【０００８】
【実施例】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【実施例１】
１細胞分離器の作製
容器寸法４１×４１×１８ｍｍで液体流出口と液体流入口を対角線上にもつポリカーボネート製容器の入口側に平均繊維径１２μｍのポリエステル不織布２５枚を、出口側に平均繊維径２．３μｍのポリエステル不織布１２枚を充填した。なお、本フィルターの充填密度は０．２ｇ／ｃｍ３ であった。
また、このフィルターに血小板通過性を付与する目的で、親水性ポリマーのコーティングを行った。即ち、ヒドロキシエチルメタクリレート・ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体の１％エタノール溶液を該フィルターの液体流入口から通液した後、窒素ガスを通して乾燥させた。
２細胞分離操作
１で作製した細胞分離器に末梢全血５０ｍｌを液体流入口から落差（流速約５ｍｌ／分）により通液した後、フィルター内に残存する赤血球、血小板を洗流する目的で生理食塩水３０ｍｌを通液した。その後、３．５％ポリビニルピロリドン（平均分子量３６万）水溶液３０ｍｌを液体流出口からポンプを用いて１００ｍｌ／分で通液し、液体流入口から細胞を回収した。なお、本回収液の粘度は２０．３ｍＰａ・ｓであった。本細胞分離操作での白血球回収率、赤血球除去率、血小板除去率はそれぞれ７５％、９９％、９８％であった。なお、回収率、除去率の算出方法は以下のとおりである。
回収率（％）＝１００×（分離後細胞数／分離前細胞数）
除去率（％）＝１００−１００×（分離後細胞数／分離前細胞数）[0008]
[Example]
The present invention will be described in more detail below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
Example 1
Preparation of a single- cell separator: A polycarbonate container measuring 41 × 41 × 18 mm with a liquid inlet and outlet diagonally aligned was packed with 25 sheets of polyester nonwoven fabric with an average fiber diameter of 12 μm on the inlet side and 12 sheets of polyester nonwoven fabric with an average fiber diameter of 2.3 μm on the outlet side. The packing density of this filter was 0.2 g/ cm3 .
To allow platelets to pass through the filter, the filter was coated with a hydrophilic polymer. A 1% ethanol solution of hydroxyethyl methacrylate-dimethylaminoethyl methacrylate copolymer was passed through the filter's liquid inlet, and then the filter was dried by passing nitrogen gas through it.
2 cell separation procedure
50 ml of peripheral whole blood was passed through the cell separator prepared in 1 via the liquid inlet at a flow rate of approximately 5 ml/min. Then, 30 ml of saline was passed through the filter to wash out any remaining red blood cells and platelets. Subsequently, 30 ml of a 3.5% aqueous solution of polyvinylpyrrolidone (average molecular weight 360,000) was pumped through the liquid outlet at 100 ml/min, and cells were recovered from the liquid inlet. The viscosity of this recovered solution was 20.3 mPa·s. The white blood cell recovery rate, red blood cell removal rate, and platelet removal rate in this cell separation procedure were 75%, 99%, and 98%, respectively. The recovery rate and removal rate were calculated as follows:
Recovery rate (%) = 100 × (number of cells after separation/number of cells before separation)
Removal rate (%) = 100-100 x (number of cells after separation/number of cells before separation)
【００１２】
【実施例５】
１細胞分離器の作製
容器寸法４１×４１×１８ｍｍで液体流出口と液体流入口を対角線上にもつポリカーボネート製容器の入口側に平均繊維径１２μｍのポリエステル不織布１２枚を、出口側に平均繊維径２．３μｍのマウス抗ヒトＣＤ３４モノクローナル抗体固定ポリスチレン不織布２５枚を充填した。本フィルターの充填密度は０．２ｇ／ｃｍ３ であった。
なお、マウス抗ヒトＣＤ３４モノクローナル抗体のポリスチレンへの固定は特開平２−２６１８３３号公報で提案されている公知のハロアセトアミド法にて行った。
２細胞分離操作
１で作製した細胞分離器に臍帯全血５０ｍｌを液体流入口から落差（流速約５ｍｌ／分）で通液した後、フィルター内に残存する赤血球、血小板、ＣＤ３４陰性細胞を洗流する目的で生理食塩水３０ｍｌを通液した。その後、市販の凍結保存剤（極東製薬製「ＣＰ−１」）に同凍結保存剤の使用説明書に従い、２５％ヒト血清アルブミン溶液を添加したもの（１２％ヒドロキシエチルデンプン、１０％ジメチルスルホキシド、８％ヒト血清アルブミン）を液体流出口からポンプを用いて１００ｍｌ／分で通液し、液体流入口から細胞を回収した。なお、本回収液の粘度は１９．０ｍＰａ・ｓであった。本細胞分離操作でのＣＤ３４陽性細胞回収率、ＣＤ３４陽性細胞純度、赤血球除去率、血小板除去率はそれぞれ８０％、９３％、９８％、９８％であった。なお、本回収液で回収された細胞は前述の凍結保存剤に添付されていたプロトコールにより凍結保存が可能であった。[0012]
Example 5
Preparation of a cell separator: A polycarbonate vessel measuring 41 x 41 x 18 mm with a liquid inlet and outlet diagonally aligned was packed with 12 sheets of polyester nonwoven fabric with an average fiber diameter of 12 μm on the inlet side and 25 sheets of mouse anti-human CD34 monoclonal antibody-immobilized polystyrene nonwoven fabric with an average fiber diameter of 2.3 μm on the outlet side. The packing density of this filter was 0.2 g/ cm3 .
The mouse anti-human CD34 monoclonal antibody was immobilized on polystyrene by the known haloacetamide method proposed in Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-261833.
2 cell separation procedure
50 ml of umbilical cord whole blood was passed through the cell separator prepared in 1 at a flow rate of approximately 5 ml/min from the liquid inlet, followed by 30 ml of saline to wash away remaining red blood cells, platelets, and CD34-negative cells. Subsequently, a commercially available cryopreservative (Kyokuto Pharmaceutical's "CP-1") containing 25% human serum albumin solution (12% hydroxyethyl starch, 10% dimethyl sulfoxide, 8% human serum albumin) was pumped through the liquid outlet at 100 ml/min, and cells were recovered from the liquid inlet. The viscosity of the recovered solution was 19.0 mPa·s. The CD34-positive cell recovery rate, CD34-positive cell purity, red blood cell removal rate, and platelet removal rate in this cell separation procedure were 80%, 93%, 98%, and 98%, respectively. The cells recovered with this recovery solution could be cryopreserved according to the protocol attached to the aforementioned cryopreservation agent.