JPH10327894A - ターゲット系 - Google Patents
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- C07K—PEPTIDES
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 タンパク質ヒスチジン／シス
テイン・ホスファターゼとして作用することによって、
ＰＴＳを脱共役する化合物の発見をもたらす分析法を開
示する。 【解決手段】 薬物ターゲット系としての細
菌ホスホトランスフェラーゼ系（ＰＴＳ）は炭水化物の
吸収とリン酸化とを触媒する。これはさらにシグナル伝
達、例えばカタボライト抑制、化学走性及び代謝酵素と
輸送体とのアロステリック制御に関係する。これは細菌
中に偏在するが、真核細胞中には発生しない。この偏在
性とプレイオトロピック機能とがＰＴＳを新しい抗菌剤
を開発するためのターゲットにさせる。ＰＴＳの脱共役
は炭水化物輸送の阻害、カタボライト制御遺伝子（例え
ば、毒性遺伝子）の抑制、及びホスホエノールピルベー
トの消耗を生じる。
テイン・ホスファターゼとして作用することによって、
ＰＴＳを脱共役する化合物の発見をもたらす分析法を開
示する。 【解決手段】 薬物ターゲット系としての細
菌ホスホトランスフェラーゼ系（ＰＴＳ）は炭水化物の
吸収とリン酸化とを触媒する。これはさらにシグナル伝
達、例えばカタボライト抑制、化学走性及び代謝酵素と
輸送体とのアロステリック制御に関係する。これは細菌
中に偏在するが、真核細胞中には発生しない。この偏在
性とプレイオトロピック機能とがＰＴＳを新しい抗菌剤
を開発するためのターゲットにさせる。ＰＴＳの脱共役
は炭水化物輸送の阻害、カタボライト制御遺伝子（例え
ば、毒性遺伝子）の抑制、及びホスホエノールピルベー
トの消耗を生じる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は新規な、高度に特異
性の抗菌剤を同定するための薬物ターゲット系に関す
る。
性の抗菌剤を同定するための薬物ターゲット系に関す
る。
【０００２】
【発明が解決しようとする課題】伝染病はあらゆる年齢
層を襲い、世界的規模での全ての死亡の１／３の原因で
ある。呼吸性感染症、下痢性疾患、結核、新生児破傷風
並びに百日咳が細菌感染症の中でも最も顕著である。感
染症は人口増加、都会化によって、抗生物質耐性の発生
をもたらす抗生物質使用の拡大のためでは決してなく、
なお増加している。細菌の薬物耐性の発生率の増加は、
抗菌療法の新たなターゲットを同定して、これらの系の
阻害剤を発見することを必要とする。細菌ホスホトラン
スフェラーゼ系（ＰＴＳ）がこのようなターゲットの１
つであることが判明した（新規な、特異性抗菌剤の同定
に関しては、図１を比較のこと）。
層を襲い、世界的規模での全ての死亡の１／３の原因で
ある。呼吸性感染症、下痢性疾患、結核、新生児破傷風
並びに百日咳が細菌感染症の中でも最も顕著である。感
染症は人口増加、都会化によって、抗生物質耐性の発生
をもたらす抗生物質使用の拡大のためでは決してなく、
なお増加している。細菌の薬物耐性の発生率の増加は、
抗菌療法の新たなターゲットを同定して、これらの系の
阻害剤を発見することを必要とする。細菌ホスホトラン
スフェラーゼ系（ＰＴＳ）がこのようなターゲットの１
つであることが判明した（新規な、特異性抗菌剤の同定
に関しては、図１を比較のこと）。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明は、新規な特異性
抗菌物質の薬物ターゲット系であって、（ａ）系の一部
ではない、好ましくは、自然に若しくは非特異的内因性
ホスホヒドロラーゼの影響下で加水分解するホスホリル
基受容体を用いることによって、又は（ｂ）ホスホトラ
ンスフェラーゼ系の酵素の少なくとも１種をブロックす
る又は不活化する化学化合物によって、ホスホトランス
フェラーゼ系の活性を阻害することによって細菌ホスホ
トランスフェラーゼ系を脱共役する又は阻害することを
含む薬物ターゲット系に関する。
抗菌物質の薬物ターゲット系であって、（ａ）系の一部
ではない、好ましくは、自然に若しくは非特異的内因性
ホスホヒドロラーゼの影響下で加水分解するホスホリル
基受容体を用いることによって、又は（ｂ）ホスホトラ
ンスフェラーゼ系の酵素の少なくとも１種をブロックす
る又は不活化する化学化合物によって、ホスホトランス
フェラーゼ系の活性を阻害することによって細菌ホスホ
トランスフェラーゼ系を脱共役する又は阻害することを
含む薬物ターゲット系に関する。
【０００４】さらに、本発明は前記薬物ターゲット系を
用いることによって同定される新規な抗菌剤に関する。
用いることによって同定される新規な抗菌剤に関する。
【０００５】
【発明の実施の形態】以下では、図面に基づいて、本発
明をさらに詳しく説明する。
明をさらに詳しく説明する。
【０００６】図１は、細菌ホスホエノールピルベート依
存性ホスホトランスフェラーゼ系を示す。ホスホリル基
は連続的にホスホエノールピルベート（Ｐ−Ｐｒｖ）か
らＨＰｒに、したがって、炭水化物及びポリアルコール
（ＩＩＡsugar、ＩＩＢsugar、ＩＩＣsugar）のための
種々な輸送体に移される。酵素Ｉ、グルコース輸送体の
ＩＩＡGlcサブユニット、Ｅ．ｃｏｌｉ及び他の可能な
グラム陰性菌のβ−グルコシドのＩＩＢBgl、並びに
Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及び他のグラム陽性菌のＨＰｒは
調節機能を有する。Ｘは仮定の阻害剤である。理想的に
は、Ｘを酵素Ｉによってリン酸化して、次に自然に加水
分解させ、それによってタンパク質リン酸化を脱共役す
べきである。
存性ホスホトランスフェラーゼ系を示す。ホスホリル基
は連続的にホスホエノールピルベート（Ｐ−Ｐｒｖ）か
らＨＰｒに、したがって、炭水化物及びポリアルコール
（ＩＩＡsugar、ＩＩＢsugar、ＩＩＣsugar）のための
種々な輸送体に移される。酵素Ｉ、グルコース輸送体の
ＩＩＡGlcサブユニット、Ｅ．ｃｏｌｉ及び他の可能な
グラム陰性菌のβ−グルコシドのＩＩＢBgl、並びに
Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及び他のグラム陽性菌のＨＰｒは
