JPH10170518A - 免疫学的凝集反応試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 製造法が簡便で、長期安定性に優れ、高感度
で、非特異的反応の少ない免疫学的凝集反応用の検査試
薬を提供すること。 【解決手段】 本発明は、不溶性担体及び免疫学的反応
試薬からなる免疫学的凝集反応の検査試薬、及び、これ
を使用する検査方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、不溶性担体を用い
た免疫学的凝集反応試薬に関する。詳しくは、不溶性担
体、及び免疫学的反応試薬からなる免疫学的凝集反応に
よる検出試薬、及び、当該検出試薬を用いた検出方法に
関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、臨床検査の分野では、各種疾患の
検査法としてラテックス粒子を用いた免疫学的検査法が
行われてきた。この方法はラッテクス粒子を担体とし
て、これに抗原又は抗体を感作させ、血清中や血漿中の
抗体又は抗原が起こす抗原抗体反応によりラテックス粒
子に凝集反応を生じさせる。その結果得られる凝集の程
度を検出あるいは定量する方法である。このような検査
法は、例えば、リウマチ因子（ＲＦ）、ＨＢｓ抗原、Ｈ
Ｂｓ抗体、抗ストレプトリジン−Ｏ（ＡＳＯ）、Ｃ−反
応性タンパク質（ＣＲＰ）、α−フェトプロテイン（Ａ
ＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）等の検査に使用されて
いる。

【０００３】一般に、従来の免疫学的凝集反応試薬を用
いて被検体となる体液、例えば血液や尿等を測定する場
合には、抗原又は抗体を感作させた感作ラテックス粒子
が使用されていた。例えば、特開平８−１１０３４０号
には、ラテックス粒子表面の少なくとも一部が側鎖に糖
残基を有するビニル重合体で被覆されている改質ラテッ
クス粒子を使用する免疫学的凝集反応試薬が開示されて
いるし、特開平８−１０５８９１号には、不溶性担体と
してのラテックス粒子を脂溶性染料で処理し、その後当
該不溶性担体に脂質抗原を固定化してなる不溶性担体を
使用する方法が開示されている。また、特開平５−２８
８７４８号にはイヌ血清由来のＣＲＰ抗原を抗原として
哺乳動物に感作させることにより得た抗イヌＣＲＰ血清
から得られた抗イヌＣＲＰ抗体のラテックス粒子を使用
する方法が開示されている。

【０００４】疾患を正確に診断するためには被検体中に
含まれる微量の被測定物質を抗原抗体反応に基づき選択
的に、かつ正確に測定することが求められている。この
ため特異性が高く、高感度な免疫学的凝集反応試薬が検
査の上で必要とされてきた。また、このような特異性が
高く、高感度な免疫学的凝集反応試薬を得ることを目的
として、試薬の凝集反応を促進させる添加物を試薬や反
応系に添加して、反応液中に共存させる方法も種々用い
られている。例えば、特開平２−１７３５６７号公報に
は、反応時にアルキル化多糖類を添加する方法が開示さ
れている。即ち、高分子ポリマーを反応液中に添加する
方法が行われてきた。

【０００５】しかしながら、このような抗原や抗体など
の免疫学的反応試薬で感作させて固定化した不溶性担体
を用いる方法では、当該不溶性担体の製造方法が煩雑で
あるばかりでなく、かつ、当該不溶性担体の保存安定性
が悪く、製造後長期間を経たものは、その感度が低下す
るばかりでなく使用できなくなることもあった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、不溶性担体
を含有する免疫学的凝集反応による検出試薬において、
簡便性があり高感度で、長期間に亘って保存安定性がよ
く、非特異的な反応の少なく、かつ、その製造方法が特
に複雑な技術を要することなく簡略である免疫学的反応
による検出試薬及び検出方法を提供することを目的とす
るものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の目
的を達成するために、種々検討してきた結果、不溶性担
体に抗原又は抗体などを感作させて固定化することに問
題があるとの知見を得て、固定化手段について検討して
きたところ、意外にも事前に不溶性担体に抗原又は抗体
などを固定化させなくても、高感度で非特異的反応の少
ない検出試薬が得られることを見い出した。そして、こ
の固定化されていない検出試薬は長期間の保存安定性に
も優れており、その製造方法も複雑な技術を必要としな
く、簡便であることから本発明を完成するに至った。

