JPH10271992A - 真菌類から得られる、精製された、酸に安定なα− アミラーゼ - Google Patents
真菌類から得られる、精製された、酸に安定なα− アミラーゼInfo
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- JPH10271992A JPH10271992A JP10039296A JP3929698A JPH10271992A JP H10271992 A JPH10271992 A JP H10271992A JP 10039296 A JP10039296 A JP 10039296A JP 3929698 A JP3929698 A JP 3929698A JP H10271992 A JPH10271992 A JP H10271992A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 アスペルギルスニガーから得られた、精製さ
れ、酸に安定なα- アミラーゼ 【解決手段】 本発明は、α- アミラーゼが酵素活性の
著しい損失がなく得られることを特徴とする、酸に安定
な真菌由来のα- アミラーゼの簡単かつ安価な精製方法
に関する。得られた、精製され、酸に安定なα- アミラ
ーゼはグルコアミラーゼを実質上有していない。酸に安
定なα- アミラーゼを得る方法は、次の工程： −酵素含有溶液のｐＨを１〜８の値に調整し、 −この溶液を、グルコアミラーゼを不活性化するのに充
分な温度に及び時間、加熱し、 −変性されたグルコアミラーゼを除去する から成る。精製され、酸に安定なα- アミラーゼを、で
んぷんの変換に使用する。精製されたα- アミラーゼを
固定化された形でも使用する。
れ、酸に安定なα- アミラーゼ 【解決手段】 本発明は、α- アミラーゼが酵素活性の
著しい損失がなく得られることを特徴とする、酸に安定
な真菌由来のα- アミラーゼの簡単かつ安価な精製方法
に関する。得られた、精製され、酸に安定なα- アミラ
ーゼはグルコアミラーゼを実質上有していない。酸に安
定なα- アミラーゼを得る方法は、次の工程： −酵素含有溶液のｐＨを１〜８の値に調整し、 −この溶液を、グルコアミラーゼを不活性化するのに充
分な温度に及び時間、加熱し、 −変性されたグルコアミラーゼを除去する から成る。精製され、酸に安定なα- アミラーゼを、で
んぷんの変換に使用する。精製されたα- アミラーゼを
固定化された形でも使用する。
Description
【０００１】
【発明の属する利用分野】本発明は、精製された、酸に
安定な、真菌由来のα- アミラーゼ及びその精製された
α- アミラーゼを得る方法に関する。更に、本発明中に
特定のグルコースシロップを得るために、遊離形で又は
固定化された形で精製されたα- アミラーゼを使用する
方法を記載する。
安定な、真菌由来のα- アミラーゼ及びその精製された
α- アミラーゼを得る方法に関する。更に、本発明中に
特定のグルコースシロップを得るために、遊離形で又は
固定化された形で精製されたα- アミラーゼを使用する
方法を記載する。
【０００２】
【従来の技術】真菌類から得られる、酸に安定なα- ア
ミラーゼは、かなり前に発見されている。たとえばＡ．
ニガー(niger) から得られる酸に安定なα- アミラーゼ
は３０年以上知られており（Y. Minoda, K. Yamada, Ar
g. Biol. Chem., ２７（１１），８０６−８１１（１９
６３））、そして Minoda, Yamada 等によって徹底的
に、特徴が調べられている。同一の著者によって、Ｃａ
2 + の存在下に酵素活性を安定化することが示されてい
る。アスペルギルスニガー調製物中の酸に不安定なα-
アミラーゼの存在は、同一の著者によって示されてい
る。酸に安定なα- アミラーゼ酵素は３〜４のｐＨ最適
値を有し、最適温度は７０〜７５℃の範囲にある。
ミラーゼは、かなり前に発見されている。たとえばＡ．
ニガー(niger) から得られる酸に安定なα- アミラーゼ
は３０年以上知られており（Y. Minoda, K. Yamada, Ar
g. Biol. Chem., ２７（１１），８０６−８１１（１９
６３））、そして Minoda, Yamada 等によって徹底的
に、特徴が調べられている。同一の著者によって、Ｃａ
2 + の存在下に酵素活性を安定化することが示されてい
る。アスペルギルスニガー調製物中の酸に不安定なα-
アミラーゼの存在は、同一の著者によって示されてい
る。酸に安定なα- アミラーゼ酵素は３〜４のｐＨ最適
値を有し、最適温度は７０〜７５℃の範囲にある。
【０００３】いくつかの処理が精製された形で酸に安定
なα- アミラーゼを得るために開発されている。ある方
法（上記の Minoda 及び Yamada)によれば、硫酸アンモ
ニウム、リバノール及びアセトンで分別沈澱して、酵素
が結晶形で得られる。この結晶性α- アミラーゼが酸に
不安定なα- アミラーゼで汚染され、一方グルコアミラ
ーゼ及びトランスグルコシダーゼは除去されることが分
った。次いで酸に不安定なα- アミラーゼは、酸性ｐＨ
（ｐＨ２．５）及び３７℃でα- アミラーゼ混合物を処
理し、分別することによって除去される。次の精製はア
セトンでの再結晶及びセファデックスＧ５０によるゲル
濾過によって行われる。
なα- アミラーゼを得るために開発されている。ある方
法（上記の Minoda 及び Yamada)によれば、硫酸アンモ
ニウム、リバノール及びアセトンで分別沈澱して、酵素
が結晶形で得られる。この結晶性α- アミラーゼが酸に
不安定なα- アミラーゼで汚染され、一方グルコアミラ
ーゼ及びトランスグルコシダーゼは除去されることが分
った。次いで酸に不安定なα- アミラーゼは、酸性ｐＨ
（ｐＨ２．５）及び３７℃でα- アミラーゼ混合物を処
理し、分別することによって除去される。次の精製はア
セトンでの再結晶及びセファデックスＧ５０によるゲル
濾過によって行われる。
【０００４】他の文献には、ＤＥＡＥ- セファデックス
Ａ２５でクロマトグラフィー分離する（D. S. Chong,
Y. Tsujisaka, J. Ferment. Technol.,５４（４），２
６４−２６６（１９７６））又は硫酸アンモニウム沈澱
し、ＤＥＡＥ- セファデックスＡ−５０でクロマトグラ
フィー分離する（N. Ramasesh, K. R. Sreekantiah, V.
S. Murthy, Starch, ３４（８），２７４−２７９（１
９８２））ことに基づく精製方法が記載されている。更
にセファデックスＧ−２５、次いでファロースＱファー
ストフロークロマトグラフィーが使用される (Y-Y. Lin
ko, X. Y. Wu,Biotechnology Techniques, ７
（８））。
Ａ２５でクロマトグラフィー分離する（D. S. Chong,
Y. Tsujisaka, J. Ferment. Technol.,５４（４），２
６４−２６６（１９７６））又は硫酸アンモニウム沈澱
し、ＤＥＡＥ- セファデックスＡ−５０でクロマトグラ
フィー分離する（N. Ramasesh, K. R. Sreekantiah, V.
