JPH10206745A

JPH10206745A - 走査型光学顕微鏡

Info

Publication number: JPH10206745A
Application number: JP9009520A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Sasaki; 浩佐々木
Original assignee: Olympus Optical Co Ltd
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 1997-01-22
Filing date: 1997-01-22
Publication date: 1998-08-07

Abstract

(57)【要約】【課題】蛍光クロストークを除去し、かつ、複数の励起
波長による各々の観察の時間的な遅れを抑えること。【解決手段】光源１からの光ビームを標本に照射し走査
機構７によって光ビームで走査する走査型光学顕微鏡で
あり、光源１から標本１２に至る光路の途中で２種以上
の励起波長の中から１種づつ波長を選択する波長選択手
段４ａ，４ｄと、２種以上の励起波長で夫々励起される
各蛍光を個別に検出すべく設けられた複数の検出器１
７，１８と、標本１２から発した蛍光をその励起波長に
対応した検出器へ導くように波長選択動作に連動して光
路を選択する光路選択手段４ｂ，４ｃと、走査機構７に
よる走査に同期して１フレーム走査、１ライン走査又は
１画素毎に選択励起波長及び選択光路を切換える手段１
００とを具備して構成される。

Description

【発明の詳細な説明】【０００１】【発明の属する技術分野】本発明は、多重染色された蛍
光試料を複数の励起波長を用いて励起して各励起波長に
対応して発生した複数の蛍光を観察する走査型光学顕微
鏡に関する。【０００２】【従来の技術】異なる蛍光色素により多重染色された試
料を複数の励起波長で励起して、発生した複数の蛍光を
複数の検出器で検出する走査型光学顕微鏡があり、例え
ばＵＳＰ５，１２７，７３０に開示されている。【０００３】図１８に、そのスキャンヘッド部の概略構
成を示す。４８８ｎｍ、５６８ｎｍ、６４７ｎｍ等の波
長を同時発振するクリプトンアルゴンレーザ５０１から
発した多波長レーザ光を励起フィルタブロック５０２に
入射して特定の励起波長を抽出する。励起フィルタブロ
ック５０２で３種類の励起フィルタ５０３ａ，５０３
ｂ，５０３ｃを選択的に光路上に配置することにより励
起波長を切り換える。【０００４】５０３ａは、４８８ｎｍと５６８ｎｍを透
過させる励起フィルタで、図１９（１）の上段（二帯域
励起）５５３ａ，５５３ｂにその透過特性を示してい
る。また５０３ｂは、４８８ｎｍの波長のみを透過させ
る励起フィルタで、図１９（１）の中段（４８８ＤＦ１
０）５５１にその透過特性を示す。また、５０３ｃは５
６８ｎｍの波長のみを透過させる励起フィルタで図１９
（１）の下段（５６８ＤＦ１０）５５２にその透過特性
を示す。【０００５】励起フィルタブロック５０２の一つの励起
フィルタで抽出した励起波長をフィルタブロック＃１に
入射して検体５０５側へ反射させる。フィルタブロック
＃１の２色ダイクロイックミラー５０４で、４８８ｎｍ
及び５６８ｎｍの励起光を反射させ、第１，第２の試薬
で多重染色した検体５０５に照射する。２色ダイクロイ
ックミラー５０４は図１９（２）の５５５に示す透過特
性を有しており、４８８ｎｍのラインにより励起される
第１の試薬から発せられた蛍光の５００〜５４０ｎｍの
波長範囲と、５６８ｎｍのラインにより励起される第２
の試薬から発せられた蛍光の５８５〜６５０ｎｍの波長
範囲とを透過させる。【０００６】フィルタブロック＃１を透過した蛍光をフ
ィルタブロック＃２に入射し、ダイクロイックミラー５
２１により５００〜５４０ｎｍの光を反射させ検出器５
０６に入射し、５８５〜６５０ｎｍの光を透過させ検出
器５０７に入射し、４８８ｎｍと５６８ｎｍの反射光は
バリアフィルタ５２２，５２３によりカットされる。フ
ィルタブロック＃２内のダイクロイックミラー５２１の
特性を図１９（３）の上段（５６１）に、バリアフィル
タ５２２，５２３の特性を図１９（３）の中段（５６
２）、下段（５６３）に示す。【０００７】以上の構成により、励起フィルタ５０３ａ
が光路中にある時は、２色ダイクロイックミラー５０４
を、４８８ｎｍ、５６８ｎｍのレーザー波長が図中下方
に反射され、標本５０５に照射される。この波長により
励起され、標本に染色されている第１の試薬から発せら
れた蛍光のうち５００〜５４０ｎｍの範囲及び第２の試
薬から発せられた蛍光の５８５〜６５０ｎｍの範囲が、
２色ダイクロイックミラー５０４を透過する。そして、
フィルタブロック＃２のダイクロイックミラー５２１に
より５００〜５４０ｎｍの光は反射して検出器５０６で
検出され、５８５〜６５０ｎｍの光は透過して検出器５
０７で検出される。【０００８】そして、図示しないガルバノミラーによ
り、検体５０５を２次元的に走査し、各走査位置での検
出光を電気信号に変換し、図示しないモニタ上に２次元
像として表示することになる。その時、それぞれの検出
器５０６，５０７により検出された信号を色分けして一
つのモニタに表示することにより、第１の試薬と第２の
試薬のそれぞれから発せられた蛍光を識別することが可
能となる。【０００９】【発明が解決しようとする課題】このように、従来は第
１の試薬の発する蛍光の波長の５００〜５４０ｎｍの範
囲を検出しているが、フレオレスセインの発する蛍光波
長の範囲は５００〜６００ｎｍ以上まで分布しているの
で、長波長側蛍光は第１の試薬の発する蛍光として検出
されるだけでなく、第２の試薬の発する蛍光（５８５〜
６５０ｎｍ）を検出すべき検出器５０７に混入されてし
まう不具合がある。この現象を一般に蛍光クロストーク
といい、２重染色標本を観察する時に短波長側の蛍光が
長波長側の蛍光にかぶることが知られている。【００１０】この蛍光クロストークを完全に除去するに
は、励起フィルタ５０３ｂを光路に入れ、４８８ｎｍの
レーザ波長のみを用いて第１の試薬の発する蛍光のみを
検出器５０６で検出して観察し、次に励起フィルタ５０
３ｃを光路に入れ５６８ｎｍのレーザ波長のみを用いて
第２の試薬の発する蛍光のみを検出器５０７で検出して
観察することになる。【００１１】なお、４８８ｎｍで観察する時は、検出器
５０７側にも第１の試薬の蛍光が混入してくる（５８５
