JPH10304883A

JPH10304883A - 新規化合物

Info

Publication number: JPH10304883A
Application number: JP9363356A
Authority: JP
Inventors: Jonathan A Terret; ジョナサン・エイ・テレット; Tania Testa; タニア・テスタ; Israel S Gloger; イスラエル・エス・グローガー; Stephen Hughes; スティーブン・ヒューズ; Tudy R Doe; トルーディ・アール・ドウ
Original assignee: SmithKline Beecham Ltd
Current assignee: SmithKline Beecham Ltd
Priority date: 1996-11-25
Filing date: 1997-11-25
Publication date: 1998-11-17
Also published as: CA2216622A1; US6187908B1; US20020082385A1

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチド及びポリヌクレオ
チド、組み換え法によるかかるポリペプチドの製造方
法、並びに、糖尿病、肥満及びアデトーム性動脈硬化症
の治療、及びかかる症状の診断におけるＴｕｂｂｙ２ポ
リペプチド及びポリヌクレオチドの使用方法を開示す
る。【解決手段】配列番号：２の全長にわたり配列番号：
２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を
有するアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。適合する
宿主細胞中に存在する場合に、該ポリペプチドを含むポ
リペプチドを生成しうるＤＮＡまたはＲＮＡ分子を含ん
でなる発現系を含む宿主細胞を該ポリペプチドを生成す
るに十分な条件下で培養し、次いで、培養物からポリペ
プチドを回収する、ポリペプチドの製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、それによりコードされるポリペプチ
ド、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの使用、ならびにそれらの製造に関する。より詳細に
は、本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、Ｔ
ｕｂｂｙ関連ポリペプチドファミリー（以下、Ｔｕｂｂ
ｙ２という）に関連している。また本発明は、かかるポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドの阻害または活性化
にも関する。

【０００２】

【従来の技術】マウス・ｔｕｂｂｙ遺伝子は、いわゆる
「Ｔｕｂｂｙ」マウスモデル（Kleyn,PW et al (1996)
Cell 85, 281-290;Noben-Trauth,K et al.(1996) Natur
e 380:534-538）において変異していることが示されて
いる。変異マウスは、６カ月目からの体重増加を示し、
この体重増加に関連したインスリン耐性を示す。これら
の変異マウスにおいてはアテローム性動脈硬化症および
異型脂血症が存在する。Kleynらは、マウス・ｔｕｂｂ
ｙ遺伝子のヒト・オーソログ（orthologue）についても
記載している。ｔｕｂｂｙポリペプチドにおける変化は
ヒトの体重増加性疾患に関連していることが示唆されて
いる。しかしながら、Kleynらはｔｕｂｂｙ蛋白の生化
学的特性またはシグナリング特性については何ら記載し
ていない。国際特許出願公開ＷＯ９６／０５８６１は、
体重に関する疾病の治療のための組成物および方法に関
するものであり、詳細には、これらの組成物および方法
に用いられる特定の遺伝子を同定している。機能不全ま
たは疾病を予防、改善または修正することにおいて役割
を果たすことのできるＴｕｂｂｙ関連ポリペプチドファ
ミリーのさらなるメンバーを同定し特徴づけることが必
要である。

【０００３】１の態様において、本発明は、Ｔｕｂｂｙ
２ポリペプチドならびにその製造のための組み換え材料
および方法に関する。本発明のもう１つの態様は、かか
るＴｕｂｂｙ２ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの
使用方法に関する。かかる使用は、とりわけ、糖尿病、
肥満、およびアテローム性動脈硬化症の治療を包含す
る。さらにもう１つの態様において、本発明は、本発明
により提供される材料を用いてアゴニストおよびアンタ
ゴニストを同定する方法、ならびに同定された化合物を
用いるＴｕｂｂｙ２バランス不良に関連症状の治療方法
に関する。本発明のさらにもう１つの態様は、不適当な
Ｔｕｂｂｙ２活性またはレベルに関連した疾病の診断ア
ッセイに関する。

【０００４】本発明のポリペプチド第１の態様において、本発明は、Ｔｕｂｂｙ２ポリペプ
チドならびにその変種およびフラグメントに関する。か
かるポリペプチドは、配列番号：２の全長にわたり配列
番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好
ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも
９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、最も
好ましくは少なくとも９７−９９％の同一性を有するア
ミノ酸配列を含む単離ポリペプチドを包含する。かかる
ポリペプチドは、配列番号：２のアミノ酸を含むポリペ
プチドを包含する。またＴｕｂｂｙ２ポリペプチドは、
アミノ酸配列が配列番号：２の全長にわたり配列番号：
２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましく
は少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０
％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、最も好ま
しくは少なくとも９７−９９％の同一性を有するもので
ある単離ポリペプチドを包含する。

【０００５】Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドは「成熟」蛋白
の形態であってもよく、あるいは融合蛋白のごとき大型
の蛋白の一部であってもよい。分泌またはリーダー配
列、プロ配列、複数のヒスチジン残基のごとき精製を促
進する配列、または組み換え法を行っている間の安定性
のためのさらなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含
んでいることがしばしば有利である。

【０００６】Ｔｕｂｂｙ２のフラグメントも本発明に含
まれる。フラグメントは、前述のＴｕｂｂｙ２ポリペプ
チドのアミノ酸配列のすべてではなく一部に対して全く
同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。
Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドでは、フラグメントは「独立
して存在するもの（free standing）」であるか、また
は一部分もしくは領域を形成するより大きなポリペプチ
ド内に含まれていてもよく、最も好ましくは単一の連続
した領域として、単一のより大きなポリペプチドに含ま
れる。本発明ポリペプチドフラグメントの典型例は、例
えば、Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドのアミノ酸番号約１〜
２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１
００および１０１から末端までからなるフラグメントを
包含する。この意味において、「約」とは、片方の端ま
たは両端において、示された数よりも数個、５個、４
個、３個、２個または１個多いかまたは少ない範囲を含
む。

【０００７】好ましいフラグメントは、例えば、アミノ
末端を含む一連の残基が欠失、またはカルボキシ末端を
含む一連の残基が欠失、あるいは一方がアミノ末端でも
う一方がカルボキシ末端を含む２種の一連の残基が欠失
していること以外はＴｕｂｂｙ２ポリペプチドのアミノ
酸配列を有する末端切断ポリペプチドを包含する。ま
た、構造的または機能的属性により特徴づけられたフラ
グメント、例えばアルファーヘリックスおよびアルファ
ーヘリックス形成領域、ベータシートおよびベータシー
ト形成領域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよ
びコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファ
ー両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、可変領域、表面
形成領域、基質結合領域、および高抗原性指標領域を含
むフラグメントなども好ましい。受容体活性を媒介す
る、生物学的に活性な領域もまた好ましく、類似の活性
もしくは改善された活性のある、または望ましくない活
性を減じたフラグメント等がある。動物、とりわけヒト
において抗原的または免疫原的なフラグメントもまた含
まれる。

【０００８】上記配列およびフラグメントの変種もこの
グループに含まれる。好ましい変種は、保存的アミノ酸
置換により変化したものであり、すなわち、同様の特徴
を有するアミノ酸によち置換されているものである。典
型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩ
ｌｅ間：ＳｅｒおよびＴｈｒ間；ＡｓｐおよびＧｌｕ
間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；ならびに塩基性残基Ｌｙｓ
およびＡｒｇ間；あるいは芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙ
ｒ間におけるものである。数個、５ないし１０個、１な
いし５個、または１ないし２個のアミノ酸がいずれかの
組み合わせで置換、欠失または付加されている変種が特
に好ましい。

【０００９】いずれの適当な方法でも本発明Ｔｕｂｂｙ
２ポリペプチドを製造することができる。かかるポリペ
プチドは、単離された天然ポリペプチド、組み換え法に
よるポリペプチド、合成法によるポリペプチド、または
これらの方法の組み合わせによるポリペプチドを包含す
る。かかるポリペプチドの製造手段は当該分野において
よく知られている。

【００１０】本発明のポリヌクレオチドさらなる態様において、本発明はＴｕｂｂｙ２ポリヌク
レオチドに関する。かかるポリヌクレオチドは、コーデ
ィング配列全体にわたり配列番号：２のポリペプチドを
コードしているヌクレオチド配列に対して少なくとも７
０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少
なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５
％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離ポリヌ
クレオチドを包含する。この点において、少なくとも９
７％の同一性を有するポリヌクレオチドが非常に好まし
く、少なくとも９８−９９％の同一性を有するものがさ
らに非常に好ましく、少なくとも９９％の同一性を有す
るものが最も非常に好ましい。かかるポリヌクレオチド
は、配列番号：２のポリペプチドをコードしている、配
列番号：１に含まれるヌクレオチド配列を含むポリヌク
レオチドを包含する。さらにＴｕｂｂｙ２ポリヌクレオ
チドは、配列番号：１の全長にわたり配列番号：１に対
して少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、
より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましく
は少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列
を含む単離ポリヌクレオチドを包含する。この点におい
て、少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチ
ドが非常に好ましく、少なくとも９８−９９％の同一性
を有するものがさらに非常に好ましく、少なくとも９９
％の同一性を有するものが最も非常に好ましい。かかる
ポリヌクレオチドは、配列番号：１のポリヌクレオチド
であるポリヌクレオチドを包含する。また本発明は、か
かるポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオチ
ドを提供する。

