JPH10260129A

JPH10260129A - 粒子計数方法

Info

Publication number: JPH10260129A
Application number: JP9065092A
Authority: JP
Inventors: Takaaki Nagai; 孝明長井; Hiroshi Asakura; 宏朝倉
Original assignee: Sysmex Corp
Current assignee: Sysmex Corp
Priority date: 1997-03-18
Filing date: 1997-03-18
Publication date: 1998-09-29
Anticipated expiration: 2017-03-18
Also published as: JP3681252B2

Abstract

(57)【要約】【課題】この発明は、粒子計数方法に関し、誤計数の
要因となるバックグラウンドを除いて、測定対象粒子の
正確な計数を行うことを課題とする。【解決手段】フローサイトメータを用いて、測定対象
粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流を
光学的に測定して第１粒度分布を作成する第１の測定工
程と、前記フローサイトメータを用いて前記シース液の
みからなる試料流を形成し、その試料流を光学的に測定
して第２粒度分布を作成する第２の測定工程と、第１粒
度分布から第２粒度分布を減算することによって、測定
対象粒子の粒度分布を求める解析工程とからなることを
特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、粒子計数方法に
関し、特に、細胞等の微小粒子の計数において、誤計数
の要因を除去して正確な計数を可能とする粒子計数方法
に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来から、人体の血液中に含まれる赤血
球、白血球などの細胞の計数をするために、いわゆるフ
ローサイトメータなどの種々の粒子計数装置が用いられ
ている。フローサイトメータは、フローセルと呼ばれる
容器に希釈した血液試料をシース液に包んで試料流とし
て流し、この試料流にレーザ光を照射して、試料流に含
まれる細胞粒子で散乱された散乱光を光検出器で検出
し、この検出信号から血液試料中の粒子の分類・計数を
行うものである。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】フローセル内では、細
胞粒子が整列して流れる試料流を作るために、希釈され
た血液試料はシース液によって包まれて流される。この
とき、シース液が本来有する気泡あるいは測定対象外の
粒子（たとえばチリやゴミ）等のため測定対象粒子のみ
を正確に計数することが困難である。

【０００４】実際、シース液には直径５μｍ程度の大き
さの気泡が発生することが多いので、直径１０μｍ以上
の比較的大きな白血球や赤血球の計数を行う場合には、
この気泡が誤計数の要因となることはほとんどないが、
血小板などの直径が５μｍ程度以下の微小粒子を計数す
る場合には、気泡は誤計数の要因となり、正確な計数が
できない。

【０００５】この発明は以上のような事情を考慮したも
のであり、誤計数の要因となる気泡やゴミを別途測定す
ることにより、計数対象の粒子の正確な計数が行えるよ
うにした粒子計数方法を提供するものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】この発明は、フローサイ
トメータを用いて、測定対象粒子を含む試料液をシース
液で包んで形成した試料流を光学的に測定して第１粒度
分布を作成する第１の測定工程と、前記フローサイトメ
ータを用いて前記シース液のみからなる試料流を形成
し、その試料流を光学的に測定して第２粒度分布を作成
する第２の測定工程と、第１粒度分布から第２粒度分布
を減算することによって、測定対象粒子の粒度分布を求
める解析工程とからなることを特徴とする粒子計数方法
を提供するものである。

【０００７】

【発明の実施の形態】この発明に用いるフローサイトメ
ータとは、測定対象粒子を含む希釈された試料をフロー
セルに導き、これをシース液に包んで細流化して、この
細流化された粒子の流れにレーザ光を照射して粒子によ
る散乱光や蛍光を検出することによって粒子の計数を行
う粒子計数装置である。この発明の測定対象粒子とは、
主として、血液中の細胞であり、赤血球、白血球、血小
板などである。この測定対象粒子は、通常希釈液で希釈
した試料液として与えられる。