ｎｍ以上の長波長側）ので、検出器５０７側の検出機能
を停止するか、フィルタブロック＃２のダイクロイック
ミラー５２１を全反射ミラーに変更し、すべての蛍光を
検出器５０６側に反射させる必要が生じる。この場合、
５６８ｎｍの観察時は、フィルタブロック＃２のダイク
ロイックミラー５２１を取り去り、空穴にしておかなけ
ればならない。【００１２】上記したように、４８８ｎｍと５６８ｎｍ
による観察を２回に分けて行うと、２つの観察の間に時
間的遅れを生じる。標本に動き等がある場合、この遅れ
により正確な観察ができなくなる。また、走査型光学顕
微鏡の特徴である共焦点効果（光軸方向に分解能を持
つ）を利用して、一平面走査観察後、ステージを移動さ
せる等して焦点面を標本の厚さ方向に所定量ずらし、さ
らに一平面走査観察を行い、再び焦点面を所定量動かし
て一平面走査観察を行うという工程を繰り返し、厚さの
ある標本の断層像の観察を行う方法がある。通常、この
ような観察をＸＹＺ観察といい、焦点面の移動と、走査
の繰り返し作業は、１つのコンピュータにより制御さ
れ、移動量（１回のずらし量）と移動範囲（総移動量）
を入力することにより、一連の作業を人手をかけること
なく、コンピュータで行う。従って、４８８ｎｍと５６
８ｎｍによる観察を２回に分けて観察する場合、４８８
ｎｍで一連の観察を行った後、５６８ｎｍで一連の観察
を行うことになり、焦点移動回数が増えるのに応じて時
間的な遅れが大きくなってしまう。また、焦点面移動機
能の位置再現性が悪いと、４８８ｎｍと５６８ｎｍで、
別の平面を観察してしまうことになる。【００１３】本発明は、以上のような実情に鑑みてなさ
れたもので、蛍光クロストークを除去できるとともに、
複数の励起波長による各々の観察の時間的な遅れを抑え
ることのできる走査型光学顕微鏡を提供することを目的
とする。【００１４】【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するために以下のような手段を講じた。本発明は、標
本を光ビームで走査する走査型光学顕微鏡において、２
種以上の励起波長の中から１種づつ選択する波長選択手
段及び前記２種以上の各々の励起波長により励起される
各々の蛍光を、それぞれ所望の光検出器へ導く光路選択
手段を設け、各々の励起波長及びその励起波長により励
起される各々の蛍光をそれぞれ対応する光検出器へ導く
励起波長及び光路の設定を走査に同期して１フレーム走
査毎に、１ライン走査毎に又は１画素受光中に切り換え
て各々の蛍光を対応する光検出器で検出する。【００１５】本発明によれば、各々の励起波長とその励
起波長により励起される各々の蛍光をそれぞれ対応する
光検出器へ導くための励起波長及び光路の設定を走査に
同期して１フレーム走査毎又は１ライン走査毎又は１画
素受光中に切り換えて、２つ以上の蛍光色素により染色
された標本の各々の蛍光を、個々に対応する光検出器で
検出しているので、蛍光クロストークを完全に除去でき
るとともに、各励起波長による観察の時間的な遅れを極
力少なく、またはなくすことができる。【００１６】波長選択手段及び光路選択手段を回転板の
単体で構成する。光源から標本に至る光路と標本から発
した蛍光の通過する蛍光光路とを同時に遮る回転板を配
置し、当該回転板において光源から標本に至る光路が遮
られる部分を含む同一円上に各々波長帯域の異なる励起
波長が通過する励起フィルターを設け、回転板において
蛍光光路が遮られる部分を含む同一円上であって各励起
フィルターが光路上に配置されたときに蛍光光路を遮る
各々の位置にそのとき光路上に配置された励起フィルタ
ーに対応した検出器へ蛍光を導く反射ミラー又は空穴を
設ける。【００１７】この発明によれば、回転板を回転させるこ
とにより励起波長選択と光路選択とが機械的に連動する
ので高速切換えが可能になる。波長選択手段及び光路選
択手段をガルバノミラー、音響光学偏向素子等の偏向素
子を用いて構成する。波長選択手段は、各々波長帯域の
異なる励起波長が通過する複数の励起フィルターと、光
源側から入射する光ビームを偏向させていずれかの励起
フィルターへ入射する偏向素子とを含んだ構成とし、光
路選択手段は、標本から入射する蛍光をその励起波長に
対応した検出器へ導くように偏向させる偏向素子を含ん
だ構成とする。【００１８】【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。（第１の実施の形態）図１（ａ）に実施の形態に係る走
査型光学顕微鏡の全体構成を示している。【００１９】この走査型光学顕微鏡は、クリプトンアル
ゴンレーザ１で４８８ｎｍ、５６８ｎｍ等の波長を発振
し、クリプトンアルゴンレーザ１の発振したレーザ光を
ビームエクスパンダ２で所望のビーム径に拡大して反射
ミラー３によって４８８ｎｍ又は５６８ｎｍの波長を選
択するターレット４に入射している。【００２０】図１（ｂ）にターレット４を同図（ａ）に
示す矢印５方向から見た平面図を示している。ターレッ
ト４は、２つの励起フィルタ４ａ，４ｄ及び反射ミラー
４ｃ、空穴４ｂを持つ回転板で構成されており、モータ
１０２により回転制御される。励起フィルタ４ａは４８
８ｎｍ、励起フィルタ４ｄは５６８ｎｍをそれぞれ透過
させる特性を持つ。【００２１】励起フィルタ４ａと反射ミラー４ｃとは回
転軸を挟んで対称位置に配置され、励起フィルタ４ｄと
空穴４ｂとは回転軸を挟んで対称位置に配置され、さら
に励起フィルタ４ａと励起フィルタ４ｄとは９０度の角
度でずれている。【００２２】ターレット４の励起フィルタで抽出した励
起波長を励起ダイクロイックミラー６で反射させて走査
光学系７に導いている。なお、励起ダイクロイックミラ
ー６は図１９（２）に示す特性を持ち、４８８ｎｍと５
６８ｎｍを反射し、フレオレスセインより発する蛍光
（５００〜５４０ｎｍ）とＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMより発
する蛍光（５８５ｎｍ以上）を透過する特性を持つ。【００２３】走査光学系７はＸ，Ｙの２次元に光ビーム
を走査する偏向光学素子として１組のガルバノメータス
キャナミラーで構成されており、これらのスキャナミラ
ーは瞳投影レンズ９、結像レンズ１０により対物レンズ
１１の瞳と共役関係になっている。走査光学系７でＸ，
Ｙ方向に偏向させた光ビームをミラー８を介して瞳投影
レンズ９に入射する。１２は標本、１３はステージを示