S. Murthy, Starch, ３４（８），２７４−２７９（１
９８２））ことに基づく精製方法が記載されている。更
にセファデックスＧ−２５、次いでファロースＱファー
ストフロークロマトグラフィーが使用される (Y-Y. Lin
ko, X. Y. Wu,Biotechnology Techniques, ７
（８））。
【０００５】ヨーロッパ特許出願第０１３８４２８号明
細書には、トランスフエラーゼ及びアミログルコシダー
ゼから遊離されるα- アミラーゼの産生方法が記載され
ている。これは適するアスペルギルスニガーを変異誘発
剤で処理し、望まれない酵素活性を生じない突然変異株
を選択することによって行われる。この突然変異株の醗
酵ブロスは主に酸に安定なα- アミラーゼ活性を含有す
る。
細書には、トランスフエラーゼ及びアミログルコシダー
ゼから遊離されるα- アミラーゼの産生方法が記載され
ている。これは適するアスペルギルスニガーを変異誘発
剤で処理し、望まれない酵素活性を生じない突然変異株
を選択することによって行われる。この突然変異株の醗
酵ブロスは主に酸に安定なα- アミラーゼ活性を含有す
る。
【０００６】Ａ．ニガーから得られる、酸に安定なα-
アミラーゼのデキストリン化及び糖化性質は、広範囲に
報告されている。液化でんぷんをグルコアミラーゼ及び
酸に安定なα- アミラーゼの混合物を用いてグルコース
へ変換することは、ヨーロッパ特許出願第０１４０４１
０号明細書中に記載され、そこには酸に安定なα- アミ
ラーゼの存在が糖化時間を短縮し、より高いデキストロ
ース収率を与えることが示されている。また上記の Lin
ko等による文献には、デキストロースの産生で酸に安定
なα- アミラーゼを使用することが記載されている。
アミラーゼのデキストリン化及び糖化性質は、広範囲に
報告されている。液化でんぷんをグルコアミラーゼ及び
酸に安定なα- アミラーゼの混合物を用いてグルコース
へ変換することは、ヨーロッパ特許出願第０１４０４１
０号明細書中に記載され、そこには酸に安定なα- アミ
ラーゼの存在が糖化時間を短縮し、より高いデキストロ
ース収率を与えることが示されている。また上記の Lin
ko等による文献には、デキストロースの産生で酸に安定
なα- アミラーゼを使用することが記載されている。
【０００７】Hansen(T. T. Hansen, New Approaches to
Research on Carbohydrates, eds.R. D. Hill 及び
L. Munck, Elsevier Science Publishers B. V., Amste
rdam１９８５，２１１−２１６）によって、１２ＤＥマ
ルトデキストリンの糖化のために酸に安定なα- アミラ
ーゼを使用して、９６時間後に７％グルコース、４８％
ＤＰ２、２６％ＤＰ３及び２０％ＤＰ４＋を有するシロ
ップが得られると報告されている。固定化された、酸に
安定なα- アミラーゼによって４２ＤＥ酸液化シロップ
から６３ＤＥシロップを産生する方法が同一文献中に記
載されている。しかしこの文献には、使用される、酸に
安定なα- アミラーゼがどのように精製されるか開示さ
れていない。ＤＥ（デキストロース当量）は、その分子
中に存在する還元基の数の尺度である。純粋なグルコー
スは１００のＤＥ、未分解でんぷんは０のＤＥを有す
る。７５〜８５℃で酸に安定なα- アミラーゼでのでん
ぷんの液化は、グルコアミラーゼによって糖化されるで
んぷん基質を生じる。得られたシロップは、正確なデキ
ストロース収率を有するが、でんぷんが多く、悪い濾過
能力を有する。突然変異株から得られた、固定化された
酸に安定なα- アミラーゼの使用は、ヨーロッパ特許出
願第０１５７６３８号明細書中に開示されている。
Research on Carbohydrates, eds.R. D. Hill 及び
L. Munck, Elsevier Science Publishers B. V., Amste
rdam１９８５，２１１−２１６）によって、１２ＤＥマ
ルトデキストリンの糖化のために酸に安定なα- アミラ
ーゼを使用して、９６時間後に７％グルコース、４８％
ＤＰ２、２６％ＤＰ３及び２０％ＤＰ４＋を有するシロ
ップが得られると報告されている。固定化された、酸に
安定なα- アミラーゼによって４２ＤＥ酸液化シロップ
から６３ＤＥシロップを産生する方法が同一文献中に記
載されている。しかしこの文献には、使用される、酸に
安定なα- アミラーゼがどのように精製されるか開示さ
れていない。ＤＥ（デキストロース当量）は、その分子
中に存在する還元基の数の尺度である。純粋なグルコー
スは１００のＤＥ、未分解でんぷんは０のＤＥを有す
る。７５〜８５℃で酸に安定なα- アミラーゼでのでん
ぷんの液化は、グルコアミラーゼによって糖化されるで
んぷん基質を生じる。得られたシロップは、正確なデキ
ストロース収率を有するが、でんぷんが多く、悪い濾過
能力を有する。突然変異株から得られた、固定化された
酸に安定なα- アミラーゼの使用は、ヨーロッパ特許出
願第０１５７６３８号明細書中に開示されている。
【０００８】低い開始ＤＥが要求される高マルトース産
生のための後- 液化酵素として使用される可能性によれ
ば、Ｂ．リチェニホルミス（lichteniformis) で前- 液
化されたでんぷんスラリーを、９０℃及びｐＨ５で酸に
安定なα- アミラーゼと共にインキュベートする。２０
分後、温度を６０℃に下げ、かろうじてβ- アミラーゼ
がプルラナーゼと共に加えられる。最終シロップは、
０．５％グルコース及び７１％マルトース及び９１％醗
酵糖を含有する。α- アミラーゼを用いないで調製され
た参考用シロップは同一のＤＰ１及びＤＰ２組成を有す
るが、７７％醗酵糖しか有さない。
生のための後- 液化酵素として使用される可能性によれ
ば、Ｂ．リチェニホルミス（lichteniformis) で前- 液
化されたでんぷんスラリーを、９０℃及びｐＨ５で酸に
安定なα- アミラーゼと共にインキュベートする。２０
分後、温度を６０℃に下げ、かろうじてβ- アミラーゼ
がプルラナーゼと共に加えられる。最終シロップは、
０．５％グルコース及び７１％マルトース及び９１％醗
酵糖を含有する。α- アミラーゼを用いないで調製され
た参考用シロップは同一のＤＰ１及びＤＰ２組成を有す
るが、７７％醗酵糖しか有さない。
【０００９】粗でんぷんを分解することができるＡ．ニ
ガーから得られる酸に安定なα- アミラーゼが記載され
ている（B. N. Okolo, L. I. Ezeogu, C. N. Mba, J. S
ci.Food. Agric., ６９，１０９−１１５（１９９
５））。酸に安定なα- アミラーゼはアスペルギルスニ
ガー中に見いだされるだけでなく、アスペルギルスアワ
モリ（Aspergillus awamori)中にも酸に安定なα- アミ
ラーゼが見い出される (R.S. Bhella, I. Altosaar, Ca
n. J. Microbiol., ３１，１４９−１５３（１９８
