JPH10304879A - 新規チトクロームｐ４５０遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 花芽成長の初期に特異的に発現するチトクロ
ームＰ４５０をコードする遺伝子および該遺伝子の発現
を誘導するプロモーターを提供する。 【解決手段】 配列番号１の塩基配列番号１〜１４８８
または配列番号３の塩基配列番号１〜１６１７の塩基配
列によってコードされるアミノ酸配列をコードするチト
クロームＰ４５０遺伝子および配列番号２の塩基配列番
号１〜４５２または配列番号４の塩基配列番号１〜１０
４１中のプロモーター活性に必要な塩基配列からなるプ
ロモーター。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、植物由来の新しい
チトクロームＰ４５０遺伝子に関する。さらに、本発明
は、花芽形成の初期に働くチトクロームＰ４５０由来の
プロモーターに関する。

【０００２】

【従来の技術】花芽は高等植物が栄養成長から生殖成長
に変換する時期に形成され、この時期には植物の機能・
形態の変化に伴って多くの遺伝子が発現している。その
ため、花芽形成の初期に特異的に発現する遺伝子および
そのプロモーターを入手することは、植物の生殖成長の
メカニズムの解明、および生殖成長期の植物を遺伝子操
作する手段を得るために極めて有意義である。

【０００３】しかしながら、花芽形成に関する機構は未
だ十分解明されておらず、花芽形成に関与する遺伝子な
らびにその発現を誘導するプロモーターも殆ど知られて
いない。

【０００４】一方、高等植物においてチトクロームＰ４
５０は、１．フラボノイド、アルカロイドなどの二次代
謝、２．除草剤などの薬物代謝に関与する遺伝子として
知られており、二次代謝に関するチトクロームＰ４５０
の例としては、ケイ皮酸４水酸化酵素、フラボノイド−
３’，５’−水酸化酵素、ジャスモン酸生成酵素、サリ
チル酸生成酵素などのｃＤＮＡがクローニングされ、生
体防御、植物ホルモン、シグナル物質などの生合成・代
謝に係わっていることが知られている。また、チトクロ
ームＰ４５０遺伝子はスーパーファミリーと呼ばれる多
くの遺伝子群からなることが知られており、一つのファ
ミリー内でのアミノ酸配列の相同性は４０％以上である
ことも知られている（Nebert et al. DNA Cell Biol. 1
0, 1-14,1991）。しかしながら、花芽成長の初期に特異
的に発現するチトクロームＰ４５０の存在は、従来知ら
れていない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、花芽成長の
初期に特異的に発現するチトクロームＰ４５０、それを
コードする遺伝子および該遺伝子の発現を誘導するプロ
モーターを提供する。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、花芽形成
に関する機構の研究において、花芽成長の初期に特異的
に発現するチトクロームＰ４５０がいくつか存在するこ
とを、ペチュニアにおいて見い出した。

【０００７】本発明の遺伝子は、プライマー１（5'AAAG
AAACATTTCGAAAGCACCC）および／またはプライマー２
（5'AAATTCTTCGTCCAGCACCAAATGG）を用いてクローニン
グすることにより得られる花芽形成の初期に発現するチ
トクロームＰ４５０遺伝子である。本発明の遺伝子の１
例は、配列番号１の塩基配列番号１〜１４８８の塩基配
列によってコードされるアミノ酸配列をコードするチト
クロームＰ４５０遺伝子である。本発明の遺伝子の別の
例は、配列番号３の塩基配列番号１〜１６１７の塩基配
列によってコードされるアミノ酸配列をコードするチト
クロームＰ４５０遺伝子である。これらの配列は、公知
のチトクロームＰ４５０のアミノ酸配列との相同性が４
０％以下であること、公知のチトクロームＰ４５０遺伝
子の何れとも塩基配列が異なること、およびその発現の
部位および時期が特異的であることから、新しいファミ
リーに属する新規遺伝子である。

【０００８】本発明の遺伝子の取得は、本明細書の開示
にしたがって当業者によって容易に行うことができる。
遺伝子単離の材料としては、ペチュニアの葉または花芽
（成長初期のものが好ましい）等を使用する。例えば、
後記実施例の方法にしたがってまず、成長初期の花芽か
らｍＲＮＡを精製し、逆転写酵素を用いて一本鎖ｃＤＮ
Ａを調製する。既知のチトクロームＰ４５０（D. R. Ne
lson, Cytochrom P450, 2nd ed., p575-606, 1995）の
ヘム結合領域近傍のアミノ酸配列を元に、ＰＣＲ用プラ
イマーを合成する。一本鎖ｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲ
を行い、得られたＰＣＲ産物を無作為にシークエンスし
て、チトクロームＰ４５０の部分塩基配列を含むｃＤＮ
Ａクローン（例えば、後記実施例のＭ１５およびＫ４
０）を得る。さらに、このｃＤＮＡクローンをプローブ
としてノザン解析を行い、このクローンが含む遺伝子
は、花芽成長の初期段階に最も強く発現していることを
確認する。花芽成長の初期段階の組織からｍＲＮＡを精
製し、ｃＤＮＡライブラリーを作製する。このｃＤＮＡ
ライブラリーを、先に得られたチトクロームＰ４５０の
部分塩基配列を含むｃＤＮＡクローンでスクリーニング
することにより、完全長ｃＤＮＡクローン（例えば、後
記実施例のＩＭＴ−１およびＩＭＴ−２）を得ることが
できる。

【０００９】得られた遺伝子が、チトクロームＰ４５０
遺伝子であることを確認するには、その塩基配列を既知
のチトクロームＰ４５０遺伝子と比較し、その相同性を
調べることにより、または得られた遺伝子を適当な発現
ベクターおよび宿主、例えば酵母で発現させ、発現した
タンパク質を一酸化炭素存在下での還元型スペクトルで
測定することにより確認できる（大川秀郎、細胞工学，
6, 72-78, 1987）。

【００１０】また、遺伝子の機能やその遺伝子がコード
する酵素活性を調べるためには、１）遺伝子をアンチセ
ンス方向に転写されるようなバイナリーベクターを植物
に導入することによって、その遺伝子の発現を抑制し、
その植物体の表現型を調べる、２）遺伝子をセンス方向
に転写されるようなバイナリーベクターを植物に導入す
ることによって、その遺伝子を過剰に発現させ、その植
物体の表現型を調べる、と言った、いわゆるリバースジ
ェネティックの方法が広く用いられている。例えば、得
られたＩＭＴ−１遺伝子またはＩＭＴ−２遺伝子を３５
Ｓプロモーターなどの下流にアンチセンスあるいはセン
ス方向に結合したバイナリーベクターを作製し、ペチュ
ニアハイブリダ（サフィニアパープル（サントリー）な
ど）に導入すればよい。ペチュニアの形質転換は容易で
あり、広く行われている。