【００１１】ヒト・Ｔｕｂｂｙ２をコードしているｃＤ
ＮＡの配列決定の結果により示されるように、本発明Ｔ
ｕｂｂｙ２は、Ｇ蛋白結合受容体の他の蛋白に構造的に
関連している。配列番号：１のｃＤＮＡ配列は、配列番
号：２の３９０個のアミノ酸からなるポリペプチドをコ
ードしている読み枠（ヌクレオチド番号１から１１７０
まで）を含んでいる。表１（配列番号：２）のアミノ酸
配列は、Ｔｕｂｂｙ［(P50586)Kleyn,PW,et al,Cell 19
96 Apr 19;85(2):281-290］に対して２６６個のアミノ
酸において約６０％の同一性を有する（BlastXを使
用）。表１（配列番号：１）のヌクレオチド配列は、ハ
ツカネズミのｔｕｂｂｙ候補（tub）ｍＲＮＡ［(U5282
4)Kleyn,PW,et al,Cell 1996 Apr 19;85(2):281-290］
に対して３７１個のアミノ酸において約６０％の同一性
を有する（BlastNを使用）。ＴｕｂｂｙとＴｕｂｂｙ２
ポリペプチドとの間における二塩基性のプロテアーゼ開
裂配列の有意な保存性が明らかであり（アミノ酸３０２
および３８３、Kleynら）、そのことはＴｕｂｂｙ２ポ
リペプチドがインビボで開裂されて小型の活性ペプチド
になりうることを示す。しかしながら、低い類似性が
５’末端方向（アミノ酸１６７−２０２、Kleynら）に
存在し、ｔｕｂｂｙとｔｕｂｂｙ２ポリペプチドとの間
の重要な機能の相違が存在しうることが示唆される。

【００１２】

【表１】

【００１３】

【表２】

【００１４】標準的クローニングおよびスクリーニング
を用い、ヒト・黒質細胞中のｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡか
ら、発現配列タグ（ＥＳＴ）分析（Adams,M.D.,et al.S
cience(1991)252:1651-1656;Adams,M.D.et al.,Nature
(1992)355:632-634;Adams,M.D.,et al.,Nature(1995)37
7 Supp:3-174）を用いて、Ｔｕｂｂｙ２をコードしてい
る本発明の１のポリヌクレオチドを得てもよい。ゲノム
ＤＮＡライブラリーのごとき天然起源から本発明ポリヌ
クレオチドを得ることもでき、あるいはよく知られ市販
されている方法を用いて合成することもできる。

【００１５】配列番号：２のＴｕｂｂｙ２ポリペプチド
をコードしているヌクレオチド配列は、表１に含まれる
ポリペプチドコーディング配列（ヌクレオチド番号１か
ら１１７０まで）と同一であってもよく、あるいは配列
番号：２のポリペプチドをコードしているヌクレオチド
配列の縮重の結果である配列であってもよい。

【００１６】本発明ポリヌクレオチドをＴｕｂｂｙ２ポ
リペプチドの組み換え生産に用いる場合、ポリヌクレオ
チドはそれ自体、成熟ポリペプチドまたはそのフラグメ
ントのコーディング配列を含むものであってもよく；あ
るいは他のコーディング配列を伴った読み枠中の成熟ポ
リペプチドまたはフラグメントのコーディング配列を含
むものであってもよい。他のコーディング配列として
は、例えば、リーダーまたは分泌配列、プレ、もしくは
プロ、もしくはプレプロ蛋白配列をコードするコーディ
ング配列、または他の融合ペプチド部分が挙げられる。
例えば、融合ポリペプチドの精製を促進するマーカー配
列をコードしていてもよい。本発明のある好ましい態様
において、マーカー配列は、ｐＱＥベクター（Qiagen,I
nc.）に提供されるようなヘキサ−ヒスチジンペプチド
（Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，86:821-824（19
89）に記載される）またはＨＡタグ（Wilsonら、Cell，
37:767（1984））である。本発明のポリヌクレオチドは
また、構造遺伝子および遺伝子発現を調節する天然の配
列をも含むが、これらに限定するものではない。ポリヌ
クレオチドは、例えば、転写された非翻訳配列、終止シ
グナル、リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配
列、イントロン、ポリアデニル化シグナル等の転写非翻
訳配列、および付加アミノ酸をコードする付加コーディ
ング配列等の非コーディング５'および３'配列等の非コ
ーディング配列をも含有していてもよい。

【００１７】さらなる好ましい具体例は、図１のＴｕｂ
ｂｙ２のアミノ酸配列（配列番号：２）を有している
が、数個、５ないし１０個、１ないし５個、１ないし３
個、１ないし２個または１個のアミノ酸残基がいずれか
の組み合わせで置換、欠失または付加されているＴｕｂ
ｂｙ２変種をコードしているポリヌクレオチドである。

【００１８】配列番号：１および２の決定のためのプロ
グラムは、短い遺伝子フラグメント（ＥＳＴ）を予備的
に同定することから開始された。したがって、さらなる
態様において、本発明は、配列番号：４の推定アミノ酸
配列により特徴づけられるＴｕｂｂｙ２またはそのフラ
グメントを提供し、さらにかかるポリペプチド、詳細に
は配列番号：３に示す部分ＤＮＡ配列を含むポリヌクレ
オチドをコードしているポリヌクレオチドを提供する。
さらなる態様において、本発明は、配列番号：４のアミ
ノ酸配列をコードしている配列番号：３のポリヌクレオ
チド、配列番号：３に示す配列を有するポリヌクレオチ
ド、および配列番号：４のアミノ酸配列を有するポリペ
プチドを提供する。配列番号：３のポリヌクレオチドお
よび配列番号：４のポリペプチドが、それぞれ配列番
号：１のポリヌクレオチドおよび配列番号：２のポリペ
プチドのフラグメントとして記載されてもよいことが容
易に理解されよう。本明細書において配列番号：１とい
う場合には、配列番号：１を配列番号：３に置き換えて
もよく、本明細書において配列番号：２という場合に
は、配列番号：２を配列番号：４に置き換えてもよい。

【００１９】

【表３】

【００２０】

【表４】

【００２１】配列番号：３のポリヌクレオチドは読み枠
全体を含まないが、当該分野でよく知られた方法により
全長のクローンを容易に得ることができる。選択される
別法のうち、以下の例を説明すべきである：１）ヒト・
ライブラリータイプのｃＤＮＡライブラリーを、すでに
クローン化された配列の５’末端由来のプローブを用い
て再スクリーニングすることができ、あるいは２）アン
カー−ＰＣＲまたはＲＡＣＥ法（ｃＤＮＡ末端の迅速増
幅）（Kriangkum et al.,Nucleic Acids Res.20 (1992)
3793-3794;Troutt et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89
(1992),9823-9825）を用いて組織タイプＲＮＡから残
りの５’配列をクローン化することができ、あるいは
３）ヒト・ゲノムライブラリーから残りの５’部分を単
離することができ、ラット・受容体のｃＤＮＡに対する
相同性に基づいてイントロンを表すと考えられるＤＮＡ
フラグメントを同定し、突然変異法により欠失させるこ
とができる。読み枠の５’末端をクローニングした後、
ＰＣＲを用いて、あるいは５’および３’部分のいずれ
においても同定されている適当な制限酵素認識配列にお
ける融合により、ｃＤＮＡのこの部分をヒト・Ｔ２ポリ
ペプチドｃＤＮＡの３’部分に融合させることができ
る。

【００２２】さらに本発明は、本明細書においてすでに
述べた配列にハイブリダイゼーションするポリヌクレオ
チドにも関する。この点において、本発明は、特に、本
明細書においてすでに述べたポリヌクレオチドに厳密な
条件下でハイブリダイゼーションするポリヌクレオチド
に関する。本明細書の用語「厳密な条件」とは、配列間
に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、よ
り好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは
９７−９９％の同一性がある場合にのみハイブリダイゼ
ーションが起こることを意味する。

【００２３】本発明ポリヌクレオチドは、配列番号：１
に含まれるヌクレオチド配列またはそのフラグメント
（配列番号：３のフラグメントも包含）に対して同一ま
たは十分に同一であり、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用
のハイブリダイゼーションプローブとして用いてＴｕｂ
ｂｙ２ポリペプチドをコードしている全長のｃＤＮＡお
よびゲノムクローンを単離し、またＴｕｂｂｙ２遺伝子
に対して非常に配列が類似した他の遺伝子（ヒト以外の
種由来の相同体およびオーソロガス体をコードしている
遺伝子を包含）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離
することができる。かかるハイブリダイゼーション法は
当業者に知られている。典型的には、これらのヌクレオ
チド配列は、対照配列に対して８０％、好ましくは９０
％、より好ましくは９５％同一である。一般的には、プ
ローブは少なくとも１５個のヌクレオチドを含むであろ
う。好ましくは、かかるプローブは少なくとも３０ヌク
レオチドを有し、少なくとも５０ヌクレオチドを有して
いてもよい。特に好ましいプローブは３０ないし５０ヌ
クレオチドの範囲である。