している。【００２４】また、励起ダイクロイックミラー６の走査
光学系７側からみて透過側には結像レンズ１４を配置し
ている。結像レンズ１４でミラー１５を介して焦点ピン
ホール１６上にビームを結像させる。１７，１８は光検
出器を示し、４８８ｎｍ及び５６８ｎｍの不要な反射光
をカットするバリアフィルタ１９，２０がそれぞれ前面
に配置される。【００２５】コンピュータ１００は、ターレット４のモ
ータ１０２と走査光学系７のミラー駆動部とを設定に基
づいて制御する。例えば、走査光学系７で１フレーム毎
にターレット４を９０度回転させる。このような走査光
学系７とターレット４との連動関係をコンピュータ１０
０によって管理している。また、コンピュータ１００は
光検出器１７，１８から出力される信号をカラー処理し
てモニタ１０１にカラー表示させる機能を備える。【００２６】次に、以上のように構成された走査型光学
顕微鏡の動作について説明する。図１に励起波長４８８
ｎｍによりフレオレスセインを励起し、その蛍光を検出
している状態を示し、図２に５６８ｎｍによりＴＥＸＡ
ＳＲＥＤ^TMを励起し、その蛍光を検出している状態を
示している。【００２７】図１に示すように、ターレット４は４８８
ｎｍに透過特性を持つ励起フィルタ４ａが反射ミラー３
と励起ダイクロイックミラー６との間の光路上に配置さ
れ、反射ミラー４ｃが焦点ピンホール１６を通過した光
の進行路上に配置されている。図１においては、クリプ
トンアルゴンレーザ１を発振したレーザ光はビームエク
スパンダ２により所望の径に拡大され、ミラー３で下方
に反射される。そして、ターレット４上の励起フィルタ
４ａにより４８８ｎｍの波長が選択される。そして、励
起ダイクロイックミラー６で反射して走査光学系７を通
ってからミラー８で反射して瞳投影レンズ９から結像レ
ンズ１０を通り、対物レンズ１１により標本１２上にビ
ームスポットとして結像する。【００２８】そして、標本１２上のフレオレスセインに
より発せられた蛍光が、前記光路を逆にたどり励起ダイ
クロイックミラー６を透過する。励起ダイクロイックミ
ラー６を透過した蛍光が結像レンズ１４、ミラー１５を
介して共焦点ピンホール１６を通過する。このとき、こ
の蛍光の進行路上にはターレット４上のミラー４ｃが配
置されているので、ミラー４ｃで反射されバリアフィル
タ１９で４８８ｎｍの反射光をカットされた後、光検出
器１７で検出される。【００２９】走査光学系７を構成するガルバノメータス
キャナミラーを振ることにより、光ビームを標本１２上
で２次元方向に走査することになり、各走査位置におい
ての光検出器１７により検出される光量を電気信号に変
換する。【００３０】以上のように、図１の状態でＸＹ方向に１
回走査し、フレオレスセインより発した蛍光を、光検出
器１７で検出した直後にコンピュータ１００からの指示
でモータ１０２によりターレット４を９０度回転させ、
５６８ｎｍを選択する励起フィルタ４ｄと空穴４ｂを各
光路上に配置させる。【００３１】図２はターレット４を図１の状態から９０
度回転させた状態を示している。このような状態でクリ
プトンアルゴンレーザ１を発振した波長のうち５６８ｎ
ｍの波長が励起フィルタ４ｄにより選択され励起ダイク
ロイックミラー６を反射し標本１２上にビームスポット
として結像する。そして、標本１２上のＴＥＸＡＳＲＥ
Ｄ^TMにより発せられた蛍光が励起ダイクロイックミラー
６を透過し、結像レンズ１４、ミラー１５を介して共焦
点ピンホール１６を通過する。このとき、蛍光の光路上
にはターレット４上の空穴４ｂが配置されているので、
ターレット４上の空穴４ｂを透過し、バリアフィルタ２
０で５６８ｎｍの反射光をカットされ光検出器１８で検
出される。【００３２】ここでも、走査光学系７のガルバノメータ
スキャナミラーを振ることで、光ビームを標本１２上で
２次元に走査し、各走査位置において光検出器１８によ
り検出される光量を電気信号に変換してコンピュータ１
００に入力する。【００３３】図１、図２に示した２つの工程を走査光学
系７の走査に同期して、１フレーム走査毎にターレット
４を９０度回転させることにより行い、光検出器１７，
１８で検出した電気信号をコンピュータ１００に順次取
り込む。そして、たとえば、光検出器１７によるものを
緑色に光検出器１８によるものを赤色に疑似カラー処理
してモニタ１０１上に重ねて表示する。【００３４】このような実施の形態によれば、走査光学
系７で１フレーム走査を行い、フレオレスセインの発し
た蛍光を光検出器１７で取得した直後に励起フィルタ４
ａ，４ｄと光検出器１７，１８への光路の設定を切り換
えて、もう一度、１フレーム走査を行い、ＴＥＸＡＳ
ＲＥＤ^TMの発した蛍光を光検出器１８で取得しているの
で、フレオレスセインの発した蛍光は光検出器１８側に
かぶる（混入する）ことなく光検出器１７で検出され、
またＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMの発した蛍光もすべて光検出
器１８で検出されるので、蛍光クロストークを完全に除
去できる。また、ターレット４を回転させるだけで使用
する励起波長と検出器を簡単に切換えることができるの
で、フレオレスセインとＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMの観察の
時間差を極力少なくできる。【００３５】（第２の実施の形態）標本を光軸方向の複
数のスライス面でスライスしたスライス画像を取得する
共焦点走査型レーザ顕微鏡において、各スライス面で１
フレーム走査毎に第１の実施の形態と同様の２波長切り
換え観察を行う。【００３６】この実施の形態は、さらにステージ１３を
光軸方向に一平面の観察毎に移動させる観察方法（ＸＹ
Ｚ観察）を実現するＸＹＺ観察プログラムをコンピュー
タ１００に登録しておく。【００３７】図３（ａ）は標本１２の上部を観察すると
きの状態を示しており、２１がその観察面となってい
る。観察面２１に焦点を合わせた状態で、ターレット４
を回転させて図１に示す状態にする。そして、励起フィ
ルタ４ａで抽出した４８８ｎｍの励起光を標本１２に照
射して蛍光を発生させると共に、走査光学系７で観察面
２１を１フレーム分走査する。標本１２上のＴＥＸＡＳ
ＲＥＤ^TMにより発せられた蛍光は、ダイクロイックミ
ラー２７を透過し、ミラー１５、４ｃを介して光検出器
１７で検出される。１フレーム走査が終了したら、即座
