JPH10201489A

JPH10201489A - ｈＲＡＤ５４

Info

Publication number: JPH10201489A
Application number: JP9351919A
Authority: JP
Inventors: Carlo M Croce; カルロ・エム・クロース; Richard A Fishel; リチャード・エイ、・フィシェル; Debora Rasio; デボラ・ラシオ; David J Robbins; デイビッド・ジェイ・ロビンス
Original assignee: Thomas Jefferson University; SmithKline Beecham Corp
Current assignee: Thomas Jefferson University; SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1996-11-13
Filing date: 1997-11-13
Publication date: 1998-08-04
Also published as: EP0844305A3; EP0844305A2

Abstract

(57)【要約】【課題】癌に関与することが示唆されるＲＡＤ５４フ
ァミリーのポリヌクレオチドおよびポリペプチドの同定
および特徴付けが望まれている。【解決手段】本発明は、サンプルをｈＲＡＤ５４をコ
ードするＤＮＡの変異について解析するために用いるＤ
ＮＡ配列であって、サンプルをｈＲＡＤ５４をコードす
るＤＮＡの変異について解析するために用いるＤＮＡ配
列であって、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８
および９からなる少なくとも１５から３０以下の連続す
る塩基のＤＮＡ配列を提供するものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、一部には、新規同
定されたポリヌクレオチドおよびポリペプチド；ポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドの変種および誘導体、お
よびポリヌクレオチドおよびポリペプチド、およびそれ
らの変種および誘導体の製造方法；ポリペプチドのアゴ
ニストおよびアンタゴニスト；ならびにポリヌクレオチ
ド、ポリペプチド、変種、誘導体、アゴニストおよびア
ンタゴニストの使用に関する。詳細には、これらおよび
他の点において本発明は、以下、本明細書で「ｈＲＡＤ
５４」と称するｈＲＡＤ５４ファミリーの新規なポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】変異率を高めるＤＮＡ修復機能欠損は、
癌の進行において見られる多重変異を説明するものと考
えられている。最近、ヒトＤＮＡ誤対合修復遺伝子ｈＭ
ＳＨ２とｈＭＬＨ１の変異が、遺伝性非ポリポーシス結
腸癌（ＨＮＰＣＣ）患者の大多数の原因となっているこ
とが示された。変換または欠損修復機能により変異率を
高めることとなる他のメカニズムは、多数の腫瘍にみら
れる染色体の欠失または転移である。これらの染色体転
移のメカニズムは、有糸分裂の接合不全に先行する染色
体のペアリング障害、組換え異常修復過程または染色体
の完全性を正常に維持する細胞サイクルチェックポイン
ト機能の欠損の結果であると提示されている。下等真核
生物の研究から、ＲＡＤ５４遺伝子の変異は、有糸分裂
の接合不全に先行する染色体のペアリング障害、組換え
異常修復過程または染色体の完全性を正常に維持する細
胞サイクルチェックポイント機能の欠損の結果であると
提示されている。酵母ＲＡＤ５４の組換え修復における
役割は、クロマチン領域に接近し、組換えを可能にする
ものと考えられている。ＲＡＤ５４遺伝子のヒト相同
体、ＤＮＡへリカーゼが仮定されている。他のヒトＤＮ
Ａヘリカーゼ遺伝子における変異は、色素性乾皮症およ
びブルーム症候群ならびにヴェルナー症候群（早老）お
よびα−サラセミア症候群を伴うＸリンクした精神遅滞
（X-linked Mental Retardation withα-thalassemia S
yndrome：ＡＴＲ−Ｘ）のごとき癌−プローン症候群（c
ancer-prone syndromes）に関与することが示されてい
る。このことは、ヒトＲＡＤ５４遺伝子は、対立遺伝子
の不均衡を示す腫瘍の修飾遺伝子の候補となることが示
される。

【０００３】ここにファイリングされる遺伝子、ヒトＲ
ＡＤ５４遺伝子の相同体は、染色体のｌｐ３２領域に位
置づけされる。染色体1の短腕は内在する欠失の複合パ
ターンを示し、癌サプレッサー遺伝子の存在が正常細胞
の維持に必要であることが示唆される。染色体バンドｌ
ｐ３２は、乳癌における染色体1の欠失の４つの最小な
領域の一つであることが同定されている。髄様甲状腺癌
および褐色細胞種のごとき神経堤に由来する腫瘍および
髄膜腫は、ｌｐ３２−１ｐｔｅｒで遺伝物質の欠損（異
型性接合の欠損、ＬＯＨ）を示す。これは、前記のｈＲ
ＡＤ５４遺伝子がｌｐ３２における対立遺伝子の不均衡
を示す腫瘍における候補遺伝子となりうることを示唆し
ている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】これらの目的および他
の目的に対して、とりわけ、図１３示すアミノ酸配列と
酵母ＲＡＤ５４蛋白質のような既知アミノ酸配列との間
の相同性により、新規ｈＲＡＤ５４として同定されたポ
リペプチドを提供することが本発明の目的である。さら
に配列番号１−９のポリヌクレオチドを提供することも
本発明の目的である。特に好ましい本発明の具体例は、
配列番号１０に示す配列のｈＲＡＤをコードする領域を
含んでなるポリヌクレオチドである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明のこの態様によれ
ば、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよびフラグメ
ントを包含するｈＲＡＤ５４をコードする単離核酸分子
が提供され、本発明のこの態様のさらなる具体例におい
て、生物学的、診断上、臨床上または治療上有用な、変
種、アナログおよび誘導体のフラグメントを含め、それ
らの変種、アナログまたは誘導体が提供される。本発明
のこの態様の特に好ましい具体例には、天然のｈＲＡＤ
５４の対立遺伝子変種がある。ヒトポリペプチド、特に
ｈＲＡＤ５４ポリペプチドを提供することも本発明の目
的であり、それらは治療目的、例えば色素性乾皮症およ
びブルーム症候群、ヴェルナー症候群（早老）およびα
−サラセミア症候群を伴うＸリンクした精神遅滞（X-li
nked Mental Retardation withα-thalassemia Syndrom
e：ＡＴＲ−Ｘ）のごとき癌−プローン症候群（cancer-
prone syndromes）；ならびにとりわけ乳癌のごとき癌
の処置に使うことができる。本発明のこの態様によれ
ば、本明細書でｈＲＡＤ５４と称するヒト起源の新規ポ
リペプチド、同様に生物学的、診断上、または治療上有
用なそのフラグメント、変種および誘導体、該フラグメ
ントの変種および誘導体、および上記のアナログが提供
される。本発明のこの態様の特に好ましい具体例には、
ｈＲＡＤ５４遺伝子の天然の対立遺伝子によりコードさ
れるｈＲＡＤ５４の変種がある。

【０００６】本発明のもう一つの態様によれば、本発明
の酵素に結合してその活性を活性化または阻害する化合
物についてスクリーニングする方法が提供される。本発
明のもう一つの目的は、上記したポリペプチド、ポリペ
プチドフラグメント、変種、および誘導体、該変種およ
び誘導体のフラグメント、ならびに上記のアナログの製
造方法を提供することである。本発明のこの態様の好ま
しい具体例において、宿主でのｈＲＡＤ５４の発現のた
めの条件下で、外来性のｈＲＡＤ５４をコードするポリ
ヌクレオチドを細胞中に発現可能な状態で組み込んだ宿
主細胞を培養し；ｈＲＡＤ５４ポリペプチドを発現さ
せ；ついで、発現したポリペプチドを回収することから
なる上記のｈＲＡＤ５４ポリペプチドの製造方法が提供
される。本発明のもう一つ別の目的によれば、とりわ
け、研究的、生物学的、臨床的および治療的な目的に、
前記したポリペプチドおよびポリヌクレオチドを利用す
る生成物、組成物、プロセスおよび方法が提供される。

【０００７】本発明のこの態様のある好ましい具体例に
よれば、とりわけ、ｈＲＡＤ５４ポリペプチドまたはｈ
ＲＡＤ５４をコードするｍＲＮＡを測定することによ
り、細胞でのｈＲＡＤ５４発現を評価し；細胞を本明細
書に開示のｈＲＡＤ５４ポリペプチドまたはポリヌクレ
オチドに曝露することにより、インビトロ、エクスビボ
またはインビボで色素性乾皮症およびブルーム症候群、
ヴェルナー症候群（早老）およびα−サラセミア症候群
を伴うＸリンクした精神遅滞（X-linked MentalRetarda
tion withα-thalassemia Syndrome：ＡＴＲ−Ｘ）のご
とき癌−プローン症候群（cancer-prone syndromes）；
ならびにとりわけ乳癌のごとき癌を治療し；ｈＲＡＤ５
４遺伝子における欠失などの遺伝的変異および異常を分
析し；および、ｈＲＡＤ５４ポリペプチドまたはポリ
ヌクレオチドを生体に投与し、ｈＲＡＤ５４機能を改善
し、あるいはｈＲＡＤ５４機能不全を治療する、生成
物、組成物および方法が提供される。

【０００８】本発明のさらにもう一つ別の具体例によれ
ば、ｈＲＡＤ５４の過剰発現に関連した症状の治療のた
めのかかる阻害化合物の使用方法が提供される。本発明
のさらにもう一つ別の態様によれば、本発明のｈＲＡＤ
５４の少なくとも一つのドメインの同種アミノ酸置換を
有する、フラグメント、共通フラグメントおよび／また
は配列である、非天然の合成、単離および／または組換
えｈＲＡＤ５４ポリペプチドが提供され、該ポリペプチ
ドはｈＲＡＤ５４のレセプター、リガンド、基質への結
合を定性的または定量的に変調することもできる。本発
明のさらにもう一つ別の態様によれば、酵素に結合する
こと、または酵素結合を変調させることによって、ｈＲ
ＡＤ５４機能の潜在的モジュレーターとして有用であり
うる合成または組換えｈＲＡＤ５４ポリペプチド、その
同種置換および誘導体、それに対する抗体、抗イディオ
タイプ抗体、組成物ならびに方法が提供され、その考え
られる生物学的特性のため、それらは診断、治療および
／または研究用途に使用することができる。

【０００９】本発明のさらにもう一つ別の目的は、種々
のｈＲＡＤ５４またはそれらのフラグメントを阻害また
は模倣するように設計された、合成、単離または組換え
ポリペプチドを提供することである。本発明のこの態様
または他の態様の好ましい具体例によれば、ｈＲＡＤ５
４配列にハイブリダイズするプローブが提供される。本
発明のこの態様のさらなる好ましい具体例において、ｈ
ＲＡＤ５４ポリペプチドに対する抗体が提供される。こ
の点における特に好ましい具体例において、抗体はｈＲ
ＡＤ５４に対して高度に選択的である。本発明のもう一
つ別の態様によれば、ｈＲＡＤ５４アゴニストが提供さ
れる。好ましいアゴニストには、ｈＲＡＤ５４酵素を模
倣し、ｈＲＡＤ５４結合分子またはレセプター分子に結
合し、ｈＲＡＤ５４誘発応答を惹起または増大させる分
子がある。また、好ましいアゴニストには、ｈＲＡＤ５
４またはｈＲＡＤ５４ポリペプチドと、あるいはｈＲＡ
Ｄ５４活性の他のモジュレーターと相互作用し、そのこ
とによりｈＲＡＤ５４の一つの効果またはｈＲＡＤ５４
の１つよりも多い効果を亢進するか、または増強する分
子もある。

【００１０】本発明のさらにもう一つ別の態様によれ
ば、ｈＲＡＤ５４アンタゴニストが提供される。好まし
いアンタゴニストには、ｈＲＡＤ５４酵素を模倣してｈ
ＲＡＤ５４レセプターまたは結合分子に結合するが、一
のｈＲＡＤ５４誘発応答または一より多いｈＲＡＤ５４
誘発応答を惹起しないものがある。また、好ましいアン
タゴニストには、ｈＲＡＤ５４に結合するか、あるいは
ｈＲＡＤ５４と相互作用して、ｈＲＡＤ５４の一つの効
果またはｈＲＡＤ５４の一より多い効果を阻害する分
子、あるいはｈＲＡＤ５４の発現を阻害する分子があ
る。本発明のさらなる態様において、インビトロで細胞
に、エクスビボで細胞に、そしてインビボで細胞に、あ
るいは多細胞生物に投与するための、ｈＲＡＤ５４ポリ
ヌクレオチドまたはｈＲＡＤ５４ポリペプチドからなる
組成物が提供される。本発明のこの態様の特に好ましい
具体例において、組成物は、疾患の治療に関する宿主生
物中でｈＲＡＤ５４ポリペプチドを発現させるためのｈ
ＲＡＤ５４ポリヌクレオチドを含んでなる。この点にお
いて、ｈＲＡＤ５４の異常内因性活性に付随する機能不
全の治療に関するヒト患者における発現が特に好まし
い。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下に例示する説明は、本明細
書、特に実施例において頻繁に用いられるある単語の理
解を容易にするために提供されるものである。説明は簡
便性のために提供されるのであって、本発明を限定する
ものではない。定義ＤＮＡの「消化」は、ＤＮＡのある配列でのみ作用する
制限酵素などの酵素を用いるＤＮＡの触媒的分裂をいう
が、これに限定されるものではない。本明細書にいう種
々の制限酵素は市販されており、その反応条件、補因子
および使用についての他の要件は知られており、当業者
にとって慣用的である。解析を目的とする場合、典型的
には、１μｇのプラスミドまたはＤＮＡフラグメント
を、約２０μｌの反応緩衝液中、約２ユニットの酵素で
消化する。プラスミド構築のためにＤＮＡフラグメント
を単離することを目的とする場合、典型的には５ないし
５０μｇのＤＮＡを、比例して大きくした容量中、２０
ないし２５０ユニットの酵素で消化する。

【００１２】個々の制限酵素についての適当な緩衝液お
よび基質の量は、以下に述べるような標準的実験室マニ
ュアルに記載されており、それらは供給者によって詳説
されている。３７℃で約１時間のインキュベーション時
間が通常使用されるが、条件は、標準的方法、供給者の
指示および反応の詳細な条件に従って変えることができ
る。消化後、当業者に慣用的な周知方法を用いて、反応
物を解析し、フラグメントをアガロースまたはポリアク
リルアミドゲルを介する電気泳動によって精製してもよ
い。「遺伝的因子」は、一般に、ポリペプチドをコード
する領域あるいは複製、転写もしくは翻訳または宿主細
胞におけるポリペプチドの発現に重要な他のプロセスを
調節する領域を含んでなるポリヌクレオチド、あるいは
ポリペプチドをコードする領域、およびそれに作動可能
に連結された、発現を調節する領域の両方を含んでなる
ポリヌクレオチドを意味する。遺伝的因子は、エピソー
ム因子として、即ち、宿主細胞ゲノムとは物理的に独立
した分子として複製されるベクター内に取り込まれてい
てもよい。それらは、真核細胞において、メトトレキセ
ート選択によるトランスフェクトされたＤＮＡの増幅の
間に生じるミニ染色体のようなものの中に取り込まれて
いてもよい。遺伝的因子は、宿主細胞ゲノム内に取り込
まれていてもよいが、それは天然の状態ではなく、むし
ろ、単離、クローニングおよび、とりわけ精製ＤＮＡの
形態の、またはベクターでの宿主細胞への導入などの操
作の後のものである。

【００１３】「単離」とは、「人工的」にその天然状態
から変えられること、すなわち、天然物の場合、その本
来的な環境から変化または除去されること、あるいはそ
の両方を意味する。例えば、その自然状態にある生存動
物に自然に存在する天然のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドは「単離」されていないが、その天然状態で共
存物質から分離されている同じポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、本明細書で用いる用語としての「単
離」である。例えば、ポリヌクレオチドに関しては、単
離という語は、それが天然に存在している染色体および
細胞から分離されていることを意味する。単離の際に、
あるいは単離後に、かかるポリヌクレオチドを、例え
ば、変異を誘発し、融合タンパク質を形成するために、
および宿主中での増殖または発現のために、ＤＮＡなど
の他のポリヌクレオチドに結合させることができる。単
独で、またはベクターなどの他のポリヌクレオチドと結
合した単離ポリヌクレオチドを、培養中または完全生物
における宿主細胞に導入することができる。培養中また
は完全生物における宿主細胞へ導入される場合、かかる
ＤＮＡは、その語を本明細書において用いる場合、やは
り単離されている。というのも、それらは天然の形態で
なく、あるいは自然環境にあるものではないからであ
る。同様に、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、
培地などの組成物、処方、ポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドの、例えば細胞への導入のための溶液、例え
ば、天然に存在しない組成物であり、その中に本明細書
で用いる場合の用語としての意味としての単離ポリヌク
レオチドまたはポリペプチドを保持する、化学反応また
は酵素反応のための組成物または溶液中に存在してもよ
い。

【００１４】「ライゲーション」とは、ほとんどの場
合、２本鎖ＤＮＡである２個またはそれ以上のポリヌク
レオチドの間でホスホジエステル結合を形成するプロセ
スをいう。ライゲーションの方法は当該分野においてよ
く知られており、ライゲーションについてのプロトコル
は標準的実験室マニュアル、および例えば、Sambrook
ら、MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL，第２
版；Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spri
ng Harbor，New York，(1989) （以下、Sambrookらとい
う）などの文献に記載されている。「オリゴヌクレオチ
ド」とは比較的短いポリヌクレオチドをいう。しばし
ば、その用語は１本鎖デオキシリボヌクレオチドをいう
が、同様に、とりわけ、１本鎖または２本鎖リボヌクレ
オチド、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッドおよび２本鎖ＤＮ
Ａをいうこともできる。１本鎖ＤＮＡプローブオリゴヌ
クレオチドなどのオリゴヌクレオチドは、自動式オリゴ
ヌクレオチド合成機の使用のごとき、化学的方法により
合成されることがよくある。しかしながら、オリゴヌク
レオチドは、インビトロ組換えＤＮＡ媒介法、細胞およ
び生物におけるＤＮＡ発現による方法を含め、他の種々
の方法により製造することができる。

【００１５】最初、化学的に合成されたＤＮＡは、典型
的には、５’リン酸を欠く状態で得られる。かかるオリ
ゴヌクレオチドの５’末端は、組換えＤＮＡ分子を形成
するために典型的に用いられるＤＮＡリガーゼを使用す
るライゲーション反応によるホスホジエステル結合形成
の基質ではない。かかるオリゴヌクレオチドのライゲー
ションが望ましい場合、キナーゼおよびＡＴＰを用いる
ような標準的方法によりリン酸を付加することができ
る。化学的に合成されたオリゴヌクレオチドの３’末端
は、一般に、遊離のヒドロキシル基を有し、Ｔ４ＤＮＡ
リガーゼなどのリガーゼの存在下、別のオリゴヌクレオ
チドなどの、別のポリヌクレオチドの５’リン酸とホス
ホジエステル結合を容易に形成するであろう。よく知ら
れているように、要すれば、ライゲーションの前に他の
ポリヌクレオチド（複数でも可）の５’リン酸を除去す
ることによって、この反応を選択的に阻害できる。

