JPH10234363A

JPH10234363A - 新規酵素及びそれを用いたｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体等の製造法

Info

Publication number: JPH10234363A
Application number: JP9057048A
Authority: JP
Inventors: Toru Nagasawa; 透長澤; Yutaka Morita; 森田　　裕
Original assignee: Chisso Corp
Current assignee: JNC Corp
Priority date: 1997-02-25
Filing date: 1997-02-25
Publication date: 1998-09-08

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】オイゲノール等の基質のα位の二重結合を隣に
移動させ、このα位に水酸基を付加させる反応を触媒す
る新規な酵素、および該酵素を用いてコニフェリルアル
コールをはじめとする有用な化合物の効率的製造方法の
提供。【解決手段】バニリル・アルコールを含有する培養液中
で培養されたビッソクラミス属に属する菌株の菌体中よ
り得られ、水の存在下少なくとも下記の反応式Ａ、Ｂ、
Ｃに示す反応を触媒する酵素およびこの酵素を触媒とし
て用いる式（２−ａ）、（２−ｂ）、（２−ｃ）で表さ
れる化合物の製造法。（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ²は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ³は水素原
子または水酸基を示し、Ｒ⁴は炭素数１〜１０のアルキ
ル基を示す。ただし、反応式ＣにおいてはＲ²は上述の
基以外に水素原子であることもできるが、この場合Ｒ¹
とＲ²が同時に水素原子であることはない。）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ビッソクラミス属
に属する菌株の菌体から得られ、ｐ−アリルフェノール
誘導体、ｐ−ヒドロキシトルエン誘導体、ｐ−アルキル
フェノール誘導体等の基質を酸化する反応を触媒する新
規な酵素および該酵素を用いて、該基質から３−（ｐ−
ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体、ｐ−
ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体、１−（４−ヒドロ
キシフェニル）アルコール誘導体等を製造する方法に関
する。