【０００８】また、測定対象粒子を含む試料液をシース
液で包んで形成した試料流とは、このような測定対象粒
子を含む試料液をフローセルを流れるシース液中に注入
して形成される細流であり、測定対象粒子はシース液に
包まれ整列されて流される。一般に試料液には、多くの
粒子が含まれており、それぞれの粒子は、その形状、大
きさ等によって分類することが可能である。粒度分布と
は、粒子の大きさ（粒度）ごとに試料流の中に含まれる
粒子の個数（度数）を測定した分布をいう。つまり、測
定において、試料流の中に含まれる粒子の大きさを識別
し、ある特定の大きさの粒子の数を計数する処理が行わ
れる。

【０００９】このような粒子の大きさの識別及び計数に
は、マイクロコンピュータを用いることが好ましい。ま
た、粒度分布の測定で求められた粒子の計数値は、ＲＡ
Ｍ等のメモリに記憶されることが好ましい。第２の試料
流とは、測定対象粒子を含まないシース液からなる流れ
であり、シース液は第１の試料流の粒度分布を測定する
際にも利用される液体である。

【００１０】前記解析工程は、マイクロコンピュータに
よって行われることが好ましい。解析工程で行われる減
算は、第１の測定工程で求められた第１粒度分布粒子の
計数値から、第２の測定工程で求められた第２粒度分布
の粒子の計数値を粒度毎に減算することを意味する。こ
のように、２つの計数値の引き算を、測定された粒子の
大きさごとに行うことによって、誤計数の要因を除いた
測定対象粒子の正確な粒度分布が求められる。

【００１１】第２の測定工程において、本来シース液に
含まれる微小な気泡や不純物等は、同じ大きさの粒子と
して計数される。また、この気泡等は、同じシース液を
用いる第１の測定工程でも同様に存在すると考えられ、
同じ大きさの粒子として計数されるため、測定対象粒子
が気泡等と同じ程度の大きさである場合には、測定対象
粒子は誤計数されうる。この意味において、誤計数の要
因となる気泡や不純物のことを、バックグラウンドと呼
ぶ。すなわち、第２の測定工程は、バックグラウンドの
粒度分布を求めている。

【００１２】上記のようなこの発明の粒子計数方法は、
微小粒子の計数を目的とする種々の粒子分析装置に適用
可能である。たとえば、血小板のような直径が１０μｍ
以下の微小粒子の計数に用いることができる。

【００１３】また、この発明は、第２の測定工程が、第
１の測定工程における粒度分布の測定に支障を及ぼさな
い期間に行われることを特徴とする。ここで、第１の測
定工程における粒度分布の測定に支障を及ぼさない期間
とは、測定対象粒子を含む試料流を「実際に光学的に測
定している期間」を除いた期間を意味し、この「実際に
光学的に測定している期間」の前あるいは後であっても
よい。

【００１４】また、第１の測定工程が、前記シース液を
フローセルに流すことによってフローセルを洗浄する洗
浄工程をさらに備え、第２の測定工程を、前記洗浄工程
に並行して行うようにしてもよい。

【００１５】ここで、洗浄工程とは、フローセル、及び
フローセルに接続され試料流が流れる測定経路上から、
試料流に含まれる測定対象粒子やその他の不純物をシー
ス液を流して除去する工程である。この洗浄工程は、第
１の測定工程に含まれることが好ましく、また、第２の
測定工程の実施期間に並行して行われることがさらに好
ましい。

【００１６】第２の測定工程と洗浄工程を同時に並行し
て行えば、バックグラウンドの粒度分布の測定を行って
も、この発明の粒子計測方法の全工程のトータル時間は
増加せず、全工程の時間的効率は低下しない。

【００１７】以下、図面に示す実施例に基づいてこの発
明を詳述する。なお、これによってこの発明が限定され
るものではない。図１にこの発明の一実施例における構
成図を示す。

【００１８】図１において、１はレーザ光光源であり、
たとえば半導体レーザ、Ａｒレーザ、Ｈｅ−Ｎｅレーザ
などが使用される。フローセル４は、計数対象である細
胞粒子を整列させて流すものであり、フローセル４の中
の粒子が細流化された部分にレーザ光源１からのレーザ
光が照射される。受光部２は、たとえばフォトダイオー
ドが使用される。受光部２では、粒子によって散乱され
た散乱光の光強度が検出され、電気信号に変換される。