【０００８】即ち、本発明は、免疫学的試薬及び不溶性
担体を含有してなる免疫学的凝集反応による検出試薬に
関する。また、本発明は免疫学的試薬及び不溶性担体を
含有してなる免疫学的凝集反応を用いる検出方法に関す
る。より詳細には、本発明はラテックスなどの不溶性担
体を、抗体などの免疫学的試薬を用いて事前に感作させ
ることなく、使用時にこれらを混合し、懸濁して使用す
ることができる不溶性担体と、免疫学的試薬とからなる
検出試薬を提供するものである。

【０００９】本発明の免疫学的試薬としては、免疫反応
により検出対象物を検出できるものであれば特に制限は
なく、例えば、リウマチ因子（ＲＦ）、ＨＢｓ抗原、Ｈ
Ｂｓ抗体、ＨＢｃ抗体、ＨＢｅ抗体、抗ストレプトリジ
ン−Ｏ（ＡＳＯ）、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）、
α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥ
Ａ）、Ｄ−ダイマー（Ｄ−ｄｉｍｅｒ）、ＨＣＧ、β_２
−ＭＧ（β_２マクログロブリン）、ＦＥＲ（フェリチ
ン）、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ヘルペスウィスル抗体、サイト
ノガロウィルス抗体、下痢原生ウィルスのロタウィル
ス、アデノウィルス、コロナウィルス、アストロウィル
スなどの抗体や細菌であるヘリコバクター、キャンピロ
バクター、クロストリジウムディフィシル、キャンディ
ダ、ペルフリーゲンス、腸管出血性大腸菌（Ｏ−１５
７）などの抗体等が挙げられる。この中でも不溶性担体
との凝集においてＣＲＰや下痢原生ウィルスの抗体のご
とく臨床検査時に迅速性を必要とする検査等が望まし
い。本発明の免疫学的試薬として、抗体を使用する場合
には、当該抗体はモノクロナール抗体であってもよい
し、ポリクローナル抗体であってもよい。

【００１０】本発明の不溶性担体としては、特に限定さ
れず、例えば、ポリスチレンラテックス粒子、ポリエチ
レンラテックス粒子等の各種の合成樹脂ラテックス粒
子；ゼラチン粒子；ウシ、ヒツジ等の動物の赤血球；カ
オリン；リポソーム；炭素末等の粒子状のもの等を挙げ
ることができ、更に、プラスチック製のマイクロタイタ
ープレート、試験管等を使用することもできる。なかで
も、ポリスチレンラテックス粒子が好ましい。上記不溶
性担体の粒径は、好ましくは０．０５〜１０μｍであ
り、より好ましくは０．１〜１μｍである。脂溶性染料
としては、不溶性担体表面上のマイナス電荷を相殺しう
るものであれば特に限定されず、例えば、スダンブラッ
クＢ、スダンＩＩＩ等を好適に用いることができる。

【００１１】本発明の検出試薬は、通常の緩衝液中に保
存することができる。上記緩衝液としては特に限定され
ず、例えば、りん酸緩衝液等の既知のもの等を挙げるこ
とができる。また、そのｐＨ及びイオン強度は、通常の
生理学的な条件とすることができる。上記緩衝液には、
所望により自己凝集反応を抑制する物質、抗原抗体反応
を促進する物質等を追加併用することができる。

【００１２】また、本発明の検出試薬は、緩衝液に懸濁
した状態で長期間安定に保存することができるが、凍結
乾燥状態で保存することもできる。その際、凍結乾燥時
の安定剤として一般に使用されている薬剤を添加して使
用することもできる。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明の検出試薬は、不溶性担体
と免疫学的反応試薬とを、通常の方法で混合することに
より製造することができる。例えば、緩衝液にラテック
ス粒子の量が全体の１〜３０重量％、好ましくは５〜１
５重量％になるようにラテックス粒子を添加し、次い
で、ＣＲＰなどの免疫学的反応試薬を添加混合して調整
することができる。

