JPH10167981A

JPH10167981A - 高血糖に起因する疾患の予防および／または治療剤

Info

Publication number: JPH10167981A
Application number: JP8328357A
Authority: JP
Inventors: Makoto Kawamura; 誠川村; Jiro Sugimoto; 次郎杉本
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1996-12-09
Filing date: 1996-12-09
Publication date: 1998-06-23

Abstract

(57)【要約】【課題】高血糖に起因する疾患の予防および／または
治療剤を提供する。【解決手段】肝実質細胞増殖因子、例えば配列番号１に
示されるアミノ酸配列で表される肝実質細胞増殖因子を
有効成分として含有する高血糖に起因する疾患の予防お
よび／または治療剤。【効果】本発明の予防および／または治療剤は、低血糖
になりすぎない利点を持っており、糖尿病等の高血糖に
起因する疾患の予防および／または治療に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は高血糖に起因する疾
患の予防および／または治療剤に関し、詳細には肝実質
細胞増殖因子（以下、これを「ＨＧＦ」と略称すること
がある）を有効成分とする糖尿病等の高血糖に起因する
疾患の予防および／または治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】血糖に
影響を与えるホルモンとしては種々のものが知られてい
るが、そのうち最も重要なものはインスリンである。イ
ンスリンは、ブドウ糖の取り込み促進、グリコーゲン合
成酵素の活性化、解糖系律速酵素の誘導および活性化な
どを通して血糖を低下させ、生体のグリコーゲン蓄積の
方向に働く。この作用を利用して、インスリンはＩ型糖
尿病患者の治療に使用されているが、インスリン治療中
の糖尿病患者では過剰注射や食事摂取不十分などにより
しばしば低血糖が発現し、思わぬ事故が起こることも少
なくない。さらに、糖尿病の治療にインスリン以外の経
口糖尿病薬を用いることも試みられているが、効果発現
までの時間差や効果の程度が弱いことなどの問題もあ
る。このように、血糖のコントロールは非常に難しく、
従来の技術では十分な血糖のコントロールができていな
いのが現状である。

【０００３】一方、ＨＧＦは、初代培養肝実質細胞の増
殖を促進させうるヒト由来の蛋白性因子として、劇症肝
炎患者血漿より見い出された（特開昭63-22526号公報；
以下、ヒト由来の肝実質細胞増殖因子を「ｈＨＧＦ」と
略称することがある）。その後、ｈＨＧＦ蛋白質のアミ
ノ酸配列およびそれをコ−ドする遺伝子（ｃＤＮＡ）
（特開平3-72883 号公報）、さらにこのｃＤＮＡを用い
た組換えｈＨＧＦ蛋白質（以下、「ｒｈＨＧＦ」と略称
することがある）の生産方法および形質転換体（特開平
3-285693号公報）が報告されている。

【０００４】ｒｈＨＧＦ蛋白質は、生体外（J. Clin. I
nvest.，87，1853-1857 (1991)）、また生体内（Jpn.
J. Pharmacol.，59(suppl. 1)，137 (1992)）において
肝実質細胞の増殖及び機能を促進する働きが認められ
た。さらに、ＨＧＦの標的細胞や組織が広く検索され、
肝細胞以外の種々の上皮細胞（尿細管上皮、肺上皮、胆
管上皮、胃上皮）や線維芽細胞、リンパ球系細胞がＨＧ
Ｆに反応してその増殖や運動性を変化させることが判明
した（Mitsubishi Kasei R & D Review，7，16-24(199
3)）。また、これらＨＧＦ標的細胞上のレセプター分子
として、癌原遺伝子ｃ−ｍｅｔ産物が機能していること
が明らかとなった（Science, 251, 802-804(1991)）。

【０００５】さらに、ＨＧＦには、インスリンによるグ
リコーゲン蓄積を抑制することが知られている（第３回
肝細胞研究会講演要旨(1996年) p.15）。しかしなが
ら、ここで開示されているのはインスリンのような強力
なグリコーゲン蓄積刺激存在下におけるＨＧＦのグリコ
ーゲン蓄積抑制効果であって、インスリンのような強力
なグリコーゲン蓄積刺激が存在しない状態における、グ
リコーゲン蓄積に対するＨＧＦ単独の作用については、
本発明者らの知る限り、報告された例はない。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＨＧＦの
糖・グリコーゲン代謝との関連性について探索、検討を
進めてきた結果、インスリンのような強力なグリコーゲ
ン蓄積刺激が存在しない状態、すなわち、ＨＧＦ単独で
は、グリコーゲン蓄積に促進的に働くことが示唆され
た。すなわち、ＨＧＦが、低血糖になりすぎない利点を
持ち、高血糖に起因する疾患に対する優れた予防および
／または治療剤になり得ることを見い出し、本発明を完
成するに至った。