【００１９】解析部３は、変換された電気信号をもと
に、フローセル４を流れる粒子の大きさを判断して計数
を行い、いわゆる粒度分布を作成するものである。また
解析部３は、誤計数の要因となるいわゆるバックグラウ
ンドの計数を行って、計数対象となる粒子の正確な計数
を行うための種々の演算を行う。

【００２０】このような解析部３は、ＣＰＵ、ＲＯＭ、
ＲＡＭ、タイマー、Ｉ／Ｏインタフェースなどのいわゆ
るマイクロコンピュータから構成されることが好まし
く、ＲＡＭ等のメモリに計数手順を示したプログラムが
格納されている。

【００２１】ジェットノズル７は試料液をフローセル４
に導入するものであり、シース液回収チャンバ５は、計
数後の試料流を回収するものである。フローセル４に
は、その下部に取りつけられたジェットノズル７から計
数対象粒子を含んだ試料液が導入される。また、シース
液チャンバ６に蓄えられたシース液が、バルブＶ₇を経
由してフローセル４に導かれる。そして、フローセル４
の上部にシース液によって細く絞られた試料流が導か
れ、１つずつ整列された粒子にレーザ光が照射される。
細く絞られた試料流はフローセル４の上部から排出さ
れ、バルブＶ₈を通って、シース液回収チャンバ５に蓄
えられる。

【００２２】希釈液チャンバ１１は、計数対象である試
料を希釈するための希釈液を蓄える容器である。サンプ
リングバルブ１０は、試料１４と希釈液とを混合した一
定量の試料液を取り出すためのバルブであり、たとえば
一部に空洞を持つ３枚の円板から構成される。この３枚
の円板の少なくとも１つを回転させることにより、一定
量の試料液が切り出される。たとえば、１０μｌの試料
を含む試料液が切り出される。ポンプ１３は試料１４を
サンプリングバルブ１０へ導くためのものである。

【００２３】ダイヤフラム式希釈ポンプ１２は、一定量
（たとえば２００ｍｌ）の希釈液を希釈液チャンバ１１
から取り出すためのポンプである。バルブＶ₁、Ｖ₂を切
り換えて、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２に陰圧をかけ
ると、希釈液は一旦ダイヤフラム式希釈ポンプ１２内に
引き込まれ、その後バルブＶ₁、Ｖ₂を切り換えてダイヤ
フラム式希釈ポンプ１２に陽圧をかけると、引き込まれ
た希釈液はバルブＶ₂を経由してサンプリングバルブ１
０の方へ押し出される。

【００２４】試料液チャンバ９は、切り出されて希釈さ
れた試料を一時蓄えておく容器である。この中には、た
とえば、約２００倍に希釈された試料液が蓄えられる。
試料液押し出し用シリンジ１９は、バルブＶ₃を通って
引き込まれた試料液をジェットノズル７の方へ押し出す
ものである。モータ２０は、試料液押出し用シリンジの
駆動用のモータである。

【００２５】陽圧印加部１５は、０．３ｋｇ／ｃｍ²程
度の陽圧をシース液チャンバ６へかけるものである。バ
ルブＶ₇が開放されると、この陽圧によって０．２ｍｌ
／ｓｅｃ程度のシース液がシース液チャンバ６からフロ
ーセル４へ流れ込む。陰圧印加部１６は、−４００ｍｍ
Ｈｇの陰圧を廃液チャンバにかけるものであるが、バル
ブＶ₃及びＶ₅が開放されたときに、この陰圧によって、
バルブＶ₃とバルブＶ₅との間の経路に、試料液チャンバ
９に蓄えられていた試料液が導かれる。

【００２６】また、バルブＶ₃及びＶ₅を閉じた状態で、
試料液押出し用シリンジ１９が押出されると、バルブＶ
₃とバルブＶ₅との間の経路に導かれた試料液がジェット
ノズルへと出射される。このとき、試料液の押出し流量
は、約０．４μｌ／ｓｅｃ程度である。

