JPH10127280A - アミダーゼ及びそれを用いたピペリジンカルボン酸類の製法 - Google Patents
アミダーゼ及びそれを用いたピペリジンカルボン酸類の製法Info
- Publication number
- JPH10127280A JPH10127280A JP8289753A JP28975396A JPH10127280A JP H10127280 A JPH10127280 A JP H10127280A JP 8289753 A JP8289753 A JP 8289753A JP 28975396 A JP28975396 A JP 28975396A JP H10127280 A JPH10127280 A JP H10127280A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- piperidinecarboxylic acid
- amidase
- formula
- acid amide
- piperidine carboxylic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】２−ピペリジンカルボン酸アミド類に作用し、
光学活性な２−ピペリジンカルボン酸類を製造するため
新規なアミダーゼを提供する。 【解決手段】Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸アミド類
を基質として加水分解することを特徴とするマイコプラ
ナ属細菌由来のアミダーゼ、その生産菌、及び該アミダ
ーゼを用いてＳ体の２−ピペリジンカルボン酸類を製造
する。
光学活性な２−ピペリジンカルボン酸類を製造するため
新規なアミダーゼを提供する。 【解決手段】Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸アミド類
を基質として加水分解することを特徴とするマイコプラ
ナ属細菌由来のアミダーゼ、その生産菌、及び該アミダ
ーゼを用いてＳ体の２−ピペリジンカルボン酸類を製造
する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規なアミダーゼ
及び該酵素を生産する微生物に関するものである。また
本発明は、該酵素を作用させることにより、２−ピペリ
ジンカルボン酸類及び２−ピペリジンカルボン酸アミド
類を製造、回収する方法に関するものである。本発明に
より製造、回収される２−ピペリジンカルボン酸類及び
２−ピペリジンカルボン酸アミド類は、医薬、農薬等に
使用される生理活性物質、或いはその中間体として有用
な物質である。例えば、アミド型局所麻酔剤、トロンビ
ン阻害剤（抗凝固剤）、脳機能改善剤、免疫抑制剤など
の重要合成中間体であり、また広くプロリンアナログと
して有用性が期待されている。
及び該酵素を生産する微生物に関するものである。また
本発明は、該酵素を作用させることにより、２−ピペリ
ジンカルボン酸類及び２−ピペリジンカルボン酸アミド
類を製造、回収する方法に関するものである。本発明に
より製造、回収される２−ピペリジンカルボン酸類及び
２−ピペリジンカルボン酸アミド類は、医薬、農薬等に
使用される生理活性物質、或いはその中間体として有用
な物質である。例えば、アミド型局所麻酔剤、トロンビ
ン阻害剤（抗凝固剤）、脳機能改善剤、免疫抑制剤など
の重要合成中間体であり、また広くプロリンアナログと
して有用性が期待されている。
【０００２】
【従来の技術】従来、光学活性なＳ体の２−ピペリジン
カルボン酸の製造方法としてＶ．Ｗ．Ｒｏｄｗｅｌｌに
よる化学的に合成したラセミ体の２−ピペリジンカルボ
ン酸を酒石酸により光学分割する方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１７Ｂ，１７４（１９７１））、
Ｄ．Ｌ．ＭｏｌｌｅｒらやＲ．Ｎ．Ｇｕｐｔａら、Ｂ．
Ｎ．Ｗｉｃｋｗｒｉｔｅらによる生合成による方法
（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４６，２７５８（１９
７１），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４４，８８（１
９６９），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５，１４７
４２（１９９０））、ＳｏｄａらによるＤ−アミノ酸オ
キシダーゼを用いる方法（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃ
ｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，２０８１（１９９
２））、ＦｕｊｉｉとＭｉｙｏｓｈｉによるＬ−リジン
を原料に用いて合成化学的に誘導する方法（Ｂｕｌｌ．
Ｃｈｅｍｉ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，４８，１３４１（１９
７５））等が知られている。
カルボン酸の製造方法としてＶ．Ｗ．Ｒｏｄｗｅｌｌに
よる化学的に合成したラセミ体の２−ピペリジンカルボ
ン酸を酒石酸により光学分割する方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１７Ｂ，１７４（１９７１））、
Ｄ．Ｌ．ＭｏｌｌｅｒらやＲ．Ｎ．Ｇｕｐｔａら、Ｂ．
Ｎ．Ｗｉｃｋｗｒｉｔｅらによる生合成による方法
（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４６，２７５８（１９
７１），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４４，８８（１
９６９），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５，１４７
４２（１９９０））、ＳｏｄａらによるＤ−アミノ酸オ
キシダーゼを用いる方法（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃ
ｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５６，２０８１（１９９
２））、ＦｕｊｉｉとＭｉｙｏｓｈｉによるＬ−リジン
を原料に用いて合成化学的に誘導する方法（Ｂｕｌｌ．
Ｃｈｅｍｉ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，４８，１３４１（１９
７５））等が知られている。
【０００３】また、Ｎｇ−Ｙｏｕｎ−Ｃｈｅｎら（Ｊ．
Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９，２０７５（１９９４））は、
２−ピペリジンカルボン酸エステルをアスペルギルス・
ニゲル由来のリパーゼと作用させ、光学活性な２−ピペ
リジンカルボン酸並びに２−ピペリジンカルボン酸エス
テルを得ているが、２−ピペリジンカルボン酸の光学収
率は９３％ｅｅでしか得られていない。
Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９，２０７５（１９９４））は、
２−ピペリジンカルボン酸エステルをアスペルギルス・
ニゲル由来のリパーゼと作用させ、光学活性な２−ピペ
リジンカルボン酸並びに２−ピペリジンカルボン酸エス
テルを得ているが、２−ピペリジンカルボン酸の光学収
率は９３％ｅｅでしか得られていない。
【０００４】特開平８−５６６５２号公報には、シュー
ドモナス・フルオレセンス（ＤＳＭ９９２４）及びシュ
ードモナス・プチダ（ＤＳＭ９９２３）、クレブシエラ
・ニューモニア（ＤＳＭ９１７５，９１７６）、クレブ
シエラ・テリゲナ（ＤＳＭ９１７４）の菌体による２−
ピペリジンカルボン酸アミドの加水分解法が記載されて
いるが、Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸の光学収率は
９７．３％ｅｅでしか得られていない。また、２−ピペ
リジンカルボン酸アルキルアミドの加水分解に関する記
載は全くなく、さらに実施例などにおけるＲ体の２−ピ
ペリジンカルボン酸アミドの光学収率に関する記述も全
くみられない。
ドモナス・フルオレセンス（ＤＳＭ９９２４）及びシュ
ードモナス・プチダ（ＤＳＭ９９２３）、クレブシエラ
・ニューモニア（ＤＳＭ９１７５，９１７６）、クレブ
シエラ・テリゲナ（ＤＳＭ９１７４）の菌体による２−
ピペリジンカルボン酸アミドの加水分解法が記載されて
いるが、Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸の光学収率は
９７．３％ｅｅでしか得られていない。また、２−ピペ
リジンカルボン酸アルキルアミドの加水分解に関する記
載は全くなく、さらに実施例などにおけるＲ体の２−ピ
ペリジンカルボン酸アミドの光学収率に関する記述も全
くみられない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、酵素
を用いた不斉加水分解反応により、光学活性な２−ピペ
リジンカルボン酸類及び２−ピペリジンカルボン酸アミ
ド類を製造・分離する方法、２−ピペリジンカルボン酸
アミド類に作用する新規なアミダーゼ、及び該酵素を生
産する微生物を提供することにある。
を用いた不斉加水分解反応により、光学活性な２−ピペ
リジンカルボン酸類及び２−ピペリジンカルボン酸アミ
ド類を製造・分離する方法、２−ピペリジンカルボン酸
アミド類に作用する新規なアミダーゼ、及び該酵素を生
産する微生物を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、アミダー
ゼを生産する新規な微生物を見いだすために、２−ピペ
リジンカルボン酸アミド類に作用するアミダーゼ活性を
有する微生物を広範囲にスクリーニングしたところ、あ
る種の細菌が新規なアミダーゼを生産することを見出
し、本発明を完成するに至った。
ゼを生産する新規な微生物を見いだすために、２−ピペ
リジンカルボン酸アミド類に作用するアミダーゼ活性を
有する微生物を広範囲にスクリーニングしたところ、あ
る種の細菌が新規なアミダーゼを生産することを見出
し、本発明を完成するに至った。
【０００７】すなわち本発明は、一般式（Ｉ）
【０００８】
【化８】
