JPH1017593A - 新規ペプチド、その製法、それを含有する細胞周期阻害剤 - Google Patents
新規ペプチド、その製法、それを含有する細胞周期阻害剤Info
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- JPH1017593A JPH1017593A JP8167401A JP16740196A JPH1017593A JP H1017593 A JPH1017593 A JP H1017593A JP 8167401 A JP8167401 A JP 8167401A JP 16740196 A JP16740196 A JP 16740196A JP H1017593 A JPH1017593 A JP H1017593A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 細胞周期阻害活性を有する新規化合物、その
製造方法、それを有効成分とする細胞周期阻害剤および
抗腫瘍剤を提供すること。 【解決手段】 下記の式（１）で表されるペペチドRK-F
1010；培地中に、ペプチドRK-F1010を産生するアスペル
ギルス属に属する糸状菌95F-1 を培養し、当該培養物か
らペプチドRK-F1010を分離・採取することを特徴とす
る、ペプチドRK-F1010の製造方法；ペプチドRK-F1010を
有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤；ペプチド
RK-F1010を産生するアスペルギルス属に属する糸状菌ア
スペルギルステレウス95F-1 株。 【化１】
製造方法、それを有効成分とする細胞周期阻害剤および
抗腫瘍剤を提供すること。 【解決手段】 下記の式（１）で表されるペペチドRK-F
1010；培地中に、ペプチドRK-F1010を産生するアスペル
ギルス属に属する糸状菌95F-1 を培養し、当該培養物か
らペプチドRK-F1010を分離・採取することを特徴とす
る、ペプチドRK-F1010の製造方法；ペプチドRK-F1010を
有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤；ペプチド
RK-F1010を産生するアスペルギルス属に属する糸状菌ア
スペルギルステレウス95F-1 株。 【化１】
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規ペプチドRK-F
1010、その製造方法、それを有効成分とする細胞周期阻
害剤、抗腫瘍剤、及びそれを生産するアスペルギルス属
に属する糸状菌に関する。
1010、その製造方法、それを有効成分とする細胞周期阻
害剤、抗腫瘍剤、及びそれを生産するアスペルギルス属
に属する糸状菌に関する。
【従来の技術】人体を構成する細胞は恒常性を維持して
おり、そのために細胞の増殖と分化は厳しく制御されて
いる。細胞は、Ｍ期・Ｇ1 期・Ｓ期・Ｇ2 期という一連
の過程からなる細胞周期を回転することにより分裂、増
殖を行う。この細胞周期の制御機構に異常が生じると恒
常性に乱れが生じ、癌や免疫疾患になる可能性が高ま
る。最近では、細胞周期の調節機構が分子レベルで解明
されつつあり、細胞周期を調節する物質には抗腫瘍剤や
免疫抑制剤などの可能性が示されつつある。これらの用
途のための従来の薬剤には毒性や副作用などの面で問題
があり、これらの用途に適する新規化合物の開発が要望
されている。
おり、そのために細胞の増殖と分化は厳しく制御されて
いる。細胞は、Ｍ期・Ｇ1 期・Ｓ期・Ｇ2 期という一連
の過程からなる細胞周期を回転することにより分裂、増
殖を行う。この細胞周期の制御機構に異常が生じると恒
常性に乱れが生じ、癌や免疫疾患になる可能性が高ま
る。最近では、細胞周期の調節機構が分子レベルで解明
されつつあり、細胞周期を調節する物質には抗腫瘍剤や
免疫抑制剤などの可能性が示されつつある。これらの用
途のための従来の薬剤には毒性や副作用などの面で問題
があり、これらの用途に適する新規化合物の開発が要望
されている。
【０００２】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、細胞
周期阻害活性を有する新規化合物、その製造方法、それ
を有効成分とする細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤を提供
することである。
周期阻害活性を有する新規化合物、その製造方法、それ
を有効成分とする細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤を提供
することである。
【課題を解決するための手段】本発明者は上記課題の解
決のために鋭意検討した結果、沖縄県那覇市で採取した