【０００２】

【従来の技術】電子供与体および電子受容体の存在下
で、オイゲノールに代表されるｐ−アリルフェノール誘
導体の基質のα位の二重結合を、隣に移動させ、このα
位に水酸基を付加させる反応を触媒する酸化還元酵素は
報告された例がなく、このような酵素を用いたコニフェ
リルアルコールに代表される３−（ｐ−ヒドロキシフェ
ニル）−２−プロペノール誘導体の製造法はいまだ知ら
れていなかった。さらに、このような酵素の触媒する様
々な反応についても報告された例はなかった。また、従
来３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール
誘導体の１種であるコニフェリルアルコールは、医薬
品、香粧品、農薬、食品添加物、飼料添加物、液晶等の
原料として広範な用途が期待されている物質であり、該
コニフェリルアルコールはバニリン製造工程の副生成物
としてできることが知られている。しかしこの工程でで
きるコニフェリルアルコールの生成量は少ないため、コ
ニフェリルアルコールは高価となり、広範な利用が妨げ
られてきた。安価なオイゲノールを微生物に作用させて
バニリン関連物質を製造する試みがなされているが、
（特開平５−２２７９８０号公報、アグリカリチュラル
・バイオロジカル・ケミストリー４１巻９２５−９２９
頁（１９７７年）及び同誌４７巻２６３９−２６４０頁
（１９８３年））いずれもバニリンまたはバニリン酸は
生成するものの、コニフェリルアルコールの効率的な製
造には成功していない。そこで、本発明者らはオイゲノ
ールを基質にフェルラ酸を生成する微生物シュードモナ
ス・フルオレッセンスE118(FERM P-15185)を自然界から
単離し、その微生物中に、オイゲノールを基質にしてコ
ニフェリルアルコールを生成する酵素、オイゲノール脱
水素酵素を見いだした。この酵素を用いてコニフェリル
アルコールが製造できることを確認して特許を出願し
た。しかし、その方法よりさらに効率的なコニフェリル
アルコールの製造方法が求められている。なぜなら、菌
体にオイゲノールを作用させるとオイゲノールの多くは
フェルラ酸に変換されコニフェリルアルコールの生成量
は少ないこと、菌体から抽出し単一に精製した酵素を用
いればコニフェリルアルコールのみが生成するものの、
菌体から抽出し精製するのに時間とコストがかかること
が問題である。また、ＷＯ95/02062ではベラトリルアル
コールを単一炭素源とした培養液で生育したPenicilliu
m simplicissimumのバニリルアルコール・オキシダーゼ
でオイゲノールを基質として反応させることによるコニ
フェリルアルコールの製造法が記述されている。しかし
この場合、高価なベラトリルアルコールを培地に添加し
なければならないので、工業的な製造法とはいえない。
また、ｐ−アルキルフェノール誘導体を酸化して効率よ
く光学活性１−（４−ヒドロキシフェニル）アルコール
誘導体を生成する反応を触媒する酸化還元酵素は報告さ
れた例がない。光学活性のある１−（４−ヒドロキシフ
ェニル）アルコール誘導体は、医薬品、香粧品、農薬、
液晶等の合成原料として広範な用途が期待されている物
質である。特に血管拡張剤のキラル・シントンとして用
いられる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、オイゲノー
ル等の基質のα位の二重結合を隣に移動させ、このα位
に水酸基を付加させる反応を触媒する新規な酸化還元酵
素、および該酵素を用いてコニフェリルアルコールをは
じめとする有用な化合物を効率よく製造する方法を提供
することである。さらに、該酵素が触媒する様々な有機
反応を利用して３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−
プロペノール誘導体、ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド
誘導体、光学活性１−（４−ヒドロキシフェニル）アル
コール誘導体等の化合物を製造する方法を提供すること
である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めに、本発明者らは自然界より広くバニリル・アルコー
ルを単一炭素源として資化できる菌株を探索し、そのう
ち真菌１株がオイゲノールを作用させたときフェルラ酸
を生成することなくコニフェリルアルコールを産生する
事を見いだした。この菌株は子嚢果壁を欠き、子嚢が菌
糸上に裸生しているなどの形態学的特徴等からビッソク
ラミス・フルヴァと同定された。この菌株について、本
発明者らは鋭意研究を重ね以下１〜７に示す発明を完成
させた。

【０００５】１．バニリル・アルコールを含有する培養
液中で培養されたビッソクラミス属に属する菌株の菌体
中より得られ、水の存在下少なくとも下記の反応式Ａ、
Ｂ、Ｃに示す反応を触媒する酵素。

【０００６】

【化９】

【０００７】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメ
トキシ基を示し、Ｒ²は水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ³は水素原子または水酸基を示し、Ｒ⁴は炭素数１
〜１０のアルキル基を示す。ただし、反応式Ｃにおいて
はＲ²は上述の基以外に水素原子であることもできる
が、この場合Ｒ¹とＲ²が同時に水素原子であることはな
い。）

【０００８】２．反応式Ｃで示される反応が不斉誘起反
応である前記１に記載の酵素。

【０００９】３．ビッソクラミス属に属する菌株がビッ
ソクラミス・フルヴァ(Byssochlamysfulva)V107 FERM P
-16024である前記１または２に記載の酵素。

【００１０】４．前記１〜３のいずれかに記載の酵素を
触媒として、水の存在下、下記の反応式Ａに示す反応に
より一般式（１−ａ）で表されるｐ−アリルフェノール
誘導体から一般式（２−ａ）で表される３−（ｐ−ヒド
ロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体を製造する
方法。

【００１１】

【化１０】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ²は水酸基またはメトキシ基を示す。）

【００１２】５．前記１〜３のいずれかに記載の酵素を
触媒として、水の存在下、下記の反応式Ｂに示す反応に
より一般式（１−ｂ）で表されるｐ−ヒドロキシトルエ
ン誘導体から一般式（２−ｂ）で表されるｐ−ヒドロキ
シベンズアルデヒド誘導体を製造する方法。

【００１３】

【化１１】

【００１４】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメ
トキシ基を示し、Ｒ²は水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ³は水素原子または水酸基を示す。）