【００２４】１の具体例において、Ｔｕｂｂｙ２ポリペ
プチドをコードしているポリヌクレオチド（ヒト以外の
種由来の相同体およびオーソロガス体を包含）を得るこ
とは、厳密なハイブリダイゼーション条件下で配列番
号：１の配列またはそのフラグメント（配列番号：３の
フラグメントを包含）を有する標識プローブを用いて適
当なライブラリーをスクリーニングし、次いで、該ポリ
ヌクレオチド配列を含む全長のｃＤＮＡおよびゲノムク
ローンを単離する工程を含む。かかるハイブリダイゼー
ション法は当業者によく知られている。よって、もう１
つの態様において、さらに本発明Ｔｕｂｂｙ２ポリヌク
レオチドは、厳密な条件下で配列番号：１の配列または
そのフラグメント（配列番号：３のフラグメントを包
含）を有するヌクレオチド配列にハイブリダイゼーショ
ンするヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を包含
する。上記ハイブリダイゼーション条件により得られる
ヌクレオチド配列によりコードされているアミノ酸配列
を含むポリペプチドもＴｕｂｂｙ２ポリペプチドに包含
される。厳密なハイブリダイゼーション条件は上記のご
ときもの、あるいは５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ
（１５０ｍＭＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウ
ム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５
ｘデンハーツ溶液、１０％デキストラン硫酸、および
２０マイクログラム／ｍｌの変性剪断サケ・精子ＤＮＡ
を含む溶液中４２℃でのインキュベーション、次いで、
６５℃において０．１ｘＳＳＣでのフィルター洗浄とい
うものである。研究試薬ならびに動物およびヒトの疾病
の治療および診断を見いだすための材料として本発明ポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドを用いてもよい。

【００２５】ベクター、宿主細胞、発現本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌ
クレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子
操作する宿主細胞および組換え技法による本発明のポリ
ペプチドの製造にも関する。無細胞翻訳系を用い、本発
明ＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを用いてかかる蛋白を製造
できる。組換え体を製造するために、宿主細胞は、遺伝
子操作して、発現系もしくはそれらの一部、または本発
明のポリヌクレオチドを組み込むことができる。ポリヌ
クレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、Davisら、B
asic Methods in Molecular Biology（1986）；Sambroo
kら、Molecular Cloning；A Laboratory Manual、第２
版；コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・
プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨー
ク（1989）のように、多くの標準的な実験マニュアルに
記載される方法により行うことができ、例えばリン酸カ
ルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラ
ン媒介トランスフェクション、トランスベクション、マ
イクロインジェクション、陽イオン脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、トランスダクシ
ョン、スクレープ負荷、バリスティック導入または感染
等がある。

【００２６】適当な宿主の代表的なものには、細菌細
胞、例えば連鎖球菌属（streptococci）、ブドウ球菌属
（staphylococci）、大腸菌（E.coli）、ストレプトミ
セスおよび枯草菌（Bacillus subtiis）細胞；真菌細胞
例えば酵母細胞およびアスペルギルス属（Aspergillu
s）細胞；昆虫細胞例えばドロソフィラＳ２（Drosophil
aS2）およびスポドプテラＳｆ９（Spodoptera Sf9）細
胞；動物細胞例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２
７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびボウズ（Bows）黒色
腫細胞；ならびに植物細胞等がある。

【００２７】本発明のポリペプチドを製造するために非
常に多くの発現系を使用できる。このようなベクターに
は、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクタ
ー、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由
来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エ
レメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキ
ュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ４０、ワク
シニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性
狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来
のベクター、ならびにそれらを組み合わせた物に由来す
るベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファー
ジ遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコスミド
およびファージミド等がある。発現系の構築物には発現
を制御および引き起こす調節領域を含有できる。通常宿
主中にポリヌクレオチドを保持、伸長または発現するの
に、および／またはポリペプチドを発現するのに適した
任意の系またはベクターを、この点に関する発現に使用
できる。周知のおよび通常的な種々の任意の技術によ
り、適当なＤＮＡ配列を発現系に挿入でき、例えばSamb
rookら、Molecular Cloning，A Laboratory Manual（上
述）に記載されている。

【００２８】翻訳蛋白を、小胞体内腔、ペリプラスミッ
クスペースまたは細胞外環境へ分泌させるために、適当
な分泌シグナルを発現するポリペプチドに組み込むこと
ができる。これらのシグナルはポリペプチドに本来的な
ものであってもく、あるいは異種性のシグナルでもよ
い。

【００２９】Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドをスクリーニン
グアッセイのために発現させる場合、一般的には、細胞
表面にポリペプチドを生成させるのが好ましい。この場
合、スクリーニングアッセイに使用する前に細胞を集め
てもよい。Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドを培地中でスクリ
ーニングする場合、培地を回収してポリペプチドを回収
し精製することができる。細胞内に生成される場合、ま
ず細胞を溶解し、次いで、ポリペプチドを回収しなけれ
ばならない。Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドは周知の方法に
より、組換え細胞培養物から回収および精製でき、その
方法には例えば硫酸アンモニウムまたはエタノール沈
殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラ
フィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性
相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィ
ー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよび
レクチンクロマトグラフィー等がある。高速液体クロマ
トグラフィー（「ＨＰＬＣ」）を精製に用いるのが最も
好ましい。ポリペプチドが単離および／または精製中に
変性した場合、再び活性な立体配座にするために、蛋白
再生のための周知の技法を用いることができる。

【００３０】診断アッセイ本発明はまた診断試薬としての本発明Ｔｕｂｂｙ２ポリ
ヌクレオチドの使用にも関する。真核生物とりわけ哺乳
動物、特にヒトにおけるＴｕｂｂｙ２の検出は、疾患の
診断のための診断法を提供する。真核生物（本明細書に
おいて「個体」とも称する）とりわけ哺乳動物、特にヒ
トがＴｕｂｂｙ２遺伝子を含む生物に感染すると、種々
の方法によりＤＮＡレベルで検出できる。診断用の核酸
は、感染した個体の細胞および組織、例えば骨、血液、
筋肉、軟骨および皮膚より得ることができる。ゲノムＤ
ＮＡは直接的に検出するのに使用できるか、または分析
の前にＰＣＲもしくはその他の増幅法を用いることによ
り酵素的に増幅できる。ＲＮＡまたはｃＤＮＡもまた同
じ方法で用いることができる。増幅法を用いると、真核
生物とりわけ哺乳動物、特にヒトに存在する原核生物株
を、原核生物遺伝子の遺伝子型の分析により特徴づけす
ることができる。対照配列の遺伝子型と比較した増幅産
物の大きさの変化により、欠損および挿入を検出でき
る。点突然変異は、増幅ＤＮＡを標識化Ｔｕｂｂｙ２ポ
リヌクレオチド配列にハイブリダイズさせることにより
同定できる。完全に対合した配列はＲＮアーゼ消化によ
り、または融解温度の差により、誤対合二重らせんから
区別できる。ＤＮＡ配列の差はまた、変性物質を伴うま
たは伴わないゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動の
移動度の変化を検出することにより、または直接的なＤ
ＮＡの配列決定により検出できる。例えばMeyers et.a
l.Science，230:1242（1985）参照。特異的な位置での
配列の変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッセイ、例えば
ＲＮアーゼおよびＳ１保護または化学的切断法によって
も明らかにすることができる。例えばCotton et al.Pro
c.Natl.Acad.Sci.,USA，85:4397-4401（1985）参照。も
う１つの具体例において、Ｔｕｂｂｙ２ヌクレオチド配
列またはそのフラグメントを含むオリゴヌクレオチドプ
ローブのアレイ（array）を構築して遺伝子の変異の効
果的なスクリーニングを行うことができる。アレイ法は
よく知られており、適用範囲が広く、遺伝子発現、遺伝
学的連関、および遺伝学的変化を包含する分子遺伝学に
おける種々の問題を調べるために用いることができる
（例えば、M.Chee et al.,Science,Vol 274,pp610-613
(1996)）。

【００３１】診断アッセイは、記載した方法によりＴｕ
ｂｂｙ２遺伝子中の変異を検出することによる、糖尿
病、肥満、およびアテローム性動脈硬化症の診断または
これらの疾病に対する感受性の決定のための方法を提供
する。さらに、対象由来の試料の異常に上昇または低下
したＴｕｂｂｙ２ポリペプチドまたはＴｕｂｂｙ２ｍ
ＲＮＡレベルを調べることを特徴とする方法によって、
糖尿病、肥満、およびアテローム性動脈硬化症を診断す
ることができる。Ｔｕｂｂｙ２ポリヌクレオチドの発現
の増加または低下は、ポリヌクレオチドの定量法として
当該分野で周知の方法の任意の方法、例えば増幅、ＰＣ
Ｒ、ＲＴＰＣＲ、ＲＮアーゼ保護、ノーザンブロッティ
ングおよびその他のハイブリダイゼーション法を用いて
測定できる。宿主由来のサンプル中のＴｕｂｂｙ２蛋白
のレベルを決定するために用いることができるアッセイ
法は、当業者に周知である。このようなアッセイ法に
は、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウェス
タンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイ等がある。