【０００９】［式中、Ｒ1及びＲ2は水素またはアルキル
基を示し、＊印は不斉炭素を表す］で表されるＳ体の２
−ピペリジンカルボン酸アミドを基質として加水分解す
ることを特徴とするマイコプラナ属細菌由来のアミダー
ゼである。
基を示し、＊印は不斉炭素を表す］で表されるＳ体の２
−ピペリジンカルボン酸アミドを基質として加水分解す
ることを特徴とするマイコプラナ属細菌由来のアミダー
ゼである。
【００１０】また本発明は、一般式（Ｉ）で表されるＳ
体の２−ピペリジンカルボン酸アミドを基質として加水
分解するアミダーゼを産生することを特徴とするマイコ
プラナ属に属する細菌である。
体の２−ピペリジンカルボン酸アミドを基質として加水
分解するアミダーゼを産生することを特徴とするマイコ
プラナ属に属する細菌である。
【００１１】さらに本発明は、一般式（Ｉ）で表される
Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドに、前述のアミ
ダーゼを作用させることを特徴とする、一般式（ＩＩ）
Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドに、前述のアミ
ダーゼを作用させることを特徴とする、一般式（ＩＩ）
【００１２】
【化９】
【００１３】［式中、Ｒ2及び＊印は前記と同様を示
す］で表されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸の製法
である。
す］で表されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸の製法
である。
【００１４】一方本発明は、一般式（Ｉ）で現されるＳ
体の２−ピペリジンカルボン酸アミド、及び一般式（Ｉ
ＩＩ）
体の２−ピペリジンカルボン酸アミド、及び一般式（Ｉ
ＩＩ）
【００１５】
【化１０】
【００１６】［式中、Ｒ1、Ｒ2及び＊印は前記と同様を
示す］で表されるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミ
ドの混合物に、前述のアミダーゼを作用させ、生成した
一般式（ＩＩ）で表されるＳ体の２−ピペリジンカルボ
ン酸を分離することを特徴とする、一般式（ＩＩＩ）で
表されるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドの回収
法にある。以下、本発明をさらに詳細に説明する。
示す］で表されるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミ
ドの混合物に、前述のアミダーゼを作用させ、生成した
一般式（ＩＩ）で表されるＳ体の２−ピペリジンカルボ
ン酸を分離することを特徴とする、一般式（ＩＩＩ）で
表されるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドの回収
法にある。以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１７】本発明のアミダーゼは、一般式（Ｉ）で表
されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドを基質と
して加水分解することができるが、一般式（ＩＩＩ）で
表されるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドは加水
分解しないことを特徴とするものである。このようなア
ミダーゼは、例えばマイコプラナ属に属する細菌によっ
て生産され、例えば本発明者により分離された新菌株マ
イコプラナｓｐ．ＴＳＴ−０２７によって生産される。
この菌株は神奈川県海老名市の土壌より分離されたもの
であり、工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ
Ｐ−１５８６１として寄託されている。
されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドを基質と
して加水分解することができるが、一般式（ＩＩＩ）で
表されるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドは加水
分解しないことを特徴とするものである。このようなア
ミダーゼは、例えばマイコプラナ属に属する細菌によっ
て生産され、例えば本発明者により分離された新菌株マ
イコプラナｓｐ．ＴＳＴ−０２７によって生産される。
この菌株は神奈川県海老名市の土壌より分離されたもの
であり、工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ
Ｐ−１５８６１として寄託されている。
【００１８】前記マイコプラナｓｐ．ＴＳＴ−０２７は
次の性質を有する。
次の性質を有する。
【００１９】Ｉ．形態的性質 肉汁寒天培地で３０℃にて３日間培養したとき、いずれ
も次の通りである。
も次の通りである。
【００２０】（１）細胞の形及び大きさ：桿菌、０．３
〜０．５ｍｍ×０．６〜０．８ｍｍ （２）細胞の多形成の有無：なし （３）運動性の有無：有り 鞭毛の着生状況：周鞭毛 （４）胞子の有無：なし。
〜０．５ｍｍ×０．６〜０．８ｍｍ （２）細胞の多形成の有無：なし （３）運動性の有無：有り 鞭毛の着生状況：周鞭毛 （４）胞子の有無：なし。
【００２１】ＩＩ．培養的性質 （１）肉汁寒天平板培養 ３０℃にて３日間培養したとき、いずれも次の通りであ
る 生育の良否：良好 コロニーのサイズ：１ｍｍ以下 コロニーの形状：円形（ｒｏｕｎｄ） コロニーの隆起：凸状（ｃｏｎｖｅｘ） コロニーの周縁：全縁（ｅｎｔｉｒｅ） コロニーの色：クリーム色 コロニーの光沢：光沢あり 拡散性色素：なし。
る 生育の良否：良好 コロニーのサイズ：１ｍｍ以下 コロニーの形状：円形（ｒｏｕｎｄ） コロニーの隆起：凸状（ｃｏｎｖｅｘ） コロニーの周縁：全縁（ｅｎｔｉｒｅ） コロニーの色：クリーム色 コロニーの光沢：光沢あり 拡散性色素：なし。
【００２２】（２）肉汁寒天斜面培養 ３０℃にて３日間培養したとき、いずれも次の通りであ
る 生育の良否：良好 （３）肉汁液体培養 ３０℃にて７日間培養したとき、いずれも次の通りであ
る 生育の良否：良好 表面の発育：良好、膜状 濁度：下位 液底部の状態：緻密な沈殿が少々 （４）肉汁ゼラチン培養 ３０℃にて２日間培養したとき、いずれも次の通りであ
る ゼラチンの液化：ゼラチンの液化はみられない （５）リトマス・ミルク：非凝集、色の変化なし。
る 生育の良否：良好 （３）肉汁液体培養 ３０℃にて７日間培養したとき、いずれも次の通りであ
る 生育の良否：良好 表面の発育：良好、膜状 濁度：下位 液底部の状態：緻密な沈殿が少々 （４）肉汁ゼラチン培養 ３０℃にて２日間培養したとき、いずれも次の通りであ
る ゼラチンの液化：ゼラチンの液化はみられない （５）リトマス・ミルク：非凝集、色の変化なし。
【００２３】ＩＩＩ．生理化学的性質 （１）硝酸塩の還元：陽性 （２）脱窒テスト：陰性 （３）ＭＲテスト：陰性 （４）ＶＰテスト：陰性 （５）インドールの生成：陰性 （６）硫化水素の生成：陽性 （７）デンプンの加水分解：陰性 （８）クエン酸の利用 Ｋｏｓｅｒの培地：陰性 Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎの培地：陰性。
【００２４】（９）無機窒素源の利用：硝酸塩、アンモ
ニウム塩とも利用する （１０）色素の生成：生成しない （１１）ウレアーゼ：陰性 （１２）オキシダーゼ：陽性 （１３）カタラーゼ：陽性 （１４）生育の範囲 ｐＨ：５．０〜９．０ 温度：１５〜４０℃ （１５）酸素に対する態度：好気性 （１６）Ｏ−Ｆテスト：酸化的。
ニウム塩とも利用する （１０）色素の生成：生成しない （１１）ウレアーゼ：陰性 （１２）オキシダーゼ：陽性 （１３）カタラーゼ：陽性 （１４）生育の範囲 ｐＨ：５．０〜９．０ 温度：１５〜４０℃ （１５）酸素に対する態度：好気性 （１６）Ｏ−Ｆテスト：酸化的。
【００２５】（１７）糖類からの酸及びガスの生成：
【００２６】
【表１】
【００２７】（１８）グラム染色性：陰性。
【００２８】ＩＶ．その他諸性質 細胞膜の脂肪酸組成 オクタデセン酸 ８０％ ヘキサデカン酸 ７％ ３−ハイドロキシテトラデカン酸 ３％ 環状ナノデカン酸 １．６％ ヘキサデセン酸 １．３％ オクタデカン酸 １．１％ 抗酸性：陰性。
【００２９】上記の菌学的性質に基づき、Ｐｅｔｅｒ
Ｎ．ＧｒｅｅｎとＩｖａｎ Ｊ．Ｂｏｕｓｆｉｅｌｄ
（Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１２８，６２３
（１９８２））及びＵｒａｋａｍｉら（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓ
ｙｓ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，Ｏｃｔ．，４３４（１９
９０））の記述に従って前記ＴＳＴ−０２７株を同定
し、これによりマイコプラナ属に属する微生物であるこ
とが明らかにされた。
Ｎ．ＧｒｅｅｎとＩｖａｎ Ｊ．Ｂｏｕｓｆｉｅｌｄ
（Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１２８，６２３
（１９８２））及びＵｒａｋａｍｉら（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓ
ｙｓ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，Ｏｃｔ．，４３４（１９
９０））の記述に従って前記ＴＳＴ−０２７株を同定
し、これによりマイコプラナ属に属する微生物であるこ
とが明らかにされた。
【００３０】本発明のアミダーゼは、マイコプラナ属に
属する細菌を培養し、菌体及び／又は培地から採取する
ことができる。本発明におけるマイコプラナ属に属する
菌株の培養は、この菌株が増殖し得るものであればいず
れを使用してもよく、このとき使用する培地は、窒素源
として例えば硫酸アンモニウム、酵母エキス、ペプト
ン、肉エキス等の１種類又は複数種類を含有する。ま
た、この培地には必要に応じて炭素源としてグルコー
ス、澱粉、グリセリン等を加えることができる。また、
この培地には無機物として、例えば硫酸マグネシウム、
リン酸水素カリウム、リン酸カリウム、塩化ナトリウム
