JPH10243788A - 新規ヒト７−トランスメンブランレセプターをコードするｃＤＮＡクローンＨＮＦＪＤ１５ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドおよびポリヌク
レオチド、ならびに組み換え法によりかかるポリペプチ
ドを製造する方法、ならびにＨＮＦＪＤ１５のバランス
不良関連症状の治療プロトコールの設計におけるＨＮＦ
ＪＤ１５ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用を
提供する。 【解決手段】 配列番号：２のポリペプチドもしくはそ
の対応フラグメントをコードしているヌクレオチド配列
に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列または上記ヌクレオチド配列に対して相補的なヌ
クレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、それによりコードされるポリペプチ
ド、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの使用、ならびにそれらの製造に関する。より詳細に
は、本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドはＧ蛋
白結合受容体（以下、ＨＮＦＪＤ１５という）に関連し
ている。また本発明は、かかるポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの阻害または活性化にも関する。

【０００２】

【従来の技術】医学的に重要な多くの生物学的プロセス
が、Ｇ蛋白および／または第２のメッセンジャー（例え
ば、ｃＡＭＰ）を含むシグナル伝達経路に関与している
蛋白により行われているということは、十分にわかって
いる（Lefkowitz,Nature,1991,351,353-354）。本明細
書では、これらの蛋白を、Ｇ蛋白またはＰＰＧ蛋白に関
する経路に関与する蛋白という。これらの蛋白のいくつ
かの例としては、ＧＰＣ蛋白（例えば、アドレナリン作
用性因子およびドパミン（Kobilka,B.K.,et al.,Proc.N
atl.Acad.Sci.,USA,1987,84:46-50;Kobolka,B.K. et a
l.,Science,1987,238:650-656;Bunzow,J.R.,et al.,Nat
ure,1988,336:783-787））、Ｇ蛋白自体、エフェクター
蛋白（effector proteins）（例えば、ホスホリパーゼ
Ｃ、アデニルシクラーゼおよびホスホジエステラー
ゼ）、ならびにアクチュエーター蛋白（actuator prote
ins）（例えば、蛋白キナーゼＡおよび蛋白キナーゼ
Ｃ）（Simon,M.I.,et al.,Science,1991,252:802-80
8））が挙げられる。例えば、シグナル伝達の１の形態
において、ホルモン結合の効果は細胞内酵素アデニレー
トシクラーゼの活性化である。ホルモンによる酵素の活
性化はヌクレオチドＧＴＰの存在による。ＧＴＰはホル
モン結合にも影響する。Ｇ蛋白は、ホルモン受容体によ
り活性化された場合に、ＧＴＰを結合ＧＤＰに交換する
ことが示された。次いで、ＧＴＰ担持形態は活性化アデ
ニレートシクラーゼに結合する。Ｇ蛋白自体により触媒
されるＧＴＰからＧＤＰへの加水分解によりＧ蛋白はそ
の基底不活性形態に戻る。かくして、Ｇ蛋白は２重の役
割、すなわち、受容体からエフェクターへのシグナルを
遅延させる中間体およびシグナル間隔を制御する時計と
しての作用を行う。

【０００３】Ｇ蛋白結合受容体の膜蛋白遺伝子スーパー
ファミリーは、７つの推定上のトランスメンブランドメ
インを有するものと特徴づけられている。ドメインは、
細胞外または細胞質ループにより結合されたトランスメ
ンブランα−ヘリックスを示すと考えられている。Ｇ蛋
白結合受容体は、広範な生物学的活性受容体を包含し、
例えば、ホルモン、ウイルス、成長因子および神経受容
体を包含する。Ｇ蛋白結合受容体（あるいは７ＴＭ受容
体としても知られる）は、少なくとも８個の種々異なる
親水性ループに結合した約２０ないし３０個のアミノ酸
からなるこれら７個の保存された疎水的配列を含むもの
として特徴づけられている。Ｇ蛋白ファミリーの結合受
容体はドパミン受容体を包含し、それは精神病および神
経学的疾病の治療に使用される神経遮断薬に結合する。
このファミリーのメンバーの他の例は、カルシトニン、
アドレナリン作動性物質、エンドセリン、ｃＡＭＰ、ア
デノシン、ムスカリン作動性物質、アセチルコリン、セ
ロトニン、ヒスタミン、スロンビン、キニン、卵胞刺激
ホルモン、オプシン、内皮分化遺伝子−１、ロドプシ
ン、オドラント、およびサイトメガロウイルス受容体が
挙げられるが、これらに限らない。たいていのＧ蛋白結
合受容体は、最初の２個の細胞外ループ中にそれぞれ１
個の保存されたシステイン残基を有し、ジスルフィド結
合を形成して機能的蛋白構造を安定化していると考えら
れている。７個のトランスメンブラン領域はＴＭ１、Ｔ
Ｍ２、ＴＭ３、ＴＭ４、ＴＭ５、ＴＭ６、およびＴＭ７
と命名されている。ＴＭ３がシグナル伝達に関与してい
る。

【０００４】システイン残基のホスホリレーションおよ
びリピデーション（パリミチレーションまたはファルネ
シレーション）により、いくつかのＧ蛋白結合受容体の
シグナル伝達が影響を受ける可能性がある。たいていの
Ｇ蛋白結合受容体は、３番目の細胞質ループおよび／ま
たはカルボキシ末端に潜在的なホスホリレーション部位
を有する。いくつかのＧ蛋白結合受容体、例えばβ−ア
ドレナリン受容体については、蛋白キナーゼＡおよび／
または特異的受容体キナーゼによるホスホリレーション
により受容体脱感作が媒介される。いくつかの受容体に
ついては、Ｇ蛋白結合受容体のリガンド結合部位は、い
くつかのＧ蛋白結合受容体トランスメンブランドメイン
により形成された親水性ソケットを含むと考えられてお
り、該ソケットはＧ蛋白結合受容体の疎水性残基により
囲まれていると考えられている。各Ｇ蛋白結合受容体ト
ランスメンブランヘリックスの親水性部位は内側を向
き、極性リガンド結合部位を形成すると考えられる。Ｔ
Ｍ３は、リガンド結合部位（例えば、ＴＭ３のアスパラ
ギン酸残基）を有するようないくつかのＧ蛋白結合受容
体中に含まれている。ＴＭ５のセリン、ＴＭ６のアスパ
ラギンおよびＴＭ６もしくはＴＭ７のフェニルアラニン
もしくはチロシンもまたリガンド結合に関与している。
ヘテロ３量体Ｇ蛋白により、Ｇ蛋白結合受容体は種々の
細胞内酵素、イオンチャンネルおよびトランスポーター
に細胞内で結合されうる（Johnson et al.,Endoc.Rev.,
1989,10:317-331参照）。別のＧ蛋白α−サブユニット
は特定のエフェクターを優先的に刺激して、細胞中の種
々の生物学的機能を転調させる。Ｇ蛋白結合受容体の細
胞質残基のホスホリレーションは、いくつかのＧ蛋白結
合受容体のＧ蛋白結合の調節のための重要な機構である
と同定されている。Ｇ蛋白結合受容体は哺乳動物宿主中
の多くの部位に見いだされている。

【０００５】過去１５年間にわたり、７トランスメンブ
ラン（７ＴＭ）受容体を標的とする約３５０種の治療薬
の市場導入が成功している。このことは、これらの受容
体が、治療標的として確立され証明された歴史を有する
ことを示すものである。細菌、真菌、原生動物およびウ
イルス感染のごとき感染症、詳細にはＨＩＶ−１または
ＨＩＶ−２による感染；痛み；癌；拒食症；大食症；喘
息；パーキンソン病；急性心臓疾患；低血圧；高血圧；
尿閉；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギ
ー；良性前立腺肥大；ならびに不安症、分裂病、躁鬱
病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞および運動障害（例
えば、Huntington病またはGilles dela Toutrett症候
群）を包含する精神病および神経学的疾病を包含（これ
らに限らない）する機能不全を予防、改善または修正す
ることにおいて役割りを果たすことのできるさらなる受
容体の同定および特徴づけが明らかに必要である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】１の態様において、本
発明は、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドならびにその製造
のための組み換え物質および方法に関する。本発明のも
う１つの態様は、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドおよびポ
リヌクレオチドの使用方法に関する。かかる方法は、細
菌、真菌、原生動物およびウイルス感染のごとき感染
症；詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２による感染；
痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；パーキンソン病；急
性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆症；狭心
症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺肥大；な
らびに不安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴呆、重度の
精神遅滞および運動障害（例えば、Huntington病または
Gilles dela Toutrett症候群）を包含する精神病および
神経学的疾病の治療を包含する。さらにもう１つの態様
において、本発明は、本発明により提供される材料を用
いるアンタゴニストおよびアゴニストの同定方法、なら
びに同定された化合物を用いるＨＮＦＪＤ１５のバラン
ス不良関連症状の治療方法に関する。さらにもう１つの
態様は、不適当なＨＮＦＪＤ１５活性またはレベルに関
連した疾病の検出のための診断アッセイに関する。

