JPH10227796A - ＨＢｓ抗原の定量方法及びＨＢｓ抗原測定用免疫学的キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 高感度かつ迅速、簡便なＨＢｓ抗原の定量方
法、及び、このＨＢｓ抗原の定量方法を実施するための
ＨＢｓ抗原測定用免疫学的キットを提供する。 【解決手段】 試料中のＨＢｓ抗原を定量するにあた
り、ＨＢｓ抗体を感作し、その後、ブロッキングした不
溶性担体と、上記試料とを、溶液中で混合して抗原抗体
反応による凝集反応を生じさせ、上記凝集反応に基づく
吸光度変化量を測定して検量線と照合することよりなる
ＨＢｓ抗原の定量方法であって、上記不溶性担体は、ラ
テックス粒子であり、上記感作及び上記ブロッキングを
３７〜５０℃で行うか、又は、上記感作及び上記ブロッ
キングのいずれかを３７〜５０℃で行うＨＢｓ抗原の定
量方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、試料中のＨＢｓ抗
原の高感度かつ迅速、簡便な定量方法、及び、このＨＢ
ｓ抗原の定量方法を実施するためのＨＢｓ抗原測定用免
疫学的キットに関する。

【０００２】

【従来の技術】ＨＢウイルスは、輸血時等に血液を介し
て感染しＢ型肝炎の原因となる。従って、輸血用血液中
のＨＢウイルスを検出し、ＨＢウイルスが存在しない血
液のみを輸血することが理想的である。

【０００３】このため、ＨＢウイルスの存在又はその存
在の可能性を推測するために、ＨＢウイルスを構成して
いる抗原を血清学的方法で検出することが一般に行われ
ている。このような抗原として現在最もよく使用されて
いるのは、ＨＢウイルス表面のタンパク質であるＨＢｓ
抗原である。

【０００４】ＨＢｓ抗原の検出方法としては、従来、オ
クタロニー法、一元免疫拡散法、逆受身赤血球凝集反応
法（ＲＰＨＡ法）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、ラジ
オイムノアッセイ法（ＲＩＡ法）等が知られている。

【０００５】しかしながら、オクタロニー法及び一元免
疫拡散法は、操作が煩雑で測定に時間がかかり、感度も
比較的低い。ＲＰＨＡ法は、「医学のあゆみ」（今井光
信ら、第７８巻、７５９頁、１９７１年）に記載されて
いるように、安定した抗体感作赤血球を用意することが
困難である。ＥＩＡ法及びＲＩＡ法は、感度はオクタロ
ニー法の２０００〜１万倍にもなるが、試薬価格が高
い。また、ＲＩＡ法は、放射性元素を用いるため、特別
な施設が必要となる等の欠点があった。

【０００６】このような問題点を解決する方法として、
ラテックス法が考えられる。特開昭５５−３０６７１号
公報に開示されているように、従来のラテックス法は、
抗原又は抗体を感作する工程を４℃〜室温の範囲で行う
のが一般的であるが、従来のラテックス法は、感度が不
充分である等の問題があった。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記に鑑
み、高感度かつ迅速、簡便なＨＢｓ抗原の定量方法、及
び、このＨＢｓ抗原の定量方法を実施するためのＨＢｓ
抗原測定用免疫学的キットを提供することを目的とす
る。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、試料中のＨＢ
ｓ抗原を定量するにあたり、ＨＢｓ抗体を感作し、その
後、ブロッキングした不溶性担体と、上記試料とを、溶
液中で混合して抗原抗体反応による凝集反応を生じさ
せ、上記凝集反応に基づく吸光度変化量を測定して検量
線と照合することよりなるＨＢｓ抗原の定量方法であっ
て、上記不溶性担体は、ラテックス粒子であり、上記感
作及び上記ブロッキングを３７〜５０℃で行うか、又
は、上記感作及び上記ブロッキングのいずれかを３７〜
５０℃で行うＨＢｓ抗原の定量方法である。以下に本発
明を詳述する。

【０００９】本発明においては、試料中のＨＢｓ抗原を
定量するにあたり、まず、ＨＢｓ抗体を感作し、その
後、ブロッキングした不溶性担体と、上記試料とを、溶
液中で混合して抗原抗体反応による凝集反応を生じさせ
る。