【００１１】また、別の方法としては、トランスポゾン
dTph1を含むペチュニアハイブリダを用いると、目的の
遺伝子（例えばＩＭＴ−１またはＩＭＴ−２）がトラン
スポゾンによって破壊された植物体を得ることができ、
その表現型からその遺伝子の機能やその遺伝子がコード
する酵素活性を知ることができる（Koesら, 4th Intern
ational Congress of Plant Molecular Biology, 要旨
集, 2071, 1994）。

【００１２】本発明の遺伝子が花芽形成の初期に特異的
に発現する機構は、現時点では十分に解明されていな
い。しかしながら、本発明のチトクロームＰ４５０遺伝
子に天然に付随するプロモーターが、花芽形成の初期に
特異的に発現を誘発する性質を有するのではないかと推
測される。

【００１３】したがって、本発明は上記チトクロームＰ
４５０遺伝子に天然に付随するプロモーターも提供す
る。このプロモーターは、配列番号２の塩基配列番号１
〜４５２または配列番号４の塩基配列番号１〜１０４１
中に含まれる。プロモーターとして必要最小限の領域
は、これより若干短いことは容易に理解されるであろ
う。また、プロモーターは、その塩基配列に、挿入、置
換、削除等の修飾を加えても実質的に同じプロモーター
活性を保持する場合がありうる。そのような修飾は、例
えば部位特異的変異形成法や適当な制限酵素消化で行う
ことが可能である。したがって、本発明は配列番号２の
塩基配列番号１〜４５２または配列番号４の塩基配列番
号１〜１０４１に、いくつかの挿入、置換、削除等の修
飾を加えたものも、プロモーター活性を保持している限
り包含する。

【００１４】本発明のプロモーターは、通常は上記チト
クロームＰ４５０遺伝子と共に単離される。例えば完全
長のチトクロームＰ４５０遺伝子を含むプラスミド（例
えばＩＭＴ−１またはＩＭＴ−２）の遺伝子調節に係わ
るプロモーター配列をｉｎｖｅｒｓｅ ＰＣＲ法により
クローニングして得ることができる。

【００１５】ここで得られたチトクロームＰ４５０遺伝
子は新しいファミリーに属することがわかった。本発明
により、花芽成長の機構を明らかにすると共に、クロー
ン化した遺伝子ならびにそのプロモーターを開花の制御
に応用することが可能となる。

【００１６】即ち、本発明の遺伝子は、花芽形成の初期
に特異的に発現することから、花の観賞を目的とする植
物に遺伝子操作により導入して、開花時期、花の形状等
に種々の影響を与えることが期待できる。遺伝子の導入
は、好ましくは本発明のプロモーターと機能的に結合さ
れた状態で行うが、必要に応じて、他のプロモーターを
用いたり、発現をコントロールするための他の要素も併
せて用いることも可能である。観賞植物の例として、バ
ラ、キク、カーネーション、ガーベラ、ペチュニア、ト
レニア、バーベナなどが挙げられる。本発明の遺伝子は
さらに、穀物、果実等の栽培植物の開花に影響を及ぼし
て、作物の収穫量、時期等に好ましい影響を与えるため
使用することも期待できる。そのような植物の例とし
て、イネ、コムギ、オオムギ、トマト、リンゴなどが挙
げられる。

【００１７】本発明のプロモーターは、所望の遺伝子と
機能的に結合した状態で植物に導入し、花芽形成の初期
に時期特異的に発現させることが可能であると思われ
る。こうして、例えば、花の色、大きさ、形状、開花時
期、開花阻止等に影響を与えるため、種々の遺伝子と組
み合わせて、上記同様の観賞植物、栽培植物等に導入す
ることが可能である。

【００１８】遺伝子を植物に導入するには、例えばアグ
ロバクテリウム ツメファシエンスを用いる常法で植物
細胞を形質転換することにより行うことができる。遺伝
子が導入された植物細胞の選択は、形質転換に際して適
当なマーカーを用いて行うことができる。目的の遺伝子
が導入されたことを確認した細胞は、植物体に再生でき
る。導入された遺伝子の形質を安定に維持する植物系統
の選別方法も既に広く知られている。これらの技術に関
しては、例えばS. C. Deroles, et al, Biotechnology
of Ornamental Plants, p87-119, 1997 を参照された
い。

【００１９】ペチュニア以外の植物にも、本発明のチト
クロームＰ４５０と同様に花芽の形成初期に発現する
が、そのアミノ酸配列または遺伝子配列が僅かに異なる
チトクロームＰ４５０が存在する可能性がある。そのよ
うなチトクロームＰ４５０の遺伝子は、上記方法により
植物から単離することもできるが、より簡単には、それ
ぞれの植物の花芽から抽出したｍＲＮＡからｃＤＮＡラ
イブラリーを作製し、配列番号１の塩基配列番号１〜１
４８８の塩基配列またはそれから適宜選択した少なくと
も１０〜１５塩基からなる部分配列をプローブとして用
い、常法によりスクリーニングして単離できる。したが
って、本発明の遺伝子およびプロモーターには、配列番
号１の塩基配列番号１〜１４８８の塩基配列、配列番号
３の１〜１６１７の塩基配列またはそれらから適宜選択
した少なくとも１０〜１５塩基からなる部分配列とハイ
ブリダイズし、植物において花芽の形成初期に発現する
チトクロームＰ４５０をコードする遺伝子およびそのプ
ロモーターも包含される。このようなハイブリダイゼー
ションは、例えば６×ＳＳＣ，５０℃の洗浄条件を含む
ストリンジェンシー条件下で行うことができる。

【００２０】本発明はさらに、配列番号１のアミノ酸配
列番号１〜４９６のアミノ酸配列を有するチトクローム
Ｐ４５０にも関する。このタンパク質は、ペチュニアそ
の他の植物の形成初期の花芽から抽出することも可能で
あり、本発明の遺伝子を適当な発現ベクターにつなぎ、
大腸菌等の適当な宿主に形質転換して培養し、その菌体
または抽出液から精製することもできる。精製したタン
パク質は、花芽の形成、花の形態調節等に使用できる。