【００３２】よって、もう１つの態様において、本発明
は、疾病、詳細には糖尿病、肥満、およびアテローム性
動脈硬化症またはかかる疾病に対する感受性の診断のた
めのキットに関し、該キットは、（ａ）Ｔｕｂｂｙ２ポリヌクレオチド、好ましくは配列
番号：１のヌクレオチド配列、またはそのフラグメン
ト；（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に対して相補的なヌク
レオチド配列；（ｃ）Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチド、好ましくは配列番
号：２のポリペプチド、もしくはそのフラグメント；ま
たは（ｄ）Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドに対する抗体、好まし
くは配列番号：２のポリペプチドに対する抗体を含んで
なる。かかるキットにおいて、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）
または（ｄ）は重要な成分を構成しうることが理解され
よう。

【００３３】染色体アッセイ本発明ヌクレオチド配列は染色体の同定にも価値があ
る。該配列は、個々のヒト・染色体上の特定の位置を標
的とし、これにハイブリダイゼーションしうる。本発明
による重要な部分の染色体へのマッピングは、それらの
配列を遺伝子関連疾病と関連づける重要な第１工程であ
る。配列を正確な染色体位置にマッピングしたならば、
染色体上の配列の物理的位置を遺伝学的地図のデータと
関連づけることができる。かかるデータは、例えば、V.
McKusick,Mendelian Inheritance in Man（Johns Hopki
ns University Weich Medical Libraryからオンライン
で利用できる）に見いだされる。次いで、連関（物理的
に近接した遺伝子の同時遺伝）の分析により、同じ染色
体領域にマッピングされた遺伝子と疾病との関係を同定
する。罹病個体と未罹病個体との間のｃＤＮＡまたはゲ
ノム配列の相違も調べることができる。罹病個体のいく
つかまたは全部において変異が観察されるが正常個体に
おいては観察されない場合、その変異は疾病の原因であ
る可能性がある。

【００３４】抗体本発明ポリペプチドもしくはそれらの変種、またはそれ
らを発現する細胞を免疫原として用いて、Ｔｕｂｂｙ２
ポリペプチドに対して免疫特異的な抗体を得ることもで
きる。本明細書の用語「免疫特異的」とは、抗体のアフ
ィニティーが、先行技術の他の関連ポリペプチドに対し
てよりも本発明ポリペプチドに対して実質的に大きいも
のであることを意味する。Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドに
対して生じる抗体は、ポリペプチド、またはエピトープ
が付いたフラグメント、アナログまたは細胞を、好まし
くはヒトはでない動物に、通常の実験法を用いて投与す
ることにより得ることができる。連続的細胞系培養によ
り産生される抗体を提供する、当業者周知の技術を用い
て、モノクローナル抗体を調製することができる。実例
としては、Kohler,G. and Milstein,C.，Nature，256:4
95-497（1975）；Kozbor et al.Immunology Today，4:7
2（1983）；Cole et al.Monoclonal Antibodies and Ca
ncer Therapy,Alan R Liss,Inc.,pp.77-96（1985）に記
載されるような種々の技法がある。

【００３５】一本鎖抗体の産生のために記載された技術
（米国特許第４９４６７７８号）は、本発明のポリペプ
チドに対する一本鎖抗体を産生するのに適用できる。ま
た、トランスジェニックマウスまたはその他の生物、例
えばその他の哺乳動物は、ヒト化抗体等の抗体を発現す
るのに用いることができる。上記抗体を用いて、ポリペ
プチドを発現するクローンを単離または同定してもよ
く、あるいはアフィニティークロマトグラフィーにより
ポリペプチドを精製してもよい。Ｔｕｂｂｙ２ポリペプ
チドに対する抗体を用いて、とりわけ、糖尿病、肥満、
およびアテローム性動脈硬化症を治療してもよい。

【００３６】ワクチン本発明の別の態様は、哺乳動物における免疫学的反応を
誘起する方法に関し、該方法は、抗体および／またはＴ
細胞免疫応答を生じさせるに十分なＴｕｂｂｙ２または
それらのフラグメントを哺乳動物に接種して、とりわ
け、糖尿病、肥満、およびアテローム性動脈硬化症から
該動物を防御することを特徴とする。本発明のもう１つ
の態様は、哺乳動物における免疫学的応答を誘導する方
法に関し、該方法は、Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドまたは
そのフラグメントもしくは変種を発現させるための核酸
ベクターを送達し、インビボでＴｕｂｂｙ２ポリペプチ
ドを発現させて、該動物を疾病から保護する抗体を生じ
る、かかる免疫学的応答を誘導することを特徴とする。

【００３７】本発明のさらなる態様は免疫学的ワクチン
処方（組成物）に関し、それは、哺乳動物宿主中に導入
された場合、Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドに対する哺乳動
物の免疫学的応答を誘導する。該組成物はＴｕｂｂｙ２
ポリペプチドまたはＴｕｂｂｙ２遺伝子を含んでなる。
ワクチン処方は、さらに適当な担体を含んでいてもよ
い。Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドは胃で分解される可能性
があるので、好ましくは非経口投与する（皮下、筋肉
内、静脈、皮内等への注射を包含）。非経口投与に適し
た処方は、抗酸化剤、バッファー、静細菌剤および処方
をレシピエントの血液と等張にする溶質を含んでいても
よい水性または非水性滅菌注射用溶液；ならびに懸濁剤
または増粘剤を含んでいてもよい水性または非水性滅菌
懸濁液を包含する。処方を１回量または複数回として容
器に入れて提供してもよく、例えば、密封アンプルおよ
びバイアルに入れて提供してもよく、また使用直前に滅
菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態として
保存してもよい。またワクチン処方は、水中油系および
当該分野で知られた他の系のごとき処方の免疫原性を高
めるためのアジュバント系を含んでいてもよい。用量
は、個々のワクチンの活性に左右され、通常の実験によ
り容易に決定することができる。

【００３８】スクリーニングアッセイ本発明受容体ポリペプチドに結合してこれを活性化（ア
ゴニスト）または阻害（アンタゴニスト）する化合物の
スクリーニングプロセスにおいて本発明Ｔｕｂｂｙ２を
用いてもよい。よって、本発明ポリペプチドを用いて、
小型分子基質およびリガンド、例えば細胞、無細胞調製
物、化学ライブラリーおよび天然産物混合物の結合を評
価してもよい。これらの基質およびリガンドは天然の基
質およびリガンドであってもよく、あるいは構造または
機能を模倣したものであってもよい。Coligan et al.,C
urrent Protocols in Immunology 1(2):Chapter5(1991)
参照。

【００３９】Ｔｕｂｂｙ２蛋白は哺乳動物宿主に広く存
在し、多くの生物学的機能に関与しており、多くの病気
にもかかわっている。したがって、Ｔｕｂｂｙ２を刺激
する化合物および薬剤、あるいはまたＴｕｂｂｙ２を阻
害しうる化合物または薬剤を見いだすことが望まれる。
一般的には、糖尿病、肥満、およびアテローム性動脈硬
化症のごとき状態を治療または予防するためにアゴニス
トが用いられる。糖尿病、肥満、およびアテローム性動
脈硬化症のごとき状態の種々の治療または予防のために
アンタゴニストを用いてもよい。

【００４０】一般的には、かかるスクリーニング手順
は、細胞表面に本発明受容体ポリペプチドを発現する適
当な細胞を製造することを含む。かかる細胞は、哺乳動
物由来の細胞、酵母、DrosophilaまたはE.coliを包含す
る。次いで、受容体発現細胞（または発現された受容体
を含む細胞膜）を試験化合物と接触させて、結合または
機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。候補化合物
と接触した細胞のＴｕｂｂｙ２活性に関する能力を、接
触しなかった細胞の能力と比較する。アッセイは、候補
化合物の結合を試験するだけであってもよく、候補化合
物に直接または間接的に結合した標識を用いて、あるい
は標識競争物質との競争を用いるアッセイにおいて、Ｔ
ｕｂｂｙ２ポリペプチドを有する細胞への付着を検出す
る。さらに、候補化合物がＴｕｂｂｙ２ポリペプチドの
活性化により発生するシグナルを生じるかどうかを、Ｔ
ｕｂｂｙ２ポリペプチドを有する細胞に適した検出系を
用いて、これらのアッセイにより試験してもよい。一般
的には、既知アゴニストの存在下で活性化に対する阻害
剤をアッセイし、候補化合物の存在によるアゴニストに
よる活性化に対する影響を観察する。さらに、アッセイ
は、Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチド含有溶液と候補化合物と
を接触させて混合物を得て、混合物中のＴｕｂｂｙ２活
性を測定し、次いで、標準と混合物のＴｕｂｂｙ２活性
とを比較する工程を含むだけのものであってもよい。

【００４１】Ｔｕｂｂｙ２ｃＤＮＡ、蛋白および該蛋
白に対する抗体を用いて、細胞中のＴｕｂｂｙ２ｍＲ
ＮＡおよび蛋白の産生に対する添加化合物の影響を調べ
るためのアッセイを行ってもよい。例えば、当該分野で
知られた標準的方法によりモノクローナルおよびポリク
ローナル抗体を用いてＴｕｂｂｙ２の分泌レベルまたは
細胞結合レベルを測定するためにＥＬＩＳＡを構築して
もよく、このＥＬＩＳＡを用いて、適当に処理された細
胞または組織からＴｕｂｂｙ２の産生を阻害または促進
しうる作用剤（それぞれアンタゴニストまたはアゴニス
トとも呼ばれる）を見いだすこともできる。当該分野で
知られた標準的な受容体結合法により、Ｔｕｂｂｙ２蛋
白を用いて膜結合または可溶性受容体を同定してもよい
（存在する場合には）。これらの方法は、リガンド結合
および架橋アッセイを包含するが、これらの方法に限ら
ない。これらの方法において、Ｔｕｂｂｙ２を放射性同
位元素（例えば¹²⁵Ｉ）で標識、化学修飾（例えば、ビ
オチン化）、あるいは検出もしくは精製に適したペプチ
ド配列に融合させて、推定上の受容体源（細胞、細胞
膜、細胞上清、組織抽出物、体液）とともにインキュベ
ーションする。受容体の精製およびクローニングに用い
るほかに、Ｔｕｂｂｙ２受容体へのＴｕｂｂｙ２の結合
と競合するＴｕｂｂｙ２のアゴニストおよびアンタゴニ
スト（存在する場合に）を同定するためにこれらの結合
アッセイを用いることができる。かかるスクリーニング
アッセイを行うための標準的方法は当該分野においてよ
く理解されている。