土壌から分離された、アスペルギルス属に属する糸状菌
95F-1 株が細胞周期を阻害する物質を生産することを見
い出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本願は
以下の発明を提供するものである。 Ａ．下記の式（１）で表されるペプチドRK-F1010。
決のために鋭意検討した結果、沖縄県那覇市で採取した
土壌から分離された、アスペルギルス属に属する糸状菌
95F-1 株が細胞周期を阻害する物質を生産することを見
い出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本願は
以下の発明を提供するものである。 Ａ．下記の式（１）で表されるペプチドRK-F1010。
【０００３】
【化２】
【０００４】Ｂ．培地中に、ペプチドRK-F1010を産生す
るアスペルギルス属に属する糸状菌95F-1 を培養し、当
該培養物からペプチドRK-F1010を分離・採取することを
特徴とする、ペプチドRK-F1010の製造方法。 Ｃ．ペプチドRK-F1010を有効成分とする細胞周期阻害
剤。 Ｄ．ペプチドRK-F1010を有効成分とする抗腫瘍剤。 Ｅ．ペプチドRK-F1010を産生するアスペルギルス属に属
する糸状菌アスペルギルス テレウス95F-1 株。
るアスペルギルス属に属する糸状菌95F-1 を培養し、当
該培養物からペプチドRK-F1010を分離・採取することを
特徴とする、ペプチドRK-F1010の製造方法。 Ｃ．ペプチドRK-F1010を有効成分とする細胞周期阻害
剤。 Ｄ．ペプチドRK-F1010を有効成分とする抗腫瘍剤。 Ｅ．ペプチドRK-F1010を産生するアスペルギルス属に属
する糸状菌アスペルギルス テレウス95F-1 株。
【０００５】
【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明の新規ペプチドRK-F1010を生産する菌株
は、本発明者らが、沖縄県那覇市にて採取した土壌から
新たに分離した菌株であり、微生物の名称「アスペルギ
ルス テレウス 95F-1 (Aspergillus terreus 95F-1 」
および微生物寄託番号「ＦＥＲＭ Ｐ−１５６２９」と
して、平成８年５月１７日に工業技術院生命工学工業技
術研究所に寄託されている。本発明のRK-F1010を生産す
る糸状菌アスペルギルス テレウス95F-1 株は、以下の
生物学的性質を有する。
する。本発明の新規ペプチドRK-F1010を生産する菌株
は、本発明者らが、沖縄県那覇市にて採取した土壌から
新たに分離した菌株であり、微生物の名称「アスペルギ
ルス テレウス 95F-1 (Aspergillus terreus 95F-1 」
および微生物寄託番号「ＦＥＲＭ Ｐ−１５６２９」と
して、平成８年５月１７日に工業技術院生命工学工業技
術研究所に寄託されている。本発明のRK-F1010を生産す
る糸状菌アスペルギルス テレウス95F-1 株は、以下の
生物学的性質を有する。
【０００６】〔培地上での諸性状〕 ツァペック・酵母エキス寒天（ＣＹＡ；表１参照）平板
上：２５℃、７日間の培養で、生育は中程度、コロニー
の直径は２６〜２９mm、表面はフェルト状で、放射状及
び同心円状にしわがあり、全体的にやや盛り上がる。胞
子の形成はコロニーの中心付近で中程度、また無色透明
な浸出液の分泌も観察される。コロニー表面の色調は、
胞子形成の認められる中心付近でうすい赤みの黄[10YR
8.5/6] 、気生菌糸の形成が盛んな周縁付近では黄みの
白[5Y9/1] 、また両者の境界線付近でうすい黄[5Y9/6]
を呈する。コロニー裏面は表面と同様にしわがあり、色
調は中心付近で黄赤[5YR6/12] 、その他の部分ではうす
い赤みの黄[10YR8.5/6] から赤みの黄[10YR7/12]を呈す
る。培地中に黄色の可溶性色素をわずかに分泌する。
上：２５℃、７日間の培養で、生育は中程度、コロニー
の直径は２６〜２９mm、表面はフェルト状で、放射状及
び同心円状にしわがあり、全体的にやや盛り上がる。胞
子の形成はコロニーの中心付近で中程度、また無色透明
な浸出液の分泌も観察される。コロニー表面の色調は、
胞子形成の認められる中心付近でうすい赤みの黄[10YR
8.5/6] 、気生菌糸の形成が盛んな周縁付近では黄みの
白[5Y9/1] 、また両者の境界線付近でうすい黄[5Y9/6]
を呈する。コロニー裏面は表面と同様にしわがあり、色
調は中心付近で黄赤[5YR6/12] 、その他の部分ではうす
い赤みの黄[10YR8.5/6] から赤みの黄[10YR7/12]を呈す
る。培地中に黄色の可溶性色素をわずかに分泌する。
【０００７】ＣＹＡ寒天平板上：３７℃、７日間の培養
では、生育良好、コロニーの直径は４８〜５６mmに達す
