JPH10108682A

JPH10108682A - ポリエステル重合酵素遺伝子及びポリエステルの製造方法

Info

Publication number: JPH10108682A
Application number: JP9199979A
Authority: JP
Inventors: Toshiaki Fukui; 俊昭福居; Yoshiharu Doi; 義治土肥
Original assignee: RIKEN
Current assignee: RIKEN
Priority date: 1996-08-14
Filing date: 1997-07-25
Publication date: 1998-04-28
Anticipated expiration: 2017-07-25
Also published as: DE69728096D1; EP0824148A3; JP3062459B2; US5981257A; EP0824148B1; EP0824148A2; DE69728096T2

Abstract

(57)【要約】【課題】ポリエステル重合酵素遺伝子、該遺伝子を含
む組換えベクター、該組換えベクターを含む形質転換体
及びポリエステルの製造方法の提供。【解決手段】配列番号２で表されるアミノ酸配列又は
該アミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠
失、置換若しくは付加された配列を含み、ポリエステル
重合活性をもたらすポリペプチドをコードするポリエス
テル重合酵素遺伝子、該ポリエステル重合酵素遺伝子
と、該遺伝子の上流及び下流に存在するオープンリーデ
ィングフレームのいずれか一方とを含む遺伝子発現カセ
ット、前記ポリエステル合成酵素遺伝子又は遺伝子発現
カセットを含む組換えベクター、該組換えベクターによ
って形質転換された形質転換体、該形質転換体を培地に
培養し、得られる培養物からポリエステルを採取するこ
とを特徴とするポリエステルの製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ポリエステル重合
酵素遺伝子、該遺伝子を含む組換えベクター、該組換え
ベクターを含む形質転換体及び該形質転換体を用いたポ
リエステルの製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】数多くの微生物は、ポリ−３−ヒドロキ
シブチレート（ P(3HB) ）を生合成し、エネルギーの貯
蔵物質として体内に微粒子状で蓄えることが知られてい
る。微生物体内から抽出した P(3HB) は、180℃程度に
融解温度をもつ熱可塑性高分子であり、優れた生分解性
と生体適合性を示すことから、環境を保全する“グリー
ン”プラスチックとして注目されている。また、 P(3H
B) は各種の微生物を用いて糖や植物油などの再生可能
炭素資源から合成できる“グリーン”プラスチックであ
る。しかしながら、P(3HB)は、高結晶性高分子のために
耐衝撃性が劣るという物性上の問題があり、実用化が見
送られてきた。

【０００３】近年、３−ヒドロキシブチレート(3HB) と
３−ヒドロキシヘキサノエート(3HH) との２成分共重合
ポリエステル P(3HB-co-3HH) およびその製造法につい
て、研究、開発がなされ、たとえば、特開平5-93049号
公報および特開平7-265065号公報にそれぞれ記載されて
いる。これらの公報の P(3HB-co-3HH) 共重合体の製造
法は、土より単離したアエロモナス・キャビエ (Aeromo
nas caviae）を用いてオレイン酸やオリーブオイルから
発酵生産するものである。発酵生産した P(3HB-co-3HH)
共重合体は、3HHユニット分率の増加とともに結晶化度
が低下するために、柔軟な高分子材料となり、熱安定性
や成形性にも優れ、強い糸や透明でしなやかなフィルム
にも加工できることが明らかにされている（Y. Doi, S.
Kitamura, H. Abe, Macromolecules 28, 4822-4823 (1
995)）。しかしながら、特開平5-93049号公報および特
開平7-265065号公報に記載の製造方法では、ポリエステ
ル収率（乾燥微生物体内のポリエステル含有量）が低い
ため、P(3HB-co-3HH) 共重合ポリエステルを高収率で生
産する方法の開発が望まれていた。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ポリエステ
ル重合酵素遺伝子、該遺伝子を含む組換えベクター、該
組換えベクターによって形質転換された形質転換体及び
該形質転換体を用いたポリエステルの製造方法を提供す
ることを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題に
基づいて鋭意研究を行った結果、ポリエステル重合酵素
の遺伝子をクローニングし、さらにポリエステル重合酵
素遺伝子に付随する上流及び下流のオープンリーディン
グフレームのいずれか一方又は両方を欠失させることに
よりポリエステルを高収率で生産することに成功し、本
発明を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明は、配列番号２で表され
るアミノ酸配列又は該アミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された配列を
含み、ポリエステル重合活性をもたらすポリペプチドを
コードするポリエステル重合酵素遺伝子である。該遺伝
子としては、例えば配列番号１で表される塩基配列を含
むものが挙げられる。

【０００７】さらに、本発明は、前記ポリエステル重合
酵素遺伝子と、該遺伝子の上流及び下流に存在するオー
プンリーディングフレームのいずれか一方とを含む遺伝
子発現カセットである。該遺伝子発現カセットにおい
て、ポリエステル重合酵素遺伝子の上流に存在するオー
プンリーディングフレームとしては、配列番号４で表さ
れるアミノ酸配列をコードするＤＮＡを含むもの（例え
ば配列番号３）が挙げられ、ポリエステル重合酵素遺伝
子の下流に存在するオープンリーディングフレームとし
ては、配列番号６で表されるアミノ酸配列又は該アミノ
酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換
若しくは付加された配列を含み、エノイル−ＣｏＡヒド
ラターゼ活性をもたらすポリペプチドをコードするＤＮ
Ａを含むもの（例えば配列番号５）が挙げられる。

【０００８】ここで、本発明のポリエステル重合酵素遺
伝子は、配列番号２で表されるアミノ酸配列又は該アミ
ノ酸配列において１個若しくは数個のアミノ酸に欠失、
置換、付加等の変異が生じても、当該アミノ酸配列を有
するポリペプチドがポリエステル重合活性を有する限
り、そのポリペプチドをコードするＤＮＡも本発明の遺
伝子に含まれる。例えば、配列番号２で表されるアミノ
酸配列の第１番目のメチオニンが欠失したものをコード
するＤＮＡも、本発明の遺伝子に含まれる。

【０００９】さらに、本発明は、前記ポリエステル重合
酵素遺伝子又は前記遺伝子発現カセットを含む組換えベ
クターである。さらに、本発明は、前記組換えベクター
によって形質転換された形質転換体である。

【００１０】さらに、本発明は、前記形質転換体を培地
に培養し、得られる培養物からポリエステルを採取する
ことを特徴とするポリエステルの製造方法である。ポリ
エステルとしては、例えば、次式Ｉ：

【００１１】

【化２】

【００１２】（Ｒは水素原子又は炭素数１〜４のアルキ
ル基を表す。）で示される３−ヒドロキシアルカン酸の
共重合体（例えば、ポリ（３−ヒドロキシブチレート−
３−ヒドロキシヘキサノエート）ランダム共重合体）が
挙げられる。以下、本発明を詳細に説明する。

【００１３】

【発明の実施の形態】

(1) ポリエステル重合酵素遺伝子のクローニング本発明のポリエステル重合酵素遺伝子は、アエロモナス
属に属する微生物の菌体から分離される。まず、ポリエ
ステル重合酵素遺伝子を有する菌株から染色体ＤＮＡを
作製する。菌株としては、例えばアエロモナス・キャビ
エ（Aeromonas caviae) が挙げられる。

【００１４】染色体ＤＮＡの調製は公知の方法を用いる
ことができる。例えば、アエロモナス・キャビエをＬＢ
培地で培養した後、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモ
ニウム法（Currnt Protocols in Molecular Biology,1
巻, 2.4.3 頁, John Wiley &Sons 出版, 1994年）等に
より染色体ＤＮＡを調製する。

【００１５】上記の手法により得られたＤＮＡを適当な
制限酵素（例えばSau3A1、BamHI、BglII等）で部分分解
した後、アルカリホスファターゼ処理を行い、ＤＮＡ断
片を脱リン酸化する。これを制限酵素（例えばBamHI、B
glII 等）で切断したベクターとライゲーションを行
い、ライブラリーを作成する。

【００１６】ベクターには、宿主微生物で自律的に増殖
し得るファージ又はプラスミドが使用される。ファージ
ベクターとしては、例えばEMBL3 、M13 、λgt11等が挙
げられ、プラスミドベクターとしては、例えばpBR322、
pUC18 、pBluescript II（STRATAGENE社製）等が挙げら
れる。さらに、大腸菌やバチルス・ブレビスなどの２種
以上の宿主微生物で自律的増殖が可能なベクターのほ
か、各種のシャトルベクターを使用することもできる。
このようなベクターについても、前記制限酵素で切断
し、その断片を得ることができる。

【００１７】ＤＮＡ断片とベクター断片とを連結させる
には、公知のＤＮＡリガーゼを用いる。そして、ＤＮＡ
断片とベクター断片とをアニーリングさせた後連結さ
せ、組換えベクターを作成する。

【００１８】宿主微生物に組換えベクターを導入するに
は、公知の方法により行うことができる。例えば、宿主
微生物が大腸菌の場合はカルシウム法（Lederberg,E.M.
etal.,J.Bacteriol.119,1072(1974)) やエレクトロポ
レーション法（Current Protocols in Molecular Biolo
gy, 1巻，1.8.4 頁, 1994年）を採用することができ、
宿主微生物がファージＤＮＡの場合はインビトロ・パッ
ケージング法（Current Protocols in Molecular Biolo
gy, 1巻，5.7.1 頁, 1994年）等を採用することができ
る。本発明では、インビトロ・パッケージング用キット
（Gigapack II； STRATAGENE 社製等) を用いることも
できる。

【００１９】次に、アエロモナス・キャビエのポリエス
テル重合酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を得るためのプロ
ーブを調製する。ポリエステル重合酵素のアミノ酸配列
については、既に何種類かのものが知られている（Peop
les, O.P. and Sinskey, A.J., J.Biol.Chem., 264, 15
293 (1989)；Huisman, G.W. et al., J.Biol.Chem.,26
6, 2191 (1991)；Pieper,U. et al., FEMS Microbiol.L
ett., 96, 73(1992)他）。そこで、これらのアミノ酸配
列のうち、保存されている２つの領域を選択し、それを
コードする核酸塩基配列を推定してオリゴヌクレオチド
を設計する。これらオリゴヌクレオチドとしては、例え
ば5'-CC(C/G)CC(C/G)TGGATCAA(T/C)AAGT(T/A)(T/C)TA(T
/C)ATC-3'（配列番号７）、及び5'-(G/C)AGCCA(G/C)GC
(G/C)GTCCA(A/G)TC(G/C)GGCCACCA-3'（配列番号８）で
表される２種類のオリゴヌクレオチドが挙げられるがこ
れらに限定されるものではない。

【００２０】これらのオリゴヌクレオチドをプライマー
とし、アエロモナス・キャビエの染色体ＤＮＡを鋳型と
してポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；Molecular Clonin
g, 2巻，14.2頁, 1989年) を行う。そして、ＰＣＲによ
りポリエステル重合酵素遺伝子を部分的に増幅する。

【００２１】次に、この部分増幅断片を適当な試薬を用
いて標識し、前記染色体ＤＮＡライブラリーからコロニ
ーハイブリダイゼーションを行う（Currnt Protocols i
n Molecular Biology,1巻, 6.0.3 頁, 1994年) 。

【００２２】コロニーハイブリダイゼーションによりス
クリーニングされた大腸菌からアルカリ法（Currnt Pro
tocols in Molecular Biology,1巻,1.6.1頁, 1994年)
によってプラスミドを回収することにより、ポリエステ
ル重合酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片が得られる。

【００２３】上記ＤＮＡ断片の塩基配列の決定は、公知
方法、例えばサンガー法（Molecular Cloning,2巻, 13.
3頁, 1989年) 等によって行うことができ、塩基配列自
動分析装置、例えば373A・DNA シークエンサー (Applie
d Biosystems社) 等を用いて行うことができる。

【００２４】配列番号１に本発明のポリエステル重合酵
素遺伝子の塩基配列を、配列番号２に該遺伝子によりコ
ードされるアミノ酸配列を示すが、当該アミノ酸配列を
有するポリペプチドがポリエステル重合活性をもたらす
限り、アミノ酸のいくつかについて欠失、置換、付加等
の変異があってもよい。また、本発明の遺伝子は、配列
番号２で表されるアミノ酸をコードする塩基配列をもつ
もののほか、縮重コドンにおいてのみ異なる同一のポリ
ペプチドをコードする縮重異性体をも包含するものであ
る。