【００１０】上記試料としては特に限定されず、例え
ば、血清、血漿等が挙げられる。また、本発明のＨＢｓ
抗原の定量方法は、これら以外の各種の生体試料、非生
体試料に適用することも可能である。

【００１１】本発明においては、上記不溶性担体とし
て、粒径が比較的一定であり、また、工業的に一定の品
質、性能のものを大量生産することができるラテックス
粒子が用いられる。上記ラテックス粒子としては特に限
定されず、例えば、スチレン、塩化ビニル、アクリロニ
トリル、酢酸ビニル、アクリル酸エステル、メタクリル
酸エステル等のビニル系モノマーの単一重合体又は共重
合体；スチレン−ブタジエン共重合体、メチルメタクリ
レート−ブタジエン共重合体等のブタジエン系共重合体
等の微粒子等が挙げられる。なかでも、抗体の吸着性に
優れており、かつ、生物学的活性を長期間安定に保持で
きる等の理由から、ポリスチレン系のラテックス粒子が
特に好ましい。

【００１２】上記不溶性担体であるラテックス粒子の粒
径は、０．０５〜１μｍであることが好ましい。０．０
５μｍ未満であると、凍結乾燥を行ったときに分散が困
難になり、１μｍを超えると、自己凝集が進み、分散性
が低下する。より好ましくは、０．１〜０．５μｍであ
る。

【００１３】本発明においては、上記不溶性担体に、Ｈ
Ｂｓ抗体を感作し、その後、ブロッキングする。本明細
書中、上記感作とは、抗体を不溶性担体表面に吸着させ
ることを意味し、上記ブロッキングとは、抗体感作後の
不溶性担体にアルブミン等のタンパクを吸着させること
を意味する。

【００１４】上記ＨＢｓ抗体としては特に限定されず、
例えば、既知の方法によりＨＢｓ抗原陽性ヒト血清から
精製されたＨＢｓ抗原又は遺伝子組換えによって得られ
たＨＢｓ抗原を、ウサギ、ヤギ、マウス等の動物に免疫
させて得られた抗血清から精製されたもの、遺伝子組換
え等によってモノクローン的に得られたもの等が挙げら
れる。上記ＨＢｓ抗原は、純度や処理方法によって制限
されるものではない。

【００１５】上記不溶性担体へのＨＢｓ抗体の感作は、
例えば、物理的又は化学的に吸着せさる方法等により行
うことができる。この場合において、上記ＨＢｓ抗体
は、凝集反応を生じさせる溶液中において、０．１〜１
００μｇ／ｍｌとなるように、上記不溶性担体に感作さ
れる。０．１μｇ／ｍｌ未満であると、感度が低く、低
濃度域での正確な測定ができず、１００μｇ／ｍｌを超
えると、非特異反応による凝集が生じ、正確な測定がで
きない。

【００１６】本発明においては、上記感作及び上記ブロ
ッキングを３７〜５０℃で行うか、又は、上記感作及び
上記ブロッキングのいずれかを３７〜５０℃で行う。３
７℃未満であると、感度向上の効果が不充分であり、５
０℃を超えると、タンパクの失活がおこり、ＨＢｓ抗体
の活性が失われるので、上記範囲に限定される。好まし
くは４０〜４７℃である。

【００１７】本発明においては、上記不溶性担体と上記
試料とを溶液中で混合する。上記溶液としては特に限定
されず、例えば、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリ
ス塩酸緩衝液、グッドの緩衝液等が挙げられる。

【００１８】本発明においては、上記溶液中の上記不溶
性担体の濃度は、０．０１〜０．５重量％であることが
好ましい。０．０１重量％未満であると、凝集反応の形
成が不充分で、必要な感度が得られず、０．５重量％を
超えると、バックグラウンドとしての吸光度が高すぎ、
正確な定量を行うことができない。

【００１９】本発明においては、上記溶液中に反応促進
剤を添加してもよい。上記反応促進剤としては、例え
ば、ポリエチレングリコール、カルボキシルメチルセル
ロース、デキストラン、プルラン、ポリビニルピロリド
ン等の水溶性高分子等が挙げられる。