調節機能を有する。Ｘは仮定の阻害剤である。理想的に
は、Ｘを酵素Ｉによってリン酸化して、次に自然に加水
分解させ、それによってタンパク質リン酸化を脱共役す
べきである。
【０００７】図２は、組合せライブラリーからの阻害性
化合物のスクリーニング、選択及び特徴付けの分析法を
説明する。実験的に測定することができる反応生成物は
ボックスで囲む。阻害性化合物Ｘは可溶性形であること
も、糸状ファージに固定されることも、マイクロタイタ
ー孔に結合することもできる。ＧｌｃＮＡｃの輸送体
（灰色に陰影）は単ポリペプチド鎖のドメインとしてＩ
ＩＡ、ＩＩＢ及びＩＩＣ機能単位を含む。
化合物のスクリーニング、選択及び特徴付けの分析法を
説明する。実験的に測定することができる反応生成物は
ボックスで囲む。阻害性化合物Ｘは可溶性形であること
も、糸状ファージに固定されることも、マイクロタイタ
ー孔に結合することもできる。ＧｌｃＮＡｃの輸送体
（灰色に陰影）は単ポリペプチド鎖のドメインとしてＩ
ＩＡ、ＩＩＢ及びＩＩＣ機能単位を含む。
【０００８】図３は、ファージ展示ライブラリーから酵
素Ｉ結合ペプチドの選択を説明する。Ｍ１３ファージを
酵素Ｉによってパンニングして、酵素Ｉ結合ファージを
富化させた。次に“高アフィニティ”ファージによって
トランスフェクトしたＥ．ｃｏｌｉクローンをニトロセ
ルロースシート上で増殖させ、分泌されたニトロセルロ
ース結合ファージを［32Ｐ］ホスホエノールピルベート
の存在下で酵素Ｉのオーバーレイと共に一晩インキュベ
ートした。リン酸化ファージを蛍光イメージャーによっ
て同定して、配列決定した。平均よりも２５〜３０倍に
リン酸化されたファージ展示配列を化学的に合成して、
それらの生物学的活性を特徴付けた。結果は表１に要約
する。
素Ｉ結合ペプチドの選択を説明する。Ｍ１３ファージを
酵素Ｉによってパンニングして、酵素Ｉ結合ファージを
富化させた。次に“高アフィニティ”ファージによって
トランスフェクトしたＥ．ｃｏｌｉクローンをニトロセ
ルロースシート上で増殖させ、分泌されたニトロセルロ
ース結合ファージを［32Ｐ］ホスホエノールピルベート
の存在下で酵素Ｉのオーバーレイと共に一晩インキュベ
ートした。リン酸化ファージを蛍光イメージャーによっ
て同定して、配列決定した。平均よりも２５〜３０倍に
リン酸化されたファージ展示配列を化学的に合成して、
それらの生物学的活性を特徴付けた。結果は表１に要約
する。
【０００９】図４は、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１２ ＵＴ５８
０の増殖阻害を説明する。ペプチドをフィルターディス
クに加えて、ＬＢ軟寒天中の細胞培養物上に置いた。透
明な帯(clear zone)は増殖阻害を示唆する（パネル
Ａ）。ペプチドの増殖阻害活性はそれらのＩＣ50に逆比
例的に(inversely)相関する（パネルＢ）。数値は表１
に列挙したペプチドを意味する。
０の増殖阻害を説明する。ペプチドをフィルターディス
クに加えて、ＬＢ軟寒天中の細胞培養物上に置いた。透
明な帯(clear zone)は増殖阻害を示唆する（パネル
Ａ）。ペプチドの増殖阻害活性はそれらのＩＣ50に逆比
例的に(inversely)相関する（パネルＢ）。数値は表１
に列挙したペプチドを意味する。
【００１０】ＰＴＳは一方では炭水化物及びヘキシトー
ルの輸送及びリン酸化において、他方ではシグナル伝達
において二重の役割を果たしている。ＰＴＳの二重機能
の分子的基礎は、ホスホエノールピルベートからホスホ
リル基を輸送された炭水化物又はポリアルコールへ連続
的に転移させる４個のリンタンパク質単位を含むタンパ
ク質リン酸化カスケードである（図１）。ホスホリル転
移はホスホヒスチジン及びホスホシステイン中間体を介
して生ずる（検討のためには、Ｍｅａｄｏｗ等，１９９
０，Ｅｒｎｉ，１９９２；Ｐｏｓｔｍａ等，１９９３，
ＳａｉｅｒとＲｅｉｚｅｒ，１９９４；Ｓａｉｅｒ等，
１９９５）。酵素Ｉ（Ｅｎｚ．Ｉ）と名付けられた、カ
スケード ホスホエノールピルベート−タンパク質−ホ
スファターゼにおける第１ユニット（Ｅ．Ｃ．２．７．
３．９）は可溶性二ドメインタンパク質である（ＬｉＣ
ａｌｓｉ等，１９９１；Ｓｅｏｋ等，１９９６）。これ
はホスホエノールピルベートから第２成分の小（９ｋ
Ｄ）可溶性ホスホリルキャリヤータンパク質ＨＰｒへの
ホスホリル転移を触媒する。次に、ＨＰｒ自体が種々な
ＰＴＳ輸送体（糖及び／又は、ホスホトランスフェラー
ゼ酵素ＩＩＡ、ホスホトランスフェラーゼ酵素ＩＩＢＣ
と呼ばれ、全てＥＣ２．７．１．６９と番号を付けられ
た、ポリアルコール特異的ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＣサブ
ユニット；Ｌｅｇｅｌｅｒ等，１９９４）へのホスホリ
ル供与体として役立つ。これらの輸送体は、転座を輸送
された溶質のリン酸化と関連づける機構によって、糖と
ポリアルコールとの吸収を仲介する（図１）。糖及び／
又はポリアルコールの輸送とリン酸化の他に、ＰＴＳは
グラム陰性菌とグラム陽性菌の両方における多様な生理
的プロセス、例えば、カタボライト抑制、ＰＴＳの基質
ではない炭水化物の輸送、炭素とエネルギーの代謝、炭
素貯蔵、窒素代謝と炭素代謝との連係(coordination o
f nitrogen with carbon metabolism)、並びに化学
走性をも調節する（Ｐｏｗｅｌｌ等，１９９５；Ｓａｉ
ｅｒとＲｅｉｚｅｒ，１９９４）。ＰＴＳによるシグナ
ル伝達はリン酸化形と非リン酸化形との間のタンパク質
のサイクリック・インターコンバージョンに基づく。こ
れらの２つの形は代謝酵素と転写因子との活性をアロス
テリックにかつリン酸化によって制御する（検討のため
には、Ｐｏｓｔｍａ等，１９９３を参照のこと）。ＰＴ
Ｓが存在して、細胞によって取り入れられると、ＰＴＳ
タンパク質の脱リン酸化形の濃度が上昇する。ＰＴＳ基
質の不存在下ではリン酸化種が優勢である。グラム陰性
菌のリン酸化ＩＩＡはアデニル酸シクラーゼを刺激する
ことによって、カタボライト制御遺伝子のｃＡＭＰ依存
性転写を刺激する（図１）。脱リン酸化ＩＩＡはグリセ
ロールキナーゼ（Ｈｕｒｌｅｙ等，１９９３）、マルト
ース、ラクトース、メリビオース、ラフィノースの輸送
体を阻害し、最も可能には、まだ知られていない他の酵