【００２１】以下の実施例によりさらに具体的に説明す
るが、これらの実施例は発明の範囲を制限するものでは
ない。

【００２２】

【実施例】

実施例１ ｍＲＮＡの精製 Petunia hybrida Vilm（サカタのタネ）の種子をバーミ
キュライトにまき、25℃、12時間明所・12時間暗所の条
件で発芽・生育させた。100日後、花芽の成長段階を５
段階に分けて（図１参照）サンプリングした。各段階の
花芽０．１ｇからｍＲＮＡを精製した。ｍＲＮＡの精製
には、QuickPrep MicroｍＲＮＡ精製キット（ファルマ
シア（株）製）を用い、製造者の推奨する方法によって
行った。

【００２３】実施例２ 一本鎖ｃＤＮＡの合成 実施例１で得られた花芽の各段階のｍＲＮＡ約１００ｎ
ｇを鋳型として、一本鎖ｃＤＮＡを合成した。一本鎖ｃ
ＤＮＡの合成にはFirst-Strand ｃＤＮＡ合成キット
（ファルマシア（株）製）を用い、製造者の推奨する方
法に従って行った。

【００２４】実施例３ ＰＣＲ用プライマーの合成とＰ
ＣＲ反応 まず、ＰＣＲ用のプライマーとして、プライマー１とプ
ライマー２を合成した。後のクローニングのために、各
プライマーには制限酵素認識部位を付加した。制限酵素
認識部位は下線で示している。なお、制限酵素認識部位
はここに示すものに限らず、必要に応じて適当なものを
用いることが可能である。 プライマー１’；5'ATGAATTCAAAGAAACATTTCGAAAGCACCC EcoRI プライマー２’；5'ATAAGCTTAAATTCTTCGTCCAGCACCAAATGG HindIII

【００２５】次に、ＰＣＲ反応を行った。反応は50μｌ
の反応液中で行い、この反応液は実施例２で得られた鋳
型一本鎖ｃＤＮＡ（段階１から５を混合したもの）０．
１４ｐｇ／ｍｌ、プライマー１’１０ｐｍｏｌ、プライ
マー２’１０ｐｍｏｌ、ｄＮＴＰ ０．０４ｍＭ、塩化
マグネシウム２．５ｍＭ 、ＰＣＲ用緩衝液（東洋紡
（株）製）、TaqDNA ポリメラーゼ（東洋紡（株）製）
０．１ｕｎｉｔ／μｌを含んでいる。

【００２６】反応条件は、９４℃で５分保持した後、９
４℃１分、４０℃１分、７２℃３分のサイクルを３０回
繰り返し、その後４℃で保持した。

【００２７】得られたＰＣＲ産物を２％のアガロースゲ
ル電気泳動で分離した後、約２５０ｂｐのＤＮＡ断片を
回収し、EcoRIとHindIIIで切断後、pBluescript SK(+)
(ストラタジーン社製）のEcoRI、HindIII部位にクロー
ニングし、大腸菌ＪＭ１０９に導入した。

【００２８】実施例４ ＰＣＲ産物の解析 実施例３で作製した大腸菌ＪＭ１０９を形質転換して得
たコロニーから無作為に４０個を抽出しそれぞれ培養し
た。各培養液からプラスミドＤＮＡを精製し、無作為に
ＤＮＡ塩基配列を決定した結果、チトクロームＰ４５０
のｃＤＮＡの部分配列を持つクローン（Ｍ１５）を得
た。

【００２９】実施例５ ノザン法によるＭ１５の遺伝子
発現の解析 Ｍ１５クローンのEcoRI-HindIIIフラグメントをＰ³²標
識したＤＮＡプローブを用い、花芽形成の各段階（図
１）におけるＭ１５の遺伝子発現を調べた。解析には、
０．３μｇのｍＲＮＡを用いた。結果を図２に示す。図
２より、ステージ１で最も強く発現することがわかっ
た。

【００３０】実施例６ 花芽で発現するチトクロームＰ
４５０のｃＤＮＡクローニング 花芽成長のステージ１で発現するｍＲＮＡをもとにｃＤ
ＮＡライブラリーを作製した。ライブラリー作製はZAP-
cDNA合成キット（ストラタジーン社製）を用いて、製造
者が推奨する方法に従って行った。また、パッケージン
グには、同社のGigapack II Plus を用いた。

【００３１】Ｍ１５クローンのEcoRI-HindIII断片のＰ
³²標識断片をプローブとして約３０万個のｃＤＮＡクロ
ーンをスクリーニングした結果、７個のポジティブクロ
ーンを得た。そのうち挿入断片が最も長いものを選び
（以下ＩＭＴ−１と記す）、ｃＤＮＡの塩基配列を解析
した結果、完全長の新規チトクロームＰ４５０（配列番
号：１）をコードするｃＤＮＡを得た。このチトクロー
ムＰ４５０のアミノ酸配列はペチュニアのフラボノイド
−３’，５’−水酸化酵素のアミノ酸配列（Holtonら、
Nature, 366, 276-279, 1993)と比べ、３７％の相同性
を示した。

【００３２】実施例７ ｉｎｖｅｒｓｅ ＰＣＲ（ＩＰ
ＣＲ）用鋳型ゲノムＤＮＡの調製 ペチュニアの葉０．５ｇを用いて、ISOPLANT（ニッポン
ジーン社製）を用いて染色体ＤＮＡを調製した。この染
色体ＤＮＡ１μｇをHincIIで完全に消化した後、Ｔ４Ｄ
ＮＡライゲースを用いてセルフライゲーション反応を行
い、ＩＰＣＲ用鋳型ゲノムＤＮＡとした。

【００３３】実施例８ ｉｎｖｅｒｓｅ ＰＣＲ（ＩＰ
ＣＲ） まず、ＩＰＣＲ用プライマーを４種合成した。 Ａプライマー；5' - AACTAAAATCAAGACAAGTAGTAATCCACC - 3' Ｂプライマー；5' - GTTGCTTATTGCTAGGTAACGAATACTTG - 3' Ｃプライマー；5' - ACTCCCCTGCCCTTAATTGGTAATTTACAT - 3' Ｄプライマー；5' - AACACTCTTGGTGCTCAACCCCATCAGTCC - 3' 各プライマーの位置は、いずれもＩＭＴ−１の５’端近
傍である。