【００２７】陽圧印加部１７は、０．３ｋｇ／ｃｍ²程
度の陽圧をダイヤフラム式希釈ポンプ１２へかけるもの
であり、陰圧印加部１８は、−４００ｍｍＨｇの陰圧を
前記ポンプ１２へかけるものである。

【００２８】また図１には、８つのバルブ（Ｖ₁〜Ｖ₈）
を示しているが、これらのバルブは、解析部３のＣＰＵ
からの制御信号によりその開閉が制御される。後述する
ように、このバルブの開閉のタイミングを制御すること
によって、フローセルにおける試料粒子の計数及び誤計
測の要因となるバックグラウンドの計数が行われる。

【００２９】各バルブの役割は、次のようなものであ
る。希釈ポンプ吐出バルブＶ₁は、ダイヤフラム式希釈
ポンプ１２にかけられる陽圧及び陰圧の切り換えを行う
ものである。希釈ポンプ吐出バルブＶ₂は、希釈液チャ
ンバ１１からの経路と、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２
又はサンプリングバルブ１０への経路と接続の切り換え
を行うものである。

【００３０】試料液吸引バルブＶ₃は、試料液を吸引す
る際の経路の開閉を行うものである。試料液チャンバ排
出バルブＶ₄は、測定後、試料液チャンバ９に残った試
料液を廃液チャンバ８へ導くための経路の開閉を行うも
のである。

【００３１】試料液吸引バルブＶ₅は、試料液を吸引す
る際の経路の開閉およびジェットノズル７内に残った試
料液を廃液チャンバ８へ引き込む際の経路の開閉を行う
ものである。試料液測定ライン洗浄バルブＶ₆は、シー
ス液チャンバ６と試料液押出しシリンジ１９の間の経路
を開閉するものである。このバルブＶ₆は、開放された
とき、試料液押出し用シリンジ１９とバルブＶ₅との間
の経路にシース液を流すことによってこの経路の洗浄を
するために用いられるものである。

【００３２】シース液流入バルブＶ₇は、シース液チャ
ンバ６とフローセル４との間の経路を開閉するものであ
る。シース液流入バルブＶ₈は、フローセル４の排出口
とシース液回収チャンバ５との経路を開閉するものであ
り、開放状態のとき、フローセル４の排出口から排出さ
れる試料液とシース液の混合液がシース液回収チャンバ
５に導かれる。

【００３３】次に、試料計数とバックグラウンド計数の
各工程について説明する。図２に、この発明の計数シー
ケンスの一実施例を示す。ここで、この実施例では、測
定対象である試料の計数を行った後に行う洗浄工程を含
む後工程のときに、バックグラウンドの計数を行うこと
を特徴とする。

【００３４】計数シーケンスは、主として次の９つの工
程（ＡからＩ）に分けられる。横軸は各工程の時間（単
位秒）を示している。まず希釈工程Ａは、ダイヤフラム
式希釈ポンプ１２により、サンプリングバルブ１０内に
取り出された試料を希釈液によって希釈して試料液チャ
ンバ９へ押出す工程である。この希釈工程Ａにおいて、
ポンプ１３による吸引によって、サンプリングバルブ１
０の中に一定量（１０μｌ）の試料１４が、取出されて
いる必要がある。

【００３５】この希釈工程Ａでは、まずバルブＶ₂及び
Ｖ₁によって、希釈液チャンバ１１とダイヤフラム式希
釈ポンプ１２との間の経路と、陰圧印加部１８とダイヤ
フラム式希釈ポンプ１２との間の経路とが接続される。
これによって希釈液チャンバ１１から、一定量（２ｍ
ｌ）の希釈液がダイヤフラム式希釈ポンプ１２内に取り
出される。

【００３６】次に、バルブＶ₁、Ｖ₂を逆に切りかえて、
陽圧印加部１７とダイヤフラム式希釈ポンプ１２との間
の経路と、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２とサンプリン
グバルブ１０との間の経路とが接続される。これによっ
て、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２内の希釈液は、サン
プリングバルブ１０の方へ押し出される。