【００１６】「プラスミド」は、宿主細胞の染色体の一
部ではなく、安定して受け継がれる遺伝的因子である。
プラスミドはＤＮＡまたはＲＮＡからなり、直鎖または
環状であってもよい。プラスミドは細胞複製の間にその
複製および安定な遺伝性を確実にする分子をコードして
おり、医学的、農学的、および環境学的に非常に重要な
産物をコードするかもしれない。例えば、プラスミドは
病原菌の毒性を非常に増加させる毒素をコードする。プ
ラスミドはまた抗生物質に対する耐性を与える遺伝子を
コードすることもできる。プラスミドは、組換え遺伝子
をクローン化および発現するために用いられるベクター
として分子生物学において広く使用されている。プラス
ミドは、一般に、当業者が使いなれた標準的な命名操作
に従い、本明細書では、小文字「ｐ」を前置し、および
／またはつづいて大文字および／または数字で表す。本
明細書に開示されている出発プラスミドは、市販され、
公的に入手可能であるか、または周知の公開された方法
を慣用的に適用することにより利用可能なプラスミドか
ら構築され得る。本発明に従い使用され得る多くのプラ
スミドおよび他のクローニングおよび発現ベクターは、
よく知られており、当業者に容易に利用され得る。さら
に、当業者であれば、本発明での使用に適したかなり多
数の他のプラスミドでも容易に構築し得る。本発明にお
ける、かかるプラスミドならびに他のベクターの特性、
構築および用途は、当業者であれば本明細書から容易に
理解できるはずである。

【００１７】「ポリヌクレオチド（複数でも可）」は、
一般に、ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボ
ヌクレオチドを包含し、それらは非修飾ＲＮＡもしくは
ＤＮＡまたは修飾ＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る。す
なわち、例えば、本明細書で使用されているポリヌクレ
オチドは、とりわけ、１本および２本鎖ＤＮＡ、１本お
よび２本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、１本または２本
鎖ＲＮＡ、および１本および２本鎖領域の混合物である
ＲＮＡ、１本鎖またはより典型的には２本鎖、または１
本および２本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡおよびＲ
ＮＡを含むハイブリッド分子をいう。加えて、本明細書
で使用されているポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤ
ＮＡまたはＲＮＡおよびＤＮＡの両方からなる３本鎖領
域をいう。かかる領域の鎖は同じ分子または異なる分子
に由来していてもよい。これらの領域は１個またはそれ
以上の分子の全てを含み得るが、より典型的には幾つか
の分子の一領域のみを含み得る。３重らせん領域の分子
の一つは、オリゴヌクレオチドであることがしばしばで
ある。本明細書で使用されている、「ポリヌクレオチ
ド」の語は、１個またはそれ以上の修飾塩基を含有する
上記のＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。すなわち、バッ
クボーンが安定性またはその他の理由で修飾されたＤＮ
ＡまたはＲＮＡも、本明細書で意図するところの「ポリ
ヌクレオチド」である。さらに、イノシンなどの普通で
ない塩基、またはトリチル化塩基などの修飾塩基を含む
ＤＮＡまたはＲＮＡは、２例しか挙げていないが、本明
細書で使用するところのポリヌクレオチドである。当業
者に周知の多くの有用な目的に役立つ非常に多様な修飾
がＤＮＡまたはＲＮＡに対してなされていることは明ら
かであろう。ここで使用されているポリヌクレオチドの
語は、ポリヌクレオチドのそうした化学的、酵素的また
は代謝的に修飾された形態、ならびにウイルスおよび特
に単純型および複雑型細胞を含む細胞に特有のＤＮＡお
よびＲＮＡの化学的形態を包含する。

【００１８】本明細書で使用されている「ポリペプチ
ド」は、下記のポリペプチド全てを包含する。ポリペプ
チドの基本的構造はよく知られており、当該分野におけ
る多数のテキストブックおよび他の刊行物に既に記載さ
れている。この点からすると、この語は、本明細書中、
ペプチド結合により直鎖で互いに結合された２個または
それ以上のアミノ酸からなるペプチドまたはタンパク質
をいうものとして使用されている。本明細書で使用され
ている、この語はまた、一般に当該分野で、例えばペプ
チド、オリゴペプチドおよびオリゴマーと称されている
短鎖、および一般に当該分野でタンパク質と称され、そ
の多くのタイプが存在している長鎖の両方を包含する。

【００１９】ポリペプチドは、２０天然アミノ酸として
一般に称される２０アミノ酸以外のアミノ酸を含むこと
が多く、末端アミノ酸を含む多くのアミノ酸は、所定の
ポリペプチドにおいて、自然プロセス、例えばプロセッ
シングおよび他の翻訳後修飾、または当該分野で公知の
化学的修飾技術により修飾されていてもよい。ポリペプ
チドにて自然に生じる一般的修飾でさえ、多すぎるため
ここで余すところ無く列挙することはできないが、それ
らは基本的なテキストおよび詳細な研究論文ならびに多
量の研究文献に詳述されており、当業者にはよく知られ
ている。本発明のポリペプチドに存在し得る既知修飾と
して、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシ
ル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有
結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結
合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイ
ノシトールの共有結合、交差結合、閉環、ジスルフィド
結合形成、脱メチル化、共有交差結合の形成、シスチン
の形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ
−カルボキシル化、糖鎖形成、ＧＰＩアンカー形成、ヒ
ドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、
酸化、タンパク質分解プロセッシング、リン酸化、プレ
ニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル
化などの、転移ＲＮＡ媒介のタンパク質へのアミノ酸付
加およびユビキチン化が挙げられるが、これに限定され
ない。かかる修飾は、当業者に周知であり、科学文献に
非常に詳細に記載されている。糖鎖形成、脂質結合、硫
酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、ヒ
ドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル化などの幾つかの
特に一般的な修飾が、PROTEINS-STRUCTURE AND MOLECUL
AR PROPERTIES、第２版、Ｔ.Ｅ.Ｃreighton，Ｗ.Ｈ.Ｆr
eeman and Ｃompany、ニューヨーク（１９９３）に記載
されている。この題目に関して、詳細な報文も入手可能
である。例えば、Ｗold,Ｆ.、POSTTRANSLATIONAL COVAL
ENT MODIFICATIONOF PROTEINS、「翻訳後タンパク質修
飾：展望および予想」、１−１２頁、Ｂ.Ｃ.Ｊohnson
編、アカデミック・プレス、ニューヨーク（１９８
３）；Ｓeifterら、Meth.Ｅnzymol. １８２：６２６−
６４６（１９９０）およびＲattanら、Ann.N.Y.Acad.Sc
i.，６６３：４８−６２（１９９２）を参照のこと。

【００２０】周知かつ前記にあるとおり、ポリペプチド
は必ずしも完全に線状とは限らない。例えば、ポリペプ
チドは、ユビキチン化の結果として分枝状であってもよ
く、一般に、自然プロセッシング事象および自然には起
こらない人的操作により得られる事象を含む、翻訳後事
象の結果として、分枝の有無にかかわらず、環状であっ
てもよい。環状、分枝および分枝環状ポリペプチドは、
非翻訳自然プロセスおよび、同様に完全な合成方法によ
っても合成され得る。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸
側鎖およびアミノまたはカルボキシル末端を含め、ポリ
ペプチドのあらゆる場所で起こり得る。事実、ポリペプ
チドでのアミノまたはカルボキシル基、あるいはそれら
両方の共有結合の修飾による遮断は、天然および合成ポ
リペプチドに共通しており、かかる修飾が、同様に本発
明のポリペプチドにあってもよい。例えば、プロセッシ
ングの前に、エシェリキア・コリ（Ｅ.coli）で生成さ
れたポリペプチドのアミノ末端残基は、ほとんど例外な
く、Ｎ−ホルミルメチオニンである。

【００２１】ポリペプチドに起こる修飾は、ポリペプチ
ドの形成の仕方と相関関係にあることがしばしばであ
る。例えば、宿主においてクローン化遺伝子を発現させ
ることにより生成されたポリペプチドの場合、修飾の性
質および程度の大部分は、宿主細胞翻訳後修飾能力およ
びポリペプチドアミノ酸配列に存在する修飾シグナルに
より決定される。例えば、よく知られているように、糖
鎖形成は、多くの場合、細菌宿主、例えばエシェリキア
・コリでは起こらない。従って、糖鎖形成が望ましい場
合、ポリペプチドを糖鎖形成性宿主、一般に真核細胞で
発現させるべきである。昆虫細胞は、しばしば、哺乳動
物と同じ翻訳後糖鎖形成を行う。この理由のため、昆虫
細胞発現系が、とりわけ、元来の糖鎖形成のパターンを
有する哺乳動物タンパク質を効率よく発現するために開
発された。同様の考え方が他の修飾にも適用される。

【００２２】同じタイプの修飾が、所定のポリペプチド
のいくつかの部位にて同じまたは様々な程度にて存在し
てもよいことが理解されよう。また、所定のポリペプチ
ドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。一般に、
本明細書にて用いるような、ポリペプチドなる語は、か
かる修飾のすべて、特に、宿主細胞にてポリヌクレオチ
ドを発現させることにより合成されるポリペプチドにて
存在する修飾を包含する。ポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドの「変種（複数でも可）」を、本明細書にて用
いる場合、それは、各々、対照標準のポリヌクレオチド
またはポリペプチドとは異なる、ポリヌクレオチドまた
はポリペプチドをいう。この意味における変種は、下記
およびこの開示のいずれかの部分においてより詳細に記
載されている。変種は、ヌクレオチド配列にて、別の対
照標準のポリヌクレオチドと異なるポリヌクレオチドを
包含する。一般に、相違は対照と変種のヌクレオチド配
列が全体的に極めて類似し、多くの領域において同一で
あるようなものに限られる。

【００２３】下記のごとく、変種のヌクレオチド配列の
変化はサイレントであってもよい。すなわち、その変化
は、ポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸を変
えなくてもよい。変化がこの型のサイレント変化に限定
される場合、変種は対照標準と同じアミノ酸配列を有す
るポリペプチドをコードするであろう。また、下記のご
とく、変種のヌクレオチド配列における変化が、対照標
準のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変化させてもよい。かかるヌクレオチ
ドの変化は、下記のごとく、対照標準の配列によりコー
ドされるポリペプチドにてアミノ酸置換、付加、欠失、
融合および切断をもたらすかもしれない。

【００２４】変種はまた、アミノ酸配列にて、別の対照
標準のポリペプチドと異なるポリペプチドを包含する。
一般に、相違は、対照標準と変種の配列が全体的に極め
て類似し、多くの領域において同一であるようなものに
限られる。変種および対照標準のポリペプチドは、アミ
ノ酸配列にて、１個またはそれ以上の置換、付加、欠
失、融合および切断により異なっていてもよく、それら
はいずれの組み合わせにて存在してもよい。

【００２５】本明細書にて用いる場合、「融合タンパク
質」は、２種の、しばしば、無関係の融合遺伝子または
そのフラグメントでコードされるタンパク質である。Ｅ
Ｐ-Ａ-０４６４５３３（対応カナダ国特許２０４５８
６９）は、もう一つ別のヒトタンパク質またはそれの一
部と共に免疫グロブリン分子の不変領域の種々の部分を
含んでなる融合タンパク質を開示する。多くの場合、融
合タンパク質の一部として免疫グロブリンＦｃ領域を用
いることが、治療および診断における使用について有利
であり、例えば、改良された薬物動態学的性質が得られ
る（ＥＰ-Ａ０２３２２６２）。他方、ある用途には、
融合タンパク質が発現され、検出され、次いで精製され
た後、Ｆｃ部分を検出できることが望ましい。したがっ
て、融合タンパク質の成分を、化学的または酵素的切断
しうる結合領域で連結させることが望ましい。これは、
Ｆｃ部分が治療および診断における用途に対する妨害物
であると判明した場合、例えば、融合タンパク質を免疫
化のための抗原として使用すべき場合である。例えば、
薬物の発見において、ｓｈＩＬ５-αなどのヒトタンパ
ク質を、ｈＩＬ-５のアンタゴニストを同定するための
高処理量のスクリーニングアッセイにて用いるためにＦ
ｃ部分と融合させる。D.Bennettら、Journal of Molecu
lar Recognition, 8：52−58（1995）およびK.Johanson
ら、TheJournal of Biological Chemistry，270（1
6）：9459−9471（1995）を参照のこと。

【００２６】かくして、本発明はまた、ｈＲＡＤ５４、
またはその部分、および、種々のサブクラスの免疫グロ
ブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の重鎖また
は軽鎖の不変領域の種々の部分を含んでなる遺伝子操作
された可溶性融合タンパク質にも関する。免疫グロブリ
ンとして好ましいのは、融合がヒンジ領域で起こる場合
の、ヒトＩｇＧ、特にＩｇＧ１の重鎖の不変部分であ
る。一つの具体例において、血餅形成因子Ｘａで開裂で
きる開裂配列を組み込むことによってＦｃ部分は簡単に
除去されうる。さらに、本発明は遺伝子操作によるこれ
らの融合タンパク質の製造方法、ならびに診断および治
療におけるそれらの使用に関する。本発明のさらなる態
様は、かかる融合タンパク質をコードするポリヌクレオ
チドにも関する。

【００２７】膜結合タンパク質は融合タンパク質の製造
において特に有用である。かかるタンパク質は、一般
に、３つの異なる構造領域：細胞外領域、トランスメン
ブラン領域および細胞質領域を有することで特徴付けら
れる。本発明は融合タンパク質の成分として１またはそ
れ以上のこれら領域を用いるものである。このような融
合タンパク質技術の例は、ＷＯ９４／２９４５８および
ＷＯ９４／２２９１４に見つけることができる。「結合
分子」（「反応分子」または「受容体構成因子」ともい
う。）は、本発明のポリペプチドに特異的に結合または
相互作用する、受容体を含む分子をいう。かかる結合分
子は本発明の一部である。結合分子はまた、本発明のポ
リペプチドに特異的に結合する抗体および抗体誘導試薬
などの非天然物であってもよい。

【００２８】当該分野に知られているごとく、２つのポ
リペプチドの間の「類似性」は、一のポリペプチドのア
ミノ酸配列およびその保存アミノ酸置換基を、別のポリ
ペプチドの配列と比較することにより決定する。さら
に、かかる配列の２本の鎖の間の対合の同一性によって
決定されるごとき、２つのポリペプチドまたは２つのポ
リヌクレオチド配列の間の配列の関連性の度合いを意味
する「同一性」も当該分野において知られている。同一
性および類似性は共に容易に計算できる（COMPUTATIONA
L MOLECULAR BIOLOGY，Lesk,A.M.編, Oxford Universit
y Press，New York（1988）；BIOCOMPUTING：INFORMATI
CS AND GENOME PROJECTS, Smith,D.W.編,Academic Pres
s, New York（1993）；COMPUTER ANALYSIS OF SEQUENCE
DATA，PART I，Griffin,A.M.およびGriffin,H.G.編，H
umana Press, New Jersey（1994）；SEQUENCE ANALYSIS
IN MOLECULAR BIOLOGY，von Heinje, G.,Academic Pre
ss（1987）；およびSEQUENCE ANALYSIS PRIMER，Gribsk
ov,M.およびDevereux,J.編, M Stockton Press，New Yo
rk（1991））。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプ
チド配列の間の同一性および類似性を測定するための多
くの方法が存在する一方、「同一性」および「類似性」
なる用語は当業者によく知られている（Carillo,H.およ
びLipton,D.、SIAM J.Applied Math. 48：1073（198
8））。２つの配列間の同一性または類似性を決定する
ために通常用いられる方法は、これに限定されないが、
GUIDE TO HUGE COMPUTERS，Martin J.Bishop編，Academ
ic Press，San Diego（1994）およびCarillo,H.および
Lipton,D.、SIAM J.Applied Math.48：1073（1988）に
開示されている方法を包含する。同一性を測定するため
の好ましい方法は、試験する２つの配列間に最大の対合
を与えるように設計される。同一性および類似性を測定
する方法はコンピュータープログラムに書き込まれてい
る。２つの配列間の同一性および類似性を決定する好ま
しいコンピュータープログラムの方法は、これに限定さ
れないが、ＧＣＧプログラム・パッケージ（Devereux,
J.ら、Nucleic Acids Research 12（1）：387（198
4）、BLASTP, BLASTNおよびFASTA（Atschul,S.F.ら、J.
Molec.Biol.，215：403（1990））を包含する。

【００２９】本発明は、とりわけ、以下にさらに詳細に
記載するような、新規ｈＲＡＤ５４ポリペプチドおよび
ポリヌクレオチドに関する。特に、本発明は、酵母ｈＲ
ＡＤ５４に対するアミノ酸配列相同性により関連付けら
れる、新規ｈＲＡＤ５４のポリペプチドおよびポリヌク
レオチドに関する。本発明は、特に、配列番号１−１０
に示すヌクレオチドおよびアミノ酸配列を有するｈＲＡ
Ｄ５４に関する。

【００３０】ポリヌクレオチド本発明の一つの態様によれば、図１３（配列番号１０）
の推定アミノ酸配列を有するｈＲＡＤ５４ポリペプチド
をコードする単離ポリヌクレオチドが提供される。本発
明のｈＲＡＤ５４は、ＤＮＡとＲＮＡへリカーゼのＳＮ
Ｆ２スーパーファミリーに属する。このファミリーのメ
ンバーは、ＤＮＡ複製、修復、遺伝子発現の様々な部分
に関連している。本発明のポリヌクレオチドは、ｍＲＮ
ＡのごときＲＮＡの形態であってもよく、あるいは、例
えばクローニングにより得られるか、または化学合成法
もしくはその組み合わせにより産生されるｃＤＮＡおよ
びゲノムＤＮＡを含め、ＤＮＡの形態であってもよい。
ＤＮＡは２本鎖または１本鎖であってもよい。１本鎖Ｄ
ＮＡはセンス鎖としても知られているコーディング鎖で
あってもよく、または、アンチセンス鎖とも称される非
コーディング鎖であってもよい。ポリペプチドをコード
するコーディング配列は、図１−１２、配列番号１−９
に示すポリヌクレオチドのコーディング配列と同じであ
ってもよい。そのコーディング配列はまた、遺伝暗号の
重複性（縮重性）の結果として、図１３、配列番号１０
のポリペプチドをもコードする、別の配列を有するポリ
ヌクレオチドであってもよい。