【００１４】本発明の検出方法としては、本発明の検出
試薬を必要に応じて調製し、検体にこれを加え混合す
る。その後、数分間、好ましくは３〜１５分間、より好
ましくは３〜１０分間くらい放置する。生起した凝集反
応を従来法、例えば、吸光度等により測定して、陽性、
疑陽性、陰性等の判定を行う。また前記の検出試薬の不
溶性担体と免疫学的試薬とが、別々に用意されている場
合には、これらの不溶性担体及び免疫学的試薬並びに検
体とを任意の順序で添加混合することもできる。

【００１５】本発明の検出試薬は、疾病の診断及び治療
のための臨床検査等の分野に広く使用することができ
る。本発明の検出試薬は、検体毎にバッチ式で使用する
こともでき、また、自動分析装置にセットして使用する
こともできる。

【００１６】本発明の検出試薬は、高感度で非特異的な
反応の少ない検出試薬であり、長期間の保存安定性にも
優れており、その製造方法も簡便である。

【００１７】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるもの
ではない。

【００１８】参考例（抗体の作製） ヒトＣＲＰを抗原としてウサギに免役させ、その後採血
し分取することにより抗ヒトＣＲＰウサギ血清を得た。
その後硫安塩析、プロティンＡカラムを用いたアフィニ
ティークロマトグラフィーにて純化させ、抗ヒトＣＲＰ
抗体としてのＩｇＧ画分を得た。

【００１９】実施例１（ＣＲＰ検出試薬） 抗ヒトＣＲＰ抗体（ＩｇＧ）を０．１ＭＴｒｉｓ緩衝液
（ｐＨ８）にて、濃度１ｍｇ／ｍｌＮ容量２ｍｌにす
る。ラテックス粒子は懸濁液として、粒径０．１〜１．
０μｍ固形分１０％（ｗ／ｖ）のポリスチレンラテック
ス（積水化学工業社製）を０．２ｍｌ使用する。

【００２０】試験例１ サンプルとして抗原ＣＲＰ濃度１４０μｇ／ｍｌ（ヤト
ロン社製ＣＲＰ−Ｌスタンダード１４ｍｇ／ｄｌ）を使
用する。サンプルは０．１ＭＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．
０）で希釈系列（ＳＴＤ濃度）をつくった。ＣＲＰ検出
試薬（ＩｇＧ（１ｍｇ／ｍｌ））は使用時に抗体、ラテ
ックス粒子を混合し、懸濁化させて５分後に使用した。
ガラス板上にサンプルを５０μｌとり上記のＣＲＰ検出
試薬５０μｌを加え攪拌し３分後に判定した。結果を表
１に示す。

【００２１】試験例２ 実施例１のＣＲＰ検出試薬に代えて、従来の固定化検出
試薬（事前にラテックスを感作させたもの）を用いて、
試験例１と同様な方法で試験をした。結果を、試験例１
の結果と併せて表１に示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】表１から明らかなように、本発明の検出試
薬は、従来の固定化試薬に比べて同等又はそれ以上の感
度を有するものである。

【００２４】

【発明の効果】本発明は、不溶性担体を含有する免疫学
的凝集反応による検出試薬において、簡便性があり高感
度で、長期間に亘って保存安定性がよく、非特異的な反
応が少なく、かつ、その製造方法が特に複雑な技術を要
することなく簡略である免疫学的反応による検出試薬及
び検出方法を提供するものである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 不溶性担体及び免疫学的反応試薬からな
   る免疫学的凝集反応による検出試薬。
2. 【請求項２】 不溶性担体がラテックス粒子である請求
   項１に記載の検出試薬。
3. 【請求項３】 免疫学的反応試薬がＣ−反応性タンパク
   質である請求項１又は２に記載の検出試薬。