【００３４】次に、ＰＣＲによる増幅を２回行った。１
回目のＰＣＲ反応は、50μｌの反応液中で行った。な
お、この反応液は、実施例７で得られたＩＰＣＲ用鋳型
ゲノムＤＮＡ１０ｎｇ／μｌ、Ｂプライマー １０ｐｍ
ｏｌ、Ｃプライマー１０ｐｍｏｌ、ｄＮＴＰ０．０４ｍ
Ｍ 、 塩化マグネシウム ２．５ｍＭ、ＰＣＲ用緩衝液
（東洋紡（株）製）、TaqDNA ポリメラーゼ（東洋紡
（株）製）０．１ｕｎｉｔ／μｌを含んでいる。反応条
件は９４℃で５分保持した後、９４℃１分、５５℃２
分、７２℃３分のサイクルを３０回繰り返し、その後４
℃で保持した。

【００３５】２回目のＰＣＲ反応は、50μｌの反応液中
で行った。なお、この反応液は１回目のＩＰＣＲ産物
０．１ｎｇ／μｌ、Ａプライマー １０ｐｍｏｌ、Ｄプ
ライマー１０ｐｍｏｌ、ｄＮＴＰ０．０４ｍＭ、塩化マ
グネシウム ２．５ｍＭ、ＰＣＲ用緩衝液（東洋紡
（株）製）、TaqDNA ポリメラーゼ（東洋紡（株）製）
０．１ｕｎｉｔ／μｌを含んでいる。反応条件は９４℃
で５分保持した後、９４℃１分、５５℃２分、 ７２℃
３分のサイクルを３０回繰り返し、その後４℃で保持し
た。

【００３６】実施例９ ＩＰＣＲ産物のクローニングと
ＤＮＡ塩基配列の決定 ２回目のＩＰＣＲ産物を０．７％アガロースゲルで分離
し、特異的に増幅した１．２ｋｂのＤＮＡ産物をpTBlue
T-Vector（Novagen社製）にクローニングした。このプ
ラスミドを用いて大腸菌ＪＭ１０９を形質転換した。独
立した７つのクローンを培養し、ＤＮＡ塩基配列を決定
した結果、ＩＭＴ−１のプロモーター領域の配列を得
た。ＩＭＴ−１のプロモーター領域の遺伝子配列を配列
表・配列番号２に示す。

【００３７】実施例１０ ＰＣＲ反応及びＰＣＲ産物の
解析 実施例３で得られたＰＣＲ産物をもとにさらにＰＣＲを
行った。ＰＣＲ産物を１ng、プライマー２’とプライマ
ー３をそれぞれ70pmol使用し、0.2mM dNTP、2.5mM MgCl
₂、ＰＣＲ用緩衝液（東洋紡績社製）、ｒＴａｑＤＮＡ
ポリメラーゼ０．１ u/mlを含む５０μｌの反応液中で
反応を行った。反応は、９４℃で３分間保持した後、９
４℃３０秒、５０℃３０秒、７２℃４５秒を１サイクル
とし、４０サイクル繰り返した後４℃に冷却した。

【００３８】なお、プライマー３の配列を以下に示す。

【００３９】得られたＰＣＲ産物を２％のアガロース電
気泳動で分離した後、約２００ｂｐのＤＮＡ断片を回収
し、pBluescriptSK+プラスミドベクターのXhoI, HindII
Iサイトにクローニングし、大腸菌ＪＭ１０９に導入し
た。

【００４０】得られた形質転換コロニーから無作為に２
２クローンを選択し、これらのプラスミドを抽出し、塩
基配列を決定した。その結果、チトクロームＰ４５０の
ｃＤＮＡの塩基配列を持つクローン（Ｋ４０）を得た。

【００４１】実施例１１ ノザン法によるＫ４０の遺伝
子発現の解析 Ｋ４０クローンのXhoI-HindIIIフラグメントをＰ³²標識
したＤＮＡプローブを用い、花芽形成の各段階（図１）
におけるＫ４０の遺伝子発現を調べた。解析には、０．
５μｇのｍＲＮＡを用いた。結果を図３に示す。図３よ
り、ステージ２で最も強く発現することがわかった。

【００４２】実施例１２ 花芽で発現するチトクローム
Ｐ４５０のｃＤＮＡクローニング 花芽成長のステージ２で発現するｍＲＮＡをもとにｃＤ
ＮＡライブラリーを作製した。ライブラリー作製はZAP-
cDNA合成キット（ストラタジーン社）を用いて、製造者
が推奨する方法に依った。パッケージングには、同社の
Gigapack II Plus を用いた。

【００４３】Ｋ４０クローンのXhoII-HindIII断片のＰ
³²標識断片をプローブとして約５０万個のｃＤＮＡクロ
ーンをスクリーニングした結果、９３個のポジティブク
ローンを得た。そのうち挿入断片が最も長いものを選
び、ｃＤＮＡの塩基配列を解析した結果、完全長の新規
チトクロームＰ４５０（ＩＭＴ−２）をコードするｃＤ
ＮＡを得た（配列番号：３）。このチロクロームＰ４５
０のアミノ酸配列は、アボカド由来のチトクロームＰ４
５０の一分子種であるＣＹＰ７１Ａ１と３９％の相同性
を示した。

【００４４】実施例１３ ＩＰＣＲ用鋳型ゲノムＤＮＡ
の調製 ペチュニアの葉０．５ｇを用いて、ISOPLANT（ニッポン
ジーン社）を用いて染色体ＤＮＡを調製した。この１μ
ｇをXbaIで完全に消化した後、T4DNAライゲースを用い
てセルフライゲーション反応を行い、ＩＰＣＲ用鋳型ゲ
ノムＤＮＡとした。

【００４５】実施例１４ ＩＰＣＲ ＩＭＴ−２のプロモーターを取得するために４種のプラ
イマーを合成した。 Ｅプライマー； 5' AAACAAAGATTGGAGCATAATCGACC 3' Ｆプライマー； 5' TAGTTCATTTTTCATTCATCGAGAGG 3' Ｇプライマー； 5' TATACGCGAAATAGGACTAGAAGATAATTGG 3' Ｈプライマー； 5' AAACAGAAAATCAATCGACTCCCTCCTGG 3' 各プライマーの位置は、いずれもＩＭＴ−２の５’端近
傍である。

