明の方法の実施に使用する装置の第２例を
示す縦断面略図。

【図９】従来の封入装置の第１例による封入の第一段階
を示す側面図。

【図１０】同じく第二段階を示す側面図。

【図１１】同じく第三段階を示す側面図。

【図１２】従来の封入装置の第２例を示す側面図。

【符号の説明】

１ 保持体 ２ 管 ３ 吸着パッド ４ 押圧棒 ５ 押圧体 ６ 圧縮スプリング ７ ナット ８ 試料 ９ 封入材 １０ スライドガラス １１ 載置台 １２ カバーガラス １３ 係止片 １４ 矢印 １５ チャンバ １６ 排気口 １７ 台 １８ 押棒 １９ 基板 ２０ 第一の載置台 ２１ 突起 ２２ 第二の載置台 ２３ パッキン ２４ 排気口 ２５ 管 ２６ 第一の三方弁 ２７ 真空源 ２８ 通気抵抗体 ２９ 第二の三方弁 ３０ 気密室 ３１ 枢軸 ３２ 気密蓋 ３３ 支持板 ３４ ベローズ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 薄切した試料を貼着したスライドガラス
   に、封入材を介して試料を覆うカバーガラスを貼着して
   顕微鏡標本とする操作を、真空中で行なうことを特徴と
   する顕微鏡標本の封入方法。