５））。これらのα- アミラーゼはｐＨ３．５〜６．５
で安定であると報告されている。
ガーから得られる酸に安定なα- アミラーゼが記載され
ている（B. N. Okolo, L. I. Ezeogu, C. N. Mba, J. S
ci.Food. Agric., ６９，１０９−１１５（１９９
５））。酸に安定なα- アミラーゼはアスペルギルスニ
ガー中に見いだされるだけでなく、アスペルギルスアワ
モリ（Aspergillus awamori)中にも酸に安定なα- アミ
ラーゼが見い出される (R.S. Bhella, I. Altosaar, Ca
n. J. Microbiol., ３１，１４９−１５３（１９８
５））。これらのα- アミラーゼはｐＨ３．５〜６．５
で安定であると報告されている。
【００１０】アスペルギルスニガー又は他のアスペルギ
ルス種──これは酸に安定なα- アミラーゼを産生する
──から得られる、酸に安定なα- アミラーゼが極めて
産業上重要であることは上記文献から明らかであるが、
市販されているアスペルギルス種による酸に安定なα-
アミラーゼ調製物はグルコアミラーゼ副活性がある。市
販の、酸に安定なα- アミラーゼ調製物中のグルコアミ
ラーゼの存在が、この調製物を使用することができる適
用範囲を著しく減少させる。
ルス種──これは酸に安定なα- アミラーゼを産生する
──から得られる、酸に安定なα- アミラーゼが極めて
産業上重要であることは上記文献から明らかであるが、
市販されているアスペルギルス種による酸に安定なα-
アミラーゼ調製物はグルコアミラーゼ副活性がある。市
販の、酸に安定なα- アミラーゼ調製物中のグルコアミ
ラーゼの存在が、この調製物を使用することができる適
用範囲を著しく減少させる。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、α- アミラ
ーゼが酵素活性を著しく損失することなく得られる、酸
に安定な真菌由来のα- アミラーゼの簡単かつ安価な精
製方法に関する。本発明はグルコアミラーゼを実質上含
まない、精製され、酸に安定なα- アミラーゼに関す
る。α- アミラーゼは真菌類から得られるのが好まし
く、好ましい真菌はアスペルギルス種、好ましくはアス
ペルギルスニガー又はアスペルギルスアワモリである。
ーゼが酵素活性を著しく損失することなく得られる、酸
に安定な真菌由来のα- アミラーゼの簡単かつ安価な精
製方法に関する。本発明はグルコアミラーゼを実質上含
まない、精製され、酸に安定なα- アミラーゼに関す
る。α- アミラーゼは真菌類から得られるのが好まし
く、好ましい真菌はアスペルギルス種、好ましくはアス
ペルギルスニガー又はアスペルギルスアワモリである。
【００１２】
更に、本発明は次の工程： −酵素含有溶液のｐＨを１〜８の値に調整し、 −この溶液を、グルコアミラーゼを不活性化するのに十
分な温度に及び時間、加熱し、 −変性されたグルコアミラーゼを除去することを特徴と
する、酸に安定なα- アミラーゼを得る方法に関する。
分な温度に及び時間、加熱し、 −変性されたグルコアミラーゼを除去することを特徴と
する、酸に安定なα- アミラーゼを得る方法に関する。
【００１３】本発明の好ましい実施態様で、加熱は４０
〜８０℃、好ましくは５０〜７５℃の温度でなければな
らない。更に、本発明は、でんぷんの変換に、精製さ
れ、酸に安定なα- アミラーゼを使用する方法に関す
る。本発明の精製された酵素を、１０％より少ない、好
ましくは５％よりすくない低量のグルコースを含有する
高いマルトースシロップ又は高いマルトトリオースを調
製するのに使用する。精製されたα- アミラーゼも、固
定化された形で使用する。
〜８０℃、好ましくは５０〜７５℃の温度でなければな
らない。更に、本発明は、でんぷんの変換に、精製さ
れ、酸に安定なα- アミラーゼを使用する方法に関す
る。本発明の精製された酵素を、１０％より少ない、好
ましくは５％よりすくない低量のグルコースを含有する
高いマルトースシロップ又は高いマルトトリオースを調
製するのに使用する。精製されたα- アミラーゼも、固
定化された形で使用する。
【００１４】本発明中に、特定のｐＨ値でアスペルギル
ス種の好ましい真菌を増殖した後に得られる培養ブロス
を含有するα- アミラーゼ／グルコアミラーゼの熱処理
を記載する。ｐＨ及び温度は、この調製物中のグルコア
ミラーゼ活性を減少させるか又は除くように選ばれる。
脱活性化されたグルコアミラーゼはこの処理後フロキュ
レートし、容易に濾去するか又は遠心分離又は他の分離
法で除くことができる。それによって純粋な酸に安定な
α- アミラーゼ調製物を生じる。この様にして得られ
た、酸に安定なα- アミラーゼをそのまま又は濃縮し、
安定剤の添加後に使用することができる。
ス種の好ましい真菌を増殖した後に得られる培養ブロス
を含有するα- アミラーゼ／グルコアミラーゼの熱処理
を記載する。ｐＨ及び温度は、この調製物中のグルコア
ミラーゼ活性を減少させるか又は除くように選ばれる。
脱活性化されたグルコアミラーゼはこの処理後フロキュ
レートし、容易に濾去するか又は遠心分離又は他の分離
法で除くことができる。それによって純粋な酸に安定な
α- アミラーゼ調製物を生じる。この様にして得られ
た、酸に安定なα- アミラーゼをそのまま又は濃縮し、
安定剤の添加後に使用することができる。
【００１５】酸に不安定なα- アミラーゼ活性も、この
熱処理によって分解されるので、酸に安定なα- アミラ
ーゼのみを含有する溶液が得られ、これはグルコアミラ
ーゼ、酸に不安定なα- アミラーゼ及びトランスグルコ
シダーゼを含まない。溶液をそのまま使用するか又は使
用前に濾過、加熱又は凍結乾燥によって濃縮することが
できる。必要ならば安定剤を添加する。
熱処理によって分解されるので、酸に安定なα- アミラ
ーゼのみを含有する溶液が得られ、これはグルコアミラ
ーゼ、酸に不安定なα- アミラーゼ及びトランスグルコ
シダーゼを含まない。溶液をそのまま使用するか又は使
用前に濾過、加熱又は凍結乾燥によって濃縮することが
できる。必要ならば安定剤を添加する。
【００１６】本発明はグルコアミラーゼを実質上含まな
い、精製され、酸に安定なα- アミラーゼに関する。α
- アミラーゼは真菌類から得られるのが好ましく、好ま
しい真菌はアスペルギルス種、好ましくはアスペルギル
スニガー又はアスペルギルスアワモリである。 更に本発明は次の工程： −酵素含有溶液のｐＨを１〜８の値に調整し、 −この溶液を、グルコアミラーゼを不活性化するのに十
分な温度に及び時間、加熱し、 −変性されたグルコアミラーゼを除去することを特徴と
する、酸に安定なα- アミラーゼを得る方法に関する。
い、精製され、酸に安定なα- アミラーゼに関する。α
- アミラーゼは真菌類から得られるのが好ましく、好ま
しい真菌はアスペルギルス種、好ましくはアスペルギル
スニガー又はアスペルギルスアワモリである。 更に本発明は次の工程： −酵素含有溶液のｐＨを１〜８の値に調整し、 −この溶液を、グルコアミラーゼを不活性化するのに十