【００３１】配列番号２のポリペプチドをコードする本
発明のポリヌクレオチドは、成熟ポリペプチド用のコー
ディング配列自体；成熟ポリペプチド用のコーディング
配列および付加的なコーディング配列；および前記した
付加的なコーディング配列を有するか、または有するこ
となく、付加的な非コーディング配列を有する、成熟ポ
リペプチドのコーディング配列を包含するが、これに限
定されるものではない。付加的なコーディング配列とし
て、例えば、プレタンパク質、プロタンパク質またはプ
レプロタンパク質配列などのリーダー配列または分泌配
列をコードする配列が挙げられるが、これに限定される
ものではない。付加的な非コーディング配列として、例
えば、転写およびスプライシングを含め、ｍＲＮＡプロ
セッシングにて役割を果たす、転写され、かつ非翻訳の
配列および、例えば、ｍＲＮＡのリボソーム結合および
安定性のためのポリアデニル化シグナルなどのイントロ
ンおよび非コーディング５’および３’配列を包含する
が、これに限定されない。付加的な官能性を付与するコ
ーディング配列をポリペプチドに組み入れてもよい。か
くして、例えば、ポリペプチドを、融合ポリペプチドの
精製を容易にする、ペプチドなどのマーカー配列に融合
させてもよい。本発明のこの態様のある好ましい具体例
において、マーカー配列は、ｐＱＥベクター（Qiagen,I
nc.）で供給されるようなヘキサヒスチジンペプチドで
ある。Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA、86：821-82
4（1989）に記載されているように、例えば、ヘキサヒ
スチジンは融合タンパク質を精製するのに都合がよい。
その他の態様では、そのＨＡタグはインフルエンザ・赤
血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応するもの
であり、例えば、Wilsonら、Cell 37：767 (1984) に記
載されている。他の多くのそのようなタグが市販されて
いる。

【００３２】前記によれば、本明細書にて用いられる
「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」なる語
は、遺伝暗号の重複性により、本発明のポリペプチド、
特に、図１３、配列番号１０に示すアミノ酸配列を有す
るｈＲＡＤ５４をコードするいずれの配列をも含むポリ
ヌクレオチドを包含する。該用語はまた、コーディング
および／または非コーディング配列を含んでいてもよ
い、付加的な領域と共に、該ポリペプチドをコードする
単一の連続領域または不連続領域（例えば、イントロン
により分断されている）を含むポリヌクレオチドも包含
する。さらに本発明は、図１３、配列番号１０の推定ア
ミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメント、アナ
ログおよび誘導体をコードする、本明細書にて前記した
ポリヌクレオチドの変種に関する。ポリヌクレオチドの
変種は、天然の対立遺伝子変種などの天然に存在する変
種であってもよく、あるいは、天然に存在することが知
られていない変種であってもよい。かかるポリヌクレオ
チドの天然に存在しない変種は、ポリヌクレオチド、細
胞または生物に用いる方法を含め、変異誘発法により製
造してもよい。

【００３３】この点で変種には、ヌクレオチド置換、欠
失または付加により前記したポリヌクレオチドと異なる
変種がある。置換、欠失または付加には１個またはそれ
以上のヌクレオチドが関与しているかもしれない。変種
は、コーディング配列または非コーディング配列あるい
はそれらの両方において変化していてもよい。コーディ
ング配列の変化により、同類または非同類アミノ酸置
換、欠失または付加が生じてもよい。この点で本発明の
特に好ましい具体例には、図１３（配列番号１０）に示
すｈＲＡＤ５４のアミノ酸配列を有するポリペプチドを
コードするポリヌクレオチド；その変種、アナログ、誘
導体およびフラグメント、ならびにその変種、アナログ
および誘導体のフラグメントがある。さらに、この点に
おいて、数個、わずかな、５ないし１０、１ないし５、
１ないし３、２、１個または０個のアミノ酸残基が、い
ずれかの組み合わせで置換、欠失または付加されてい
る、図１３（配列番号１０）のｈＲＡＤ５４ポリペプチ
ドのアミノ酸配列を有する、ｈＲＡＤ５４変種、アナロ
グ、誘導体およびフラグメント、ならびにそのフラグメ
ントの変種、アナログおよび誘導体をコードするポリヌ
クレオチドが特に好ましい。これらのうち特に好ましい
のは、ｈＲＡＤ５４の特性および活性を変化させないサ
イレント置換、付加および欠失である。またこの点にお
いて、同類置換が特に好ましい。置換されていない、図
１３（配列番号１０）のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドが最も好ましい。

【００３４】本発明のさらに好ましい具体例は、図1−
１２（配列番号１−９）に示すポリヌクレオチド配列に
対して少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオ
チド、およびかかるポリヌクレオチドに相補的なポリヌ
クレオチドである。配列番号１−９のポリヌクレオチド
およびそれに相補的なポリヌクレオチドに対して少なく
とも８０％の同一性を有するポリヌクレオチドが非常に
好ましい。その同じポリペプチドに対して少なくとも９
０％同一であるポリヌクレオチドが特に好ましく、これ
らのうちでも特に好ましいのは、少なくとも９５％同一
のものである。さらには、少なくとも９７％同一のもの
が非常に好ましく、少なくとも９８−９９％同一のもの
がさらに好ましく、少なくとも９９％同一のものが最も
好ましい。この点において、さらに特に好ましい具体例
は、配列番号１−９のポリヌクレオチドによりコードさ
れる成熟ポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能また
は活性を保持しているポリペプチドをコードしているポ
リヌクレオチドである。

【００３５】本発明はさらに本明細書にて前記した配列
とハイブリッド形成するポリヌクレオチドに関する。こ
の点において、本発明は、特に、ストリンジェントな条
件下、本明細書にて前記したポリヌクレオチドとハイブ
リッド形成するポリヌクレオチドに関する。本明細書に
て用いるような、「ストリンジェントな条件」なる語
は、ハイブリッド形成が、配列間で少なくとも９５％、
好ましくは少なくとも９７％同一である場合にのみ生じ
ることを意味する。本発明のポリヌクレオチドアッセイ
に関してさらに検討するように、例えば、前記した本発
明のポリヌクレオチドをｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用
のハイブリダイゼーションプローブとして用いて、ｈＲ
ＡＤ５４をコードする完全長のｃＤＮＡおよびゲノムク
ローンを単離し、ｈＲＡＤ５４遺伝子に対して高度の配
列類似性を有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムク
ローンを単離してもよい。かかるプローブは、一般に、
少なくとも１５個のヌクレオチドを有してなる。好まし
くは、かかるプローブは少なくとも３０個のヌクレオチ
ドを有するであろうし、少なくとも５０個のヌクレオチ
ドを有していてもよい。特に好ましいプローブは３０と
５０個の範囲にあるヌクレオチドを有する。

【００３６】例えば、ｈＲＡＤ５４遺伝子のコード領域
は、既知のＤＮＡ配列を使用してスクリーニングしてオ
リゴヌクレオチド・プローブを合成することにより単離
できる。ついで、本発明の遺伝子の配列と相補性の配列
を有する標識したオリゴヌクレオチドを用いてヒトｃＤ
ＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡのライブラリーをス
クリーニングし、ライブラリーのどのメンバーがプロー
ブとハイブリダイズするか決定する。本発明のポリヌク
レオチドおよびポリペプチドは、本明細書においてポリ
ヌクレオチド・アッセイに関してさらに説明するよう
に、ヒト疾患に対する治療および診断の発見のための研
究試薬および研究材料として用いることができる。

【００３７】該ポリヌクレオチドは、成熟タンパク質
に、付加的なアミノまたはカルボキシ末端アミノ酸が加
わるか、成熟ポリペプチドの内部にアミノ酸が加わった
（例えば、成熟形態が一つ以上のポリペプチド鎖を有す
る場合）ポリペプチドをコードすることができる。この
ような配列は、とりわけ、前駆体から成熟形態へのタン
パク質のプロセッシングにおいて役割を果たし、タンパ
ク質を運ぶことを容易にし、タンパク質の半減期を長く
したり、短くしたり、あるいはアッセイまたは生産のた
めのタンパク質の操作を容易にすることができる。イン
シテューで一般的なように、該付加アミノ酸は細胞酵素
により成熟タンパク質からプロセッシングにより除かれ
る。一またはそれ以上のプロ配列に融合したポリペプチ
ドの成熟形態を有する前駆体タンパク質は該ポリペプチ
ドの不活性形でもよい。プロ配列が除かれると、そのよ
うな不活性前駆体は一般に活性化される。プロ配列の幾
らかまたは全体を、活性化の前に除去できる。一般に、
そのような前駆体はプロタンパク質と称される。

【００３８】総じて、本発明のポリヌクレオチドは成熟
タンパク質、リーダー配列の加わった成熟タンパク質
（プレタンパク質とも称される）、プレタンパク質のリ
ーダー配列ではない１またはそれ以上のプロ配列を有す
る成熟タンパク質の前駆体、またはリーダー配列と、一
般に、ポリペプチドの活性な成熟形態を生成するプロセ
ッシング工程の間に除去される１またはそれ以上のプロ
配列を有するプロタンパク質の前駆体であるプレプロタ
ンパク質をコードする。

【００３９】ポリペプチド本発明は、さらに図１３、配列番号１０の推定アミノ酸
配列を有するｈＲＡＤ５４ポリペプチドに関する。本発
明はまた、これらのポリペプチドのフラグメント、アナ
ログおよび誘導体にも関する。「フラグメント」、「誘
導体」および「アナログ」なる語は、図１３のポリペプ
チドについて言う場合、かかるポリペプチドと実質的に
同じ生物学的機能または活性を保持している、すなわ
ち、ｈＲＡＤ５４のごとく機能するポリペプチド、また
は、たとえそのポリペプチドが酵素として機能しなくて
もいかなる受容体、結合分子に結合する能力を保持して
いる、ポリペプチドを意味する。かくして、アナログ
は、プロタンパク質部分の開裂により活性化され、活性
成熟ポリペプチドを産生しうるプロタンパク質を包含す
る。本発明のポリペプチドは、組換えポリペプチド、天
然ポリペプチドまたは合成ポリペプチドであってもよ
い。ある種の好ましい具体例において、本発明のポリペ
プチドは組換えポリペプチドである。

【００４０】図１３（配列番号１０）のポリペプチドの
フラグメント、誘導体またはアナログは、（ｉ）１個ま
たはそれ以上のアミノ酸残基が保存または非保存アミノ
酸残基（好ましくは、保存アミノ酸残基）で置換されて
おり、かかる置換アミノ酸残基は遺伝暗号によりコード
されているものであっても、なくてもよいもの；（ｉ
ｉ）１個またはそれ以上のアミノ酸残基が置換基を含む
もの；（ｉｉｉ）成熟ポリペプチドが別の化合物、例え
ば、ポリペプチドの半減期を増加させる化合物（例え
ば、ポリエチレングリコール）と融合しているもの；ま
たは（ｉｖ）付加的なアミノ酸が成熟ポリペプチドに融
合しているもの、例えば、リーダーもしくは分泌配列ま
たは成熟ポリペプチドの精製用に利用される配列または
プロタンパク質配列であってもよい。かかるフラグメン
ト、誘導体およびアナログは、本明細書の教示から当業
者に自明であると考えられる。この点において、本発明
の好ましい具体例には、図１３（配列番号１０）に示す
ｈＲＡＤ５４のアミノ酸配列を有するポリペプチド、そ
の変種、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならび
に該フラグメントの変種、アナログおよび誘導体であ
る。さらに、この点において本発明の特に好ましい具体
例は、ｈＲＡＤ５４のアミノ酸配列を有するポリペプチ
ド、その変種、アナログ、誘導体およびフラグメント、
ならびにこの酵素の活性／機能を保持しているフラグメ
ントの変種、アナログおよび誘導体である。

【００４１】好ましい変種には、同類アミノ酸置換によ
って対照標準から変化している変種がある。かかる置換
は、ポリペプチド中の所定のアミノ酸を同様の特性の別
のアミノ酸で置換したものである。同類アミノ酸置換と
して認められる典型的なものは、脂肪族アミノ酸である
Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅの間での相互の置
換；ヒドロキシル残基であるＳｅｒおよびＴｈｒの相互
置換、酸性残基であるＡｓｐおよびＧｌｕの交換、アミ
ド残基であるＡｓｎおよびＧｌｎの間の置換、塩基性残
基であるＬｙｓおよびＡｒｇの交換、ならびに芳香族残
基であるＰｈｅおよびＴｙｒの間の置換である。さらに
この点において特に好ましいのは、数個、わずかな、５
ないし１０、１ないし５、１ないし３、２、１個または
０個のアミノ酸残基が、いずれかの組み合わせで置換、
欠失または付加されている、図１３（配列番号１０）の
ｈＲＡＤ５４ポリペプチドのアミノ酸配列を有する変
種、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに該
フラグメントの変種、アナログおよび誘導体である。こ
れらのうち特に好ましいのは、該酵素の性質および活性
を変化させないサイレント置換、付加および欠失であ
る。またこの点において、同類置換が特に好ましい。最
も好ましいのは、置換されていない図１３（配列番号１
０）のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。

【００４２】本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドは、好ましくは、単離形態にて提供され、好ましく
は、等質性になるまで精製される。本発明のポリペプチ
ドは、配列番号１０のポリペプチド（詳細には成熟ポリ
ペプチド）、ならびに配列番号１０のポリペプチドに対
して少なくとも７０％の同一性を有し、より好ましくは
配列番号１０のポリペプチドに対して９０％の類似性
（より好ましくは少なくとも９０％の同一性）を有し、
さらにより好ましくは配列番号１０のポリペプチドに対
して少なくとも９５％の類似性（さらにより好ましくは
少なくとも９５％の同一性）を有するポリペプチドを包
含する。

【００４３】本発明のポリペプチドのフラグメントまた
は部分を、ペプチド合成により対応する完全長のポリペ
プチドの製造に使用してもよい；従って、フラグメント
を完全長のポリペプチドの製造のための中間体として使
用してもよい。本発明のポリヌクレオチドのフラグメン
トまたは部分を用いて本発明の完全長のポリヌクレオチ
ドを合成してもよい。フラグメントは、「自立してい
る」、すなわち、他のアミノ酸またはポリペプチドの一
部でなく、または、それらに融合しておらず、あるい
は、かかるフラグメントが大きなポリペプチド中に含ま
れていてその一部分または領域となっていてもよい。大
きなポリペプチド中に含まれている場合、現在議論中の
フラグメントは、最も好ましくは単一の連続した領域を
形成する。しかしながら、いくつかのフラグメントが、
単一のより大きなポリペプチド中に含まれていてもよ
い。例えば、特定の好ましい具体例は、宿主中での発現
のために設計された前駆体ポリペプチド中に含まれてい
て、ｈＲＡＤ５４フラグメントのアミノ末端に融合した
異種プレおよびプロ−ポリペプチド領域、および、該フ
ラグメントのカルボキシル末端に融合した付加的な領域
を有している、本発明のｈＲＡＤ５４ポリペプチドのフ
ラグメントに関する。従って、本明細書の意図する１つ
の態様において、フラグメントは、ｈＲＡＤ５４由来の
融合ポリペプチドまたは融合タンパク質の一部または部
分をいう。

【００４４】ベクター、宿主細胞、発現本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、
本発明のベクターを用いて遺伝子操作される宿主細胞お
よび組換え法による本発明のポリペプチドの製造にも関
する。宿主細胞を遺伝子操作してポリヌクレオチドを取
り込ませ、本発明のポリペプチドを発現させることがで
きる。例えば、感染、トランスダクション、トランスフ
ェクション、トランスベクションおよび形質転換といっ
たよく知られた方法を用いて、ポリヌクレオチドを宿主
細胞中に導入してもよい。ポリヌクレオチドを単独また
は他のポリヌクレオチドと一緒に導入してもよい。他の
ポリヌクレオチドを本発明のポリヌクレオチドと別個に
導入するか、同時に導入するか、あるいは結合させて導
入してもよい。

【００４５】かくして、例えば、本発明のポリヌクレオ
チドを、例えば、哺乳動物細胞において同時トランスフ
ェクションおよび選択のための標準的方法を用いて、選
択可能マーカーをコードするもう１つ別のポリペプチド
で宿主細胞中にトランスフェクションしてもよい。この
場合、一般に、ポリヌクレオチドは宿主細胞ゲノム中に
安定に取り込まれるであろう。別法として、ポリヌクレ
オチドを、宿主における増殖用の選択可能マーカーを有
するベクターに結合させてもよい。前記した方法によ
り、ベクター構築物を宿主細胞中に導入してもよい。一
般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈殿物
のごとき沈殿物中、あるいは荷電脂質との複合体中のＤ
ＮＡとして導入される。さらに、エレクトロポレーショ
ンを用いてポリヌクレオチドを宿主に導入してもよい。
ベクターがウイルスである場合、それをインビトロでパ
ッケージし、またはパッケージ細胞中に導入し、そのパ
ッケージウイルスを細胞中に形質導入してもよい。本発
明のこの態様によれば、ポリヌクレオチドを製造し、ポ
リヌクレオチドを細胞に導入するのに適当な多種の方法
は当業者によく知られた、慣用的なものである。かかる
方法は、詳細に、Sambrookらに詳細に記載されており、
これらの方法を詳述する多くの実験室マニュアルを説明
している。

【００４６】本発明のこの態様によれば、ベクターは、
例えばプラスミドベクター、１本鎖または２本鎖のファ
ージベクター、１本鎖または２本鎖のＲＮＡまたはＤＮ
Ａウイルスベクターであってもよい。かかるベクター
は、ＤＮＡおよびＲＮＡを細胞に導入するためのよく知
られた方法によって、ポリヌクレオチド、好ましくはＤ
ＮＡとして細胞中に導入される。ファージおよびウイル
スベクターの場合、感染およびトランスダクションにつ
いての周知方法によって、ベクターはまた、パッケージ
または封入ウイルスとして細胞中に導入されていてもよ
く、好ましくは導入されている。ウイルスベクターは複
製可能であってもよく、複製欠損であってもよい。後者
の場合、ウイルス増殖は、一般に、相補的宿主細胞にお
いてのみ起こるであろう。ベクターは、ある態様におい
て、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発
現用ベクターが好ましい。一般に、かかるベクターは、
発現されるべきポリヌクレオチドに作動可能に連結され
た宿主中での発現に効果的なシス−作用性制御領域を含
んでなる。適当なトランス−作用性因子は、宿主により
供給されるか、相補的ベクターにより供給されるか、ま
たは宿主中に導入した後のベクター自身によって供給さ
れるかである。

【００４７】この点における好ましい具体例において、
ベクターは特異的発現を提供する。かかる特異的発現は
誘導可能な発現であってもよく、またはある型の細胞に
おいてのみ起こる発現であってもよく、または誘導可能
および細胞特異的の両方であってもよい。誘導可能なベ
クターの中でも、温度および栄養添加物などの操作容易
な環境因子によってタンパク質発現を誘導することので
きるベクターが、特に好ましい。原核細胞および真核細
胞宿主において使用される構成的および誘導可能な発現
ベクターを含め、本発明のこの態様に適する種々のベク
ターは当業者によく知られており、慣用的に使用されて
いる。遺伝子操作された宿主細胞は通常の栄養培地で培
養することができ、そのような培地は、とりわけプロモ
ーターの活性化、形質転換体の選択、または遺伝子の増
幅に関して、適宜修飾されていてもよい。温度、ｐＨな
どの、発現のために選択される宿主細胞で予め使用され
た培養条件は、一般に、本発明のポリペプチドの発現に
適しており、それは当業者に明らかであろう。