【００２５】なお、上記欠失等の変異は、公知の部位突
然変異誘発方法（Current Protocols in Molecular Bio
logy 1巻, 8.1.1 頁, 1994年）により誘発することがで
きる。上記手法により塩基配列が決定された後は、化学
合成によって、又は染色体ＤＮＡを鋳型としたＰＣＲ法
によって、あるいは該塩基配列を有するＤＮＡ断片をプ
ローブとしてハイブリダイズさせることにより、本発明
の遺伝子を得ることができる。

【００２６】(2) 形質転換体の作製本発明の形質転換体は、本発明の組み換えベクターを、
該組み換えベクターを作製する際に用いた発現ベクター
に適合する宿主中に導入することにより得られる。宿主
としては、目的とする遺伝子を発現できるものであれば
特に限定されず、例えば、アルカリゲネス属に属する微
生物、シュードモナス属に属する微生物、バチルス属に
属する微生物等の細菌、サッカロミセス属、カンジダ属
等の酵母、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞等の動物細胞などが
挙げられる。

【００２７】アルカリゲネス属に属する微生物、シュー
ドモナス属に属する微生物等の細菌を宿主として用いる
場合は、本発明の組換え体ＤＮＡが該宿主中で自立複製
可能であると同時に、プロモーター、本発明のＤＮＡ、
転写終結配列を含む構成であることが好ましい。発現ベ
クターとしては、広範囲の宿主において複製・保持され
るRK2複製起点を有するpLA2917(ATCC 37355) 、あるい
はRSF1010複製起点を有するpJRD215(ATCC 37533) 等が
挙げられる。

【００２８】プロモーターとしては、宿主中で発現でき
るものであればいずれを用いてもよい。例えば、trp プ
ロモーター、lac プロモーター、Ｐ_Lプロモーター、Ｐ
_Rプロモーター、T7プロモーターなどの大腸菌やファー
ジ等に由来するプロモーターが用いられる。細菌への組
み換え体ＤＮＡの導入方法としては、例えばカルシウム
イオンを用いる方法（Current Protocols in Molecular
Biology, 1巻, 1.8.1頁，1994年) 、エレクトロポレー
ション法（Current Protocols in MolecularBiology, 1
巻，1.8.4 頁, 1994年）等が挙げられる。

【００２９】酵母を宿主として用いる場合は、発現ベク
ターとして、例えばYEp13 、YCp50等が挙げられる。プ
ロモーターとしては、例えばgal 1 プロモーター、gal
10プロモーター等が挙げられる。酵母への組換え体ＤＮ
Ａの導入方法としては、例えばエレクトロポレーション
法（Methods. Enzymol.,194,182-187(1990))、スフェロ
プラスト法（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84,1929-1933(19
78))、酢酸リチウム法（J.Bacteriol.,153,163-168(198
3)) 等が挙げられる。

【００３０】動物細胞を宿主として用いる場合は、発現
ベクターとして例えばpcDNAI、pcDNAI/Amp（インビトロ
ジェン社) 等が用いられる。動物細胞への組換え体ＤＮ
Ａの導入方法としては、例えば、エレクトロポレーショ
ン法、リン酸カルシウム法等が挙げられる。

【００３１】ここで、前記のようにして決定された塩基
配列は、ポリエステル重合酵素遺伝子のほかに、その上
流及び下流にポリエステル生合成に関与する遺伝子のオ
ープンリーディングフレームが複数含まれている。すな
わち、ポリエステル重合酵素遺伝子は、単一のプロモー
ター領域の支配下に少なくとも２個のＯＲＦとともにオ
ペロンを形成している。

【００３２】ポリエステル重合酵素遺伝子の上流に位置
するＯＲＦを以下「ＯＲＦ１」といい、下流に位置する
ＯＲＦを以下「ＯＲＦ３」という。ＯＲＦ１は、菌体内
ポリエステルの蓄積に関与する遺伝子又はポリエステル
生合成系遺伝子のものと思われる。また、ＯＲＦ３は、
ポリエステル生合成に関与するエノイル−ＣｏＡヒドラ
ターゼ（特に（Ｒ）−特異的エノイル−ＣｏＡヒドラタ
ーゼ）をコードする遺伝子のものであることを明らかに
した。

【００３３】本発明では、図１に示すように、発現制御
領域（図１(1) において「-35/-10」と表示）、ポリエ
ステル重合酵素遺伝子、ＯＲＦ１及びＯＲＦ３を含むEc
oRI断片をクローニングした（図１(1) ）。この断片を
ＥＥ32とする。

【００３４】次に、ＥＥ32においてＯＲＦ１又はＯＲＦ
３のいずれか一方又は両方を欠失させた断片（遺伝子発
現カセット）を作製し、このカセットを宿主に導入する
ことにより、ポリエステルを効率よく生産することがで
きる形質転換体を得ることができる。

【００３５】ＥＥ32中、発現制御領域とＯＦＲ１の翻訳
開始領域との間、及びＯＦＲ１の翻訳停止領域とポリエ
ステル重合酵素遺伝子の翻訳開始領域との間にそれぞれ
制限酵素BglII 部位を導入し、BglII によりＯＲＦ１を
欠失させる（図１(2) ）。これと同様にして、ポリエス
テル重合酵素遺伝子の翻訳停止領域とＯＲＦ３との間に
制限酵素BamHI領域を挿入し、BamHI処理によりＯＲＦ３
を欠失させる（図１(3) ）。

【００３６】ＯＲＦ１及びＯＲＦ３の両者を欠失させる
には、ＥＥ32について、上記ＯＲＦ１及びＯＲＦ３を欠
失させる操作を両方行えばよい（図１(4) ）。なお、制
限酵素部位は、合成オリゴヌクレオチドを用いた部位特
異的変異法（Currnt Protocols in Molecular Biology,
1巻, 8.1.1 頁, 1994年) によって導入することができ
る。

【００３７】このようにして得られたそれぞれの遺伝子
発現カセットを、前記発現可能なプラスミド（例えばpJ
RD215 (ATCC 37533)）に挿入し、得られた組換えベクタ
ーを用いて、アルカリゲネス・ユートロファス（Alcali
genes eutrophus)・PHB-4 株（DSM541) （ポリエステル
合成能欠損株）を形質転換する。形質転換法としては、
例えば塩化カルシウム法、塩化ルビジウム法、低ｐＨ
法、インビトロ・パッケージングによる方法、接合伝達
法等が挙げられる。

【００３８】(3) ポリエステルの製造ポリエステルの製造は、本発明の形質転換体を培地で培
養し、培養菌体又は培養物中に本発明のポリエステルを
生成蓄積させ、該培養菌体又は培養物から該ポリエステ
ルを採取することにより行われる。本発明の形質転換体
を培地で培養する方法は、宿主の培養に用いられる通常
の方法に従って行われる。

【００３９】アルカリゲネス属に属する微生物又はシュ
ードモナス属に属する微生物等の細菌を宿主として得ら
れた形質転換体を培養する培地としては、微生物が資化
し得る炭素源を与え、窒素源、無機塩類及び有機栄養源
のうちのいずれかを制限した培地、例えば窒素源を0.01
〜0.1％に制限した培地が挙げられる。

【００４０】炭素源は微生物の増殖に必要であり、か
つ、ポリエステル合成の原料となるものであり、その例
としては、例えばグルコース、フラクトース、スクロー
ス、マルトース等の炭水化物が挙げられる。また、炭素
数２以上の油脂関連物質を炭素源とすることもできる。
炭素数２以上の油脂関連物質としては、コーン油、大豆
油、サフラワー油、サンフラワー油、オリーブ油、ヤシ
油、パーム油、ナタネ油、魚油、鯨油、豚油又は牛油な
どの天然油脂、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、ペンタ
ン酸、ヘキサン酸、オクタン酸、デカン酸、ラウリン
酸、オレイン酸、パルミチン酸、リノレン酸、リノール
酸若しくはミリスチン酸等の脂肪酸又はこれら脂肪酸の
エステル、オクタノール、ラウリルアルコール、オレイ
ルアルコール若しくはパルミチルアルコール等又はこれ
らアルコールのエステル等が挙げられる。

【００４１】窒素源としては、例えばアンモニア、塩化
アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
等のアンモニウム塩の他、ペプトン、肉エキス、酵母エ
キス、コーンスティープリカー等が挙げられる。無機物
としては、例えばリン酸第一カリウム、リン酸第二カリ
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム等が挙げられる。

【００４２】培養は、通常振盪培養などの好気的条件
下、25〜37℃で発現誘導後24時間以上（例えば１〜７
日）行う。培養中は、カナマイシン、アンピシリン、テ
トラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよい。
そして、培養することによりポリエステルを菌体内に蓄
積させ、その後、このポリエステルを回収する。

【００４３】誘導性のプロモーターを用いた発現ベクタ
ーで形質転換した微生物を培養する場合は、インデュー
サーを培地に添加することもできる。例えば、イソプロ
ピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（IPTG) 、イン
ドールアクリル酸(IAA) 等を培地に添加することができ
る。

【００４４】動物細胞を宿主として得られた形質転換体
を培養する培地としては、例えばRPMI-1640 、DMEM培地
又はこれらの培地にウシ胎児血清を添加した培地が用い
られる。培養は、通常５％ＣＯ₂存在下、30〜37℃で14
〜28日間行う。培養中はカナマイシン、ペニシリン等の
抗生物質を培地に添加してもよい。

【００４５】本発明において、ポリエステルの精製は例
えば以下のように行うことができる。培養液から遠心分
離によって形質転換体を集め、蒸留水で洗浄した後、乾
燥させる。その後、クロロホルムに乾燥形質転換体を懸
濁し、加熱することによってポリエステルを抽出する。
なお、濾過によって残渣を取り除く。このクロロホルム
溶液にメタノールを加えてポリエステルを沈殿させる。
濾過や遠心分離によって上澄み液を除去した後、乾燥し
て精製ポリエステルを得る。

【００４６】得られたポリエステルが目的のものである
ことの確認は、通常の方法、例えばガスクロマトグラフ
法、核磁気共鳴法等により行う。本発明の遺伝子はアエ
ロモナス・キャビエから単離したポリエステル重合酵素
をコードする遺伝子を含んでいる。この重合酵素は、次
式Ｉ：

【００４７】

【化３】

【００４８】（Ｒは水素原子又は炭素数１〜４のアルキ
ル基を表す。）で示される３−ヒドロキシアルカン酸を
モノマーユニットとした共重合体（ポリエステル）を合
成することが可能である。上記共重合体としては、例え
ばポリ（３−ヒドロキシブチレート−３−ヒドロキシヘ
キサノエート）ランダム共重合体（P(3HB-co-3HH））等
が挙げられ、前記重合酵素遺伝子を導入した形質転換体
はP(3HB-co-3HH）を極めて高効率で生産する能力を示
す。

【００４９】従来では、ポリ−３−ヒドロキシブチレー
ト（ P(3HB) ）あるいはポリ（３−ヒドロキシブチレー
ト−３−ヒドロキシバリレート）ランダム共重合体（ P
(3HB-co-3HV)）の製造法について研究、開発がなされき
たが、これらのポリエステルは高結晶性高分子のために
耐衝撃性が劣るという物性上の問題がある。

【００５０】炭素数６の３−ヒドロキシヘキサノエート
をポリマー鎖に導入することによって結晶化度が低下す
るため、ポリエステルは柔軟な高分子材料となり、熱安
定性や成形性にも優れるが、アエロモナス・キャビエを
用いた従来のP(3HB-co-3HH)製造法（特開平5-93049号公
報および特開平7-265065号公報）では、ポリエステルの
収率が低い。

【００５１】これに対し、本発明ではP(3HB-co-3HH) 共
重合ポリエステルを高収率で生産することができる。上
記手法により目的とするポリエステルを大量に得ること
ができるため、これを用いて生分解性の糸やフィルム、
各種容器等の素材として利用することができる。また、
本発明の遺伝子を用いてP(3HB-co-3HH) 共重合ポリエス
テル高生産株を育種することもできる。

【００５２】

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。但し、本発明は、これら実施例にその技術的
範囲を限定するものではない。〔実施例１〕アエロモナス・キャビエのポリエステル重
合酵素遺伝子のクローニング最初に、アエロモナス・キャビエの染色体ＤＮＡライブ
ラリーを作製した。

【００５３】アエロモナス・キャビエＦＡ４４０株を10
0ml のＬＢ培地（１％イーストエキス、0.5 ％トリプト
ン、0.5 ％塩化ナトリウム、0.1 ％グルコース、ｐＨ7.
5 ）中、30℃で終夜培養した後、臭化ヘキサデシルトリ
メチルアンモニウム法（Currnt Protocols in Molecula
r Biology,1巻, 2.4.3.頁, 1994年; John Wiley & Sons
出版）により染色体ＤＮＡを得た。