【０００７】

【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】定義 下記定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の
理解を容易にするためのものである。「ＨＮＦＪＤ１
５」は、一般的には、配列番号：２に示すアミノ酸配列
を有するポリペプチド、またはその対立遺伝子変種をい
う。「受容体活性」または「受容体の生物学的活性」
は、該ＨＮＦＪＤ１５の代謝的または生理学的機能をい
い、類似の活性または改善された活性または望ましくな
い副作用を減じられたこれらの活性を包含する。該ＨＮ
ＦＪＤ１５の抗原性および免疫原性の活性も含まれる。
「ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチド」は、ＨＮＦＪＤ１５配
列に十分類似しているアミノ酸配列を有するポリペプチ
ドをいい、好ましくは、少なくとも１つの受容体活性を
示すものをいう。「ＨＮＦＪＤ１５遺伝子」は、配列番
号：１に示すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドまたはその対立遺伝子変種および／またはそれらの相
補物をいう。「ＨＮＦＪＤ１５ポリヌクレオチド」は、
ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドまたはそのフラグメントを
コードしているヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチ
ド、または配列番号：２のポリペプチドもしくはその対
応フラグメントをコードしているヌクレオチド配列に対
して少なくとも５７．００％の同一性を有するヌクレオ
チド配列を含むポリヌクレオチド、または配列番号：１
に含まれるヌクレオチド配列に対して充分な同一性を有
しているため増幅に使用可能な条件下またはプローブも
しくはマーカーとして使用可能な条件下でハイブリダイ
ゼーションするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチ
ドをいう。

【０００８】本明細書の用語「抗体」は、ポリクローナ
ルおよびモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、ならび
にヒト化抗体、さらにはＦａｂフラグメントを包含し、
Ｆａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブラリーの生
成物も包含する。

【０００９】「単離」とは、「人間の手により」天然の
状態から変化させられた、すなわち、それが天然に存在
する場合、元来の環境から変化させるもしくは取り除
く、またはその両方を行ったことを意味する。例えばポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然の状態で生
物中に存在する場合は、「単離」されていないが、同一
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然に共存
する物質から分離されている場合は、本明細書に用いる
用語である、「単離」がなされている。

【００１０】「ポリヌクレオチド」とは、一般的には、
修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾さ
れたＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、任意のポリリ
ボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを
意味する。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖および二本
鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物または一本
鎖、二本鎖および三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一
本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖
領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより典型的
には二本鎖もしくは三本鎖、または一本鎖および二本鎖
領域の混合物であってもよいＤＮＡおよびＲＮＡを含む
ハイブリッド分子を意味するが、これらに限定するもの
ではない。さらに、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡも
しくはＤＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本
鎖領域を意味する。安定性またはその他の理由で修飾し
た骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡは、本明細書の用語
「ポリヌクレオチド」に含まれる。イノシン等の通常的
でない塩基、またはトリチル化塩基等は「修飾」された
塩基に含まれる。種々の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡにつ
いて行われているので、「ポリヌクレオチド」は、典型
的に天然において見いだされるようなポリヌクレオチド
のかかる化学的、酵素的または代謝的に修飾された形
態、ならびにウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよ
びＲＮＡの化学的形態を包含する。また、「ポリヌクレ
オチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと称される短
いポリヌクレオチドを包含する。

【００１１】「ポリペプチド」は、ペプチド結合または
修飾したペプチド結合により互いに結合している２個ま
たはそれ以上のアミノ酸を含むペプチドまたは蛋白を意
味する。「ポリペプチド」は、通常、例えばペプチド、
オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称される短鎖のも
の、および一般的に蛋白と称される長鎖のものの両方を
意味する。ポリペプチドは遺伝子によりコードされた２
０種のアミノ酸とは異なるアミノ酸を含有していてもよ
い。「ポリペプチド」には、プロセッシングおよびその
他の翻訳後修飾のような天然プロセスにより修飾された
ものが含まれるが、当業者に周知の化学修飾技術によっ
ても修飾される。かかる修飾は基礎的な参考書およびさ
らに詳細な論文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載
されており、これらは当業者に周知である。修飾は、ペ
プチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキ
シル末端等のポリペプチドの任意の部位で起こりうる。
同一の型の修飾は該ポリペプチドの幾つかの部位で、同
一または異なる程度で存在し得ることが理解されよう。
また、ポリペプチドは多くの型の修飾をも含み得る。ポ
リペプチドは、ユビキチネーションの結果として分枝状
となったものであってもよく、ポリペプチドは分枝あり
またはなしの環状のものであってもよい。環状、分枝
状、および環状かつ分枝状ポリペプチドは、翻訳後の天
然プロセスにより生じるものであってもよく、マタ、合
成的方法により作られるものであってもよい。修飾に
は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミ
ド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌク
レオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質ま
たは脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトール
の共有結合、交差架橋、環化、ジスルフィド結合形成、
脱メチル化、交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピ
ログルタメート形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシ
ル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨ
ウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白加水分
解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、
グリコシル化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基の
ガンマ−カルボキシル化、水酸化およびＡＤＰリボシル
化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のごときトラ
ンスファーＲＮＡ媒介の蛋白へのアミノ酸の添加、なら
びにユビキチネーションなどがある。例えばProteins-S
tructure and Molecular Properties、第２版、T.E.Cre
ighton、W.H.Freeman and Company、ニューヨーク（199
3）およびPosttranslational Covalent Modification o
f Proteins、B.C.Johnson編、アカデミックプレス、ニ
ューヨーク（1983）のWold,F.,PosttranslationalProte
in Modifications ：Perspective and Prospects、1〜1
2頁；Seifterら、Meth.Enzymol.182:626-646（1990）お
よびRattanら、Protein Synthesis：Posttranslational
Modifications and Aging，Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-
62（1992）を参照されたい。

【００１２】本明細書で用いる「変種」なる用語は、対
照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なる
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的
な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変
種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列
が異なる。変種のヌクレオチド配列の変化は、対照ポリ
ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ
酸配列を変化させるものであってもよく、変化させない
ものであってもよい。以下に論じるように、ヌクレオチ
ドの変化は結果的に、対照配列によりコードされるポリ
ペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠損、融合およ
び末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別
の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的
には、差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、
全体的に非常に類似しており、多くの領域で同一なもの
に限られる。変種および対照ポリペプチドは、１または
それ以上の置換、付加、欠損が任意の組み合わせで起こ
ることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換または
挿入されたアミノ酸残基は、遺伝学的コードによりコー
ドされたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの変種は、例えば対立遺伝子変種
のような自然発生的なものでもよく、または自然発生す
ることが知られていない変種でよい。ポリヌクレオチド
およびポリペプチドの非自然発生変種は、突然変異技術
または直接的合成により製造できる。

【００１３】「同一性」とは、ヌクレオチド配列または
アミノ酸配列の同一性の尺度である。一般的には、最高
の合致が得られるように配列を並置する。「同一性」は
それ自体当該分野で認識されている意味を有し、公表さ
れた手法を用いて計算できる。例えば、Computational
Molecular Biology，Lesk,A.M.編、オックスフォード・
ユニバーシティー・プレス、ニューヨーク、1988年；Bi
ocomputing：Informatics and Genome Projects，Smit
h,D.W.編、アカデミック・プレス、ニューヨーク、1993
年；Computer Analysis of Sequence Data，パートＩ，
Griffin,A.M.およびGriffin,H.G.編、ヒューマン・プレ
ス、ニュージャージー、1994年；Sequence Analysis in
Molecular Biology，von Heinje,G.、アカデミック・
プレス、1987年；およびSequence Analysis Primer，Gr
ibskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトン・プレ
ス、ニューヨーク、1991年参照。二つのポリヌクレオチ
ド配列またはポリペプチド配列の間の同一性および類似
性を測定する方法は多くあるが、用語「同一性」は当業
者に周知である（Carillo,H.およびLipman,D.，SIAM J.
Applied Math.，48:1073（1988））。配列間の同一性ま
たは類似性を測定するために通常用いられる方法は、Gu
ide to Huge Computers,Martin J.Bishop,ed.,Academic
Press,San Diego,1994およびCarilo,H.,and Lipton,
D.,SIAM J.Applied Math.，48:1073（1988）等に開示さ
れているが、これらに限定するものではない。同一性を
決定するための好ましい方法は、試験する配列間で最も
良く適合するように設計される。同一性および類似性を
決定する方法は、公に入手できるコンピュータープログ
ラムに集成されている。二つの配列間の同一性および類
似性を測定する好ましいコンピュータープログラム法に
は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux,J.ら、Nuc
leic Acids Research 12(1):387（1984）、BLASTP、BLA
STN、およびFASTA（Atschul,S.F.ら、J.Molec.Biol（19
90） 215:403））等があるが、これらに限定するもので
はない。

【００１４】本発明のポリペプチド 本発明ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドは、配列番号：２の
ポリペプチド（詳細には、成熟ポリペプチド）ならびに
ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドを包含し、配列番号：２の
ポリペプチドまたはその関連部分に対して少なくとも２
６．８％の同一性を有するものであり、より好ましく
は、配列番号：２に対して少なくとも８０％の同一性を
有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、さらに
好ましくは少なくとも９０％の同一性、そのうえさらに
好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するポリペプ
チドを包含する。ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドは「成
熟」蛋白の形態であってもよく、あるいは融合蛋白のご
とき大型の蛋白の一部であってもよい。分泌またはリー
ダー配列、プロ配列、複数のヒスチジン残基のごとき精
製を促進する配列、または組み換え生産を行っている間
の安定性のためのさらなる配列を含むさらなるアミノ酸
配列を含んでいることがしばしば有利である。