【００４８】多種の発現ベクターを用いて、本発明のポ
リペプチドを発現させることができる。かかるベクター
は、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクタ
ー、例えば、細菌プラスミド、バクテリオファージ、酵
母エピソーム、酵母染色体因子、バキュロウイルス、パ
ポーバウイルス、ＳＶ４０、ワクシニアウイルス、アデ
ノウイルス、ニワトリポックスウイルス、偽狂犬病ウイ
ルス、アルファーウイルスおよびレトロウイルスから由
来のベクター、およびプラスミドおよびバクテリオファ
ージ遺伝的因子から由来のベクターなどのその組み合わ
せに由来のベクター、コスミドおよびファージミドを包
含する。この点における発現のために、一般に、宿主中
でポリペプチドを発現するためのポリヌクレオチドを維
持、増殖または発現するのに適したベクターを用いるこ
とができる。

【００４９】種々のよく知られた慣用的方法のいずれに
よっても、適当なＤＮＡ配列をベクターに挿入すること
ができる。一般に、発現させるＤＮＡ配列を、そのＤＮ
Ａ配列および発現ベクターを１種またはそれ以上の制限
エンドヌクレアーゼで開裂させ、ついで、Ｔ４ＤＮＡ
リガーゼを用いて制限フラグメントを一緒に結合させる
ことにより、発現ベクターに結合させる。この目的に用
いることのできる制限的開裂およびライゲーションの操
作は当業者によく知られており、慣用的なものである。
この点における、および別法を用いて発現ベクターを構
築するための適当な操作も当業者によく知られており、
慣用的なものであり、Sambrookらに詳細に記載されてい
る。

【００５０】発現ベクター中のＤＮＡ配列を、例えば、
ｍＲＮＡ転写を指令するプロモーターを含め、適当な発
現制御配列（複数でも可）に作動可能に連結する。かか
るプロモーターの代表例は、ファージ・ラムダＰＬプロ
モーター、エシェリキア・コリのｌａｃ、ｔｒｐおよび
ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期および後期プロモー
ターならびにレトロウイルスＬＴＲのプロモーターを包
含するが、それらは周知プロモーターのほんの例示に過
ぎない。本発明のこの態様にて有用な多数の他のプロモ
ーターはよく知られており、本明細書の記載および実施
例で説明されるようにして当業者であれば慣用的に使用
することができる。一般に、発現構築物は、転写開始部
位および停止部位、および、転写領域に翻訳のためのリ
ボソーム結合部位を有するであろう。構築物により発現
される成熟転写物のコーディング部分は、翻訳されるべ
きポリペプチドの初めの部分に翻訳開始ＡＵＧを、およ
び終わりの部分に適宜位置する終止コドンを含むであろ
う。

【００５１】加えて、構築物は、発現を調節ならびに発
生させる制御領域を含んでいてもよい。一般に、多くの
通常なされる操作に従って、かかる領域は、転写を調節
することにより作動するであろう。例えば、とりわけ、
レプレッサー結合部位およびエンハンサーが挙げられ
る。一般に、増殖および発現のためのベクターは選択可
能なマーカーを有する。選択可能なマーカー遺伝子は形
質転換された宿主細胞を選択するための表現型特徴を提
供する。好ましいマーカーは、真核細胞を培養するため
のジヒドロ葉酸還元酵素またはネオマイシン耐性のも
の、およびエシェリキア・コリおよび他の細菌を培養す
るためのテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝
子を包含するが、これに限定されるものではない。かか
るマーカーはまた、増幅に適していてもよい。また、ベ
クターがこの目的のための別のマーカーを有していても
よい。

【００５２】所望のポリペプチドの宿主中での発現に適
した種々の周知方法を用いて、本明細書にて記載したポ
リヌクレオチド配列から選択された配列、ならびに適当
なプロモーター、および他の適当な制御配列を含むベク
ターを、適当な宿主中に導入してもよい。適当な宿主の
代表例は、エシェリキア・コリ、ストレプトマイセス
（Streptomyces）およびサルモネラ・チフィムリウム
（Salmonella typhimurium）細胞などの細菌細胞；酵母
細胞などの真菌細胞；ドロソフィラ（Drosophila）Ｓ２
およびスポドプテラ（Spodoptera）Ｓｆ９細胞などの昆
虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳおよびボウエス（Bowes）メラ
ノーマ細胞などの動物細胞を包含する。多種の発現構築
物の宿主が周知であり、当業者は本開示により本発明の
この態様に従ってポリペプチドの発現のための宿主を容
易に選択することができる。より詳細には、本発明はま
た、発現構築物などの組換え構築物であって、１種また
はそれ以上の前記した配列を含んでなる組換え構築物を
包含する。構築物は、本発明のかかる配列がその中に挿
入されたプラスミドまたはウイルスベクターなどのベク
ターからなる。配列は順方向または逆方向に挿入するこ
とができる。この点において、ある種の好ましい具体例
において、構築物はさらに、例えば、該配列に作動可能
に連結されたプロモーターを含め、調節配列を含んでな
る。多数の適当なベクターおよびプロモーターが当業者
に知られており、本発明の使用に適した多数の市販のベ
クターがある。

【００５３】市販されている以下のベクターを例示とし
て提供する。細菌に使用するのに好ましいベクターに
は、Qiagenから市販されている、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６
０およびｐＱＥ−９；Stratageneから市販されている、
ｐＢＳベクター、Phagescriptベクター、Bluescriptベ
クター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐ
ＮＨ４６Ａ；ならびに、Pharmaciaから市販されてい
る、ｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３
−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５がある。好ましい真核
細胞ベクターには、Stratageneから市販のｐＷＬＮＥ
Ｏ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳ
Ｇ；ならびに、Pharmaciaから市販のｐＳＶＫ３、ｐＢ
ＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬがある。これらのベクタ
ーは、多くの市販されている、および、本発明のこの態
様により使用するために当業者によく知られたベクター
を例示するためにのみ列挙する。例えば、宿主中におけ
る本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの導
入、維持、増殖または発現に適する他のプラスミドまた
はベクターを本発明のこの態様に使用してもよいことが
理解されよう。

【００５４】プロモーター領域は、制限部位、または、
候補プロモーターフラグメント；すなわち、プロモータ
ーを含んでいるかもしれないフラグメントを導入するた
めの部位の下流の、クロラムフェニコールアセチルトラ
ンスフェラーゼ（「ＣＡＴ」）転写ユニットのごとき、
プロモーター領域を欠くレポーター転写ユニットを含む
ベクターを用いて、所望の遺伝子から選択することがで
きる。周知のように、プロモーター含有フラグメントを
ベクター中にＣＡＴ遺伝子の上流の制限部位で導入する
ことにより、ＣＡＴ活性を生じさせ、それを標準的ＣＡ
Ｔアッセイにより検出することができる。この目的に適
するベクターはよく知られており、容易に入手できる。
かかるベクターとして、ｐＫＫ２３２−８およびｐＣＭ
７の２種類が挙げられる。かくして、本発明のポリヌク
レオチドの発現用のプロモーターはよく知られていて容
易に入手できるプロモーターだけでなく、レポーター遺
伝子を用いて上記方法により容易に得ることのできるプ
ロモーターも包含する。

【００５５】本発明に係るポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドの発現に適した既知細菌プロモーターには、エ
シェリキア・コリｌａｃＩおよびｌａｃＺプロモータ
ー、Ｔ３およびＴ７プロモーター、ｇｐｔプロモータ
ー、ラムダＰＲ、ＰＬプロモーターおよびｔｒｐプロモ
ーターがある。この点において適当な既知の真核細胞プ
ロモーターには、ＣＭＶ即時初期プロモーター、ＨＳＶ
チミジンキナーゼプロモーター、初期および後期ＳＶ４
０プロモーター、Ｒｏｕｓサルコーマウイルス（「ＲＳ
Ｖ」）のごときレトロウイルスＬＴＲのプロモーター、
ならびにマウス・メタロチオネイン−Ｉプロモーターな
どのメタロチオネインプロモーターがある。宿主細胞中
での発現に適するベクターおよびプロモーターの選択は
周知操作であり、発現ベクターの構築、宿主中へのベク
ターの導入および宿主における発現のための必須方法
は、当業者にとって日常的なものである。本発明は、前
記の構築物を含む宿主細胞にも関する。宿主細胞は、哺
乳動物細胞のごとき高等真核細胞、酵母細胞のごとき下
等真核細胞、または細菌細胞のごとき原核細胞であって
もよい。

【００５６】構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カル
シウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン
により媒介されるトランスフェクション、陽イオン性脂
質により媒介されるトランスフェクション、エレクトロ
ポレーション、形質導入、感染または他の方法により、
行うことができる。かかる方法は、多くの標準的実験室
マニュアルに記載されている。宿主中の構築物を常法で
使用して、組換え配列によりコードされた遺伝子産物を
製造することができる。別法として、慣用的ペプチド合
成装置により本発明ポリペプチドを合成的に製造するこ
ともできる。成熟タンパク質は、適当なプロモーターの
制御下、哺乳動物細胞、酵母、細菌または他の細胞中で
発現させることができる。さらに、無細胞翻訳系を利用
して、本発明のＤＮＡ構築物から由来のＲＮＡを用い
て、かかるタンパク質を製造することもできる。原核宿
主および真核宿主とともに使用に適するクローニングお
よび発現ベクターは、Sambrookらにより記載されてい
る。

【００５７】一般に、組換え発現ベクターは、複製開始
点、下流の構造配列の転写を指令する高発現遺伝子由来
のプロモーター、およびベクターに曝露した後のベクタ
ー含有細胞の単離を可能にする選択可能マーカーを含
む。適当なプロモーターには、とりわけ、３−ホスホグ
リセレートキナーゼ（「ＰＧＫ」）などの糖分解酵素、
ａ−ファクター、酸ホスファターゼ、および熱ショック
タンパク質をコードする遺伝子由来のプロモーターがあ
る。選択可能マーカーは、エシェリキア・コリのアンピ
シリン耐性遺伝子およびスタフィロコッカス・セレビシ
エ（S.cerevisiae）のｔｒｐ１遺伝子を包含する。高等
真核生物により本発明のポリペプチドをコードするＤＮ
Ａの転写は、エンハンサー配列をベクター中に挿入する
ことにより増大させることができる。エンハンサーは、
通常、約１０ないし３００ｂｐのＤＮＡのシス−作用性
エレメントであり、所定の宿主細胞型中でのプロモータ
ーの転写活性を増大させるように作用する。エンハンサ
ーの例は、複製開始点の後期側１００ないし２７０ｂｐ
に位置するＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイル
ス初期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後期側
にあるポリオーマエンハンサー、ならびにアデノウイル
スエンハンサーを包含する。

【００５８】一般に、本発明のポリペプチドの異種構造
配列をコードする本発明のポリヌクレオチドを、発現用
プロモーターに作動可能に連結されるように標準的方法
を用いてベクター中に挿入する。転写開始部位がリボソ
ーム結合部位に対して５’付近に位置するようにポリヌ
クレオチドを配置する。リボソーム結合部位は、発現さ
れるポリペプチドの翻訳を開始するＡＵＧに対して５’
にある。一般に、通常、ＡＵＧである開始コドンから始
まり、リボソーム結合部位と開始コドンの間に位置する
他のオープン・リーディング・フレームはないであろ
う。また、一般に、ポリペプチド末端に翻訳終止コドン
が存在し、転写される領域の３’末端に適宜散在するポ
リアデニル化シグナルおよび転写終止シグナルが存在す
るであろう。適当な分泌シグナルを、小胞体ルーメン、
周辺腔または細胞外環境中への翻訳タンパク質の分泌の
ために、発現されるポリペプチド中に組み込ませてもよ
い。シグナルは、ポリペプチドに対して内在性のもので
あってもよく、あるいは異種的であってもよい。

【００５９】ポリペプチドは、融合タンパク質のごとき
修飾形態で発現させることができ、分泌シグナルのみな
らず付加的な異種機能領域を含んでいてもよい。かくし
て、例えば、付加的アミノ酸の領域、特に荷電アミノ酸
の領域をポリペプチドのＮ−末端に付加して、宿主細胞
における精製またはその後の取り扱いおよび保存の間の
安定性および維持性を改善してもよい。また、一の領域
をポリペプチドに付加し、精製を容易にしてもよい。か
かる領域は、最終的なポリペプチドの調製の前に除去す
ることができる。ペプチド部分をポリペプチドに付加
し、とりわけ、分泌または外分泌を引き起こし、安定性
を改善し、精製を容易にすることは、当業者によく知ら
れている日常的方法である。本発明に係るポリヌクレオ
チドおよびポリペプチドの増殖、維持または発現に適し
た原核宿主は、エシェリキア・コリ（Escherichia col
i）、バシラス・サチリス（Bacillus subtilis）および
サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimuriu
m）を包含する。シュードモナス（Pseudomonas）、スト
レプトマイセス（Streptomyces）およびスタフィロコッ
カス（Staphylococcus）の様々な種もまた、この点にお
いて適当な宿主である。さらに、この点において、当業
者に知られている他の多くの宿主も使用可能である。

【００６０】限定するものではないが、一の代表例とし
て、細菌についての有用な発現ベクターは、選択可能な
マーカーと、周知のクローニングベクターｐＢＲ３２２
（ＡＴＣＣ３７０１７）の遺伝的エレメントを有してな
る市販プラスミドから由来の細菌の複製開始点とからな
り得る。かかる市販ベクターは、例えば、ｐＫＫ２２３
−３（Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala,Sweden）お
よびＧＥＭ１（Promega Biotec, Madison,WI,USA）を包
含する。これらベクターにおいて、ｐＢＲ３２２「骨
格」部分を適当なプロモーターおよび発現すべき構造配
列と組み合わせる。適当な宿主株を形質転換した後、そ
の宿主株を適当な細胞密度まで増殖させる。選択したプ
ロモーターが誘導可能である場合には、適当な手段（例
えば、温度シフトまたは化学誘導剤に曝露）によりそれ
を誘導し、細胞をさらなる期間培養する。次いで、典型
的には、細胞を遠心分離により集め、物理的または化学
的手段により破壊し、得られた粗抽出物をさらに精製に
供する。

【００６１】凍結−融解のサイクリング、超音波処理、
機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含め、慣用的方
法により、タンパク質発現に使用する微生物細胞を破壊
することができる。かかる方法は当業者によく知られて
いる。同様に、種々の哺乳動物細胞培養系を発現に使用
することができる。哺乳動物発現系の例は、Ｃ１２７、
３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ヒト腎臓２９３およびＢＨ
Ｋ細胞系ならびにGluzmanら、Cell，23：175（1981）に
記載されたサル・腎臓線維芽細胞のＣＯＳ−７細胞系を
包含する。哺乳動物発現ベクターは、複製開始点、適当
なプロモーターおよびエンハンサー、および必要なリボ
ソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナ
ーおよびアクセプター部位、転写終結配列、および発現
に必要とされる５’隣接非転写配列からなる。好ましい
具体例において、ＳＶ４０スプライス部位およびＳＶ４
０ポリアデニル化部位から由来のＤＮＡ配列が、必須の
非転写遺伝的エレメントとして用いられる。

【００６２】ｈＲＡＤ５４ポリペプチドは、硫酸アンモ
ニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは
陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースク
ロマトグラフィー、疎水相互作用クロマトグラフィー、
アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパ
タイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラ
フィーを含むよく知られた方法により、組換え細胞培養
物から回収し、精製することができる。最も好ましく
は、高性能液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）を
精製に用いる。単離または精製の間にポリペプチドが変
性する場合、タンパク質の再生するためのよく知られた
方法を用いて活性コンフォメーションを再生することが
できる。本発明のポリペプチドは、自然に精製されるポ
リペプチド、化学合成法による産生されるポリペプチ
ド、および例えば、細菌、酵母、高等植物、昆虫および
哺乳動物細胞を含め、原核細胞または真核細胞宿主から
組換え技術により得られるポリペプチドを包含する。組
換え体産生法に用いる宿主によっては、本発明のポリペ
プチドは糖鎖形成されていても、糖鎖形成されていなく
てもよい。加えて、本発明のポリペプチドは、ある場合
には、宿主が介在する工程の結果として、最初の修飾さ
れたメチオニン残基を含みうる。ｈＲＡＤ５４ポリヌク
レオチドおよびポリペプチドを、本発明に従って、種々
の用途、特にＥＬＦ３の化学的および生物学的特性を用
いる用途に使用することができる。さらなる用途は、細
胞、組織および器官の障害の診断および治療に関する。
本発明のこれらの態様を以下の議論によってさらに説明
する。

【００６３】ポリヌクレオチドアッセイ本発明はまた、例えば診断試薬として用いるための相補
的ポリヌクレオチドの検出のためのｈＲＡＤ５４ポリヌ
クレオチドの使用に関する。機能不全に伴う変異形のｈ
ＲＡＤ５４の検出は、ｈＲＡＤ５４の過小発現、過剰発
現または発現の変化から生じる疾患の診断、または疾患
に対する感受性に付加および定義することができる診断
用装置を提供することである。ｈＲＡＤ５４遺伝子に変
異を有する個体は、種々の方法により、ＤＮＡレベルで
検出することができる。診断のための核酸を、血液、
尿、唾液、生検および剖検材料などの患者の細胞から得
てもよい。ゲノムＤＮＡを検出用に直接使用してもよ
く、または分析前にＰＣＲを用いることにより酵素的に
増幅してもよい（Saikiら、Nature，324：163−166（19
86））。ＲＮＡまたはｃＤＮＡを同じように使用しても
よい。一例として、ｈＲＡＤ５４をコードする核酸に相
補的なＰＣＲプライマーを用いて、ｈＲＡＤ５４の発現
および変異を同定および分析することができる。例え
ば、正常な遺伝子型との比較にて増幅産物の大きさが変
化することにより、欠失および挿入を検出することがで
きる。増幅したＤＮＡを放射性標識したｈＲＡＤ５４
ＲＮＡまたは放射性標識したｈＲＡＤ５４アンチセンス
ＤＮＡ配列とハイブリダイゼーションさせることによ
り、点変異を同定することができる。好ましくは、ＲＮ
ａｓｅＡ消化または融点温度の相違により、対合した配
列と誤対合の２本鎖を識別することができる。

【００６４】直接的ＤＮＡ配列決定により、対照標準の
遺伝子と変異を有する遺伝子との間の配列の相違も明ら
かとなりうる。加えて、クローン化されたＤＮＡセグメ
ントをプローブとして用い、特定のＤＮＡセグメントを
検出してもよい。ＰＣＲまたは他の増幅方法を適宜用い
ることにより、かかる方法の感度を非常に向上させるこ
とができる。例えば、配列決定用プライマーを、２本鎖
ＰＣＲ産物またはＰＣＲ変法により得られた１本鎖鋳型
分子とともに使用する。放射性標識されたヌクレオチド
を用いる慣用的操作により、または蛍光タグを用いる自
動式配列決定法により配列決定を行う。変性剤と共にま
たは無しで、ゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動度
の変化を検出することにより、ＤＮＡ配列の相違に基づ
く遺伝的試験を行うことができる。高分解能ゲル電気泳
動により、小規模な配列の欠失および挿入を可視化する
ことができる。異なる配列のＤＮＡフラグメントは、そ
の特異的融点または部分的融解温度によって、異なるＤ
ＮＡフラグメントの移動がゲル中の異なる位置で遅延す
る、変性ホルムアミド勾配ゲル上で識別することができ
る（例えば、Myersら、Science，230：1242（1985）を
参照のこと）。