素を阻害する（検討のためには、Ｓａｉｅｒ，１９９
３；Ｔｉｇｅｍｅｉｙｅｒ等，１９９４；Ｓａｉｅｒ
等，１９９５を参照のこと）。 グラム陽性菌では、Ｉ
ＩＡの代わりにＨＰｒがカタボライト抑制に関与する
（Ｓａｉｅｒ等，１９９５）。グラム陽性菌のＨＰｒは
Ｓｅｒ４６においてＡＴＰ依存性ＨＰｒ特異的タンパク
質キナーゼによってリン酸化される。リン酸化ＨＰｒは
カタボライト制御タンパク質Ａ（ＣｅｐＡ）リプレッサ
ーに結合して、ＣｃｐＡの調節ＤＮＡ領域へのアフィニ
ティを高めることによってコリプレッサー(corepresso
r)として作用する（Ｓａｉｅｒ等，１９９５において検
討）。
ルの輸送及びリン酸化において、他方ではシグナル伝達
において二重の役割を果たしている。ＰＴＳの二重機能
の分子的基礎は、ホスホエノールピルベートからホスホ
リル基を輸送された炭水化物又はポリアルコールへ連続
的に転移させる４個のリンタンパク質単位を含むタンパ
ク質リン酸化カスケードである（図１）。ホスホリル転
移はホスホヒスチジン及びホスホシステイン中間体を介
して生ずる（検討のためには、Ｍｅａｄｏｗ等，１９９
０，Ｅｒｎｉ，１９９２；Ｐｏｓｔｍａ等，１９９３，
ＳａｉｅｒとＲｅｉｚｅｒ，１９９４；Ｓａｉｅｒ等，
１９９５）。酵素Ｉ（Ｅｎｚ．Ｉ）と名付けられた、カ
スケード ホスホエノールピルベート−タンパク質−ホ
スファターゼにおける第１ユニット（Ｅ．Ｃ．２．７．
３．９）は可溶性二ドメインタンパク質である（ＬｉＣ
ａｌｓｉ等，１９９１；Ｓｅｏｋ等，１９９６）。これ
はホスホエノールピルベートから第２成分の小（９ｋ
Ｄ）可溶性ホスホリルキャリヤータンパク質ＨＰｒへの
ホスホリル転移を触媒する。次に、ＨＰｒ自体が種々な
ＰＴＳ輸送体（糖及び／又は、ホスホトランスフェラー
ゼ酵素ＩＩＡ、ホスホトランスフェラーゼ酵素ＩＩＢＣ
と呼ばれ、全てＥＣ２．７．１．６９と番号を付けられ
た、ポリアルコール特異的ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＣサブ
ユニット；Ｌｅｇｅｌｅｒ等，１９９４）へのホスホリ
ル供与体として役立つ。これらの輸送体は、転座を輸送
された溶質のリン酸化と関連づける機構によって、糖と
ポリアルコールとの吸収を仲介する（図１）。糖及び／
又はポリアルコールの輸送とリン酸化の他に、ＰＴＳは
グラム陰性菌とグラム陽性菌の両方における多様な生理
的プロセス、例えば、カタボライト抑制、ＰＴＳの基質
ではない炭水化物の輸送、炭素とエネルギーの代謝、炭
素貯蔵、窒素代謝と炭素代謝との連係(coordination o
f nitrogen with carbon metabolism)、並びに化学
走性をも調節する（Ｐｏｗｅｌｌ等，１９９５；Ｓａｉ
ｅｒとＲｅｉｚｅｒ，１９９４）。ＰＴＳによるシグナ
ル伝達はリン酸化形と非リン酸化形との間のタンパク質
のサイクリック・インターコンバージョンに基づく。こ
れらの２つの形は代謝酵素と転写因子との活性をアロス
テリックにかつリン酸化によって制御する（検討のため
には、Ｐｏｓｔｍａ等，１９９３を参照のこと）。ＰＴ
Ｓが存在して、細胞によって取り入れられると、ＰＴＳ
タンパク質の脱リン酸化形の濃度が上昇する。ＰＴＳ基
質の不存在下ではリン酸化種が優勢である。グラム陰性
菌のリン酸化ＩＩＡはアデニル酸シクラーゼを刺激する
ことによって、カタボライト制御遺伝子のｃＡＭＰ依存
性転写を刺激する（図１）。脱リン酸化ＩＩＡはグリセ
ロールキナーゼ（Ｈｕｒｌｅｙ等，１９９３）、マルト
ース、ラクトース、メリビオース、ラフィノースの輸送
体を阻害し、最も可能には、まだ知られていない他の酵
素を阻害する（検討のためには、Ｓａｉｅｒ，１９９
３；Ｔｉｇｅｍｅｉｙｅｒ等，１９９４；Ｓａｉｅｒ
等，１９９５を参照のこと）。 グラム陽性菌では、Ｉ
ＩＡの代わりにＨＰｒがカタボライト抑制に関与する
（Ｓａｉｅｒ等，１９９５）。グラム陽性菌のＨＰｒは
Ｓｅｒ４６においてＡＴＰ依存性ＨＰｒ特異的タンパク
質キナーゼによってリン酸化される。リン酸化ＨＰｒは
カタボライト制御タンパク質Ａ（ＣｅｐＡ）リプレッサ
ーに結合して、ＣｃｐＡの調節ＤＮＡ領域へのアフィニ
ティを高めることによってコリプレッサー(corepresso
r)として作用する（Ｓａｉｅｒ等，１９９５において検
討）。
【００１１】最近の研究は、カタボライト抑制が毒性(v
irulence)因子の発現に関係することを明らかにしてい
る。アデニル酸シクラーゼを有さないＳ．ｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍはマウスに対して無毒性である（Ｃｕｒｔｉ
ｓｓとＫｅｌｌｙ，１９８７；Ｃｕｒｔｉｓｓ等，１９
８８）。同様に、機能的アデニル酸シクラーゼを有さな
いＳ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ突然変異体も無毒性で
あり、このことは細胞付着又は細胞侵入に関与する遺伝
子がカタボライト制御下にありうることを示唆する（Ｋ
ｅｌｌｙ等，１９９２）。ベロ細胞毒素を産生するＥ．
ｃｏｌｉは、ＰＴＳ糖マンノースの存在下で増殖すると
きに接着の顕著な阻害を示し、このことは毒性遺伝子の
発現がカタボライト抑制を介してＰＴＳによって制御さ
れうることをさらに示唆した（Ｎｉｓｈｉｋａｗａ等，
１９９５）。
irulence)因子の発現に関係することを明らかにしてい
る。アデニル酸シクラーゼを有さないＳ．ｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍはマウスに対して無毒性である（Ｃｕｒｔｉ
ｓｓとＫｅｌｌｙ，１９８７；Ｃｕｒｔｉｓｓ等，１９
８８）。同様に、機能的アデニル酸シクラーゼを有さな
いＳ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ突然変異体も無毒性で
あり、このことは細胞付着又は細胞侵入に関与する遺伝
子がカタボライト制御下にありうることを示唆する（Ｋ
ｅｌｌｙ等，１９９２）。ベロ細胞毒素を産生するＥ．
ｃｏｌｉは、ＰＴＳ糖マンノースの存在下で増殖すると
きに接着の顕著な阻害を示し、このことは毒性遺伝子の
発現がカタボライト抑制を介してＰＴＳによって制御さ
れうることをさらに示唆した（Ｎｉｓｈｉｋａｗａ等，
１９９５）。