にターレット４を９０度回転させて励起フィルタ４ｄで
抽出した５６８ｎｍの励起波長を標本１２に照射して蛍
光を発生させると共に、走査光学系７で同一観察面２１
を１フレーム走査する。標本１２上のＴＥＸＡＳＲＥ
Ｄ^TMにより発せられた蛍光は、ダイクロイックミラー２
７を透過し、ミラー１５、空孔４ｂを介して光検出器１
８で検出される。この結果、コンピュータ１００に観察
面２１を２波長で走査した２つの画像が取得されたこと
になる。【００３８】次にステージ１３を上方へ移動し、図３
（ｂ）の状態とする。この状態では標本１２の中心部２
２が観察面となっている。観察面２２に焦点を合わせた
状態で、励起フィルタ４ａで抽出した４８８ｎｍの励起
光を標本１２に照射し、走査光学系７で観察面２２を１
フレーム分走査したら、即座にターレット４を９０度回
転させて励起フィルタ４ｄで抽出した５６８ｎｍの励起
波長を標本１２に照射して同一観察面２２を１フレーム
走査することにより、上記と同様に４８８ｎｍの励起光
による標本１２からの蛍光は光検出器１７で検出され、
５６８ｎｍの励起光による標本１２からの蛍光は検出器
１８で検出される。この結果、コンピュータ１００に観
察面２２を２波長で走査した２つの画像が取得されたこ
とになる。【００３９】さらにステージ１３を上方へ移動し、図３
（ｃ）の状態とする。この状態では標本１２の下部２３
が観察面となる。観察面２３に焦点を合わせた状態で
も、上記同様に走査光学系７の走査とターレット４の回
転動作とを連動させて２波長観察して観察面２３の２つ
の画像を取得する。【００４０】以上の一連の動作をコンピュータ制御で行
うことにより、蛍光クロストークを完全に除去でき、か
つ２種の蛍光取得の時間的な遅れを極力、少なくした２
種染色標本のＸＹＺ観察が可能となる。標本のＸＹＺ観
察方法としては、ステージ移動方式の他に、対物レンズ
をＺ方向に移動させながらステージをＸＹ方向に移動さ
せることもできる。またフォーカルな光学系の光路中に
焦点距離を補正する厚さの異なる複数の光路長補正板を
選択挿入できるようにすることもできる。【００４１】（第３の実施の形態）所定の時間間隔毎に
一平面の観察画像を取り込んで標本の時間的な変化を追
うＸＹＺ観察に、第１の実施の形態で示した工程を適用
する。【００４２】この実施の形態は、走査型光学顕微鏡を第
１の実施の形態と同様に構成し、ＸＹＺ観察を実現する
観察プログラムをコンピュータ１００に登録する。今、
コンピュータ１００により入力されたインターバル（時
間間隔）をｔ分とする。まず、第１の実施の形態と同様
にして、ターレット４の回転と走査光学系７の動作とを
連動させて１フレーム走査毎に励起波長を切り換えて、
フレオレスセインの発した蛍光と、ＴＥＸＡＳＲＥＤ
^TMの発した蛍光とを順次取得し、１回の画像取得工程を
終了する。【００４３】次に、前回の画像取得完了からｔ分経過後
に、再び上記同様の手法によりフレオレスセイン、ＴＥ
ＸＡＳＲＥＤ^TMの発した蛍光を順次取得する。このよ
うな処理をコンピュータ１００の管理下でｔ分毎に実行
し、予めコンピュータ１００に指定された回数だけ繰り
返す。これにより、蛍光クロストークがなく、かつ２種
の蛍光取得の時間的な遅れを極力、少なくした２重染色
標本のＸＹＺ観察が可能となる。【００４４】（第４の実施の形態）光源に４８８ｎｍを
発振するアルゴンレーザと７００ｎｍの赤外光をパルス
状に発振するレーザを用いることで、赤外のパルスレー
ザを走査型光学顕微鏡に適用し、赤外のパルスレーザを
集光させることで２光子励起を発生させるものである。【００４５】ＵＶ光により励起され４５０ｎｍ近辺の蛍
光を発する色素ＤＡＰＩに７００ｎｍの赤外パルスレー
ザを照射して励起すると、４５０ｎｍ近辺の蛍光を発す
ることができる。このような赤外のパルスレーザを集光
させる２光子励起では赤外光で集光しているので厚みの
ある標本内の屈折による結像性能の劣化が起きにくいと
いうメリットがある。【００４６】図４は、本実施の形態に係る走査型光学顕
微鏡の構成を示す図であり、図１及び図２に示したもの
と同じ機能の部位には同一符号を付けている。この実施
の形態は、４８８ｎｍを発振するアルゴンレーザ２４か
らのレーザ光と７００ｎｍのパルスを発振するパルスレ
ーザ２５からのレーザ光とを、４８８ｎｍを反射し７０
０ｎｍを透過させる特性を持つダイクロイックミラー２
６により一つの光路上に導いている。【００４７】また、ターレット４上に７００ｎｍのパル
スレーザを選択する励起フィルタ４ｅが備えられてい
る。励起ダイクロイックミラー２７の特性は、図６に示
すように４８８ｎｍと７００ｎｍを反射し、それ以外の
波長を透過するようになっている。【００４８】また、光検出器１８の前面に５６８ｎｍの
反射光をカットするバリアフィルタ２０に代えて、７０
０ｎｍの反射光をカットするバリアフィルタ２８を備え
ている。標本２９はＤＡＰＩ及びフレオレスセインで２
重染色されている。【００４９】次に、この実施の形態の動作について説明
する。まず、図４の状態にターレット４を位置させるこ
とにより、光路上に４８８ｎｍの励起フィルタ４ａとミ
ラー４ｃを配置し、アルゴンレーザ２４より発振した４
８８ｎｍのレーザ光を用いて、フレオレスセインの発す
る蛍光を光検出器１７側で検出する。【００５０】そして、１フレーム走査後にターレット４
をモータ１０２により９０°回転させ、光路上に励起フ
ィルタ４ｅ及び空穴４ｂを配置させる。これにより、赤
外パルスレーザ２５の発振した７００ｎｍのパルスレー
ザを標本２９に導く。ＤＡＰＩより発した蛍光は、励起
ダイクロイックミラー２７を透過して、ターレット４の
空穴４ｂを通り、光検出器１８で検出される。【００５１】ここで、通常、対物レンズ１１は、７００
ｎｍの赤外領域までは収差補正されていない。したがっ
て、７００ｎｍのパルスレーザを用いた場合と４８８ｎ
ｍのアルゴンレーザを用いた場合とでは、対物レンズ１
１の焦点面がずれる現象が生じる。図５に焦点面がずれ
る状況を拡大して示している。【００５２】コンピュータ１００は、４８８ｎｍの観察
から７００ｎｍの観察に切りかえる時（ターレット４を
９０°回転させた時）に、ステージ１３を移動させて４
８８ｎｍの観察面と７００ｎｍの観察面のズレδを補正
する。【００５３】このようにして得られた画像をフレオレス
セインの発する蛍光を緑、ＤＡＰＩの発する蛍光を水色
のように色分けし、重ねてモニタ１０１に表示すること