【００６５】特定位置での配列の変化はまた、ＲＮase
およびＳ１保護などのヌクレアーゼ保護アッセイまたは
化学的開裂法により明らかとなる（例えば、Cottonら、
Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85：4397−4401（1985））。
かくして、ハイブリダイゼーション、ＲＮase保護、化
学的開裂、直接的ＤＮＡ配列決定または制限酵素の使用
（例えば、制限フラグメント長多型性（「ＲＦＬ
Ｐ」））およびゲノムＤＮＡのサザンブロッティングな
どの方法により、特定のＤＮＡ配列の検出を行うことが
できる。

【００６６】本発明のさらなる態様によれば、色素性乾
皮症およびブルーム症候群、ヴェルナー症候群（早老）
およびα−サラセミア症候群を伴うＸリンクした精神遅
滞（X-linked Mental Retardation withα-thalassemia
Syndrome：ＡＴＲ−Ｘ）のごとき癌−プローン症候群
（cancer-prone syndromes）；ならびに乳癌のごとき癌
に対する感受性を診断または測定する方法が提供され
る。ｈＲＡＤ５４の変異は、色素性乾皮症およびブルー
ム症候群、ヴェルナー症候群（早老）およびα−サラセ
ミア症候群を伴うＸリンクした精神遅滞（X-linked Men
tal Retardationwithα-thalassemia Syndrome：ＡＴＲ
−Ｘ）のごとき癌−プローン症候群（cancer-prone syn
dromes）；ならびに乳癌のごとき癌に対する感受性の指
標となりうる。上記の核酸配列をかかる感受性を確認す
るためのアッセイにて用いてもよい。かくして、例え
ば、該アッセイを用いて、上述したようなｈＲＡＤ５４
遺伝子の変異、欠失、トランケーション、挿入、フレー
ムシフトのような、それにより高増殖性疾患のような疾
患に対する感受性が不活性となる、上述したようなｈＲ
ＡＤ５４遺伝子の変異を測定することができる。

【００６７】本発明は、疾患、特に、色素性乾皮症およ
びブルーム症候群、ヴェルナー症候群（早老）およびα
−サラセミア症候群を伴うＸリンクした精神遅滞（X-li
nkedMental Retardation withα-thalassemia Syndrom
e：ＡＴＲ−Ｘ）のごとき癌−プローン症候群（cancer-
prone syndromes）；ならびに乳癌のごとき癌の診断方
法であって、図１−１２、配列番号１−９の配列を有す
るポリヌクレオチドの発現レベルが異常に減少または増
加している患者から由来の試料から決定することからな
る方法を提供する。ポリヌクレオチドの発現の減少また
は増加は、例えば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮase保
護、ノザンブロッティングおよび他のハイブリダイゼー
ション法などのポリヌクレオチド定量のための当該分野
でよく知られた方法を用いて測定できる。より慣用的な
ゲル電気泳動法およびＤＮＡ配列決定法に加えて、変異
をインシテュ分析により検出することもできる。本発明
はまた、下記に示すプライマーのセット（表1）を提供
する。これらはｈRAD配列中の変異を検出するための一
本鎖配座多型現象（single-strand conformational pol
ymorphism;SSCP）解析のような、ＰＣＲゲノムＤＮＡに
用いられる：

【００６８】個々のｈＲＡＤ５４エキソンを増幅するた
めのプライマー配列

【表１】

【００６９】

【表２】

【００７０】

【表３】

【００７１】

【表４】

【００７２】ポリペプチドアッセイ本発明はまた、細胞および組織中のｈＲＡＤ５４タンパ
ク質レベルを検出するための診断アッセイに関する。か
かるアッセイは定量的または定性的であってもよい。か
くして、例えば、正常対照組織試料と比較してｈＲＡＤ
５４タンパク質の過剰発現を検出するための本発明の診
断アッセイを用いて、色素性乾皮症およびブルーム症候
群、ヴェルナー症候群（早老）およびα−サラセミア症
候群を伴うＸリンクした精神遅滞（X-linked Mental Re
tardation withα-thalassemia Syndrome：ＡＴＲ−
Ｘ）のごとき癌−プローン症候群（cancer-prone syndr
omes）；ならびに乳癌のごとき癌の存在を検出すること
ができる。宿主由来の試料中の本発明のｈＲＡＤ５４タ
ンパク質のごときタンパク質のレベルを決定するのに用
いることのできるアッセイ法は当業者によく知られてい
る。かかるアッセイ法は、ラジオイムノアッセイ、競合
結合アッセイ、ウェスタンブロット分析および酵素結合
イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）を包含する。こ
れらのうち、ＥＬＩＳＡが好ましいことが多い。ＥＬＩ
ＳＡアッセイは、最初にｈＲＡＤ５４に特異的な抗体、
好ましくはモノクローナル抗体を調製することからな
る。加えて、一般に、モノクローナル抗体に結合するレ
ポーター抗体を調製する。レポーター抗体は、放射性試
薬、蛍光試薬または酵素試薬のごとき検出可能試薬に結
合する。本明細書の実施例では、ホースラディッシュ・
ペルオキシダーゼ酵素に結合している。

【００７３】ＥＬＩＳＡを行うために、試料を宿主から
取り出し、試料中のタンパク質に結合する固体支持体、
例えば、ポリスチレン皿上でインキュベーションする。
ついで、ウシ血清アルブミンなどの非特異的タンパク質
とともにインキュベーションすることにより、皿上の遊
離タンパク質結合部位を被覆する。ついで、モノクロー
ナル抗体を皿中でインキュベーションし、その間にモノ
クローナル抗体は、ポリスチレン皿に結合しているｈＲ
ＡＤ５４タンパク質に結合する。未結合モノクローナル
抗体をバッファーで洗い流す。ホースラディッシュ・ペ
ルオキシダーゼに連結したレポーター抗体を皿中に入
れ、レポーター抗体とｈＲＡＤ５４タンパク質に結合し
ているモノクローナル抗体との結合を生じさせる。つい
で、未結合レポーター抗体を洗い流す。ついで、発色基
質を含め、ペルオキシダーゼ活性のための試薬を皿に添
加する。１次抗体および２次抗体を介してｈＲＡＤ５４
に結合し、固定されているペルオキシダーゼは、着色反
応生成物を生成する。所定の時間に発色した量は試料中
のｈＲＡＤ５４タンパク質量を示す。典型的には、標準
曲線と比較することにより定量的結果が得られる。競合
アッセイはまた、固体支持体に結合するｈＲＡＤ５４に
特異的な抗体、標識したｈＲＡＤ５４および宿主由来の
試料を、固体支持体上を通すことで用いられる。固体支
持体に結合した標識の検出量を試料中のＥＬＦ３量と相
関させることができる。

【００７４】抗体ポリペプチド、そのフラグメントまたは他の誘導体、ま
たはそのアナログ、またはそれらを発現する細胞を、そ
れらに対する抗体を製造するための免疫原として使用す
ることができる。これらの抗体は、例えば、ポリクロー
ナルまたはモノクローナル抗体であってよい。本発明
は、キメラ、単鎖およびヒト化抗体ならびにＦａｂフラ
グメント、またはＦａｂ発現ライブラリーの生成物も包
含する。当該分野で知られた種々の操作をかかる抗体お
よびフラグメントの製造に用いてもよい。本発明の配列
に対応するポリペプチドに拮抗して生成される抗体は、
当該分野で知られた種々の手法で得ることができる。例
えば、一つの例では、ポリペプチドを動物、好ましくは
ヒト以外の動物に直接注射することができる。そのよう
にして得られた抗体はポリペプチド自体と結合する。こ
の例のように、ポリペプチドのフラグメントだけをコー
ドする配列であっても、完全に無傷のポリペプチドに結
合する抗体を得るのに用いることができる。ついで、か
かる抗体を用いて、ポリペプチドを発現する組織からそ
のポリペプチドを単離することができる。

【００７５】モノクローナル抗体を調製する場合、連続
細胞培養系により産生される抗体を提供するいずれの方
法も用いることができる。例えば、ハイブリドーマ法
（Kohler,G.およびMilstein,C.、Nature，256：495-497
（1975））、トリオーマ法、ヒトＢ−細胞ハイブリドー
マ法（Kozborら、Immunology Today，4：72（1983））
およびＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Coleら、MONOCLONAL
ANTIBODIES AND CANCERTHERAPY，７７-９６頁、Alan
R.Liss,Inc,（1985））が挙げられる。さらに、単鎖抗
体の製造について記載されている方法（米国特許第４,
９４６,７７８号）を用いて、本発明の免疫原性ポリペ
プチド生成物に対する単鎖抗体を製造することができ
る。また、トランスジェニックマウス、または他の哺乳
動物を含む他の生物を用いて、本発明の免疫原性ポリペ
プチド産物に対するヒト化抗体を発現させてもよい。ア
フィニティークロマトグラフィーにより単離および／ま
たは精製する場合、前記した抗体を用いて、ポリペプチ
ドを発現するクローンを単離または同定してもよく、あ
るいは抗体を固体支持体に結合させることにより本発明
のポリペプチドを精製してもよい。また、ｈＲＡＤ５４
に対する抗体を用いて、色素性乾皮症およびブルーム症
候群、ヴェルナー症候群（早老）およびα−サラセミア
症候群を伴うＸリンクした精神遅滞（X-linked Mental
Retardation withα-thalassemia Syndrome：ＡＴＲ−
Ｘ）のごとき癌−プローン症候群（cancer-prone syndr
omes）；ならびに乳癌のごとき癌を阻害することができ
る。

【００７６】結合分子およびアッセイｈＲＡＤ５４をこれに相互作用するタンパク質を単離す
るために使用することができる；この相互作用は阻害の
ための標的となり得る。ｈＲＡＤ５４と他の因子の間の
タンパク質−タンパク質相互作用の阻害剤は、ｈＲＡＤ
５４活性の調節のための医薬品の開発に用いることがで
きる。かくして、本発明は、ｈＲＡＤ５４に結合する分
子の同定方法も提供する。分子をｈＲＡＤ５４に結合さ
せるタンパク質をコードする遺伝子は、当業者に知られ
た多くの方法、例えば、リガンドパニング（panning）
およびＦＡＣＳソーティングにより、同定することがで
きる。かかる方法は多くの実験室用マニュアル、例え
ば、Coliganら、CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY
１，第５章（１９９１）に記載されている。

【００７７】例えば、酵母２ハイブリッドシステムが、
転写活性化因子の活性を復元するのに用いる、インビボ
での第１の試験タンパク質と第２の試験タンパク質との
間の相互作用を検出するための方法を提供する。この方
法は、米国特許第５,２８３,１７３号に開示されてお
り；試薬はClontechおよびStratageneから市販されてい
る。簡単には、ｈＲＡＤ５４ｃＤＮＡをＧａｌ４転写
因子ＤＮＡ結合領域に融合させ、酵母細胞中で発現させ
る。問題の細胞から得られたｃＤＮＡライブラリーメン
バーをＧａｌ４のトランス活性化領域に融合させる。ｈ
ＲＡＤ５４と相互作用可能なタンパク質を発現するｃＤ
ＮＡクローンは、Ｇａｌ４活性の復元およびＧａｌ４−
ｌａｃＺなどのレポーター遺伝子の発現のトランス活性
化をもたらす。

【００７８】別法は、組換えｈＲＡＤ５４を用いてλgt
１１、λＺＡＰ（Stratagene）または同等のｃＤＮＡ発
現ライブラリーをスクリーニングすることからなる。組
換えｈＲＡＤ５４タンパク質またはそのフラグメントを
ＦＬＡＧ、ＨＳＶまたはＧＳＴなどの小さなペプチドタ
グに融合させる。ペプチドタグは心筋クレアチンキナー
ゼなどのキナーゼについての都合のよいリン酸化部位を
有しており、あるいはそれらをビオチン化できる。組換
えｈＲＡＤ５４を³²［Ｐ］または標識されていないＰを
用いてリン酸化し、ストレプトアビジンまたはそのタグ
に対する抗体で検出することができる。λgt１１ｃＤＮ
Ａ発現ライブラリーを問題の細胞から作成し、組換えｈ
ＲＡＤ５４とともにインキュベートし、洗浄し、次い
で、ｈＲＡＤ５４と相互作用するｃＤＮＡクローンを単
離する。かかる方法は当業者に慣用的なものである。例
えば、Sambrookらを参照のこと。

【００７９】もう一つの方法は、哺乳動物発現ライブラ
リーをスクリーニングすることである。この方法におい
ては、ｃＤＮＡを哺乳動物プロモーターとポリアデニル
化部位の間のベクターにクローンし、ＣＯＳまたは２９
３細胞にて一時的にトランスフェクションされる。４８
時間後、結合タンパク質を、固定かつ洗浄した細胞を標
識したｈＲＡＤ５４と一緒にインキュベーションするこ
とで検出する。好ましい具体例においては、ｈＲＡＤ５
４をヨウ素化し、結合ｈＲＡＤ５４の検出をオートラジ
オグラフィーを介して検出する。Simsら、Science，24
1：585-589（1988）およびMcMahanら、EMBO J.，10：28
21-2832（1991）を参照のこと。このように、問題の結
合タンパク質をコードするｃＤＮＡを含むｃＤＮＡプー
ルを選択し、各プールをさらに分割し、つづいて一時的
なトランスフェクション、結合およびオートラジオグラ
フィーのサイクルにより問題のｃＤＮＡを単離すること
ができる。別法として、完全なｃＤＮＡライブラリーを
哺乳動物細胞にトランスフェクションし、プレートに結
合したＥＬＦ３を含む皿上で細胞をパニングすることに
よって問題のｃＤＮＡを単離できる。洗浄後に結合して
いる細胞を溶解させ、プラスミドＤＮＡを単離し、細菌
中で増幅し、単一のｃＤＮＡクローンが得られるまでト
ランスフェクションおよびパニングのサイクルを繰り返
す。Seedら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA，84：3365
（1987）およびAruffoら、EMBO J.，6：3313（1987）
を参照のこと。結合タンパク質が分泌される場合、結合
または中和アッセイが一時的にトランスフェクションさ
れた細胞からの上清をアッセイするために確立される
と、類似するプール方法によりそのｃＤＮＡを得ること
ができる。上清をスクリーニングする一般的方法は、Wo
ngら、Science，228：810-815（1985）に開示されてい
る。

【００８０】もう一つの別法は、細胞からのｈＲＡＤ５
４と直接相互作用するタンパク質を単離することであ
る。ｈＲＡＤ５４のＧＳＴまたは小さいペプチドタグと
の融合タンパク質を製造し、ビーズ上に固定化する。問
題の細胞からの生合成的に標識された、または標識され
ていないタンパク質抽出物を調製し、ビーズとインキュ
ベートし、バッファーで洗浄する。ｈＲＡＤ５４と相互
作用するタンパク質はビーズから特異的に溶出し、ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥによって解析する。結合相手の一次アミノ
酸配列データをマイクロシークエンシングによって得
る。所望により、細胞性タンパク質のチロシンリン酸化
などの機能的応答を誘発する物質で細胞を処理できる。
かかる物質の一例は、成長因子またはインターロイキン
−２などのサイトカインである。

【００８１】もう一つの別の方法はイムノアフィニティ
ー精製法である。組換えｈＲＡＤ５４を標識または標識
していない細胞抽出物とインキュベートし、抗ＥＬＦ３
抗体で免疫沈降させる。その免疫沈降物をプロテインＡ
−セファロースで回収し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析す
る。標識されていないタンパク質をビオチン化により標
識化し、ストレプトアビジンを含むＳＤＳゲル上で検出
する。結合相手のタンパク質をマイクロシークエンシン
グにより解析する。さらに、当業者に知られている標準
的生化学的精製工程をマイクロシークエンシングの前に
使用してもよい。さらにもう一つの別法は、ペプチドラ
イブラリーを結合相手についてスクリーニングすること
に関する。組換えタグ付きまたは標識されたｈＲＡＤ５
４を用いて、ｈＲＡＤ５４と相互作用するペプチドまた
はホスホペプチドライブラリーからペプチドを選択す
る。そのペプチドを配列決定し、相互作用するタンパク
質にて見いだされるコンセンサスペプチド配列を同定す
る。

【００８２】アゴニストおよびアンタゴニスト−アッセ
イおよび分子本発明のｈＲＡＤ５４を用いて、この酵素の活性化剤
（アゴニスト）または阻害活性剤（アンタゴニスト）を
スクリーニングすることもできる。強いアンタゴニスト
には、ｈＲＡＤ５４にとても関連するタンパク質、すな
わち、酵素活性を失った酵素の断片が含まれる。潜在的
アンタゴニストはまた、アンチセンス法を用いて調製さ
れたアンチセンス構築物も包含する。アンチセンス法を
用いて、３重ヘリックス形成により、またはアンチセン
スＤＮＡまたはＲＮＡ（いずれの方法もポリペプチドの
ＤＮＡまたはＲＮＡへの結合をベースとしている）によ
り遺伝子発現を制御することができる。例えば、ポリヌ
クレオチド配列の５’コーディング部分は、本発明の成
熟ポリペプチドをコードしており、約１０ないし４０塩
基対の長さのアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを
設計するのに用いられる。ＤＮＡオリゴヌクレオチド
は、転写に関する遺伝子の領域に相補的であるように設
計され（３重ヘリックス − Leeら、Nucl.Acids Res.，
6：3073（1979）；Cooneyら、Science，241：456（198
8）；およびDervanら、Science，251：1360（1991）を
参照のこと）、それによりｈＲＡＤ５４の転写および製
造を阻害する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド
は、インビボにてｍＲＮＡとハイブリッド形成し、ｍＲ
ＮＡ分子の該酵素への翻訳を遮断する（アンチセンス
− Okano、J.Neurochem.，56：560（1991）；Oligodeox
ynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expre
ssion，CRC Press，Boca Raton，ＦＬ（1988）を参照の
こと）。前記したオリゴヌクレオチドはまた、アンチセ
ンスＲＮＡまたはＤＮＡがインビボにて発現されてｈＲ
ＡＤ５４の生成を阻害するように、細胞にデリバリーす
ることができる。

【００８３】もう一つの潜在的アンタゴニストは、リガ
ンドに近寄り難いようにし、正常な生物学的活性が妨げ
られる、該酵素に結合する小さな分子である。小さな分
子の例として、小さなペプチドまたはペプチド様分子が
挙げられるが、これに限定されるものではない。ｈＲＡ
Ｄ５４のアンタゴニストには、ｈＲＡＤ５４の可溶性の
形体、例えば、リガンドに結合し、リガンドと膜結合性
ｈＲＡＤ５４との反応を阻害するようなフラグメント酵
素が含まれる。ｈＲＡＤ５４のアンタゴニストは、色素
性乾皮症およびブルーム症候群、ヴェルナー症候群（早
老）およびα−サラセミア症候群を伴うＸリンクした精
神遅滞（X-linked Mental Retardation withα-thalass
emia Syndrome：ＡＴＲ−Ｘ）のごとき癌−プローン症
候群（cancer-prone syndromes）；ならびに乳癌のごと
き癌の様々な治療と予防に適用できる。