【００１５】生物学的に活性のあるＨＮＦＪＤ１５のフ
ラグメントも本発明に含まれる。フラグメントは、前述
のＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドのアミノ酸配列のすべて
ではなく一部に対して全く同一であるアミノ酸配列を有
するポリペプチドである。ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチド
では、フラグメントは「独立して存在するもの（freest
anding）」であるか、あるいはより大きなポリペプチド
内に含まれていてもよく、その中でフラグメントは一部
分もしくは領域を形成している。最も好ましくは、単一
の連続した領域として、より大きなポリペプチドに含ま
れる。本発明ポリペプチドフラグメントの典型例は、例
えば、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドのアミノ酸番号約１
〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜
１００および１０１から末端までからなるフラグメント
を包含する。この意味において、「約」とは、片方の端
または両端において、示された数よりも数個、５個、４
個、３個、２個または１個多いかまたは少ない範囲を含
む。好ましいフラグメントは、例えば、アミノ末端を含
む一連の残基が欠失、またはカルボキシ末端を含む一連
の残基が欠失、あるいは一方がアミノ末端でもう一方が
カルボキシ末端を含む２種の一連の残基が欠失している
こと以外はＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドのアミノ酸配列
を有する末端切断ポリペプチドを包含する。また、構造
的または機能的属性により特徴づけられるフラグメン
ト、例えばアルファーヘリックスおよびアルファーヘリ
ックス形成領域、ベータシートおよびベータシート形成
領域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイ
ル形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファー両親
媒性領域、ベータ両親媒性領域、可変領域、表面形成領
域、基質結合領域、および高抗原性指標領域を含むフラ
グメントなども好ましい。受容体活性を媒介する、生物
学的に活性な領域も好ましく、類似の活性もしくは改善
された活性のある、または望ましくない活性を減じたフ
ラグメント等がある。動物、とりわけヒトにおいて抗原
的または免疫原的なフラグメントも含まれる。

【００１６】本発明ポリペプチドは、配列番号：２に対
して少なくとも２６．８％の同一性を有するアミノ酸配
列を有するポリペプチド、または配列番号：２の対応フ
ラグメントに対して少なくとも２６．８％の同一性を有
するそのフラグメントを包含する。好ましくは、これら
のポリペプチドのすべては、抗原的活性を包含する受容
体の生物学的活性を保持している。上記配列およびフラ
グメントの変種もこのグループに含まれる。好ましい変
種は、保存的アミノ酸置換により変化したものであり、
すなわち、同様の特徴を有するアミノ酸により置換され
ているものである。典型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖ
ａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ間：ＳｅｒおよびＴｈｒ間；
ＡｓｐおよびＧｌｕ間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；ならび
に塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇ間；あるいは芳香族残
基ＰｈｅおよびＴｙｒ間におけるものである。数個、５
ないし１０個、１ないし５個、または１ないし２個のア
ミノ酸がいずれかの組み合わせで置換、欠失または付加
されている変種が特に好ましい。

【００１７】いずれの適当な方法でも本発明ＨＮＦＪＤ
１５ポリペプチドを製造することができる。かかるポリ
ペプチドは、単離された天然ポリペプチド、組み換え法
によるポリペプチド、合成法によるポリペプチド、また
はこれらの方法の組み合わせによるポリペプチドを包含
する。かかるポリペプチドの製造手段は当該分野におい
てよく理解されている。

【００１８】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう１つの態様は、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチ
ドをコードしている単離ポリヌクレオチドおよびそれに
密接に関連しているポリヌクレオチドに関する。ヒト・
ＨＮＦＪＤ１５をコードしているｃＤＮＡの配列決定の
結果により示されるように、本発明ＨＮＦＪＤ１５はＧ
蛋白結合受容体に構造上関連している。そのｃＤＮＡ配
列は３９６個のアミノ酸の蛋白をコードしている１つの
読み枠を含み、その推定分子量は４３．７１ｋＤａであ
る。図１および２のＨＮＦＪＤ１５（配列番号：２）
は、ヒト・ヒスタミンＨ２受容体(Neuroreport, 7(7),
1293-1296 (1996)、受託番号Ｘ９８１３３）に対して２
２４個のアミノ酸残基において約２６．８％の同一性を
有する（FASTAを用いた場合）。さらにそのうえ、ＨＮ
ＦＪＤ１５（配列番号：２）は、セロトニン５ＨＴ２受
容体（Pro. Natl. Acad. Sci. USA. 92(12),5441-5445
(1995)、受託番号Ｘ８１８３５）に対して１９５個のア
ミノ酸について２３．１％の同一性がある。さらにその
うえ、ＨＮＦＪＤ１５は、ドーパミン受容体様蛋白Ｄ２
１５（Genomics, 25(2), 436-446 (1995)、受託番号Ｘ
８０１７５）に対して１９６個のアミノ酸残基について
２９．６％の同一性がある。図１および２のＨＮＦＪＤ
１５遺伝子（配列番号：１）は、ヒト・神経ペプチドＹ
４受容体（Bard J.A. et al., J.Biol.Chem.270(45),26
762-26765, (1995)、受託番号Ｕ３５２３２）に対して
２１２個のヌクレオチド残基について約５７．００％の
同一性を有する（BLASTを用いた場合）。さらにそのう
え、ＨＮＦＪＤ１５（配列番号：１）は、ヒト・膵臓ポ
リペプチド受容体（Larhammar D. et al., J. Biol. Ch
em.,279(49), 29123-29128 (1995)、受託番号Ｚ６６５
２６）に対して２１２個のヌクレオチド塩基残基につい
て５７．０８％の同一性がある。

【００１９】標準的クローニングおよびスクリーニング
を用い、ヒト・好中球（活性化されたもの）、ヒト・胎
児脳およびヒト・白血球細胞のｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡ
ライブラリーから、発現配列タグ（ＥＳＴ）分析（Adam
s,M.D.,et al.Science(1991)252:1651-1656;Adams,M.D.
et al.,Nature(1992)355:632-634;Adams,M.D.,et al.,N
ature(1995)377 Supp:3-174）を用いて、ＨＮＦＪＤ１
５をコードしている本発明の１のポリヌクレオチドを得
てもよい。ゲノムＤＮＡライブラリーのごとき天然起源
から本発明ポリヌクレオチドを得ることもでき、あるい
はよく知られ市販されている手段方法を用いて合成する
こともできる。

【００２０】よって、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドをコ
ードしているヌクレオチド配列は図１および２（配列番
号：１）のコーディング配列に対してその全長にわたり
同一であってもよく、あるいは配列番号：２のポリペプ
チドをコードしているこのヌクレオチド配列の縮重形態
であってもよく、あるいは配列番号：２のポリペプチド
をコードしているヌクレオチド配列に対して非常に高い
同一性を有するものであってもよい。好ましくは、本発
明ポリヌクレオチドは、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドを
コードしているヌクレオチド配列に対して高い同一性、
少なくとも５７．００％の同一性を有するヌクレオチド
配列、あるいは図１および２（配列番号：１）に示すヌ
クレオチド配列に対して少なくとも５７．００％の同一
性を有するヌクレオチド配列、あるいは配列番号：２の
ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列に対し
て少なくとも５７．００％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列を含む。

【００２１】本発明ポリヌクレオチドをＨＮＦＪＤ１５
ポリペプチドの組み換え生産に用いる場合、ポリヌクレ
オチドはそれ自体、成熟ポリペプチドまたはそのフラグ
メントのコーディング配列を含むものであってもよく；
あるいは他のコーディング配列を伴った読み枠中の成熟
ポリペプチドまたはフラグメントのコーディング配列を
含むものであってもよい。他のコーディング配列として
は、例えば、リーダーまたは分泌配列、プレ、プロ、プ
レプロ蛋白配列をコードするコーディング配列、または
他の融合ペプチド部分が挙げられる。例えば、融合ポリ
ペプチドの精製を促すマーカー配列をコードしていても
よい。本発明のこの態様の１の好ましい具体例におい
て、マーカー配列は、ｐＱＥベクター（Qiagen,Inc.）
に提供されるようなヘキサ−ヒスチジンペプチド（Gent
zら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，86:821-824（1989）に
記載される）またはＨＡタグ（Wilsonら、Cell，37:767
（1984））である。本発明のポリヌクレオチドはまた、
構造遺伝子および遺伝子発現を調節する天然の配列をも
含むが、これらに限定するものではない。ポリヌクレオ
チドは、例えば、転写された非翻訳配列、終止シグナ
ル、リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配列、
イントロン、ポリアデニル化シグナル等の転写非翻訳配
列、および付加アミノ酸をコードする付加コーディング
配列のごとき非コーディング５'および３'配列を含有し
ていてもよい。とりわけ好ましい本発明の具体例は、図
１および２（配列番号：２）に示すアミノ酸配列を有す
るＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドをコードしているポリヌ
クレオチド、およびそれらの変種である。さらに好まし
い具体例は、図１および２に示すＨＮＦＪＤ１５ポリペ
プチドのアミノ酸配列（配列番号：２）を含むＨＮＦＪ
Ｄ１５変種をコードしているポリヌクレオチドであり、
数個、５ないし１０個、１ないし５個、１ないし３個、
１ないし２個または１個のアミノ酸残基がいずれかの組
み合わせで置換、欠失または付加されているものであ
る。さらに好ましい本発明の具体例は、図１および２
（配列番号：２）に示すアミノ酸配列を有するＨＮＦＪ
Ｄ１５ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド
に対してその全長にわたり少なくとも５７．００％同一
であるポリヌクレオチド、およびかかるポリヌクレオチ
ドに対して相補的なポリヌクレオチドである。この点に
おいて、上記ポリヌクレオチドに対してその全長にわた
り少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチドが特に
好ましく、少なくとも９０％同一であるものが特に好ま
しい。さらにそのうえ、少なくとも９７％同一のものが
非常に好ましく、少なくとも９８−９９％のものが最も
非常に好ましく、少なくとも９９％同一のものが最高に
好ましい。