【００１５】６．前記１〜３のいずれかに記載の酵素を
触媒として、水の存在下、下記の反応式Ｃに示す反応に
より一般式（１−ｃ）で表されるｐ−アルキルフェノー
ル誘導体から一般式（２−ｂ）で表される光学活性１−
（４−ヒドロキシフェニル）アルコール誘導体を製造す
る方法。

【００１６】

【化１２】

【００１７】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメ
トキシ基を示し、Ｒ²は水素原子、水酸基またはメトキ
シ基を示し、Ｒ⁴は炭素数１〜１０のアルキル基を示す
が、Ｒ¹とＲ²が同時に水素原子であることはない。）

【００１８】７．バニリル・アルコールを含有する培養
液中でビッソックラミス属に属する菌株を培養し、続い
てその培養液に一般式（１−ａ）で表される基質を添加
するか、またはその培養液中で培養された菌株を一般式
（１−ａ）で表される基質を含有する他の培養液に移植
してさらに培養を行うことを特徴とする一般式（２−
ａ）で表される化合物の製造方法。

【００１９】８．バニリル・アルコールを含有する培養
液中でビッソックラミス属に属する菌株を培養し、続い
てその培養液に一般式（１−ｂ）で表される基質を添加
するか、またはその培養液中で培養された菌株を一般式
（１−ｂ）で表される基質を含有する他の培養液に移植
してさらに培養を行うことを特徴とする一般式（２−
ｂ）で表される化合物の製造方法。

【００２０】９．バニリル・アルコールを含有する培養
液中でビッソックラミス属に属する菌株を培養し、続い
てその培養液に一般式（１−ｃ）で表される基質を添加
するか、またはその培養液中で培養された菌株を一般式
（１−ｃ）で表される基質を含有する他の培養液に移植
してさらに培養を行うことを特徴とする一般式（２−
ｃ）で表される光学活性化合物の製造方法。

【００２１】本発明の酵素を得るには、まず、該酵素を
生産する菌体であるビッソクラミス属に属する菌株をバ
ニリル・アルコールを含んだ培養液で好気的に培養す
る。培養液は、バニリル・アルコールを含んでいて本菌
が生育するものであればいかなるものでも良いが、好ま
しくは、バニリル・アルコールを０．１から０．４％
（ｗ／ｖ）、グリセリン０．５から３％（ｗ／ｖ）、硫
酸アンモニウム０．１から０．５％（ｗ／ｖ）、リン酸
１水素２カリウム０．１から０．５％（ｗ／ｖ）、硫酸
マグネシウム７水塩０．０１から０．１％（ｗ／ｖ）、
酵母エキス０．０１から０．１％（ｗ／ｖ）及び金属塩
混液０．０５から０．２％（ｖ／ｖ）からなるものでｐ
Ｈ３．５から７．０のものが用いられる。金属塩混液は
脱イオン水１Ｌ中に塩化カルシウム２水塩０．４ｇ、ほ
う酸０．３ｇ，硫酸銅５水塩０．０４ｇ，よう化カリウ
ム０．１ｇ，硫酸マンガン７水塩０．４ｇ，モリブデン
酸ナトリウム２水塩０．２ｇを溶かした溶液からなるも
のが好ましい。培養は２０〜３５℃で２４ないし７２時
間通気攪拌培養する。得られた培養液を遠心分離または
ろ過などして得られた菌体を１Ｍリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）に懸濁する。菌体懸濁液を超音波破砕
機、もしくは菌体破砕機にかけて菌体を破砕し、粗酵素
液を得る。

【００２２】得られた粗酵素液を硫酸アンモニウムによ
る塩析処理、および／またはイオン交換、ゲル濾過、疎
水性などの各種のカラムクロマトグラフィー法で処理し
高純度の酵素標品を得る。こうして、ＳＤＳポリアクリ
ルアミド・ゲル電気泳動で単一と認められる精製酵素標
品が得られる。この酵素の酵素化学的諸性質を以下に述
べる。