【００８４】加えて、本発明は、過剰なｈＲＡＤ５４活
性に関係した異常な状態を治療する方法であって、前記
した阻害化合物（アンタゴニスト）を医薬上許容される
担体と共に、該酵素の活性を阻害するか、または第２シ
グナルを阻害し、それにより異常な状態を緩和するのに
効果的な量にて対象に投与することからなる方法を提供
する。一般的にｈＲＡＤ５４アゴニストは細胞を高増殖
状態に誘導することが好ましい病気や不調の治療や予防
に適用できる。本発明はまた、ｈＲＡＤ５４とその活性
の低発現に関係した異常な状態を治療する方法であっ
て、前記した阻害化合物（アンタゴニスト）を、該酵素
を活性化し、異常な状態を緩和するのに効果的な量にて
対象に投与することからなる方法を提供する。

【００８５】組成物とキットｈＲＡＤ５４の可溶性体、そのような酵素を活性化また
は阻害する物質は、可溶性の医薬上許容される担体との
組み合わせで適用される。そのような組成物は、治療上
効果的な量のポリヌクレオチドまたは物質、そして、医
薬上許容される担体または賦形剤を含有する。そのよう
な担体とは、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、
水、グリセロール、エタノールおよびその組み合わせを
意味するが、これに限定されるものではない。処方は投
与方法に適していなければならない。投与方法による適
当な担体の選択は当業者に慣用的になされる。本発明は
さらに、１またはそれ以上の前記した本発明の組成物を
充填した１またはそれ以上の容器からなる医薬パックお
よびキットに関する。

【００８６】投与本発明のポリペプチドおよび他の化合物を単独で、ある
いは治療化合物などの他の化合物と組み合わせて用いて
もよい。医薬組成物は、例えば、とりわけ、局所的、経
口的、経肛門的、経膣的、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮
下、経鼻内または皮内経路による投与を含め、効果的か
つ都合のよい方法で投与してもよい。一般に、組成物
を、少なくとも約１０μｇ／ｋｇ体重の量で投与する。
大抵の場合、一日に付き約８ｍｇ／ｋｇ体重を越えない
量で組成物が投与されるであろう。好ましくは、大抵の
場合、投与量は、一日当たり約１０μｇ／ｋｇ体重ない
し約１ｍｇ／ｋｇ体重である。最適用量は、症状、重篤
度、投与経路、合併症などを考慮して、各治療様式につ
いての標準的方法および症状により決定されることが理
解されよう。

【００８７】遺伝子治療ＥＬＦ３ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ポリペプチ
ドであるアゴニストおよびアンタゴニストを、しばしば
「遺伝子治療」と呼ばれる治療様式において、かかるポ
リペプチドを発現させることにより、本発明にて使用す
ることができる。かくして、例えば、患者からの細胞
を、ＤＮＡまたはＲＮＡなどのポリヌクレオチドで操作
し、ポリペプチドをエクスビボでコードしてもよい。次
いで、その操作された細胞をそのポリペプチドで治療す
べき患者に与えてもよい。この具体例において、例え
ば、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレ
トロウイルスプラスミドベクターの使用により、細胞を
エクスビボで操作してもよい。かかる方法は当該分野に
おいてよく知られており、本発明におけるそれらの使用
は本明細書の教示から明らかである。

【００８８】同様に、当該分野において知られた方法に
より、インビボでのポリペプチドの発現のために細胞を
インビボで処理してもよい。例えば、本発明のポリヌク
レオチドを、上記のように、複製欠損レトロウイルスベ
クター中での発現のために操作してもよい。ついで、レ
トロウイルス発現構築物を単離し、本発明のポリペプチ
ドをコードするＲＮＡを含有するレトロウイルスプラス
ミドベクターで形質導入したパッケージング細胞中に導
入し、そのパッケージング細胞が問題の遺伝子を含有す
る感染性ウイルス粒子を産生するようにしてもよい。こ
れらの産生細胞を、インビボでの細胞の操作およびイン
ビボでのポリペプチドの発現のために患者に投与しても
よい。本発明のポリペプチドを投与するためのこれらの
方法および他の方法は、本発明の教示から当業者に明ら
かである。

【００８９】本明細書において前記したレトロウイルス
プラスミドベクターが由来するレトロウイルスは、モロ
ニーネズミ白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス
肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイ
ルス、ギボンサル白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイル
ス、アデノウイルス、ミエロ増殖性肉腫ウイルス（Myel
oproliferative Sarcoma Virus）および哺乳動物腫瘍ウ
イルスを包含するが、これらに限定されない。好ましい
具体例において、レトロウイルスプラスミドベクターは
モロニーネズミ白血病ウイルス由来のものである。かか
るベクターは、ポリペプチド発現のための１個またはそ
れ以上のプロモーターを含む。用いることのできる適当
なプロモーターは、レトロウイルスＬＴＲ；ＳＶ４０プ
ロモーター；およびMillerら、Biotechniques，7：980-
990（1989）に記載されたヒトサイトメガロウイルス
（ＣＭＶ）プロモーターを包含するが、これに限定され
ない。ヒストン、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩおよびβ−
アクチンプロモーターを包含するが、これに限定されな
い真核細胞プロモーターなどの細胞プロモーターもまた
用いることができる。使用できる付加的なウイルス性プ
ロモーターは、アデノウイルスプロモーター、チミジン
キナーゼ（ＴＫ）プロモーター、およびＢ１９パーボウ
イルスプロモーターを包含するが、これらに限定されな
い。適当なプロモーターの選択は、本明細書に含まれる
教示から当業者に明らかであろう。

【００９０】本発明のポリペプチドをコードする核酸配
列は適当なプロモーターの制御下に置かれるであろう。
使用できる適当なプロモーターは、アデノウイルス主要
後期プロモーターのごときアデノウイルスプロモータ
ー；またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ
ーのごとき異種プロモーター；呼吸器合胞体ウイルス
（ＲＳＶ）プロモーター；ＭＭＴプロモーター、メタロ
チオネインプロモーターのごとき誘導可能プロモータ
ー；熱ショックプロモーター；アルブミンプロモータ
ー；ＡｐｏＡＩプロモーター；ヒトグロビンプロモータ
ー；単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーターのごと
きウイルス性チミジンキナーゼプロモーター；レトロウ
イルス性ＬＴＲ（本明細書で前記した修飾レトロウイル
スＬＴＲを包含する）；β−アクチンプロモーター；お
よびヒト成長ホルモンプロモーターを包含するが、これ
らに限定されない。プロモーターは、ポリペプチドをコ
ードする遺伝子を制御する元来のプロモーターであって
もよい。

【００９１】レトロウイルスプラスミドベクターを用い
てパッケージング細胞系に形質導入し、産生細胞系を形
成する。トランスフェクションされてもよいパッケージ
ング細胞の例は、ＰＥ５０１、ＰＡ３１７、Ｙ−２、Ｙ
−ＡＭ、ＰＡ１２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ−１９−１７
−Ｈ２、ＹＣＲＥ、ＹＣＲＩＰ、ＧＰ＋Ｅ−８６、ＧＰ
＋ｅｎｖＡｍ１２、およびMiller,A.、Human Gene Ther
apy，1：5-14（1990）に記載されたＤＡＮ細胞系を包含
するが、これらに限定されない。当該分野で知られてい
るいずれかの手段によりベクターをパッケージング細胞
中に形質導入してもよい。かかる手段は、エレクトロポ
レーション、リポソームの使用、ＣａＰＯ4沈殿を包含
するが、これらに限定されない。別法において、レトロ
ウイルスプラスミドベクターをリポソーム中に封入し、
あるいは脂質と結合させ、ついで、宿主に投与してもよ
い。

【００９２】産生細胞系は、ポリペプチドをコードする
核酸配列（複数でも可）を含む、感染性レトロウイルス
ベクター粒子を産生するであろう。かかるレトロウイル
スベクター粒子を用いて、インビトロまたはインビボの
いずれかにおいて真核細胞に形質導入してもよい。形質
導入された真核細胞はポリペプチドをコードする核酸配
列（複数でも可）を発現するであろう。形質導入されう
る真核細胞は、胚幹細胞、胚カルシノーマ細胞、ならび
に造血幹細胞、肝細胞、線維芽細胞、筋芽細胞、ケラチ
ノサイト、内皮細胞、および気管支上皮細胞を包含する
が、これらに限定されない。

【００９３】

【実施例】本発明を実施例を用いてさらに詳しく説明す
る。実施例は、特定の具体例を参照することにより本発
明を説明するためにのみ提供される。これらの例示説明
は本発明の特定の態様を説明するものであるが、開示し
た発明の範囲を限定または制限するものではない。本明
細書中の特定の用語は、上記の定義において説明されて
いる。すべての実施例は標準的方法を用いて行われ、特
記しないかぎり、それらの方法は当業者によく知られて
おり、通常的なものである。以下の実施例の通常的方法
は、例えばSambrookらの標準的な実験室マニュアルに記
載されているようにして行うことができる。

【００９４】新規ＤＮＡ修復酵素のデータベースサーチ酵母ＤＮＡ切断修復酵素ＲＡＤ５４（ジーンバンク番号
Ｍ６３２３２）に由来するアミノ酸配列を用いて、Gene
tics computer Group（ＧＣＧ、ウィスコンシン大学）
により設計されたＴＦＡＳＴＡコンピューター・ソフト
ウェアで、Human Genome Sciences（ＨＧＣ）コンピュ
ーター・データベースをスクリーニングした。ＨＧＳデ
ータベースは、４００以上のｃＤＮＡライブラリーに由
来するｃＤＮＡの多様なコレクションを同定する、発現
した配列タグ（ＥＳＴ）のヌクレオチド配列情報を有す
る（Adams,M.D.、Kelley,J.M.、Gocayne,J.D.、Dubnic
k,M.、Polymeropoulos,M.H.、Xiao,H.、Merril,C.R.、W
u,A.、Olbe,B.、Moreno,R.F.ら、Comlementary ＤＮＡ
sequencing：expressed sequence tags and human geno
me project，Science 252:1651-1656（1991））。一つ
のＥＳＴ（Ｃ２と称する）はＲＡＤ５４タンパク質配列
に対して有意に相同であるが同一ではないことが見出さ
れた：１２６の重複アミノ酸において同一性が６０％。
ＤＮＡ配列レベルでは、ＥＳＴは酵母ＲＡＤ５４に対し
て４９２塩基について５１％の同一性を有することが見
出された。別の比較においては、ヒトＤＮＡ切断修復酵
素ＥＲＣＣ６（ジーンバンク番号Ｌ０４７９１）（Troe
lstra,C.、van Gool,A.、de Wit,J.、Vermeulen,W.、Bo
otsma,D.およびHoeijmakers,J.H.、推定ヘリカーゼのサ
ブファミリーのメンバーであるＥＲＣＣ６は、コーケン
症候群および活性遺伝子の優先的修復に関与する、Cell
71:939-953（1992））に由来するアミノ酸配列をも用
いてＴＦＡＳＴＡでＨＧＳデータベースをスクリーニン
グした。酵母ＲＡＤ５４に対する相同の同一ＥＳＴは、
ＥＲＣＣ６タンパク質配列に対して有意に相同である
が、同一ではないことが示された（８４の重複アミノ酸
において３６．９％の同一性）。ＤＮＡ配列レベルで
は、ＥＳＴはヒトＥＲＣＣ６に対して２２０の塩基につ
いて６４％の同一性を有することが見出された。ＦＡＳ
ＴＡプログラム（ＧＣＧ、ウィスコンシン大学）を用い
てＥＳＴ配列をＨＧＳデータベースと比較し、さらに２
個のＥＳＴが重複配列で同一であることが見出された。
LaserGeneソフトウェアパッケージ（ＤＮＡstar）のＳ
ＥＱＭＡＮルーチンを用いて、３個のＥＳＴを４０１塩
基の単一のコンセンサス配列に変換する。

【００９５】ｃＤＮＡクローニングＣ２ＥＳＴの５’および３’末端に由来するプライマー
を用いて、末梢血ｃＤＮＡについて、通常のプラークハ
イブリダイゼーションにより正常の睾丸ＩＤＲ２ｃＤＮ
Ａライブラリー（クロンテック）をスクリーニングする
ためのＰＣＲ誘導プローブを作った。最初に8個のクロ
ーンを単離し、製造者の指示書に従ってｐＤＲ２プラス
ミド中切断した。８個の陽性クローンの配列分析によ
り、これらの一つがオープン・リーディング・フレーム
の全てをコードする３．２ｋｂのインサートを含有する
ことが示された。色素−デオキシヌクレオチドキットお
よびＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（ペルキン・エルマ
−）を用いて、サイクル・シークエンシング・プログラ
ムにより、このクローンの二本鎖配列決定を実施した。
自動アプライドバイソステムシークエンサー（Applied
Biosystems Sequencer）３７７型によりヌクレオチド配
列を決定した。

【００９６】ノーザン分析ｈＲＡＤ５４オープン・リーディング・フレームの全て
を含有するｃＤＮＡクローンのインサートに由来するプ
ローブを用いて、製造者のプロトコルに従って、多重組
織ノーザンブロット（クロンテック）をハイブリダイズ
した。フィルターを０．５ＸＳＳＣ−０．１ＸＳＤＳで
６０℃、１．５時間洗浄し、オートラジオグラフィーに
１６時間供した。染色体マッピングＣ２ＥＳＴ由来のプライマーＣ２ｆ（ＡＧＣＣＣＴＧ
ＡＣＴＴＴＧＴＣＴＴＣＡ）（配列番号：５１）および
Ｃ２ｒ（ＧＣＴＴＧＴＴＣＡＴＣＣＡＴＴＧＧＣＴ）
（配列番号：５２）はヒトゲノムＤＮＡにおいて１２０
ｂｐの生成物を増幅できる。これらをGeneBridge４放射
ハイブリドマッピングパネル（リサーチ・ジェネティク
ス）のＰＣＲスクリーニングに用いた。ＰＣＲ反応を以
下の条件で、最終用量１０ｍｌで実施した：９５℃、５
分、次いで９４℃、１５秒；５７℃、２０秒；７２℃、
３０秒の３５サイクル；続いて７２℃で５分の延長。
１．５％寒天ゲル上でＰＣＲ生成物を電気泳動し、臭化
エチジウム染色により可視化した。スクリーニングの結
果を統計プログラムＲＨＭＡＰを用いて分析し、染色体
ｌｐ３２上でマーカーＤ１Ｓ４４３に連鎖した（ＬＯＤ
スコア＞３．０）。ゲノムクローンの単離プライマーＣ２ｆおよびＣ２ｒをヒトゲノムＢＡＣライ
ブラリー（リサーチ・ジェネティクス）のＰＣＲスクリ
ーニングに使用した。４個の陽性クローンを同定し、そ
れらの２個からのＤＮＡをQiagen Plasmid Midi kitを
用いて精製し、配列決定分析のための鋳型に用いた。

【００９７】エクソンイントロン境界およびイントロン
の大きさの決定ｃＤＮＡ由来のプライマーをゲノムＢＡＣクローンの二
方向配列決定に使用した。エクソンイントロン境界を、
ゲノム生成物の配列がｈＲＡＤ５４ｃＤＮＡ配列と異
なる部位での、コンセンサススプライス接合の存在によ
り同定した。コンピュータープログラムＦＡＳＴＡを配
列比較に用いた。直接的な配列決定またはイントロン−
エクソンＰＣＲ生成物のゲル電気泳動によりイントロン
の大きさを決定した。ＳＳＣＰ分析１７種の乳癌細胞系および２０種の散在性乳房腫瘍から
のゲノムＤＮＡを、変異に関して分析した。個々のエク
ソンを増幅するプライマをイントロン配列に基づいて設
計した。最終容量１０ｍｌ、ゲノムＤＮＡ２０ｎｇで、
０．５単位のＴａｑＤＮＡポリメラーゼ、ｄＡＴＰ、
ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ各々２００ｍＭ、ｄＣＴＰおよびの
（ａ−３２Ｐ）ｄＣＴＰ（０．５ｍＣｉ／反応）２．０
ｍＭを用いてＰＣＲ反応を実施した。サイクルは以下の
とおりである：９５℃で５分、次いで９４℃、１５秒；
５７℃、２０秒；７２℃、２０秒の２２サイクル；続い
て７２℃で５分の延長。ＳＳＣＰ生成物を０．５ＸＭＤ
Ｅゲル（ＦＭＣバイオプロダクツ）に１６時間かけ、オ
ートラジオグラフィーによりＫＯＤＡＫＸ−ＡＲ５フ
ィルムに曝露して可視化した。

【００９８】

【配列表】

（１）一般的情報：（ｉ）出願人：スミスクライン・ビーチャム・コーポレ
イショントーマス・ジェファーソン・ユニバーシティ（ｉｉ）発明の名称：ｈＲＡＤ５４（ｉｉｉ）配列の数：５２（ｉｖ）連絡先：（Ａ）宛名：スミスクライン・ビーチャム・コーポレ
イション（Ｂ）通り名：スウェード・ランドロード７０９番（Ｃ）都市名：キング・オブ・プルシア（Ｄ）州名：ペンシルベニア州（Ｅ）国名：アメリカ合衆国（Ｆ）郵便番号：１９４０６−０９３９（ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム：（Ａ）媒体形態：ディスケット（Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパティブル（Ｃ）オペレーティングシステム：ＤＯＳ（Ｄ）ソフトウェア：ＦａｓｔＳＥＱバージョン１．
５（ｖｉ）現出願データ：（Ａ）出願番号：（Ｂ）出願日：（Ｃ）分類：（ｖｉｉ）先の出願データ（Ａ）出願番号：６０／０３０，６７６（Ｂ）出願日：１３，１９９６（ｖｉｉｉ）代理人等の情報：（Ａ）氏名：ウィリアム・ティー・ハン（Ｂ）登録番号：３４,３４４（Ｃ）代理人等における処理番号：ＡＴＧ５００２４（ｉｘ）テレコミュニケーションの情報：（Ａ）電話番号：６１０−２７０−５２１９（Ｂ）テレファックス番号：６１０−２７０−５０９０