【００５４】得られた染色体ＤＮＡを制限酵素Sau3AIで
部分分解した。またベクタープラスミドについては、コ
スミドベクターであるpLA2917(ATCC37355)を使用した。
このプラスミドを制限酵素BglII で切断し、脱リン酸化
処理（Molecular Cloning,1巻, 5.7.2 頁，1989年; Col
d Spring Harbar Laboratory 出版）を施した後、ＤＮ
Ａリガーゼを用いて染色体ＤＮＡ部分分解断片と連結さ
せた。

【００５５】この連結ＤＮＡ断片を用いたインビトロ・
パッケージング法（Currnt Protocols in Molecular Bi
ology,1巻, 5.7.2 頁, 1994年）によって大腸菌S17-1
株を形質転換し、アエロモナス・キャビエ染色体ＤＮＡ
ライブラリーを得た。

【００５６】次に、アエロモナス・キャビエのポリエス
テル重合酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を得るためのプロ
ーブを調製した。これまでに知られている数種のポリエ
ステル重合酵素のアミノ酸配列でよく保存されている２
つの領域を選択し、それをコードする核酸塩基配列を推
定して5'-CC(C/G)CC(C/G)TGGATCAA(T/C)AAGT(T/A)(T/C)
TA(T/C)ATC-3'（配列番号７）、及び5'-(G/C)AGCCA(G/
C)GC(G/C)GTCCA(A/G)TC(G/C)GGCCACCA-3'（配列番号
８）で表される２種類のオリゴヌクレオチドを合成し
た。

【００５７】これらのオリゴヌクレオチドをプライマー
とし、アエロモナス・キャビエの染色体ＤＮＡを鋳型と
したＰＣＲ法によってポリエステル重合酵素遺伝子を部
分増幅した。ＰＣＲは、94℃で30秒、50℃で30秒及び72
℃で60秒の反応を１サイクルとしてこれを30サイクル行
った。この部分増幅断片をDIG DNA 標識キット（ベーリ
ンガーマンハイム社製）によってジゴキシゲニン標識
し、プローブとした。

【００５８】得られたプローブを用いてアエロモナス・
キャビエ染色体ＤＮＡライブラリーからコロニーハイブ
リダイゼーション法によってポリエステル重合酵素遺伝
子を含むプラスミドを有する大腸菌を単離した。この大
腸菌からアルカリ法によってプラスミドを回収すること
でポリエステル重合酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を得
た。この断片のBglII-EcoRI 断片についてサンガー法に
よって塩基配列を決定した。その結果、配列番号９又は
10で表される3.2kbp断片の塩基配列が決定された。

【００５９】さらに、この塩基配列について相同性検索
を行った結果、この3.2kbpの塩基配列の中には、配列番
号１で表される塩基配列(1785bp)を含むポリエステル重
合酵素遺伝子を同定することができた。なお、本発明に
おいては、本発明のポリエステル重合酵素遺伝子により
コードされるタンパク質が、ポリエステル重合の遺伝子
発現機能を有する限り、当該遺伝子の塩基配列に欠失、
置換、付加等の変異が生じてもよい。

【００６０】また、配列番号９又は10で表される塩基配
列を有する断片において、上記1785bpの塩基配列の下流
に存在する405bp の遺伝子（ＯＲＦ３）及び転写終結領
域、並びに上流に存在する354bp の遺伝子（ＯＲＦ１）
及び発現調節領域を同定した。ＯＲＦ１の塩基配列を配
列番号３、ＯＲＦ１によりコードされるアミノ酸配列を
配列番号４に、ＯＲＦ３の塩基配列を配列番号５、ＯＲ
Ｆ３によりコードされるアミノ酸配列を配列番号６に示
す。ここで、ＯＲＦ３はポリエステル生合成に関与する
エノイル−ＣｏＡヒドラターゼをコードする遺伝子のも
のである。そして、ＯＲＦ３によりコードされるアミノ
酸を有するポリペプチドがエノイル−ＣｏＡヒドラター
ゼ活性、特に（Ｒ）−特異的エノイル−ＣｏＡヒドラタ
ーゼ活性をもたらす限り、当該アミノ酸配列において、
１個又は数個のアミノ酸に欠失、置換、付加等の変異が
生じてもよい。また、配列番号９及び10で表される塩基
配列において、発現調節領域は第１〜383 番目であり、
転写終結領域は第3010〜3187番目である。

【００６１】〔実施例２〕アルカリゲネス・ユートロフ
ァス形質転換体の作製実施例１で同定された発現調節領域、ＯＲＦ１、ポリエ
ステル重合酵素遺伝子、ＯＲＦ３及び転写終結領域を含
むBglII-EcoRI 断片のBglII部位をEcoRIリンカーを用い
てEcoRI部位とし、3.2kbpのEcoRI-EcoRI断片（ＥＥ３２
断片）を得た。これをアルカリゲネス属に属する微生物
中で発現可能なプラスミドpJRD215(ATCC37533)に挿入
し、得られた組換えプラスミドでアルカリゲネス・ユー
トロファスPHB-4 株（DSM541)(ポリエステル合成能欠損
株）を接合伝達法によって形質転換した。

【００６２】すなわち、まず、この組換えプラスミドを
用いて大腸菌S17-1 株を塩化カルシウム法によって形質
転換した。この組換え大腸菌とアルカリゲネス・ユート
ロファスPHB-4 株をＬＢ培地1.5ml 中、30℃で終夜培養
し、それぞれの培養液0.1mlを混合し、30℃で４時間培
養した。この菌体混合液をＭＢＦ寒天培地（0.9 ％リン
酸二ナトリウム、0.15％リン酸一カリウム、0.05％塩化
アンモニウム、0.5 ％フルクトース、1.5 ％寒天、0.3m
g/mlカナマイシン）に塗布し、30℃で５日間培養した。

【００６３】組換え大腸菌中のプラスミドがアルカリゲ
ネス・ユートロファスPHB-4 株に伝達されるとカナマイ
シン耐性を示すことから、ＭＢＦ寒天培地上で増殖した
コロニーはアルカリゲネス・ユートロファス形質転換体
である。この中から１個のコロニーを単離し、アルカリ
ゲネス・ユートロファスＡＣ３２株（以下、ＡＣ３２株
と呼ぶ）を得た。なお、ＡＣ３２株は、工業技術院生命
工学工業技術研究所に、FERM P- 15786として寄託され
ている。

【００６４】さらに合成オリゴヌクレオチドを用いた部
位特異的変異法（Currnt Protocolsin Molecular Biolo
gy,1巻, 8.1.1 頁, 1994年) によってＥＥ３２断片中の
ＯＲＦ１遺伝子の前後にそれぞれ制限酵素BglII 部位を
導入し、BglII-BglII 断片を欠失させることによってＯ
ＲＦ１遺伝子が欠失した断片を作製し、プラスミドpJRD
215 に挿入した。この組換えプラスミドを用いて、上述
の接合伝達法によってアルカリゲネス・ユートロファス
PHB-4 株を形質転換した。得られた形質転換体を、以下
ＡＣ３２１株と呼ぶ。

【００６５】同様に、部位特異的変異法によってＥＥ３
２断片中のＯＲＦ３遺伝子の前後にそれぞれ制限酵素Ba
mHI部位を導入し、BamHI-BamHI断片を欠失させることに
よってＯＲＦ３遺伝子が欠失した断片を作製し、プラス
ミドpJRD215 に挿入した。この組換えプラスミドを用い
て、上述の接合伝達法によってアルカリゲネス・ユート
ロファスPHB-4 株を形質転換した。得られた形質転換体
を、以下ＡＣ３２３株と呼ぶ。

【００６６】同様に、ＥＥ３２断片中のＯＲＦ１遺伝子
の前後にそれぞれ制限酵素BglII 部位を、ＯＲＦ３遺伝
子の前後にそれぞれ制限酵素BamHI部位を導入し、BglII
-BglII 断片およびBamHI-BamHI断片を欠失させることに
よってＯＲＦ１遺伝子およびＯＲＦ３遺伝子が共に欠失
した断片を作製し、プラスミドpJRD215 に挿入した。こ
の組換えプラスミドを用いて、上述の接合伝達法によっ
てアルカリゲネス・ユートロファスPHB-4 株を形質転換
した。得られた形質転換体を、以下ＡＣ３２１３株と呼
ぶ。

【００６７】さらに、ＥＥ３２断片を鋳型とし、ＰＣＲ
法によってポリエステル重合酵素遺伝子を増幅し、得ら
れた増幅断片を、公知であるアルカリゲネス・ユートロ
ファス由来ポリエステル合成系遺伝子の発現調節領域と
転写終結領域との間に挿入した。ＰＣＲは、5'-AGTTCCC
GCCTCGGGTGTGGGTGAA-3'(配列番号11）および5'-GGCATAT
GCGCTCATGCGGCGTCCT-3'(配列番号12）をプライマーとし
て、94℃で30秒、55℃で30秒及び72℃で60秒の反応を１
サイクルとしてこれを30サイクル行った。

【００６８】このＤＮＡ断片をプラスミドpJRD215 に挿
入し、得られた組換えプラスミドを用いて、上述の接合
伝達法によってアルカリゲネス・ユートロファスPHB-4
株を形質転換した。得られた形質転換体を、以下ＡＣ２
９株と呼ぶ。

【００６９】〔実施例３〕アルカリゲネスユートロフ
ァス形質転換体によるポリエステル合成アルカリゲネス・ユートロファスＨ１６株、ＰＨＢ-４
株、ＡＣ３２株、ＡＣ３２１株、ＡＣ３２３株、ＡＣ３
２１３株、ＡＣ２９株を、それぞれ、95mlのＭＢ培地
（0.9 ％リン酸二ナトリウム、0.15％リン酸一カリウ
ム、0.05％塩化アンモニウム）に１mlの１％オクタン酸
ナトリウムを加えた培地に植菌し、坂口フラスコ中、30
℃で培養した。ＡＣ３２株、ＡＣ３２１株、ＡＣ３２３
株、ＡＣ３２１３株及びＡＣ２９株についてはカナマイ
シンを0.2g/Lの濃度で含有させた。12時間、24時間、36
時間及び48時間経過後にそれぞれ１mlの１％オクタン酸
ナトリウムを添加しつつ（オクタン酸ナトリウムの総添
加量0.5g）、72時間培養した。

【００７０】Ｈ１６株、及びＡＣ３２１３株については
上述のＭＢ培地に１％オリーブ油、パーム油、コーン
油、あるいはオレイン酸を加えた培地に植菌し、坂口フ
ラスコ中、30℃で72時間培養した。なお、ＡＣ３２１３
株を培養する際には、培地にカナマイシンを0.2g/Lの濃
度で含有させた。

【００７１】Ｈ１６株、ＡＣ３２株、ＡＣ３２１株、Ａ
Ｃ３２３株、ＡＣ３２１３株については上述のＭＢ培地
に１mlの１％ヘプタン酸ナトリウムを加えた培地に植菌
し、坂口フラスコ中、30℃で培養した。なお、ＡＣ３２
株、ＡＣ３２１株、ＡＣ３２３株、及びＡＣ３２１３株
を培養する際には、培地にカナマイシンを0.2g/Lの濃度
で含有させた。12時間、24時間、36時間及び48時間経過
後にそれぞれ１mlの１％ヘプタン酸ナトリウムを添加し
つつ（ヘプタン酸ナトリウムの総添加量0.5g）、72時間
培養した。

【００７２】培養後、遠心分離によって菌体を回収し、
蒸留水で洗浄後、凍結乾燥し、乾燥菌体重量を測定し
た。乾燥菌体10〜30mgに２mlの硫酸−メタノール混液
（15：85）と２mlのクロロホルムを添加して密栓し、10
0 ℃で140 分間加熱することにより、菌体内ポリエステ
ル分解物のメチルエステルを得た。これに１mlの蒸留水
を添加して激しく撹拌した。静置して二層に分離させた
後、下層の有機層を取り出し、その組成をキャピラリー
ガスクロマトグラフィーによって分析した。ガスクロマ
トグラフは島津製作所製GC-14A、キャピラリーカラムは
ＧＬサイエンス社製NEUTRA BOND-1 （カラム長25ｍ、カ
ラム内径0.25mm、液膜厚0.4 μｍ）を用いた。温度条件
は、初発温度100 ℃から８℃／分の速度で昇温した。得
られた結果を表１、表２、および表３に示す。