【００２０】上記反応促進剤は、適当な媒体に分散又は
溶解させて使用することが好ましい。この場合において
は、上記不溶性担体と、上記反応促進剤とを同一の媒体
に分散又は溶解させることにより１液型のラテックス試
薬として使用してもよいし、また、それぞれ、別個に媒
体に分散又は溶解させることによりラテックス試薬と溶
液状の試薬である検体希釈用液との２液型試薬として使
用してもよい。

【００２１】上記媒体としては特に限定されず、例え
ば、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス塩酸緩衝
液、グッド緩衝液等が挙げられる。上記媒体のｐＨは、
５．５〜８．５が好ましく、より好ましくは、６．５〜
８．０である。

【００２２】上記反応促進剤の濃度は、凝集反応を行う
溶液（１液型の場合は試料及びラテックス試薬の混合
液、２液型の場合は試料、ラテックス試薬及び検体希釈
用液の混合液）中において、０．１〜５重量％になるよ
うに添加して使用することが好ましい。０．１重量％未
満であると、感度が低く、低濃度域での正確な測定がで
きず、５重量％を超えると、非特異反応による凝集が生
じ、正確な測定ができない。より好ましくは０．４〜３
重量％である。

【００２３】上記１液型のラテックス試薬中には、更
に、ウシ血清アルブミン、塩化コリン、ショ糖、塩濃度
調整のための塩化ナトリウム等を適宜溶解させてもよ
い。また、上記２液型試薬中にも、それぞれに、ウシ血
清アルブミン、塩化コリン、ショ糖、塩濃度調整のため
の塩化ナトリウム等を適宜溶解させてもよい。

【００２４】本発明において、抗原抗体反応による凝集
反応は、好ましくは、５秒〜１５分間行う。５秒未満で
あると、正確な測定ができず、１５分を超えると、非特
異反応による凝集が生じ、正確な測定ができない。上記
凝集反応は、恒温において行われることが好ましい。好
ましくは、２５〜３７℃である。

【００２５】本発明においては、次に、上記凝集反応に
基づく吸光度変化量を測定して検量線と照合することよ
り、ＨＢｓ抗原を定量する。上記吸光度変化量は、凝集
反応に伴う吸光度の増加量である。

【００２６】上記吸光度変化量の測定の際の測定波長
は、通常、５００〜１０００ｎｍ、好ましくは、５００
〜８００ｎｍの範囲から適切な波長が選択される。上記
吸光度変化量の測定に用いられる測定装置としては、経
時的に上記溶液の吸光度を測定することができるもので
あれば特に限定されず、例えば、汎用の生化学自動分析
装置等が挙げられる。上記吸光度変化量の測定における
測定波長、検体量、試薬量等は、装置に合わせて適宜選
択することができる。

【００２７】上記検量線と照合する具体的な方法として
は、例えば、ＨＢｓ抗原の希釈系列等の濃度既知のＨＢ
ｓ抗原試料について、吸光度変化量の測定を行い、その
測定値とＨＢｓ抗原量とから検量線を作成しておき、濃
度未知のＨＢｓ抗原試料について同一条件で測定した吸
光度変化量の測定値から上記検量線において対応するＨ
Ｂｓ抗原量を求めることにより実施することができる。

【００２８】本発明２は、ラテックス粒子からなるＨＢ
ｓ抗原測定用免疫学的キットであって、上記ラテックス
粒子は、ＨＢｓ抗体を感作し、その後、ブロッキングし
たものであり、上記感作及び上記ブロッキングを３７〜
５０℃で行うか、又は、上記感作及び上記ブロッキング
のいずれかを３７〜５０℃で行う本発明１のＨＢｓ抗原
の定量方法を実施するためのＨＢｓ抗原測定用免疫学的
キットである。

【００２９】本発明２で用いられるラテックス粒子は、
本発明１において説明したものと同様のものである。本
発明２のＨＢｓ抗原測定用免疫学的キットは、１液型の
ラテックス試薬を使用してもよいし、また、ラテックス
試薬及び上記検体希釈用液の２液型試薬を使用してもよ
い。