る。表面は綿毛状からフェルト状を呈し、その他はＣＹ
Ａ、２５℃でのコロニーと同様の性状を示す。 麦芽エキス寒天（ＭＥＡ；表１参照）平板上：２５℃、
７日間の培養で、生育は中程度、コロニーの直径は１９
〜２０mmでＣＹＡに比べやや生育速度は遅い。表面はフ
ェルト状からビロード状で、ＣＹＡと同様に放射状及び
同心円状にしわがあるが、生育に厚みがなく平坦なコロ
ニーを形成する。胞子の形成はコロニーの中心付近で中
程度。コロニー表面の色調は、胞子形成の認められる中
心付近でうすい赤みの黄[10YR8.5/6] 、気生菌糸の形成
が盛んな周縁付近では黄みの白[5Y9/1] を呈する。コロ
ニー裏面の色調は中心付近で赤みの黄[10YR7/12]、その
他の部分ではうすい赤みの黄[10YR8.5/6] を呈する。
では、生育良好、コロニーの直径は４８〜５６mmに達す
る。表面は綿毛状からフェルト状を呈し、その他はＣＹ
Ａ、２５℃でのコロニーと同様の性状を示す。 麦芽エキス寒天（ＭＥＡ；表１参照）平板上：２５℃、
７日間の培養で、生育は中程度、コロニーの直径は１９
〜２０mmでＣＹＡに比べやや生育速度は遅い。表面はフ
ェルト状からビロード状で、ＣＹＡと同様に放射状及び
同心円状にしわがあるが、生育に厚みがなく平坦なコロ
ニーを形成する。胞子の形成はコロニーの中心付近で中
程度。コロニー表面の色調は、胞子形成の認められる中
心付近でうすい赤みの黄[10YR8.5/6] 、気生菌糸の形成
が盛んな周縁付近では黄みの白[5Y9/1] を呈する。コロ
ニー裏面の色調は中心付近で赤みの黄[10YR7/12]、その
他の部分ではうすい赤みの黄[10YR8.5/6] を呈する。
【０００８】２０％シュークロース含有ＣＹＡ寒天（Ｃ
Ｙ２０S ；表１参照）平板上：２５℃、７日間の培養
で、生育は中程度、コロニーの直径は２６〜２９mm、Ｃ
ＹＡとほぼ同様の性状を示し、可溶性色素の分泌はやや
多く、浸出液の分泌は認められない。コロニー表面の色
調は、胞子形成の認められる中心付近でうすい赤みの黄
[10YR8.5/6] 、気生菌糸の形成が盛んな周縁付近では黄
みの白[5Y9/1] からごくうすい黄[5Y9/3] を呈する。コ
ロニー裏面の色調は黄赤[5YR6/12] から明るい赤みの黄
[10YR8/11]を呈する。 その他の各種寒天平板上：２５℃、７日間培養した場合
の、肉眼的コロニー観察結果を表２に示した。なお、色
の表示は日本規格協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の
系統色名を引用した。
Ｙ２０S ；表１参照）平板上：２５℃、７日間の培養
で、生育は中程度、コロニーの直径は２６〜２９mm、Ｃ
ＹＡとほぼ同様の性状を示し、可溶性色素の分泌はやや
多く、浸出液の分泌は認められない。コロニー表面の色
調は、胞子形成の認められる中心付近でうすい赤みの黄
[10YR8.5/6] 、気生菌糸の形成が盛んな周縁付近では黄
みの白[5Y9/1] からごくうすい黄[5Y9/3] を呈する。コ
ロニー裏面の色調は黄赤[5YR6/12] から明るい赤みの黄
[10YR8/11]を呈する。 その他の各種寒天平板上：２５℃、７日間培養した場合
の、肉眼的コロニー観察結果を表２に示した。なお、色
の表示は日本規格協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の
系統色名を引用した。
【０００９】〔形態〕本菌株がＭＥＡ上、２５℃、１４
日間の培養で形成したコロニ−を光学顕微鏡で観察する
と、基底菌糸から長く伸長した分生子柄の先端が球状に
膨らみ、アスペルギルス（Aspergillus)属に特徴的な復
列、短円筒状の分生子頭が多数観察される。培養７日目
で形成される分生子頭は、ほとんどが未熟な放射状、色
調も白色から極めてうすい褐色を呈するが、培養１４日
目では淡黄褐色、短円筒状分生子頭が発達し優勢とな
る。ただし、未熟な放射状分生子頭が優勢のまま残存す
る箇所が、コロニーの中心付近および不規則なセクター
状部分で認められる。分生子柄はやや屈曲し、無色で厚
壁、表面は滑面、長さは２００〜７００μｍ、径は4.６
〜8.０μｍ、壁の厚みは0.４〜1.０μｍである。分生子
柄の先端が球状に膨らんだ頂のう部分の直径は１４〜２
６μｍ、基部を除く２／３以上の表面にメトレを生じて
いる。メトレの大きさは4.０〜7.０×1.８〜3.０μｍ。
フィアライドはフラスコ形、大きさは5.８〜8.０×1.６
〜2.０μｍである。分生子は球形から亜球形、表面は平
滑、直径は2.０〜2.６μｍである。また、一部の基中菌
糸では、側面に亜球形からしずく形のアレウリオ型分生
子(aleurioconidia)が単生する。アレウリオ型分生子の
大きさは5.０〜9.０×3.４〜5.０μｍである。なお、培