【００７３】

【表１】

【００７４】

【表２】

【００７５】

【表３】

【００７６】オクタン酸を炭素源とした場合、表１に示
すようにアルカリゲネス・ユートロファス野生株である
Ｈ１６株ではポリ（３−ヒドロキシブチレート）ホモポ
リマーを合成する。これはＨ１６株の有するポリエステ
ル重合酵素は炭素数６の３ＨＨ（３−ヒドロキシヘキサ
ノエート）を基質としないためである。そのポリエステ
ル合成能欠損株であるＰＨＢ-４株では変異処理によっ
てポリエステル重合酵素が欠損しているため、ポリエス
テルを蓄積しない。ＰＨＢ-４株にアエロモナス・キャ
ビエ由来のポリエステル重合酵素遺伝子を含むＥＥ３２
断片を導入したＡＣ３２株では３ＨＨ（３−ヒドロキシ
ヘキサノエート）分率22モル％のポリ（３−ヒドロキシ
ブチレート−３ヒドロキシヘキサノエート）ランダム共
重合体（P(3HB-co-3HH））を乾燥菌体重量あたり33重量
％蓄積した。

【００７７】さらに、ＡＣ３２１株、ＡＣ３２３株、Ａ
Ｃ３２１３株では３ＨＨ分率12〜15モル％のP(3HB-co-3
HH）を92〜96重量％蓄積し、ＯＲＦ１遺伝子、ＯＲＦ３
遺伝子、あるいはその両方を欠失させることでポリエス
テル収率が著しく改善された。

【００７８】また、導入したポリエステル重合酵素遺伝
子の発現調節領域および転写終結領域をアルカリゲネス
・ユートロファス由来のものに置換したＡＣ２９株で
も、94重量％のP(3HB-co-3HH）を蓄積し、由来の異なる
発現調節領域および転写終結領域を使用してもポリエス
テル収率が著しく改善された。

【００７９】最もポリエステル収率の高いＡＣ３２１３
株をオリーブ油、コーン油、パーム油を炭素源として培
養したところ、表２に示すように３ＨＨ分率4〜5モル％
のP(3HB-co-3HH）を76〜81重量％蓄積した。植物油に最
も多く含まれる脂肪酸成分であるオレイン酸を炭素源と
しても３ＨＨ分率４モル％のP(3HB-co-3HH）を70重量％
で蓄積した。野性株であるＨ１６株はこの条件下でポリ
（３−ヒドロキシブチレート）ホモポリマーのみを合成
した。

【００８０】なお、アエロモナス・キャビエＦＡ４４０
株では、パルミチン酸を炭素源として８重量％のP(3HB-
co-3HH）を蓄積することが報告されている（特開平7-26
5065号公報）。本発明においてはオクタン酸を炭素源と
して96重量％のP(3HB-co-3HH）が、また極めて安価であ
る植物油を炭素源として76〜81重量％のＰ（３ＨＢ−ｃ
ｏ−３ＨＨ）が蓄積されることから、公報記載の方法と
比較すると、本実施例で使用した形質転換体によるＰ
（３ＨＢ−ｃｏ−３ＨＨ）合成法は極めて優れた方法で
あると言える。

【００８１】ヘプタン酸を炭素源とした場合、表２に示
すようにアルカリゲネス・ユートロファス野生株である
Ｈ１６株ではポリ（３−ヒドロキシブチレート−３−ヒ
ドロキシバリレート）共重合体（P(3HB-co-3HV)）を合
成する。これはH16株の有するポリエステル重合酵素は
炭素数７の３ＨＨｐ（３−ヒドロキシヘプタノエート）
を基質としないためである。ＰＨＢ-４株にアエロモナ
ス・キャビエ由来のポリエステル重合酵素遺伝子を含む
ＥＥ３２断片を導入したＡＣ３２株では３ＨＨｐ分率５
モル％のポリ（３−ヒドロキシブチレート−３−ヒドロ
キシバリレート−３−ヒドロキシヘプタノエート）三元
共重合体（P(3HB-co-3HV-co-3HHp)）を乾燥菌体重量あ
たり７重量％蓄積した。

【００８２】さらに、ＡＣ３２１株、ＡＣ３２３株、Ａ
Ｃ３２１３株では３ＨＨｐ分率２〜８モル％のP(3HB-co
-3HV-co-3HHp)を40〜67重量％蓄積し、ＯＲＦ１遺伝
子、ＯＲＦ３遺伝子、あるいはその両方を欠失させるこ
とでポリエステル収率が著しく改善された（表３）。

【００８３】これらの結果から、アエロモナス・キャビ
エ由来のポリエステル重合酵素は炭素数４〜７の3-ヒド
ロキシアルカン酸をモノマーユニットとする共重合ポリ
エステルを合成することができると言える。

【００８４】〔実施例４〕ＯＲＦ３の機能同定ＥＥ３２断片を鋳型として、ＰＣＲ法によってＯＲＦ３
遺伝子を増幅し、発現プラスミドＰＥＴ−３ａ（ノバジ
ェン社製）のT7プロモーター下流に挿入した。ＰＣＲは
５’-GCCATATGAGCGCACAATCCCTGGAAGTAG-３’（配列番号
13）および５’-CTGGGATCCGCCGGTGCTTAAGGCAGCTTG-３’
（配列番号14）をプライマーとして、95℃で60秒、68℃
で30秒の反応を１サイクルとして25サイクル行った。得
られたプラスミドを用いて大腸菌BL21(DE3) 株（ノバジ
ェン社製）を形質転換した。得られた形質転換体を以
下、ＮＢ３株とする。

【００８５】ＮＢ３株を100ml のＬＢ培地で30℃、４時
間培養し、イソプロピルチオガラクトピラノシド（IPT
G）を最終濃度0.4 mMとなるように添加して発現を誘導
し、さらに30℃で２時間培養した。菌体を遠心分離によ
って回収した後、超音波破砕、遠心分離によって可溶性
タンパク画分を得た。表４に示すように、発現プラスミ
ドを導入した菌体の可溶性画分には高いエノイル−Ｃｏ
Ａヒドラターゼ活性が検出された。

【００８６】

【表４】

【００８７】エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性はクロ
トニル−ＣｏＡ（シグマ社製）を基質とし（濃度0.25m
M）、２重結合の水和に伴う吸光度変化（263nm ）を測
定することにより求めた。一方、ＯＲＦ３遺伝子を挿入
していないコントロールプラスミドＰＥＴ−３ａを導入
した大腸菌株では活性はまったく検出されなかった。

【００８８】そこで、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼタ
ンパクの精製を行った。ＮＢ３株の可溶性タンパク画分
をＱ−セファロース陰イオン交換カラム（ファルマシア
社製）に負荷し、塩化ナトリウム濃度勾配（０Ｍから１
Ｍ）によってタンパクを溶出させ、エノイル−ＣｏＡヒ
ドラターゼ活性画分を回収した。活性画分のドデシル硫
酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析か
ら、図２に示すように電気泳動的に均一であることがわ
かった。また表５に示すように比活性を約３倍に向上さ
せることができた。

【００８９】

【表５】

【００９０】得られた精製エノイル−ＣｏＡヒドラター
ゼタンパクのＮ末端アミノ酸配列を決定したところ、表
６に示すように開始コドンであるMet 以外のアミノ酸配
列は、ＯＲＦ３遺伝子の塩基配列から推定したアミノ酸
配列と一致した。

【００９１】

【表６】

【００９２】このことから、ＯＲＦ３がエノイル−Ｃｏ
Ａヒドラターゼをコードしていることが確認できた。Me
tは翻訳後修飾によって脱離したものと考えられる。ま
た、ＯＲＦ３にコードされるエノイル−ＣｏＡヒドラタ
ーゼの立体特異性について以下のように検討した。

【００９３】活性測定の反応溶液に（Ｓ）−３−ヒドロ
キシブチリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（シグマ社製）
（最終濃度0.2 ユニット/ml ）と酸化型ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）（最終濃度0.5mM
）を添加すると、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼの特
異性が（Ｓ）−体特異的であれば、生成した（Ｓ）−３
−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡはデヒドロゲナーゼの作
用によってアセトアセチル−ＣｏＡに酸化される。それ
に伴ってＮＡＤ＋は還元されてＮＡＤＨが生成し、340n
m に特異的な吸収を生じる。逆にエノイル−ＣｏＡヒド
ラターゼが（Ｒ）−体特異的であれば、ＮＡＤＨは生成
しない。

【００９４】表７に示すように、ＯＲＦ３にコードされ
るエノイル−ＣｏＡヒドラターゼを用いた場合では、34
0nm の吸光度変化はエノイル−ＣｏＡヒドラターゼ無添
加の場合とほとんど同じであったが、市販の（Ｓ）−特
異的エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ（シグマ社製）を用
いた場合では、ＮＡＤＨの生成に伴う吸光度変化が見ら
れた。

【００９５】

【表７】

【００９６】この結果から、精製エノイル−ＣｏＡヒド
ラターゼは（Ｒ）−体特異的であることが明らかとなっ
た。従って、ＯＲＦ３は（Ｒ）−体特異的エノイル−Ｃ
ｏＡヒドラターゼをコードしていることが分かった。

【００９７】

【発明の効果】本発明により、ポリエステル重合酵素遺
伝子、該遺伝子を含む組換えベクター、該組換えベクタ
ーを含む形質転換体及びポリエステルの製造方法が提供
される。本発明の遺伝子は、炭素数４〜７の3-ヒドロキ
シアルカン酸をモノマーユニットとする共重合ポリエス
テルを合成することが可能なポリエステル重合酵素をコ
ードしている点で、また、本発明の製造方法は、熱安定
性や成形性に優れた生分解性プラスチックであるP(3HB-
co-3HH）を効率よく合成可能である点で有用である。

