JPH10201470A5 - - Google Patents

Description

【０００８】
【実施例】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【実施例１】
１細胞分離器の作製
容器寸法４１×４１×１８ｍｍで液体流出口と液体流入口を対角線上にもつポリカーボネート製容器の入口側に平均繊維径１２μｍのポリエステル不織布２５枚を、出口側に平均繊維径２．３μｍのポリエステル不織布１２枚を充填した。なお、本フィルターの充填密度は０．２ｇ／ｃｍ^３ であった。
また、このフィルターに血小板通過性を付与する目的で、親水性ポリマーのコーティングを行った。即ち、ヒドロキシエチルメタクリレート・ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体の１％エタノール溶液を該フィルターの液体流入口から通液した後、窒素ガスを通して乾燥させた。
２細胞分離操作
１で作製した細胞分離器に末梢全血５０ｍｌを液体流入口から落差（流速約５ｍｌ／分）により通液した後、フィルター内に残存する赤血球、血小板を洗流する目的で生理食塩水３０ｍｌを通液した。その後、３．５％ポリビニルピロリドン（平均分子量３６万）水溶液３０ｍｌを液体流出口からポンプを用いて１００ｍｌ／分で通液し、液体流入口から細胞を回収した。なお、本回収液の粘度は２０．３ｍＰａ・ｓであった。本細胞分離操作での白血球回収率、赤血球除去率、血小板除去率はそれぞれ７５％、９９％、９８％であった。なお、回収率、除去率の算出方法は以下のとおりである。
回収率（％）＝１００×（分離後細胞数／分離前細胞数）
除去率（％）＝１００−１００×（分離後細胞数／分離前細胞数）

【００１２】
【実施例５】
１細胞分離器の作製
容器寸法４１×４１×１８ｍｍで液体流出口と液体流入口を対角線上にもつポリカーボネート製容器の入口側に平均繊維径１２μｍのポリエステル不織布１２枚を、出口側に平均繊維径２．３μｍのマウス抗ヒトＣＤ３４モノクローナル抗体固定ポリスチレン不織布２５枚を充填した。本フィルターの充填密度は０．２ｇ／ｃｍ^３ であった。
なお、マウス抗ヒトＣＤ３４モノクローナル抗体のポリスチレンへの固定は特開平２−２６１８３３号公報で提案されている公知のハロアセトアミド法にて行った。
２細胞分離操作
１で作製した細胞分離器に臍帯全血５０ｍｌを液体流入口から落差（流速約５ｍｌ／分）で通液した後、フィルター内に残存する赤血球、血小板、ＣＤ３４陰性細胞を洗流する目的で生理食塩水３０ｍｌを通液した。その後、市販の凍結保存剤（極東製薬製「ＣＰ−１」）に同凍結保存剤の使用説明書に従い、２５％ヒト血清アルブミン溶液を添加したもの（１２％ヒドロキシエチルデンプン、１０％ジメチルスルホキシド、８％ヒト血清アルブミン）を液体流出口からポンプを用いて１００ｍｌ／分で通液し、液体流入口から細胞を回収した。なお、本回収液の粘度は１９．０ｍＰａ・ｓであった。本細胞分離操作でのＣＤ３４陽性細胞回収率、ＣＤ３４陽性細胞純度、赤血球除去率、血小板除去率はそれぞれ８０％、９３％、９８％、９８％であった。なお、本回収液で回収された細胞は前述の凍結保存剤に添付されていたプロトコールにより凍結保存が可能であった。