分な温度に及び時間、加熱し、 −変性されたグルコアミラーゼを除去することを特徴と
する、酸に安定なα- アミラーゼを得る方法に関する。
【００１７】本発明の好ましい実施態様で、酵素含有溶
液は醗酵ブロスである。細胞性又は微生物性材料を先
ず、たとえば濾過又は遠心分離によって除去する。次い
で醗酵ブロスを加熱する。加熱はグルコアミラーゼを不
活性化する温度でなければならず、一方同一時間で酸に
安定なα- アミラーゼはその活性を保つ。的確な温度は
酵素の起源及び醗酵ブロスの組成による。５０〜８０℃
の温度が使用されるが、好ましい温度は６０〜７５℃の
範囲である。温度があまり高いと、これが酸に安定なα
- アミラーゼの残存活性に影響する。その結果として調
製物を過加熱しないように注意しなければならない。加
熱をカルシウムイオンの存在下に行うのが好ましい。カ
ルシウムイオンを、酸に安定なα- アミラーゼを安定化
するのに十分な量で存在させねばならない。５０〜３５
０ｐｐｍの範囲のカルシウムイオン量が満足に使用され
る。的確な量は酵素の起源及び醗酵ブロス中に生じる汚
染物による。１５０〜２５０ｐｐｍの量が特に有用であ
る。
液は醗酵ブロスである。細胞性又は微生物性材料を先
ず、たとえば濾過又は遠心分離によって除去する。次い
で醗酵ブロスを加熱する。加熱はグルコアミラーゼを不
活性化する温度でなければならず、一方同一時間で酸に
安定なα- アミラーゼはその活性を保つ。的確な温度は
酵素の起源及び醗酵ブロスの組成による。５０〜８０℃
の温度が使用されるが、好ましい温度は６０〜７５℃の
範囲である。温度があまり高いと、これが酸に安定なα
- アミラーゼの残存活性に影響する。その結果として調
製物を過加熱しないように注意しなければならない。加
熱をカルシウムイオンの存在下に行うのが好ましい。カ
ルシウムイオンを、酸に安定なα- アミラーゼを安定化
するのに十分な量で存在させねばならない。５０〜３５
０ｐｐｍの範囲のカルシウムイオン量が満足に使用され
る。的確な量は酵素の起源及び醗酵ブロス中に生じる汚
染物による。１５０〜２５０ｐｐｍの量が特に有用であ
る。
【００１８】本発明の方法を、かなりの量のグルコアミ
ラーゼを含有する調製物として酵素供給者によって供給
されるような酵素調製物にも使用することができる。こ
の場合、本発明の方法は、醗酵ブロスを用いて出発する
のではなく、微生物材料がすでに除去され、かつ常法で
緩衝され、安定剤を含有し、製造業者によって供給され
るような酵素調製を用いて出発する。この調製物も更に
濃縮された形で酵素を含有する。
ラーゼを含有する調製物として酵素供給者によって供給
されるような酵素調製物にも使用することができる。こ
の場合、本発明の方法は、醗酵ブロスを用いて出発する
のではなく、微生物材料がすでに除去され、かつ常法で
緩衝され、安定剤を含有し、製造業者によって供給され
るような酵素調製を用いて出発する。この調製物も更に
濃縮された形で酵素を含有する。
【００１９】更に、本発明は、でんぷんの変換に、精製
され、酸に安定なα- アミラーゼを使用する方法に関す
る。精製された酵素を用いた場合、１０％よはり少な
い、好ましくは５％より少ない比較的低量のグルコース
を含有する高アミロースシロップを調製することができ
る。精製されたα- アミロースはそのまま又は固定化さ
れた形で使用することができる。固定化は公知の固定化
方法を用いて行われる。酵素を、たとえばマトリックス
又はゲル（アルギナート、カラギーナン）中に取り込み
又はイオン交換樹脂と結合させることができる。
され、酸に安定なα- アミラーゼを使用する方法に関す
る。精製された酵素を用いた場合、１０％よはり少な
い、好ましくは５％より少ない比較的低量のグルコース
を含有する高アミロースシロップを調製することができ
る。精製されたα- アミロースはそのまま又は固定化さ
れた形で使用することができる。固定化は公知の固定化
方法を用いて行われる。酵素を、たとえばマトリックス
又はゲル（アルギナート、カラギーナン）中に取り込み
又はイオン交換樹脂と結合させることができる。
【００２０】市場で得られるα- アミラーゼ生成物は、
かなりの量の酵素不純物を含有する。特に真菌類から得
られる酸に安定なα- アミラーゼ調製物は、かなりのグ
ルコアミラーゼ及び酸に不安定なα- アミラーゼ活性を
有する。例１，２及び５の開始酵素（Stern 酵素から得
られる）は、７．２ＧＡＵ／ｇ及び４５００ＡＡＵ／ｇ
を含有する。他の調製物は１５．７ＧＡＵ／ｇ及び８４
０ＡＡＵ／ｇを含有する酵素バイオ- システム（例３及
び４で使用される）によってＧ−ＺＹＭＥTMＧ９９８と
して販売されている。調べられる他の酵素調製物はＳＡ
ＮＡＣＴＡＳＥ（粉末、明治製菓社）１３８０ＡＡＵ／
ｇ及び１２３ＧＡＵ／ｇ及びＭＵＬＴＩＦＲＥＳＨ（噴
霧乾燥された、Ｇ９９８変種、酵素バイオ- システム）
１１９ＧＡＵ／ｇ及び９３５６ＡＡＵ／ｇである。
かなりの量の酵素不純物を含有する。特に真菌類から得
られる酸に安定なα- アミラーゼ調製物は、かなりのグ
ルコアミラーゼ及び酸に不安定なα- アミラーゼ活性を
有する。例１，２及び５の開始酵素（Stern 酵素から得
られる）は、７．２ＧＡＵ／ｇ及び４５００ＡＡＵ／ｇ
を含有する。他の調製物は１５．７ＧＡＵ／ｇ及び８４
０ＡＡＵ／ｇを含有する酵素バイオ- システム（例３及
び４で使用される）によってＧ−ＺＹＭＥTMＧ９９８と
して販売されている。調べられる他の酵素調製物はＳＡ
ＮＡＣＴＡＳＥ（粉末、明治製菓社）１３８０ＡＡＵ／
ｇ及び１２３ＧＡＵ／ｇ及びＭＵＬＴＩＦＲＥＳＨ（噴
霧乾燥された、Ｇ９９８変種、酵素バイオ- システム）
１１９ＧＡＵ／ｇ及び９３５６ＡＡＵ／ｇである。
【００２１】例１中に、７０℃で１時間、カルシウムイ
オンの存在下でのインキュベーションは、グルコアミラ
ーゼの完全な不活性化を生じ、一方酸に安定なα- アミ
ラーゼ活性７４％が残存することを示す。しかしα- ア
ミラーゼの６５℃での残存活性は、約１０％より高く、
グルコアミラーゼも例２に例示するように完全に不活性
化されない。例３は第二酵素調製物に関する例１の結果
を確認する。カルシウムイオンが例４の調製物中に全く
添加されない場合、α- アミラーゼの活性は著しく減少
する。
オンの存在下でのインキュベーションは、グルコアミラ
ーゼの完全な不活性化を生じ、一方酸に安定なα- アミ
ラーゼ活性７４％が残存することを示す。しかしα- ア
ミラーゼの６５℃での残存活性は、約１０％より高く、
グルコアミラーゼも例２に例示するように完全に不活性
化されない。例３は第二酵素調製物に関する例１の結果
を確認する。カルシウムイオンが例４の調製物中に全く
添加されない場合、α- アミラーゼの活性は著しく減少
する。
【００２２】例５中に、ｐＨがα- アミラーゼ及びグル
コアミラーゼの不活性化速度及び量に影響することを示
す。例６中に、酸に不安定なα- アミラーゼの量をＧ−