【００２２】さらに本発明は、上記配列にハイブリダイ
ゼーションするポリヌクレオチドにも関する。この点に
おいて、本発明は、厳密な条件下で上記ポリヌクレオチ
ドにハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに特
別に関連する。本明細書の用語「厳密な条件」とは、配
列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％
の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起
こることを意味する。

【００２３】配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列
に対して十分に同一である本発明ポリヌクレオチドをｃ
ＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーション
プローブとして用いて全長のｃＤＮＡおよびＨＮＦＪＤ
１５をコードしているゲノムクローンを単離し、あるい
はＨＮＦＪＤ１５遺伝子に対して高い類似性を有する配
列を有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムクローン
を単離してもよい。かかるハイブリダイゼーション法は
当業者に知られている。典型的には、これらのヌクレオ
チド配列は、対照に対して７０％、好ましくは８０％、
より好ましくは９０％の同一性を有する。一般的には、
プローブは少なくとも１５個のヌクレオチドを含む。好
ましくは、かかるプローブは少なくとも３０個のヌクレ
オチドを有し、少なくとも５０個のヌクレオチドを有し
ていてもよい。特に好ましいプローブは３０ないし５０
個の範囲のヌクレオチドを含む。本発明ポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドを、動物およびヒトの疾病の研究
試薬ならびに治療および診断のための材料として用いて
もよい。

【００２４】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌ
クレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子
操作する宿主細胞および組換え技法による本発明のポリ
ペプチドの製造にも関する。本発明のＤＮＡ構築物に由
来するＲＮＡを用いる、かかる蛋白の製造に無細胞翻訳
系を用いてもよい。組換え体を製造するために、宿主細
胞を遺伝子操作して、発現系もしくはそれらの一部、ま
たは本発明のポリヌクレオチドを組み込むことができ
る。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、
Davisら、Basic Methods in Molecular Biology（198
6）；Sambrookら、Molecular Cloning；A Laboratory M
anual、第２版；コールド・スプリング・ハーバー・ラ
ボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバ
ー、ニューヨーク（1989）のように、多くの標準的な実
験マニュアルに記載される方法により行うことができ、
例えばリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡ
Ｅ−デキストラン媒介トランスフェクション、トランス
ベクション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質
媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、
トランスダクション、スクレイプ負荷（scrapeloadin
g）、バリスティック導入（ballistic introduction）
および感染等がある。

【００２５】適当な宿主の代表的なものには、細菌細
胞、例えば連鎖球菌属（Streptococci）、ブドウ球菌属
（Staphylococci）、大腸菌（E.coli）、ストレプトミ
セスおよび枯草菌（Bacillus subtiis）細胞；真菌細胞
例えば酵母細胞およびアスペルギルス属（Aspergillu
s）細胞；昆虫細胞例えばショウジョウバエＳ２（Droso
phila S2）およびスポドプテラＳｆ９（Spodoptera Sf
9）細胞；動物細胞例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、
Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびボウズ（Bow
s）黒色腫細胞；ならびに植物細胞等がある。

【００２６】非常に多くの発現系を使用できる。かかる
系は、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクタ
ー、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由
来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エ
レメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキ
ュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ４０、ワク
シニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性
狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来
のベクター、ならびにそれらを組み合わせた物に由来す
るベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファー
ジ遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコスミド
およびファージミドを包含する。発現系は、発現を制御
ならびに発生させる制御領域を含有していてもよい。一
般的には、宿主中でポリヌクレオチドを保持、伸長また
は発現してポリペプチドを発現するのに適した系または
ベクターを用いてもよい。例えばSambrookら、Molecula
rCloning，A Laboratory Manual（上述）に記載されて
いるような周知のおよび常套的な種々の技術により、適
当なＤＮＡ配列を発現系に挿入できる。

【００２７】翻訳蛋白を、小胞体内腔、ペリプラスミッ
クスペースまたは細胞外環境へ分泌させるために、適当
な分泌シグナルを所望ポリペプチド中に含ませてもよ
い。これらのシグナルはポリペプチドに本来的なもので
あってもく、あるいは異種性のシグナルでもよい。

【００２８】ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドをスクリーニ
ングアッセイのために発現させる場合、一般的には、細
胞表面にポリペプチドを生成させるのが好ましい。この
場合、スクリーニングアッセイに使用する前に細胞を集
めてもよい。ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドを培地中でス
クリーニングする場合、培地を回収してポリペプチドを
回収し精製することができる。細胞内に生成される場
合、まず細胞を溶解し、次いで、ポリペプチドを回収し
なければならない。ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドは周知
の方法により、組換え細胞培養物から回収および精製で
き、その方法には例えば硫酸アンモニウムまたはエタノ
ール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマ
トグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、
疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー
およびレクチンクロマトグラフィー等がある。高速液体
クロマトグラフィーを精製に用いるのが最も好ましい。
ポリペプチドが単離および／または精製中に変性した場
合、再び活性な立体配座にするために、蛋白再生のため
の周知の技法を用いることができる。

【００２９】診断アッセイ 本発明はまた診断試薬としての本発明ＨＮＦＪＤ１５ポ
リヌクレオチドの使用にも関する。機能不全に関連した
変異形態のＨＮＦＪＤ１５遺伝子は、ＨＮＦＪＤ１５の
発現低下、過剰発現または変化した発現から生じる疾病
の診断またはかかる疾病に対する感受性の診断に付加で
き、かかる診断を決定する診断用手段を提供するであろ
う。種々の方法により、ＨＮＦＪＤ１５遺伝子中の変異
を有する個体をＤＮＡレベルで検出してもよい。診断用
の核酸は、対象の細胞、例えば骨、血液、尿、唾液、組
織生検または剖検材料から得てもよい。ゲノムＤＮＡは
検出に直接使用できるか、または分析の前にＰＣＲもし
くはその他の増幅法を用いることにより酵素的に増幅で
きる。ＲＮＡまたはｃＤＮＡも同様の方法で用いること
ができる。正常な遺伝子型と比較した場合の増幅生成物
のサイズの変化により、欠失および挿入を検出すること
ができる。点突然変異は、増幅ＤＮＡを標識化ＨＮＦＪ
Ｄ１５ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズさせるこ
とにより同定できる。好ましくは、完全に対合した配列
は、ＲＮアーゼ消化または融解温度の差により、誤対合
二重らせんから区別できる。ＤＮＡ配列の差はまた、変
性剤含有または不含のゲル中のＤＮＡフラグメントの電
気泳動の移動度の変化を検出することにより、または直
接的なＤＮＡの配列決定により検出できる。例えばMeye
rs et.al.Science，230:1242（1985）参照。特異的な位
置での配列の変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッセイ例
えばＲＮアーゼおよびＳ１保護または化学的切断法によ
っても明らかにすることができる。例えばCotton et a
l.Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，85:4397-4401（1985）参
照。

【００３０】診断アッセイは、本明細書記載の方法によ
りＨＮＦＪＤ１５遺伝子の変異を検出することにより、
細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染のごとき感染
症、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２による感染；
痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；パーキンソン病；急
性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆症；狭心
症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺肥大；な
らびに不安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴呆、重度の
精神遅滞および運動障害（例えば、Huntington病または
Gilles dela Toutrett症候群）を包含する精神病および
神経学的疾病に対する感受性の診断または決定方法を提
供する。

【００３１】さらに、対象由来の試料の異常に上昇また
は低下したＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドもしくはＨＮＦ
ＪＤ１５ ｍＲＮＡレベルを調べることを特徴とする方
法によって、細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染
のごとき感染症、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２
による感染；痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；パーキ
ンソン病；急性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗
鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立
腺肥大；ならびに不安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴
呆、重度の精神遅滞および運動障害（例えば、Huntingt
on病またはGilles dela Toutrett症候群）を包含する精
神病および神経学的疾病を診断することができる。減少
または増加した発現は、ポリヌクレオチドの定量法とし
て当該分野で周知の方法の任意の方法、例えばＰＣＲ、
ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼ保護、ノーザンブロッティン
グおよびその他のハイブリダイゼーション法を用いて測
定できる。宿主由来の試料中の蛋白レベル、例えばＨＮ
ＦＪＤ１５のレベルを決定するために用いることができ
るアッセイ法は、当業者に周知である。このようなアッ
セイ法には、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセ
イ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイ
等がある。

【００３２】染色体アッセイ 本発明ヌクレオチド配列は染色体の同定にも価値があ
る。本発明配列は、個々のヒト・染色体上の特定の位置
を標的とし、これにハイブリダイゼーションしうる。本
発明による重要な部分の染色体へのマッピングは、それ
らの配列を遺伝子関連疾病と関連づける重要な第１工程
である。配列を正確な染色体位置にマッピングしたなら
ば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝学的地図のデー
タと関連づけることができる。かかるデータは、例え
ば、V.McKusick,Mendelian Inheritance in Man（Johns
Hopkins University Weich Medical Libraryからオン
ラインで利用できる）に見いだされる。次いで、連関
（物理的に近接した遺伝子の同時遺伝）の分析により、
同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾病との関
係を同定する。罹病個体と未罹病個体との間のｃＤＮＡ
またはゲノム配列の相違も調べることができる。罹病個
体のいくつかまたは全部において変異が観察されるが正
常個体においては観察されない場合、その変異は疾病の
原因である可能性がある。