【００４２】潜在的なＴｕｂｂｙ２ポリペプチドアンタ
ゴニストの例は、抗体、あるいはいくつかの場合にはオ
リゴヌクレオチドまたはＴｕｂｂｙ２のリガンドに密接
に関連した蛋白（例えば、リガンドのフラグメント、ま
たは受容体に結合するが応答を誘発せず、その結果、受
容体活性を保持する小型分子）を包含する。

【００４３】よって、もう１つの態様において、本発明
は、Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドに対するアゴニスト、ア
ンタゴニスト、リガンド、受容体、基質、酵素等；また
はＴｕｂｂｙ２ポリペプチド産生を減少もしくは促進す
る化合物を同定するためのスクリーニングキットに関
し、該キットは、（ａ）Ｔｕｂｂｙ２ポリヌクレオチド、好ましくは配列
番号：１のヌクレオチド配列、またはそのフラグメン
ト；（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に対して相補的なヌク
レオチド配列；（ｃ）Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチド、好ましくは配列番
号：２のポリペプチド、もしくはそのフラグメント；ま
たは（ｄ）Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドに対する抗体、好まし
くは配列番号：２のポリペプチドに対する抗体を含んで
なる。かかるキットにおいて、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）
または（ｄ）は重要な成分を構成しうることが理解され
よう。

【００４４】予防および治療方法本発明は、過剰または不十分な量のＴｕｂｂｙ２活性に
関連する異常な状態の処置方法を提供する。Ｔｕｂｂｙ
２活性が過剰な場合、いくつかの方法を用いることがで
きる。１の方法は、Ｔｕｂｂｙ２ポリペプチドの機能を
阻害（例えば、リガンド、基質、酵素、受容体等の結合
をブロックすることにより、あるいは２次的シグナルを
阻害することにより）するに有効な量の上記阻害化合物
（アンタゴニスト）を医薬上許容される担体とともに対
象に投与し、そのことにより異常なな症状を改善するこ
とを含む。もう１つの方法において、やはり内在性Ｔｕ
ｂｂｙ２ポリペプチドと競争してリガンド、基質、酵
素、受容体等に結合することができる可溶性形態のＴｕ
ｂｂｙ２ポリペプチドを投与してもよい。かかる競争物
質の典型例はＴｕｂｂｙ２ポリペプチドのフラグメント
を含む。

【００４５】さらにもう１つの方法において、発現ブロ
ック法を用いて内在性Ｔｕｂｂｙ２をコードしている遺
伝子の発現を阻害してもよい。知られているかかる方法
には、細胞内で生成した、あるいは別個に投与されたア
ンチセンス配列を用いる。例えば、Oligodeoxynucleoti
des as Antisense Inhibitors of Gene Expression,CRC
Press,Boca Raton, FL(1988)中、O'Connor,J.Neuroche
m(1991)56:560を参照のこと。別法として、遺伝子とと
もに三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを提供し
てもよい。例えば、Lee et al.,Nucleic Acids Res(197
9)6:3073;Cooney et al.,Science(1988)241:456;Dervan
et al.,Science(1991)251:1360参照。これらのオリゴ
ヌクレオチドはそれ自体投与することができ、あるいは
重要部分のオリゴマーをインビボで発現させることもで
きる。

【００４６】Ｔｕｂｂｙ２およびその活性の発現不足に
関連する異常な症状の処置には、いくつかの方法が用い
られる。１の方法は、Ｔｕｂｂｙ２を活性化する治療上
有効量の化合物（すなわち上記アゴニスト）を医薬上許
容される担体とともに投与し、そのことにより異常な状
態を改善することを特徴とする。別法として、遺伝子治
療を用いて、対象中の細胞によるＴｕｂｂｙ２の細胞内
での生成を有効ならしめてもよい。例えば、上記のごと
く本発明ポリヌクレオチドを処理加工して複製欠損レト
ロウイルスベクターに入れて発現するようにしてもよ
い。次いで、レトロウイルス発現構築物を単離し、本発
明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレトロウ
イルスプラスミドベクターでトランスダクションしたパ
ッケージング細胞中に導入して、今度はパッケージング
細胞が目的遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を生成する
ようにしてもよい。これらのプロデューサー細胞を対象
に投与して細胞をインビボで処理加工して、インビボで
ポリペプチドを発現するようにしてもよい。遺伝子治療
の概説としては、Human Molecular Genetics,T.Stracha
n and A.P.Read,BIOS Scientific Publishers Ltd(199
6)中、第２０章、GeneTherapy and other Molecular Ge
netic-based Therapeutic Approaches（およびその中の
引用文献）参照。もう１つの方法は、治療量のＴｕｂｂ
ｙ２ポリペプチドを適当な医薬担体と混合して投与する
ことである。

【００４７】処方および投与可溶性形態のＴｕｂｂｙ２ポリペプチドのごときペプチ
ド、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストペプチド
または小型分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処方
してもよい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプチ
ドまたは化合物、および医薬上許容される担体もまたは
賦形剤を含んでなる。かかる担体としては、セイライ
ン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロ
ール、エタノール、およびそれらの混合物が挙げられる
が、これらに限らない。処方は投与経路に適したものと
すべきであり、当業者によく知られている。さらに本発
明は、上記本発明成分の１種またはそれ以上を充填し
た、１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パック
およびキットにも関する。

【００４８】本発明ポリペプチドおよび他の化合物を単
独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他の
化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身投与
の好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含す
る。皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を
用いることもできる。全身投与のための別の手段は、胆
汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき
浸透剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さら
に、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるな
らば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は
局所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の
形態であってもよい。

【００４９】必要な用量範囲は、ペプチド、投与経路、
処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断
による。しかしながら、適当な用量は対象の体重１ｋｇ
あたり０．１ないし１００μｇの範囲である。しかしな
がら、種々の使用化合物および種々の投与経路のさまざ
まな有効性を考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと
思われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用
量が必要であると考えられる。当該分野においてよく知
られた最適化のための標準的な常套的実験を用いてこれ
らの用量の変更を行うことができる。

【００５０】しばしば「遺伝子治療」と称される上記治
療方法において、処置に使用するポリペプチドを対象中
において得ることもできる。よって、例えば、レトロウ
イルスプラスミドベクターを用いて対象由来の細胞をＤ
ＮＡまたはＲＮＡのごときポリヌクレオチドでエクスビ
ボで処理加工してもよい。次いで、細胞を対象に導入す
る。

【００５１】また本発明は、Ｔ２ポリペプチドをコード
しているＴ２ポリヌクレオチドを含んでいるトランスジ
ェニック非ヒト動物を提供する。変異およびＳＡＲ（構
造／活性相関）の評価のためのモデルとしての該トラン
スジェニック動物の使用方法ならびに薬剤スクリーニン
グにおける該トランスジェニック動物の使用方法も提供
される。

【００５２】定義以下の定義は本明細書で頻繁に使用される特定の用語の
理解を容易にするためのものである。「Ｔｕｂｂｙ２活
性またはＴｕｂｂｙ２ポリペプチド活性」あるいは「Ｔ
ｕｂｂｙ２またはＴｕｂｂｙ２ポリペプチドの生物学的
活性」とは、上記Ｔｕｂｂｙ２の代謝的または生理学的
機能をいい、類似の活性または改善された活性または望
ましくない副作用を減じられたこれらの活性を包含す
る。上記Ｔｕｂｂｙ２の抗原的および免疫原的活性も包
含する。

【００５３】「Ｔｕｂｂｙ２遺伝子」とは、配列番号：
１に示すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドま
たはその対立遺伝子変種および／またはそれらの相補物
をいう。

【００５４】本明細書で用いる「抗体」とは、ポリクロ
ーナルおよびモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、お
よびヒト化抗体、ならびにＦａｂフラグメントを包含
し、Ｆａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブラリー
の生成物を包含する。

【００５５】「単離」とは、「人間の手により」天然の
状態から変化させられた、すなわち、それが天然に存在
する場合、元来の環境から変化させるもしくは取り除
く、またはその両方を行ったことを意味する。例えばポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然の状態で生
存動物に存在する場合は、「単離」されていないが、同
一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然に共
存する物質から分離されている場合は、本明細書に用い
る用語である、「単離」がなされている。