等を加えることが好ましい。また、酵素の誘導物質とな
りうる一般式（Ｉ）または（ＩＩＩ）で表される２−ピ
ペリジンカルボン酸アミドを少量添加することも好まし
い。この２−ピペリジンカルボン酸アミド類の添加量は
基礎培地の組成、培養する菌体の性質により異なるが、
およそ０．０１％〜５％である。
属する細菌を培養し、菌体及び／又は培地から採取する
ことができる。本発明におけるマイコプラナ属に属する
菌株の培養は、この菌株が増殖し得るものであればいず
れを使用してもよく、このとき使用する培地は、窒素源
として例えば硫酸アンモニウム、酵母エキス、ペプト
ン、肉エキス等の１種類又は複数種類を含有する。ま
た、この培地には必要に応じて炭素源としてグルコー
ス、澱粉、グリセリン等を加えることができる。また、
この培地には無機物として、例えば硫酸マグネシウム、
リン酸水素カリウム、リン酸カリウム、塩化ナトリウム
等を加えることが好ましい。また、酵素の誘導物質とな
りうる一般式（Ｉ）または（ＩＩＩ）で表される２−ピ
ペリジンカルボン酸アミドを少量添加することも好まし
い。この２−ピペリジンカルボン酸アミド類の添加量は
基礎培地の組成、培養する菌体の性質により異なるが、
およそ０．０１％〜５％である。
【００３１】培養は固体培地又は液体培地のいずれを用
いてもよいが、目的酵素を多量に得るためには液体培地
を用い、振とう培養、通気・撹拌培養により好気的条件
下にて培養を行うことが好ましい。培養温度並びに培地
のｐＨは、菌が生育し、目的酵素が得られる範囲内であ
ればいずれの温度並びにｐＨでも良いが、温度は１５〜
４０℃、好ましくは２０〜３５℃、ｐＨは５〜９、好ま
しくは６〜８の範囲である。培養時間は酵素活性が発現
される時間を選べば良いが好ましくは１２〜９６時間で
ある。
いてもよいが、目的酵素を多量に得るためには液体培地
を用い、振とう培養、通気・撹拌培養により好気的条件
下にて培養を行うことが好ましい。培養温度並びに培地
のｐＨは、菌が生育し、目的酵素が得られる範囲内であ
ればいずれの温度並びにｐＨでも良いが、温度は１５〜
４０℃、好ましくは２０〜３５℃、ｐＨは５〜９、好ま
しくは６〜８の範囲である。培養時間は酵素活性が発現
される時間を選べば良いが好ましくは１２〜９６時間で
ある。
【００３２】次に得られた培養物から本発明のアミダー
ゼを回収するが、その方法としては、通常の酵素精製法
を用いることができる。例えば上記培養物を遠心分離な
どによって菌体を回収し、次に菌体から本発明のアミダ
ーゼを抽出する。その方法としては、例えば超音波処理
により破砕する方法、ガラスビーズと共に高速振動させ
る方法、フレンチプレス等により高圧から常圧に噴出さ
せる方法、凍結と融解を繰り返す方法などにより細胞を
破砕した後、遠心分離し上清を回収する方法、ろ過して
ろ液を採取する方法等がある。また、培地から本発明の
アミダーゼを回収する方法としては、通常の酵素精製法
などを用いることができる。これらの方法により目的酵
素を含む溶液（無細胞抽出液）を得ることができる。
ゼを回収するが、その方法としては、通常の酵素精製法
を用いることができる。例えば上記培養物を遠心分離な
どによって菌体を回収し、次に菌体から本発明のアミダ
ーゼを抽出する。その方法としては、例えば超音波処理
により破砕する方法、ガラスビーズと共に高速振動させ
る方法、フレンチプレス等により高圧から常圧に噴出さ
せる方法、凍結と融解を繰り返す方法などにより細胞を
破砕した後、遠心分離し上清を回収する方法、ろ過して
ろ液を採取する方法等がある。また、培地から本発明の
アミダーゼを回収する方法としては、通常の酵素精製法
などを用いることができる。これらの方法により目的酵
素を含む溶液（無細胞抽出液）を得ることができる。
【００３３】更にこの溶液に硫酸プロタミン又は硫酸ス
トレプトマイシンを加えて処理を行い、生じた沈殿を遠
心分離等により除去した後、硫酸アンモニウム又は硫酸
ナトリウム等の塩析剤を加えて生じる沈殿を遠心分離に
より採取し、リン酸緩衝液等に溶解して目的の酵素を含
む液とすることができる。なお、この部分精製酵素を有
機溶媒沈殿、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロ
マトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、アフィ
ニティークロマトグラフィー等を行うことにより更に高
純度な酵素溶液を得ることができる。
トレプトマイシンを加えて処理を行い、生じた沈殿を遠
心分離等により除去した後、硫酸アンモニウム又は硫酸
ナトリウム等の塩析剤を加えて生じる沈殿を遠心分離に
より採取し、リン酸緩衝液等に溶解して目的の酵素を含
む液とすることができる。なお、この部分精製酵素を有
機溶媒沈殿、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロ
マトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、アフィ
ニティークロマトグラフィー等を行うことにより更に高
純度な酵素溶液を得ることができる。
【００３４】本発明のアミダーゼとしては、精製された
ものばかりでなく、マイコプラナ属に属する細菌の菌
体、菌体破砕物、培地またはそれらの部分精製物であっ
てもよい。
ものばかりでなく、マイコプラナ属に属する細菌の菌
体、菌体破砕物、培地またはそれらの部分精製物であっ
てもよい。
【００３５】本発明におけるアミダーゼの各種２−ピペ
リジンカルボン酸アミド類に対する基質特異性に関して
は、一般式（Ｉ）で表されるＳ体の２−ピペリジンカル
ボン酸アミドを特異的に加水分解し、一般式（ＩＩ）で
表されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸を生成する。
一方、一般式（ＩＩＩ）で表されるＲ体の２−ピペリジ
ンカルボン酸アミドを加水分解しないという特徴を有す
る。また一般式（Ｉ）で表される基質のＲ1が水素ばか
りでなく、アルキル基であっても活性を示すことが特徴
としてあげられる。しかしながら、該アミダーゼは２−
ピペリジンカルボン酸アミドを最も良好な基質とし、カ
ルボキシ末端のアルキル鎖の炭素数が増えるにつれて活
性が低下する。またＲ1が、直鎖のブチル基の場合と分
枝鎖のブチル基の場合とを比較すると、分枝鎖のブチル
基に対する方が活性及び光学特異性が高いことから、本
発明のアミダーゼは、基質のカルボキシ末端の絶対的距
離が長くなるにつれて基質との親和性が低下し、活性及
び光学特異性が低下すると考えられる。
リジンカルボン酸アミド類に対する基質特異性に関して
は、一般式（Ｉ）で表されるＳ体の２−ピペリジンカル
ボン酸アミドを特異的に加水分解し、一般式（ＩＩ）で
表されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸を生成する。
一方、一般式（ＩＩＩ）で表されるＲ体の２−ピペリジ
ンカルボン酸アミドを加水分解しないという特徴を有す
る。また一般式（Ｉ）で表される基質のＲ1が水素ばか
りでなく、アルキル基であっても活性を示すことが特徴
としてあげられる。しかしながら、該アミダーゼは２−
ピペリジンカルボン酸アミドを最も良好な基質とし、カ
ルボキシ末端のアルキル鎖の炭素数が増えるにつれて活
性が低下する。またＲ1が、直鎖のブチル基の場合と分
枝鎖のブチル基の場合とを比較すると、分枝鎖のブチル
基に対する方が活性及び光学特異性が高いことから、本
発明のアミダーゼは、基質のカルボキシ末端の絶対的距
離が長くなるにつれて基質との親和性が低下し、活性及
び光学特異性が低下すると考えられる。
【００３６】本発明においてアミダーゼの力価の測定
は、該酵素が作用する基質であればいずれを使用しても
よく、２−ピペリジンカルボン酸類以外にもプロリン誘
導体を基質として使用できる。
は、該酵素が作用する基質であればいずれを使用しても
よく、２−ピペリジンカルボン酸類以外にもプロリン誘
導体を基質として使用できる。
【００３７】本発明によるアミダーゼを作用させること
により、一般式（Ｉ）で表されるＳ体の２−ピペリジン
カルボン酸アミドを加水分解し、一般式（ＩＩ）で表さ
れるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸を製造することが
できる。このとき原料の一般式（Ｉ）で表されるＳ体の
２−ピペリジンカルボン酸アミドは、光学的に純品なも
のばかりでなく、光学異性体である一般式（ＩＩＩ）で
あらわされるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドを
含んでいてもよい。この場合、Ｒ体は反応に関与せず、
そのまま反応系に残存する。この時の反応条件として
は、使用する菌体量及び酵素量、基質の種類などによっ
て異なり一概には特定しえないが、一般に反応ｐＨは５
〜１２、好ましくは６〜１１、反応温度は１０〜７０
℃、好ましくは２０〜６０℃、反応時間は１０分〜４８
時間が適当である。
により、一般式（Ｉ）で表されるＳ体の２−ピペリジン
カルボン酸アミドを加水分解し、一般式（ＩＩ）で表さ
れるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸を製造することが
できる。このとき原料の一般式（Ｉ）で表されるＳ体の
２−ピペリジンカルボン酸アミドは、光学的に純品なも
のばかりでなく、光学異性体である一般式（ＩＩＩ）で
あらわされるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドを
含んでいてもよい。この場合、Ｒ体は反応に関与せず、
そのまま反応系に残存する。この時の反応条件として
は、使用する菌体量及び酵素量、基質の種類などによっ
て異なり一概には特定しえないが、一般に反応ｐＨは５
〜１２、好ましくは６〜１１、反応温度は１０〜７０
℃、好ましくは２０〜６０℃、反応時間は１０分〜４８
時間が適当である。
【００３８】また、本発明によるアミダーゼを作用させ
ることにより、一般式（Ｉ）または（ＩＩＩ）で表され
るＳ体及びＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドの混
合物からＳ体だけを加水分解し、生成した一般式（Ｉ
Ｉ）で表されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸を分離