【００３０】本発明２のＨＢｓ抗原測定用免疫学的キッ
トを用いてＨＢｓ抗原を定量する具体的な方法として
は、例えば、ＨＢｓ抗原の定量を行おうとする試料、及
び、必要に応じて、上記検体希釈用液を反応容器に分注
し、インキュベートした後、上記ラテックス試薬を添加
混合することにより実施することができる。

【００３１】

【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。

【００３２】実施例１感作温度及びブロッキング温度４０℃での調製 （１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製 抗ＨＢｓウサギ抗体を１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で１００
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した液１．２５
ｍｌに、平均粒径０．３μｍのポリスチレンラテックス
（固形分１０％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）１ｍｌ
とリン酸−食塩緩衝液（０．０３６Ｍ リン酸緩衝液
（ｐＨ６．６）、０．１Ｍ ＮａＣｌ）２．５ｍｌを添
加し、４０℃にて６０分間攪拌した。ついで、この液に
ウシ血清アルブミン（以下「ＢＳＡ」という）を１重量
％含有するリン酸−食塩緩衝液（０．０５Ｍ リン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｍ ＮａＣｌ）（以下「Ｐ
ＢＳ」という）を２ｍｌ添加し、４０℃にて６０分間攪
拌した後、４℃にて２０分間、１８０００ｒｐｍで遠心
分離することにより洗浄した。洗浄操作は３回行った。
得られた沈澱物にＢＳＡを１重量％含有するＰＢＳ １
０ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁した後、超音波破砕
機にて分散処理を行い、固形分０．１％（Ｗ／Ｖ）のＨ
Ｂｓ抗体感作ラテックス液を調製した。

【００３３】（２）検体希釈用液の調製 平均分子量２０万のプルラン（ＰＩ−２０、林原商事社
製）をＢＳＡを１重量％含有するＰＢＳに１．０重量％
の濃度になるように溶解した。

【００３４】（３）ＨＢｓ抗原測定試薬 本実施例のＨＢｓ抗原測定試薬は、上記（１）項のＨＢ
ｓ抗体感作ラテックスからなる第１試薬と、上記（２）
項のプルラン溶液からなる第２試薬とから構成される２
液型の試薬である。

【００３５】（４）標準ＨＢｓ抗原液 ＨＢｓ抗原を、それぞれ、０、５０、１００、３００、
５００ＩＵ／ｍｌの濃度で含むヒト血清を標準品として
使用した。

【００３６】（５）測定方法 検体２０μｌと上記（２）項の検体希釈用液１５０μｌ
とを混合し、３７℃で適時保持した後、上記（１）項の
ＨＢｓ抗体感作ラテックス液１５０μｌを添加攪拌し
た。この後、１分後及び５分後の波長７５０ｎｍでの吸
光度を測定し、この差を吸光度変化量（ΔＡｂｓ）とし
た。測定は日立自動分析装置７１５０形を使用した。標
準ＨＢｓ抗原液を測定して、予め検量線を作成してお
き、検体の吸光度変化量を上記検量線に外挿して、検体
中のＨＢｓ抗原濃度を算出した。

【００３７】（６）実検体の測定 ＨＢｓ抗原陽性の血清及び陰性の血清を検体として、上
記の測定方法（以下「ラテックス法」という）に従っ
て、ＨＢｓ抗原濃度を測定した。

【００３８】実施例２感作温度及びブロッキング温度４７℃での調製 以下のように（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製
を行った後、実施例１における（２）〜（５）と同様に
行った。

【００３９】（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製 抗ＨＢｓウサギ抗体を１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で１００
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した液１．２５
ｍｌに、平均粒径０．３μｍのポリスチレンラテックス
（固形分１０％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）１ｍｌ
とリン酸−食塩緩衝液（０．０３６Ｍ リン酸緩衝液
（ｐＨ６．６）、０．１Ｍ ＮａＣｌ）２．５ｍｌを添
加し、４７℃にて６０分間攪拌した。ついで、この液に
ＢＳＡを１重量％含有するＰＢＳを２ｍｌ添加し、４７
℃にて６０分間攪拌した後、４℃にて２０分間、１８０
００ｒｐｍで遠心分離することにより洗浄した。洗浄操
作は３回行った。得られた沈澱物にＢＳＡを１重量％含
有するＰＢＳ １０ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁し
た後、超音波破砕機にて分散処理を行い、固形分０．１
％（Ｗ／Ｖ）のＨＢｓ抗体感作ラテックス液を調製し
た。