【０００７】すなわち、本発明の要旨は、肝実質細胞増
殖因子（ＨＧＦ）を有効成分として含有することを特徴
とする高血糖に起因する疾患の予防および／または治療
剤である。

【０００８】更に、本発明の好ましい態様によれば、肝
実質細胞増殖因子が以下の理化学的性質 1) ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；非還元条件下）による推
定分子量が約７６，０００〜９２，０００ダルトンであ
る、 2) 肝実質細胞を増殖させる活性を有する、 3) ８０℃、１０分間の加熱処理により上記活性が失活
する、 4) トリプシンまたはキモトリプシンによる消化処理に
より上記活性が失活する、および 5) ヘパリンに対して強い親和性を有するを有する蛋白性因子である上記予防および／または治療
剤；肝実質細胞増殖因子がヒト由来の肝実質細胞増殖因
子である上記予防および／または治療剤；肝実質細胞増
殖因子がｃＤＮＡを用いた組換え肝実質細胞増殖因子で
ある上記予防および／または治療剤；組換え肝実質細胞
増殖因子が配列番号１に示されるアミノ酸配列で表され
る肝実質細胞増殖因子である上記予防および／または治
療剤；組換え肝実質細胞増殖因子が配列番号１に示され
るアミノ酸配列のうち３０番目のグルタミン酸から７２
８番目のセリンまでの配列で表される肝実質細胞増殖因
子である上記予防および／または治療剤；組換え肝実質
細胞増殖因子が配列番号１に示されるアミノ酸配列のう
ち３２番目のグルタミンから７２８番目のセリンまでの
配列で表される肝実質細胞増殖因子である上記予防およ
び／または治療剤；高血糖に起因する疾患が糖尿病であ
る上記予防および／または治療剤；肝実質細胞増殖因子
の肝臓へのグリコーゲン蓄積に基づく作用による疾患の
予防および／または治療である上記予防および／または
治療剤が提供される。

【０００９】

【発明の実施の形態】以下、本発明につき詳細に説明す
る。本発明の予防および／または治療剤は、ＨＧＦを有
効成分として含有する。かかるＨＧＦは、ＨＧＦを含有
することの知られているヒトやラット等のほ乳動物由来
の体液や組織、または自発的にＨＧＦを産生する細胞か
ら天然のＨＧＦを単離してもよいし、あるいは遺伝子組
換え法により該ＨＧＦをコードするｃＤＮＡを細胞に導
入して得られる組換えＨＧＦを用いてもよい。組換えＨ
ＧＦを産生させる宿主としては、大腸菌、枯草菌、酵
母、糸状菌、植物細胞、昆虫細胞、動物細胞などが挙げ
られる。

【００１０】具体例には、上記ほ乳動物由来の胎盤、肝
障害患者肝組織及び血液、MRC-5 細胞、IMR-9 細胞など
の線維芽細胞株、あるいは特開平3-285693号公報に記載
された方法に従いｈＨＧＦをコードするｃＤＮＡを含む
発現ベクターをＣＨＯ細胞等の宿主に導入した産生株な
どから得られたものが該当する。また、これらＨＧＦに
おいては、その前駆体蛋白質や、肝実質細胞を増殖させ
るという活性を損なわない範囲において一部のアミノ酸
を置換、欠失、挿入、修飾するなどの改変を行ったもの
を用いてもよい。かかる改変体としては、特開平2-2888
99号公報、WO90/10651号公報、特開平3-130091号公報、
同3-255096号公報、同4-30000号公報、Nature, 342, 44
0-443(1989)等に記載のものが挙げられる。