により、蛍光クロストークがなく、また２種の蛍光の観
察の時間的遅れを、極力少なくでき、かつ赤外レーザと
アルゴンレーザの対物レンズの収差による焦点面のズレ
が生じない観察ができる。【００５４】なお、ステージ１３の制御で焦点面のずれ
を補正するのではなく、光路に対して光路長補正板を挿
入することによっても同様の効果を奏することができ
る。例えば、瞳投影レンズ９から結像レンズ１０の間の
フォーカル光学系中（集光点を除く）に焦点面のずれ量
を補正可能な厚さを有する光路長補正板を挿脱自在に設
け、レーザ切換えに連動して挿脱させる。【００５５】（第５の実施の形態）複数の励起フィルタ
ーとそれら励起フィルターに対応した反射ミラー及び空
穴とをそれぞれ異なる円周上に配置したターレットを使
用して励起波長及び光路の切換えを行う。【００５６】図７，図８に実施の形態に係る走査型光学
顕微鏡の全体構成（結像レンズ９からステージ１３まで
は省略してあるが第１の実施の形態と同一構成をなす）
を示している。図１、図２に示す顕微鏡と同じ機能を有
する部位には同一符号を付している。第１の実施の形態
と同様に、４８８ｎｍと５６８ｎｍの波長を発振するク
リプトンアルゴンレーザ１により、フレオレスセインと
ＴＥＸＳＡＲＥＤ
^{ＴＭで２重染色標本を観察するもので、励起ダイクロイ}
^{ックミラー６、バリアフィルタ１９，２０は第１の実施}
^{の形態と同じものを用いている。} ^{【００５７】本実施の形態では、ターレット３１上に図}
^{７（ｂ）に示すように４５°間隔で４コづつ交互に４８}
^{８ｎｍ選択の励起フィルタ３１ａ（☆印）と、５６８ｎ}
^{ｍ選択の励起フィルタ３１ｂ（＊印）を同心円上に配置}
^{し、その外側に４８８ｎｍにより励起されフレオレスセ}
^{インより発した蛍光を光検出器１７へ導くミラー３１ｃ}
^{（＋印４ケ所）と、５６８ｎｍにより励起されＴＥＸＡ}
^{ＳＲＥＤ} ^ＴＭより発した蛍光を光検出器１８へ導く空
穴３１ｄ（△印４ケ所）とを同じ４５度間隔で交互に同
じ同心円状に配置している。【００５８】図７には励起光照明光路上に４８８ｎｍを
選択する励起フィルタ３１ａが配置され、光検出器１７
へ蛍光を導くミラー３１ｃが光路上に配置され、フレオ
レスセインの発する蛍光を光検出器１７で検出する状態
を示している。【００５９】また図８には、励起光照明光路上に５６８
ｎｍを選択する励起フィルタ３１ｂが配置され、光検出
器１８へ蛍光を導く空穴３１ｄが光路上に配置されて、
ＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMの発する蛍光を光検出器１８で検
出する状態を示している。【００６０】ターレット３１を連続的に回転させること
により高速で図７と図８の状態（フレオレスセイン又は
ＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMの観察）を切りかえることができ
る。走査光学系７は、Ｘガルバノミラー７ａを高速で画
面水平方向に走査し、Ｙガルバノミラー７ｂをＸガルバ
ノミラー７ａが水平方向１ライン走査する毎にＹ方向１
ピクセル（画素）分動かす。また、モニター１０１の解
像度に合わせてＸ，Ｙガルバノミラー７ａ，ｂの走査と
光検出器１７，１８の検出タイミングを決めている。本
実施の形態では、Ｘガルバノミラー７ａが１ライン走査
を終えるごとに、ターレット３１を４５°回転させるよ
うに走査光学系７の走査と、回転ターレット３１の回転
を同期させることにより、図９に示すように水平方向１
ライン毎にフレオレスセインによる蛍光とＴＥＸＡＳ
ＲＥＤ^TMによる蛍光とを取得する。【００６１】さらに、ターレット３１を４５°回転させ
るタイミングとして、Ｘガルバノミラー７ａの１ピクセ
ル停止期間中（１ピクセル受光中）に切り換えを行うこ
とにすれば、全てのピクセル（画素）にフレオレスセイ
ンによる蛍光の情報とＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMによる蛍光
の情報とを光検出器１７，１８で検出することが可能と
なる。【００６２】このような実施の形態によれば、第１の実
施の形態に記した効果を確保できる上に、フレオレスセ
インによる蛍光とＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMによる蛍光を検
出する時間的な遅れを完全になくすことができる。【００６３】（第６の実施の形態）図１０〜図１３を参
照して第６の実施の形態について説明する。この実施の
形態は、クリプトンアルゴンレーザ３５の発振する４８
８ｎｍ、５６８ｎｍ、６４７ｎｍの３波長を用いてフレ
オレスセイン、ＴＥＸＡＳＲＥＤ^TM、シアニン５によ
り発する３種の蛍光を３つの光検出器３６，３７，３８
でそれぞれ検出する。【００６４】図１０、図１１、図１２は図示しないモー
タに接続された回転ターレット３９を回転して切換えた
３段階の状態を示している。回転ターレット３９は光源
側の大円部と標本側の小円部とを光軸方向に所定距離離
間させて一体化した２重円板構造になっている。【００６５】図１０（ｂ）に示すように、回転ターレッ
ト３９の小円部は４８８ｎｍを透過する励起フィルタ３
９ａ、５６８ｎｍを透過する励起フィルタ３９ｂ、６４
７ｎｍを透過する励起フィルタ３９ｃが同一円上に隣接
して配置され、その同一円上で中心を挟んで４８８ｎｍ
励起フィルタ３９ａと対称位置にミラー３９ｅが配置さ
れ、さらにその同一円上で中心を挟んで５６８ｎｍ励起
フィルタ３９ｂ、６４７ｎｍ励起フィルタ３９ｃの対称
位置にそれぞれ空穴３９ｇ，３９ｍが配置されている。【００６６】また、図１０（ｃ）に示すように、回転タ
ーレット３９の大円部は、４８８ｎｍ励起フィルタ３９
ａ等の配置された円と同一径の円上に空穴３９ｄ，３９
ｆ，３９ｊが４８８ｎｍ励起フィルタ３９ａ，３９ｂ，
３９ｃと同一ピッチで配置されている。さらに、空穴３
９ｄ等が配置された円よりも大きい円周上であって空穴
３９ｆ，３９ｊとそれぞれ回転中心を挟んで対称位置に
ミラー３９ｈ、空穴３９ｎが配置されている。【００６７】図１３は励起ダイクロイックミラー４０の
透過特性を示している。この励起ダイクロイックミラー
４０は、励起波長の４８８ｎｍと５６８ｎｍと６４７ｎ
ｍを反射し、フレオレスセイン、ＴＥＸＡＳＲＥ
Ｄ^TM、シアニン５の発する蛍光を透過する透過特性を持
つ。【００６８】以上のように構成した実施の形態での動作