【００１２】しかし、ＰＴＳ機能が実験室における複合
培地(complex medium)上でのＥ．ｃｏｌｉの増殖のた
めに不必要であることに言及しなければならない。しか
し、ＰＴＳ ＥｎｚＩ突然変異体は唯一つの炭素源とし
てＰＴＳ基質を含有する特定培地(defined medium)上
で増殖することができない。これらは非ＰＴＳ基質を含
有する他の特定培地上でも増殖しないか、又は困難さを
伴って増殖する。
培地(complex medium)上でのＥ．ｃｏｌｉの増殖のた
めに不必要であることに言及しなければならない。しか
し、ＰＴＳ ＥｎｚＩ突然変異体は唯一つの炭素源とし
てＰＴＳ基質を含有する特定培地(defined medium)上
で増殖することができない。これらは非ＰＴＳ基質を含
有する他の特定培地上でも増殖しないか、又は困難さを
伴って増殖する。
【００１３】上述したように、細菌ホスホトランスフェ
ラーゼ系は、特にＰＴＳは細菌中に偏在するが、真核細
胞中には発生しないので、抗菌療法のターゲットであ
る。このことは有害な副作用を最小にする。ＰＴＳは、
細胞壁合成又はＤＮＡ複製とは異なり、活性であり続け
るので、非増殖細胞及び緩慢増殖細胞中では傷つき易
い。複製及び細胞分割が停止した後長く経過した定常期
細胞では代謝エネルギーが必要である。
ラーゼ系は、特にＰＴＳは細菌中に偏在するが、真核細
胞中には発生しないので、抗菌療法のターゲットであ
る。このことは有害な副作用を最小にする。ＰＴＳは、
細胞壁合成又はＤＮＡ複製とは異なり、活性であり続け
るので、非増殖細胞及び緩慢増殖細胞中では傷つき易
い。複製及び細胞分割が停止した後長く経過した定常期
細胞では代謝エネルギーが必要である。
【００１４】ＰＴＳをターゲットとする抗菌剤は次の機
能的特性を有するべきである：（i）これは、ＰＴＳタ
ンパク質が脱リン酸化状態で留まるように、リン酸化カ
スケードに沿ってのホスホリル基の流れを中断すべきで
ある。脱リン酸化タンパク質は、ＰＴＳ糖が培地中に存
在しないとしてもＰＴＳ糖が豊富に存在すると誤ったシ
グナルを送る。この結果、カタボライト制御下で毒性因
子は発現することができず、宿主中に存在しうる他の栄
養素(alternative nutrient)は効果的に代謝されるこ
とができない。（ii）これは酵素Ｉ又は任意の他のＰＴ
Ｓタンパク質に対してタンパク質ヒスチジンホスファタ
ーゼとして作用すべきである。このように、これはホス
ホリル転移連鎖をブロックするのみでなく、脱共役もす
るので、ホスホエノールピルベートが無益回路で消費さ
れるという効果をもたらす。これは細胞から基質レベル
のリン酸化のためのエネルギーキャリヤーと、生合成反
応（オキサロアセテートのアナプレロティック合成、糖
新生、芳香族アミノ酸生合成）の重要な基本成分とを取
り上げる。２つの効果、ホスホエノールピルベートの消
耗とカタボライト制御遺伝子の抑制は、細胞増殖と伝染
性とを弱めるために充分である。
能的特性を有するべきである：（i）これは、ＰＴＳタ
ンパク質が脱リン酸化状態で留まるように、リン酸化カ
スケードに沿ってのホスホリル基の流れを中断すべきで
ある。脱リン酸化タンパク質は、ＰＴＳ糖が培地中に存
在しないとしてもＰＴＳ糖が豊富に存在すると誤ったシ
グナルを送る。この結果、カタボライト制御下で毒性因
子は発現することができず、宿主中に存在しうる他の栄
養素(alternative nutrient)は効果的に代謝されるこ
とができない。（ii）これは酵素Ｉ又は任意の他のＰＴ
Ｓタンパク質に対してタンパク質ヒスチジンホスファタ
ーゼとして作用すべきである。このように、これはホス
ホリル転移連鎖をブロックするのみでなく、脱共役もす
るので、ホスホエノールピルベートが無益回路で消費さ
れるという効果をもたらす。これは細胞から基質レベル
のリン酸化のためのエネルギーキャリヤーと、生合成反
応（オキサロアセテートのアナプレロティック合成、糖
新生、芳香族アミノ酸生合成）の重要な基本成分とを取
り上げる。２つの効果、ホスホエノールピルベートの消
耗とカタボライト制御遺伝子の抑制は、細胞増殖と伝染
性とを弱めるために充分である。
【００１５】あらゆるＰＴＳタンパク質のなかで、酵素
Ｉは好ましくは−排他的ではなく−次の理由から選択す
べきターゲットである。
Ｉは好ましくは−排他的ではなく−次の理由から選択す
べきターゲットである。
【００１６】酵素ＩはＰＴＳ系を含有する全ての細菌中
で発見されている。ＥＭＢＬタンパク質データバンクに
は少なくとも１７種類の酵素Ｉ配列が挙げられている。
例えば、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕ
ｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｎｅｚａｅの完
全なゲノムと、Ｅ．ｃｏｌｉのほぼ完全なゲノムとの比
較は、酵素ＩとＨＰｒが常に存在することを確認する。
比較のために、糖特異性ＰＴＳ輸送体の数と種類は異な
る種の間で強く変化する。
で発見されている。ＥＭＢＬタンパク質データバンクに
は少なくとも１７種類の酵素Ｉ配列が挙げられている。
例えば、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕ
ｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｎｅｚａｅの完
全なゲノムと、Ｅ．ｃｏｌｉのほぼ完全なゲノムとの比
較は、酵素ＩとＨＰｒが常に存在することを確認する。
比較のために、糖特異性ＰＴＳ輸送体の数と種類は異な
る種の間で強く変化する。
【００１７】ＰＴＳの酵素は原核系(prokaryotic king
dom)における最大のアミノ酸配列類似性と真核系(eukar
yotic kingdom)からのタンパク質に対する最小のアミ
ノ酸配列類似性とを有する最良に保存されたタンパク質
の１種であると思われる。この理由から、酵素Ｉの阻害
剤及び／又は脱共役剤はそのターゲットに対する強い選
択性を有し、それ故に、真核細胞に関して非常に低下し
た（存在するとしても）副作用を有することを予想する
ことができる。
dom)における最大のアミノ酸配列類似性と真核系(eukar
yotic kingdom)からのタンパク質に対する最小のアミ
ノ酸配列類似性とを有する最良に保存されたタンパク質