養を３週間に延長したが、子のう果等の有性生殖器官の
形成は認められなかった。
日間の培養で形成したコロニ−を光学顕微鏡で観察する
と、基底菌糸から長く伸長した分生子柄の先端が球状に
膨らみ、アスペルギルス（Aspergillus)属に特徴的な復
列、短円筒状の分生子頭が多数観察される。培養７日目
で形成される分生子頭は、ほとんどが未熟な放射状、色
調も白色から極めてうすい褐色を呈するが、培養１４日
目では淡黄褐色、短円筒状分生子頭が発達し優勢とな
る。ただし、未熟な放射状分生子頭が優勢のまま残存す
る箇所が、コロニーの中心付近および不規則なセクター
状部分で認められる。分生子柄はやや屈曲し、無色で厚
壁、表面は滑面、長さは２００〜７００μｍ、径は4.６
〜8.０μｍ、壁の厚みは0.４〜1.０μｍである。分生子
柄の先端が球状に膨らんだ頂のう部分の直径は１４〜２
６μｍ、基部を除く２／３以上の表面にメトレを生じて
いる。メトレの大きさは4.０〜7.０×1.８〜3.０μｍ。
フィアライドはフラスコ形、大きさは5.８〜8.０×1.６
〜2.０μｍである。分生子は球形から亜球形、表面は平
滑、直径は2.０〜2.６μｍである。また、一部の基中菌
糸では、側面に亜球形からしずく形のアレウリオ型分生
子(aleurioconidia)が単生する。アレウリオ型分生子の
大きさは5.０〜9.０×3.４〜5.０μｍである。なお、培
養を３週間に延長したが、子のう果等の有性生殖器官の
形成は認められなかった。
【００１０】
【表１】 ────────────────────────────────── CYA*1 MEA*2 CY20S*3 リン酸水素二カリウム(K2HPO4) O.1% - O.1% 酵母エキス(Yeast extract) O.5% - O.1% シュークロース(Sucrose) 3.0% - 20.0% 麦芽エキス(Malt extract) - 2.0% - ペプトン(Peptone) - O.1% - グルコース(Glucose) - 2.0% - 硝酸ナトリウム(NaNO3) O.3% - O.3% 塩化カリウム(KCl) O.05% - O.05% 硫酸マグネシウム七水和物 O.05% - O.05% (MgSO4・7H2O) 硫酸鉄（II) 七水和物 O.001% - O.001% (FeSO4・7H2O) 硫酸亜鉛七水和物 O.001% - O.001% (ZnSO4・7H2O) 硫酸銅（II) 五水和物 O.0005% - O.0005% (CuSO4・5H2O) 寒天(Agar) 1.5% 2.0% 1.5% pH 6.0 6.0 6.0 *1:ツァペック・酵母エキス寒天 *2:麦芽エキス寒天 *3:20% シュークロース含有ツァペック・酵母エキス寒天
【００１１】
【表２】 ─────────────────────────────────── 培地 生育 コロニーの色調 胞子の 可溶性色素 （コロニー径） 形成 の分泌 コロニーの 性状 表面 裏面 バレイ 中程度 黄みの白 薄い赤みの黄 中程度 わずかに ショ、ブ (14-15mm) (5Y9/1), (10YR8.5/6) 分泌 ドウ糖寒 フェルト状か くすんだ赤み 黄赤天培地 らビロード状 の黄(10YR7/7) (5YR6/12) オート 中程度 黄みの白 赤みの白 中程度 わずかに ミール寒 (26-27mm） (5Y9/1), (10YR7/12) 分泌する 天培地 フェルト状か 薄い赤みの黄 黄赤 が、ほと らビロード状 (10YR8.5/6) (5YR6/12) んど拡散 くすんだ赤み しない の黄(10YR7/7) サブロー 中程度 黄みの白 薄い赤みの黄 なし わずかに 寒天培地 (28-34mm) (5Y9/1), (10YR8.5/6) 分泌 フェルト状 YpSs寒天 中程度 黄みの白 薄い赤みの黄 中程度 わずかに 培地 (23-28mm) (5Y9/1), (10YR8.5/6) 分泌 綿毛状から 薄い赤みの黄 黄赤 ビロード状 (10YR8.5/6) (5YR6/12)
【００１２】〔生理的性質〕 生育ｐＨ範囲及び最適ｐＨ：ＹｐＳｓ液体培地におい
て、ｐＨ２〜１０の範囲で生育し、最適ｐＨは５〜７で
ある。 生育温度範囲及び最適温度：サブロ−液体培地におい
て、１６〜４２℃の範囲で生育し、最適生育温度は３６
〜３９℃である。 好気性，嫌気性の区別： 好気性
て、ｐＨ２〜１０の範囲で生育し、最適ｐＨは５〜７で
ある。 生育温度範囲及び最適温度：サブロ−液体培地におい
て、１６〜４２℃の範囲で生育し、最適生育温度は３６
〜３９℃である。 好気性，嫌気性の区別： 好気性
【００１３】以上の形態的特徴及び培養上の性状から、
本菌株が、不完全菌亜門、アスペルギルス（Aspergillu
s)属の１菌種であることが明らかであり、宇田川俊一、
椿啓介編『菌類図鑑』講談社（1978年）、レイパー（K.