【００４０】実施例３感作温度４０℃、ブロッキング温度４℃での調製 以下のように（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製
を行った後、実施例１における（２）〜（５）と同様に
行った。

【００４１】（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製 抗ＨＢｓウサギ抗体を１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で１００
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した液１．２５
ｍｌに、平均粒径０．３μｍのポリスチレンラテックス
（固形分１０％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）１ｍｌ
とリン酸−食塩緩衝液（０．０３６Ｍ リン酸緩衝液
（ｐＨ６．６）、０．１Ｍ ＮａＣｌ）２．５ｍｌを添
加し、４０℃にて６０分間攪拌した。ついで、この液に
ＢＳＡを１重量％含有するＰＢＳを２ｍｌ添加し、４℃
にて６０分間攪拌した後、４℃にて２０分間、１８００
０ｒｐｍで遠心分離することにより洗浄した。洗浄操作
は３回行った。得られた沈澱物にＢＳＡを１重量％含有
するＰＢＳ １０ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁した
後、超音波破砕機にて分散処理を行い、固形分０．１％
（Ｗ／Ｖ）のＨＢｓ抗体感作ラテックス液を調製した。

【００４２】実施例４感作温度４℃、ブロッキング温度４０℃での調製 以下のように（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製
を行った後、実施例１における（２）〜（５）と同様に
行った。

【００４３】（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製 抗ＨＢｓウサギ抗体を１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で１００
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した液１．２５
ｍｌに、平均粒径０．３μｍのポリスチレンラテックス
（固形分１０％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）１ｍｌ
とリン酸−食塩緩衝液（０．０３６Ｍ リン酸緩衝液
（ｐＨ６．６）、０．１Ｍ ＮａＣｌ）２．５ｍｌを添
加し、４℃にて６０分間攪拌した。ついで、この液にＢ
ＳＡを１重量％含有するＰＢＳを２ｍｌ添加し、４０℃
にて６０分間攪拌した後、４℃にて２０分間、１８００
０ｒｐｍで遠心分離することにより洗浄した。洗浄操作
は３回行った。得られた沈澱物にＢＳＡを１重量％含有
するＰＢＳ １０ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁した
後、超音波破砕機にて分散処理を行い、固形分０．１％
（Ｗ／Ｖ）のＨＢｓ抗体感作ラテックス液を調製した。

【００４４】比較例１ＲＰＨＡ法による測定 実施例１における上記（６）で測定した検体について、
市販のＲＰＨＡ法によるＨＢｓ抗原測定キット（リバー
スセル、山之内製薬社製）を用いて、検体中のＨＢｓ抗
原を測定した。方法は、キットの能書に従って行った。

【００４５】比較例２ＥＩＡ法による測定 実施例１における上記（６）で測定した検体について、
市販のＥＩＡ法によるＨＢｓ抗原測定キット（エンザイ
グノスト ＨＢｓＡｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ、へキス
トジャパン社製）を用いて、検体中のＨＢｓ抗原を測定
した。方法は、キットの能書に従って行った。

【００４６】比較例３感作及びブロッキング温度２５℃での調製 以下のように（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製
を行った後、実施例１における（２）〜（５）と同様に
行った。

【００４７】（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製 抗ＨＢｓウサギ抗体を１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で１００
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した液１．２５
ｍｌに、平均粒径０．３μｍのポリスチレンラテックス
（固形分１０％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）１ｍｌ
とリン酸−食塩緩衝液（０．０３６Ｍ リン酸緩衝液
（ｐＨ６．６）、０．１Ｍ ＮａＣｌ）２．５ｍｌを添
加し、２５℃にて６０分間攪拌した。ついで、この液に
ＢＳＡを１重量％含有するＰＢＳを２ｍｌ添加し、２５
℃にて６０分間攪拌した後、４℃にて２０分間、１８０
００ｒｐｍで遠心分離することにより洗浄した。洗浄操
作は３回行った。得られた沈澱物にＢＳＡを１重量％含
有するＰＢＳ １０ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁し
た後、超音波破砕機にて分散処理を行い、固形分０．１
％（Ｗ／Ｖ）のＨＢｓ抗体感作ラテックス液を調製し
た。