【００３７】このとき、サンプリングバルブ１０では、
予め取り出されていた試料１４と希釈液とが混合され、
この混合液（すなわち試料液）は陽圧印加部１７による
陽圧によって試料液チャンバ９に導かれる。なお、この
希釈工程Ａでは、バルブＶ₃、Ｖ₄は閉じられている。ま
た希釈工程は、図２に示すように、３秒程度とすること
ができる。

【００３８】吸引工程Ｂは、試料液チャンバ９に導かれ
た試料液を、バルブＶ₃とバルブＶ₅との間の経路（以
下、シース測定部という）へ吸引する工程である。この
工程Ｂでは、バルブＶ₃、Ｖ₅が開放で、バルブＶ₄、
Ｖ₆、Ｖ₇、Ｖ₈は閉状態である。この工程も約３秒あれ
ばよい。

【００３９】シース形成工程Ｃは、シース液とシース測
定部に吸引された試料液とをフローセル４へ流入させて
シース流を形成すると共に、試料液チャンバ９の中に残
った試料液を廃液チャンバ８へ捨てる工程である。この
工程Ｃでは、バルブＶ₃を閉じて、バルブＶ₄を開くこと
によって試料液が廃液チャンバ８へ捨てられる。

【００４０】またこの工程Ｃでは、バルブＶ₆が閉じら
れ、バルブＶ₇及びＶ₈が開かれる。バルブＶ₇、Ｖ₈が開
かれることによってシース液チャンバ６内に蓄えられて
いたシース液がフローセル４へ導かれ、フローセル４の
上方の排出口から出射される。

【００４１】一方、このシース形成工程Ｃにおいて、試
料液押出し用シリンジ１９がモータ２０によって駆動さ
れ、シース測定部にあった試料液がジェットノズル７の
中に導かれる。このとき、試料液押出し用シリンジ１９
は１２μｌ／ｓｅｃ程度の速度で駆動される。このシー
ス形成工程Ｃは、前工程と同様に約３秒でよい。

【００４２】第１待機工程Ｄは、シース流の安定化のた
めにしばらく待つ工程である。たとえば約１秒間待てば
よい。この工程Ｄに入る際にバルブＶ₄が閉じられる。

【００４３】計数工程Ｅは、実際に計数対象である試料
流の計数を行う工程である。すなわち、試料液押出し用
シリンジ１９が０．４μｌ／ｓｅｃ程度の速さで押さ
れ、ジェットノズル７から試料液がフローセル４の中へ
流入される。フローセル４では、この試料液とシース液
とが混合され、シース液で包まれた細流となって排出口
へと導かれる。一方、この計数工程Ｅにおいて、レーザ
光が放射され、試料粒子によって散乱された散乱光が受
光部２で検出される。

【００４４】この検出された信号をもとに解析部３で計
数が行われる。計数は、たとえば７秒間行われ、終了時
には、試料液押出し用シリンジ１９がその位置で停止さ
れる。この計数工程Ｅにおいて、計数された数値には、
実際の試料の計数値と共に、気泡などの計数してほしく
ないバックグラウンドによる計数値も含まれる。すなわ
ち、計測した試料の大きさと、バックグラウンドとなる
気泡等の大きさがほぼ同じ場合には、その大きさの計数
値には、かなりの誤差が含まれることになる。

【００４５】逆流工程Ｆは、ジェットノズル７の中に残
った試料液を逆流させて廃液チャンバ８の中へ引き込む
工程であり、洗浄工程の一つである。ここでは、バルブ
Ｖ₃を閉じ、バルブＶ₇、Ｖ₈を開いたまま、バルブＶ₅を
開く。このとき、陰圧印加部１６による陰圧によって、
ジェットノズル７の中の試料液がバルブＶ₅を通って廃
液チャンバ８へ引き込まれる。この工程は、約１秒あれ
ばよい。