B. Raper)、フェンネル（D.I. Fennell)著『ザ ジー
ナス アスペルギルス（The genus Aspergillus)』ザウ
イリアムス アンド ウィルキンス カンパニー（The
Williams & WilkinsCompany）（1965年）およびクリッ
ク（M.A.Klich)、ピット（J.I.Pitt）著『アラボラトリ
ー ガイド トゥー コモン アスペルギルス スピー
シーズ アンド ゼア テレオモルフズ（A Laboratory
guide to common Aspergillus species and their tel
eomorphs）』コモンウェールス サイエンティフィック
アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイ
ション、ディヴィジョン オブ フード プロセッシン
グ(Commonwealth Scientific and Industrial Research
Organization, Division of Food Processing) （1988
年）に報告されている多くの既知菌株と比較検討した。
その結果、本菌株はアスペルギルス テレウス（Asperg
illus terreus Thom) に最も近い性状を示すことが明か
となり、本菌株を「アスペルギルス テレウス 95F-1
（Aspergillus terreus 95F-1)」と命名した。
本菌株が、不完全菌亜門、アスペルギルス（Aspergillu
s)属の１菌種であることが明らかであり、宇田川俊一、
椿啓介編『菌類図鑑』講談社（1978年）、レイパー（K.
B. Raper)、フェンネル（D.I. Fennell)著『ザ ジー
ナス アスペルギルス（The genus Aspergillus)』ザウ
イリアムス アンド ウィルキンス カンパニー（The
Williams & WilkinsCompany）（1965年）およびクリッ
ク（M.A.Klich)、ピット（J.I.Pitt）著『アラボラトリ
ー ガイド トゥー コモン アスペルギルス スピー
シーズ アンド ゼア テレオモルフズ（A Laboratory
guide to common Aspergillus species and their tel
eomorphs）』コモンウェールス サイエンティフィック
アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイ
ション、ディヴィジョン オブ フード プロセッシン
グ(Commonwealth Scientific and Industrial Research
Organization, Division of Food Processing) （1988
年）に報告されている多くの既知菌株と比較検討した。
その結果、本菌株はアスペルギルス テレウス（Asperg
illus terreus Thom) に最も近い性状を示すことが明か
となり、本菌株を「アスペルギルス テレウス 95F-1
（Aspergillus terreus 95F-1)」と命名した。
【００１４】上記糸状菌95F-1 株を培養し、当該培養物
から式（1)に示す構造式のRK-F1010（以下「本発明化合
物」と記載することもある）を採取する方法は、具体的
には後述する製造例に記載するが、概ね常法に従って行
うことができる。すなわち、一般に微生物代謝産物を採
取するのに通常用いられる手段を適宜利用して行うこと
ができる。例えば、各種イオン交換樹脂、非イオン性吸
着樹脂、ゲル濾過クロマトグラフィー、又は活性炭、ア
ルミナ、シリカゲル等の吸着剤によるクロマトグラフィ
ー及び高速液体クロマトグラフィー、或いは結晶化、減
圧濃縮、凍結乾燥等の手段をそれぞれ単独又は適宜組み
合わせて、或いは反復して使用することが可能である。
から式（1)に示す構造式のRK-F1010（以下「本発明化合
物」と記載することもある）を採取する方法は、具体的
には後述する製造例に記載するが、概ね常法に従って行
うことができる。すなわち、一般に微生物代謝産物を採
取するのに通常用いられる手段を適宜利用して行うこと
ができる。例えば、各種イオン交換樹脂、非イオン性吸
着樹脂、ゲル濾過クロマトグラフィー、又は活性炭、ア
ルミナ、シリカゲル等の吸着剤によるクロマトグラフィ
ー及び高速液体クロマトグラフィー、或いは結晶化、減
圧濃縮、凍結乾燥等の手段をそれぞれ単独又は適宜組み
合わせて、或いは反復して使用することが可能である。
【００１５】
【実施例】以下に実施例等を記載して本発明を具体的に
記載する。 〔製造例〕グルコース2.５％、可溶性澱粉１％、肉エキ
ス0.５％、酵母0.３％、ポリペプトン0.５％、食塩0.２
％、リン酸第一カリウム0.０５％、硫酸マグネシウム0.