の１種であると思われる。この理由から、酵素Ｉの阻害
剤及び／又は脱共役剤はそのターゲットに対する強い選
択性を有し、それ故に、真核細胞に関して非常に低下し
た（存在するとしても）副作用を有することを予想する
ことができる。
【００１８】酵素Ｉはホスホリル基をホスホエノールピ
ルベートからホスホリルキャリヤータンパク質ＨＰｒへ
転移させる。これが分岐カスケードにおける第１反応で
ある（図１を比較のこと）。それ故、これの阻害は最も
多面的な効果を有する。
ルベートからホスホリルキャリヤータンパク質ＨＰｒへ
転移させる。これが分岐カスケードにおける第１反応で
ある（図１を比較のこと）。それ故、これの阻害は最も
多面的な効果を有する。
【００１９】上記で説明した薬物ターゲット系を用い
て、細菌ホスホトランスフェラーゼ系に向けられた、特
に（排他的ではなく）酵素Ｉに向けられた抗菌性化合物
が同定されている。これを達成するために、図１に示し
たＥ．ｃｏｌｉのあらゆる関連ＰＴＳタンパク質が精製
されて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再構成されている。すぐ使
用可能な(at hand)これらのタンパク質によって、下記
目的が達成されている。
て、細菌ホスホトランスフェラーゼ系に向けられた、特
に（排他的ではなく）酵素Ｉに向けられた抗菌性化合物
が同定されている。これを達成するために、図１に示し
たＥ．ｃｏｌｉのあらゆる関連ＰＴＳタンパク質が精製
されて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再構成されている。すぐ使
用可能な(at hand)これらのタンパク質によって、下記
目的が達成されている。
【００２０】化学化合物及びペプチドライブラリーをＰ
ＴＳタンパク質への結合、ＰＴＳ活性の阻害及びタンパ
ク質ホスファターゼ活性に関して迅速スクリーニングす
るためのｉｎ ｖｉｔｒｏ分析法の開発。
ＴＳタンパク質への結合、ＰＴＳ活性の阻害及びタンパ
ク質ホスファターゼ活性に関して迅速スクリーニングす
るためのｉｎ ｖｉｔｒｏ分析法の開発。
【００２１】酵素ＩとＨＰｒとの間のホスホリル転移を
阻害する化学化合物及びペプチドの探索（このようなペ
プチドの例を列挙した表１を比較のこと）。
阻害する化学化合物及びペプチドの探索（このようなペ
プチドの例を列挙した表１を比較のこと）。
【００２２】タンパク質ホスファターゼ活性を有する化
学化合物及びペプチドの探索。
学化合物及びペプチドの探索。
【００２３】化合物及びペプチド（酵素Ｉの強力な競合
阻害剤として作用する）の、自殺−阻害剤及び脱共役剤
への転化。脱共役剤の構成は、活性ヒスチジンの求核イ
ミダゾール環の、Ｎ−アルキルイミダゾール、チアゾリ
ウム環及び／又は同様な反応性の他の複素環化合物によ
る置換を包含する。このような基は酵素Ｉに結合したホ
スホリル基とイミダゾールと同様に反応する。しかし、
イミダゾリウムホスフェートとは異なり、Ｎ−アルキル
イミダゾリウム／チアゾリウムホスフェートは脱プロト
ンによって安定化されることができず、直ちに加水分解
される。自殺−阻害剤の構成は適当に置換したα，β−
不飽和チオール及び他の求核基を含み、これらの基はリ
ン酸化時に良好な脱離基（例えば、ホスフェートチオエ
ステル）になる。このような脱離基はβ−炭素における
タンパク質求核剤によるビニログ求核置換を促進する。
阻害剤として作用する）の、自殺−阻害剤及び脱共役剤
への転化。脱共役剤の構成は、活性ヒスチジンの求核イ
ミダゾール環の、Ｎ−アルキルイミダゾール、チアゾリ
ウム環及び／又は同様な反応性の他の複素環化合物によ
る置換を包含する。このような基は酵素Ｉに結合したホ
スホリル基とイミダゾールと同様に反応する。しかし、
イミダゾリウムホスフェートとは異なり、Ｎ−アルキル
イミダゾリウム／チアゾリウムホスフェートは脱プロト
ンによって安定化されることができず、直ちに加水分解
される。自殺−阻害剤の構成は適当に置換したα，β−
不飽和チオール及び他の求核基を含み、これらの基はリ
ン酸化時に良好な脱離基（例えば、ホスフェートチオエ
ステル）になる。このような脱離基はβ−炭素における
タンパク質求核剤によるビニログ求核置換を促進する。
【００２４】ＰＴＳを特異的に阻害する化学化合物を発
見するための細菌スクリーニング分析を用いた、ＰＴＳ
を阻害する化学化合物及びペプチド又はペプチドコンジ
ュゲートの探索。
見するための細菌スクリーニング分析を用いた、ＰＴＳ
を阻害する化学化合物及びペプチド又はペプチドコンジ
ュゲートの探索。
【００２５】下記例示は本発明を説明する。
【００２６】ＰＴＳタンパク質への結合、ＰＴＳ活性の
阻害及びタンパク質ホスファターゼ活性に関して化学化
合物ライブラリーをスクリーニングするための分析法。 （ａ）酵素Ｉに結合する、及び（b）酵素Ｉによってリ
ン酸化される化学化合物を同定するために幾つかの分析
法（次頁の図２）を開発した。酵素Ｉに対するホスファ
ターゼ活性を有するリガンドを検出するための分析法
（ｃ）も開発されている（詳細に関しては、材料と方法
の項を参照のこと）。 （ａ）固定リガンド、例えば、ファージ展示ライブラリ
ー(phage display library)からの糸状ファージ又は
組合せペプチドライブラリーからの合成ペプチドへの酵
素Ｉの結合を［125Ｉ］−酵素Ｉとオートラジオグラフ
ィーとを用いて検出した。
阻害及びタンパク質ホスファターゼ活性に関して化学化
合物ライブラリーをスクリーニングするための分析法。 （ａ）酵素Ｉに結合する、及び（b）酵素Ｉによってリ
ン酸化される化学化合物を同定するために幾つかの分析
法（次頁の図２）を開発した。酵素Ｉに対するホスファ
ターゼ活性を有するリガンドを検出するための分析法
（ｃ）も開発されている（詳細に関しては、材料と方法
の項を参照のこと）。 （ａ）固定リガンド、例えば、ファージ展示ライブラリ
ー(phage display library)からの糸状ファージ又は
組合せペプチドライブラリーからの合成ペプチドへの酵
素Ｉの結合を［125Ｉ］−酵素Ｉとオートラジオグラフ
ィーとを用いて検出した。
【００２７】（ｂ）酵素Ｉによるリン酸化。ペプチド
と、酵素Ｉによってリン酸化されることができるペプチ
ドを展示する糸状ファージとを同定するために、サポー