【００３３】抗体 本発明のポリペプチドもしくはそれらの変種、またはそ
れらを発現する細胞は、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドに
対して免疫特異的な抗体を産生する免疫原として用いる
ことができる。本明細書で用いる「免疫特異的」とは、
抗体が、先行技術における他の関連ポリペプチドに対し
てよりも、本発明ポリペプチドに対して実質的に大きい
アフィニティーを有することを意味する。本発明のポリ
ペプチドに対して生じる抗体は、ポリペプチドまたはエ
ピトープが付いたフラグメント、アナログまたは細胞
を、好ましくはヒトはでない動物に、通常の実験法を用
いて投与することにより得ることができる。連続的細胞
系培養により産生される抗体を提供する、当業者周知の
技術を用いて、モノクローナル抗体を調製することがで
きる。例としては、Kohler,G. and Milstein,C.，Natur
e，256:495-497（1975）；Kozbor et al.Immunology To
day，4:72（1983）；Cole et al.Monoclonal Antibodie
s and Cancer Therapy,Alan R Liss,Inc.,77-96頁（198
5）に記載されるような種々の技法がある。

【００３４】一本鎖抗体の産生のために記載された技術
（米国特許第４９４６７７８号）は、本発明のポリペプ
チドに対する一本鎖抗体を産生するのに適用できる。ま
た、トランスジェニックマウスまたはその他の生物、例
えばその他の哺乳動物を用いてヒト化抗体等の抗体を発
現させてもよい。上記抗体を用いて、ポリペプチドを発
現するクローンを単離または同定してもよく、あるいは
アフィニティークロマトグラフィーによりポリペプチド
を精製してもよい。

【００３５】ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドに対する抗体
を用いて、細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染の
ごとき感染症、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に
よる感染；痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；パーキン
ソン病；急性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆
症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺
肥大；ならびに不安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴
呆、重度の精神遅滞および運動障害（例えば、Huntingt
on病またはGilles dela Toutrett症候群）を包含する精
神病および神経学的疾病を治療してもよい。

【００３６】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物における免疫学的反応を
誘導する方法に関し、該方法は、抗体および／またはＴ
細胞免疫応答を生じさせるに十分なＨＮＦＪＤ１５また
はそれらのフラグメントを哺乳動物に接種して、細菌、
真菌、原生動物およびウイルス感染のごとき感染症、詳
細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２による感染；痛み；
癌；拒食症；大食症；喘息；パーキンソン病；急性心臓
疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆症；狭心症；心筋
梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺肥大；ならびに不
安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞
および運動障害（例えば、Huntington病またはGilles d
ela Toutrett症候群）を包含する精神病および神経学的
疾病から該動物を防御することを特徴とする。本発明の
もう１つの態様は、哺乳動物における免疫学的応答を誘
導する方法に関し、該方法は、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプ
チドをインビボで発現させるベクターを介してＨＮＦＪ
Ｄ１５ポリペプチドを送達し、かかる免疫学的応答を誘
導して該動物を疾患から防御する抗体を生させることを
特徴とする。

【００３７】本発明のさらなる態様は免疫学的／ワクチ
ン処方（組成物）に関するものであり、それは、哺乳動
物宿主中に導入された場合、ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチ
ドに対する哺乳動物の免疫学的応答を誘導する。該組成
物はＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドまたはＨＮＦＪＤ１５
遺伝子を含んでなる。ワクチン処方は、さらに適当な担
体を含んでいてもよい。ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドは
胃で分解される可能性があるので、好ましくは非経口投
与する（皮下、筋肉内、静脈、皮内等への注射を包
含）。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、バッファ
ー、静細菌剤および処方を受容者の血液と等張にする溶
質を含んでいてもよい水性または非水性滅菌注射用溶
液；ならびに懸濁剤または増粘剤を含んでいてもよい水
性または非水性滅菌懸濁液を包含する。処方を１回量ま
たは複数回量として容器に入れて提供してもよく、例え
ば、密封アンプルおよびバイアルに入れて提供してもよ
く、また使用直前に滅菌液体担体の添加のみを必要とす
る凍結乾燥状態として保存してもよい。またワクチン処
方は、水中油系および当該分野で知られた他の系のごと
き処方の免疫原性を高めるためのアジュバント系を含ん
でいてもよい。用量は、個々のワクチンの活性に左右さ
れ、通常の実験により容易に決定することができる。

【００３８】スクリーニングアッセイ 本発明受容体ポリペプチドに結合してこれを活性化（ア
ゴニスト）または阻害（アンタゴニスト）する化合物の
スクリーニングプロセスにおいて本発明ＨＮＦＪＤ１５
を用いてもよい。よって、本発明ポリペプチドを用い
て、小型分子基質とリガンドとの結合を、例えば細胞、
無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物混合物
において評価してもよい。これらの基質およびリガンド
は天然の基質およびリガンドであってもよく、あるいは
構造または機能を模倣したものであってもよい。Coliga
n et al.,Current Protocols in Immunology 1(2):Chap
ter5(1991)参照。

【００３９】ＨＮＦＪＤ１５蛋白は哺乳動物宿主に広く
存在し、多くの生物学的機能に関与しており、多くの病
気にもかかわっている。したがって、ＨＮＦＪＤ１５を
刺激する化合物および薬剤、あるいはまたＨＮＦＪＤ１
５を阻害しうる化合物または薬剤を見いだすことが望ま
れる。一般的には、細菌、真菌、原生動物およびウイル
ス感染のごとき感染症、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩ
Ｖ−２による感染；痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；
パーキンソン病；急性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿
閉；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；
良性前立腺肥大；ならびに不安症、分裂病、躁鬱病、せ
ん妄、痴呆、重度の精神遅滞および運動障害（例えば、
Huntington病またはGilles dela Toutrett症候群）を包
含する精神病および神経学的疾病のごとき状態を治療ま
たは予防するためにアゴニストが用いられる。細菌、真
菌、原生動物およびウイルス感染のごとき感染症、詳細
にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２による感染；痛み；
癌；拒食症；大食症；喘息；パーキンソン病；急性心臓
疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆症；狭心症；心筋
梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺肥大；ならびに不
安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞
および運動障害（例えば、Huntington病またはGilles d
ela Toutrett症候群）を包含する精神病および神経学的
疾病のごとき状態の種々の治療または予防のためにアン
タゴニストを用いてもよい。

【００４０】一般的には、かかるスクリーニング手順
は、細胞表面に本発明受容体ポリペプチドを発現する適
当な細胞を製造することを含む。かかる細胞は、哺乳動
物由来の細胞、酵母、ショウジョウバエ（Drosophila）
または大腸菌（E.coli）を包含する。次いで、受容体発
現細胞（または発現された受容体を含む細胞膜）を試験
化合物と接触させて、結合または機能的応答の刺激もし
くは阻害を観察する。

【００４１】１のスクリーニング方法は、本発明受容体
を発現する細胞（例えば、トランスフェクションされた
ＣＨＯ細胞）を系に使用し、受容体活性化により引き起
こされる細胞外ｐＨまたは細胞内カルシウム変化を測定
する。この方法において、本発明受容体ポリペプチドを
発現する細胞に化合物を接触させてもよい。次いで、２
次的メッセンジャー応答、例えば、シグナル伝達、ｐＨ
変化、またはカルシウムレベル変化を測定して候補化合
物が受容体を活性化または阻害するかどうかを決定す
る。

【００４２】もう１つの方法は、受容体により伝達され
るｃＡＭＰおよび／またはアデニレートシクラーゼ蓄積
の阻害または刺激を調べることにより受容体阻害剤をス
クリーニングすることを包含する。かかる方法は、本発
明受容体で真核細胞をトランスフェクションして細胞表
面に受容体を発現させることを用いる。次いで、本発明
受容体存在下において細胞を候補アンタゴニストと接触
させる。次いで、ｃＡＭＰ蓄積量を測定する。候補アン
タゴニストが受容体に結合し、受容体結合を阻害する場
合には、受容体により伝達されるｃＡＭＰのレベルまた
はアデニレートシクラーゼ活性が低下または上昇するで
あろう。

【００４３】本発明受容体のアゴニストまたはアンタゴ
ニストを検出するためのもう１つの方法は、米国特許第
５４８２８３５号記載の酵母による方法である。そのア
ッセイは候補化合物の結合を試験するだけでよく、候補
化合物に直接的または間接的に結合した標識を用いるこ
とにより、あるいは標識競争物質との競争を用いるアッ
セイにおいて、受容体を有する細胞への付着を検出す
る。さらに、これらのアッセイにおいて、受容体を表面
に有する細胞に適する検出系を用いて、候補化合物が受
容体活性化により発生するシグナルを生じるかどうかを
試験してもよい。一般的には、既知アゴニスト存在下に
おいて活性化阻害剤をアッセイし、アゴニストによる活
性化に対する候補化合物の存在の影響を観察する。かか
るスクリーニングアッセイを行うための標準的方法は当
該分野においてよく理解されている。潜在的なＨＮＦＪ
Ｄ１５アンタゴニストの例は、抗体、あるいはいくつか
の場合にはオリゴヌクレオチドまたはＨＮＦＪＤ１５の
リガンドに密接に関連した蛋白（例えば、リガンドのフ
ラグメント、または受容体に結合するが応答を誘発せ
ず、その結果受容体活性を保持する小型分子）を包含す
る。

【００４４】予防および治療方法 本発明は、過剰または不十分な量のＨＮＦＪＤ１５活性
に関連する異常な状態の治療方法を提供する。ＨＮＦＪ
Ｄ１５活性が過剰な場合、いくつかの方法を用いること
ができる。１の方法は、有効量の上記阻害剤化合物（ア
ンタゴニスト）を医薬上許容される担体とともに対象に
投与して、ＨＮＦＪＤ１５へのリガンドの結合をブロッ
クすることあるいは第２のシグナルを阻害することによ
り活性化を阻害し、そのことにより異常な状態を改善す
ることを特徴とする。