について説明する。図１０は、４８８ｎｍの波長を励起
フィルタ３９ａで選択し、フレオレスセインの発生した
蛍光を光検出器３６で検出している状態を示している。
このような図１０に示す状態で標本を１フレーム走査す
る。【００６９】図１０に示す状態では、クリプトンアルゴ
ンレーザ３５を発した４８８ｎｍ、５６８ｎｍ、６４７
ｎｍの各波長の多波長レーザ光は、ターレット３９の空
穴３９ｄを通過し、励起フィルタ３９ａにより４８８ｎ
ｍの波長が選択される。そして、励起ダイクロイックミ
ラー４０を反射し、走査光学系７のガルバノメータスキ
ャナミラーで反射された後、ミラー８を反射し図示しな
い標本上にビームスポットを形成する。【００７０】標本のフレオレスセインより発した蛍光が
逆の光路をたどって励起ダイクロイックミラー４０を透
過する。この励起ダイクロイックミラー４０を透過した
蛍光は結像レンズ１４、ミラー１５、共焦点ピンホール
１６を通り、ターレット３９に配置されたミラー３９ｅ
により反射される。ミラー３９ｅで反射した蛍光はさら
にバリアフィルタ１９により４８８ｎｍの反射光をカッ
トされてから光検出器３６でフレオレスセインの発する
蛍光として検出される。図１０に示すターレット３９の
位置で、走査光学系７のガルバノメータスキャナミラー
を走査駆動して１フレーム走査を行って、フレオレスセ
インによる画像を１枚取得する。【００７１】このように、４８８ｎｍの励起波長で励起
したフレオレスセインからの蛍光を１フレームだけ走査
したら、図１０（ｂ）（ｃ）に示す矢印４１方向にター
レット３９を６０°だけ図示しないモータ等により回転
させる。その結果、図１１に示す状態に変化する。【００７２】図１１は５６８ｎｍの波長を励起フィルタ
３９ｂで選択し、ＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMの発した蛍光を
光検出器３７で検出する状態を示している。図１１に示
す状態で再び標本を１フレーム走査する。【００７３】図１１に示す状態では、クリプトンアルゴ
ンレーザ３５から発振した４８８ｎｍ、５６８ｎｍ、６
４７ｎｍは、ターレット３９上の空穴３９ｆを通過し、
励起フィルタ３９ｂにより５６８ｎｍの波長が選択され
る。５６８ｎｍのレーザ光が励起ダイクロイックミラー
４０で反射され、図１０と同じ経路をたどり、標本上に
ビームスポットを形成する。【００７４】そして、ＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMより発した
蛍光が、図１０と同様に逆方向に光路を進み、励起ダイ
クロイックミラー４０を透過する。励起ダイクロイック
ミラー４０を透過した蛍光は、結像レンズ１４、ミラー
１５、共焦点ピンホール１６を通り、ターレット３９上
に形成した空穴３９ｇを通過して同ターレット３９のミ
ラー３９ｈにより反射され、さらにバリアフィルタ２０
により５６８ｎｍの反射光をカットされてから光検出器
３７でＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMの発する蛍光として検出さ
れる。したがって、図１１に示すターレット３９位置で
走査光学系７を駆動して１フレーム走査を行うことによ
り、ＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMによる画像が１枚取得され
る。【００７５】１フレーム走査が完了したら、ターレット
３９を図１１（ｂ）（ｃ）に示す矢印４２の方向に６０
°だけモータで回転して図１２に示す状態にする。図１
２では６４７ｎｍの波長を励起フィルタ３９ｃで選択
し、シアニン５の発した蛍光を光検出器３８で検出して
いる。図１２に示す状態で再び標本を１フレーム走査す
る。【００７６】図１２に示す状態では、クリプトンアルゴ
ンレーザ３５から発振した、４８８ｎｍ、５６８ｎｍ、
６４７ｎｍは、ターレット３９上の空穴３９ｇを通過
し、励起フィルタ３９ｃにより６４７ｎｍの波長が選択
される。この励起波長は励起ダイクロックミラー４０に
より反射され、図１０，１１と同様に図示しない標本上
にビームスポットを形成する。【００７７】６４７ｎｍの励起波長で励起したシアニン
５により発した蛍光は、図１０、１１と同様に逆方向に
光路を進み、励起ダイクロイックミラー４０を透過す
る。そして、結像レンズ１４、ミラー１５、共焦点ピン
ホール１６を通り、ターレット３９上に形成した空穴３
９ｍ，３９ｎを通過し、バリアフィルタ４３により６４
７ｎｍの反射光をカットしてから光検出器３８でシアニ
ン５の発する蛍光として検出される。したがって、図１
２に示すターレット３９の位置で１フレーム走査を行う
ことにより、シアニン５による画像が１枚取得される。【００７８】以上のようにして、図１０、図１１、図１
２に示す状態でそれぞれ取得したフレオレスセインによ
る画像、ＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMによる画像、シアニン５
による画像をそれぞれ色分けしてモニターに重ねて表示
する。【００７９】このような実施の形態によれば、３重染色
標本の各蛍光色素より発する蛍光の取り込みをガルバノ
メータスキャナミラーの走査とターレットの回転を同期
させて１フレーム走査毎にターレットを切り換えて各蛍
光色素毎に行っているので、蛍光クロストークがなく、
また各蛍光色素により発する蛍光の取り込みの時間的遅
れを、極力少なくできる。【００８０】（第７の実施の形態）励起波長の選択及び
光検出器へ導く光路の切換えのために前述した各実施の
形態で採用しているターレット方式ではなく励起波長選
択用及び光路切換え用のガルバノミラーを使用する。【００８１】図１４、図１５に第７の実施の形態となる
走査型光学顕微鏡の光学系の構成を示している。この実
施の形態は、第１の実施の形態と同様に４８８ｎｍと５
６８ｎｍを発振するクリプトンアルゴンレーザによりフ
レオレスセインとＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMで２重染色された
標本を観察するもので、第１の実施の形態と同じ機能を
持つ部位には同じ符号を付している。【００８２】ビームエキスパンダ２で所定ビーム径に調
整したレーザ光を第１ガルバノミラー５１に入射し、第
１ガルバノミラー５１を振ることでレーザ光の進行する