【００５６】「ポリヌクレオチド」とは、修飾されてい
ないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾されたＲＮＡも
しくはＤＮＡであってよい、任意のポリリボヌクレオチ
ドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを意味する。
「ポリヌクレオチド」は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、
一本鎖および二本鎖領域の混合物または一本鎖、二本鎖
および三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および
二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合
物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより通常的には二本鎖
もしくは三本鎖、または一本鎖および二本鎖領域の混合
物でよいＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子を
意味するが、これに限定するものではない。さらに、本
明細書で用いる「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡもしく
はＤＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本鎖領域
を意味する。本明細書で用いる「ポリヌクレオチド」な
る用語は、一つまたはそれ以上の修飾した塩基を含有す
るＤＮＡまたはＲＮＡ、ならびに安定性またはその他の
理由で修飾した骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡを包含
する。「修飾された」塩基は、例えば、トリチウム化さ
れた塩基およびイノシンのごとき通常でない塩基を包含
する。種々の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡに対して行われ
ている。よって、「ポリヌクレオチド」は、典型的には
天然において見いだされるような化学的、酵素的または
代謝的に修飾された形態のポリヌクレオチド、ならびに
ウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化
学的形態を包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、
しばしばオリゴヌクレオチドと称する短いポリヌクレオ
チドを包含する。

【００５７】「ポリペプチド」は、ペプチド結合または
修飾したペプチド結合により互いに結合している２個ま
たはそれ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたは蛋
白を意味する。「ポリペプチド」は、通常、例えばペプ
チド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称する短
鎖、および一般的に蛋白と称する長鎖の両方を意味す
る。ポリペプチドは２０種の遺伝子によりコードされた
アミノ酸とは異なるアミノ酸を含有できる。「ポリペプ
チド」には、プロセッシングおよびその他の翻訳後修飾
のような天然の工程により修飾されたものが含まれる
が、当業者に周知の化学修飾技術によっても修飾され
る。このような修飾は基礎的な参考書およびさらに詳細
な論文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載されてい
る。同一の型の修飾は該ポリペプチドの幾つかの部位
で、同一または異なる程度で存在し得ることは理解され
よう。また、該ポリペプチドは多くの型の修飾をも含み
得る。ポリペプチドはウビキチネーションの結果であっ
てもよく、環状であってもよく、分岐があってもなくて
もよい。環状、分岐および分岐環状ポリペプチドは翻訳
後の天然ポロセスにより生じたものであってもよく、合
成法により製造されたものであってもよい。修飾は、ペ
プチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキ
シル末端等のポリペプチドの任意の部位で起こりうる。
修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル
化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結
合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結
合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイ
ノシトールの共有結合、交差架橋、環化、ジスルフィド
結合形成、脱メチル化、交差架橋共有結合形成、システ
イン形成、ピログルタメート形成、ホルミル化、ガンマ
−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形
成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸
化、蛋白加水分解プロセッシング、リン酸化、プレニル
化、ラセミ化、グリコシル化、脂質結合、硫酸化、グル
タミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、水酸化および
ＡＤＰリボシル化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル
化のようなトランスファーＲＮＡ媒介の蛋白へのアミノ
酸の添加、ならびにユビキチネーションなどがある。例
えば、Proteins-Structure and Molecular Propertie
s、第２版、T.E.Creighton、W.H.Freeman and Compan
y、ニューヨーク（1993）およびPosttranslationalCova
lent Modification of Proteins、B.C.Johnson編、アカ
デミックプレス、ニューヨーク（1983）のWold,F.,Post
translational Protein Modifications ：Perspective
and Prospects、1〜12頁；Seifterら、Meth.Enzymol.18
2:626-646（1990）およびRattanら、Protein Synthesi
s：Posttranslational Modifications and Aging，Ann.
N.Y.Acad.Sci.663:48-62（1992）参照。

【００５８】本明細書で用いる「変種」なる用語は、対
照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なる
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的
な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変
種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列
が異なる。変種のヌクレオチド配列の差異は、対照ポリ
ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ
酸配列を変化させるものであってもよく、変化させない
ものであってもよい。ヌクレオチドの変化は結果的に、
以下に論じるように、対照配列によりコードされるポリ
ペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠損、融合およ
び末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別
の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的
に差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、全体
的に非常に類似しており、多くの領域で同一であるよう
に限定される。変種および対照ポリペプチドは、１また
はそれ以上の置換、付加、欠損が任意の組み合わせで起
こることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換また
は挿入したアミノ酸残基は、遺伝的コードによりコード
されたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチド
またはポリペプチドの変種は例えば対立遺伝子変種のよ
うな天然発生のものでよいか、または天然に発生するこ
とが知られていない変種でよい。ポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドの非天然発生変種は、突然変異技術、直
接的合成、および当業者に既知のその他の組換え技術に
より製造できる。

【００５９】「同一性」とは、当該分野に周知であるよ
うに、二つもしくはそれ以上のポリペプチド配列また二
つもしくはそれ以上のポリヌクレオチド配列間の関係で
あり、配列を比較して決定する。当該分野において、
「同一性」とは、場合によってはこのような配列の鎖の
適合性により決定できる、ポリペプチドまたはポリヌク
レオチド配列の配列関連性の程度をも意味する。「同一
性」および「類似性」は共に既知の方法により容易に算
出できる（Computational Molecular Biology，Lesk,A.
M.編、オックスフォード・ユニバーシティー・プレス、
ニューヨーク、1988年；Biocomputing：Informatics an
d Genome Projects，Smith,D.W.編、アカデミック・プ
レス、ニューヨーク、1993年；Computer Analysis of S
equence Data，パートＩ，Griffin,A.M.およびGriffin,
H.G.編、ヒューマン・プレス、ニュージャージー、1994
年；Sequence Analysis in Molecular Biology，von He
inje,G.、アカデミック・プレス、1987年；およびSeque
nce Analysis Primer，Gribskov,M.およびDevereux,J.
編、Ｍストックトン・プレス、ニューヨーク、1991
年）。二つの配列の同一性および類似性を測定する方法
は多くあるが、両用語共当業者に周知である（Sequence
Analysis in Molecular Biology，von Heinje,G.、ア
カデミック・プレス、1987年；Sequence Analysis Prim
er，Gribskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトン
・プレス、ニューヨーク、1991年；ならびにCarillo,H.
およびLipman,D.，SIAM J.Applied Math.，48:1073（19
88））。配列間の同一性または類似性を測定するために
通常用いられる方法はCarillo,H.およびLipman,D.，SIA
M J.Applied Math.，48:1073（1988）等に開示されてい
るが、これらに限定するものではない。同一性を決定す
るための好ましい方法は、試験する配列間で最も良く適
合するように設計される。同一性および類似性を決定す
る方法は、コンピュータープログラムに集成されてい
る。二つの配列間の同一性および類似性を測定する好ま
しいコンピュータープログラム法には、ＧＣＧプログラ
ムパッケージ（Devereux,J.ら、Nucleic Acids Researc
h 12(1):387（1984）、BLASTP、BLASTN、およびFASTA
（Atschul,S.F.ら、J.Molec.Biol.215:403-410（199
0）））等があるが、これらに限定するものではない。

【００６０】一例として、配列番号：１のリファレンス
ヌクレオチド配列に対して、例えば少なくとも９５％の
同一性を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオ
チドを挙げると、そのポリヌクレオチドが配列番号：１
のリファレンスヌクレオチド配列のヌクレオチド１００
個ごとに５個までの点突然変異を含みうることを除き、
そのポリヌクレオチドのヌクレオチド配列はリファレン
ス配列と同一である。言い換えると、リファレンスヌク
レオチド配列に対して少なくとも９５％同一であるヌク
レオチドを有するポリヌクレオチドを得るためには、リ
ファレンス配列中の５％までのヌクレオチドが欠失また
は別のヌクレオチドと置換していてもよく、あるいはリ
ファレンス配列中の全ヌクレオチドの５％までの数のヌ
クレオチドがリファレンス配列に挿入されたものであっ
てもよい。リファレンス配列のこれらの変異は、リファ
レンスヌクレオチド配列の５’または３’末端位置に存
在していてもよく、あるいはそれらの末端位置の間のい
ずれかの位置に存在していてもく、リファレンス配列の
ヌクレオチドに散在していてもよく、あるいはリファレ
ンス配列内の１個またはそれ以上の一連の群となってい
てもよい。同様に、配列番号：２のリファレンスアミノ
酸配列に対して少なくとも例えば９５％の同一性を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチドを例に挙げると、
そのポリペプチド配列が配列番号：２のリファレンスア
ミノ酸配列のアミノ酸１００個ごとに５個までのアミノ
酸の変化を含みうることを除き、そのポリペプチドのア
ミノ酸配列はリファレンス配列と同一である。言い換え
ると、リファレンスアミノ酸配列に対して少なくとも９
５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを得
るためには、リファレンス配列中のアミノ酸の５％まで
が置換または他のアミノ酸と置換していてもよく、ある
いはリファレンス配列中の全アミノ酸のうち５％までの
数のアミノ酸がリファレンス配列中に挿入されたもので
あってもよい。リファレンス配列におけるこれらの変化
は、リファレンスアミノ酸配列のアミノまたはカルボキ
シ末端位置に存在してもよく、あるいはそれらの末端間
のいずれかの位置に存在してもよく、リファレンス配列
中に散在していてもよく、あるいはリファレンス配列内
で１個またはそれ以上の一連の群をなしていてもよい。