０５％及び大豆粉２％の組成の培地 (pH 5.8) に、本発
明菌株９５Ｆ−１株を接種して２８℃で９６時間振盪培
養を行った。培養液７Ｌを７０％アセトン１０Ｌを用い
て抽出した。減圧濃縮後得られた水溶液をpH 7.0に調整
し、3.５Ｌの酢酸エチルで２回抽出を繰り返した。抽出
後、全ての酢酸エチルをあわせて減圧濃縮し、褐色のシ
ロップ１8.５ｇを得た。このシロップ１8.５ｇをクロロ
ホルム１０mlに溶解し、クロロホルムで調製したシリカ
ゲルカラム（直径６cm、長さ９０cm）に浸潤させ、最初
にクロロホルムを１Ｌ流した後、クロロホルム−メタノ
ール溶液を配合割合を順次変えて（９９：１、４９：
１、１９：１、９：１）それぞれ１Ｌづつ流し、最後に
メタノール１Ｌを流した。活性はクロロホルム−メタノ
ール溶液（１９：１）の画分に溶出した。これを減圧濃
縮することによって7.８７ｇの褐色油状物質を得た。さ
らにこの褐色油状物質をタノールに溶解し、同じ溶液で
調製したセファデックス LH-20（ファルマシア社製）の
カラム（直径4.５cm、長さ１２０cm）にかけて、メタノ
ールで溶出した。活性画分を集め、これを減圧濃縮によ
り4.０６ｇの黄色油状物質を得た。最後に、ODS カラム
（直径２cm、長さ２５cm; センシューパック、センシュ
ー科学社製）を用いて高速液体クロマトグラフィーによ
る分取を行った。なお、用いた溶媒はアセトニル−水
（３：１）、流速9.０ml／分で13−15分の画分を分取し
てRK−F1010 を淡黄色粉末として53.3mg単離した。
記載する。 〔製造例〕グルコース2.５％、可溶性澱粉１％、肉エキ
ス0.５％、酵母0.３％、ポリペプトン0.５％、食塩0.２
％、リン酸第一カリウム0.０５％、硫酸マグネシウム0.