【００４８】比較例４感作及びブロッキング温度５５℃での調製 以下のように（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製
を行った後、実施例１における（２）〜（５）と同様に
行った。

【００４９】（１）ＨＢｓ抗体感作ラテックス液の調製 抗ＨＢｓウサギ抗体を１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で１００
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した液１．２５
ｍｌに、平均粒径０．３μｍのポリスチレンラテックス
（固形分１０％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）１ｍｌ
とリン酸−食塩緩衝液（０．０３６Ｍ リン酸緩衝液
（ｐＨ６．６）、０．１Ｍ ＮａＣｌ）２．５ｍｌを添
加し、５５℃にて６０分間攪拌した。ついで、この液に
ＢＳＡを１重量％含有するＰＢＳを２ｍｌ添加し、５５
℃にて６０分間攪拌した後、４℃にて２０分間、１８０
００ｒｐｍで遠心分離することにより洗浄した。洗浄操
作は３回行った。得られた沈澱物にＢＳＡを１重量％含
有するＰＢＳ １０ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁し
た後、超音波破砕機にて分散処理を行い、固形分０．１
％（Ｗ／Ｖ）のＨＢｓ抗体感作ラテックス液を調製し
た。

【００５０】結果 実施例１〜４及び比較例３、４の検量線を表１及び図１
に示した。表１及び図１より、感作及びブロッキングを
３７〜５０℃の範囲で行った場合、並びに、感作及びブ
ロッキングのいずれかを３７〜５０℃の範囲で行った場
合には、単位ＨＢｓ抗原濃度あたりの吸光度変化量が大
きく、高い反応性が得られることが明らかとなった。ま
た、実施例１及び比較例１、２の検体測定結果を表２に
示した。更に、判定の一致率を第３、４表に示した。表
２〜４より、比較例１のＲＰＨＡ法は低濃度域の感度が
低いので、実施例１のラテックス法との一致率が８０％
であった。一方、実施例１と比較例２のＥＩＡ法との一
致率は１００％であり、本発明のラテックス法は、ＥＩ
Ａ法と同等の感度を有することが明らかとなった。

【００５１】

【表１】

【００５２】

【表２】

【００５３】

【表３】

【００５４】

【表４】

【００５５】

【発明の効果】本発明のＨＢｓ抗原の定量方法及びＨＢ
ｓ抗原測定用免疫学的キットは、上述の通りであるの
で、ＥＩＡ法と同様の検出感度を有し、かつ、迅速、簡
便に血清等に含まれるＨＢｓ抗原を定量することができ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１〜４及び比較例３、４の検量線であ
る。縦軸は、吸光度変化量（ΔＡｂｓ）であり、横軸
は、標準ＨＢｓ抗原液の濃度である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 試料中のＨＢｓ抗原を定量するにあた
   り、ＨＢｓ抗体を感作し、その後、ブロッキングした不
   溶性担体と、前記試料とを、溶液中で混合して抗原抗体
   反応による凝集反応を生じさせ、前記凝集反応に基づく
   吸光度変化量を測定して検量線と照合することよりなる
   ＨＢｓ抗原の定量方法であって、前記不溶性担体は、ラ
   テックス粒子であり、前記感作及び前記ブロッキングを
   ３７〜５０℃で行うか、又は、前記感作及び前記ブロッ
   キングのいずれかを３７〜５０℃で行うことを特徴とす
   るＨＢｓ抗原の定量方法。
2. 【請求項２】 ラテックス粒子からなるＨＢｓ抗原測定
   用免疫学的キットであって、前記ラテックス粒子は、Ｈ
   Ｂｓ抗体を感作し、その後、ブロッキングしたものであ
   り、前記感作及び前記ブロッキングを３７〜５０℃で行
   うか、又は、前記感作及び前記ブロッキングのいずれか
   を３７〜５０℃で行うことを特徴とする請求項１記載の
   ＨＢｓ抗原の定量方法を実施するためのＨＢｓ抗原測定
   用免疫学的キット。