【００１１】本発明においては、ＨＧＦが、特開昭63-2
2526号公報および米国特許第5,004,805号公報に記載さ
れている、以下の理化学的性質を有する蛋白性因子であ
ることが好ましい。 1) ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；非還元条件下）による推
定分子量が約７６，０００〜９２，０００ダルトンであ
る、 2) 肝実質細胞を増殖させる活性を有する、 3) ８０℃、１０分間の加熱処理により上記活性が失活
する、 4) トリプシンまたはキモトリプシンによる消化処理に
より上記活性が失活する、および 5) ヘパリンに対して強い親和性を有するまた、かかるＨＧＦはヒト由来のものであることが好ま
しく、特に好ましいものとしては、特開平3-72883号公
報、特開平4-89499号公報およびヨーロッパ公開特許第0
412557号公報に記載の、後記配列表の配列番号１に示さ
れるアミノ酸配列で表されるもの、配列番号１に示され
るアミノ酸配列のうち３０番目のグルタミン酸から７２
８番目のセリンまでの配列で表されるもの、配列番号１
に示されるアミノ酸配列のうち３２番目のグルタミンか
ら７２８番目のセリンまでの配列で表されるものを挙げ
ることができる。

【００１２】本発明において、上記ＨＧＦは、下記実施
例で示すように、肝臓へのグリコーゲン蓄積を増加す
る。したがって、糖尿病をはじめとした高血糖に由来す
る疾患の優れた予防および／または治療剤になりうる。

【００１３】本発明の予防および／または治療剤は、前
記ＨＧＦを単独もしくは適当な希釈剤や他の添加剤と共
に各種の製剤形態（剤型）に調合され、使用される。剤
型としては、一般に非経口的投与に適する剤型が、好ま
しくは、注射用アンプル剤や注射用凍結乾燥粉末剤（バ
イアル）が使用に供される。各種剤型への調製は、この
技術分野で慣用される通常の手法を用いて行われる。製
剤化に使用される製剤担体としては、各種剤型への調製
に慣用される希釈剤や添加剤などが用いられる。

【００１４】例えば、注射用凍結乾燥粉末剤は、精製さ
れた前記ＨＧＦの有効量を、例えば蒸留水、生理食塩
水、ブドウ糖水溶液などの希釈剤に溶解し、必要に応じ
てカルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム
などの賦形剤、ポリエチレングリコール、デキストラン
硫酸ナトリウム、アミノ酸、ヒト血清アルブミンなどの
安定化剤、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウ
ム、フェノールなどの保存剤、ブドウ糖、グルコン酸カ
ルシウム、塩酸プロカインなどの無痛化剤、塩酸、酢
酸、クエン酸、水酸化ナトリウムなどのｐＨ調節剤など
を加え、常法に従い凍結乾燥することにより調製され
る。また、注射用アンプル剤は、前記ＨＧＦの有効量
を、例えば蒸留水、生理食塩水、リンゲル液などの希釈
剤に溶解し、必要に応じてサリチル酸ナトリウム、マン
ニトールなどの溶解補助剤、クエン酸ナトリウム、グリ
セリンなどの緩衝剤、ブドウ糖、添加糖などの等張化
剤、上記安定化剤、上記保存剤、上記無痛化剤、上記ｐ
Ｈ調節剤などの添加剤を加え、これを通常の加熱滅菌、
無菌濾過などにより無菌化して調製される。上記添加剤
の配合量は、各種の製剤形態に応じて適宜決定される。

【００１５】また、本発明の予防および／または治療剤
は、特開平5-301824号公報に記載のように、ＨＧＦをヘ
パリン、デキストラン硫酸等の硫酸化多糖類もしくはそ
の誘導体と併用することにより、その活性を増強するこ
とができ、また安定化することができる。

【００１６】本発明の薬剤は、これを必要とする患者に
対して経口的または非経口的に、一般には皮下、筋肉ま
たは静脈内注射により、その所定量を単回、もしくは複
数回に分けて投与するか、または連続的に投与する。か
かる投与量は、患者の年齢、性別、症状、体重等により
適宜調整されるが、有効ＨＧＦ量として、１日当たり１
μg/kg〜10 mg/kg、より好ましくは10〜1000μg/kgの範
囲で投与される。

【００１７】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、その要旨を超えない限り、以下の実施例に
限定されるものではない。なおＨＧＦは、特開平3-2856
93号公報に記載されているBD-24株等を用いて、該公報
に記載されている方法に従って製造された組換えｈＨＧ
Ｆを使用した。

【００１８】実施例１Ｚｕｃｋｅｒ系雄性ラット（１９週齢）を用い、ペント
バルビタール麻酔下で外科的手術により、頚静脈にカニ
ューレーションした。カニューレには、浸透圧ポンプを
装着し、１日に約３００μｇ／ｋｇのＨＧＦ（溶媒：生
理的食塩水）が静脈内に注入されるように、皮下にポン
プを植え込み、覚醒後、通常飼育に戻した。コントロー
ル群には、ＨＧＦの溶媒（生理的食塩水）のみをポンプ
にセットした。２週間の連続注入後、肝臓を摘出し、直
ちにホルマリン固定後、組織標本を作成した。ＰＡＳ陽
性染色を行い、グリコーゲンの蓄積を病理組織学的に検
討した。