することにより、一般式（ＩＩＩ）であらわされるＲ体
の２−ピペリジンカルボン酸アミドを回収することがで
きる。この反応により、一般式（Ｉ）及び（ＩＩＩ）で
表されるＳ体及びＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミ
ド混合物中に存在するＲ体の光学純度を高めることがで
きる。
ることにより、一般式（Ｉ）または（ＩＩＩ）で表され
るＳ体及びＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドの混
合物からＳ体だけを加水分解し、生成した一般式（Ｉ
Ｉ）で表されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸を分離
することにより、一般式（ＩＩＩ）であらわされるＲ体
の２−ピペリジンカルボン酸アミドを回収することがで
きる。この反応により、一般式（Ｉ）及び（ＩＩＩ）で
表されるＳ体及びＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミ
ド混合物中に存在するＲ体の光学純度を高めることがで
きる。
【００３９】なお、この反応において、一般式（Ｉ）で
表されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドが完全
に加水分解された時点では、一般式（ＩＩ）で表される
Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸及び一般式（ＩＩＩ）
で表されるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドが、
それぞれほぼ１００％の光学純度で存在する。この時点
で速やかに反応を停止させた後、分離、回収することに
より高光学純度の一般式（ＩＩ）で表されるＳ体の２−
ピペリジンカルボン酸及び一般式（ＩＩＩ）で表される
Ｒ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドが得られる。
表されるＳ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドが完全
に加水分解された時点では、一般式（ＩＩ）で表される
Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸及び一般式（ＩＩＩ）
で表されるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドが、
それぞれほぼ１００％の光学純度で存在する。この時点
で速やかに反応を停止させた後、分離、回収することに
より高光学純度の一般式（ＩＩ）で表されるＳ体の２−
ピペリジンカルボン酸及び一般式（ＩＩＩ）で表される
Ｒ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドが得られる。
【００４０】その分離方法としては、分別結晶、溶媒抽
出、イオン交換等の常法の方法により行うことができ
る。
出、イオン交換等の常法の方法により行うことができ
る。
【００４１】本発明において、一般式（Ｉ）、一般式
（ＩＩ）及び一般式（ＩＩＩ）のＲ1及びＲ2は水素また
はアルキル基を示し、アルキル基としては、例えばメチ
ル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル
基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基及びｔｅｒｔ−ブ
チル基等が例示される。
（ＩＩ）及び一般式（ＩＩＩ）のＲ1及びＲ2は水素また
はアルキル基を示し、アルキル基としては、例えばメチ
ル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル
基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基及びｔｅｒｔ−ブ
チル基等が例示される。
【００４２】一般式（Ｉ）及び一般式（ＩＩＩ）で表さ
れる２−ピペリジンカルボン酸アミド類としては、例え
ば２−ピペリジンカルボン酸アミド、４−メチル−２−
ピペリジンカルボン酸アミド、４−エチル−２−ピペリ
ジンカルボン酸アミド、４−ｎ−プロピル−２−ピペリ
ジンカルボン酸アミド、４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピ
ペリジンカルボン酸アミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペ
リジンカルボン酸アミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピ
ペリジンカルボン酸アミド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２
−ピペリジンカルボン酸アミドなどがあげられる。
れる２−ピペリジンカルボン酸アミド類としては、例え
ば２−ピペリジンカルボン酸アミド、４−メチル−２−
ピペリジンカルボン酸アミド、４−エチル−２−ピペリ
ジンカルボン酸アミド、４−ｎ−プロピル−２−ピペリ
ジンカルボン酸アミド、４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピ
ペリジンカルボン酸アミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペ
リジンカルボン酸アミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピ
ペリジンカルボン酸アミド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２
−ピペリジンカルボン酸アミドなどがあげられる。
【００４３】また２−ピペリジンカルボン酸メチルアミ
ド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸メチルアミ
ド、４−エチル−２−ピペリジンカルボン酸メチルアミ
ド、４−ｎ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸メチ
ルアミド、４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピペリジンカル
ボン酸メチルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジン
カルボン酸メチルアミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピ
ペリジンカルボン酸メチルアミド、４−ｔｅｒｔ−ブチ
ル−２−ピペリジンカルボン酸メチルアミドなどがあげ
られる。
ド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸メチルアミ
ド、４−エチル−２−ピペリジンカルボン酸メチルアミ
ド、４−ｎ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸メチ
ルアミド、４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピペリジンカル
ボン酸メチルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジン
カルボン酸メチルアミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピ
ペリジンカルボン酸メチルアミド、４−ｔｅｒｔ−ブチ
ル−２−ピペリジンカルボン酸メチルアミドなどがあげ
られる。
【００４４】さらに、２−ピペリジンカルボン酸エチル
アミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸エチル
アミド、４−エチル−２−ピペリジンカルボン酸エチル
アミド、４−ｎ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸
エチルアミド、４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピペリジン
カルボン酸エチルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリ
ジンカルボン酸エチルアミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２
−ピペリジンカルボン酸エチルアミド、４−ｔｅｒｔ−
ブチル−２−ピペリジンカルボン酸エチルアミドなどが
あげられる。
アミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸エチル
アミド、４−エチル−２−ピペリジンカルボン酸エチル
アミド、４−ｎ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸
エチルアミド、４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピペリジン
カルボン酸エチルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリ
ジンカルボン酸エチルアミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２
−ピペリジンカルボン酸エチルアミド、４−ｔｅｒｔ−
ブチル−２−ピペリジンカルボン酸エチルアミドなどが
あげられる。
【００４５】さらに２−ピペリジンカルボン酸ｎ−プロ
ピルアミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ
−プロピルアミド、４−エチル−２−ピペリジンカルボ
ン酸ｎ−プロピルアミド、４−ｎ−プロピル−２−ピペ
リジンカルボン酸ｎ−プロピルアミド、４−ｉｓｏ−プ
ロピル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ−プロピルアミ
ド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ−プ
ロピルアミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピペリジンカ
ルボン酸ｎ−プロピルアミド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−
２−ピペリジンカルボン酸ｎ−プロピルアミドなどがあ
げられる。
ピルアミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ
−プロピルアミド、４−エチル−２−ピペリジンカルボ
ン酸ｎ−プロピルアミド、４−ｎ−プロピル−２−ピペ
リジンカルボン酸ｎ−プロピルアミド、４−ｉｓｏ−プ
ロピル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ−プロピルアミ
ド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ−プ
ロピルアミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピペリジンカ
ルボン酸ｎ−プロピルアミド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−
２−ピペリジンカルボン酸ｎ−プロピルアミドなどがあ
げられる。
【００４６】さらに２−ピペリジンカルボン酸ｉｓｏ−
プロピルアミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン
酸ｉｓｏ−プロピルアミド、４−エチル−２−ピペリジ
ンカルボン酸ｉｓｏ−プロピルアミド、４−ｎ−プロピ
ル−２−ピペリジンカルボン酸ｉｓｏ−プロピルアミ
ド、４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸
ｉｓｏ−プロピルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリ
ジンカルボン酸ｉｓｏ−プロピルアミド、４−ｓｅｃ−
ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｉｓｏ−プロピルア
ミド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ピペリジンカルボン
酸ｉｓｏ−プロピルアミドなどがあげられる。
プロピルアミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン
酸ｉｓｏ−プロピルアミド、４−エチル−２−ピペリジ
ンカルボン酸ｉｓｏ−プロピルアミド、４−ｎ−プロピ
ル−２−ピペリジンカルボン酸ｉｓｏ−プロピルアミ
ド、４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸
ｉｓｏ−プロピルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリ
ジンカルボン酸ｉｓｏ−プロピルアミド、４−ｓｅｃ−
ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｉｓｏ−プロピルア
ミド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ピペリジンカルボン
酸ｉｓｏ−プロピルアミドなどがあげられる。
【００４７】さらに、２−ピペリジンカルボン酸ｎ−ブ
チルアミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ
−ブチルアミド、４−エチル−２−ピペリジンカルボン
酸ｎ−ブチルアミド、４−ｎ−プロピル−２−ピペリジ
ンカルボン酸ｎ−ブチルアミド、４−ｉｓｏ−プロピル
−２−ピペリジンカルボン酸ｎ−ブチルアミド、４−ｎ
−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ−ブチルアミ
ド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ
−ブチルアミド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ピペリジ
ンカルボン酸ｎ−ブチルアミドなどがあげられる。
チルアミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ
−ブチルアミド、４−エチル−２−ピペリジンカルボン
酸ｎ−ブチルアミド、４−ｎ−プロピル−２−ピペリジ
ンカルボン酸ｎ−ブチルアミド、４−ｉｓｏ−プロピル
−２−ピペリジンカルボン酸ｎ−ブチルアミド、４−ｎ
−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ−ブチルアミ
ド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｎ
−ブチルアミド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ピペリジ
ンカルボン酸ｎ−ブチルアミドなどがあげられる。
【００４８】さらに２−ピペリジンカルボン酸ｓｅｃ−
ブチルアミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸
ｓｅｃ−ブチルアミド、４−エチル−２−ピペリジンカ
ルボン酸ｓｅｃ−ブチルアミド、４−ｎ−プロピル−２
−ピペリジンカルボン酸ｓｅｃ−ブチルアミド、４−ｉ
ｓｏ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸ｓｅｃ−ブ
チルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジンカルボン
酸ｓｅｃ−ブチルアミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピ
ペリジンカルボン酸ｓｅｃ−ブチルアミド、４−ｔｅｒ
ｔ−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｓｅｃ−ブチル
アミドなどがあげられる。
ブチルアミド、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸
ｓｅｃ−ブチルアミド、４−エチル−２−ピペリジンカ
ルボン酸ｓｅｃ−ブチルアミド、４−ｎ−プロピル−２
−ピペリジンカルボン酸ｓｅｃ−ブチルアミド、４−ｉ
ｓｏ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸ｓｅｃ−ブ
チルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジンカルボン
酸ｓｅｃ−ブチルアミド、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピ
ペリジンカルボン酸ｓｅｃ−ブチルアミド、４−ｔｅｒ
ｔ−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸ｓｅｃ−ブチル
アミドなどがあげられる。
【００４９】さらに２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ
−ブチルアミド４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸
ｔｅｒｔ−ブチルアミド、４−エチル−２−ピペリジン
カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド、４−ｎ−プロピル
−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド、
４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅ
ｒｔ−ブチルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジン
カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド、４−ｓｅｃ−ブチ
ル−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミ
ド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸
ｔｅｒｔ−ブチルアミド等があげられる。
−ブチルアミド４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸
ｔｅｒｔ−ブチルアミド、４−エチル−２−ピペリジン
カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド、４−ｎ−プロピル
−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド、
４−ｉｓｏ−プロピル−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅ
ｒｔ−ブチルアミド、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジン
カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド、４−ｓｅｃ−ブチ
ル−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミ
ド、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ピペリジンカルボン酸
ｔｅｒｔ−ブチルアミド等があげられる。
【００５０】一般式（ＩＩ）で表されるＳ体のピペリジ
ンカルボン酸としては、例えば２−ピペリジンカルボン
酸、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸、４−エチ
ル−２−ピペリジンカルボン酸、４−ｎ−プロピル−２
−ピペリジンカルボン酸、４−ｉｓｏ−プロピル−２−
ピペリジンカルボン酸、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジ
ンカルボン酸、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピペリジンカ
ルボン酸、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ピペリジンカル