【００４５】もう１つのアプローチにおいて、内在性Ｈ
ＮＦＪＤ１５と競争してリガンドに結合する能力をやは
り有している可溶性形態のＨＮＦＪＤ１５ポリペプチド
を投与してもよい。かかる競争物質の典型的な具体例は
ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドのフラグメントを含む。

【００４６】さらにもう１つの方法において、発現ブロ
ック法を用いて内在性ＨＮＦＪＤ１５をコードしている
遺伝子の発現を阻害してもよい。知られているかかる方
法には、細胞内で生成した、あるいは別個に投与された
アンチセンス配列を用いる。例えば、Oligodeoxynucleo
tides as Antisense Inhibitors of Gene Expression,C
RC Press,Boca Raton, FL(1988)中、O'Connor,J.Neuroc
hem(1991)56:560を参照のこと。別法として、遺伝子と
ともに三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを提供
してもよい。例えば、Lee et al.,Nucleic Acids Res(1
979)6:3073;Cooney et al.,Science(1988)241:456;Derv
an et al.,Science(1991)251:1360参照。これらのオリ
ゴマーはそれ自体投与することができ、あるいは関連オ
リゴマーをインビボで発現させることもできる。

【００４７】ＨＮＦＪＤ１５およびその活性の発現不足
に関連する異常な症状の治療には、いくつかの方法が用
いられる。１の方法は、ＨＮＦＪＤ１５を活性化する治
療上有効量の化合物（すなわち上記アゴニスト）を医薬
上許容される担体とともに投与し、そのことにより異常
な状態を改善することを特徴とする。別法として、遺伝
子治療を用いて、対象中の細胞によるＨＮＦＪＤ１５の
細胞内での生成を有効ならしめてもよい。例えば、上記
のごとく本発明ポリヌクレオチドを処理加工して複製欠
損レトロウイルスベクターに入れて発現するようにして
もよい。次いで、レトロウイルス発現構築物を単離し、
本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレト
ロウイルスプラスミドベクターでトランスダクションし
たパッケージング細胞中に導入して、今度はパッケージ
ング細胞が目的遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を生成
するようにしてもよい。これらのプロデューサー細胞を
対象に投与して細胞をインビボで処理加工して、インビ
ボでポリペプチドを発現するようにしてもよい。遺伝子
治療の概説としては、Human Molecular Genetics,T.Str
achan and A.P.Read,BIOS Scientific Publishers Ltd
(1986)中、第２０章、Gene Therapy and other Molecul
ar Genetic-based Therapeutic Approaches（およびそ
の中の引用文献）参照。

【００４８】処方および投与 可溶性形態のＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドのごときペプ
チド、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストペプチ
ドまたは小型分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処
方してもよい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプ
チドまたは化合物、および医薬上許容される担体または
賦形剤を含んでなる。かかる担体としては、セイライ
ン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロ
ール、エタノール、およびそれらの混合物が挙げられる
が、これらに限らない。処方は投与経路に適したものと
すべきであり、当業者によく知られている。さらに本発
明は、上記本発明成分の１種またはそれ以上を充填し
た、１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パック
およびキットにも関する。

【００４９】本発明ポリペプチドおよび他の化合物を単
独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他の
化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身投与
の好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含す
る。皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を
用いることもできる。全身投与のための別の手段は、胆
汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき
浸透剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さら
に、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるな
らば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は
局所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の
形態であってもよい。

【００５０】必要な用量範囲は、ペプチド、投与経路、
処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断
による。しかしながら、適当な用量は対象の体重１ｋｇ
あたり０．１ないし１００μｇの範囲である。しかしな
がら、種々の使用化合物および種々の投与経路のさまざ
まな有効性を考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと
思われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用
量が必要であると考えられる。当該分野においてよく知
られた最適化のための標準的な常套的実験を用いてこれ
らの用量の変更を行うことができる。

【００５１】しばしば「遺伝子治療」と称される上記治
療方法において、治療に使用するポリペプチドを対象中
において得ることもできる。よって、例えば、レトロウ
イルスプラスミドベクターを用いることにより、ポリペ
プチドをコードしているＤＮＡまたはＲＮＡのごときポ
リヌクレオチドを用いて対象由来の細胞をエクスビボで
処理加工してもよい。次いで、細胞を対象に導入する。

【００５２】

【実施例】特記しないかぎり、当業者によく知られた標
準的方法を用いて下記実施例を行う。実施例は本発明を
例示説明するものであり、本発明を限定するものではな
い。 実施例１ ｃＤＮＡ配列をコードしている７−ＴＭドメインを伴う
発現配列タグ（ＥＳＴ）として知られる短い配列からな
るHuman Genome Sciencesから得たランダムｃＤＮＡデ
ータベースをＢＬＡＳＴアルゴリズムを用いて検索する
ことにより、アドレナリン受容体様７−トランスメンブ
ラン受容体と相同的なＥＳＴが示された。全長のクロー
ンを得るために、自動ＤＮＡ配列決定を用いてインサー
トの完全ＤＮＡ配列を推定した。ＧＣＧソフトウェアを
用いるＤＮＡ配列のマップ分析により、３９６個のアミ
ノ酸残基からなる読み枠（ＯＲＦ）が示された。FASTA
およびBLASTアルゴリズムによるＤＮＡ配列のさらなる
分析により、７−トランスメンブラン様Ｇ蛋白結合受容
体に対するこのポリペプチドの相同性が示された。さら
に、lasergene proteanソフトウェアを用いる疎水性プ
ロット分析により、Ｇ蛋白結合受容体と共通したいくつ
かの特徴が示された。最大の特徴は、それぞれ約２０な
いし３０個のアミノ酸からなる７つの疎水的領域の存在
であり、それらはＧ蛋白結合スーパーファミリーの受容
体に見いだされる７−トランスメンブラン構造トポロジ
ーを形成する膜貫通ドメインとなっている可能性があ
る。当該クローンの同一性をさらに確認するために、読
み枠（ＯＲＦ）のヌクレオチド配列を用いてＰＣＲプラ
イマーを設計し、２つのさらなるライブラリー（ヒト・
胎児脳およびヒト・白血球）からＤＮＡ配列を増幅し
た。正しいサイズのＰＣＲバンドをＰＣＲIIベクター
（Stratageneから得た）中にサブクローンし、配列決定
した。

【００５３】実施例２：哺乳動物細胞での発現 本発明受容体は、ヒト胚腎臓２９３細胞（ＨＥＫ２９
３）または付着性ｄｈｆｒ ＣＨＯ細胞のいずれかにお
いて発現される。受容体発現を最大にするために、ＣＤ
ＮまたはｐＣＤＮＡ３ベクターに挿入する前にすべての
５’および３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を受容体ｃＤＮＡ
から除去した。リポフェクチンにより個々の受容体ｃＤ
ＮＡで細胞をトランスフェクションし、４００ｍｇ／ｍ
ｌのＧ４１８存在下で選択する。３週間の選択期間後、
個々のクローンを拾い、さらなる分析のために増殖させ
る。ベクターのみでトランスフェクションされたＨＥＫ
２９３またはＣＨＯ細胞は負の対照として役立つ。個々
の受容体を安定に発現する細胞系を単離するために、典
型的には、約２４個のクローンを選択し、ノーザンブロ
ット分析により分析する。通常には、受容体ｍＲＮＡ
は、分析したＧ４１８耐性クローンの約５０％において
検出される。

【００５４】実施例３：リガンド結合アッセイ リガンド結合アッセイは受容体機能の確認のための直接
的方法を提供し、高処理量フォーマットに適用可能であ
る。孤立受容体と推定される２００個以上のものからな
るバンクを最初のスクリーニングのために集めた。バン
クは、ヒト・７トランスメンブラン（７ＴＭ）受容体を
経てさようすることが知られている伝達物質、ホルモン
およびケモカイン；ヒト・７ＴＭ受容体の推定上のアゴ
ニストである可能性のある天然に存在する化合物；まだ
哺乳動物における同等物が同定されていない非天然の生
物学的に活性のあるペプチド；ならびに天然においては
見出されないが未知の天然リガンドとともに７ＴＭ受容
体を活性化する化合物を含む。まず、このバンクを用い
て既知リガンドに対する受容体をスクリーニングする。
信頼できる放射性リガンド結合アッセイを行なうために
は、受容体に対するリガンドの最小解離定数は約１０ｎ
Ｍである。受容体に対する精製リガンドを放射性標識し
て高比活性（５０ないし１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と
し、結合の研究に備える。次いで、放射性標識のプロセ
スが受容体に対するリガンドの活性を減じないように測
定を行う。バッファー、イオン、ｐＨおよびヌクレオチ
ドのごとき他のモジュレーターに関するアッセイ条件を
最適化して、膜および全細胞受容体源に関して測定可能
な雑音対シグナル比を得る。これらのアッセイのため
に、過剰の未標識競争リガンドの存在下で測定した放射
活性を全結合放射活性から差し引いたものを、特異的受
容体結合と定義する。可能ならば、１種よりも多い競争
リガンドを用いて残りの非特異的結合を決定する。約５
０％の特異的結合が最適と考えられる。放射性リガンド
結合部位の受容体としての重要性を、下記判断基準に従
って決定する。これらの判断基準は、適当なアゴニスト
およびアンタゴニストのリガンドを結合相互作用により
特異的に認識し、定義された生物学的応答を開始させる
部分として受容体を定義することに由来する。判断基準
は、（１）作用剤の反応動力学を近似する放射性リガン
ド結合の反応動力学が生物学的応答に影響すること；
（２）濃度を上昇させた放射性リガンドの特異的結合が
飽和し、かくして、有限の受容体数を反映すること；
（３）放射性リガンドが結合する濃度範囲が、リガンド
が生物学的応答を活性化または阻害する濃度範囲に匹敵
していること；および（４）放射性リガンドにより占め
られている受容体部位が、生物学的応答として適当な薬
理学的特異性を示すことである。