光路を２つの光路５３と光路５４とから選択する。一方
の光路５３には４８８ｎｍの励起フィルタ５５が配置さ
れ、もう一方の光路５４には５６８ｎｍの励起フィルタ
５６が配置されている。すなわち、光路５３と５４とか
らいずれかの光路を選択することが励起波長を選択する
ことになる。２つの光路はミックス用ダイクロイックミ
ラー５７によって励起ダイクロイックミラー６の配置さ
れた一つの光路に導かれる。【００８３】また、共焦点ピンホール１６を通過した蛍
光を第２ガルバノミラー５２に入射し、第２ガルバノミ
ラー５２を振ることで蛍光を光検出器１７，１８に導く
２つの光路５９，６０から選択する。【００８４】ガルバノミラー５１の傾きを制御してレー
ザ光を光路５３又は５４に切換える。図１４に示すよう
に、光路５３へレーザ光が導かれるように制御した場
合、光路５３には４８８ｎｍを選択する励起フィルタ５
５が配置されているので、ミックス用ダイクロイックミ
ラー５７に入射するレーザ波長は４８８ｎｍとなる。【００８５】一方、図１５に示すようにガルバノミラー
５１の傾きを制御してレーザ光を光路５４に導いた場合
は、光路中に５６８ｎｍを選択する励起フィルタ５６が
配置されているので、ミックス用ダイクロイックミラー
５７に入射するレーザ波長は５６８ｎｍとなる。【００８６】ミックス用ダイクロイックミラー５７は、
４８８ｎｍを反射し、５６８ｎｍを透過する透過特性を
持つ。したがって、図１４に示すように光路５３を進む
４８８ｎｍのレーザ光はミラー５８、ミックス用ダイク
ロイックミラー５７を反射して励起ダイクロイックミラ
ー６に入射し、励起ダイクロイックミラー６を反射して
走査光学系７、ミラー８を通り、図示しない標本上にビ
ームスポットを結ぶ。また、図１５に示すように光路５
４を進む５６８ｎｍのレーザ光はミックス用ダイクロイ
ックミラー５７を透過し、励起ダイクロイックミラー６
を反射して走査光学系７、ミラー８を通り、図示しない
標本上にビームスポットを形成する。【００８７】４８８ｎｍの励起レーザ光で励起されてフ
レオレスセインにより発した蛍光、５６８ｎｍの励起レ
ーザ光で励起されてＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMにより発した
蛍光は、逆方向に光路を進み励起ダイクロイックミラー
６を透過する。その後、結像レンズ１４、ミラー１５、
共焦点ピンホール１６を透過して第２ガルバノミラー５
２へ入射する。【００８８】ここで、第１ガルバノミラー５１による励
起波長選択と第２ガルバノミラー５２による光路の切換
えとが連動するように、図示していないコンピュータに
よりミラー駆動制御し、しかも第１，第２ガルバノミラ
ー５１と走査光学系７の走査とが同期するように３者の
動作を制御する。【００８９】今、図１４のように第１ガルバノミラー５
１により４８８ｎｍが励起波長として選択されていれ
ば、ピンホール１６を通過したフレオレスセインの発し
た蛍光は、第２ガルバノミラー５２により光路５９の方
へ進みバリアフィルタ１９で４８８ｎｍの反射光をカッ
トして、フレオレスセインの発した蛍光として光検出器
１７で検出される。【００９０】また、図１５のように第１ガルバノミラー
５１により５６８ｎｍが励起波長として選択されていれ
ば、共焦点ピンホール１６を通過したＴＥＸＡＳＲＥ
Ｄ^TMの発した蛍光は、第２ガルバノミラー５２により光
路６０の方へ進み、バリアフィルタ２０で５６８ｎｍの
反射光をカットして、ＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMの発した蛍
光として光検出器１８で検出される。【００９１】図１４に示す状態に制御してフレオレスセ
インの発する蛍光を取り込む状態と図１５に示す状態に
制御してＴＥＸＡＳＲＥＤ^TMの発する蛍光を取り込む
状態との切り換えを走査光学系７の走査に同期して行
う。具体的には、第１の実施の形態のように１フレーム
走査毎の光路切り換えや、第５の実施の形態のように走
査光学系７のＸガルバノミラー７ａの１ライン走査毎の
光路切り換えを行うことができる。【００９２】このような実施の形態によれば、２重染色
標本の各蛍光色素より発する蛍光の取り込みを、１フレ
ーム走査毎、１ライン走査毎に切換えて各蛍光色素毎に
行っているので、蛍光クロストークがなく、また各蛍光
色素により発する蛍光の取り込みの時間的な遅れを極力
少なくできる。また、励起波長の選択、光検出器への光
路切り換えをガルバノメータスキャナで行っているの
で、標本上のビーム走査を行うガルバノメータスキャナ
ミラーとの同期が取りやすく、１ライン走査毎の切り換
え等の高速切り換えを簡単に実現できる。【００９３】（第８の実施の形態）励起波長の選択及び
光検出器へ導く光路の切換えのために前述したガルバノ
ミラー５１，５２ではなく励起波長選択用及び光路切換
え用の音響光学偏向素子（ＡＯＤ）を使用する。【００９４】図１６、図１７に第８の実施の形態となる
走査型光学顕微鏡の光学系の構成を示している。この実
施の形態は、ガルバノミラー５１，５２を音響光学偏向
素子６１，６２に代えたこと以外は前述の第７の実施の
形態とほぼ同じ構成になっている。【００９５】第１音響光学偏向素子６１はビームエキク
スパンダ２からのレーザ光を光路５３又は５４へ導くよ
うに偏向させる機能を持ち、第２音響光学偏向素子６２
は共焦点ピンホール１６を通過した蛍光を光路５９又は
６０へ導くように偏向させる機能を持つ。【００９６】これら第１，第２の音響光学偏向素子６
１，６２の偏向作用を図示していないコンピュータから
の制御で第７の実施の形態と同様に連動させることがで
きるので、走査光学系７の走査に同期して第１音響光学
偏向素子６１により励起波長を選択すると共に、第２音
響光学偏向素子６２により蛍光を入射する光路を選択す
ることができる。本発明は上記実施の形態に限定される
ものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲内で種々
変形実施可能である。【００９７】【発明の効果】以上詳記したように本発明によれば、蛍
光クロストークを除去できるとともに、複数の励起波長
による各々の観察の時間的な遅れを抑えることのできる
走査型光学顕微鏡を提供できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】第１の実施の形態に係る走査型光学顕微鏡の全
体構成図である。