【００２３】（１）作用：水の存在下で、オイゲノール
のα位の二重結合を隣に移動させ、α位に水酸基を付加
することによってコニフェリルアルコールを生成する作
用を持つ。（２）基質特異性：一般式（１−ａ）または（１−ｂ）
で表される化合物に作用し、それぞれ一般式（２−ａ）
あるいは（２−ｂ）で表される化合物を生成する。ま
た、一般式（１−ｃ）で表される化合物に作用し、一般
式（２−ｃ）で表される化合物を生成する。（３）基質親和性：オイゲノールまたはバニリルアルコ
ールに対するミカエリス定数は、それぞれ15.6または21
4μモル濃度である。（４）至適ｐＨ：ｐＨ７．５付近。（５）至適温度：６０℃。（６）安定ｐＨ範囲：３０℃、３０分間の処理では、ｐ
Ｈ４から９まで安定である。（７）各種金属塩による影響：表１に示すように、銅、
銀、水銀塩により顕著に活性が阻害される。

【００２４】

【表１】

【００２５】（８）各種阻害剤の影響：表２に示すよう
に、ｐ-(クロロメルクリ)安息香酸、フェニルヒドラジ
ンで活性が阻害される。

【００２６】

【表２】

【００２７】（９）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミ
ド・ゲル電気泳動により58,000、超遠心分析により110,
000である。同一サブユニット２個から成るダイマーで
ある。これらの性質から、本発明の酵素はヨーロピアン
・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー２０８巻６５
１−６５７頁（１９９２）に記述されている、Penicill
ium simplicissimusのベラトリルアルコールで誘導され
るバニリルアルコール・オキシダーゼと全く異なること
が明らかである。特に、Penicilliumの酵素ではバニリ
ルアルコールに対するミカエリス定数が730μモル濃
度、至適ｐＨが１０付近、至適温度が３８℃、分子量6
5,000のサブユニット８個からなるオクタマーであるこ
となどが異なる。

【００２８】本発明においては酵素活性を以下のように
測定する。１モル濃度のリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．
０が２０μＬ及び脱イオン水９３０μＬからなる酵素活
性測定用反応液の入った試験管に酵素液５０μＬを加え
３０℃で５分間、保温した後に、２０ミリモル濃度のオ
イゲノールを３．２μＬ加え、３０℃で３０分間振盪
し、メタノールを１ｍＬ加えることで反応を停止させ、
得られた反応液を遠心分離し、上清を高速液体クロマト
グラフィーにかけて、コニフェリルアルコールのピーク
を検出し定量する。高速液体クロマトグラフィーは、サ
イズが４．６×１５０ｍｍのＯＤＳＣ１８カラムを用
い、メタノール：脱イオン水：酢酸＝４５：５２：３の
成分比の溶出液を毎分１．０ｍＬの流速で流して展開
し、２８０ｎｍでの吸光度を検出する。標準のコニフェ
リルアルコールの保持時間である３．６分付近のピーク
をコニフェリルアルコールとする。本酵素の活性の１単
位は１分間に１μｍｏｌのコニフェリルアルコールを生
成させる酵素活性のことである。

【００２９】本酵素を用いる一般式（２−ａ）で表され
る３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール
誘導体、一般式（２−ｂ）で表されるｐ−ヒドロキシベ
ンズアルデヒド誘導体、一般式（２−ｃ）で表される１
−（４−ヒドロキシフェニル）アルコール誘導体の製造
法をコニフェリルアルコールの製造法を例として説明す
る。前記の酵素活性測定用反応液から緩衝液をのぞいた
組成のものを、希硫酸あるいはアンモニア水を滴下して
ｐＨを５から８に調節し、２５℃から７０℃の温度で１
５から１８０分間、撹拌する。反応終了後、酢酸エチ
ル、クロロホルム、塩化メチレンもしくはエチルエーテ
ル等の有機溶媒で反応液からコニフェリルアルコールを
抽出し、シリカゲルクロマトグラフィー、逆相液体クロ
マトグラフィー、もしくは真空蒸留等の手段で精製し、
必要ならば活性炭で脱色し、真空乾燥して無色のコニフ
ェリルアルコール粉末を得る。本発明の酵素を用いる一
般式（２−ａ）で表される３−（ｐ−ヒドロキシフェニ
ル）−２−プロペノール誘導体、一般式（２−ｂ）で表
されるｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体、一般式
（２−ｃ）で表される１−（４−ヒドロキシフェニル）
アルコール誘導体の製造方法において使用される水は、
溶媒および酸素原子供給源として作用する。水は少なく
とも基質と等モル量必要だが、通常は大過剰量の水溶液
中で反応が行われる。