【００４６】次のプレ洗浄工程Ｇ、洗浄工程Ｈ、第２待
機工程Ｉは、試料計数が終了し、次の試料計数に入るた
めの準備工程であるが、これらの３つの工程期間中にバ
ックグラウンドの計数を行う。すなわち、新たにバック
グラウンド計数のための工程を別途設けるものではな
い。通常の試料計数に必要な準備工程期間中に誤計数の
要因となるバックグラウンドの計数を行うので、試料計
数のための全工程の効率を低下させることなく、バック
グラウンドの計数が可能となる。

【００４７】プレ洗浄工程Ｇでは、バルブＶ₆を開く。
このとき、シース液チャンバ６からシース液が、バルブ
Ｖ₆、試料液押出し用シリンジ１９、シース測定部、バ
ルブＶ₅を経由して、廃液チャンバ８へ流れる。すなわ
ち、このプレ洗浄工程Ｇでは、試料液押出し用シリンジ
１９とバルブＶ ₅の間のシース測定部の洗浄が行われ
る。

【００４８】一方、この工程Ｇにおいて、バルブＶ₇及
びＶ₈は開放されているので、シース液はバルブＶ₇、フ
ローセル４、フローセル４の上部排出口、バルブＶ₈を
経由して、シース液回収チャンバ５へと流れる。このフ
ローセル４の上部排出口へのシース液の流れに、レーザ
光を照射し、散乱光を測定することによって、気泡等の
バックグラウンドのみの計数が行われる。

【００４９】洗浄工程Ｈでは、試料液押出し用シリンジ
１９を初期位置まで引き戻すほかは、プレ洗浄工程Ｇと
同じ状態を保つ。すなわち、シース液によるシース測定
部の洗浄と、バックグラウンドの計測を行う。プレ洗浄
工程Ｇは約１秒、洗浄工程Ｈは約３秒程度あればよい。

【００５０】第２待機工程Ｉは、シース測定部の洗浄が
終了した後、ジェットノズル７よりシース液がフローセ
ル４の方へ流出されることのないように待機する工程で
ある。この工程では、バルブＶ₇、Ｖ₈は開いたままであ
るが、バルブＶ₅とＶ₆とが閉じられる。このときバルブ
Ｖ₃も閉じられている。したがって、ジェットノズル
７、バルブＶ₅及びＶ₃、試料液押出し用シリンジ１９及
びバルブＶ₆とで形成される。シース測定部の経路で
は、シース液の出入りはない。

【００５１】一方、第２待機工程Ｉにおいても、バルブ
Ｖ₇、Ｖ₈は開放されているので、シース液は、バルブＶ
₇、フローセル４、バルブＶ₈を経由してシース液回収チ
ャンバ５へと流される。したがって、この工程Ｉにおい
ても、バックグラウンドの計数は続行する。第２待機工
程Ｉは、バルブＶ₇及びＶ₈を閉じると終了し、同時に、
バックグラウンドの計数も終了する。この第２待機工程
Ｉは、たとえば１秒程度設ければよい。

【００５２】以上のように、３つの工程Ｇ、Ｈ、Ｉにお
いて、シース液のみがフローセル４内に流され、約５秒
間バックグラウンドの計数が行われる。

【００５３】ところで、解析部３における計数処理で
は、粒子の大きさごとに計数が行われ、いわゆる粒度分
布が作成され、ＲＡＭ等のメモリに記憶される。図３
に、この発明の粒度分布のグラフの一実施例を示す。図
３（ａ）は、計数工程Ｅで測定された粒度分布であり、
計数対象粒子のなかに、いわゆるバックグラウンドも含
んだ分布である。図３（ｂ）は、３つの工程Ｇ、Ｈ、Ｉ
で測定された粒度分布であり、バックグラウンドのみの
粒度分布を示している。

【００５４】したがって、粒子の大きさごとに、図３
（ａ）のその粒子の計数値から、図３（ｂ）のその粒子
の大きさに相当するバックグラウンドの計数値を減算す
れば、その大きさの粒子自体の計数値が求められる。図
３（ｃ）は、このような減算によって求めた粒度分布で
あり、バックグラウンドを除去した計測粒子のみの粒度
分布を示している。