０５％及び大豆粉２％の組成の培地 (pH 5.8) に、本発
明菌株９５Ｆ−１株を接種して２８℃で９６時間振盪培
養を行った。培養液７Ｌを７０％アセトン１０Ｌを用い
て抽出した。減圧濃縮後得られた水溶液をpH 7.0に調整
し、3.５Ｌの酢酸エチルで２回抽出を繰り返した。抽出
後、全ての酢酸エチルをあわせて減圧濃縮し、褐色のシ
ロップ１8.５ｇを得た。このシロップ１8.５ｇをクロロ
ホルム１０mlに溶解し、クロロホルムで調製したシリカ
ゲルカラム（直径６cm、長さ９０cm）に浸潤させ、最初
にクロロホルムを１Ｌ流した後、クロロホルム−メタノ
ール溶液を配合割合を順次変えて（９９：１、４９：
１、１９：１、９：１）それぞれ１Ｌづつ流し、最後に
メタノール１Ｌを流した。活性はクロロホルム−メタノ
ール溶液（１９：１）の画分に溶出した。これを減圧濃
縮することによって7.８７ｇの褐色油状物質を得た。さ
らにこの褐色油状物質をタノールに溶解し、同じ溶液で
調製したセファデックス LH-20（ファルマシア社製）の
カラム（直径4.５cm、長さ１２０cm）にかけて、メタノ
ールで溶出した。活性画分を集め、これを減圧濃縮によ
り4.０６ｇの黄色油状物質を得た。最後に、ODS カラム
（直径２cm、長さ２５cm; センシューパック、センシュ
ー科学社製）を用いて高速液体クロマトグラフィーによ
る分取を行った。なお、用いた溶媒はアセトニル−水
（３：１）、流速9.０ml／分で13−15分の画分を分取し
てRK−F1010 を淡黄色粉末として53.3mg単離した。
【００１６】以下に当該精製標品の物性値等を示す。 〔RK-F1010の物理化学的諸性質〕 性状 淡黄色粉末 融点 92-95 ℃ [α]D 25 −135.2゜(c 0.10, CHCl3) 分子式 C28H40N4O3 質量分析 m/z 480(M) 元素分析 実測値(%) C:63.09 H:8.58 N:9.38 理論値(%) C:62.92 H:8.61 N:10.49 （C28H40N4O3・3H20として計算） UVλmax MeOHnm (ε) スペクトルを図１に示す。 230 (87000), 285 (6700) IRνmax KBr cm-1 スペクトルを図２に示す。 3312, 2966, 2932, 1627, 1494, 1460, 1093, 744 核磁気共鳴スペクトル DMSO-d6 中で測定した1H-NMRの結果を表３及び図３に示
す。DMSO-d6 中で測定した13C-NMR の結果を表３及び図
４に示す。
す。DMSO-d6 中で測定した13C-NMR の結果を表３及び図
４に示す。
【００１７】
【表３】 RK-F1010の1H-NMR,13C-NMR(DMSO-d6)
【００１８】
【化３】
【００１９】なお、本発明化合物の活性は以下の方法に
従って測定した。 〔試験例１〕細胞周期阻害効果 細胞周期の調節蛋白質である p34cdc キナーゼが温度感
受性に変異したマウス乳癌細胞tsFT210 細胞を用いた。
tsFT210 細胞は通常32℃で5%仔牛血清を含むRPMI1640培
地にて5%炭酸ガスと水蒸気を飽和させた培養器内で培養
する。tsFT210細胞は39℃で培養すると、細胞周期がG2
期で停止し、これを32℃にシフトダウンすると再び細胞
分裂を開始してG1期へ移行する。シフトダウンと同時に
RK-F1010を添加して、フローサイトメーターと顕微鏡観
察により細胞周期（G2→Ｍ→G1)の進行を解析した。結
果を表４に示す。
従って測定した。 〔試験例１〕細胞周期阻害効果 細胞周期の調節蛋白質である p34cdc キナーゼが温度感
受性に変異したマウス乳癌細胞tsFT210 細胞を用いた。
tsFT210 細胞は通常32℃で5%仔牛血清を含むRPMI1640培
地にて5%炭酸ガスと水蒸気を飽和させた培養器内で培養
する。tsFT210細胞は39℃で培養すると、細胞周期がG2
期で停止し、これを32℃にシフトダウンすると再び細胞
分裂を開始してG1期へ移行する。シフトダウンと同時に
RK-F1010を添加して、フローサイトメーターと顕微鏡観
察により細胞周期（G2→Ｍ→G1)の進行を解析した。結
果を表４に示す。
【００２０】
【表４】 RK-F1010の細胞周期阻害活性
【００２１】〔試験例２〕 RK-F1010 の細胞増殖抑制効
果 ヒト白血病細胞K-562 及びHL-60 をRPMI1640培地(10%の
牛胎仔血清を含む）で培養した。これに一連の稀釈系列
のRK-F1010を加え、17時間培養したのち、MTT試薬を加
えて生育を計測した。その結果を表５に示す。
果 ヒト白血病細胞K-562 及びHL-60 をRPMI1640培地(10%の
牛胎仔血清を含む）で培養した。これに一連の稀釈系列
のRK-F1010を加え、17時間培養したのち、MTT試薬を加
えて生育を計測した。その結果を表５に示す。
【００２２】
【表５】 細胞増殖抑制効果（最少生育阻止濃度）
【００２３】
【発明の効果】本発明の新規ペプチド RK-F1010 は、優
れた細胞周期阻害活性及び抗腫瘍活性を有する。
れた細胞周期阻害活性及び抗腫瘍活性を有する。
【図１】本発明化合物の紫外線吸収スペクトル（メタノ
ール中）を示す。
ール中）を示す。
【図２】本発明化合物の赤外線吸収スペクトル(KBr中)
を示す。
を示す。
【図３】本発明化合物の1H-NMRスペクトル (ジメチルス
ルホキシド-d6 中）を示す。
ルホキシド-d6 中）を示す。
【図４】本発明化合物の13C-NMR スペクトル (ジメチル
スルホキシド-d6 中）を示す。
スルホキシド-d6 中）を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｃ１２Ｒ 1:66） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:66） (72)発明者 小日向 君江 埼玉県和光市広沢２番１号 理化学研究所 内 (72)発明者 新井 好史 東京都豊島区高田３−24−１ 大正製薬株 式会社内
Claims (5)
- 【請求項１】 下記の式（１）で表されるペプチドRK-F
1010。 【化１】 - 【請求項２】 培地中に、ペプチドRK-F1010を産生する
アスペルギルス属に属する糸状菌95F-1 を培養し、当該
培養物からペプチドRK-F1010を分離・採取することを特
徴とする、ペプチドRK-F1010の製造方法。 - 【請求項３】 ペプチドRK-F1010を有効成分とする細胞
周期阻害剤。 - 【請求項４】 ペプチドRK-F1010を有効成分とする抗腫
瘍剤。 - 【請求項５】 ペプチドRK-F1010を産生するアスペルギ
ルス属に属する糸状菌アスペルギルス テレウス95F-1