【００９８】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１７８５配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：genomic DNA 配列： ATG AGC CAA CCA TCT TAT GGC CCG CTG TTC GAG GCC CTG GCC CAC TAC 48 Met Ser Gln Pro Ser Tyr Gly Pro Leu Phe Glu Ala Leu Ala His Tyr 1 5 10 15 AAT GAC AAG CTG CTG GCC ATG GCC AAG GCC CAG ACA GAG CGC ACC GCC 96 Asn Asp Lys Leu Leu Ala Met Ala Lys Ala Gln Thr Glu Arg Thr Ala 20 25 30 CAG GCG CTG CTG CAG ACC AAT CTG GAC GAT CTG GGC CAG GTG CTG GAG 144 Gln Ala Leu Leu Gln Thr Asn Leu Asp Asp Leu Gly Gln Val Leu Glu 35 40 45 CAG GGC AGC CAG CAA CCC TGG CAG CTG ATC CAG GCC CAG ATG AAC TGG 192 Gln Gly Ser Gln Gln Pro Trp Gln Leu Ile Gln Ala Gln Met Asn Trp 50 55 60 TGG CAG GAT CAG CTC AAG CTG ATG CAG CAC ACC CTG CTC AAA AGC GCA 240 Trp Gln Asp Gln Leu Lys Leu Met Gln His Thr Leu Leu Lys Ser Ala 65 70 75 80 GGC CAG CCG AGC GAG CCG GTG ATC ACC CCG GAG CGC AGC GAT CGC CGC 288 Gly Gln Pro Ser Glu Pro Val Ile Thr Pro Glu Arg Ser Asp Arg Arg 85 90 95 TTC AAG GCC GAG GCC TGG AGC GAA CAA CCC ATC TAT GAC TAC CTC AAG 336 Phe Lys Ala Glu Ala Trp Ser Glu Gln Pro Ile Tyr Asp Tyr Leu Lys 100 105 110 CAG TCC TAC CTG CTC ACC GCC AGG CAC CTG CTG GCC TCG GTG GAT GCC 384 Gln Ser Tyr Leu Leu Thr Ala Arg His Leu Leu Ala Ser Val Asp Ala 115 120 125 CTG GAG GGC GTC CCC CAG AAG AGC CGG GAG CGG CTG CGT TTC TTC ACC 432 Leu Glu Gly Val Pro Gln Lys Ser Arg Glu Arg Leu Arg Phe Phe Thr 130 135 140 CGC CAG TAC GTC AAC GCC ATG GCC CCC AGC AAC TTC CTG GCC ACC AAC 480 Arg Gln Tyr Val Asn Ala Met Ala Pro Ser Asn Phe Leu Ala Thr Asn 145 150 155 160 CCC GAG CTG CTC AAG CTG ACC CTG GAG TCC GAC GGC CAG AAC CTG GTG 528 Pro Glu Leu Leu Lys Leu Thr Leu Glu Ser Asp Gly Gln Asn Leu Val 165 170 175 CGC GGA CTG GCC CTC TTG GCC GAG GAT CTG GAG CGC AGC GCC GAT CAG 576 Arg Gly Leu Ala Leu Leu Ala Glu Asp Leu Glu Arg Ser Ala Asp Gln 180 185 190 CTC AAC ATC CGC CTG ACC GAC GAA TCC GCC TTC GAG CTC GGG CGG GAT 624 Leu Asn Ile Arg Leu Thr Asp Glu Ser Ala Phe Glu Leu Gly Arg Asp 195 200 205 CTG GCC CTG ACC CCG GGC CGG GTG GTG CAG CGC ACC GAG CTC TAT GAG 672 Leu Ala Leu Thr Pro Gly Arg Val Val Gln Arg Thr Glu Leu Tyr Glu 210 215 220 CTC ATT CAG TAC AGC CCG ACT ACC GAG ACG GTG GGC AAG ACA CCT GTG 720 Leu Ile Gln Tyr Ser Pro Thr Thr Glu Thr Val Gly Lys Thr Pro Val 225 230 235 240 CTG ATA GTG CCG CCC TTC ATC AAC AAG TAC TAC ATC ATG GAC ATG CGG 768 Leu Ile Val Pro Pro Phe Ile Asn Lys Tyr Tyr Ile Met Asp Met Arg 245 250 255 CCC CAG AAC TCC CTG GTC GCC TGG CTG GTC GCC CAG GGC CAG ACG GTA 816 Pro Gln Asn Ser Leu Val Ala Trp Leu Val Ala Gln Gly Gln Thr Val 260 265 270 TTC ATG ATC TCC TGG CGC AAC CCG GGC GTG GCC CAG GCC CAA ATC GAT 864 Phe Met Ile Ser Trp Arg Asn Pro Gly Val Ala Gln Ala Gln Ile Asp 275 280 285 CTC GAC GAC TAC GTG GTG GAT GGC GTC ATC GCC GCC CTG GAC GGC GTG 912 Leu Asp Asp Tyr Val Val Asp Gly Val Ile Ala Ala Leu Asp Gly Val 290 295 300 GAG GCG GCC ACC GGC GAG CGG GAG GTG CAC GGC ATC GGC TAC TGC ATC 960 Glu Ala Ala Thr Gly Glu Arg Glu Val His Gly Ile Gly Tyr Cys Ile 305 310 315 320 GGC GGC ACC GCC CTG TCG CTC GCC ATG GGC TGG CTG GCG GCG CGG CGC 1008 Gly Gly Thr Ala Leu Ser Leu Ala Met Gly Trp Leu Ala Ala Arg Arg 325 330 335 CAG AAG CAG CGG GTG CGC ACC GCC ACC CTG TTC ACT ACC CTG CTG GAC 1056 Gln Lys Gln Arg Val Arg Thr Ala Thr Leu Phe Thr Thr Leu Leu Asp 340 345 350 TTC TCC CAG CCC GGG GAG CTT GGC ATC TTC ATC CAC GAG CCC ATC ATA 1104 Phe Ser Gln Pro Gly Glu Leu Gly Ile Phe Ile His Glu Pro Ile Ile 355 360 365 GCG GCG CTC GAG GCG CAA AAT GAG GCC AAG GGC ATC ATG GAC GGG CGC 1152 Ala Ala Leu Glu Ala Gln Asn Glu Ala Lys Gly Ile Met Asp Gly Arg 370 375 380 CAG CTG GCG GTC TCC TTC AGC CTG CTG CGG GAG AAC AGC CTC TAC TGG 1200 Gln Leu Ala Val Ser Phe Ser Leu Leu Arg Glu Asn Ser Leu Tyr Trp 385 390 395 400 AAC TAC TAC ATC GAC AGC TAC CTC AAG GGT CAG AGC CCG GTG GCC TTC 1248 Asn Tyr Tyr Ile Asp Ser Tyr Leu Lys Gly Gln Ser Pro Val Ala Phe 405 410 415 GAT CTG CTG CAC TGG AAC AGC GAC AGC ACC AAT GTG GCG GGC AAG ACC 1296 Asp Leu Leu His Trp Asn Ser Asp Ser Thr Asn Val Ala Gly Lys Thr 420 425 430 CAC AAC AGC CTG CTG CGC CGT CTC TAC CTG GAG AAC CAG CTG GTG AAG 1344 His Asn Ser Leu Leu Arg Arg Leu Tyr Leu Glu Asn Gln Leu Val Lys 435 440 445 GGG GAG CTC AAG ATC CGC AAC ACC CGC ATC GAT CTC GGC AAG GTG AAG 1392 Gly Glu Leu Lys Ile Arg Asn Thr Arg Ile Asp Leu Gly Lys Val Lys 450 455 460 ACC CCT GTG CTG CTG GTG TCG GCG GTG GAC GAT CAC ATC GCC CTC TGG 1440 Thr Pro Val Leu Leu Val Ser Ala Val Asp Asp His Ile Ala Leu Trp 465 470 475 480 CAG GGC ACC TGG CAG GGC ATG AAG CTG TTT GGC GGG GAG CAG CGC TTC 1488 Gln Gly Thr Trp Gln Gly Met Lys Leu Phe Gly Gly Glu Gln Arg Phe 485 490 495 CTC CTG GCG GAG TCC GGC CAC ATC GCC GGC ATC ATC AAC CCG CCG GCC 1536 Leu Leu Ala Glu Ser Gly His Ile Ala Gly Ile Ile Asn Pro Pro Ala 500 505 510 GCC AAC AAG TAC GGC TTC TGG CAC AAC GGG GCC GAG GCC GAG AGC CCG 1584 Ala Asn Lys Tyr Gly Phe Trp His Asn Gly Ala Glu Ala Glu Ser Pro 515 520 525 GAG AGC TGG CTG GCA GGG GCG ACG CAC CAG GGC GGC TCC TGG TGG CCC 1632 Glu Ser Trp Leu Ala Gly Ala Thr His Gln Gly Gly Ser Trp Trp Pro 530 535 540 GAG ATG ATG GGC TTT ATC CAG AAC CGT GAC GAA GGG TCA GAG CCC GTC 1680 Glu Met Met Gly Phe Ile Gln Asn Arg Asp Glu Gly Ser Glu Pro Val 545 550 555 560 CCC GCG CGG GTC CCG GAG GAA GGG CTG GCC CCC GCC CCC GGC CAC TAT 1728 Pro Ala Arg Val Pro Glu Glu Gly Leu Ala Pro Ala Pro Gly His Tyr 565 570 575 GTC AAG GTG CGG CTC AAC CCC GTG TTT GCC TGC CCA ACA GAG GAG GAC 1776 Val Lys Val Arg Leu Asn Pro Val Phe Ala Cys Pro Thr Glu Glu Asp 580 585 590 GCC GCA TGA 1785 Ala Ala

【００９９】配列番号：２配列の長さ：５９４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列： Met Ser Gln Pro Ser Tyr Gly Pro Leu Phe Glu Ala Leu Ala His Tyr 1 5 10 15 Asn Asp Lys Leu Leu Ala Met Ala Lys Ala Gln Thr Glu Arg Thr Ala 20 25 30 Gln Ala Leu Leu Gln Thr Asn Leu Asp Asp Leu Gly Gln Val Leu Glu 35 40 45 Gln Gly Ser Gln Gln Pro Trp Gln Leu Ile Gln Ala Gln Met Asn Trp 50 55 60 Trp Gln Asp Gln Leu Lys Leu Met Gln His Thr Leu Leu Lys Ser Ala 65 70 75 80 Gly Gln Pro Ser Glu Pro Val Ile Thr Pro Glu Arg Ser Asp Arg Arg 85 90 95 Phe Lys Ala Glu Ala Trp Ser Glu Gln Pro Ile Tyr Asp Tyr Leu Lys 100 105 110 Gln Ser Tyr Leu Leu Thr Ala Arg His Leu Leu Ala Ser Val Asp Ala 115 120 125 Leu Glu Gly Val Pro Gln Lys Ser Arg Glu Arg Leu Arg Phe Phe Thr 130 135 140 Arg Gln Tyr Val Asn Ala Met Ala Pro Ser Asn Phe Leu Ala Thr Asn 145 150 155 160 Pro Glu Leu Leu Lys Leu Thr Leu Glu Ser Asp Gly Gln Asn Leu Val 165 170 175 Arg Gly Leu Ala Leu Leu Ala Glu Asp Leu Glu Arg Ser Ala Asp Gln 180 185 190 Leu Asn Ile Arg Leu Thr Asp Glu Ser Ala Phe Glu Leu Gly Arg Asp 195 200 205 Leu Ala Leu Thr Pro Gly Arg Val Val Gln Arg Thr Glu Leu Tyr Glu 210 215 220 Leu Ile Gln Tyr Ser Pro Thr Thr Glu Thr Val Gly Lys Thr Pro Val 225 230 235 240 Leu Ile Val Pro Pro Phe Ile Asn Lys Tyr Tyr Ile Met Asp Met Arg 245 250 255 Pro Gln Asn Ser Leu Val Ala Trp Leu Val Ala Gln Gly Gln Thr Val 260 265 270 Phe Met Ile Ser Trp Arg Asn Pro Gly Val Ala Gln Ala Gln Ile Asp 275 280 285 Leu Asp Asp Tyr Val Val Asp Gly Val Ile Ala Ala Leu Asp Gly Val 290 295 300 Glu Ala Ala Thr Gly Glu Arg Glu Val His Gly Ile Gly Tyr Cys Ile 305 310 315 320 Gly Gly Thr Ala Leu Ser Leu Ala Met Gly Trp Leu Ala Ala Arg Arg 325 330 335 Gln Lys Gln Arg Val Arg Thr Ala Thr Leu Phe Thr Thr Leu Leu Asp 340 345 350 Phe Ser Gln Pro Gly Glu Leu Gly Ile Phe Ile His Glu Pro Ile Ile 355 360 365 Ala Ala Leu Glu Ala Gln Asn Glu Ala Lys Gly Ile Met Asp Gly Arg 370 375 380 Gln Leu Ala Val Ser Phe Ser Leu Leu Arg Glu Asn Ser Leu Tyr Trp 385 390 395 400 Asn Tyr Tyr Ile Asp Ser Tyr Leu Lys Gly Gln Ser Pro Val Ala Phe 405 410 415 Asp Leu Leu His Trp Asn Ser Asp Ser Thr Asn Val Ala Gly Lys Thr 420 425 430 His Asn Ser Leu Leu Arg Arg Leu Tyr Leu Glu Asn Gln Leu Val Lys 435 440 445 Gly Glu Leu Lys Ile Arg Asn Thr Arg Ile Asp Leu Gly Lys Val Lys 450 455 460 Thr Pro Val Leu Leu Val Ser Ala Val Asp Asp His Ile Ala Leu Trp 465 470 475 480 Gln Gly Thr Trp Gln Gly Met Lys Leu Phe Gly Gly Glu Gln Arg Phe 485 490 495 Leu Leu Ala Glu Ser Gly His Ile Ala Gly Ile Ile Asn Pro Pro Ala 500 505 510 Ala Asn Lys Tyr Gly Phe Trp His Asn Gly Ala Glu Ala Glu Ser Pro 515 520 525 Glu Ser Trp Leu Ala Gly Ala Thr His Gln Gly Gly Ser Trp Trp Pro 530 535 540 Glu Met Met Gly Phe Ile Gln Asn Arg Asp Glu Gly Ser Glu Pro Val 545 550 555 560 Pro Ala Arg Val Pro Glu Glu Gly Leu Ala Pro Ala Pro Gly His Tyr 565 570 575 Val Lys Val Arg Leu Asn Pro Val Phe Ala Cys Pro Thr Glu Glu Asp 580 585 590 Ala Ala