【００６１】本明細書に引用される特許および特許出願
（これらに限らない）を包含するすべての刊行物を、個
々の刊行物が詳細かつ個々にその全体が本明細書に含ま
れているかのごとく、参照により本明細書に含まれてい
るものとみなす。

【００６２】実施例ＥＳＴ配列（Human Genome Sciences,HGS 1603911）
を、公表されたヒトおよびマウスのｔｕｂｂｙ遺伝子配
列（Kleynら、１９９６年）に対して相同性を有するも
のとして同定した。同じプロジェクトＩＤ（HSXAK37）
を有する黒質ｃＤＮＡライブラリー由来のさらなるＥＳ
Ｔを、新規Ｔｕｂｂｙ２遺伝子のより多くの５’領域に
由来するものと同定した。重複しない各ＥＳＴ配列にお
いてオリゴ（Oligo）を設計し、これらの重複しない配
列間でＰＣＲを行って、得られた生成物をクローン化
し、配列決定した。ＨＧＳおよびＳＢ生成配列のセット
を組み合わせてポリヌクレオチド（配列番号：３）およ
び推定ポリペプチド（配列番号：４）を作成した。この
ＰＣＲの鋳型は、Clontechのラムダｇｔ１１ベクター中
の胎児・脳ｃＤＮＡ（Clontech Laboratories Inc.,403
0 Fabian Way,Palo Alto,CA 94303-40607,USA）であっ
た。ＰＣＲ反応条件は、MJ PTC-100サーマルサイクラー
中、９４℃で４５秒、６０℃で４５秒、７２℃で２分を
３５サイクル繰り返した。ClontechのQuickscreenパネ
ルにより、上記のものと同じプライマーおよび条件を用
いて発現特性を決定した。MJ PTC-100サーマルサイクラ
ー中、９４℃で４０秒、６５℃で３０秒を３５サイクル
行う条件を用いて、GeneBridge4ラジエーションハイブ
リッドパネルにより、オリゴＴｂ３およびＴｂ４を用い
てＴｕｂｂｙ２遺伝子の染色体位置を決定した。これに
より、Ｔｕｂｂｙ２遺伝子が染色体１２Ｐ１３上にある
ことがわかった。

【００６３】

【配列表】

【００６４】（１）一般的情報（ｉ）出願人（Ａ）名称：スミスクライン・ビーチャム・パブリック
・リミテッド・カンパニー（Ｂ）通り名：ニュー・ホライズンズ・コート（Ｃ）都市名：ブレンフォード（Ｄ）州名または県名：ミドルセックス（Ｅ）国名：イギリス（Ｆ）郵便番号：ＴＷ８９ＥＰ（ｉｉ）発明の名称：新規化合物（ｉｉｉ）配列の数：４（ｉｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム：（Ａ）媒体タイプ：ディスケット（Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル（Ｃ）オペレーティング・システム：ＤＯＳ（Ｄ）ソフトウェア：Windowsバージョン２.０用FastSE
Q （ｖ）現出願データ：（Ａ）出願番号：

【００６５】（２）配列番号：１に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１１８０塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号：１： ATGAAGATGC GACAGGCTAA GCTGGATTAT CAGAGGCTAC TACTTGAGAA GAGGCAAAGG 60 AAAAAGCGCC TTGAGCCATT TATGGTGCAG CCCAATCCAG AAGCCAGGCT ACGTCGGGCA 120 AAGCCAAGGG CCAGTGATGA GCAGACTCCC TTGGTGAACT GTCATACTCC CCACAGCAAT 180 GTCATCTTAC ATGGTATTGA TGGTCCAGCT GCTGTCCTGA AACCAGACGA AGTTCATGCT 240 CCATCAGTAA GCTCCTCTGT TGTGGAAGAA GATGCTGAAA ACACCGTGGA TACTGCTTCC 300 AAGCCAGGAC TTCAGGAGCG TCTCCAAAAG CATGATATCT CTGAAAGTGT GAACTTCGAT 360 GAGGAGACTG ATGGAATATC CCAGTCAGCA TGTTTAGAAA GACCCAATTC TGCATCAAGC 420 CAGAATTCAA CCGATACAGG CACTTCCGGT TCTGCTACTG CCGCCCAACC AGCTGATAAC 480 CTCCTGGGAG ACATAGACGA CCTGGAGGAC TTTGTGTATA GTCCTGCCCC TCAAGGTGTC 540 ACAGTAAGAT GTCGGATAAT CCGGGATAAA AGGGGAATGG ATCGGGGTCT CTTCCCCACC 600 TACTATATGT ACTTGGAAAA AGAAGAAAAT CAGAAGATAT TTCTTCTTGC AGCTAGAAAG 660 CGGAAAAAGA GCAAAACAGC CAACTACCTT ATCTCCATTG ATCCAGTTGA TTTATCTCGT 720 GAAGGAGAAA GTTATGTCGG CAAGCTTAGA TCCAACCTCA TGGGGACCAA GTTTACAGTT 780 TATGACCGTG GCATCTGCCC CATGAAGGGC CGGGGTTTGG TAGGAGCGGC CCACACCCGG 840 CAGGAGCTGG CTGCCATCTC CTATGTGAGT GCTGCTTTCC CAGGGCCGCT GCCTGCCCTC 900 CTGGTGTCCT GCTGGCACTT TTCACCTAGT GTCGCTGAAG AACTCCCCTC CCAAGCTTGT 960 TTCTATTTCT GTGATTTCTG TTGCTGTACC ATTTTCTCCA TGTATTTGAG TTTTAGTTAT 1020 TTGAATTGCC AAGTTCAATT ATTTTTCACT CTCAGAACAT TTCTTCCCTT ATTTCCTTTT 1080 CTTTTTTCCT GCTGCCACTT AATTCAGACC TTTACTTCTT ACCCAGTGGC CAAAGGTTAC 1140 AATAAATTAA AGCTGATCTT TTTTTGCTTT TAATCTTTTC 1180

【００６６】（２）配列番号：２に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：３９０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）配列の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号：２： Met Lys Met Arg Gln Ala Lys Leu Asp Tyr Gln Arg Leu Leu Leu Glu 1 5 10 15 Lys Arg Gln Arg Lys Lys Arg Leu Glu Pro Phe Met Val Gln Pro Asn 20 25 30 Pro Glu Ala Arg Leu Arg Arg Ala Lys Pro Arg Ala Ser Asp Glu Gln 35 40 45 Thr Pro Leu Val Asn Cys His Thr Pro His Ser Asn Val Ile Leu His 50 55 60 Gly Ile Asp Gly Pro Ala Ala Val Leu Lys Pro Asp Glu Val His Ala 65 70 75 80 Pro Ser Val Ser Ser Ser Val Val Glu Glu Asp Ala Glu Asn Thr Val 85 90 95 Asp Thr Ala Ser Lys Pro Gly Leu Gln Glu Arg Leu Gln Lys His Asp 100 105 110 Ile Ser Glu Ser Val Asn Phe Asp Glu Glu Thr Asp Gly Ile Ser Gln 115 120 125 Ser Ala Cys Leu Glu Arg Pro Asn Ser Ala Ser Ser Gln Asn Ser Thr 130 135 140 Asp Thr Gly Thr Ser Gly Ser Ala Thr Ala Ala Gln Pro Ala Asp Asn 145 150 155 160 Leu Leu Gly Asp Ile Asp Asp Leu Glu Asp Phe Val Tyr Ser Pro Ala 165 170 175 Pro Gln Gly Val Thr Val Arg Cys Arg Ile Ile Arg Asp Lys Arg Gly 180 185 190 Met Asp Arg Gly Leu Phe Pro Thr Tyr Tyr Met Tyr Leu Glu Lys Glu 195 200 205 Glu Asn Gln Lys Ile Phe Leu Leu Ala Ala Arg Lys Arg Lys Lys Ser 210 215 220 Lys Thr Ala Asn Tyr Leu Ile Ser Ile Asp Pro Val Asp Leu Ser Arg 225 230 235 240 Glu Gly Glu Ser Tyr Val Gly Lys Leu Arg Ser Asn Leu Met Gly Thr 245 250 255 Lys Phe Thr Val Tyr Asp Arg Gly Ile Cys Pro Met Lys Gly Arg Gly 260 265 270 Leu Val Gly Ala Ala His Thr Arg Gln Glu Leu Ala Ala Ile Ser Tyr 275 280 285 Val Ser Ala Ala Phe Pro Gly Pro Leu Pro Ala Leu Leu Val Ser Cys 290 295 300 Trp His Phe Ser Pro Ser Val Ala Glu Glu Leu Pro Ser Gln Ala Cys 305 310 315 320 Phe Tyr Phe Cys Asp Phe Cys Cys Cys Thr Ile Phe Ser Met Tyr Leu 325 330 335 Ser Phe Ser Tyr Leu Asn Cys Gln Val Gln Leu Phe Phe Thr Leu Arg 340 345 350 Thr Phe Leu Pro Leu Phe Pro Phe Leu Phe Ser Cys Cys His Leu Ile 355 360 365 Gln Thr Phe Thr Ser Tyr Pro Val Ala Lys Gly Tyr Asn Lys Leu Lys 370 375 380 Leu Ile Phe Phe Cys Phe 385 390