【００４６】次に、ＰＣＲによる増幅を２回行った。１
回目のＰＣＲ反応は、５０μｌの反応液中で行い、この
反応液はＩＰＣＲ用鋳型ゲノムＤＮＡ10 ng/μl、Ｅプ
ライマー50pmol、Ｆプライマー50pmol、dNTP 0.2mM、塩
化マグネシウム 2.5mM、ＰＣＲ用緩衝液（ベーリンガー
マンハイム社 エクスパンドハイフィデリティーPCRシ
ステム）、酵素ミックス（ベーリンガーマンハイム社
エクスパンドハイフィデリティーPCRシステム）0.04uni
t/μlを含んでいる。反応条件は９４℃で５分保持した
後、９４℃１分、６０℃１分、７２℃３分を１サイクル
とし、３０サイクル繰り返し、その後４℃で保持した。

【００４７】２回目のＰＣＲ反応は、５０μｌの反応液
中で行い、この反応液は１回目のＩＰＣＲ産物0.2 ng/
μl、Gプライマー50pmol、Hプライマー50pmol、dNTP 0.
2mM、塩化マグネシウム 2.5mM、ＰＣＲ用緩衝液（ベー
リンガーマンハイム社 エクスパンドハイフィデリティ
ーPCRシステム）、酵素ミックス（ベーリンガーマンハ
イム社 エクスパンドハイフィデリティーPCRシステ
ム） 0.04 unit/μlを含んでいる。反応条件は９４℃で
５分保持した後、９４℃１分、６０℃１分、７２℃３分
を１サイクルとし、３０サイクル繰り返し、その後４℃
で保持した。

【００４８】実施例１５ ＩＰＣＲ産物のクローニング
とＤＮＡ塩基配列の決定 ２回目のＩＰＣＲ産物を０．７％アガロースゲルで分離
し、特異的に増幅した1.7kbのＤＮＡ産物をpT7Blue T-V
ector（Novagen社）にクローニングした。このプラスミ
ドを用いて大腸菌JM109を形質転換した。独立したクロ
ーンを培養し、ＤＮＡ塩基配列を決定した結果、ＩＭＴ
−２のプロモーター領域の配列を得た。ＩＭＴ−２のプ
ロモーター領域の遺伝子配列を配列番号４に示す。

【００４９】

【発明の効果】本発明は、新規なチトクロームＰ４５０
遺伝子ならびにそのプロモーターを提供する。さらに、
本発明によって、チトクロームＰ４５０遺伝子ならびに
そのプロモーターを用いて、植物の開花の制御に応用す
ることが可能になった。