トに基づくペプチドライブラリーと、固定ペプチドを展
示するファージとを［32Ｐ］ホスホエノールピルベート
の存在下で酵素Ｉと共に一晩インキュベートし、リン酸
化種を蛍光イメージャー(Phosphor Imager)によって検
出した。酵素Ｉ依存性リン酸化を、リン酸化可溶性ペプ
チドの薄層クロマトグラフィー、オートラジオグラフィ
ー及びエレクトロスプレー質量分光法によって確認し
た。
と、酵素Ｉによってリン酸化されることができるペプチ
ドを展示する糸状ファージとを同定するために、サポー
トに基づくペプチドライブラリーと、固定ペプチドを展
示するファージとを［32Ｐ］ホスホエノールピルベート
の存在下で酵素Ｉと共に一晩インキュベートし、リン酸
化種を蛍光イメージャー(Phosphor Imager)によって検
出した。酵素Ｉ依存性リン酸化を、リン酸化可溶性ペプ
チドの薄層クロマトグラフィー、オートラジオグラフィ
ー及びエレクトロスプレー質量分光法によって確認し
た。
【００２８】（ｃ）ホスファターゼ活性。無機ホスフェ
ートの形成を比色法によって検出するための慣用的な、
充分に確立された分析法が特異的なニーズ(needs)に適
用されている。この分析法はマイクロタイタープレート
でおこなうことができ、マイクロプレート・フォトリー
ダー(microplate photoreader)によって定量すること
ができる。可溶性化合物のホスファターゼ活性をモニタ
ーするためのもう一つの分析法は、酵素Ｉが脱リン酸さ
れるときには常にホスホエノールピルベートから連続的
に生成されるピルビン酸(pyruvate)の検出に基づく。可
溶性化合物の酵素Ｉ特異性ホスファターゼ活性はピルビ
ン酸・バースト(pyruvate burst)から検出することが
できる。ピルビン酸生成速度は乳酸デヒドロゲナーゼと
ＮＡＤＨによってモニターする。この分析法はマイクロ
タイタープレートでおこなうことができ、マイクロプレ
ート・フォトリーダーによって定量することができる。 （ｄ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＰＴＳ活性の阻害。可溶性化
合物の阻害活性は、精製ＰＴＳタンパク質の存在下での
糖ホスホトランスフェラーゼ分析において、末端リン酸
受容体(terminal phosphate acceptor)としての［14
Ｃ］ＧｌｃＮＡｃ（［14Ｃ］Ｎ−アセチル−グルコサミ
ン）又は［14Ｃ］Ｇｌｃ（［14Ｃ］グルコース）によっ
て定量的に測定することができる（Ｅｒｎｉ等，１９８
２）。
ートの形成を比色法によって検出するための慣用的な、
充分に確立された分析法が特異的なニーズ(needs)に適
用されている。この分析法はマイクロタイタープレート
でおこなうことができ、マイクロプレート・フォトリー
ダー(microplate photoreader)によって定量すること
ができる。可溶性化合物のホスファターゼ活性をモニタ
ーするためのもう一つの分析法は、酵素Ｉが脱リン酸さ
れるときには常にホスホエノールピルベートから連続的
に生成されるピルビン酸(pyruvate)の検出に基づく。可
溶性化合物の酵素Ｉ特異性ホスファターゼ活性はピルビ
ン酸・バースト(pyruvate burst)から検出することが
できる。ピルビン酸生成速度は乳酸デヒドロゲナーゼと
ＮＡＤＨによってモニターする。この分析法はマイクロ
タイタープレートでおこなうことができ、マイクロプレ
ート・フォトリーダーによって定量することができる。 （ｄ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＰＴＳ活性の阻害。可溶性化
合物の阻害活性は、精製ＰＴＳタンパク質の存在下での
糖ホスホトランスフェラーゼ分析において、末端リン酸
受容体(terminal phosphate acceptor)としての［14
Ｃ］ＧｌｃＮＡｃ（［14Ｃ］Ｎ−アセチル−グルコサミ
ン）又は［14Ｃ］Ｇｌｃ（［14Ｃ］グルコース）によっ
て定量的に測定することができる（Ｅｒｎｉ等，１９８
２）。
【００２９】（ｅ）細菌におけるＰＴＳ活性の阻害。Ｐ
ＴＳを特異的に妨害する化合物も細菌中で検出すること
ができる。インジケーターＥ．ｃｏｌｉ（又は任意の他
の細菌）を、唯一つの炭素原としてグルコース又は非Ｐ
ＴＳ基質（例えば、ラクトース）のいずれかを含有する
２つの特定最少塩培地で培養する。化学ライブラリーか
らの化合物を両方の培養物に供給する。グルコース上の
みでの増殖を阻害するが非ＰＴＳ基質上での増殖に影響
を及ぼさない作用剤が候補のＰＴＳ阻害剤である。
ＴＳを特異的に妨害する化合物も細菌中で検出すること
ができる。インジケーターＥ．ｃｏｌｉ（又は任意の他
の細菌）を、唯一つの炭素原としてグルコース又は非Ｐ
ＴＳ基質（例えば、ラクトース）のいずれかを含有する
２つの特定最少塩培地で培養する。化学ライブラリーか
らの化合物を両方の培養物に供給する。グルコース上の
みでの増殖を阻害するが非ＰＴＳ基質上での増殖に影響
を及ぼさない作用剤が候補のＰＴＳ阻害剤である。
【００３０】ファージ展示ライブラリーからのペプチド ６マー(6-mer)、９マー、１０マー及び１５マーのイン
サートを発現するＭ１３ファージ展示ライブラリー（Ｓ
ｃｏｔｔとＳｍｉｔｈ，１９９０；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ
等，１９９２）を酵素Ｉによってパンニングして(panne
d)、酵素Ｉ結合ファージを富化させた。“高アフィニテ
ィ”ファージによってトランスフェクトしたＥ．ｃｏｌ
ｉクローンをニトロセルロースシート上で増殖させ、分
泌されたニトロセルロース結合ファージを［32Ｐ］ホス
ホエノールピルベートの存在下で酵素Ｉと共に一晩イン
キュベートした。リン酸化ファージを蛍光イメージャー
（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓから商業的に
入手可能）によって同定して、配列決定した。平均より
も２５〜３０倍にリン酸化されたペプチドの配列を表１
に示す。図３はこの方法を説明する。
サートを発現するＭ１３ファージ展示ライブラリー（Ｓ
ｃｏｔｔとＳｍｉｔｈ，１９９０；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ
等，１９９２）を酵素Ｉによってパンニングして(panne
d)、酵素Ｉ結合ファージを富化させた。“高アフィニテ
ィ”ファージによってトランスフェクトしたＥ．ｃｏｌ
ｉクローンをニトロセルロースシート上で増殖させ、分
泌されたニトロセルロース結合ファージを［32Ｐ］ホス
ホエノールピルベートの存在下で酵素Ｉと共に一晩イン
キュベートした。リン酸化ファージを蛍光イメージャー
（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓから商業的に
入手可能）によって同定して、配列決定した。平均より
も２５〜３０倍にリン酸化されたペプチドの配列を表１
に示す。図３はこの方法を説明する。
【００３１】全てのファージ展示ペプチドはヒスチジン
残基又はシステイン残基を含有し、全てのペプチドは１
個又は数個の塩基残基を含有する。このことは正に荷電
したペプチドと、高い割合の酸残基を含有する酵素Ｉの
活性部位ポケットとの間の酵素Ｉリガンド錯体の静電的
安定化を示唆する（Ｓｅｏｋ等，１９９６）。予想され
るＨｉｓ含有ペプチドの他に、システイン含有配列が現
れたことが特に重要である。実際に、ある一定のＰＴＳ
タンパク質（ＰＴＳ輸送体のＩＩＢドメイン，図１）は
システインにおいてリン酸化される（Ｍｅｉｎｓ等，Ｅ
ｂｅｒｓｔａｄｔ等，１９９６）。酵素Ｉの活性部位は
適当な配列に関連してＨｉｓのみでなくＣｙｓをも認識
するように思われる。
残基又はシステイン残基を含有し、全てのペプチドは１
個又は数個の塩基残基を含有する。このことは正に荷電
したペプチドと、高い割合の酸残基を含有する酵素Ｉの
活性部位ポケットとの間の酵素Ｉリガンド錯体の静電的
安定化を示唆する（Ｓｅｏｋ等，１９９６）。予想され
るＨｉｓ含有ペプチドの他に、システイン含有配列が現
れたことが特に重要である。実際に、ある一定のＰＴＳ
タンパク質（ＰＴＳ輸送体のＩＩＢドメイン，図１）は
システインにおいてリン酸化される（Ｍｅｉｎｓ等，Ｅ
ｂｅｒｓｔａｄｔ等，１９９６）。酵素Ｉの活性部位は
適当な配列に関連してＨｉｓのみでなくＣｙｓをも認識
するように思われる。
【００３２】ペプチドによるＰＴＳの阻害 酵素Ｉによってリン酸化されたファージ展示ライブラリ
ーからのペプチドの一部は、可溶性形で標準方法によっ
て合成され、特徴付けられている。これらは６０μＭか
ら１０ｍＭを越えるまでのＩＣ50を有するｉｎ ｖｉｔ
ｒｏホスホトランスフェラーゼ活性を阻害する（表
１）。図３の第２部はこの方法を説明する。
ーからのペプチドの一部は、可溶性形で標準方法によっ
て合成され、特徴付けられている。これらは６０μＭか
ら１０ｍＭを越えるまでのＩＣ50を有するｉｎ ｖｉｔ
ｒｏホスホトランスフェラーゼ活性を阻害する（表
１）。図３の第２部はこの方法を説明する。
【００３３】材料と方法 ［125Ｉ］酵素Ｉによってモニターした、固定ペプチド
への酵素Ｉの結合。ゴナドトロピンに関して報告された
方法（Ｓａｉｒａｍ，Ｍ．Ｒ．１９７９）に従って、ラ
クトペルオキシダーゼ触媒反応によって酵素Ｉを125Ｉ
で放射能標識した。簡単に述べると、２００μｌの緩衝
剤中の１ｍｇの酵素Ｉを１０μｌ（０．５ｍＣｉ）のＮ
ａ125Ｉによってヨウ素化した。この反応は水浴中で、
全体を通して穏やかに撹拌しながら、３４℃において６
０分間おこなった。この反応はヨウ化カリウムの添加に
よって停止させた。ＢＳＡで予め飽和させ、５０ｍＭ
ＰＢＳ（ｐＨ７．２）と平衡させたＳｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ−５０カラム上で、ヨウ素化タンパク質を遊離ヨウ素
から分離した。
への酵素Ｉの結合。ゴナドトロピンに関して報告された
方法（Ｓａｉｒａｍ，Ｍ．Ｒ．１９７９）に従って、ラ
クトペルオキシダーゼ触媒反応によって酵素Ｉを125Ｉ
で放射能標識した。簡単に述べると、２００μｌの緩衝
剤中の１ｍｇの酵素Ｉを１０μｌ（０．５ｍＣｉ）のＮ
ａ125Ｉによってヨウ素化した。この反応は水浴中で、
全体を通して穏やかに撹拌しながら、３４℃において６
０分間おこなった。この反応はヨウ化カリウムの添加に
よって停止させた。ＢＳＡで予め飽和させ、５０ｍＭ
ＰＢＳ（ｐＨ７．２）と平衡させたＳｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ−５０カラム上で、ヨウ素化タンパク質を遊離ヨウ素
から分離した。
【００３４】固定ペプチドを有するセルロース膜を３％
ＢＳＡを含有する５０ｍＭ ＴＢＳと共に、室温におい
て振とうしながら１時間インキュベートした。その後
に、膜を洗浄し、０．１５％カゼインを含有する５０ｍ
Ｍ ＰＢＳ（別のブロッキング剤）と共にさらに１時間
インキュベートして、非特異性結合部位をブロックし
た。次に、これらの膜を０．１５％カゼインを含有する
ＰＢＳ中で［125Ｉ］酵素Ｉと共に２時間インキュベー
トした。これらの膜を０．１％Ｔｗｅｅｎを含有するＰ
ＢＳによって洗浄することによって、これらの膜から非
特異的に、弱く結合した［125Ｉ］酵素Ｉを除去した。
オートラジオグラフィーによって放射能を測定した。
ＢＳＡを含有する５０ｍＭ ＴＢＳと共に、室温におい
て振とうしながら１時間インキュベートした。その後
に、膜を洗浄し、０．１５％カゼインを含有する５０ｍ
Ｍ ＰＢＳ（別のブロッキング剤）と共にさらに１時間
インキュベートして、非特異性結合部位をブロックし
た。次に、これらの膜を０．１５％カゼインを含有する
ＰＢＳ中で［125Ｉ］酵素Ｉと共に２時間インキュベー
トした。これらの膜を０．１％Ｔｗｅｅｎを含有するＰ
ＢＳによって洗浄することによって、これらの膜から非
特異的に、弱く結合した［125Ｉ］酵素Ｉを除去した。
オートラジオグラフィーによって放射能を測定した。
【００３５】固定ペプチドの酵素Ｉ依存性リン酸化。［
32Ｐ］ＰＥＰをＲｏｓｓｉｅｎ等，１９８３が述べてい
るように調製した。固定ペプチドライブラリーを含むセ
ルロース膜を上述したようにブロッキング剤によって処
理した。次に、これらのライブラリーを触媒量の酵素Ｉ
の存在下で［32Ｐ］ＰＥＰと共に室温において３０分間
インキュベートした。リン酸化種を蛍光イメージャー
（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ）によって同定
した。