【００５５】実施例４：アフリカツメガエル・卵母細胞
における機能のアッセイ 本発明受容体ｃＤＮＡをコードしている直鎖状にしたプ
ラスミド鋳型由来のキャップしたＲＮＡ転写物を、標準
的手順に従ってＲＮＡポリメラーゼを用いて合成する。
インビトロ転写物を水に懸濁して最終濃度０．２ｍｇ／
ｍｌとする。卵巣葉を成体メスのカエルから取り、段階
Ｖの脱卵胞した卵母細胞を得て、Drummond微量注入装置
を用いてＲＮＡ転写物（１０ｎｇ／卵母細胞）を５０ｎ
ｌのボーラスとして注入する。２個の電極電圧クランプ
を用いて個々のアフリカツメガエル卵母細胞からの電流
を測定する。室温のＣａ²⁺不含Barth培地中で記録を行
う。

【００５６】実施例５：マイクロフィジオメトリックア
ッセイ（Microphysiometric Assays） 種々の２次メッセンジャー系の活性化により、少量の酸
が細胞から生じる。大まかにいえば、生じた酸は、細胞
内シグナリングプロセスの燃料として必要な代謝活性の
増大の結果である。細胞周辺の培地のｐＨ変化は非常に
小さいが、サイトセンサー・マイクロフィジオメーター
（CYTOSENSOR microphysiometer）（Molecular Devices
Ltd.,Menlo Park,CA）により検出可能である。よっ
て、CYTOSENSORは、本発明Ｇ蛋白結合受容体のごときエ
ネルギーを使用する細胞内シグナリング経路に連動した
受容体の活性化を検出することができる。

【００５７】実施例６：抽出物／細胞上清のスクリーニ
ング 多数の哺乳動物ペプチドが存在するが、いままでのとこ
ろ、それらに対する哺乳動物同等物は存在していない。
よって、これらの受容体に対する活性リガンドが、現在
に至るまで同定されてきたようなリガンドバンク中に含
まれていない可能性がある。したがって、本発明ＴＭ受
容体を組織抽出物に対してもスクリーニングして天然リ
ガンドを同定する。

【００５８】実施例７：カルシウム機能アッセイ ＨＥＫ２９３細胞において発現される７ＴＭ受容体は、
ＰＬＣおよびカルシウム可動化の活性化および／または
ｃＡＭＰ刺激もしくは抑制に機能的に連動していること
が示されている。受容体でトランスフェクションされて
いる、あるいはベクターで制御されているＨＥＫ２９３
細胞における基底カルシウムレベルが正常であること、
すなわち１００ｎＭないし２００ｎＭの範囲であること
が観察された。組み換え受容体を発現するＨＥＫ２９３
細胞をfura2とともに負荷し、１日で１５０個以上の選
択リガンドまたは組織／細胞抽出物を、アゴニストによ
り誘導されるカルシウム可動化について評価する。カル
シウムトランジエントを示すアゴニストをベクターで制
御された細胞において試験して、応答が受容体を発現す
るトランスフェクション細胞に独自のものであるかどう
かを決定する。独自のアゴニストにより誘導される応答
が同定された場合、別個の細胞群において応答を再度生
じさせ、ついで、有効かつ関連したリガンドに関する濃
度応答曲線を用いて薬理学的に特徴づける。

【００５９】

【配列表】

【００６０】（１）一般的情報： （ｉ）出願人：サザ，ギャネシュ フュータラー，ウェンディ バーグスマ，ダーク エリス，キャサリン （ｉｉ）発明の名称：新規ヒト７−トランスメンブラン
レセプターをコードするｃＤＮＡクローンＨＮＦＪＤ１
５ （ｉｉｉ）配列の数：２ （ｖｉ）連絡先： （Ａ）宛て名：スミスクライン・ビーチャム （Ｂ）通り名：スウェードランド・ロード７０９番 （Ｃ）都市名：キング・オブ・プルシア （Ｄ）州名：ペンシルベニア （Ｅ）国名：アメリカ合衆国 （Ｆ）ＺＩＰ：１９４０６ （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）作動システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：Windowsバージョン２.０用FastSE
Q （ｖｉ）本願のデータ： （Ａ）出願番号：不明 （Ｂ）出願日：１９９７年１月９日 （Ｃ）分類：不明 （ｖｉｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （ｖｉｉｉ）代理人等の情報： （Ａ）氏名：ハン，ウィリアム・ティ （Ｂ）登録番号：３４３４４ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＡＴＧ５００４２ （ｘｉ）テレコミュニケーションの情報： （Ａ）電話番号：６１０−２７０−５２１９ （Ｂ）ファックス番号：６１０−２７０−４０２６ （Ｃ）テレックス：

【００６１】（２）配列番号：１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：１４９８塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号：１： GGCACGAGCT CTTTGGGTGA GTTGAACTTC TTCCATTATA GAAAGAATTG AAGGCTGAGA 60 AACTCAGCCT CTATCATGTG GAACAGCTCT GACGCCAACT TCTCCTGCTA CCATGAGTCT 120 GTGCTGGGCT ATCGTTATGT TGCAGTTAGC TGGGGGGTGG TGGTGGCTGT GACAGGCACC 180 GTGGGCAATG TGCTCACCCT ACTGGCCTTG GCCATCCAGC CCAAGCTCCG TACCCGATTC 240 AACCTGCTCA TAGCCAACCT CACACTGGCT GATCTCCTCT ACTGCACGCT CCTTCAGCCC 300 TTCTCTGTGG ACACCTACCT CCACCTGCAC TGGCGCACCG GTGCCACCTT CTGCAGGGTA 360 TTTGGGCTCC TCCTTTTTGC CTCCAATTCT GTCTCCATCC TGACCCTCTG CCTCATCGCA 420 CTGGGACGCT ACCTCCTCAT TGCCCACCCT AAGCTTTTTC CCCAAGTTTT CAGTGCCAAG 480 GGGATAGTGC TGGCACTGGT GAGCACCTGG GTTGTGGGCG TGGCCAGCTT TGCTCCCCTC 540 TGGCCTATTT ATATCCTGGT ACCTGTAGTC TGCACCTGCA GCTTTGACCG CATCCGAGGC 600 CGGCCTTACA CCACCATCCT CATGGGCATC TACTTTGTGC TTGGGCTCAG CAGTGTTGGC 660 ATCTTCTATT GCCTCATCCA CCGCCAGGTC AAACGAGCAG CACAGGCACT GGACCAATAC 720 AAGTTGCGAC AGGCAAGCAT CCACTCCAAC CATGTGGCCA GGACTGATGA GGCCATGCCT 780 GGTCGTTTCC AGGAGCTGGA CAGCAGGTTA GCATCAGGAG GACCCAGTGA GGGGATTTCA 840 TCTGAGCCAG TCAGTGCTGC CACCACCCAG ACCCTGGAAG GGGACTCATC AGAAGTGGGA 900 GACCAGATCA ACAGCAAGAG AGCTAAGCAG ATGGCAGAGA AAAGCCCTCC AGAAGCATCT 960 GCCAAAGCCC AGCCAATTAA AGGAGCCAGA AGAGCTCCGG ATTCTTCATC GGAATTTGGG 1020 AAGGTGACTC GAATGTGTTT TGCTGTGTTC CTCTGCTTTG CCCTGAGCTA CATCCCCTTC 1080 TTGCTGCTCA ACATTCTGGA TGCCAGAGTC CAGGCTCCCC GGGTGGTCCA CATGCTTGCT 1140 GCCAACCTCA CCTGGCTCAA TGGTTGCATC AACCCTGTGC TCTATGCAGC CATGAACCGC 1200 CAATTCCGCC AAGCATATGG CTCCATTTTA AAAAGAGGGC CCCGGAGTTT CCATAGGCTC 1260 CATTAGAACT GTGACCCTAG TCACCAGAAT TCAGGACTGT CTCCTCCAGG ACCAAAGTGG 1320 CCAGGTAATA GGAGAATAGG TGAAATAACA CATGTGGGCA TTTTCACAAC AATCTCTCCC 1380 CAGCCTCCCA AATCAAGTCT CTCCATCACT TGATCAATGT TTCAGCCCTA GACTGCCCAA 1440 GGAGTATTAT TAATTATTAA TAAATGAATT CTGTGCTTTT AAAAAAAAAA AAAAAAAA 1498