【００３０】本発明の酵素を用いて一般式（１−ａ）、
（１−ｂ）、（１−ｃ）で表される基質から一般式（２
−ａ）で表される３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２
−プロペノール誘導体、一般式（２−ｂ）で表されるｐ
−ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体、一般式（２−
ｃ）で表される１−（４−ヒドロキシフェニル）アルコ
ール誘導体をそれぞれ製造する場合においては、単離精
製された酵素を用いてもよいが、酵素を単離精製するこ
となく、バニリル・アルコールを含有する培養液中でビ
ッソックラミス属に属する菌株を培養し、続いてその培
養液に一般式（１−ａ）〜（１−ｃ）で表される基質を
添加するか、またはその培養液中で培養された菌株を一
般式（１−ａ）〜（１−ｃ）で表される基質を含有する
他の培養液に移植してさらに培養を行うことでも、対応
する一般式（２−ａ）〜（２−ｃ）で表される化合物を
製造することができる。この場合は生きたままの菌株を
利用するため酵素を単離精製するという工程を省略でき
るので有利である。

【００３１】

【実施例】つぎに、実施例により本発明を具体的に説明
する。本発明はこれらの実施例にのみ限定されるもので
はない。

【００３２】実施例１ビッソクラミス・フルヴァV107 FERM P-16024をバニリ
ル・アルコール０．３％（ｗ／ｖ）、グリセリン１．５
％（ｗ／ｖ）、硫酸アンモニウム０．２５％（ｗ／
ｖ）、りん酸１水素２カリウム０．２％（ｗ／ｖ）、硫
酸マグネシウム７水塩０．０５％、酵母エキス０．０５
％（ｗ／ｖ）、及び金属塩混合液０．１％（ｖ／ｖ）を
含みｐＨを４．５に調整した培養液２０Ｌで５４時間、
通気攪拌培養した。金属塩混液は脱イオン水１Ｌ中に塩
化カルシウム２水塩０．４ｇ、ほう酸０．３ｇ，硫酸銅
５水塩０．０４ｇ，よう化カリウム０．１ｇ，硫酸マン
ガン７水塩０．４ｇ，モリブデン酸ナトリウム２水塩
０．２ｇを溶かした溶液からなるものを用いた。培養液
を濾過して得られた菌体を生理食塩水で洗浄し、１０ｍ
Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）３００ｍｌに懸
濁した。この菌体懸濁液から以下に記述するように、本
酵素を抽出し精製した。表３に精製のスキームを示す。

【００３３】菌体懸濁液を菌体破砕機で処理し菌体を破
砕し、遠心分離して得られた上清６２１ｍｇ（総活性７
５．２単位）を無細胞抽出液とした。これに硫酸アンモ
ニウムを加えて５０から８０％（w/v）の硫酸飽和濃度
画分１７４ｍｇ（総活性63.7単位）を得た。この画分を
フェニルセファロースCL-4B（ファルマシア社製品）の
カラムにかけ活性画分４８．７ｍｇ（総活性３８．９単
位）を得た。活性画分をオクチルセファローズCL-6B
（ファルマシア社製品）及びハイドロキシアパタイトの
カラムに順次かけて、クロマトグラフィーをおこない最
終的に、３．７７ｍｇ（総活性３３．４単位）の酵素標
品を得た。この標品はＳＤＳ−ポリアクリルアミド・ゲ
ル電気泳動で単一であった。なお、無細胞抽出液から最
終的に比活性は７３．２倍上昇し、回収率は４４．４％
であった。