ボン酸等があげられる。
ンカルボン酸としては、例えば２−ピペリジンカルボン
酸、４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸、４−エチ
ル−２−ピペリジンカルボン酸、４−ｎ−プロピル−２
−ピペリジンカルボン酸、４−ｉｓｏ−プロピル−２−
ピペリジンカルボン酸、４−ｎ−ブチル−２−ピペリジ
ンカルボン酸、４−ｓｅｃ−ブチル−２−ピペリジンカ
ルボン酸、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ピペリジンカル
ボン酸等があげられる。
【００５１】
実施例１ リン酸水素２カリウム０．１％、ポリペプトン０．５
％、グリセリン０．１％、酵母エキス０．５％、２−ピ
ペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド０．１％を
含有し、ｐＨ７．２に調整した培地１００ｍｌをエルレ
ンマイヤーフラスコに分注し、オートクレーブ中、１２
０℃、２０分間殺菌した。そこへＴＳＴ−０２７（工業
技術院生命工学工業技術研究所受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−
１５８６１）を白金耳にて植菌し、３０℃で２日間振と
う培養した。培養終了後、培養液を１２０００ｒｐｍで
１５分間遠心分離により菌体を回収し、生理食塩水１０
ｍｌで３回洗浄した。この洗浄菌体を１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０) １０ｍｌに懸濁し、超音波処理に
て菌体を破砕した後、１２０００ｒｐｍで１５分間の遠
心分離により上清を回収し、無細胞抽出液を得た。
％、グリセリン０．１％、酵母エキス０．５％、２−ピ
ペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド０．１％を
含有し、ｐＨ７．２に調整した培地１００ｍｌをエルレ
ンマイヤーフラスコに分注し、オートクレーブ中、１２
０℃、２０分間殺菌した。そこへＴＳＴ−０２７（工業
技術院生命工学工業技術研究所受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−
１５８６１）を白金耳にて植菌し、３０℃で２日間振と
う培養した。培養終了後、培養液を１２０００ｒｐｍで
１５分間遠心分離により菌体を回収し、生理食塩水１０
ｍｌで３回洗浄した。この洗浄菌体を１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０) １０ｍｌに懸濁し、超音波処理に
て菌体を破砕した後、１２０００ｒｐｍで１５分間の遠
心分離により上清を回収し、無細胞抽出液を得た。
【００５２】この無細胞抽出液８ｍｌに１％プロタミン
硫酸溶液１．６ｍｌを加え０℃で１５分間放置し、生じ
た沈殿を１２０００ｒｐｍで１５分間の遠心分離で沈殿
を除去した。この上清に３０％飽和溶液になるよう硫酸
アンモニウムを加え、生じた沈殿を１２０００ｒｐｍで
１５分間の遠心分離により除去した。この上清に６０％
飽和溶液になるよう更に硫酸アンモニウムを加え、生じ
た沈殿を１２０００ｒｐｍで１５分間の遠心分離にて回
収し、２ｍｌの１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
に溶解した後、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）で４℃にて２４時間透析した。これを部分精製した
本発明のアミダーゼとして以下の実験に用いた。
硫酸溶液１．６ｍｌを加え０℃で１５分間放置し、生じ
た沈殿を１２０００ｒｐｍで１５分間の遠心分離で沈殿
を除去した。この上清に３０％飽和溶液になるよう硫酸
アンモニウムを加え、生じた沈殿を１２０００ｒｐｍで
１５分間の遠心分離により除去した。この上清に６０％
飽和溶液になるよう更に硫酸アンモニウムを加え、生じ
た沈殿を１２０００ｒｐｍで１５分間の遠心分離にて回
収し、２ｍｌの１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
に溶解した後、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）で４℃にて２４時間透析した。これを部分精製した
本発明のアミダーゼとして以下の実験に用いた。
【００５３】実施例２ １０ｍＭの２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
アミド（ラセミ体）、１０ｍＭのトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）及び部分精製した該アミダーゼ１０μｌ
を含んだ反応液５００μｌを３０℃において２４時間反
応させた。反応終了後、反応液を分画分子量１０，００
０の限外濾過膜で濾過し、アミダーゼを除去した。残存
する２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
量はＯＤＳをカラムに使用した逆相高速液体クロマトグ
ラフィーにより測定した。その結果、２−ピペリジンカ
ルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド残存率は４８．５％で
あった。
アミド（ラセミ体）、１０ｍＭのトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）及び部分精製した該アミダーゼ１０μｌ
を含んだ反応液５００μｌを３０℃において２４時間反
応させた。反応終了後、反応液を分画分子量１０，００
０の限外濾過膜で濾過し、アミダーゼを除去した。残存
する２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
量はＯＤＳをカラムに使用した逆相高速液体クロマトグ
ラフィーにより測定した。その結果、２−ピペリジンカ
ルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド残存率は４８．５％で
あった。
【００５４】生成物の同定は、ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ−
ＷＨ（ダイセル化学製）をカラムに使用した高速液体ク
ロマトグラフィーの保持時間より求め、標準品との比較
により、Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸であることが
確認された。なお保持時間は、Ｒ体の２−ピペリジンカ
ルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドが９．４分、Ｓ体の２
−ピペリジンカルボン酸が１１．９分である。
ＷＨ（ダイセル化学製）をカラムに使用した高速液体ク
ロマトグラフィーの保持時間より求め、標準品との比較
により、Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸であることが
確認された。なお保持時間は、Ｒ体の２−ピペリジンカ
ルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドが９．４分、Ｓ体の２
−ピペリジンカルボン酸が１１．９分である。
【００５５】また生成したＳ体の２−ピペリジンカルボ
ン酸量及びその光学純度はＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ−ＷＨ
（ダイセル化学製）をカラムに使用した高速液体クロマ
トグラフィーにより測定した。その結果、生成した２−
ピペリジンカルボン酸の収率は４４．９％であり、その
時の（Ｓ）体の２−ピペリジンカルボン酸の光学純度は
９９％ｅｅ以上であることが判明した。反応液中の残存
２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド量お
よび生成２−ピペリジンカルボン酸量は検量線より求め
た。高速液体クロマトグラフィーの分析条件は以下の通
りである。
ン酸量及びその光学純度はＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ−ＷＨ
（ダイセル化学製）をカラムに使用した高速液体クロマ
トグラフィーにより測定した。その結果、生成した２−
ピペリジンカルボン酸の収率は４４．９％であり、その
時の（Ｓ）体の２−ピペリジンカルボン酸の光学純度は
９９％ｅｅ以上であることが判明した。反応液中の残存
２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド量お
よび生成２−ピペリジンカルボン酸量は検量線より求め
た。高速液体クロマトグラフィーの分析条件は以下の通
りである。
【００５６】２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチ
ルアミドの分析条件； カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−１２０Ｔ（４．６ｍ
ｍＩＤ×２５０ｍｍ，東ソー製） 移動相：２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ２．８）
／メタノール［８：２，Ｖ／Ｖ］ 検出：２２０ｎｍ 流速：１ｍｌ／分 温度：室温（２５℃）。
ルアミドの分析条件； カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−１２０Ｔ（４．６ｍ
ｍＩＤ×２５０ｍｍ，東ソー製） 移動相：２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ２．８）
／メタノール［８：２，Ｖ／Ｖ］ 検出：２２０ｎｍ 流速：１ｍｌ／分 温度：室温（２５℃）。
【００５７】２−ピペリジンカルボン酸及びその光学純
度の分析条件； カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ−ＷＨ（４．６ｍｍＩＤ
×２５０ｍｍ，ダイセル化学製） 移動相：２ｍＭ ＣｕＳＯ4 検出：２５４ｎｍ 流速：１ｍｌ／分 温度：５０℃。
度の分析条件； カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ−ＷＨ（４．６ｍｍＩＤ