株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16740196A JP3807784B2 (ja) | 1996-06-27 | 1996-06-27 | 新規ペプチド、その製法、それを含有する細胞周期阻害剤 |
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|---|---|---|---|
| JP16740196A JP3807784B2 (ja) | 1996-06-27 | 1996-06-27 | 新規ペプチド、その製法、それを含有する細胞周期阻害剤 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1017593A true JPH1017593A (ja) | 1998-01-20 |
| JP3807784B2 JP3807784B2 (ja) | 2006-08-09 |
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|---|---|---|---|
| JP16740196A Expired - Fee Related JP3807784B2 (ja) | 1996-06-27 | 1996-06-27 | 新規ペプチド、その製法、それを含有する細胞周期阻害剤 |
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| JP (1) | JP3807784B2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003045982A1 (en) * | 2001-11-29 | 2003-06-05 | The Kitasato Institute | Antibiotics fki-9739 and process for producing the same |
| WO2012059348A1 (en) | 2010-11-05 | 2012-05-10 | L'oreal | Fluid aqueous antisun composition based on a superabsorbent polymer and a crosslinked copolymer of methacrylic acid and of a c1-c4 alkyl acrylate |
| WO2012095786A2 (en) | 2011-01-11 | 2012-07-19 | L'oreal | Anti-uv cosmetic composition |
| WO2012105723A1 (en) | 2011-02-04 | 2012-08-09 | L'oreal | Composite pigment and method for preparation thereof |
| WO2012104161A1 (en) | 2011-02-04 | 2012-08-09 | L'oreal | Oil-in-water emulsion comprising a mixture of spherical and non-spherical screening particles of composite material |
| WO2012104160A2 (en) | 2011-02-04 | 2012-08-09 | L'oreal | Oil-in-water emulsion containing screening particles of composite material, non-spherical non-screening particles and at least one polar oil |
| WO2013011094A2 (en) | 2011-07-21 | 2013-01-24 | L'oreal | Cosmetic and/or dermatological composition containing a merocyanine derivative comprising specific polar groups consisting of hydroxyl- and ether-functionalities |
| US11266584B2 (en) | 2012-07-13 | 2022-03-08 | L'oreal | Cosmetic composition comprising composite sunscreen particles |
| US11523976B2 (en) | 2012-07-13 | 2022-12-13 | L'oreal | Composite pigment and method for preparing the same |
-
1996
- 1996-06-27 JP JP16740196A patent/JP3807784B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
| WO2003045982A1 (en) * | 2001-11-29 | 2003-06-05 | The Kitasato Institute | Antibiotics fki-9739 and process for producing the same |
| WO2012059348A1 (en) | 2010-11-05 | 2012-05-10 | L'oreal | Fluid aqueous antisun composition based on a superabsorbent polymer and a crosslinked copolymer of methacrylic acid and of a c1-c4 alkyl acrylate |
| WO2012095786A2 (en) | 2011-01-11 | 2012-07-19 | L'oreal | Anti-uv cosmetic composition |
| WO2012105723A1 (en) | 2011-02-04 | 2012-08-09 | L'oreal | Composite pigment and method for preparation thereof |
| WO2012104161A1 (en) | 2011-02-04 | 2012-08-09 | L'oreal | Oil-in-water emulsion comprising a mixture of spherical and non-spherical screening particles of composite material |
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