ＺＹＭＥ酵素調製物中で測定する。例７中に、精製され
た、酸に安定なα- アミラーゼを使用して、１０％より
少ない、好ましくは５％より少ないグルコースを含有す
る高マルトースシロップ又は高マルトトリオースシロッ
プが得られることを示す。これは市販の酵素調製物では
不可能である。
コアミラーゼの不活性化速度及び量に影響することを示
す。例６中に、酸に不安定なα- アミラーゼの量をＧ−
ＺＹＭＥ酵素調製物中で測定する。例７中に、精製され
た、酸に安定なα- アミラーゼを使用して、１０％より
少ない、好ましくは５％より少ないグルコースを含有す
る高マルトースシロップ又は高マルトトリオースシロッ
プが得られることを示す。これは市販の酵素調製物では
不可能である。
【００２３】例８中に、精製された、酸に安定なα- ア
ミラーゼを固定化された形で使用する場合、４２ＤＥシ
ロップから出発して、６２ＤＥシロップを得ることがで
きることを示す。
ミラーゼを固定化された形で使用する場合、４２ＤＥシ
ロップから出発して、６２ＤＥシロップを得ることがで
きることを示す。
【００２４】
【実施例】酵素活性の測定は通常、酵素供給者によって
提供されているような標準法によって行われる。グルコ
アミラーゼ活性をパラ- ニトロフエニル -α- Ｄ- グル
コピラノシドの加水分解によって測定する（K. A. Hol
m, Analyst, ３，９２７−９２９（１９８６））。基
本的に処理を次の様に行う。酵素調製物を、パラ- ニト
ロフエニル-α- Ｄ- グルコピラノシドと標準条件（ｐ
Ｈ４．２、５５℃）下で反応させる。グルコアミラーゼ
の存在下に、この基質をグルコースと黄色を有するパラ
- ニトロフエノラートに分解する。生じたパラ- ニトロ
フエノラートの量を比色的に測定する。酵素活性を、パ
ラ- ニトロフエノラートの濃度と吸光度の関係を表わす
スタンダードカーブから算出する。
提供されているような標準法によって行われる。グルコ
アミラーゼ活性をパラ- ニトロフエニル -α- Ｄ- グル
コピラノシドの加水分解によって測定する（K. A. Hol
m, Analyst, ３，９２７−９２９（１９８６））。基
本的に処理を次の様に行う。酵素調製物を、パラ- ニト
ロフエニル-α- Ｄ- グルコピラノシドと標準条件（ｐ
Ｈ４．２、５５℃）下で反応させる。グルコアミラーゼ
の存在下に、この基質をグルコースと黄色を有するパラ
- ニトロフエノラートに分解する。生じたパラ- ニトロ
フエノラートの量を比色的に測定する。酵素活性を、パ
ラ- ニトロフエノラートの濃度と吸光度の関係を表わす
スタンダードカーブから算出する。
【００２５】α- アミラーゼ活性を、酵素とスタンダー
ドでんぷん溶液との反応によって測定する。α- アミラ
ーゼ活性の量を、でんぷんのヨウ素- 染色能が減少する
速度によって測定する（G. B. Manning, L. L. Campbel
l, J. Biological Chemistry２３６，２９５２−２９５
７（１９６１））。 〔例１〕Stern 酵素から得られた、粉末（４５００ＡＡ
Ｕ／ｇ、２００ｍｇたん白質／ｇ粉末）を含有するα-
アミラーゼ／グルコアミラーゼ１ｇを、Ｃａ2 + ２００
ｐｐｍを含有する０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡｃ（Ａｃ
＝酢酸塩）緩衝液（ｐＨ４．２）１９ｇ中に溶解する。
濾過して澄明な液体を得た後に、溶液を一定時間７０℃
でインキュベートする。一定の間隔で熱処理をｐＨ５及
び環境温度で０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡｃ緩衝液９ｍ
ｌにインキュベートされた溶液のサンプル１ｍｌを加え
ることによって停止する。これらの溶液中のＧＡ及びＡ
Ａの活性を測定する。その結果を表中に示す。一般に残
存する酸に安定なα- アミラーゼのたん白質含有量は、
本来のたん白質含有量に対してほんの２０％である。 インキュベーション 残存する全ＡＡ活性* 残存するＧＡ活性 時間（ｈ） （％） （％） ０．５ ７７ ０．０１５ １ ７４ ０ １．５ ６４ ０ ２．０ ５０ ０ ３．０ ４０ ０ ４．４ ２５ ０* 全ＡＡ（α- アミラーゼ）活性＝酸に安定な及び酸に不安定なα- アミラーゼ の活性の合計 ｐＨ４．２、７０℃で短時間インキュベーションの後
に、グルコアミラーゼ活性のすべてが分解することが明
らかに示される。〔例２〕Stern 酵素から得られた、粉
末（４５００ＡＡＵ／ｇ、２００ｍｇたん白質／ｇ粉
末）を含有するα- アミラーゼ／グルコアミラーゼ１ｇ
を、Ｃａ2 + ２００ｐｐｍを含有する０．０５Ｎ Ｎａ
Ａｃ／ＨＡｃ緩衝液（ｐＨ３．５）１９ｇ中に溶解す
る。濾過して澄明な液体を得た後に、溶液を一定時間６
５℃でインキュベートする。一定の間隔で、熱処理をイ
ンキュベートされた溶液のサンプル１ｍｌを濾過し、次
いでｐＨ５及び環境温度で０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡ
ｃ緩衝液９ｍｌに加えることによって停止する。これら
の溶液中のＧＡ及びＡＡの活性を測定する。その結果を
表中に示す。一般に残存する酸に安定なα- アミラーゼ
のたん白質含有量は、本来のたん白質含有量に対してほ
んの２０％である。 インキュベーション 残存する全ＡＡ活性* 残存するＧＡ活性 時間（ｈ） （％） （％） ０．７ １００ １６ １．１ ８８ １６ １．６ ８８ １４ ２．１ ９０ ８．２ ２．５ ９０ ８．６ ３．０ ８２ ８．１ ３．５ ８４ ８．９* 全ＡＡ（α- アミラーゼ）活性＝酸に安定な及び酸に不安定なα- アミラーゼ の活性の合計 ｐＨ３．５及び６５℃でのインキュベーションがほとん
どのグルコアミラーゼ活性を減少させることが明らかに
示される。 〔例３〕Ｇ９９８１ｇ（酵素バイオ- システムから得ら
れた市販の液状、酸に安定なアミラーゼ／グルコアミラ
ーゼ調製物、１５．７ＧＡＵ／ｇ、８４０ＡＡＵ／ｇ、
３８ｍｇたん白質／ｇ酵素溶液）を、Ｃａ2 + ２００ｐ
ｐｍを含有する０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡｃ緩衝液
（ｐＨ３．５）１９ｇ中に溶解する。濾過して澄明な液
体を得た後に、溶液を一定時間６５℃でインキュベート
する。一定の間隔で熱処理を、ｐＨ５及び環境温度で
０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡｃ緩衝液９ｍｌにインキュ
ベートされた溶液のサンプル１ｍｌを加えることによっ
て停止する。これらの溶液中のＧＡ及びＡＡの活性を測
定する。その結果を表中に示す。一般に残存する酸に安
定なα- アミラーゼのたん白質含有量は、本来のたん白
質含有量に対してほんの２０〜２５％である。
ドでんぷん溶液との反応によって測定する。α- アミラ
ーゼ活性の量を、でんぷんのヨウ素- 染色能が減少する
速度によって測定する（G. B. Manning, L. L. Campbel