【００３４】

【表３】

【００３５】実施例２２００ミリモル濃度のオイゲノールのn-オクタン溶液を
５０ｍＬ、及び脱イオン水７２５ｍＬの入った還流器付
きの反応容器に、実施例１に準拠して作製した硫安塩析
を終えた酵素液２５ｍＬ（２０単位）を加えて、希硫酸
を自動的に滴下することでｐＨを５．５に維持しなが
ら、５０℃で２時間撹拌した。反応液に酢酸エチルを８
００ｍＬ加えて抽出した酢酸エチル層をロータリーエバ
ポレーターで２０ｍＬに濃縮してシリカゲルカラムにか
けた。メタノール：クロロホルム（１：１）の溶媒で流
出してくる画分を集めて、室温で真空乾燥し、融解温度
７４℃の無色粉末１．６ｇを得た。収率は８９％であっ
た。この粉末をＧＣＭＳ分析にかけ、分子量ピークを測
定したところ、１８０ｍ／ｚで、標準のコニフェリルア
ルコールと一致した。赤外吸収スペクトルも標準のコニ
フェリルアルコールと一致し、コニフェリルアルコール
と同定した。

【００３６】実施例３実施例２と同様にして、表４に示すように各基質から対
応する生成物を製造した。各生成物はＧＣＭＳ分析、赤
外吸収スペクトル分析等で同定した。光学活性はキラル
セルOBカラムを用いる高速液体クロマトグラフィーで、
移動相にn-ヘキサン:n-プロパノール（９：１）を、ピ
ークの検出には紫外線検出器および旋光度検出器を用い
て行った。各基質に対する活性は、オイゲノールを基質
とした場合を１００とした相対活性で示した。

【００３７】

【表４】

【００３８】実施例４実施例１に記載の方法で培養して得られたビッソクラミ
ス・フルヴァV107菌体を３ｇ（湿重量）に１モル濃度の
リン酸カリウム緩衝液(pH7.0)２mL及び基質としてオイ
ゲノール５２５μＬを加え、総容量４０mL基質濃度８０
ミリモル濃度になった懸濁液を２８℃で振盪した。３５
時間後、懸濁液中に７４ミリモル濃度０．５４ｇのコニ
フェリルアルコール、７ミリモル濃度０．０５ｇのコニ
フェリルアルデヒドが生成した。