【００５５】図１に示したようなフローセルを用いた粒
子測定においては、５μｍ程度の大きさの気泡やゴミや
チリなどの計数対象外粒子がバックグラウンドとして多
数計数されることが多い。したがって、実際の血液中の
細胞の計数において、５μｍ程度の大きさの粒子、たと
えば血小板の計数に、この発明の計数処理を用いること
は非常に有効である。

【００５６】なお、図２に示した計数シーケンスでは試
料計数（７秒間）とバックグラウンド計数（５秒間）の
時間が異なるが、両者の計数時間を統一するために、ど
ちらか一方の計数値を換算してから、減算を行えばよ
い。したがって、必ずしも両者の計数時間を一致させる
必要はない。

【００５７】また、図２に示したように、バックグラウ
ンドの計数を試料計数後の洗浄工程時に行うのが、全工
程の時間を増加させることなく、最も効率的である。し
かし、粒子計測の仕様、シーケンスの順序等の関係で、
バックグラウンドの計測工程を独立に別途設けてもよい
ことは言うまでもない。

【００５８】また、バックグラウンドの計数において、
通常の範囲を大きく超えるような異常なバックグラウン
ドが計測された場合には、粒子計測処理を中断し、所定
の警告表示を行うことも可能である。

【００５９】

【発明の効果】この発明によれば、誤計数の要因となる
バックグラウンドのみの計数を行っているので、計数対
象粒子がバックグラウンドと同じ程度の大きさであって
も、正確な計数が可能である。また、通常の粒子計数処
理の中で通常の粒子計数工程に支障をきたさない期間に
バックグラウンドの計数を行うようにしているので、粒
子計数にかかる全時間を増加させることなく、測定対象
粒子の正確な計数が可能である。特に、洗浄工程時にバ
ックグラウンドの計数を行えば、最も効率的かつ正確な
粒子計数が可能である。

【図面の簡単な説明】

【図１】この発明の粒子計数装置の一実施例の構成図で
ある。

【図２】この発明の計数シーケンスの一実施例の説明図
である。

【図３】この発明の粒子分布の一実施例の説明図であ
る。

【符号の説明】

１レーザ光源２受光部３解析部４フローセル５シース液回収チャンバ６シース液チャンバ７ジェットノズル８廃液チャンバ９試料液チャンバ１０サンプリングバルブ１１希釈液チャンバ１２ダイヤフラム式希釈ポンプ１３ポンプ１４試料１５陽圧印加部１６陰圧印加部１７陽圧印加部１８陰圧印加部１９試料液押出し用シリンジ２０モータＡ希釈工程Ｂ吸引工程Ｃシース形成工程Ｄ第１待機工程Ｅ計数工程Ｆ逆流工程Ｇプレ洗浄工程Ｈ洗浄工程Ｉ第２待機工程

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】フローサイトメータを用いて、測定対象
粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流を
光学的に測定して第１粒度分布を作成する第１の測定工
程と、前記フローサイトメータを用いて前記シース液の
みからなる試料流を形成し、その試料流を光学的に測定
して第２粒度分布を作成する第２の測定工程と、第１粒度分布から第２粒度分布を減算することによっ
て、測定対象粒子の粒度分布を求める解析工程とからな
ることを特徴とする粒子計数方法。
【請求項２】前記第２の測定工程が、前記第１の測定
工程における粒度分布の測定に支障を及ぼさない期間に
行われることを特徴とする請求項１記載の粒子計数方
法。
【請求項３】前記第１の測定工程が、前記シース液を
フローセルに流すことによってフローセルを洗浄する洗
浄工程をさらに備え、前記第２の測定工程を前記洗浄工程に並行して行うこと
を特徴とする請求項１記載の粒子計数方法。
【請求項４】前記測定対象粒子が直径１０μｍ以下の
微小粒子を含むことを特徴とする請求項１から３に記載
したいずれかの粒子計数方法。
【請求項５】前記測定対象粒子が、血小板である請求
項１から３に記載したいずれかの粒子計数方法。