l, J. Biological Chemistry２３６，２９５２−２９５
７（１９６１））。 〔例１〕Stern 酵素から得られた、粉末（４５００ＡＡ
Ｕ／ｇ、２００ｍｇたん白質／ｇ粉末）を含有するα-
アミラーゼ／グルコアミラーゼ１ｇを、Ｃａ2 + ２００
ｐｐｍを含有する０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡｃ（Ａｃ
＝酢酸塩）緩衝液（ｐＨ４．２）１９ｇ中に溶解する。
濾過して澄明な液体を得た後に、溶液を一定時間７０℃
でインキュベートする。一定の間隔で熱処理をｐＨ５及
び環境温度で０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡｃ緩衝液９ｍ
ｌにインキュベートされた溶液のサンプル１ｍｌを加え
ることによって停止する。これらの溶液中のＧＡ及びＡ
Ａの活性を測定する。その結果を表中に示す。一般に残
存する酸に安定なα- アミラーゼのたん白質含有量は、
本来のたん白質含有量に対してほんの２０％である。 インキュベーション 残存する全ＡＡ活性* 残存するＧＡ活性 時間（ｈ） （％） （％） ０．５ ７７ ０．０１５ １ ７４ ０ １．５ ６４ ０ ２．０ ５０ ０ ３．０ ４０ ０ ４．４ ２５ ０* 全ＡＡ（α- アミラーゼ）活性＝酸に安定な及び酸に不安定なα- アミラーゼ の活性の合計 ｐＨ４．２、７０℃で短時間インキュベーションの後
に、グルコアミラーゼ活性のすべてが分解することが明
らかに示される。〔例２〕Stern 酵素から得られた、粉
末（４５００ＡＡＵ／ｇ、２００ｍｇたん白質／ｇ粉
末）を含有するα- アミラーゼ／グルコアミラーゼ１ｇ
を、Ｃａ2 + ２００ｐｐｍを含有する０．０５Ｎ Ｎａ
Ａｃ／ＨＡｃ緩衝液（ｐＨ３．５）１９ｇ中に溶解す
る。濾過して澄明な液体を得た後に、溶液を一定時間６
５℃でインキュベートする。一定の間隔で、熱処理をイ
ンキュベートされた溶液のサンプル１ｍｌを濾過し、次
いでｐＨ５及び環境温度で０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡ
ｃ緩衝液９ｍｌに加えることによって停止する。これら
の溶液中のＧＡ及びＡＡの活性を測定する。その結果を
表中に示す。一般に残存する酸に安定なα- アミラーゼ
のたん白質含有量は、本来のたん白質含有量に対してほ
んの２０％である。 インキュベーション 残存する全ＡＡ活性* 残存するＧＡ活性 時間（ｈ） （％） （％） ０．７ １００ １６ １．１ ８８ １６ １．６ ８８ １４ ２．１ ９０ ８．２ ２．５ ９０ ８．６ ３．０ ８２ ８．１ ３．５ ８４ ８．９* 全ＡＡ（α- アミラーゼ）活性＝酸に安定な及び酸に不安定なα- アミラーゼ の活性の合計 ｐＨ３．５及び６５℃でのインキュベーションがほとん
どのグルコアミラーゼ活性を減少させることが明らかに
示される。 〔例３〕Ｇ９９８１ｇ（酵素バイオ- システムから得ら
れた市販の液状、酸に安定なアミラーゼ／グルコアミラ
ーゼ調製物、１５．７ＧＡＵ／ｇ、８４０ＡＡＵ／ｇ、
３８ｍｇたん白質／ｇ酵素溶液）を、Ｃａ2 + ２００ｐ
ｐｍを含有する０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡｃ緩衝液
（ｐＨ３．５）１９ｇ中に溶解する。濾過して澄明な液
体を得た後に、溶液を一定時間６５℃でインキュベート
する。一定の間隔で熱処理を、ｐＨ５及び環境温度で
０．０５Ｎ ＮａＡｃ／ＨＡｃ緩衝液９ｍｌにインキュ
ベートされた溶液のサンプル１ｍｌを加えることによっ
て停止する。これらの溶液中のＧＡ及びＡＡの活性を測
定する。その結果を表中に示す。一般に残存する酸に安
定なα- アミラーゼのたん白質含有量は、本来のたん白
質含有量に対してほんの２０〜２５％である。
【００２６】 インキュベーション 残存する全ＡＡ活性* 残存するＧＡ活性 時間（ｈ） （％） （％） ０．７ ９８ ６．２ １ ９７ １．４ １．５ ８０ １．１ ２ ７５ ０．２ ２．５ ７６ ０．０ ３．５ ７６ ０．０* 全ＡＡ（α- アミラーゼ）活性＝酸に安定な及び酸に不安定なα- アミラーゼ の活性の合計 この例中でも、酸に安定なα- アミラーゼは害となるグ
ルコアミラーゼ活性から容易に解放される。 〔例４〕例４中で使用される実験条件は、Ｃａ2 + をｐ
Ｈ３．５でＮａＡｃ／ＨＡｃに加えない他は、例３に記
載したのと同一である。
ルコアミラーゼ活性から容易に解放される。 〔例４〕例４中で使用される実験条件は、Ｃａ2 + をｐ
Ｈ３．５でＮａＡｃ／ＨＡｃに加えない他は、例３に記
載したのと同一である。
【００２７】 インキュベーション Ｃａ2 + 不含残存 Ｃａ2 + 含有残存 時間（ｈ） 全ＡＡ活性* （％） 全ＡＡ活性（％） １０ ４９ ２０ ３２ ３０ ２９ ４０ ２１ ９８* 全ＡＡ活性＝酸に安定な及び酸に不安定なα- アミラーゼの活性の合計 これらの数値から、Ｃａ2 + の存在は酸に安定なα- ア
ミラーゼの熱安定性を増加するのに必要であることが明
らかである。 〔例５〕Stern 酵素から得られた、粉末（４５００ＡＡ
Ｕ／ｇ、２００ｍｇたん白質／ｇ粉末）を含有するα-
アミラーゼ／グルコアミラーゼ０．５ｇを、脱塩水２．
５ｍｌ中に溶解する。濾過して、澄明な液体を得た後、
Ａ ＰＤ−１０カラム（フアルマシア）上での脱塩処理
を行い、α- アミラーゼ／グルコアミラーゼ含有溶液
３．５ｍｌを生じる。この溶液をＣａ2 + ２００ｐｐｍ
を含有する０．１ＮＮａＡｃ／ＨＡｃ緩衝液（ｐＨ４．
２又は３．５）で４倍に希釈する。調製された溶液を７
０℃で一定時間インキュベートする。一定の間隔の後、
熱処理をｐＨ５及び環境温度で０．０５Ｎ ＮａＡｃ／
ＨＡｃ緩衝液９ｍｌにインキュベートされた溶液のサン
プル１ｍｌを加えることによって停止する。これらの溶
液中のＧＡ及びＡＡの活性を測定する。その結果を表中
に示す。一般に残存する酸に安定なα- アミラーゼのた
ん白質含有量は、本来のたん白質含有量に対してほんの
２０％である。 ｐＨ インキュベーション 残存する全ＡＡ活性* 残存するＧＡ活性 時間（ｈ） （％） （％） ３．５ ０．０８ ８４ ０ ４．２ ０．１７ １００ ５５ ４．２ ０．２５ ８０ １０* 全ＡＡ活性＝酸に安定な及び酸に不安定なα- アミラーゼの活性の合計 〔例６〕酸に不安定なα- アミラーゼの量の測定。
ミラーゼの熱安定性を増加するのに必要であることが明
らかである。 〔例５〕Stern 酵素から得られた、粉末（４５００ＡＡ
Ｕ／ｇ、２００ｍｇたん白質／ｇ粉末）を含有するα-
アミラーゼ／グルコアミラーゼ０．５ｇを、脱塩水２．
５ｍｌ中に溶解する。濾過して、澄明な液体を得た後、
Ａ ＰＤ−１０カラム（フアルマシア）上での脱塩処理
を行い、α- アミラーゼ／グルコアミラーゼ含有溶液
３．５ｍｌを生じる。この溶液をＣａ2 + ２００ｐｐｍ
を含有する０．１ＮＮａＡｃ／ＨＡｃ緩衝液（ｐＨ４．