×２５０ｍｍ，ダイセル化学製） 移動相：２ｍＭ ＣｕＳＯ4 検出：２５４ｎｍ 流速：１ｍｌ／分 温度：５０℃。
【００５８】実施例３、４、５ 表２に示す原料を用い、反応時間を表２に示す通りとし
たこと以外は実施例２に準じて反応を行った。結果を表
２に示す。この結果は、前述の本発明のアミダーゼの基
質特異性を裏付けるものである。また相対活性は、実施
例２の場合を１００としたときの、各実施例における値
を示すものである。
たこと以外は実施例２に準じて反応を行った。結果を表
２に示す。この結果は、前述の本発明のアミダーゼの基
質特異性を裏付けるものである。また相対活性は、実施
例２の場合を１００としたときの、各実施例における値
を示すものである。
【００５９】なお、各生成物は実施例２と同様にして、
液体クロマトグラフィーによる標準品の保持時間との比
較から確認した。
液体クロマトグラフィーによる標準品の保持時間との比
較から確認した。
【００６０】
【表２】
【００６１】実施例６ 反応時間を２８時間とした以外は実施例２に準じ行った
結果、２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミ
ド残存率は４８．５％であった。また、その時の２−ピ
ペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドの光学純度
の測定は以下に示す通り行った。すなわち、反応液２５
μｌに７５μｌの６７％アセトニトリル溶液を加えた
後、０．２％ＧＩＴＣ（２，３，４，６−ｔｅｔｒａ−
Ｏ−ａｃｅｔｙｌ−β−Ｄ−ｇｕｌｃｏｐｙｒａｎｏｓ
ｉｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）アセトニトリル
溶液１００μｌを加え室温にて１時間反応させた。この
反応液を以下に示す条件の高速液体クロマトグラフィー
にかけ、２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルア
ミドの光学純度を分析した結果、（Ｒ）体の２−ピペリ
ジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドが光学純度９９
％ｅｅ以上であることが判明した。
結果、２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミ
ド残存率は４８．５％であった。また、その時の２−ピ
ペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドの光学純度
の測定は以下に示す通り行った。すなわち、反応液２５
μｌに７５μｌの６７％アセトニトリル溶液を加えた
後、０．２％ＧＩＴＣ（２，３，４，６−ｔｅｔｒａ−
Ｏ−ａｃｅｔｙｌ−β−Ｄ−ｇｕｌｃｏｐｙｒａｎｏｓ
ｉｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）アセトニトリル
溶液１００μｌを加え室温にて１時間反応させた。この
反応液を以下に示す条件の高速液体クロマトグラフィー
にかけ、２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルア
ミドの光学純度を分析した結果、（Ｒ）体の２−ピペリ
ジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドが光学純度９９
％ｅｅ以上であることが判明した。
【００６２】２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチ
ルアミドの光学純度の分析条件； カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−１２０Ｔ（４．６ｍ
ｍＩＤ×２５０ｍｍ，東ソー社製) 移動相：２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液 (pH2.8)／メタ
ノール［４：６，Ｖ／Ｖ］ 流速：１ｍｌ／分 検出：２５０ｎｍ 温度：室温（２５℃）。
ルアミドの光学純度の分析条件； カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−１２０Ｔ（４．６ｍ
ｍＩＤ×２５０ｍｍ，東ソー社製) 移動相：２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液 (pH2.8)／メタ
ノール［４：６，Ｖ／Ｖ］ 流速：１ｍｌ／分 検出：２５０ｎｍ 温度：室温（２５℃）。
【００６３】実施例７ ５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）、５０ｍＭ
の２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
（ラセミ体）及び５０μｌのプロリンイミノペプチダー
ゼ（東洋紡製）を含んだ反応液５００μｌを３０℃にお
いて６時間反応させた。反応終了後、反応液を分画分子
量１０，０００の限外濾過膜で濾過し酵素を除去した
後、実施例２の高速液体クロマトグラフィーの条件にて
生成したＳ体の２−ピペリジンカルボン酸量を測定し
た。１分間に１μｍｏｌの２−ピベリジンカルボン酸を
与える酵素量を１ユニットとし、ユニット数を求めた。
一方、実施例２の結果から同様にユニット数を求め、ユ
ニット数の比を相対活性として表３に示す。
の２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
（ラセミ体）及び５０μｌのプロリンイミノペプチダー
ゼ（東洋紡製）を含んだ反応液５００μｌを３０℃にお
いて６時間反応させた。反応終了後、反応液を分画分子
量１０，０００の限外濾過膜で濾過し酵素を除去した
後、実施例２の高速液体クロマトグラフィーの条件にて
生成したＳ体の２−ピペリジンカルボン酸量を測定し
た。１分間に１μｍｏｌの２−ピベリジンカルボン酸を
与える酵素量を１ユニットとし、ユニット数を求めた。
一方、実施例２の結果から同様にユニット数を求め、ユ
ニット数の比を相対活性として表３に示す。
【００６４】また、Ｌ−プロリン−ｐ−ニトロアニリド
を基質とした際の酵素活性（力価）を、実施例１で得ら
れた本発明の部分精製したアミダーゼ及びプロリンイミ
ノペプチダーゼについて測定した。なお、Ｌ−プロリン
−ｐ−ニトロアニリドを基質とする酵素力価は次のよう
に測定した。すなわち１ｍＭのＬ−プロリン−ｐ−ニト
ロアニリド溶液５００μｌを２ｍｌの１００ｍＭのトリ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に加え３０℃で５分間加
温した後、酵素溶液５００μｌを正確に加え３０℃にて
１０分間反応させ、１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を加
え反応を停止させた。この液につき４１０ｎｍにおける
吸光度を測定した。盲検は１ｍＭのＬ−プロリン−ｐ−
ニトロアニリド溶液５００μｌを加えた２ｍｌの１００
ｍＭのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を３０℃で５
分間加温した後、１Ｍの酢酸緩衝液１ｍｌを先に加え、
次いで酵素溶液５００μｌを加えた。なお、ｐ−ニトロ
アニリンの分子吸光係数ε（ｍｏｌ-1，ｃｍ-1）は５５
７０であり、１分間に１μｍｏｌのｐ−ニトロアニリン
を与える酵素量を１ユニットとした。各酵素を用いたと
きのユニット数を求め、ユニット数の比を相対活性とし
て表３に示す。
を基質とした際の酵素活性（力価）を、実施例１で得ら
れた本発明の部分精製したアミダーゼ及びプロリンイミ
ノペプチダーゼについて測定した。なお、Ｌ−プロリン
−ｐ−ニトロアニリドを基質とする酵素力価は次のよう
に測定した。すなわち１ｍＭのＬ−プロリン−ｐ−ニト
ロアニリド溶液５００μｌを２ｍｌの１００ｍＭのトリ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に加え３０℃で５分間加
温した後、酵素溶液５００μｌを正確に加え３０℃にて
１０分間反応させ、１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を加
え反応を停止させた。この液につき４１０ｎｍにおける
吸光度を測定した。盲検は１ｍＭのＬ−プロリン−ｐ−
ニトロアニリド溶液５００μｌを加えた２ｍｌの１００
ｍＭのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を３０℃で５
分間加温した後、１Ｍの酢酸緩衝液１ｍｌを先に加え、
次いで酵素溶液５００μｌを加えた。なお、ｐ−ニトロ
アニリンの分子吸光係数ε（ｍｏｌ-1，ｃｍ-1）は５５
７０であり、１分間に１μｍｏｌのｐ−ニトロアニリン
を与える酵素量を１ユニットとした。各酵素を用いたと
きのユニット数を求め、ユニット数の比を相対活性とし
て表３に示す。
【００６５】
【表３】
【００６６】表３より、本発明の部分精製アミダーゼは
Ｌ−プロリン−ｐ−ニトロアニリドを基質とするが、目
的とする２−ピペリジンカルボン酸アミド類に対しては
るかに効率よく作用し、プロリンイミノペプチダーゼと
は性質を異にするものであることが明らかとなった。
Ｌ−プロリン−ｐ−ニトロアニリドを基質とするが、目
的とする２−ピペリジンカルボン酸アミド類に対しては
るかに効率よく作用し、プロリンイミノペプチダーゼと
は性質を異にするものであることが明らかとなった。
【００６７】実施例８ 反応液に下記表４に示す濃度にて化学物質を添加したこ
と以外は、実施例７のＬ−プロリン−ｐ−ニトロアニリ
ドを基質とする力価の測定法に準じて、実施例１で得ら
れた本発明の部分精製アミダーゼの活性を測定した。こ
れらの結果を表４に示す。
と以外は、実施例７のＬ−プロリン−ｐ−ニトロアニリ
ドを基質とする力価の測定法に準じて、実施例１で得ら
れた本発明の部分精製アミダーゼの活性を測定した。こ
れらの結果を表４に示す。
【００６８】
【表４】
【００６９】表中、化学物質を添加しない場合の活性を
１００％とし、化学物質を添加したときの相対活性を示
す。なおＰＭＳＦとは、ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｓｕ
ｌｆｏｎｙｌｆｌｕｏｒｉｄｅである。