【００３９】

【発明の効果】本発明は基質のα位の二重結合の転移を
伴ってこのα位に水酸基を付加させて不飽和アルコール
を製造する反応を触媒する酵素であり、かかる酵素を用
いて、コニフェリルアルコールを始めとする各種の3-(p
-ヒドロキシフェニル)-2-プロペノール誘導体、p-ヒド
ロキシベンズアルデヒド誘導体や1-(4-ヒドロキシフェ
ニル)アルコール誘導体を効率的に製造することができ
る。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記（１）〜（９）の性質を有する酵素。（１）作用：オイゲノールのα位の二重結合を隣に移動
させ、α位に水酸基を付加することによってコニフェリ
ルアルコールを生成する。（２）基質特異性：水の存在下下記反応式Ａ、Ｂ、Ｃに
示されるように一般式（１−ａ）、（１−ｂ）、（１−
ｃ）で表される化合物に作用し、それぞれ一般式（２−
ａ）、（２−ｂ）、（２−ｃ）で表される化合物を生成
する。【化１】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ²は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ³は水素原
子または水酸基を示し、Ｒ⁴は炭素数１〜１０のアルキ
ル基を示す。ただし、反応式ＣにおいてはＲ²は上述の
基以外に水素原子であることもできるが、この場合Ｒ¹
とＲ²が同時に水素原子であることはない。）（３）基質親和性：オイゲノールまたはバニリルアルコ
ールに対するミカエリス定数は、それぞれ15.6、214μ
モル濃度である。（４）至適ｐＨ：ｐＨ７．５付近。（５）至適温度：６０℃。（６）安定ｐＨ範囲：３０℃、３０分間の処理では、ｐ
Ｈ４から９まで安定である。（７）各種金属塩による影響：銅、銀、水銀塩により顕
著に活性が阻害される。（８）各種阻害剤の影響：ｐ-(クロロメルクリ)安息香
酸、フェニルヒドラジンで活性が阻害される。（９）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミド・ゲル電気
泳動による測定で58,000、超遠心分析による測定で110,
000であり、同一サブユニット２個から成るダイマーで
ある。
【請求項２】バニリル・アルコールを含有する培養液中
で培養されたビッソクラミス属に属する菌株の菌体中よ
り得られ、水の存在下少なくとも下記の反応式Ａ、Ｂ、
Ｃに示す反応を触媒する酵素。【化２】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ²は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ³は水素原
子または水酸基を示し、Ｒ⁴は炭素数１〜１０のアルキ
ル基を示す。ただし、反応式ＣにおいてはＲ²は上述の
基以外に水素原子であることもできるが、この場合Ｒ¹
とＲ²が同時に水素原子であることはない。）
【請求項３】反応式Ｃで示される反応が不斉誘起反応で
ある請求項２に記載の酵素。
【請求項４】ビッソクラミス属に属する菌株がビッソク
ラミス・フルヴァ(Byssochlamys fulva)V107 FERM P-16
024である請求項２または３に記載の酵素。
【請求項５】請求項１〜４のいずれか１項に記載の酵素
を触媒として、水の存在下、下記の反応式Ａに示す反応
により一般式（１−ａ）で表されるｐ−アリルフェノー
ル誘導体から一般式（２−ａ）で表される３−（ｐ−ヒ
ドロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体を製造す
る方法。【化３】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ²は水酸基またはメトキシ基を示す。）
【請求項６】請求項１〜４のいずれか１項に記載の酵素
を触媒として、水の存在下、下記の反応式Ｂに示す反応
により一般式（１−ｂ）で表されるｐ−ヒドロキシトル
エン誘導体から一般式（２−ｂ）で表されるｐ−ヒドロ
キシベンズアルデヒド誘導体を製造する方法。【化４】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ²は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ³は水素原
子または水酸基を示す。）
【請求項７】請求項１〜４のいずれか１項に記載の酵素
を触媒として、下記の反応式Ｃに示す反応により一般式
（１−ｃ）で表されるｐ−アルキルフェノール誘導体か
ら一般式（２−ｂ）で表される光学活性１−（４−ヒド
ロキシフェニル）アルコール誘導体を製造する方法。【化５】（式中、Ｒ¹は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示
し、Ｒ²は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、
Ｒ⁴は炭素数１〜１０のアルキル基を示すが、Ｒ¹とＲ²
が同時に水素原子であることはない。）
【請求項８】バニリル・アルコールを含有する培養液中
でビッソックラミス属に属する菌株を培養し、続いてそ
の培養液に一般式（１−ａ）で表される基質を添加する
か、またはその培養液中で培養された菌株を一般式（１
−ａ）で表される基質を含有する他の培養液に移植して
さらに培養を行うことを特徴とする一般式（２−ａ）で
表される化合物の製造方法。【化６】
【請求項９】バニリル・アルコールを含有する培養液中
でビッソックラミス属に属する菌株を培養し、続いてそ
の培養液に一般式（１−ｂ）で表される基質を添加する
か、またはその培養液中で培養された菌株を一般式（１
−ｂ）で表される基質を含有する他の培養液に移植して
さらに培養を行うことを特徴とする一般式（２−ｂ）で
表される化合物の製造方法。【化７】
【請求項１０】バニリル・アルコールを含有する培養液
中でビッソックラミス属に属する菌株を培養し、続いて
その培養液に一般式（１−ｃ）で表される基質を添加す
るか、またはその培養液中で培養された菌株を一般式
（１−ｃ）で表される基質を含有する他の培養液に移植
してさらに培養を行うことを特徴とする一般式（２−
ｃ）で表される光学活性化合物の製造方法。【化８】