【００９９】（２）配列番号１の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１２１２塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１： GGTCTTGGCG GGTCGGTGAG TCTTGGCGGC TGTTAACGCG CGCTTTGGGA ACAGGAAGGT 60 TGAGAGAGAG GTGCTGGGGT CTGCGTCTAT CTCTGTCGCT CTTTTCAGCC CCTCCTGGTA 120 TTCCCCTCCT AACCTGGGTT TTTTACACGC CCGCGTGGCT TCCTGCTCGA CCTCCCTGAG 180 TCTGATCCTG GTTTCCACCT CCAGCCCTGG GAAATTTCCT TTCTCCAGAC TCGCCCTCCC 240 CACCCGGGCC TCGGACTTTC ACCCCAGCTT CTCTCTCCTG GCCAGTGATT ACCCACCCCC 300 AATCCCACCC CGCCCCGCCG CGCAACTACC TCCTCCCTTC ACCCGGACTG GGACCATCAT 360 CCCCACTCCA CTCCGCCCAG TCTGGGACTC CACCTGCCTC CTCCCCAATC CCACACTAAT 420 CTCTGCTTGG TCTCTTCCTC TTTGGCCTAA TCTCTCGTCT CGGCTTATTG GGGACGGCCA 480 CTCTCACAGT TTGGTTCCAA ACACCAGTTC CTGGATGGAT TCCCGCCATC CATGCCCCCT 540 CTTTAATTAG CCGGTCCTCT CAATAATGTA GCAGCCCCCT CTACAGATTA GACCCTGGTC 600 CTACACTCTT AGCCGCTGCC TGCTTTTGAC CTTTGGCTCA TGGGTACTTG ACGTTTTAAA 660 CTCCTAGGCC CAGGATGGTA AGTGTGGGCC TAGGGGAGAC TGGGAATAGC CCTGGGTCAG 720 GGTCTAGTAG GCCTAGGCTG CAGGATCCTT GCAGGCACTG TTTCTGTTCT CCCTTTACAG 780 AGGAGGAGCT TGGCTCCCAG CCAGCTGGCC AAGAGAAAAC CTGAAGGCAG GTCCTGTGAT 840 GATGAAGACT GGCAACCTGG CCTAGTGGTG AGCACTCAAG GGGACAGGGA AGGTGGGTAG 900 AGCTGTTTGG ACAGAAAAGA AGCCAGGATT TGGTTTCTAG GGTTACATAN CCAATTCCAG 960 ATGCCTCTTT TGTATGTTCA ATAAACTTTT AGTGAGTACT TACTATGTGC CAGGCATTGA 1020 ACAAGATTAG TAAAATCTTT ATCCTCAGGG TTAGTCACTA NAAGCTAATA TAGCCTCAGT 1080 TTTCCTGGTG GGAAAAGATA AGCAAAAGAG CCAGTTGGAT TGGACCTTTT GACTCTGCTT 1140 GGAAAAAAGG GCTACACAAC AGCAATTATC AGCTGGCTCT TTTGCTCTTT GTCCCCTGCC 1200 CAGTGTCACA GA 1212

【０１００】（２）配列番号２の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４３５塩基対（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２： AATTTAGCAC AGTGCCTGGC ACTTAATAAG CACTTCAAGT GTTAGTAACC ATTATGGTGA 60 TTTCTGTGGT TTTCTAGACT TCACCTTTCC CAATTCTCTC TCCTAGACTC CTAGGAAACG 120 GAAATCCAGC AGTGAGACCC AGATCCAGGA GTGTTTCCTG TCTCCTTTTC GGAAACCTTT 180 GAGTCAGCTA ACCAATCAAC CACCTTGTCT GGACAGCAGT CAGCATGTAA GCCAGAACTG 240 CAACCTGCAT GTGTATGTCT GTGCCCAGTC ACTCAGCCTA GGTAGACTCC TGTCCCTGTA 300 CACTCCCTCA GTGCTTTCTA GAGTGGCCAG AAGACACACA TCTGTAGGGG CTTTGGACCT 360 GCCCACAGCT GCTGGGGCCT GCTTAGAGAG GTGTGCCTGA CTTGTGCCTG GTTTATAGTA 420 GCTACATGGG CACCA 435

【０１０１】（２）配列番号３の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：３５９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３： TCCCCTGGAT ATTTGTAGAA CCTTACATAA AGCCTCGAAG ATGGATGCTG TTGTACAAAA 60 CCTAATGTGA AGCATATCAT GATATTGTCC CATAACATCT CCAGTCAGTC CTGAATCCTT 120 GTTTCTCCTT TCTTTTTAGG AAGCATTTAT TCGAAGCATT TTGTCAAAGC CTTTCAAAGT 180 CCCCATTCCA AATTATCAAG GTAAAATGGA GGTTTTTCTG TTTTTGAAAT CAGTCATATG 240 TACGTGTGCC TGAATAAATT AAAAACCTGC TTTTGTAAAT ACAAGCTTAG CTGGGAATTG 300 AAGGTGCCAG TCCAGCGGTG GCTGTGTTTG GGGTGACCCT CCTGAGGCCT GCATGAAAA 359

【０１０２】（２）配列番号４の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２００８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４： CTGAGGCAGG AGAATTGCTT GAACCTGGGA GGCAGAGGTT GCAGTGAGCC GAGATTGTGC 60 CACTGCACTC CAGCCTGGGC AACAAAGTGA GACTCCATCT CAAAAAAAAA AAAAAGCTGA 120 ATGGGATAAT GGTCATATAG AGATGCCCAA ACTGAGTTTG GAGGCATTCT CAGAGAGAGA 180 GGGTCATATG GGAGCTCGGG AAAGGTTATG TGAAGGACAA GTATTTGATC ATGGGCTTGC 240 TGGAGCTCCT AAACATAGAT TCAGGTGACG GAATGATTAT TGGTTTGTAG GTCCTCTGGG 300 CTCTCGAGCA TTGGGCCTGA AAAGGGCTGG GGTCCGCCGG GCCCTCCATG ACCCCCTGGA 360 AAAAGATGCC TTGGTTCTGT ATGAGCCTCC CCCGCTGAGC GCTCATGACC AGCTGAAGCT 420 TGACAAGTAT GTGCACTGGT ATTTCATAAG CAGTTTTGGT TCTCTGTATA TGCACGCATA 480 CTTGGGAGGG CAGAGGGTAT TTTGGTGTGA TTTCTTTTTA GGATTGACAT ATGTTTTCAG 540 AGAGTAGATG ATTGGGGAAG GAGACTGCCT GGGGAAGAGC CTGTGGTCAT GTCCAGTGAG 600 TGGGCATTCC TCATCCCCTC CTGCCTTCCC AGGATGCTCA CTCAGGAGGA GGAGTGATTG 660 AGGTGATGAC ACAGGGAACC CATCCCTCTC TGAGCTAACT TTCTAACTCC TAAAGTAGGA 720 ACTTGCTATG GTTTTACGAT TTATCACCCA AGAAGGTCTT CTTTTAGGCA GCTGCCTCTG 780 TTGCCTCCGG ATCACCAGGA CACAGCTTCC TGAGGGTGCT CCCTTGCCCA TGTCTGAGCA 840 CGCTGTTTTC TTTGCTGTGT TTTCTCAGGG AGAAACTCCC TGTCCATGTG GTTGTTGACC 900 CTATTCTCAG TAAGGTTTTG CGGCCTCATC AGAGAGAGGT AAATGAGGGT GAGGGGAACG 960 AGGTATGGGC TATGGGCTGA GCCTGGGAGA CTACCATCCC TGGGACAGCA GCAGCGTAGG 1020 TGCCAAAGTG GACTGAAGGC TGTTATTCTC TAGGGAGTGA AATTCCTGTG GGAGTGTGTC 1080 ACCAGTCGGC GCATCCCTGG CAGCCATGGC TGCATCATGG CTGATGAGAT GGGCCTAGGA 1140 AAGACGCTGC AGTGCATCAC ATTGATGTGG ACACTTTTAC GCCAGAGTCC AGAGTGCAAG 1200 CCAGAAATTG ACAAGGCAGT GGTGGTGTCG CCTTCCAGCC TGGTGAAGAA CTGGTACAAT 1260 GAGGTTGGGA AATGGCTCGG AGGGAGGATC CAACCTCTGG CCATCGATGG AGGATCTAAG 1320 GATGAAATAG ACCAAAAGCT GGGTACGGAG CCCTATTCNA AGATGGCTGC ACTCTCCTGC 1380 ACAGCCTGCT GCTTTCTTAC GTGTATGCTC ATTTATGGCC AGGGTGGAGG GCAATGCAGG 1440 GGTAGAAGAA AAGAGAATTT CCATTGAAAA TAGTTGAAGT GGAGTCAGTT GTTTCCAGGC 1500 TAAATTAAAG AACTGTCTAA TTGTTTTTTT TGTTTTTTTT TTTCTCAAAA GATTCTGAAT 1560 TGTTCCCTTT ACACCTTTTC TGTTGTAGAA GGATTCATGA ACCAGCGTGG AGCCAGGGTG 1620 TCTTCTCCCA TCCTCATCAT TTCCTATGAG ACCTTCCGCC TTCATGTTGG AGTCCTCCAG 1680 AAAGGAAGTG TTGGTCTGGT CATATGTGAC GAGGTACTTG ACTCTCACCA GTCTGGGTGG 1740 TANGAGAAAA TCTGTCAAAA TCTCTTCACT GAGTATTGCC TTCCAAGGGC TGTGCTACTC 1800 ACTGGGGAAT GCTGAAGACA GGATGCTGCC TTGGAGACAA GTGACAGGGA NAGCCTGTGC 1860 ATACCAAAAT ACAAGATACT GTCTGCCAAA AGAGGGCTGA AACAATGCTT ANAACCCTGA 1920 GGAGAGTGAG ATACTGGGGG CTGATTGGCT TTGTTGCCTC CGGATAGTAT TCCTACACTA 1980 AAGAAGGACC TTGAAGGGTG GGTGGCAA 2008

【０１０３】（２）配列番号５の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８４０塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号５： AGCCTCGACC TCCTGGACTC AAGCGATCTT CCCATCTCAG CCTCCCAAGT AGCTGGGGCT 60 ATGGGTGTAA GCTACTATGC CCAGCTAATT TTTGTATGTT TTGTAGAGAT GGGGTTTCAC 120 CACACTGGCC AGGCTGGTCT GGAACTCCTG GGCTCAAGTG ATCCACCTGT CTCGGCCTCC 180 CCAAAGTGCT GGGATTACAG GCATGAGCCA CGGCGCCCGG CCTGGAATGT TTTTGACTCC 240 TCTTTTCCTG TCTACATGAG ACTTTGCTAC CGTATAGGGA ATGCCACATT GCGCTCTGAA 300 TAAGGATTCT CTTGGCAGGG ACACAGGCTC AAGAACTCTG AGAATCAGAC TTACCAAGCC 360 CTGGACAGCT TGAACACCAG CCGGCGGGTG CTCATCTCCG GAACTCCCAT CCAGAATGAT 420 CTGCTTGAGT ATTTCAGCTT GGTACATTTT GTTAATTCCG GCATCCTAGG TAAGAACTAG 480 CCTTGTTTGC CACATCAGAG AGGAGCCCTG CCTTGTCTTT GGGAGTATAA CTCCAGCTGA 540 GGGAGAGAAA GAAGAGAATG CTAGTTATAT GTGGGTCACT AGCATTCTTG TAGGAAGGCT 600 TCTCTTGTCA GGGGAGTAGC AAAGCCATTG GGGAGGCCTT GGATCTGCTG AGCAACTCAG 660 CAAAGCCCAT GTTGGCCATT TTTCCATTGC AGAGGTGGCA GGGGCTATAC AGGGCAATGG 720 TGTCATGATG AGCTGAGGGT GGAATTATTA TTTTTGTTCC TCAGATCCTA GCTCCCTTAG 780 AAGAGTTTTG GCCTCAGAGC AAGCTCTGTC TTGGGCAGAC GTGTGTGTTT TAAAAATCAT 840

【０１０４】（２）配列番号６の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：５０９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号６： AGGTAGTCTG CCATCACTAG CTGTGGGAAA ATCATTCCTT ATCCACATTC TTCTGTTTTC 60 CTTCTCTGCC TGNGTGTAGG GACTGCCCAT GAATTCAAGA AGCATTTTGA ATTGCCAATT 120 TTGAAGGGTC GAGACGCTGC TGCTAGTGAG GCAGACAGGC AGCTAGGAGA GGAGCGGCTG 180 CGGGAGCTCA CCAGCATTGT GAATAGGTAA TGACCTTAAG CGAAGTCATT AGAATTGCCT 240 CCCAAACCAT CCATGGCCAA TCCTTTGGGG GCTTTGCCTC TCTAGAGCCC TCAAAGGCTG 300 GGATTCTAGG AAGGGAGTGG GTTCTGTGTC CTAACTATGG CCACTGAATA AACAAGGGAG 360 TCTTGGAGGT GAAGTGCCTG CTTTCTTTCT GGCTTGGGCT CTGTGGTCTG GTTTTGGTCT 420 GTTTATCAGC CTGCTGAGGA AGCTTTTCTC TGATGCTGCT GGACTTCTTG AGCAAAGTAT 480 ACCTTGGAGC ATTACTAGTA TTTCAGAAG 509

【０１０５】（２）配列番号７の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：５７２塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号７： CTTGGTCCTT TGGGTGGTAG CTTTTATTCC AGTAGTTAGC ATGGCAATTT TACCAGCCTC 60 TTGCCTTTTT ATCCTGTTTT CTCTAGATGC CTGATACGGA GGACTTCTGA TATCCTTTCT 120 AAATATCTGC CTGTGAAGAT TGAGCAGGTC GTTTGTTGTA GGTACTGAAC TCAACTGAAA 180 GATGTGGAGT GGGTCAAAGC CTAGCTCCTG AAGCATGGAT GGGATCTCAA GGTGTTCTCA 240 GAGGGCAGGA GGGTGGTCTA GTTTTTCCAC TGACCCAGCT GCCTTTTTTA GGCTGACACC 300 CCTTCAGACT GAGTTATACA AGAGGTTTCT GAGACAAGCC AAACCGGCAG AAGAATTGCT 360 TGAGGGCAAG ATGAGTGTGT CTTCCCTTTC TTCCATCACC TCGCTAAAGA AGCTTTGTAA 420 TCGTGAGTTG GGCTTGTGTC CTGGTGTCCT CTGTGAGAGT GAGCAAGGGA GGGTAGGTTC 480 CTGTAGTGGC CTGGCAACCC TCACTAAAAC TCGTCCAGAG TCATCCTCAT AGAGGCCACA 540 TGTGATTCCA ACCCTACCCA AGGCATGAAC CC 572

【０１０６】（２）配列番号８の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８５１塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号８： CTGTTATAGC TCCCTTCTTG TTGGGAGAAC ACATTAGTGA GTGAGATTGT CCATCCATCG 60 TCCCAGATGG CACCGACTAT ATCCTGTTGG AATTTGGTAG GATGAAGATC AAGCAAGTCT 120 GATGTTGAGG AAGGCCTTTT GGGCTATGCT TCTAGAGGGA GTTCTAGTGA ACACTGAAGT 180 GGAAACTTCA GAAAGCAAAG TATCTGGGTT TTGTTTTGTT TTCTCCCAGA TCCAGCTCTA 240 ATCTATGATA AGTGTGTGGA AGAGGAGGAT GGCTTTGTGG GTGCCTTGGA CCTCTTCCCT 300 CCTGGTTACA GCTCTAAGGC CCTGGAGCCC CAGCTGTCAG GTGACCCTTT TCATACCAGT 360 ATTTGGGCTT CTCTAGGAGG AGGGTGGGAG ATTTTTTTTT GTGCTAGGGC TGTCCTGTTT 420 CAAGGCAGGA TATCAAGAGT AAGAAGCCTG GGCCATTGGG ACAGCCAGTA GGGGACTGCT 480 GGTTGCTGCT TCTTCCCAGG TAAGATGCTG GTCCTGGATT ATATTCTGGC GGTGACCCGA 540 AGCCGTAGCA GTGACAAAGT AGTGCTGGTG TCGAATTACA CCCAGACTTT GGATCTCTTT 600 GAGAAGCTGT GCCGTGCCCG AAGGTAGGGA AGATCCTAAC CAGGATGCCA AAGGGGGATA 660 TACCCCTCCC CTACTGTCTG TCTATTTCTG ATTTGTGGAT GTGGGCCAAG ATCTGGGCAC 720 ATAAGGGCTT TCCCTGGAGA TATCTTCCCT TATTGCTATG ATGGCCTCAG CTCTATCTCC 780 AAGTAGAAGA TCCCCTAGTC CTTCAGGTAC TCCCTTAGGA AAGAGTCTTG GCCTCTAGCT 840 CCCTGCCCCT GCCTTTGGGA GCTTAGGGCC TCAAGCATGG TTATTTCAGT CCCTTCAGTG 900 GCTCTCCAAG GGACTCTGCT TTCTTGGGTC TTTTTAAAAA AATTTTTATT TTTAATTTTT 960 TTTCCCCCTA ATCATTGAAG CTTTATTTTC TTGGGTCTCG AATCCCCCTT CAGGTACTTA 1020 TACGTCCGCC TGGATGGCAC GATGTCCATT AAGAAGCGAG CCAAGGTTGT AGAACGCTTC 1080 AATAGTCCAT CGGTAAATGC ACATCCCCGT CCCCACACCA CCAATGCAGT ATCATCAGAA 1140 TTAAGGAATG ATAGAGAAGC TATAAGGGGT TACCTTGATT TTTTTTTTTT TTAATTCCCC 1200 TAGTGGATAA AGTAGGATTT GTCTGGTTGG TGATGGCTGG GCTGGAAACT GACTGTGTGT 1260 GTTGGGATTG GCTGGCTGGT GAGCAGATAA ACTGGTGGTT TTCACAATTG GTACTGAGTA 1320 GTATAGAGGC ATGAGGGAGG AGCTGGTTGG GCTGAGCAGG ATCCCAGTTT AGGCTATAAG 1380 GGTTCCTTTT CTCCTGTTTC TTCTCTTTTC CAGAGCCCTG ACTTTGTCTT CATGCTGAGC 1440 AGCAAAGCTG GGGGCTGTGG CCTCAATCTC ATTGGGGCTA ACCGGCTGGT CATGTTTGAC 1500 CCTGACTGGA ACCCAGCCAA TGATGAACAA GCCATGGCCC GGGTCTGGCG AGATGGTCAA 1560 AAGAAGACTT GCTATATCTA CCGCCTGCTG TCTGTAAGGA TGGTGATAGT AGTCATAGTA 1620 GGGGTGGGTC ATGGAACGAG ATCTTCAGGA CCATCTTGTT CCTTAGTGCC TCTCTTTGGC 1680 CTTTCTGCCT CTAGCAGTAG CCAAGCTATG GGCCCAGAAG TGAGTCTTTT ATTCTTCTGT 1740 TCTCCCTCCC CTTCTCTCCA CCCCATTCCC TCAAACCATT CTTACTGTGC CATCTGGACA 1800 CCTGTTCAGT ACATCCTTTT CACAGGACAC CTGCTTCCCT CATACATGAT T 1851