【００５０】

【配列表】

【００５１】配列番号：１ 配列の長さ：１７２２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 ATG AAT TAT GTA GCA ATT GTA GGT GGA TTA CTA CTT GTC TTG ATT TTA 48 Met Asn Tyr Val Ala Ile Val Gly Gly Leu Leu Leu Val Leu Ile Leu 1 5 10 15 GTT CAA AGT ATT CGT TAC CTA GCA ATA AGC AAC AAA TGT CAC AAA AAG 96 Val Gln Ser Ile Arg Tyr Leu Ala Ile Ser Asn Lys Cys His Lys Lys 20 25 30 CTT CCA CCA GGA CCA ACT CCC CTG CCC TTA ATT GGT AAT TTA CAT AAC 144 Leu Pro Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Leu Ile Gly Asn Leu His Asn 35 40 45 ACT CTT GGT GCT CAA CCC CAT CAG TCC CTT GCG AAA CTT GCC AAA AAA 192 Thr Leu Gly Ala Gln Pro His Gln Ser Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys 50 55 60 TAT GGT CCA ATT ATT AGC CTC AGG TTG GGC CAA ATT ACG ACA GTG GTT 240 Tyr Gly Pro Ile Ile Ser Leu Arg Leu Gly Gln Ile Thr Thr Val Val 65 70 75 80 ATA TCT TCA CCA ACA ATG GCT AAA GAA GTC TTA CAA AAA CAA GAT TTA 288 Ile Ser Ser Pro Thr Met Ala Lys Glu Val Leu Gln Lys Gln Asp Leu 85 90 95 GCC TTC TCC AGT AGA ACA ATT CCA AAT GCA CTC CAT GCT CAT AAT CAT 336 Ala Phe Ser Ser Arg Thr Ile Pro Asn Ala Leu His Ala His Asn His 100 105 110 TAT CAA TAC TCT GTT GTA TGG CTA CCA GTT GCT GCT AGA TGG AGA AGC 384 Tyr Gln Tyr Ser Val Val Trp Leu Pro Val Ala Ala Arg Trp Arg Ser 115 120 125 CTT CGG AAA ATC TTG AAT TCT AAT ATT TTC TCT AGC AAC AGG CTT GAT 432 Leu Arg Lys Ile Leu Asn Ser Asn Ile Phe Ser Ser Asn Arg Leu Asp 130 135 140 GCA AAT CAG CAT CTC AGG TCC CGA AAG ATA CAA GAG TTT ATT GAT TAT 480 Ala Asn Gln His Leu Arg Ser Arg Lys Ile Gln Glu Phe Ile Asp Tyr 145 150 155 160 TGC CGA AAG TGT AGC CAA ACA GGG GAG GCA GTG AAT ATA GGC CAA GCT 528 Cys Arg Lys Cys Ser Gln Thr Gly Glu Ala Val Asn Ile Gly Gln Ala 165 170 175 GCT TTT GAG ACC TCT ATT AAT TTA CTT TCC AAT ACT ATT TTC TCC AAG 576 Ala Phe Glu Thr Ser Ile Asn Leu Leu Ser Asn Thr Ile Phe Ser Lys 180 185 190 GAT GTA GTC CAC CCT TAT GCA AAT TCA GAA TTC AAG GAT GTT GTT TGG 624 Asp Val Val His Pro Tyr Ala Asn Ser Glu Phe Lys Asp Val Val Trp 195 200 205 AAA ATC ATG GAA GAA GCT GGT AAG CCA AAC TTG GCT GAT TAT TAC CCA 672 Lys Ile Met Glu Glu Ala Gly Lys Pro Asn Leu Ala Asp Tyr Tyr Pro 210 215 220 ATC TTG GGA AAG ATT GAT CCT CAA GGG ATA AGG CGA CGC GTA GGC AAG 720 Ile Leu Gly Lys Ile Asp Pro Gln Gly Ile Arg Arg Arg Val Gly Lys 225 230 235 240 TGT TTT GGT AAG TTG CTT CAG CAG ATT GAG GGA TTG ATT GAT CAA CGT 768 Cys Phe Gly Lys Leu Leu Gln Gln Ile Glu Gly Leu Ile Asp Gln Arg 245 250 255 TTG CAG CAA AGG AAG AAA TTG CAA ACT GGC GAT AGT GCT GAT GTT CTT 816 Leu Gln Gln Arg Lys Lys Leu Gln Thr Gly Asp Ser Ala Asp Val Leu 260 265 270 GAT GTT TTG TTA GAT ACT AGC CAA GAA GAT CCA CAT GCA ATT GAT AGA 864 Asp Val Leu Leu Asp Thr Ser Gln Glu Asp Pro His Ala Ile Asp Arg 275 280 285 AAT CAT ATA GAG CGC TTG TGC ATG GAC CTT TTT ATT GCG GGG ACT GAT 912 Asn His Ile Glu Arg Leu Cys Met Asp Leu Phe Ile Ala Gly Thr Asp 290 295 300 ACA AGT TCA AAT ACA TTA GAA TGG GCA ATG GTT GAG ACC ATG AGG AAA 960 Thr Ser Ser Asn Thr Leu Glu Trp Ala Met Val Glu Thr Met Arg Lys 305 310 315 320 CCA TAC ATA ATG AAA AAA GCT AAA AAC GAG CTA GCA GAA GTT ATT GGC 1008 Pro Tyr Ile Met Lys Lys Ala Lys Asn Glu Leu Ala Glu Val Ile Gly 325 330 335 AAA GGC AGC GTA ATA GAA GAA GCT GAT ATT GGA CGT CTC CCT TAT TTG 1056 Lys Gly Ser Val Ile Glu Glu Ala Asp Ile Gly Arg Leu Pro Tyr Leu 340 345 350 CAG TGC ATT GTT AAA GAA ACC TTA AGA ATA CAC CCA CCA GGT CCC TTT 1104 Gln Cys Ile Val Lys Glu Thr Leu Arg Ile His Pro Pro Gly Pro Phe 355 360 365 TTA ATT CGC AAG GTT GAT CAA GAC GTT GAG GCG TGT GGC TAT TTT GTT 1152 Leu Ile Arg Lys Val Asp Gln Asp Val Glu Ala Cys Gly Tyr Phe Val 370 375 380 CCA AAA GAC TCT CAA GTG TTG GTG CAT ATA TGG TCA ATA GGC CGC GAC 1200 Pro Lys Asp Ser Gln Val Leu Val His Ile Trp Ser Ile Gly Arg Asp 385 390 395 400 CCA ACT ATA TGG GAG GAT CCT TTG GTA TTT AAG CCC GAA AGA TTT TGG 1248 Pro Thr Ile Trp Glu Asp Pro Leu Val Phe Lys Pro Glu Arg Phe Trp 405 410 415 GGT ACA AAA ATG GAC GTT CGT GGA CAA GAT TTT GAA CTC ATT CCA TTT 1296 Gly Thr Lys Met Asp Val Arg Gly Gln Asp Phe Glu Leu Ile Pro Phe 420 425 430 GGT GCC GGA CGA AGA ATT TGC CCG GGA TTA CCT TTG GCA ACC AGG ACA 1344 Gly Ala Gly Arg Arg Ile Cys Pro Gly Leu Pro Leu Ala Thr Arg Thr 435 440 445 TTA ACT GCA ATG TTG GGT TCA TTG TTG AAT TCA TTT GAT TGG AAA GTT 1392 Leu Thr Ala Met Leu Gly Ser Leu Leu Asn Ser Phe Asp Trp Lys Val 450 455 460 GAA GGC CAT ATT GAA CCA GAA GAT TTG GAT GTG GAA GAA AAG TTT GGC 1440 Glu Gly His Ile Glu Pro Glu Asp Leu Asp Val Glu Glu Lys Phe Gly 465 470 475 480 ATT ACC CTG GCG AGA TCA CGT TCT TTA CGA GCT GTA CCT ATT CCG CTA 1488 Ile Thr Leu Ala Arg Ser Arg Ser Leu Arg Ala Val Pro Ile Pro Leu 485 490 495 TAAATATCCT CACCCAGATT CGCCATATAC ATTATTGTTG ACAAGATAAC ACCGAAAACT 1548 GAAGTATTGG GCGTCTTGAT CTTATAACTT TGTCATGAAT AATAGTGTTC CACATGTTAT 1608 AGTATATATT TATATTATGA TTTGTTACCA TAATAGTAAA GGTATTATTG TCCTTTGCAT 1668 ATATTATAAA TAAATGTCAG GAGTTCATAG TTATCAAAAA AAAAAAAAAA AAAA 1722

【００５２】配列番号：２ 配列の長さ：４５２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 TTAACCTTAA CGTACACCGG GCCCTCAGCT AGGGGGGGAA AAAAATTTAT TAGGAATTTG 60 TAGCTCTCCC AATTAAAAAA AAAATTGTTG TTTCCAAAAT ACTTTTTATT TTGACCAAAC 120 TCTCCAAATT TCCTTAAAAG TGTTTTTCTC AAAGAAAAAA AAAATCCTTA GGTTCGGCAA 180 AAATTTGGCC AAATAGGCCA TTAGTGAGAC TAACCAAATT AAAGACCAAG TTGCAAAAAT 240 AGGCCTGGAA CTCACCGATC CCTCTTTTGT CATCAATTGT TATTATGTAA TACCATACAA 300 GACTTATTAG GACCTACCGG CTAAGTTCAC TAGACTTGAT CCAAGAATTA GGTGCACTAT 360 TAATTTCTTT TCCGCCTGTG TACTATTAAT TTTAAATCAG TATTTATATC CCTGCCTCAT 420 GGCTTGTTCA ACTAGGAAGA AAGAAGTAAA CA 452