【０１００】配列番号：３配列の長さ：３５４配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：genomic DNA 配列： ATG ATG AAT ATG GAC GTG ATC AAG AGC TTT ACC GAG CAG ATG CAA GGC 48 Met Met Asn Met Asp Val Ile Lys Ser Phe Thr Glu Gln Met Gln Gly 1 5 10 15 TTC GCC GCC CCC CTC ACC CGC TAC AAC CAG CTG CTG GCC AGC AAC ATC ９６ＰｈｅＡｌａＡｌａＰｒｏＬｅｕＴｈｒＡｒｇＴｙｒＡｓｎ
ＧｌｎＬｅｕＬｅｕＡｌａＳｅｒＡｓｎＩｌｅ２０２５
３０ＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＣＣＣＧＧＴＴＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣ
ＴＣＣＧＣＣＡＡＣＧＣＣＴＡＣＧＣＣＧＡＡ１４４ＧｌｕＧｌｎＬｅｕＴｈｒＡｒｇＬｅｕＧｌｎＬｅｕＡｌａ
ＳｅｒＡｌａＡｓｎＡｌａＴｙｒＡｌａＧｌｕ３５４０
４５ＣＴＧＧＧＣＣＴＣＡＡＣＣＡＧＴＴＧＣＡＧＧＣＣＧＴＧ
ＡＧＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＧＡＣＡＣＣＣＡＧ１９２ＬｅｕＧｌｙＬｅｕＡｓｎＧｌｎＬｅｕＧｌｎＡｌａＶａｌ
ＳｅｒＬｙｓＶａｌＧｌｎＡｓｐＴｈｒＧｌｎ５０５５
６０ＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＣＡＧＴＧＣＡＡ
ＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＣＴＣ２４０ＳｅｒＬｅｕＡｌａＡｌａＬｅｕＧｌｙＴｈｒＶａｌＧｌｎ
ＬｅｕＧｌｕＴｈｒＡｌａＳｅｒＧｌｎＬｅｕ６５７０
７５８０ＴＣＣＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＴＧＧＡＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧ
ＡＡＧＣＴＧＡＧＣＧＣＣＣＴＣＧＧＣＣＡＧ２８８ＳｅｒＡｒｇＧｌｎＭｅｔＬｅｕＡｓｐＡｓｐＩｌｅＧｌｎ
ＬｙｓＬｅｕＳｅｒＡｌａＬｅｕＧｌｙＧｌｎ８５
９０９５ＣＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＣＴＧ
ＡＣＣＧＣＡＧＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＧＡＡＡ３３６ＧｌｎＰｈｅＬｙｓＧｌｕＧｌｕＬｅｕＡｓｐＶａｌＬｅｕ
ＴｈｒＡｌａＡｓｐＧｌｙＩｌｅＬｙｓＬｙｓ１００１０５
１１０ＡＧＣＡＣＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＴＧＡ
３５４ＳｅｒＴｈｒＧｌｙＬｙｓＡｌａ１１５

【０１０１】配列番号：４配列の長さ：１１７配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列：ＭｅｔＭｅｔＡｓｎＭｅｔＡｓｐＶａｌＩｌｅＬｙｓＳｅｒ
ＰｈｅＴｈｒＧｌｕＧｌｎＭｅｔＧｌｎＧｌｙ１５
１０１５ＰｈｅＡｌａＡｌａＰｒｏＬｅｕＴｈｒＡｒｇＴｙｒＡｓｎ
ＧｌｎＬｅｕＬｅｕＡｌａＳｅｒＡｓｎＩｌｅ２０２５
３０ＧｌｕＧｌｎＬｅｕＴｈｒＡｒｇＬｅｕＧｌｎＬｅｕＡｌａ
ＳｅｒＡｌａＡｓｎＡｌａＴｙｒＡｌａＧｌｕ３５４０
４５ＬｅｕＧｌｙＬｅｕＡｓｎＧｌｎＬｅｕＧｌｎＡｌａＶａｌ
ＳｅｒＬｙｓＶａｌＧｌｎＡｓｐＴｈｒＧｌｎ５０５５
６０ＳｅｒＬｅｕＡｌａＡｌａＬｅｕＧｌｙＴｈｒＶａｌＧｌｎ
ＬｅｕＧｌｕＴｈｒＡｌａＳｅｒＧｌｎＬｅｕ６５７０
７５８０ＳｅｒＡｒｇＧｌｎＭｅｔＬｅｕＡｓｐＡｓｐＩｌｅＧｌｎ
ＬｙｓＬｅｕＳｅｒＡｌａＬｅｕＧｌｙＧｌｎ８５
９０９５ＧｌｎＰｈｅＬｙｓＧｌｕＧｌｕＬｅｕＡｓｐＶａｌＬｅｕ
ＴｈｒＡｌａＡｓｐＧｌｙＩｌｅＬｙｓＬｙｓ１００１０５
１１０ＳｅｒＴｈｒＧｌｙＬｙｓＡｌａ１１５

【０１０２】配列番号：５配列の長さ：４０５配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：genomic DNA 配列：ＡＴＧＡＧＣＧＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＧＡＡＧＴＡＧＧＣ
ＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＴＣＴＣＡＧＣＡＡＧ４８ＭｅｔＳｅｒＡｌａＧｌｎＳｅｒＬｅｕＧｌｕＶａｌＧｌｙ
ＧｌｎＬｙｓＡｌａＡｒｇＬｅｕＳｅｒＬｙｓ１５
１０１５ＣＧＧＴＴＣＧＧＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＴＡＧＣＣＧＣＣ
ＴＴＣＧＣＣＧＣＧＣＴＣＴＣＧＧＡＧＧＡＣ９６ＡｒｇＰｈｅＧｌｙＡｌａＡｌａＧｌｕＶａｌＡｌａＡｌａ
ＰｈｅＡｌａＡｌａＬｅｕＳｅｒＧｌｕＡｓｐ２０２５
３０ＴＴＣＡＡＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＴＧＧＡＣＣＣＧＧＣＣ
ＴＴＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＣＧＧＣＧＴＴＣ１４４ＰｈｅＡｓｎＰｒｏＬｅｕＨｉｓＬｅｕＡｓｐＰｒｏＡｌａ
ＰｈｅＡｌａＡｌａＴｈｒＴｈｒＡｌａＰｈｅ３５４０
４５ＧＡＧＣＧＧＣＣＣＡＴＡＧＴＣＣＡＣＧＧＣＡＴＧＣＴＧ
ＣＴＣＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＧＧＧ１９２ＧｌｕＡｒｇＰｒｏＩｌｅＶａｌＨｉｓＧｌｙＭｅｔＬｅｕ
ＬｅｕＡｌａＳｅｒＬｅｕＰｈｅＳｅｒＧｌｙ５０５５
６０ＣＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＡＧＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧ
ＧＧＧＡＧＣＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＧＴＣＡＡ２４０ＬｅｕＬｅｕＧｌｙＧｌｎＧｌｎＬｅｕＰｒｏＧｌｙＬｙｓ
ＧｌｙＳｅｒＩｌｅＴｙｒＬｅｕＧｌｙＧｌｎ６５７０
７５８０ＡＧＣＣＴＣＡＧＣＴＴＣＡＡＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＴＴＴ
ＧＴＣＧＧＧＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＣＧＧＣＣ２８８ＳｅｒＬｅｕＳｅｒＰｈｅＬｙｓＬｅｕＰｒｏＶａｌＰｈｅ
ＶａｌＧｌｙＡｓｐＧｌｕＶａｌＴｈｒＡｌａ８５
９０９５ＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＣＴＴＣＧＣＧＡＧ
ＧＡＣＡＡＧＣＣＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧ３３６ＧｌｕＶａｌＧｌｕＶａｌＴｈｒＡｌａＬｅｕＡｒｇＧｌｕ
ＡｓｐＬｙｓＰｒｏＩｌｅＡｌａＴｈｒＬｅｕ１００１０５
１１０ＡＣＣＡＣＣＣＧＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＣＡＡＧＧＣＧＧＣ
ＧＣＣＣＴＣＧＣＣＧＴＧＡＣＧＧＧＧＧＡＡ３８４ＴｈｒＴｈｒＡｒｇＩｌｅＰｈｅＴｈｒＧｌｎＧｌｙＧｌｙ
ＡｌａＬｅｕＡｌａＶａｌＴｈｒＧｌｙＧｌｕ１１５１２０
１２５ＧＣＣＧＴＧＧＴＣＡＡＧＣＴＧＣＣＴＴＡＡ
４０５ＡｌａＶａｌＶａｌＬｙｓＬｅｕＰｒｏ１３０

【０１０３】配列番号：６配列の長さ：１３４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列：ＭｅｔＳｅｒＡｌａＧｌｎＳｅｒＬｅｕＧｌｕＶａｌＧｌｙ
ＧｌｎＬｙｓＡｌａＡｒｇＬｅｕＳｅｒＬｙｓ１５
１０１５ＡｒｇＰｈｅＧｌｙＡｌａＡｌａＧｌｕＶａｌＡｌａＡｌａ
ＰｈｅＡｌａＡｌａＬｅｕＳｅｒＧｌｕＡｓｐ２０２５
３０ＰｈｅＡｓｎＰｒｏＬｅｕＨｉｓＬｅｕＡｓｐＰｒｏＡｌａ
ＰｈｅＡｌａＡｌａＴｈｒＴｈｒＡｌａＰｈｅ３５４０
４５ＧｌｕＡｒｇＰｒｏＩｌｅＶａｌＨｉｓＧｌｙＭｅｔＬｅｕ
ＬｅｕＡｌａＳｅｒＬｅｕＰｈｅＳｅｒＧｌｙ５０５５
６０ＬｅｕＬｅｕＧｌｙＧｌｎＧｌｎＬｅｕＰｒｏＧｌｙＬｙｓ
ＧｌｙＳｅｒＩｌｅＴｙｒＬｅｕＧｌｙＧｌｎ６５７０
７５８０ＳｅｒＬｅｕＳｅｒＰｈｅＬｙｓＬｅｕＰｒｏＶａｌＰｈｅ
ＶａｌＧｌｙＡｓｐＧｌｕＶａｌＴｈｒＡｌａ８５
９０９５ＧｌｕＶａｌＧｌｕＶａｌＴｈｒＡｌａＬｅｕＡｒｇＧｌｕ
ＡｓｐＬｙｓＰｒｏＩｌｅＡｌａＴｈｒＬｅｕ１００１０５
１１０ＴｈｒＴｈｒＡｒｇＩｌｅＰｈｅＴｈｒＧｌｎＧｌｙＧｌｙ
ＡｌａＬｅｕＡｌａＶａｌＴｈｒＧｌｙＧｌｕ１１５１２０
１２５ＡｌａＶａｌＶａｌＬｙｓＬｅｕＰｒｏ１３０

【０１０４】配列番号：７配列の長さ：２７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： CCSCCSTGGA TCAAYAAGTW YTAYATC 27

【０１０５】配列番号：８配列の長さ：２７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： SAGCCASGCS GTCCARTCSG GCCACCA 27