１００％とし、化学物質を添加したときの相対活性を示
す。なおＰＭＳＦとは、ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｓｕ
ｌｆｏｎｙｌｆｌｕｏｒｉｄｅである。
【００７０】この阻害のプロフィールは、これまでに報
告されているアミダーゼのいずれとも異なり、本発明の
アミダーゼの新規性を裏づけるものである。
告されているアミダーゼのいずれとも異なり、本発明の
アミダーゼの新規性を裏づけるものである。
【００７１】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 17/12 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (5)
- 【請求項１】一般式（Ｉ） 【化１】 ［式中、Ｒ1及びＲ2は水素またはアルキル基を示し、＊
印は不斉炭素を表す］で表されるＳ体の２−ピペリジン
カルボン酸アミドを基質として加水分解することを特徴
とするマイコプラナ属細菌由来のアミダーゼ。 - 【請求項２】一般式（Ｉ） 【化２】 ［式中、Ｒ1及びＲ2は水素またはアルキル基を示し、＊
印は不斉炭素を表す］で表されるＳ体の２−ピペリジン
カルボン酸アミドを基質として加水分解するアミダーゼ
を産生することを特徴とするマイコプラナ属に属する細
菌。 - 【請求項３】請求項２において、マイコプラナｓｐ．Ｔ
ＳＴ−０２７。 - 【請求項４】一般式（Ｉ） 【化３】 ［式中、Ｒ1及びＲ2は水素またはアルキル基を示し、＊
印は不斉炭素を表す］で表されるＳ体の２−ピペリジン
カルボン酸アミドに、請求項１に記載のアミダーゼを作
用させることを特徴とする、一般式（ＩＩ） 【化４】 ［式中、Ｒ2及び＊印は前記と同様を示す］で表される
Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸の製法。 - 【請求項５】一般式（Ｉ） 【化５】 ［式中、Ｒ1及びＲ2は水素またはアルキル基を示し、＊
印は不斉炭素を表す］で現されるＳ体の２−ピペリジン
カルボン酸アミド、及び一般式（ＩＩＩ） 【化６】 ［式中、Ｒ1、Ｒ2及び＊印は前記と同様を示す］で表さ
れるＲ体の２−ピペリジンカルボン酸アミドの混合物
に、請求項１に記載のアミダーゼを作用させ、生成した
一般式（ＩＩ） 【化７】 ［式中、Ｒ2及び＊印は前記と同様を示す］で表される
Ｓ体の２−ピペリジンカルボン酸を分離することを特徴
とする、一般式（ＩＩＩ）で表されるＲ体の２−ピペリ
ジンカルボン酸アミドの回収法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8289753A JPH10127280A (ja) | 1996-10-31 | 1996-10-31 | アミダーゼ及びそれを用いたピペリジンカルボン酸類の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8289753A JPH10127280A (ja) | 1996-10-31 | 1996-10-31 | アミダーゼ及びそれを用いたピペリジンカルボン酸類の製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10127280A true JPH10127280A (ja) | 1998-05-19 |
Family
ID=17747322
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8289753A Pending JPH10127280A (ja) | 1996-10-31 | 1996-10-31 | アミダーゼ及びそれを用いたピペリジンカルボン酸類の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10127280A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002101003A3 (fr) * | 2001-06-08 | 2004-02-26 | Rhodia Chimie Sa | Preparation stereoselective de l-acides amines cycliques |
| JP2007117034A (ja) * | 2005-10-31 | 2007-05-17 | Koei Chem Co Ltd | 光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法 |
| US8338142B2 (en) | 2007-02-19 | 2012-12-25 | Kaneka Corporation | Method for producing optically active 3-aminopiperidine or salt thereof |
-
1996
- 1996-10-31 JP JP8289753A patent/JPH10127280A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002101003A3 (fr) * | 2001-06-08 | 2004-02-26 | Rhodia Chimie Sa | Preparation stereoselective de l-acides amines cycliques |
| US7425530B2 (en) | 2001-06-08 | 2008-09-16 | Rhodia Chimie | Stereoselective preparation of cyclic L-amino acids |
| JP2007117034A (ja) * | 2005-10-31 | 2007-05-17 | Koei Chem Co Ltd | 光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法 |
| US8338142B2 (en) | 2007-02-19 | 2012-12-25 | Kaneka Corporation | Method for producing optically active 3-aminopiperidine or salt thereof |
| JP5265513B2 (ja) * | 2007-02-19 | 2013-08-14 | 株式会社カネカ | 光学活性３−アミノピペリジン又はその塩の製造方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2623345B2 (ja) | 光学活性なα―置換有機酸の製造方法 | |
| JP2974737B2 (ja) | 光学活性乳酸の製造法 | |
| US4774179A (en) | Process for preparing a 7-aminocephalosporanic acid compound | |
| EP0264457A1 (en) | Process for preparing optically active cyclopropanecarboxylic acids | |
| US4943528A (en) | Process for the production of optically active (R)-(-)-3-halo-1,2-propanediol | |
| JPH10127280A (ja) | アミダーゼ及びそれを用いたピペリジンカルボン酸類の製法 | |
| JP2847089B2 (ja) | 光学活性（ｒ）‐（‐）‐３‐ハロ‐１，２‐プロパンジオールの製造法 | |
| JPS6322188A (ja) | 新規なｌ−アミノアシラ−ゼ | |
| US6303349B1 (en) | Esterase and methods for the production of optically active chroman compounds | |
| JPH0576391A (ja) | Ｓ−（＋）−２，２−ジメチルシクロプロパンカルボキサミドの生物工学的製造方法 | |
| EP0309310B1 (fr) | Nouveau système enzymatique, son procédé de préparation et son application notamment dans la préparation de la D-parahydroxyphénylglycine | |
| JP2880204B2 (ja) | （＋）‐ホモピロピン酸の製造法 | |
| US4918012A (en) | Method for producing carnitine, L-carnitinamide hydrolase and method for producing same | |
| JPH0669381B2 (ja) | カルニチンの製造法 | |
| JP3810860B2 (ja) | アルカリゲネス属の微生物を利用してヘテロ芳香族カルボン酸を製造する微生物学的方法 | |
| JPH05199889A (ja) | （ｓ）−１−フェニル−１，３−プロパンジオールまたはその誘導体の製造方法 | |
| JP3055711B2 (ja) | 光学活性（ｓ）−３−フェニル−１，３−プロパンジオールの製造法 | |
| US5232853A (en) | Method for producing (2r,3s)-3-hydroxy-2-methylbutyrate by microbial reduction | |
| JPH07303491A (ja) | 光学活性な酸アミドの製造法 | |
| JP4269416B2 (ja) | α−ハロ−α，β−飽和カルボニル化合物の製造方法 | |
| JPH05176794A (ja) | 光学活性な２−フェニルプロピオン酸および２−フェニ ルプロピオンアミドの製造法 | |
| JP3866357B2 (ja) | 熱安定性耐溶媒性エステル分解酵素 | |
| KR100260837B1 (ko) | 광학활성 카본산 및 그 거울상 이성체 에스테르의 제조방법 | |
| JP2869486B2 (ja) | 光学活性（ｒ）‐（‐）‐３‐ハロ‐１，２‐プロパンジオールの製造法 | |
| JP2983695B2 (ja) | ４−ハロ−３−ヒドロキシ酪酸の製造法 |