【００５３】配列番号：３ 配列の長さ：１７６１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列： ATG ATT GAC TTT ACC AAT TAT CTT CTA GTC CTA TTT CGC GTA TAT ATC 48 Met Ile Asp Phe Thr Asn Tyr Leu Leu Val Leu Phe Arg Val Tyr Ile 1 5 10 15 TTT TAT TTG GTC GAT TAT GCT CCA ATC TTT GTT TGC GTA TAT CTT GTT 96 Phe Tyr Leu Val Asp Tyr Ala Pro Ile Phe Val Cys Val Tyr Leu Val 20 25 30 TCC AAG CTA GTT CAT TTT TCA TTC ATC GAG AGG TCC AAA CAG AAA ATC 144 Ser Lys Leu Val His Phe Ser Phe Ile Glu Arg Ser Lys Gln Lys Ile 35 40 45 AAT CGA CTC CCT CCT GGT CCA AAA CAG TGG CCT ATT GTT GGC AAC CTT 192 Asn Arg Leu Pro Pro Gly Pro Lys Gln Trp Pro Ile Val Gly Asn Leu 50 55 60 TTT CAA TTA GGG CAA TTG CCT CAC AGA GAC ATG GCT TCA TTT TGT GAT 240 Phe Gln Leu Gly Gln Leu Pro His Arg Asp Met Ala Ser Phe Cys Asp 65 70 75 80 AAA TAT GGA CCA TTG GTC TAC CTC CGA CTA GGT AAT GTT GAT GCT ATA 288 Lys Tyr Gly Pro Leu Val Tyr Leu Arg Leu Gly Asn Val Asp Ala Ile 85 90 95 ACA ACA AAT GAT CCC GAA ATC ATA AGG GAA ATA CTT GTA CAA CAA GAC 336 Thr Thr Asn Asp Pro Glu Ile Ile Arg Glu Ile Leu Val Gln Gln Asp 100 105 110 GAT ATT TTT GCG TCT AGA CCC AGG ACT CTT GCT GCC ATA CAT CTA GCT 384 Asp Ile Phe Ala Ser Arg Pro Arg Thr Leu Ala Ala Ile His Leu Ala 115 120 125 TAT GGT TGT GGA GAT GTA GCA TTG GCT CCC TTA GGA CCA AAA TGG AAG 432 Tyr Gly Cys Gly Asp Val Ala Leu Ala Pro Leu Gly Pro Lys Trp Lys 130 135 140 AGA ATG AGA AGA ATA TGT ATG GAA CAT TTG TTG ACA ACT AAA AGG CTC 480 Arg Met Arg Arg Ile Cys Met Glu His Leu Leu Thr Thr Lys Arg Leu 145 150 155 160 GAG TCC TTT GGA AAG CAT CGG GCA GAT GAA GCC CAA AGC CTA GTT GAA 528 Glu Ser Phe Gly Lys His Arg Ala Asp Glu Ala Gln Ser Leu Val Glu 165 170 175 GAT GTA TGG GCC AAG ACA CAA AAA GGA GAG ACA GTG AAC TTA AGG GAT 576 Asp Val Trp Ala Lys Thr Gln Lys Gly Glu Thr Val Asn Leu Arg Asp 180 185 190 TTA TTA GGG GCT TTT TCA ATG AAC AAT GTA ACT AGG ATG TTG TTG GGA 624 Leu Leu Gly Ala Phe Ser Met Asn Asn Val Thr Arg Met Leu Leu Gly 195 200 205 AAG CAA TTC TTT GGG GCA GAG TCA GCA GGG CCA CAA GAA GCA ATG GAA 672 Lys Gln Phe Phe Gly Ala Glu Ser Ala Gly Pro Gln Glu Ala Met Glu 210 215 220 TTT ATG CAC ATA ACT CAT GAG TTA TTT TGG CTT CTT GGA GTG ATT TAT 720 Phe Met His Ile Thr His Glu Leu Phe Trp Leu Leu Gly Val Ile Tyr 225 230 235 240 CTG GGT GAC TAT TTA CCT TTA TGG AGG TGG ATT GAC CCT CAT GGT TGT 768 Leu Gly Asp Tyr Leu Pro Leu Trp Arg Trp Ile Asp Pro His Gly Cys 245 250 255 GAG AAG AAA ATG AGG GAA GTG GAG AAA AGG GTT GAT GAT TTT CAC ATG 816 Glu Lys Lys Met Arg Glu Val Glu Lys Arg Val Asp Asp Phe His Met 260 265 270 AGA ATT ATT GAA GAA CAT AGA AAG AAC GGA AAA AAT GTT GAT GAA GGT 864 Arg Ile Ile Glu Glu His Arg Lys Asn Gly Lys Asn Val Asp Glu Gly 275 280 285 GAA ATG GAC TTT GTT GAT GTT TTA TTG TCT TTG CCA GGT GAA GAT GAA 912 Glu Met Asp Phe Val Asp Val Leu Leu Ser Leu Pro Gly Glu Asp Glu 290 295 300 GGA GAT GGG AAT GGA AAA CAA CAC ATG GAT GAC ACA GAG ATA AAA GCT 960 Gly Asp Gly Asn Gly Lys Gln His Met Asp Asp Thr Glu Ile Lys Ala 305 310 315 320 CTA ATT CAG GAT ATG ATA GCT GCA GCC ACG GAT ACA TCT GCT GTC ACC 1008 Leu Ile Gln Asp Met Ile Ala Ala Ala Thr Asp Thr Ser Ala Val Thr 325 330 335 AAC GAA TGG CCA ATG GCT GAG GTG ATA AAG CAT CCA AAT GTC CTC AAG 1056 Asn Glu Trp Pro Met Ala Glu Val Ile Lys His Pro Asn Val Leu Lys 340 345 350 AAG ATC CAA GAA GAA CTT GAT ATT GTT GTT GGA TCG GAC CGT ATG GTA 1104 Lys Ile Gln Glu Glu Leu Asp Ile Val Val Gly Ser Asp Arg Met Val 355 360 365 ACC GAA TCC GAC TTG GTT CAT CTC AAG TAC CTT CGT TGT GTA GTA CGT 1152 Thr Glu Ser Asp Leu Val His Leu Lys Tyr Leu Arg Cys Val Val Arg 370 375 380 GAA ACA TTT CGA ATG CAC CCT GCT GGT CCA TTT CTA ATT CCA CAT GAA 1200 Glu Thr Phe Arg Met His Pro Ala Gly Pro Phe Leu Ile Pro His Glu 385 390 395 400 TCA ATT CGA GAT ACT AAG ATC AAC GGC TAT TAT ATC CCA GCA AAG ACA 1248 Ser Ile Arg Asp Thr Lys Ile Asn Gly Tyr Tyr Ile Pro Ala Lys Thr 405 410 415 CGT GTC TTC ATC AAC ACA CAT GGT CTT GGT AGA AAC ACA AAG ATA TGG 1296 Arg Val Phe Ile Asn Thr His Gly Leu Gly Arg Asn Thr Lys Ile Trp 420 425 430 GAT AAT ATT GAT GAG TTT AGG CCA GAG AGA CAT TTG CCT GCA GAT GAA 1344 Asp Asn Ile Asp Glu Phe Arg Pro Glu Arg His Leu Pro Ala Asp Glu 435 440 445 TTA AGT AGA GTT GAA ATA AGT CAT GGG GCA GAT TTC AAG ATT TTA CCA 1392 Leu Ser Arg Val Glu Ile Ser His Gly Ala Asp Phe Lys Ile Leu Pro 450 455 460 TTT AGT GCT GGA AAA AGG AAG TGT CCT GGT GCA CCA TTA GGA GTG AAA 1440 Phe Ser Ala Gly Lys Arg Lys Cys Pro Gly Ala Pro Leu Gly Val Lys 465 470 475 480 TTG GTA CTT ATG GCT TTG GCT AGA TTG TTC CAT TGC TTT GAG TGG AGC 1488 Leu Val Leu Met Ala Leu Ala Arg Leu Phe His Cys Phe Glu Trp Ser 485 490 495 CCA CCA GAT GGA TTA CGG CCT GAA GAT ATT GAC ACA ATT GAG GTT TAC 1536 Pro Pro Asp Gly Leu Arg Pro Glu Asp Ile Asp Thr Ile Glu Val Tyr 500 505 510 GGA ATG ACT ATG CCT AAA GCT AAG CCA TTG ATG GCT ATT GCT AGG CCT 1584 Gly Met Thr Met Pro Lys Ala Lys Pro Leu Met Ala Ile Ala Arg Pro 515 520 525 CGA CTG CCT GAT CAC CTG TAC CAC TCA ATC AAA TGATTTATCA TTTCCTTATA 1637 Arg Leu Pro Asp His Leu Tyr His Ser Ile Lys * 530 535 539 CAAATTAAAA GTGTGTTATT AATAACTTTT TTAAGTAGTT GGACCATATA GTTATTTGTG 1697 TAGACAGATA CTAAAATATG ATACATCTCT TTTTCTGAAT CAATAAAAAA AAAAAAAAAA 1757 AAAA 1761