【０１０６】配列番号：９配列の長さ：３１８７配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：genomic DNA 配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：384..734 特徴を表す記号：CDS 存在位置：830..2611 配列： AGATCTGGAC CGGGGTGCTG GCCTGGGCCA CGCCGGCGAG GGCCAGCGCG GAGCAACCGA 60 GCAGCAGGGC GAGAGGTTTC ATCGGGATTC CTTGGCAGTC TGAATGACGT GCCAGCCTAT 120 CAGCGCGGCG CCGGTGCGGC GAGGGCGCGC CGGACCCAGT GCGTCACCTC TCGTCTGATC 180 CGCCTCCCTC GACGGGCGTC GCTGACAAAA AAATTCAAAC AGAAATTAAC ATTTATGTCA 240 TTTACACCAA ACCGCATTTG GTTGCAGAAT GCTCAAACGT GTGTTTGAAC AGAGCAAGCA 300 ACACGTAAAC AGGGATGACA TGCAGTACCC GTAAGAAGGG CCGATTGGCC CACAACAACA 360 CTGTTCTGCC GAACTGGAGA CCG ATG ATG AAT ATG GAC GTG ATC AAG AGC 410 Met Met Asn Met Asp Val Ile Lys Ser 1 5 TTT ACC GAG CAG ATG CAA GGC TTC GCC GCC CCC CTC ACC CGC TAC AAC 458 Phe Thr Glu Gln Met Gln Gly Phe Ala Ala Pro Leu Thr Arg Tyr Asn 10 15 20 25 CAG CTG CTG GCC AGC AAC ATC GAA CAG CTG ACC CGG TTG CAG CTG GCC 506 Gln Leu Leu Ala Ser Asn Ile Glu Gln Leu Thr Arg Leu Gln Leu Ala 30 35 40 TCC GCC AAC GCC TAC GCC GAA CTG GGC CTC AAC CAG TTG CAG GCC GTG 554 Ser Ala Asn Ala Tyr Ala Glu Leu Gly Leu Asn Gln Leu Gln Ala Val 45 50 55 AGC AAG GTG CAG GAC ACC CAG AGC CTG GCG GCC CTG GGC ACA GTG CAA 602 Ser Lys Val Gln Asp Thr Gln Ser Leu Ala Ala Leu Gly Thr Val Gln 60 65 70 CTG GAG ACC GCC AGC CAG CTC TCC CGC CAG ATG CTG GAT GAC ATC CAG 650 Leu Glu Thr Ala Ser Gln Leu Ser Arg Gln Met Leu Asp Asp Ile Gln 75 80 85 AAG CTG AGC GCC CTC GGC CAG CAG TTC AAG GAA GAG CTG GAT GTC CTG 698 Lys Leu Ser Ala Leu Gly Gln Gln Phe Lys Glu Glu Leu Asp Val Leu 90 95 100 105 ACC GCA GAC GGC ATC AAG AAA AGC ACG GGC AAG GCC TGATAACCCC 744 Thr Ala Asp Gly Ile Lys Lys Ser Thr Gly Lys Ala 110 115 TGGCTGCCCG TTCGGGCAGC CACATCTCCC CATGACTCGA CGCTACGGGC TAGTTCCCGC 804 CTCGGGTGTG GGTGAAGGAG AGCAC ATG AGC CAA CCA TCT TAT GGC CCG CTG 856 Met Ser Gln Pro Ser Tyr Gly Pro Leu 1 5 TTC GAG GCC CTG GCC CAC TAC AAT GAC AAG CTG CTG GCC ATG GCC AAG 904 Phe Glu Ala Leu Ala His Tyr Asn Asp Lys Leu Leu Ala Met Ala Lys 10 15 20 25 GCC CAG ACA GAG CGC ACC GCC CAG GCG CTG CTG CAG ACC AAT CTG GAC 952 Ala Gln Thr Glu Arg Thr Ala Gln Ala Leu Leu Gln Thr Asn Leu Asp 30 35 40 GAT CTG GGC CAG GTG CTG GAG CAG GGC AGC CAG CAA CCC TGG CAG CTG 1000 Asp Leu Gly Gln Val Leu Glu Gln Gly Ser Gln Gln Pro Trp Gln Leu 45 50 55 ATC CAG GCC CAG ATG AAC TGG TGG CAG GAT CAG CTC AAG CTG ATG CAG 1048 Ile Gln Ala Gln Met Asn Trp Trp Gln Asp Gln Leu Lys Leu Met Gln 60 65 70 CAC ACC CTG CTC AAA AGC GCA GGC CAG CCG AGC GAG CCG GTG ATC ACC 1096 His Thr Leu Leu Lys Ser Ala Gly Gln Pro Ser Glu Pro Val Ile Thr 75 80 85 CCG GAG CGC AGC GAT CGC CGC TTC AAG GCC GAG GCC TGG AGC GAA CAA 1144 Pro Glu Arg Ser Asp Arg Arg Phe Lys Ala Glu Ala Trp Ser Glu Gln 90 95 100 105 CCC ATC TAT GAC TAC CTC AAG CAG TCC TAC CTG CTC ACC GCC AGG CAC 1192 Pro Ile Tyr Asp Tyr Leu Lys Gln Ser Tyr Leu Leu Thr Ala Arg His 110 115 120 CTG CTG GCC TCG GTG GAT GCC CTG GAG GGC GTC CCC CAG AAG AGC CGG 1240 Leu Leu Ala Ser Val Asp Ala Leu Glu Gly Val Pro Gln Lys Ser Arg 125 130 135 GAG CGG CTG CGT TTC TTC ACC CGC CAG TAC GTC AAC GCC ATG GCC CCC 1288 Glu Arg Leu Arg Phe Phe Thr Arg Gln Tyr Val Asn Ala Met Ala Pro 140 145 150 AGC AAC TTC CTG GCC ACC AAC CCC GAG CTG CTC AAG CTG ACC CTG GAG 1336 Ser Asn Phe Leu Ala Thr Asn Pro Glu Leu Leu Lys Leu Thr Leu Glu 155 160 165 TCC GAC GGC CAG AAC CTG GTG CGC GGA CTG GCC CTC TTG GCC GAG GAT 1384 Ser Asp Gly Gln Asn Leu Val Arg Gly Leu Ala Leu Leu Ala Glu Asp 170 175 180 185 CTG GAG CGC AGC GCC GAT CAG CTC AAC ATC CGC CTG ACC GAC GAA TCC 1432 Leu Glu Arg Ser Ala Asp Gln Leu Asn Ile Arg Leu Thr Asp Glu Ser 190 195 200 GCC TTC GAG CTC GGG CGG GAT CTG GCC CTG ACC CCG GGC CGG GTG GTG 1480 Ala Phe Glu Leu Gly Arg Asp Leu Ala Leu Thr Pro Gly Arg Val Val 205 210 215 CAG CGC ACC GAG CTC TAT GAG CTC ATT CAG TAC AGC CCG ACT ACC GAG 1528 Gln Arg Thr Glu Leu Tyr Glu Leu Ile Gln Tyr Ser Pro Thr Thr Glu 220 225 230 ACG GTG GGC AAG ACA CCT GTG CTG ATA GTG CCG CCC TTC ATC AAC AAG 1576 Thr Val Gly Lys Thr Pro Val Leu Ile Val Pro Pro Phe Ile Asn Lys 235 240 245 TAC TAC ATC ATG GAC ATG CGG CCC CAG AAC TCC CTG GTC GCC TGG CTG 1624 Tyr Tyr Ile Met Asp Met Arg Pro Gln Asn Ser Leu Val Ala Trp Leu 250 255 260 265 GTC GCC CAG GGC CAG ACG GTA TTC ATG ATC TCC TGG CGC AAC CCG GGC 1672 Val Ala Gln Gly Gln Thr Val Phe Met Ile Ser Trp Arg Asn Pro Gly 270 275 280 GTG GCC CAG GCC CAA ATC GAT CTC GAC GAC TAC GTG GTG GAT GGC GTC 1720 Val Ala Gln Ala Gln Ile Asp Leu Asp Asp Tyr Val Val Asp Gly Val 285 290 295 ATC GCC GCC CTG GAC GGC GTG GAG GCG GCC ACC GGC GAG CGG GAG GTG 1768 Ile Ala Ala Leu Asp Gly Val Glu Ala Ala Thr Gly Glu Arg Glu Val 300 305 310 CAC GGC ATC GGC TAC TGC ATC GGC GGC ACC GCC CTG TCG CTC GCC ATG 1816 His Gly Ile Gly Tyr Cys Ile Gly Gly Thr Ala Leu Ser Leu Ala Met 315 320 325 GGC TGG CTG GCG GCG CGG CGC CAG AAG CAG CGG GTG CGC ACC GCC ACC 1864 Gly Trp Leu Ala Ala Arg Arg Gln Lys Gln Arg Val Arg Thr Ala Thr 330 335 340 345 CTG TTC ACT ACC CTG CTG GAC TTC TCC CAG CCC GGG GAG CTT GGC ATC 1912 Leu Phe Thr Thr Leu Leu Asp Phe Ser Gln Pro Gly Glu Leu Gly Ile 350 355 360 TTC ATC CAC GAG CCC ATC ATA GCG GCG CTC GAG GCG CAA AAT GAG GCC 1960 Phe Ile His Glu Pro Ile Ile Ala Ala Leu Glu Ala Gln Asn Glu Ala 365 370 375 AAG GGC ATC ATG GAC GGG CGC CAG CTG GCG GTC TCC TTC AGC CTG CTG 2008 Lys Gly Ile Met Asp Gly Arg Gln Leu Ala Val Ser Phe Ser Leu Leu 380 385 390 CGG GAG AAC AGC CTC TAC TGG AAC TAC TAC ATC GAC AGC TAC CTC AAG 2056 Arg Glu Asn Ser Leu Tyr Trp Asn Tyr Tyr Ile Asp Ser Tyr Leu Lys 395 400 405 GGT CAG AGC CCG GTG GCC TTC GAT CTG CTG CAC TGG AAC AGC GAC AGC 2104 Gly Gln Ser Pro Val Ala Phe Asp Leu Leu His Trp Asn Ser Asp Ser 410 415 420 425 ACC AAT GTG GCG GGC AAG ACC CAC AAC AGC CTG CTG CGC CGT CTC TAC 2152 Thr Asn Val Ala Gly Lys Thr His Asn Ser Leu Leu Arg Arg Leu Tyr 430 435 440 CTG GAG AAC CAG CTG GTG AAG GGG GAG CTC AAG ATC CGC AAC ACC CGC 2200 Leu Glu Asn Gln Leu Val Lys Gly Glu Leu Lys Ile Arg Asn Thr Arg 445 450 455 ATC GAT CTC GGC AAG GTG AAG ACC CCT GTG CTG CTG GTG TCG GCG GTG 2248 Ile Asp Leu Gly Lys Val Lys Thr Pro Val Leu Leu Val Ser Ala Val 460 465 470 GAC GAT CAC ATC GCC CTC TGG CAG GGC ACC TGG CAG GGC ATG AAG CTG 2296 Asp Asp His Ile Ala Leu Trp Gln Gly Thr Trp Gln Gly Met Lys Leu 475 480 485 TTT GGC GGG GAG CAG CGC TTC CTC CTG GCG GAG TCC GGC CAC ATC GCC 2344 Phe Gly Gly Glu Gln Arg Phe Leu Leu Ala Glu Ser Gly His Ile Ala 490 495 500 505 GGC ATC ATC AAC CCG CCG GCC GCC AAC AAG TAC GGC TTC TGG CAC AAC 2392 Gly Ile Ile Asn Pro Pro Ala Ala Asn Lys Tyr Gly Phe Trp His Asn 510 515 520 GGG GCC GAG GCC GAG AGC CCG GAG AGC TGG CTG GCA GGG GCG ACG CAC 2440 Gly Ala Glu Ala Glu Ser Pro Glu Ser Trp Leu Ala Gly Ala Thr His 525 530 535 CAG GGC GGC TCC TGG TGG CCC GAG ATG ATG GGC TTT ATC CAG AAC CGT 2488 Gln Gly Gly Ser Trp Trp Pro Glu Met Met Gly Phe Ile Gln Asn Arg 540 545 550 GAC GAA GGG TCA GAG CCC GTC CCC GCG CGG GTC CCG GAG GAA GGG CTG 2536 Asp Glu Gly Ser Glu Pro Val Pro Ala Arg Val Pro Glu Glu Gly Leu 555 560 565 GCC CCC GCC CCC GGC CAC TAT GTC AAG GTG CGG CTC AAC CCC GTG TTT 2584 Ala Pro Ala Pro Gly His Tyr Val Lys Val Arg Leu Asn Pro Val Phe 570 575 580 585 GCC TGC CCA ACA GAG GAG GAC GCC GCA TGAGCGCACA ATCCCTGGAA 2631 Ala Cys Pro Thr Glu Glu Asp Ala Ala 590 GTAGGCCAGA AGGCCCGTCT CAGCAAGCGG TTCGGGGCGG CGGAGGTAGC CGCCTTCGCC 2691 GCGCTCTCGG AGGACTTCAA CCCCCTGCAC CTGGACCCGG CCTTCGCCGC CACCACGGCG 2751 TTCGAGCGGC CCATAGTCCA CGGCATGCTG CTCGCCAGCC TCTTCTCCGG GCTGCTGGGC 2811 CAGCAGTTGC CGGGCAAGGG GAGCATCTAT CTGGGTCAAA GCCTCAGCTT CAAGCTGCCG 2871 GTCTTTGTCG GGGACGAGGT GACGGCCGAG GTGGAGGTGA CCGCCCTTCG CGAGGACAAG 2931 CCCATCGCCA CCCTGACCAC CCGCATCTTC ACCCAAGGCG GCGCCCTCGC CGTGACGGGG 2991 GAAGCCGTGG TCAAGCTGCC TTAAGCACCG GCGGCACGCA GGCACAATCA GCCCGGCCCC 3051 TGCCGGGCTG ATTGTTCTCC CCCGCTCCGC TTGCCCCCTT TTTCGGGGCA ATTTGGCCCA 3111 GGCCCTTTCC CTGCCCCGCC TAACTGCCTA AAATGGCCGC CCTGCCGTGT AGGCATTCAT 3171 CCAGCTAGAG GAATTC 3187