【００１９】その結果、コントロール群は６例すべてに
おいてグリコーゲン蓄積の増加は見られなかったが、Ｈ
ＧＦ群では４例中３例においてグリコーゲン蓄積の増加
が見られた。

【００２０】上記の結果より、ＨＧＦは肝臓へのグリコ
ーゲン蓄積増加作用を有しており、血糖の肝臓中への取
り込み促進が示唆され、高血糖症等起因する疾患に対す
る予防および／または治療剤になり得るといえる。

【００２１】

【発明の効果】本発明の予防および／または治療剤は、
低血糖になりすぎない利点を持ち、糖尿病等の高血糖に
起因する疾患に対する予防および／または治療剤として
有用である。

【００２２】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：７２８配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質起源：生物名：ヒト配列 Met Trp Val Thr Lys Leu Leu Pro Ala Leu Leu Leu Gln His Val Leu 1 5 10 15 Leu His Leu Leu Leu Leu Pro Ile Ala Ile Pro Tyr Ala Glu Gly Gln 20 25 30 Arg Lys Arg Arg Asn Thr Ile His Glu Phe Lys Lys Ser Ala Lys Thr 35 40 45 Thr Leu Ile Lys Ile Asp Pro Ala Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val 50 55 60 Asn Thr Ala Asp Gln Cys Ala Asn Arg Cys Thr Arg Asn Lys Gly Leu 65 70 75 80 Pro Phe Thr Cys Lys Ala Phe Val Phe Asp Lys Ala Arg Lys Gln Cys 85 90 95 Leu Trp Phe Pro Phe Asn Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Glu Phe 100 105 110 Gly His Glu Phe Asp Leu Tyr Glu Asn Lys Asp Tyr Ile Arg Asn Cys 115 120 125 Ile Ile Gly Lys Gly Arg Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys 130 135 140 Ser Gly Ile Lys Cys Gln Pro Trp Ser Ser Met Ile Pro His Glu His 145 150 155 160 Ser Phe Leu Pro Ser Ser Tyr Arg Gly Lys Asp Leu Gln Glu Asn Tyr 165 170 175 Cys Arg Asn Pro Arg Gly Glu Glu Gly Gly Pro Trp Cys Phe Thr Ser 180 185 190 Asn Pro Glu Val Arg Tyr Glu Val Cys Asp Ile Pro Gln Cys Ser Glu 195 200 205 Val Glu Cys Met Thr Cys Asn Gly Glu Ser Tyr Arg Gly Leu Met Asp 210 215 220 His Thr Glu Ser Gly Lys Ile Cys Gln Arg Trp Asp His Gln Thr Pro 225 230 235 240 His Arg His Lys Phe Leu Pro Glu Arg Tyr Pro Asp Lys Gly Phe Asp 245 250 255 Asp Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Gln Pro Arg Pro Trp Cys Tyr 260 265 270 Thr Leu Asp Pro His Thr Arg Trp Glu Tyr Cys Ala Ile Lys Thr Cys 275 280 285 Ala Asp Asn Thr Met Asn Asp Thr Asp Val Pro Leu Glu Thr Thr Glu 290 295 300 Cys Ile Gln Gly Gln Gly Glu Gly Tyr Arg Gly Thr Val Asn Thr Ile 305 310 315 320 Trp Asn Gly Ile Pro Cys Gln Arg Trp Asp Ser Gln Tyr Pro His Glu 325 330 335 His Asp Met Thr Pro Glu Asn Phe Lys Cys Lys Asp Leu Arg Glu Asn 340 345 350 Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Ser Glu Ser Pro Trp Cys Phe Thr Thr 355 360 365 Asp Pro Asn Ile Arg Val Gly Tyr Cys Ser Gln Ile Pro Asn Cys Asp 370 375 380 Met Ser His Gly Gln Asp Cys Tyr Arg Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Met 385 390 395 400 Gly Asn Leu Ser Gln Thr Arg Ser Gly Leu Thr Cys Ser Met Trp Asp 405 410 415 Lys Asn Met Glu Asp Leu His Arg His Ile Phe Trp Glu Pro Asp Ala 420 425 430 Ser Lys Leu Asn Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asp Asp Ala His 435 440 445 Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Gly Asn Pro Leu Ile Pro Trp Asp Tyr Cys 450 455 460 Pro Ile Ser Arg Cys Glu Gly Asp Thr Thr Pro Thr Ile Val Asn Leu 465 470 475 480 Asp His Pro Val Ile Ser Cys Ala Lys Thr Lys Gln Leu Arg Val Val 485 490 495 Asn Gly Ile Pro Thr Arg Thr Asn Ile Gly Trp Met Val Ser Leu Arg 500 505 510 Tyr Arg Asn Lys His Ile Cys Gly Gly Ser Leu Ile Lys Glu Ser Trp 515 520 525 Val Leu Thr Ala Arg Gln Cys Phe Pro Ser Arg Asp Leu Lys Asp Tyr 530 535 540 Glu Ala Trp Leu Gly Ile His Asp Val His Gly Arg Gly Asp Glu Lys 545 550 555 560 Cys Lys Gln Val Leu Asn Val Ser Gln Leu Val Tyr Gly Pro Glu Gly 565 570 575 Ser Asp Leu Val Leu Met Lys Leu Ala Arg Pro Ala Val Leu Asp Asp 580 585 590 Phe Val Ser Thr Ile Asp Leu Pro Asn Tyr Gly Cys Thr Ile Pro Glu 595 600 605 Lys Thr Ser Cys Ser Val Tyr Gly Trp Gly Tyr Thr Gly Leu Ile Asn 610 615 620 Tyr Asp Gly Leu Leu Arg Val Ala His Leu Tyr Ile Met Gly Asn Glu 625 630 635 640 Lys Cys Ser Gln His His Arg Gly Lys Val Thr Leu Asn Glu Ser Glu 645 650 655 Ile Cys Ala Gly Ala Glu Lys Ile Gly Ser Gly Pro Cys Glu Gly Asp 660 665 670 Tyr Gly Gly Pro Leu Val Cys Glu Gln His Lys Met Arg Met Val Leu 675 680 685 Gly Val Ile Val Pro Gly Arg Gly Cys Ala Ile Pro Asn Arg Pro Gly 690 695 700 Ile Phe Val Arg Val Ala Tyr Tyr Ala Lys Trp Ile His Lys Ile Ile 705 710 715 720 Leu Thr Tyr Lys Val Pro Gln Ser 725