２又は３．５）で４倍に希釈する。調製された溶液を７
０℃で一定時間インキュベートする。一定の間隔の後、
熱処理をｐＨ５及び環境温度で０．０５Ｎ ＮａＡｃ／
ＨＡｃ緩衝液９ｍｌにインキュベートされた溶液のサン
プル１ｍｌを加えることによって停止する。これらの溶
液中のＧＡ及びＡＡの活性を測定する。その結果を表中
に示す。一般に残存する酸に安定なα- アミラーゼのた
ん白質含有量は、本来のたん白質含有量に対してほんの
２０％である。 ｐＨ インキュベーション 残存する全ＡＡ活性* 残存するＧＡ活性 時間（ｈ） （％） （％） ３．５ ０．０８ ８４ ０ ４．２ ０．１７ １００ ５５ ４．２ ０．２５ ８０ １０* 全ＡＡ活性＝酸に安定な及び酸に不安定なα- アミラーゼの活性の合計 〔例６〕酸に不安定なα- アミラーゼの量の測定。
【００２８】市販のアスペルギルス種α- アミラーゼ調
製物中に酸に安定なα- アミラーゼの量を調整するため
に、次の方法を採用する：酵素の溶液をｐＨ２．５と
し、３７℃で３０分間インキュベートする。次いで冷却
し、中和してｐＨ４．８とする。次いでα- アミラーゼ
活性を測定する。 残存する相対ＡＡ活性を例１〜５の全ＡＡ活性と比較す
ると、残存する酸に安定なα- アミラーゼ活性は、例１
〜５の表中に示された値よりも高いことを示す。 〔例７〕５ＤＥ（デキストロース当量）の噴霧乾燥され
たマルトデキストリン（Ｃ☆ＰＵＲ１９０４、バシルス
リチェニホルミス（Bacillus licheniformis) 熱安定な
α- アミラーゼを用いる液化によってコーンから得られ
るを、Ｇ９９８又は例３中に記載した様にＧ９９８から
得られ、生成されたα- アミラーゼを用いて糖化する。
製物中に酸に安定なα- アミラーゼの量を調整するため
に、次の方法を採用する：酵素の溶液をｐＨ２．５と
し、３７℃で３０分間インキュベートする。次いで冷却
し、中和してｐＨ４．８とする。次いでα- アミラーゼ
活性を測定する。 残存する相対ＡＡ活性を例１〜５の全ＡＡ活性と比較す
ると、残存する酸に安定なα- アミラーゼ活性は、例１
〜５の表中に示された値よりも高いことを示す。 〔例７〕５ＤＥ（デキストロース当量）の噴霧乾燥され
たマルトデキストリン（Ｃ☆ＰＵＲ１９０４、バシルス
リチェニホルミス（Bacillus licheniformis) 熱安定な
α- アミラーゼを用いる液化によってコーンから得られ
るを、Ｇ９９８又は例３中に記載した様にＧ９９８から
得られ、生成されたα- アミラーゼを用いて糖化する。
【００２９】糖化を６０℃で、ｐＨ４．５で及び３０ｇ
溶液１００ｇの基質濃度で行う。Ｇ９９８での糖化の場
合、Ｇ９９８の乾燥体０．１％を糖化混合物に加える。
精製されたα- アミラーゼを用いる糖化に対して、０．
１％ｄ．ｓ．Ｇ９９８中に存在するのと同一の当量のα
- アミラーゼを加える。 次の結果が得られる： 酵素 糖化時間 ＤＰ1(％） ＤＰ2(％） ＤＰ3(％） ＤＰ3(％） （時間） Ｇ９９８ ２３．２ ７６．２ １１．０ ０．６ １２．２ Ｇ９９８ ２８．０ ７８．３ ９．０ １．０ １１．７ Ｇ９９８ ４８．５ ８７．０ ４．８ １．０ ７．２ Ｇ９９８ ７２．４ ９１．４ ３．４ ０．７ ４．５ pur.ＡＡＡ* ２３．２ ２．４ ２６．９ ３１．２ ３９．５ pur.ＡＡＡ* ２８．０ ３．５ ３０．８ ３１．７ ３４．０ pur.ＡＡＡ* ４８．５ ５．３ ３９．９ ３０．４ ２４．４ pur.ＡＡＡ* ７２．４ ６．６ ４３．７ ２８．２ ２１．５* 例３によって得られた、精製された酸に安定なα- アミラーゼ。 この表から、精製されたα- アミラーゼがα- アミラー
ゼ及びグルコアミラーゼ活性の混合物である本来のＧ９
９８とは全体的に異なる生成物スペクトルを生じること
が明らかである。本発明の精製されたα- アミラーゼを
使用した場合、低量のグルコース（ＤＰ1)を含有するマ
ルトース（ＤＰ2)シロップを得ることができる。グルコ
ースの量は１０％以下である。 〔例８〕Ｇ９９８ ８９００ＡＡＵを湿潤イオン交換体
１０ｍｌと接触させる。混合物を１２時間環境温度で攪
拌し、次いで脱塩水で洗滌する。接合体を二重ジャケッ
トを備えた恒温性ガラスカラムに入れ、ｐＨ４．５とさ
れた４２ＤＥシロップを５０℃でこれに流れ通す。
溶液１００ｇの基質濃度で行う。Ｇ９９８での糖化の場
合、Ｇ９９８の乾燥体０．１％を糖化混合物に加える。
精製されたα- アミラーゼを用いる糖化に対して、０．
１％ｄ．ｓ．Ｇ９９８中に存在するのと同一の当量のα
- アミラーゼを加える。 次の結果が得られる： 酵素 糖化時間 ＤＰ1(％） ＤＰ2(％） ＤＰ3(％） ＤＰ3(％） （時間） Ｇ９９８ ２３．２ ７６．２ １１．０ ０．６ １２．２ Ｇ９９８ ２８．０ ７８．３ ９．０ １．０ １１．７ Ｇ９９８ ４８．５ ８７．０ ４．８ １．０ ７．２ Ｇ９９８ ７２．４ ９１．４ ３．４ ０．７ ４．５ pur.ＡＡＡ* ２３．２ ２．４ ２６．９ ３１．２ ３９．５ pur.ＡＡＡ* ２８．０ ３．５ ３０．８ ３１．７ ３４．０ pur.ＡＡＡ* ４８．５ ５．３ ３９．９ ３０．４ ２４．４ pur.ＡＡＡ* ７２．４ ６．６ ４３．７ ２８．２ ２１．５* 例３によって得られた、精製された酸に安定なα- アミラーゼ。 この表から、精製されたα- アミラーゼがα- アミラー
ゼ及びグルコアミラーゼ活性の混合物である本来のＧ９
９８とは全体的に異なる生成物スペクトルを生じること
が明らかである。本発明の精製されたα- アミラーゼを
使用した場合、低量のグルコース（ＤＰ1)を含有するマ
ルトース（ＤＰ2)シロップを得ることができる。グルコ
ースの量は１０％以下である。 〔例８〕Ｇ９９８ ８９００ＡＡＵを湿潤イオン交換体
１０ｍｌと接触させる。混合物を１２時間環境温度で攪
拌し、次いで脱塩水で洗滌する。接合体を二重ジャケッ
トを備えた恒温性ガラスカラムに入れ、ｐＨ４．５とさ
れた４２ＤＥシロップを５０℃でこれに流れ通す。
【００３０】６２ＤＥシロップを調製することが目的で
ある。次の結果が得られる： 接合体 流れ DP1(％）DP2(％）DP3(％）DP4(％）DPn （％）D.E.**** 速度*** (BV/h) 基質(42DE) 不適用 20.3 14.6 13.1 9.9 42.1 44.5 imm.G998* 2.2 91.6 8.7 3.4 2.3 3.9 89.4 imm.G998* 3.5 82.1 7.1 3.6 2.3 4.9 89.2 imm.G998* 5.1 80.7 6.7 3.8 2.4 6.4 88.0 imm.G998* 5.5 78.7 7.4 4.3 2.6 7.0 86.7 imm.pur.AA** 2.2 34.0 35.1 14.2 6.2 10.3 62.9 imm.pur.AA** 2.5 32.3 34.5 15.8 6.0 11.3 62.0 imm.pur.AA** 3.7 29.7 34.1 17.4 6.1 12.5 59.7 imm.pur.AA** 5.2 27.8 33.1 19.1 6.1 13.8 58.1* ：固定されたＧ９９８接合体** ：固定され、精製された酸に安定なα- アミラーゼ接合体（例３による精製さ れた）*** ：床容量／時間**** ：デキストロース当量 表から、Ｇ９９８から得られた固定化され、精製された