【０１０７】配列番号：１０配列の長さ：３１８７配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：genomic DNA 配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：2611..3012 配列： AGATCTGGAC CGGGGTGCTG GCCTGGGCCA CGCCGGCGAG GGCCAGCGCG GAGCAACCGA 60 GCAGCAGGGC GAGAGGTTTC ATCGGGATTC CTTGGCAGTC TGAATGACGT GCCAGCCTAT 120 CAGCGCGGCG CCGGTGCGGC GAGGGCGCGC CGGACCCAGT GCGTCACCTC TCGTCTGATC 180 CGCCTCCCTC GACGGGCGTC GCTGACAAAA AAATTCAAAC AGAAATTAAC ATTTATGTCA 240 TTTACACCAA ACCGCATTTG GTTGCAGAAT GCTCAAACGT GTGTTTGAAC AGAGCAAGCA 300 ACACGTAAAC AGGGATGACA TGCAGTACCC GTAAGAAGGG CCGATTGGCC CACAACAACA 360 CTGTTCTGCC GAACTGGAGA CCGATGATGA ATATGGACGT GATCAAGAGC TTTACCGAGC 420 AGATGCAAGG CTTCGCCGCC CCCCTCACCC GCTACAACCA GCTGCTGGCC AGCAACATCG 480 AACAGCTGAC CCGGTTGCAG CTGGCCTCCG CCAACGCCTA CGCCGAACTG GGCCTCAACC 540 AGTTGCAGGC CGTGAGCAAG GTGCAGGACA CCCAGAGCCT GGCGGCCCTG GGCACAGTGC 600 AACTGGAGAC CGCCAGCCAG CTCTCCCGCC AGATGCTGGA TGACATCCAG AAGCTGAGCG 660 CCCTCGGCCA GCAGTTCAAG GAAGAGCTGG ATGTCCTGAC CGCAGACGGC ATCAAGAAAA 720 GCACGGGCAA GGCCTGATAA CCCCTGGCTG CCCGTTCGGG CAGCCACATC TCCCCATGAC 780 TCGACGCTAC GGGCTAGTTC CCGCCTCGGG TGTGGGTGAA GGAGAGCACA TGAGCCAACC 840 ATCTTATGGC CCGCTGTTCG AGGCCCTGGC CCACTACAAT GACAAGCTGC TGGCCATGGC 900 CAAGGCCCAG ACAGAGCGCA CCGCCCAGGC GCTGCTGCAG ACCAATCTGG ACGATCTGGG 960 CCAGGTGCTG GAGCAGGGCA GCCAGCAACC CTGGCAGCTG ATCCAGGCCC AGATGAACTG 1020 GTGGCAGGAT CAGCTCAAGC TGATGCAGCA CACCCTGCTC AAAAGCGCAG GCCAGCCGAG 1080 CGAGCCGGTG ATCACCCCGG AGCGCAGCGA TCGCCGCTTC AAGGCCGAGG CCTGGAGCGA 1140 ACAACCCATC TATGACTACC TCAAGCAGTC CTACCTGCTC ACCGCCAGGC ACCTGCTGGC 1200 CTCGGTGGAT GCCCTGGAGG GCGTCCCCCA GAAGAGCCGG GAGCGGCTGC GTTTCTTCAC 1260 CCGCCAGTAC GTCAACGCCA TGGCCCCCAG CAACTTCCTG GCCACCAACC CCGAGCTGCT 1320 CAAGCTGACC CTGGAGTCCG ACGGCCAGAA CCTGGTGCGC GGACTGGCCC TCTTGGCCGA 1380 GGATCTGGAG CGCAGCGCCG ATCAGCTCAA CATCCGCCTG ACCGACGAAT CCGCCTTCGA 1440 GCTCGGGCGG GATCTGGCCC TGACCCCGGG CCGGGTGGTG CAGCGCACCG AGCTCTATGA 1500 GCTCATTCAG TACAGCCCGA CTACCGAGAC GGTGGGCAAG ACACCTGTGC TGATAGTGCC 1560 GCCCTTCATC AACAAGTACT ACATCATGGA CATGCGGCCC CAGAACTCCC TGGTCGCCTG 1620 GCTGGTCGCC CAGGGCCAGA CGGTATTCAT GATCTCCTGG CGCAACCCGG GCGTGGCCCA 1680 GGCCCAAATC GATCTCGACG ACTACGTGGT GGATGGCGTC ATCGCCGCCC TGGACGGCGT 1740 GGAGGCGGCC ACCGGCGAGC GGGAGGTGCA CGGCATCGGC TACTGCATCG GCGGCACCGC 1800 CCTGTCGCTC GCCATGGGCT GGCTGGCGGC GCGGCGCCAG AAGCAGCGGG TGCGCACCGC 1860 CACCCTGTTC ACTACCCTGC TGGACTTCTC CCAGCCCGGG GAGCTTGGCA TCTTCATCCA 1920 CGAGCCCATC ATAGCGGCGC TCGAGGCGCA AAATGAGGCC AAGGGCATCA TGGACGGGCG 1980 CCAGCTGGCG GTCTCCTTCA GCCTGCTGCG GGAGAACAGC CTCTACTGGA ACTACTACAT 2040 CGACAGCTAC CTCAAGGGTC AGAGCCCGGT GGCCTTCGAT CTGCTGCACT GGAACAGCGA 2100 CAGCACCAAT GTGGCGGGCA AGACCCACAA CAGCCTGCTG CGCCGTCTCT ACCTGGAGAA 2160 CCAGCTGGTG AAGGGGGAGC TCAAGATCCG CAACACCCGC ATCGATCTCG GCAAGGTGAA 2220 GACCCCTGTG CTGCTGGTGT CGGCGGTGGA CGATCACATC GCCCTCTGGC AGGGCACCTG 2280 GCAGGGCATG AAGCTGTTTG GCGGGGAGCA GCGCTTCCTC CTGGCGGAGT CCGGCCACAT 2340 CGCCGGCATC ATCAACCCGC CGGCCGCCAA CAAGTACGGC TTCTGGCACA ACGGGGCCGA 2400 GGCCGAGAGC CCGGAGAGCT GGCTGGCAGG GGCGACGCAC CAGGGCGGCT CCTGGTGGCC 2460 CGAGATGATG GGCTTTATCC AGAACCGTGA CGAAGGGTCA GAGCCCGTCC CCGCGCGGGT 2520 CCCGGAGGAA GGGCTGGCCC CCGCCCCCGG CCACTATGTC AAGGTGCGGC TCAACCCCGT 2580 GTTTGCCTGC CCAACAGAGG AGGACGCCGC ATG AGC GCA CAA TCC CTG GAA GTA 2634 Met Ser Ala Gln Ser Leu Glu Val 1 5 GGC CAG AAG GCC CGT CTC AGC AAG CGG TTC GGG GCG GCG GAG GTA GCC 2682 Gly Gln Lys Ala Arg Leu Ser Lys Arg Phe Gly Ala Ala Glu Val Ala 10 15 20 GCC TTC GCC GCG CTC TCG GAG GAC TTC AAC CCC CTG CAC CTG GAC CCG 2730 Ala Phe Ala Ala Leu Ser Glu Asp Phe Asn Pro Leu His Leu Asp Pro 25 30 35 40 GCC TTC GCC GCC ACC ACG GCG TTC GAG CGG CCC ATA GTC CAC GGC ATG 2778 Ala Phe Ala Ala Thr Thr Ala Phe Glu Arg Pro Ile Val His Gly Met 45 50 55 CTG CTC GCC AGC CTC TTC TCC GGG CTG CTG GGC CAG CAG TTG CCG GGC 2826 Leu Leu Ala Ser Leu Phe Ser Gly Leu Leu Gly Gln Gln Leu Pro Gly 60 65 70 AAG GGG AGC ATC TAT CTG GGT CAA AGC CTC AGC TTC AAG CTG CCG GTC 2874 Lys Gly Ser Ile Tyr Leu Gly Gln Ser Leu Ser Phe Lys Leu Pro Val 75 80 85 TTT GTC GGG GAC GAG GTG ACG GCC GAG GTG GAG GTG ACC GCC CTT CGC 2922 Phe Val Gly Asp Glu Val Thr Ala Glu Val Glu Val Thr Ala Leu Arg 90 95 100 GAG GAC AAG CCC ATC GCC ACC CTG ACC ACC CGC ATC TTC ACC CAA GGC 2970 Glu Asp Lys Pro Ile Ala Thr Leu Thr Thr Arg Ile Phe Thr Gln Gly 105 110 115 120 GGC GCC CTC GCC GTG ACG GGG GAA GCC GTG GTC AAG CTG CCT 3012 Gly Ala Leu Ala Val Thr Gly Glu Ala Val Val Lys Leu Pro 125 130 TAAGCACCGG CGGCACGCAG GCACAATCAG CCCGGCCCCT GCCGGGCTGA TTGTTCTCCC 3072 CCGCTCCGCT TGCCCCCTTT TTCGGGGCAA TTTGGCCCAG GCCCTTTCCC TGCCCCGCCT 3132 AACTGCCTAA AATGGCCGCC CTGCCGTGTA GGCATTCATC CAGCTAGAGG AATTC 3187

【０１０８】配列番号：１１配列の長さ：２５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： AGTTCCCGCC TCGGGTGTGG GTGAA 25

【０１０９】配列番号：１２配列の長さ：２５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： GGCATATGCG CTCATGCGGC GTCCT 25

【０１１０】配列番号：１３配列の長さ：３０配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： GCCATATGAG CGCACAATCC CTGGAAGTAG 30

【０１１１】配列番号：１４配列の長さ：３０配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： CTGGGATCCG CCGGTGCTTA AGGCAGCTTG 30

【０１１２】配列番号：１５配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Ser Ala Gln Ser Leu Glu Val Gly Gln Lys Ala Arg Leu Ser Lys Arg 1 5 10 15 Phe Gly Ala Ala 20

【０１１３】配列番号：１６配列の長さ：２１配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Ser Ala Gln Ser Leu Glu Val Gly Gln Lys Ala Arg Leu Ser Lys 1 5 10 15 Arg Phe Gly Ala Ala 20

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の遺伝子の構築図である。

【図２】ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動の結
果を示す写真である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:05） (Ｃ１２Ｎ 9/88 Ｃ１２Ｒ 1:05） (Ｃ１２Ｐ 7/62 Ｃ１２Ｒ 1:05）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号２で表されるアミノ酸配列又は
該アミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠
失、置換若しくは付加された配列を含み、ポリエステル
重合活性をもたらすポリペプチドをコードするポリエス
テル重合酵素遺伝子。
【請求項２】配列番号１で表される塩基配列を含むポ
リエステル重合酵素遺伝子。
【請求項３】請求項１又は２記載のポリエステル重合
酵素遺伝子と、該遺伝子の上流及び下流に存在するオー
プンリーディングフレームのいずれか一方とを含む遺伝
子発現カセット。
【請求項４】ポリエステル重合酵素遺伝子の上流に存
在するオープンリーディングフレームが、配列番号４で
表されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡを含むもので
ある請求項３記載の遺伝子発現カセット。
【請求項５】ポリエステル重合酵素遺伝子の上流に存
在するオープンリーディングフレームが、配列番号３で
表される塩基配列を含むものである請求項３記載の遺伝
子発現カセット。
【請求項６】ポリエステル重合酵素遺伝子の下流に存
在するオープンリーディングフレームが、配列番号６で
表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列において１若
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された
配列を含み、エノイル−ＣｏＡヒドラターゼ活性をもた
らすポリペプチドをコードするＤＮＡを含むものである
請求項３記載の遺伝子発現カセット。
【請求項７】ポリエステル重合酵素遺伝子の下流に存
在するオープンリーディングフレームが、配列番号５で
表される塩基配列を含むものである請求項３記載の遺伝
子発現カセット。
【請求項８】請求項１若しくは２記載のポリエステル
合成酵素遺伝子又は請求項３〜７のいずれか１項に記載
の遺伝子発現カセットを含む組換えベクター。
【請求項９】請求項８記載の組換えベクターによって
形質転換された形質転換体。
【請求項１０】請求項９記載の形質転換体を培地に培
養し、得られる培養物からポリエステルを採取すること
を特徴とするポリエステルの製造方法。
【請求項１１】ポリエステルが、次式Ｉ：【化１】（Ｒは水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を表
す。）で示される３−ヒドロキシアルカン酸の共重合体
である請求項１０記載のポリエステルの製造方法。
【請求項１２】ポリエステルが、ポリ（３−ヒドロキ
シブチレート−３−ヒドロキシヘキサノエート）ランダ
ム共重合体である請求項１０記載のポリエステルの製造
方法。