【００６７】（２）配列番号：３に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：７２９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号：３： GGCACGAGCT TTTTTCCCAG AGGCTACTAC TTGAGAAGAG GCAAAGGAAA AAGCGCCTTG 60 AGCCATTTAT GGTGCAGCCC AATCCAGAAG CCAGGCTACG TCGGGCAAAG CAAGGGCCAG 120 TGATGAGCAG ACTCCCTTGG GTGAACTGTC ATACTCCCCA CAGCAATGTC ATCTTACATG 180 GTATTGATGG TCCAGCTGCT GTCCTGAAAC CAGACGAAGG TTCATGCTCC ATCAGTAAGC 240 TCTCTGTTGT GGAAGAAGAT GCTGAAAACA CCGTGGATAC TGCTTCCAAG CCAGGACTTC 300 AGGAGCGTCT CCAAAAGCAT GATATCTCTG AAAGTGTGAA CTTCGATGAG GAGACTGATG 360 GAATATCCCA GTCAGCATGT TTAGAAAGAC CCAATTCTGC ATCAAGCCAG AATTCAACCG 420 ATACAGGCAC TTCCGGTTCT GCTACTGCCG CCCAACCAGC TGATAACCTC CTGGGAGACA 480 TAGACGACCT GGAGGACTTT GTGTATAGTC CTGCCCCTCA AGGTGTCACA GTAAGATGTC 540 GGATAATCCG GGATAAAAGG GGAATGGATC GGGGTCTCTT CCCCACCTAC TATATGTACT 600 TGGAAAAAGA AGAAAATCAG AAGATATTTC TTCTTGCAGC TAGAAAGCGG AAAAAGAGCA 660 AAACAGCCAA CTACCTTATC TCCATTGATC CAGTTGATTT ATCTCGTGAA GGANAAAGTT 720 ATGTCGGGG 729

【００６８】（２）配列番号：４に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２４２アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）配列の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号：４： His Glu Leu Phe Ser Gln Arg Leu Leu Leu Glu Lys Arg Gln Arg Lys 1 5 10 15 Lys Arg Leu Glu Pro Phe Met Val Gln Pro Asn Pro Glu Ala Arg Leu 20 25 30 Arg Arg Ala Lys Gln Gly Pro Val Met Ser Arg Leu Pro Trp Val Asn 35 40 45 Cys His Thr Pro His Ser Asn Val Ile Leu His Gly Ile Asp Gly Pro 50 55 60 Ala Ala Val Leu Lys Pro Asp Glu Gly Ser Cys Ser Ile Ser Lys Leu 65 70 75 80 Ser Val Val Glu Glu Asp Ala Glu Asn Thr Val Asp Thr Ala Ser Lys 85 90 95 Pro Gly Leu Gln Glu Arg Leu Gln Lys His Asp Ile Ser Glu Ser Val 100 105 110 Asn Phe Asp Glu Glu Thr Asp Gly Ile Ser Gln Ser Ala Cys Leu Glu 115 120 125 Arg Pro Asn Ser Ala Ser Ser Gln Asn Ser Thr Asp Thr Gly Thr Ser 130 135 140 Gly Ser Ala Thr Ala Ala Gln Pro Ala Asp Asn Leu Leu Gly Asp Ile 145 150 155 160 Asp Asp Leu Glu Asp Phe Val Tyr Ser Pro Ala Pro Gln Gly Val Thr 165 170 175 Val Arg Cys Arg Ile Ile Arg Asp Lys Arg Gly Met Asp Arg Gly Leu 180 185 190 Phe Pro Thr Tyr Tyr Met Tyr Leu Glu Lys Glu Glu Asn Gln Lys Ile 195 200 205 Phe Leu Leu Ala Ala Arg Lys Arg Lys Lys Ser Lys Thr Ala Asn Tyr 210 215 220 Leu Ile Ser Ile Asp Pro Val Asp Leu Ser Arg Glu Gly Xaa Ser Tyr 225 230 235 240 Val Gly

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 15/02 Ｃ１２Ｑ 1/00 Ｃ１２Ｐ 21/08 1/68 Ｃ１２Ｑ 1/00 Ａ６１Ｋ 48/00 1/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ // Ａ６１Ｋ 48/00 15/00 Ｃ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (72)発明者ジョナサン・エイ・テレットイギリス、シーエム19・５エイダブリュー、エセックス、ハーロウ、ニュー・フロンティアーズ・サイエンス・パーク・サウス、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ (72)発明者タニア・テスタイギリス、シーエム19・５エイダブリュー、エセックス、ハーロウ、ニュー・フロンティアーズ・サイエンス・パーク・サウス、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ (72)発明者イスラエル・エス・グローガーイギリス、シーエム19・５エイダブリュー、エセックス、ハーロウ、ニュー・フロンティアーズ・サイエンス・パーク・サウス、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ (72)発明者スティーブン・ヒューズイギリス、シーエム19・５エイダブリュー、エセックス、ハーロウ、ニュー・フロンティアーズ・サイエンス・パーク・サウス、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ (72)発明者トルーディ・アール・ドウイギリス、シーエム19・５エイダブリュー、エセックス、ハーロウ、ニュー・フロンティアーズ・サイエンス・パーク・サウス、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号：２の全長にわたって配列番
号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有するアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項２】アミノ酸配列が少なくとも８０％の同一
性を有する請求項１記載の単離ポリペプチド。
【請求項３】アミノ酸配列が少なくとも９０％の同一
性を有する請求項１記載の単離ポリペプチド。
【請求項４】配列番号：２のアミノ酸配列を含む請求
項１記載のポリペプチド。
【請求項５】配列番号：２のポリペプチド。
【請求項６】コーディング領域全体にわたって配列番
号：２のポリペプチドをコードしているヌクレオチド配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオ
チド配列を含む単離ポリヌクレオチド；あるいは該単離
ポリヌクレオチドに対して相補的なヌクレオチド配列。
【請求項７】ヌクレオチド配列が少なくとも８０％の
同一性を有する請求項６記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８】ヌクレオチド配列が少なくとも９０％の
同一性を有する請求項６記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９】配列番号：２のポリペプチドをコードし
ている配列番号：１中に含まれるヌクレオチド配列を含
む単離ポリヌクレオチド；あるいは該単離ポリヌクレオ
チドに対して相補的なヌクレオチド配列。
【請求項１０】配列番号：１の全長にわたり配列番
号：１のヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の
同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレ
オチド；あるいは該単離ポリヌクレオチドに対して相補
的なヌクレオチド配列。
【請求項１１】ヌクレオチド配列が少なくとも８０％
の同一性を有する請求項１０記載の単離ポリヌクレオチ
ド。
【請求項１２】ヌクレオチド配列が少なくとも９０％
の同一性を有する請求項１０記載の単離ポリヌクレオチ
ド。
【請求項１３】配列番号：１のポリヌクレオチドであ
る請求項１０のポリヌクレオチド。
【請求項１４】適合する宿主細胞中に存在する場合
に、請求項１のポリペプチドを含むポリペプチドを生成
しうるＤＮＡまたはＲＮＡ分子を含んでなる発現系。
【請求項１５】請求項１４の発現系を含む宿主細胞。
【請求項１６】該ポリペプチドを生成するに十分な条
件下で請求項１５の宿主細胞を培養し、次いで、培養物
からポリペプチドを回収することを特徴とする、ポリペ
プチドの製造方法。
【請求項１７】請求項１のポリペプチドに対して免疫
特異的な抗体。
【請求項１８】請求項１のポリペプチドに対するアゴ
ニストまたはアンタゴニスト。
【請求項１９】治療に使用される請求項１のポリペプ
チドに対するアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項２０】コーディング領域の全長にわたり配列
番号：２のポリペプチドをコードしているヌクレオチド
配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレ
オチド配列を含む、治療に使用される単離ポリヌクレオ
チド、あるいは該ヌクレオチド配列に対して相補的な、
治療に使用されるヌクレオチド配列。
【請求項２１】請求項１のポリペプチドをコードして
いるヌクレオチド配列の発現を阻害する、治療に使用さ
れる核酸分子。
【請求項２２】リガンド、基質、または受容体を求め
て請求項１のポリペプチドと競争する、治療に使用され
るポリペプチド。
【請求項２３】対象における請求項１のポリペプチド
の発現または活性に関連した対象における疾病または疾
病に対する感受性の診断方法であって、（ａ）該対象のゲノムにおいて該ポリペプチドをコード
しているヌクレオチド配列中の変異の有無を決定するこ
と；そして／または（ｂ）該対象由来の試料中の該ポリペプチドの発現の存
在または量を分析することを特徴とする方法。
【請求項２４】配列番号：１の配列またはそのフラグ
メントを有する標識プローブを用いて、厳密なハイブリ
ダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリー
ニングすることにより得ることのできるポリヌクレオチ
ド。
【請求項２５】配列番号：４の推定アミノ酸配列によ
り特徴づけられるＴｕｂｂｙ２ポリペプチド、またはそ
のフラグメント。
【請求項２６】配列番号：４のアミノ酸配列を有する
ポリペプチド。
【請求項２７】配列番号：４の推定アミノ酸配列によ
り特徴づけられるポリペプチドをコードしているポリヌ
クレオチド。
【請求項２８】配列番号：３に示される部分ＤＮＡ配
列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２９】配列番号：３に示される配列を有する
ポリヌクレオチド。