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】肝実質細胞増殖因子を有効成分として含
有することを特徴とする高血糖に起因する疾患の予防お
よび／または治療剤。
【請求項２】肝実質細胞増殖因子が以下の理化学的性
質を有する蛋白性因子であることを特徴とする請求項１
に記載の予防および／または治療剤。 1) ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；非還元条件下）による推
定分子量が約７６，０００〜９２，０００ダルトンであ
る、 2) 肝実質細胞を増殖させる活性を有する、 3) ８０℃、１０分間の加熱処理により上記活性が失活
する、 4) トリプシンまたはキモトリプシンによる消化処理に
より上記活性が失活する、および 5) ヘパリンに対して強い親和性を有する
【請求項３】肝実質細胞増殖因子がヒト由来の肝実質
細胞増殖因子である請求項１または２のいずれかに記載
の予防および／または治療剤。
【請求項４】肝実質細胞増殖因子がｃＤＮＡを用いた
組換え肝実質細胞増殖因子である請求項１に記載の予防
および／または治療剤。
【請求項５】組換え肝実質細胞増殖因子が配列番号１
に示されるアミノ酸配列で表される肝実質細胞増殖因子
である請求項４に記載の予防および／または治療剤。
【請求項６】組換え肝実質細胞増殖因子が配列番号１
に示されるアミノ酸配列のうち３０番目のグルタミン酸
から７２８番目のセリンまでの配列で表される肝実質細
胞増殖因子である請求項４に記載の予防および／または
治療剤。
【請求項７】組換え肝実質細胞増殖因子が配列番号１
に示されるアミノ酸配列のうち３２番目のグルタミンか
ら７２８番目のセリンまでの配列で表される肝実質細胞
増殖因子である請求項４に記載の予防および／または治
療剤。
【請求項８】高血糖に起因する疾患が糖尿病である請
求項１から７のいずれかに記載の予防および／または治
療剤。
【請求項９】肝実質細胞増殖因子の肝臓へのグリコー
ゲン蓄積に基づく作用による疾患の予防および／または
治療である請求項１から８のいずれかに記載の予防およ
び／または治療剤。