【００５４】配列番号：４ 配列の長さ：１０４１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列： GAAACAGCGC AGATACCAGT GCTGAAACGA TGCAGAAACA GTTTAAAACA ACGCAGATAC 60 ATTTCTGAAA CGATGCAGAA ACAGTTAGAT ACGGTGCTGC AGAAACAGTT GAAACGGTTC 120 AGAAACAGTT AGATACGGTG CTGCAGGAAC AGTTGAAACA ATGCAGAAAT AGTTGAGATA 180 CTGTGCTGCA GAAACAGTTG AAACGGTGCA GAAACAGTTG AGACACGGTG CTGCAGAAAC 240 AGTTGTAACG GTGCAGAAAC AGTTAGATAC GGTGCAGAAA TAATGAGATT CAACGAGATA 300 CATTGAGGAT GGATGAGGAA AAGTGAAATT GGGAATAATG AGAGGAGTAA AAGTGAAATT 360 GGGAGGAAAT GGTGAGAGGA AAAGTGAAAT ATGGGGAAAT GGGAGAAGCA AAAATGATAG 420 TCGGGGAAAT ATAAAGAAGA ATGTAAGGGC TTGGTATGTT ATGGGAAAAT ATTGCTATGT 480 TTTTGCTATG TTTGCAATTA TCTTGTGTTT TCCTCTATAT AGGGTAATTT TACTAAAATG 540 TTGCTATGTT TGGTAATTAA GCTCTAAAAC TTGTACTTTT ATGTAAAAAT TCCTCGAGAT 600 AGCTTACAAC AACATATCCA ATGATATTCC ACCAATTTGG AATTTGGGGA GGGTAAAATG 660 TACGCAGACC TTGCCTCCAC TAAAATAGAA AAGTTGTTTT CAAAAGATCC TCGTTTAAAG 720 AAAATATTTT TTAAAAAATA AATTTAAAAA TATTTTGAAA ACATATTTAA AGTAAAACAA 780 TGATGAAAGA CTGAGATTAA GATAGGTTGT TCTTTCAAAT TTTCCAATAA TATCGGTCAT 840 GTGAAAGCAA TAAGCGTGAG TTCAAGATGA ATAGTGTAGT TGAAACATGT CAAGATGGTG 900 GGCTTCCTAA TCACTCGCGG TCATGTCTTT TTGCAGCCAA TTGCATATTG TTTAAACAGA 960 TTATAAATTA AGTAACATTT AACAACACAT TAATTACCTT ACTGAAGCTT GTAAACTACT 1020 TTTCCTCTTT GACAAATTAA G 1041

【図面の簡単な説明】

【図１】 花芽の成長段階を示す図面に代わる写真であ
る。

【図２】 花芽の各成長段階におけるノザンブロット解
析によるＭ１５の遺伝子発現を示す。

【図３】 花芽の各成長段階におけるノザンブロット解
析によるＫ４０の遺伝子発現を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 プライマー１（5'AAAGAAACATTTCGAAAGCA
   CCC）および／またはプライマー２（5'AAATTCTTCGTCCAG
   CACCAAATGG）を用いてクローニングすることにより得ら
   れる花芽形成の初期に発現するチトクロームＰ４５０遺
   伝子。
2. 【請求項２】 配列番号１の塩基配列番号１〜１４８８
   の塩基配列によってコードされるアミノ酸配列をコード
   するチトクロームＰ４５０遺伝子、または配列番号１の
   塩基配列番号１〜１４８８の全部または一部の塩基配列
   とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、ペチ
   ュニアの花芽形成の初期に発現するチトクロームＰ４５
   ０と同一の活性を有するタンパク質をコードする遺伝
   子。
3. 【請求項３】 配列番号３の塩基配列番号１〜１６１７
   の塩基配列によってコードされるアミノ酸配列をコード
   するチトクロームＰ４５０遺伝子、または配列番号３記
   載の塩基配列番号１〜１６１７の全部又は一部の塩基配
   列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、ペ
   チュニアの花芽形成の初期に発現するチトクロームＰ４
   ５０と同一の活性を有する蛋白質をコードする遺伝子。
4. 【請求項４】 請求項１〜３記載の遺伝子によりコード
   される蛋白質。
5. 【請求項５】 配列番号２または配列番号４の塩基配列
   またはこれらのいずれかとストリンジェントな条件下で
   ハイブリダイズする塩基配列からなり、植物の花芽形成
   の初期にプロモーター活性を有するＤＮＡ。