【０１０７】（２）配列番号９の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：９９６塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号９： CCTGACGGGA TTTAGCCAGG CCCTGGGACC CTTCATTAGT ATAGAAAGTA GCCTGGGTGG 60 GCAGACTATT CATGTCATGT TCTCAGGAGA CAGACTGGGA AAATGGACCT CAGCTGAGTA 120 GAGATAATGT TCTGGGACTC ATACTTTTTA TTCATCTCCT CTTCTCGGGT AGCTGTAGTT 180 TCAACCCTTT GGTTTTCCTG CTCCCTTTTT ATGAGGATGG CTAAGCGCTG TATCTTTTGA 240 CATTCCCCAC CTCCTCTTTC CCCAGGCAGG GACCATTGAG GAGAAGATCT TCCAGCGTCA 300 GAGCCACAAG AAGGCACTGA GCAGCTGTGT GGTGGATGAG GAGCAGGATG TAGAGCGCCA 360 CTTCTCTCTG GGCGAGTTGA AGGAGCTGTT TATCCTGGAT GAAGCTAGCC TCAGTGACAC 420 ACATGACAGG TGGGGAAGTG CCCTAACCAT TATCTCTAAG CTACCCACAC AGTATGGAGA 480 TGGGATCTGT ANTGACTTCA GCTGTGCCTT CTGTCCCTAG GTTGCACTGC CGACGTTGTG 540 TCAACAGCCG TCAGATCCGG CCACCCCCTG ATGGTTCTGA CTGCACTTCA GACCTGGCAG 600 GGTGGAACCA CTGCACTGAT AAGTGGGGGC TCCGGGATGA GGTACTCCAG GCTGCCTGGG 660 ATGCTGCCTC CACTGCTATC ACCTTCGTCT TCCACCAGCG TTCTCATGAG GAGCAGCGGG 720 GCCTCCGCTG ATAACCAGCT GGTCTGGGTG TAGCTCTTAG AGGAAGGAGA TAGGGAAAAG 780 GGGCTCCTTG CTCCACAGGG CCCTGTTGAA TTTTGTTCTT TGGGAGAAAA TCATCAAGAA 840 GGGCTGCATG ATGTTTGCCC AAAATTTATT TTATAAGAAA AACTTTTTTG GTTAAAAAAA 900 AGAATAAAGG TATGAAAGGG TTTGAGGCCT GCAGCAGCAG TGTGGTAAGC CCATCANGGC 960 AATAAGCCCC CTACTACTTC TCTAAAGCCT GGGTGC 996

【０１０８】（２）配列番号１０の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：７５０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ペプチド（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：Ｎ−ターミナル（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１０： Met Arg Arg Ser Leu Ala Pro Ser Gln Leu Ala Lys Arg Lys Pro Glu 1 5 10 15 Gly Arg Ser Cys Asp Asp Glu Asp Trp Gln Pro Gly Leu Val Thr Pro 20 25 30 Arg Lys Arg Lys Ser Ser Ser Glu Thr Gln Ile Gln Glu Cys Phe Leu 35 40 45 Ser Pro Phe Arg Lys Pro Leu Ser Gln Leu Thr Asn Gln Pro Pro Cys 50 55 60 Leu Asp Ser Ser Gln His Glu Ala Phe Ile Arg Ser Ile Leu Ser Lys 65 70 75 80 Pro Phe Lys Val Pro Ile Pro Asn Tyr Gln Gly Pro Leu Gly Ser Arg 85 90 95 Ala Leu Gly Leu Lys Arg Ala Gly Val Arg Arg Ala Leu His Asp Pro 100 105 110 Leu Glu Lys Asp Ala Leu Val Leu Tyr Glu Pro Pro Pro Leu Ser Ala 115 120 125 His Asp Gln Leu Lys Leu Asp Lys Glu Lys Leu Pro Val His Val Val 130 135 140 Val Asp Pro Ile Leu Ser Lys Val Leu Arg Pro His Gln Arg Glu Gly 145 150 155 160 Val Lys Phe Leu Trp Glu Cys Val Thr Ser Arg Arg Ile Pro Gly Ser 165 170 175 His Gly Cys Ile Met Ala Asp Glu Met Gly Leu Gly Lys Thr Leu Gln 180 185 190 Cys Ile Thr Leu Met Trp Thr Leu Leu Arg Gln Ser Pro Glu Cys Lys 195 200 205 Pro Glu Ile Asp Lys Ala Val Val Val Ser Pro Ser Ser Leu Val Lys 210 215 220 Asn Trp Tyr Asn Glu Val Gly Lys Trp Leu Gly Gly Arg Ile Gln Pro 225 230 235 240 Leu Ala Ile Asp Gly Gly Ser Lys Asp Glu Ile Asp Gln Lys Leu Glu 245 250 255 Gly Phe Met Asn Gln Arg Gly Ala Arg Val Ser Ser Pro Ile Leu Ile 260 265 270 Ile Ser Tyr Glu Thr Phe Arg Leu His Val Gly Val Leu Gln Lys Gly 275 280 285 Ser Val Gly Leu Val Ile Cys Asp Glu Gly His Arg Leu Lys Asn Ser 290 295 300 Glu Asn Gln Thr Tyr Gln Ala Leu Asp Ser Leu Asn Thr Ser Arg Arg 305 310 315 320 Val Leu Ile Ser Gly Thr Pro Ile Gln Asn Asp Leu Leu Glu Tyr Phe 325 330 335 Ser Leu Val His Phe Val Asn Ser Gly Ile Leu Gly Thr Ala His Glu 340 345 350 Phe Lys Lys His Phe Glu Leu Pro Ile Leu Lys Gly Arg Asp Ala Ala 355 360 365 Ala Ser Glu Ala Asp Arg Gln Leu Gly Glu Glu Arg Leu Arg Glu Leu 370 375 380 Thr Ser Ile Val Asn Arg Cys Leu Ile Arg Arg Thr Ser Asp Ile Leu 385 390 395 400 Ser Lys Tyr Leu Pro Val Lys Ile Glu Gln Val Val Cys Cys Arg Leu 405 410 415 Thr Pro Leu Gln Thr Glu Leu Tyr Lys Arg Phe Leu Arg Gln Ala Lys 420 425 430 Pro Ala Glu Glu Leu Leu Glu Gly Lys Met Ser Val Ser Ser Leu Ser 435 440 445 Ser Ile Thr Ser Leu Lys Lys Leu Cys Asn His Pro Ala Leu Ile Tyr 450 455 460 Asp Lys Cys Val Glu Glu Glu Asp Gly Phe Val Gly Ala Leu Asp Leu 465 470 475 480 Phe Pro Pro Gly Tyr Ser Ser Lys Ala Leu Glu Pro Gln Leu Ser Gly 485 490 495 Lys Met Leu Val Leu Asp Tyr Ile Leu Ala Val Thr Arg Ser Arg Ser 500 505 510 Ser Asp Lys Val Val Leu Val Ser Asn Tyr Thr Gln Thr Leu Asp Leu 515 520 525 Phe Glu Lys Leu Cys Arg Ala Arg Arg Tyr Leu Tyr Val Arg Leu Asp 530 535 540 Gly Thr Met Ser Ile Lys Lys Arg Ala Lys Val Val Glu Arg Phe Asn 545 550 555 560 Ser Pro Ser Ser Pro Asp Phe Val Phe Met Leu Ser Ser Lys Ala Gly 565 570 575 Gly Cys Gly Leu Asn Leu Ile Gly Ala Asn Arg Leu Val Met Phe Asp 580 585 590 Pro Asp Trp Asn Pro Ala Asn Asp Glu Gln Ala Met Ala Arg Val Trp 595 600 605 Arg Asp Gly Gln Lys Lys Thr Cys Tyr Ile Tyr Arg Leu Leu Ser Ala 610 615 620 Gly Thr Ile Glu Glu Lys Ile Phe Gln Arg Gln Ser His Lys Lys Ala 625 630 635 640 Leu Ser Ser Cys Val Val Asp Glu Glu Gln Asp Val Glu Arg His Phe 645 650 655 Ser Leu Gly Glu Leu Lys Glu Leu Phe Ile Leu Asp Glu Ala Ser Leu 660 665 670 Ser Asp Thr His Asp Arg Leu His Cys Arg Arg Cys Val Asn Ser Arg 675 680 685 Gln Ile Arg Pro Pro Pro Asp Gly Ser Asp Cys Thr Ser Asp Leu Ala 690 695 700 Gly Trp Asn His Cys Thr Asp Lys Trp Gly Leu Arg Asp Glu Val Leu 705 710 715 720 Gln Ala Ala Trp Asp Ala Ala Ser Thr Ala Ile Thr Phe Val Phe His 725 730 735 Gln His Ser His Glu Glu Gln Arg Gly Leu Arg Ala Thr Gly 740 745 750

【０１０９】（２）配列番号１１の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１１： CTAATCTCTC GTCTCGGC 18

【０１１０】（２）配列番号１２の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１２： TGACCCAGGG CTATTCCCA 19

【０１１１】（２）配列番号１３の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１３： TAGGCTGCAG GATCCTTG 18

【０１１２】（２）配列番号１４の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１４： CTAGAAACCA AATCCTGGC 19

【０１１３】（２）配列番号１５の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１５： CCTGGCACTT AATAAGCAC 19

【０１１４】（２）配列番号１６の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１６： TGACTGGGCA CAGACATAC 19

【０１１５】（２）配列番号１７の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１７： CCATAACATC TCCAGTCAG 19

【０１１６】（２）配列番号１８の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１８： CAGGCACACG TACATATG 18

【０１１７】（２）配列番号１９の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号１９： CTGGAGCTCC TAAACATAG 19

【０１１８】（２）配列番号２０の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２０： GCGTGCATAT ACAGAGAAC 19

【０１１９】（２）配列番号２１の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２１： TTGCCCATGT GTGAGCAC 18

【０１２０】（２）配列番号２２の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２２： ACTTTGGCAC CTACGCTG 18

【０１２１】（２）配列番号２３の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２３： AGCGTAGGTG CCAAAGTG 18

【０１２２】（２）配列番号２４の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２４： AGTTCTTCAC CAGGCTGG 18

【０１２３】（２）配列番号２５の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２５： CTGCAGTGCA TCACATTGA 19

【０１２４】（２）配列番号２６の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２６： TAAGAAAGCA GCAGGCTG 18

【０１２５】（２）配列番号２７の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２７： AGATTCTGAA TTGTTCCC 18

【０１２６】（２）配列番号２８の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２８： GGCAATACTC AGTGAAGAG 19

【０１２７】（２）配列番号２９の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号２９： TACCGTATAG GGAATGCC 18

【０１２８】（２）配列番号３０の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３０： AAAGACAAGG CAGGGCTC 18

【０１２９】（２）配列番号３１の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３１： CTGCCATCAC TAGCTGTG 18

【０１３０】（２）配列番号３２の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３２： AAGGATTGGC CATGGATG 18

【０１３１】（２）配列番号３３の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３３： GCATGGCAAT TTTACCAGC 19

【０１３２】（２）配列番号３４の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３４： TTCAGGAGCT AGGCTTTG 18

【０１３３】（２）配列番号３５の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３５： ATCAAGGTGT TCTCAGAGG 19

【０１３４】（２）配列番号３６の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３６： TTGCTCACTC TCACAGAG 18

【０１３５】（２）配列番号３７の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３７： CTAGTGAACA CTGAAGTGG 19

【０１３６】（２）配列番号３８の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３８： GAAACAGGAC AGCCCTAG 18

【０１３７】（２）配列番号３９の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号３９： AAGAAGCCTG GGCCATTG 18

【０１３８】（２）配列番号４０の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４０： AGACAGACAG TAGGGGAG 18

【０１３９】（２）配列番号４１の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４１： TCCCCCTAAT CATTGAAGC 19

【０１４０】（２）配列番号４２の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４２： CTGATGATAC TGCATTGG 18

【０１４１】（２）配列番号４３の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４３： CAGGATCCCA GTTTAGGC 18

【０１４２】（２）配列番号４４の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４４： CTGAAGATCT CGTTCCATG 19

【０１４３】（２）配列番号４５の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４５： ATGGCTAAGC GCTGTATC 18

【０１４４】（２）配列番号４６の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４６： ACTGTGTGGG TAGCTTAG 18

【０１４５】（２）配列番号４７の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４７： AGTGCCCTAA CCATTATC 18

【０１４６】（２）配列番号４８の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４８： TGGAAGACGA AGGTGATA 18

【０１４７】（２）配列番号４９の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号４９： CCACTGCACT GATAAGTG 18

【０１４８】（２）配列番号５０の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１８塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号５０： ATGCAGCCCT TCTTGATG 18

【０１４９】（２）配列番号５１の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号５１： AGCCCTGACT TTGTCTTCA 19

【０１５０】（２）配列番号５２の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：一本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）分子タイプ：ｃＤＮＡ（ｉｉｉ）ハイポセチカル：なし（ｉｖ）アンチセンス：なし（ｖ）フラグメントタイプ：（ｖｉ）起源：（ｘｉ）配列の記載：配列番号５２： GCTTGTTCAT CCATTGGCT 19

【図面の簡単な説明】

【図１】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号１）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号１はエクソン１−２を含む。

【図２】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号１）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号１はエクソン１−２を含む。

【図３】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号２）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号２はエクソン３を含む。

【図４】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号３）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号３はエクソン４を含む。

【図５】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号４）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号４はエクソン５、６、７そして８を含
む。

【図６】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号４）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号４はエクソン５、６、７そして８を含
む。

【図７】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号５）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号５はエクソン９を含む。

【図８】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号６）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号６はエクソン１０を含む。

【図９】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を示
す（配列番号７）。大文字はエクソンを小文字はイント
ロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示さ
れる。配列番号７はエクソン１１、１２を含む。

【図１０】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を
示す（配列番号８）。大文字はエクソンを小文字はイン
トロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示
される。配列番号８はエクソン１３、１４、１５そして
１６を含む。

【図１１】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を
示す（配列番号８）。大文字はエクソンを小文字はイン
トロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示
される。配列番号８はエクソン１３、１４、１５そして
１６を含む。

【図１２】ｈＲＡＤ５４のゲノムヌクレオチド配列を
示す（配列番号９）。大文字はエクソンを小文字はイン
トロンを示す。エクソンを増幅するプライマーもまた示
される。配列番号９はエクソン１７、１８を含む。

【図１３】ｈＲＡＤ５４の推測されるアミノ酸配列を
示す（配列番号１０）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 14/52 Ｃ０７Ｋ 16/24 16/24 Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｔ 1/68 ＰＧ０１Ｎ 33/50 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (71)出願人 597177242 トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティＴｈｏｍａｓＪｅｆｆｅｒｓｏｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙアメリカ合衆国19107ペンシルベニア州フィラデルフィア、イレブンス・アンド・ウォールナット・ストリーツ (72)発明者カルロ・エム・クロースアメリカ合衆国19103ペンシルベニア州フィラデルフィア、デランシー・ストリート 1829番 (72)発明者リチャード・エイ、・フィシェルアメリカ合衆国19072ペンシルベニア州ペン・バレー、スプラーグ・ロード575番 (72)発明者デボラ・ラシオイタリア00162ローマ、ビア・ノメンターナ373番 (72)発明者デイビッド・ジェイ・ロビンスアメリカ合衆国19406ペンシルベニア州キング・オブ・プルシア、アブラムズ・ミル・ロード347番

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】サンプルをｈＲＡＤ５４をコードするＤ
ＮＡの変異について解析するために用いるＤＮＡ配列で
あって、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８およ
び９からなるＤＮＡ配列の少なくとも１５から３０以下
の連続する塩基のＤＮＡ配列を含有するＤＮＡ配列。
【請求項２】配列番号１−９を含むＤＮＡフラグメン
トの組み合わせ。
【請求項３】（ａ）配列番号１のポリヌクレオチドと
少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号２のポリヌクレオチドと少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号３のポリヌクレオチドと少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号４のポリヌクレオチドと少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号５のポリヌクレオチドと少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｆ）配列番号６のポリヌクレオチドと少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｇ）配列番号７のポリヌクレオチドと少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｈ）配列番号８のポリヌクレオチドと少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｉ）配列番号９のポリヌクレオチドと少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｊ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、
（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）のポリヌクレオチ
ドに対して相補性のポリヌクレオチド；および（ｋ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、
（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）のポリヌクレオチ
ドの少なくとも連続した１５塩基からなるポリヌクレオ
チド；からなる群より選択されるメンバーからなる単離ポリヌ
クレオチド。
【請求項４】（ａ）配列番号１のポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号２のポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号３のポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号４のポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号５のポリヌクレオチド；（ｆ）配列番号６のポリヌクレオチド；（ｇ）配列番号７のポリヌクレオチド；（ｈ）配列番号８のポリヌクレオチド；（ｉ）配列番号９のポリヌクレオチド；（ｊ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、
（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）のポリヌクレオチ
ドに対して相補性のポリヌクレオチド；および（ｋ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、
（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）のポリヌクレオチ
ドの少なくとも連続した１５塩基からなるポリヌクレオ
チド；からなる群より選択されるメンバーからなる単離ポリヌ
クレオチド。
【請求項５】請求項3記載のＤＮＡからなるベクタ
ー。
【請求項６】請求項５記載のベクターからなる宿主細
胞。
【請求項７】請求項６記載の宿主細胞からそのＤＮＡ
によってコードされるポリペプチドを発現させることを
特徴とするポリペプチドの製造法。
【請求項８】ポリペプチドを発現する細胞の製造法で
あって、細胞がベクター中に含まれるヒトｃＤＮＡによ
りコードされるポリペプチドを発現するように、該細胞
を請求項５に記載のベクターで形質転換またはトランス
フェクションすることからなる方法。
【請求項９】配列番号１０のポリペプチドに対するア
ゴニスト。
【請求項１０】配列番号１０のポリペプチドに対する
抗体。
【請求項１１】配列番号１０のポリペプチドに対する
アンタゴニスト。
【請求項１２】ｈＲＡＤ５４の必要な患者の治療方法
であって、配列番号１０のポリペプチドの治療上有効量
を該患者に投与することからなる治療方法。
【請求項１３】ポリペプチドをコードするＤＮＡを患
者に与え、インビボにて該ポリペプチドを発現させるこ
とにより、該ポリペプチドの治療上有効量を投与するこ
とからなる請求項１２記載の方法。
【請求項１４】ｈＲＡＤ５４ポリペプチドの阻害を必
要とする患者の治療方法であって、請求項１１記載のア
ンタゴニストの治療上有効量を該患者に投与することか
らなる方法。
【請求項１５】ｈＲＡＤ５４ポリペプチドの増加を必
要とする患者の治療方法であって、請求項９記載のアゴ
ニストの治療上有効量を該患者に投与することからなる
方法。
【請求項１６】配列番号１０のポリペプチドの発現に
関与する疾患または該疾患に対する感受性の診断方法で
あって、該ポリペプチドをコードする核酸配列における
変異を測定することからなる方法。
【請求項１７】宿主由来のサンプル中の配列番号１０
のポリペプチドの存在を分析することからなる診断方
法。
【請求項１８】個体の癌の遺伝的な素因を決定する方
法であって、配列番号１１−５０からなる群より選択されるヌレクオ
チド配列を有するオリゴヌクレオチドプライマーを用い
てＰＣＲにより個体のサンプル中のｈＲＡＤ５４変異を
検出することからなる方法。
【請求項１９】配列番号１１−５０からなる群より選
択される配列を有するオリゴヌクレオチド。