酸に安定なα- アミラーゼの作用パターンが固定化され
たＧ９９８によって得られた作用パターンと全体的に異
なっていることは全く明らかである。
ある。次の結果が得られる： 接合体 流れ DP1(％）DP2(％）DP3(％）DP4(％）DPn （％）D.E.**** 速度*** (BV/h) 基質(42DE) 不適用 20.3 14.6 13.1 9.9 42.1 44.5 imm.G998* 2.2 91.6 8.7 3.4 2.3 3.9 89.4 imm.G998* 3.5 82.1 7.1 3.6 2.3 4.9 89.2 imm.G998* 5.1 80.7 6.7 3.8 2.4 6.4 88.0 imm.G998* 5.5 78.7 7.4 4.3 2.6 7.0 86.7 imm.pur.AA** 2.2 34.0 35.1 14.2 6.2 10.3 62.9 imm.pur.AA** 2.5 32.3 34.5 15.8 6.0 11.3 62.0 imm.pur.AA** 3.7 29.7 34.1 17.4 6.1 12.5 59.7 imm.pur.AA** 5.2 27.8 33.1 19.1 6.1 13.8 58.1* ：固定されたＧ９９８接合体** ：固定され、精製された酸に安定なα- アミラーゼ接合体（例３による精製さ れた）*** ：床容量／時間**** ：デキストロース当量 表から、Ｇ９９８から得られた固定化され、精製された
酸に安定なα- アミラーゼの作用パターンが固定化され
たＧ９９８によって得られた作用パターンと全体的に異
なっていることは全く明らかである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:665） (72)発明者 エルス・デンドーフエン ベルギー国、1853 ストロムベーク− ベ フェル、イエット・デ・フレミンクストラ ート、７ (72)発明者 アン・アマンダ・ユレス・ハイレン ベルギー国、1800 フイルフオールデ、ニ ーウヴエ・ローレウエーク、66
Claims (8)
- 【請求項１】 次の工程： −酵素含有溶液のｐＨを１〜８の値に調整し、 −この溶液を、グルコアミラーゼを不活性化するのに十
分な温度に及び時間、加熱し、 −変性されたグルコアミラーゼを除去することを特徴と
する、真菌類から得られる、精製された、酸に安定なα
- アミラーゼを得る方法。 - 【請求項２】 溶液が醗酵ブロスである、請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】 加熱をカルシウムイオンの存在下に行
う、請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 溶液又は醗酵ブロスを４０〜８０℃、好
ましくは５０〜７５℃の温度に加熱する、請求項１又は
２記載の方法。 - 【請求項５】 真菌類がアスペルギルス属、好ましくは
アスペルギルスニガー(Aspergillus niger) 又はアスペ
ルギルスアワモリ(Aspergillus awamori) から選ばれた
種である、請求項１記載の方法。 - 【請求項６】 でんぷんの変換に、請求項１記載の方法
によって得られた、精製され、酸に安定なα- アミラー
ゼを使用する方法。 - 【請求項７】 １０％より少ない、好ましくは５％より
少ないグルコースを含有する高マルトースシロップ又は
高マルトトリオースシロップの調製に、請求項１記載
の、精製された、酸に安定なα- アミロースを使用する
方法。 - 【請求項８】 固定化された形で請求項１記載の方法に
よって得られた、精製された、酸に安定なα- アミラー
ゼを使用する方法。
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|---|---|---|---|
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| GBGB9703641.2A GB9703641D0 (en) | 1997-02-21 | 1997-02-21 | Purified acid stable alpha-amylase from fungal origin |
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|---|---|
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| JP (1) | JPH10271992A (ja) |
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| DK (1) | DK0860500T3 (ja) |
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| GB (1) | GB9703641D0 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| DK141785A (da) * | 1984-04-03 | 1985-10-04 | Novo Industri As | Fremgangsmaade til fremstilling af high conversion sirupper |
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-
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005046110A (ja) * | 2003-07-31 | 2005-02-24 | National Agriculture & Bio-Oriented Research Organization | β−アミラーゼの製造方法 |
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| EP0860500B1 (en) | 2004-09-01 |
| DE69825926T2 (de) | 2005-01-20 |
| PT860500E (pt) | 2005-01-31 |
| US5962276A (en) | 1999-10-05 |
| GB9703641D0 (en) | 1997-04-09 |
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| ATE275193T1 (de) | 2004-09-15 |
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