【図２】第１の実施の形態の全体構成図であり図１とは
異なる状態を示す図である。

【図３】第２の実施の形態に係る走査型光学顕微鏡の動
作説明図である。

【図４】第４の実施の形態に係る走査型光学顕微鏡の全
体構成図である。

【図５】第４の実施の形態における焦点ずれ補正原理を
説明するための図である。

【図６】励起ダイクロイックミラーの透過特性を示す図
である。

【図７】第５の実施の形態に係る走査型光学顕微鏡の全
体構成図である。

【図８】図７とは異なる状態での第５の実施の形態の全
体構成図である。

【図９】第５の実施の形態における取得画像情報の並び
を示す図である。

【図１０】第６の実施の形態に係る走査型光学顕微鏡の
全体構成図である。

【図１１】図１０とは異なる状態での第６の実施の形態
の全体構成図である。

【図１２】図１０，図１１とは異なる状態での第６の実
施の形態の全体構成図である。

【図１３】励起ダイクロイックミラーの透過特性を示す
図である。

【図１４】第７の実施の形態に係る走査型光学顕微鏡の
全体構成図である。

【図１５】図１４とは異なる状態での第７の実施の形態
の全体構成図である。

【図１６】第８の実施の形態に係る走査型光学顕微鏡の
全体構成図である。

【図１７】図１６とは異なる状態での第８の実施の形態
の全体構成図である。

【図１８】従来の走査型光学顕微鏡のスキャンヘッド部
の構成図である。

【図１９】各フィルタブロックの特性図である。

【符号の説明】

１…クリプトンアルゴンレーザ２…ビームエキスパンダ３…ミラー４…励起フィルタユニット４ａ，４ｄ…励起フィルタ４ｂ…空穴４ｃ…反射ミラー６…励起ダイクロイックミラー７…走査光学系８…ミラー１１…対物レンズ１２…標本１６…共焦点ピンホール１７、１８…光検出器１００…コンピュータ１０１…モニタ１０２…モータ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】光源からの光ビームを標本に照射し走査
機構によって前記標本を前記光ビームで走査する走査型
光学顕微鏡において、前記光源から前記標本に至る光路の途中で２種以上の励
起波長の中から１種づつ波長を選択する波長選択手段
と、前記２種以上の励起波長で夫々励起される各蛍光を個別
に検出すべく設けられた複数の検出器と、前記標本から発した蛍光をその励起波長に対応した検出
器へ導くように前記波長選択手段の波長選択動作に連動
して光路を選択する光路選択手段と、前記走査機構による走査に同期して１フレーム走査、１
ライン走査又は１画素受光中に前記波長選択手段による
選択励起波長及び前記光路選択手段による選択光路を切
換える手段とを具備したことを特徴とする走査型光学顕
微鏡。
【請求項２】請求項１記載の走査型光学顕微鏡におい
て、前記波長選択手段及び前記光路選択手段は、前記光源か
ら前記標本に至る光路と前記標本から発した蛍光の通過
する蛍光光路とを同時に遮る回転板を配置し、当該回転
板において光源から標本に至る光路が遮られる部分を含
む同一円上に各々波長帯域の異なる励起波長が通過する
励起フィルターを設け、前記回転板において前記蛍光光
路が遮られる部分を含む同一円上であって前記各励起フ
ィルターが光路上に配置されたときに蛍光光路を遮る各
々の位置にそのとき光路上に配置された励起フィルター
に対応した検出器へ蛍光を導く反射ミラー又は空穴を設
けてなることを特徴とする走査型光学顕微鏡。
【請求項３】請求項１記載の走査型光学顕微鏡におい
て、前記波長選択手段は、各々波長帯域の異なる励起波長が
通過する複数の励起フィルターと、前記光源側から入射
する光ビームを偏向させていずれかの励起フィルターへ
入射する偏向素子とを含んでなり、前記光路選択手段は、前記標本から入射する蛍光をその
励起波長に対応した検出器へ導くように偏向させる偏向
素子を含むことを特徴とする走査型光学顕微鏡。