【００６２】（２）配列番号：２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３９６アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：蛋白 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：２： Met Trp Asn Ser Ser Asp Ala Asn Phe Ser Cys Tyr His Glu Ser Val 1 5 10 15 Leu Gly Tyr Arg Tyr Val Ala Val Ser Trp Gly Val Val Val Ala Val 20 25 30 Thr Gly Thr Val Gly Asn Val Leu Thr Leu Leu Ala Leu Ala Ile Gln 35 40 45 Pro Lys Leu Arg Thr Arg Phe Asn Leu Leu Ile Ala Asn Leu Thr Leu 50 55 60 Ala Asp Leu Leu Tyr Cys Thr Leu Leu Gln Pro Phe Ser Val Asp Thr 65 70 75 80 Tyr Leu His Leu His Trp Arg Thr Gly Ala Thr Phe Cys Arg Val Phe 85 90 95 Gly Leu Leu Leu Phe Ala Ser Asn Ser Val Ser Ile Leu Thr Leu Cys 100 105 110 Leu Ile Ala Leu Gly Arg Tyr Leu Leu Ile Ala His Pro Lys Leu Phe 115 120 125 Pro Gln Val Phe Ser Ala Lys Gly Ile Val Leu Ala Leu Val Ser Thr 130 135 140 Trp Val Val Gly Val Ala Ser Phe Ala Pro Leu Trp Pro Ile Tyr Ile 145 150 155 160 Leu Val Pro Val Val Cys Thr Cys Ser Phe Asp Arg Ile Arg Gly Arg 165 170 175 Pro Tyr Thr Thr Ile Leu Met Gly Ile Tyr Phe Val Leu Gly Leu Ser 180 185 190 Ser Val Gly Ile Phe Tyr Cys Leu Ile His Arg Gln Val Lys Arg Ala 195 200 205 Ala Gln Ala Leu Asp Gln Tyr Lys Leu Arg Gln Ala Ser Ile His Ser 210 215 220 Asn His Val Ala Arg Thr Asp Glu Ala Met Pro Gly Arg Phe Gln Glu 225 230 235 240 Leu Asp Ser Arg Leu Ala Ser Gly Gly Pro Ser Glu Gly Ile Ser Ser 245 250 255 Glu Pro Val Ser Ala Ala Thr Thr Gln Thr Leu Glu Gly Asp Ser Ser 260 265 270 Glu Val Gly Asp Gln Ile Asn Ser Lys Arg Ala Lys Gln Met Ala Glu 275 280 285 Lys Ser Pro Pro Glu Ala Ser Ala Lys Ala Gln Pro Ile Lys Gly Ala 290 295 300 Arg Arg Ala Pro Asp Ser Ser Ser Glu Phe Gly Lys Val Thr Arg Met 305 310 315 320 Cys Phe Ala Val Phe Leu Cys Phe Ala Leu Ser Tyr Ile Pro Phe Leu 325 330 335 Leu Leu Asn Ile Leu Asp Ala Arg Val Gln Ala Pro Arg Val Val His 340 345 350 Met Leu Ala Ala Asn Leu Thr Trp Leu Asn Gly Cys Ile Asn Pro Val 355 360 365 Leu Tyr Ala Ala Met Asn Arg Gln Phe Arg Gln Ala Tyr Gly Ser Ile 370 375 380 Leu Lys Arg Gly Pro Arg Ser Phe His Arg Leu His 385 390 395

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒト・ＨＮＦＪＤ１５のヌクレオチド配列お
よび推定アミノ酸配列（配列番号：１および２）を示す
図である。

【図２】 ヒト・ＨＮＦＪＤ１５のヌクレオチド配列お
よび推定アミノ酸配列（配列番号：１および２）を示す
図である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｙ 33/53 33/566 33/566 Ａ６１Ｋ 39/00 ＡＤＵＨ // Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＣＮ 39/395 ＡＡＢ 39/00 ＡＤＵ ＡＡＥ 39/395 ＡＡＢ ＡＡＨＮ ＡＡＥ ＡＡＫ ＡＡＨ ＡＡＭ ＡＡＫ ＡＡＮ ＡＡＭ ＡＢＦ ＡＡＮ ＡＢＪ ＡＢＦ ＡＢＮ ＡＢＪ ＡＢＳ ＡＢＮ ＡＢＵ ＡＢＳ ＡＢＶ ＡＢＵ ＡＣＤ ＡＢＶ ＡＣＬ ＡＣＤ ＡＣＶ ＡＣＬ ＡＤＳ ＡＣＶ ＡＤＹＤ ＡＤＳ Ｃ１２Ｐ 21/08 ＡＤＹ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＮ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ウェンディ・エス・フューターラー アメリカ合衆国19348ペンシルベニア州ケ ネット・スクエア、ベイヤード・ロード 435番 (72)発明者 ダーク・ジョン・バーグスマ アメリカ合衆国19312ペンシルベニア州バ ーウィン、アイリッシュ・ロード271番 (72)発明者 キャサリン・エリス アメリカ合衆国08028ニュージャージー州 グラスボロー、フォーダム・プレイス831 番

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：２のポリペプチドもしくはそ
   の対応フラグメントをコードしているヌクレオチド配列
   に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチ
   ド配列または上記ヌクレオチド配列に対して相補的なヌ
   クレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 ＤＮＡまたはＲＮＡである請求項１のポ
   リヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ヌクレオチド配列が配列番号：１に含ま
   れるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一
   性を有するものである請求項１のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 ヌクレオチド配列が配列番号：１に含ま
   れるものである請求項３のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 クレオチド配列が配列番号：２のポリペ
   プチドまたはそのフラグメントをコードしているもので
   ある請求項１のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 請求項３のポリヌクレオチドの少なくと
   も１５個の連続したヌクレオチドを含むポリヌクレオチ
   ドプローブまたはプライマー。
7. 【請求項７】 適合する宿主細胞中に存在する場合に、
   配列番号：２のポリペプチドまたはフラグメントに対し
   て少なくとも８０％の同一性を有するＨＮＦＪＤ１５ま
   たはそのフラグメントを生成する能力のある発現系を含
   むＤＮＡまたはＲＮＡ分子。
8. 【請求項８】 請求項７の発現系を含む宿主細胞。
9. 【請求項９】 ＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドまたはフラ
   グメントの製造方法であって、該ポリペプチドまたはフ
   ラグメントの生成に十分な条件下で請求項８の宿主を培
   養することを特徴とする方法。
10. 【請求項１０】 該ポリペプチドまたはフラグメントが
    該細胞の表面に発現される請求項９の方法。
11. 【請求項１１】 請求項１０の方法により製造される細
    胞。
12. 【請求項１２】 培地からポリペプチドまたはフラグメ
    ントを回収することをさらに特徴とする請求項９の方
    法。
13. 【請求項１３】 請求項７の発現系で宿主細胞を形質転
    換またはトランスフェクションして、適当な培養条件下
    で宿主細胞がＨＮＦＪＤ１５ポリペプチドまたはフラグ
    メントを生成するようにすることを特徴とする、ＨＮＦ
    ＪＤ１５ポリペプチドまたはそのフラグメント生成する
    細胞の製造方法。
14. 【請求項１４】 配列番号：２に含まれるアミノ酸配列
    と同一のヒト・ヒスタミンＨ２受容体に対して少なくと
    も８０％同一であるアミノ酸配列を含むＨＮＦＪＤ１５
    ポリペプチドまたはそのフラグメント。
15. 【請求項１５】 配列番号：２のアミノ酸配列またはそ
    のフラグメントを含む請求項１４のポリペプチド。
16. 【請求項１６】 請求項１２の方法により製造されるＨ
    ＮＦＪＤ１５ポリペプチドまたはフラグメント。
17. 【請求項１７】 請求項１４のＨＮＦＪＤ１５ポリペプ
    チドに対して免疫特異的な抗体。
18. 【請求項１８】 （ａ）受容体に対する治療上有効量の
    アゴニストを対象に投与すること、および／または
    （ｂ）該受容体活性をインビボで生じさせる形態のＨＮ
    ＦＪＤ１５ポリヌクレオチドを対象に与えることを特徴
    とする、ＨＮＦＪＤ１５活性の増強を必要とする対象の
    治療方法。
19. 【請求項１９】 （ａ）受容体に対する治療上有効量の
    アンタゴニストを対象に投与すること、および／または
    （ｂ）該受容体をコードしているヌクレオチド配列の発
    現を阻害する核酸分子を対象に投与すること、および／
    または（ｃ）リガンドを求めて該受容体と競争する治療
    上有効量のポリペプチドを対象に投与することを特徴と
    する、ＨＮＦＪＤ１５活性の阻害を必要とする対象の治
    療方法。
20. 【請求項２０】 （ａ）対象のゲノム中のＨＮＦＪＤ１
    ５をコードしているヌクレオチド配列中の変異の存在ま
    たは不存在を決定すること；および／または（ｂ）該対
    象由来の試料中のＨＮＦＪＤ１５発現の存在または量を
    分析することを特徴とする、対象におけるＨＮＦＪＤ１
    ５の発現または活性に関連した対象における疾病または
    かかる疾病に対する感受性の診断方法。
21. 【請求項２１】 （ａ）請求項１１の細胞を候補化合物
    と接触させること；次いで、 （ｂ）該候補化合物の該細胞への結合能を評価すること
    を特徴とする、ＨＮＦＪＤ１５に結合する化合物の同定
    方法。
22. 【請求項２２】 候補化合物が細胞表面におけるＨＮＦ
    ＪＤ１５ポリペプチドの活性化により発生するシグナル
    を生じさせるかどうかを決定することをさらに特徴と
    し、該シグナルを発生させる候補化合物がアゴニストで
    あると同定される、請求項２１の方法。
23. 【請求項２３】 請求項２２の方法により同定されるア
    ゴニスト。
24. 【請求項２４】 細胞を該ＨＮＦＪＤ１５に対する既知
    アゴニストと接触させること；次いで、 該アゴニストにより発生するシグナルが該候補化合物の
    存在下において減少するかどうかを決定することをさら
    に特徴とし、該シグナルを減少させる候補化合物が該Ｈ
    ＮＦＪＤ１５に対するアンタゴニストであると同定され
    る、請求項２１の方法。
25. 【請求項２５】 請求項２４の方法により同定されるア
    ンタゴニスト。