32Ｐ］ＰＥＰをＲｏｓｓｉｅｎ等，１９８３が述べてい
るように調製した。固定ペプチドライブラリーを含むセ
ルロース膜を上述したようにブロッキング剤によって処
理した。次に、これらのライブラリーを触媒量の酵素Ｉ
の存在下で［32Ｐ］ＰＥＰと共に室温において３０分間
インキュベートした。リン酸化種を蛍光イメージャー
（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ）によって同定
した。
【００３６】可溶性ペプチドによるホスホトランスフェ
ラーゼ活性の阻害。この分析法は酵素Ｉ依存性糖リン酸
化活性の阻害を測定する。ＩＣ50はＰＴＳ活性を５０％
阻害するために必要な阻害剤の濃度として定義される。
糖特異性化合物として、Ｅ．ｃｏｌｉの精製Ｎ−アセチ
ルグルコサミン輸送体（ＩＩGlcNAc）（Ｍｕｋｈｉｊａ
とＥｒｎｉ，１９９６）を用いた。この反応混合物は１
００μｌにつき１００μｇの、卵黄からのホスファチジ
ルグリセロール（Ｓｉｇｍａ）と、５０ｍＭのＫＰｉ
（ｐＨ７．５）と、２．５ｍＭのジチオトレイトール
と、２．５ｍＭのＮａＦと、５ｍＭのＭｇＣｌ2と、１
ｍＭのホスホエノールピルベート（カリウム塩、Ｓｉｇ
ｍａ）と、０．５ｍＭの［Ｕ−14Ｃ］ＧｌｃＮＡｃ（Ｎ
ｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ；５６．３ｍＣ
ｉ／ｍｍｏｌ、１０００ｃｐｍ／ｎｍｏｌまでに希釈）
と、各３μＭの精製ＨＰｒ及び酵素Ｉとを含有した（Ｍ
ａｏ等，１９９５）。この反応は０．１μｇのＩＩ
GlcNAcの添加によって開始した。３７℃における３０分
間のインキュベーション後に、１ｍｌの氷冷水を加える
ことによって、反応を停止した。ＧｌｃＮＡｃ−６−ホ
スフェートをＡＧ−１−Ｘ２（５０−１００メッシュ，
Ｂｉｏｒａｄ）上でのアニオン−交換クロマトグラフィ
ーによって遊離ＧｌｃＮＡｃから分離した。活性は３０
分間後に形成された糖−Ｐのナノモル数として表現され
る。ＨＰｒ濃度は、それが総合ホスホトランスフェラー
ゼ反応において速度制限性(time-limiting)であるよう
に、調節した。阻害性ペプチドを２５μＭ〜１０ｍＭの
濃度まで加えた。ペプチドの不存在下でのＧｌｃＮＡｃ
のリン酸化を１００％と見なした。乳酸デヒドロゲナー
ゼに関連したピルビン酸生成。酵素Ｉによるホスホエノ
ールピルベートから生成されたピルベートは乳酸デヒド
ロゲナーゼの存在下でラクテートに転化し、付随するＮ
ＡＤＨ消費を３４０ｎｍにおいて分光測光法によって追
跡した。反応混合物は０．８ｍＭのＰＥＰと、０．２ｍ
ＭのＮＡＤＨと、３０μｇの乳酸デヒドロゲナーゼと、
５０ｍＭのＫＰｉ（ｐＨ７．５）と、２．５ｍＭのジチ
オトレイトールと、２．５ｍＭのＮａＦと、５ｍＭのＭ
ｇＣｌ2と、基質としての２２．５μＭのＨＰｒ又は５
０〜１５０μＭのペプチドとを含有した。０．７５μＭ
の酵素Ｉを添加することによって、反応を開始した。ペ
プチドによる酵素Ｉの阻害を測定するために、種々な濃
度でペプチドを加えた。阻害性ペプチドはＨＰｒより非
常に緩慢な速度で酵素Ｉによってリン酸化される。
ラーゼ活性の阻害。この分析法は酵素Ｉ依存性糖リン酸
化活性の阻害を測定する。ＩＣ50はＰＴＳ活性を５０％
阻害するために必要な阻害剤の濃度として定義される。
糖特異性化合物として、Ｅ．ｃｏｌｉの精製Ｎ−アセチ
ルグルコサミン輸送体（ＩＩGlcNAc）（Ｍｕｋｈｉｊａ
とＥｒｎｉ，１９９６）を用いた。この反応混合物は１
００μｌにつき１００μｇの、卵黄からのホスファチジ
ルグリセロール（Ｓｉｇｍａ）と、５０ｍＭのＫＰｉ
（ｐＨ７．５）と、２．５ｍＭのジチオトレイトール
と、２．５ｍＭのＮａＦと、５ｍＭのＭｇＣｌ2と、１
ｍＭのホスホエノールピルベート（カリウム塩、Ｓｉｇ
ｍａ）と、０．５ｍＭの［Ｕ−14Ｃ］ＧｌｃＮＡｃ（Ｎ
ｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ；５６．３ｍＣ
ｉ／ｍｍｏｌ、１０００ｃｐｍ／ｎｍｏｌまでに希釈）
と、各３μＭの精製ＨＰｒ及び酵素Ｉとを含有した（Ｍ
ａｏ等，１９９５）。この反応は０．１μｇのＩＩ
GlcNAcの添加によって開始した。３７℃における３０分
間のインキュベーション後に、１ｍｌの氷冷水を加える
ことによって、反応を停止した。ＧｌｃＮＡｃ−６−ホ
スフェートをＡＧ−１−Ｘ２（５０−１００メッシュ，
Ｂｉｏｒａｄ）上でのアニオン−交換クロマトグラフィ
ーによって遊離ＧｌｃＮＡｃから分離した。活性は３０
分間後に形成された糖−Ｐのナノモル数として表現され
る。ＨＰｒ濃度は、それが総合ホスホトランスフェラー
ゼ反応において速度制限性(time-limiting)であるよう
に、調節した。阻害性ペプチドを２５μＭ〜１０ｍＭの
濃度まで加えた。ペプチドの不存在下でのＧｌｃＮＡｃ
のリン酸化を１００％と見なした。乳酸デヒドロゲナー
ゼに関連したピルビン酸生成。酵素Ｉによるホスホエノ
ールピルベートから生成されたピルベートは乳酸デヒド
ロゲナーゼの存在下でラクテートに転化し、付随するＮ
ＡＤＨ消費を３４０ｎｍにおいて分光測光法によって追
跡した。反応混合物は０．８ｍＭのＰＥＰと、０．２ｍ
ＭのＮＡＤＨと、３０μｇの乳酸デヒドロゲナーゼと、
５０ｍＭのＫＰｉ（ｐＨ７．５）と、２．５ｍＭのジチ
オトレイトールと、２．５ｍＭのＮａＦと、５ｍＭのＭ
ｇＣｌ2と、基質としての２２．５μＭのＨＰｒ又は５
０〜１５０μＭのペプチドとを含有した。０．７５μＭ
の酵素Ｉを添加することによって、反応を開始した。ペ
プチドによる酵素Ｉの阻害を測定するために、種々な濃
度でペプチドを加えた。阻害性ペプチドはＨＰｒより非
常に緩慢な速度で酵素Ｉによってリン酸化される。
【００３７】増殖阻害分析法。ＬＢ培地中で増殖させた
Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ−１２ ＵＴ５８０の一晩培養物を４
０℃の軟寒天（ＬＢブロス中に０．７％アガロース）中
で１：３０に希釈し、３ｍｌの希釈済み細胞懸濁液をＬ
Ｂ寒天プレート上に広げた。フィルターディスク（４．
４ｍｍ直径）を凝固した上部寒天上に規則的な間隔で置
いた。各フィルターに、種々なペプチドストック溶液
（２０μＭ〜８０μＭ）の１種類（１０μｌ）を加え
た。寒天プレートを３７℃において一晩インキュベート
した。各フィルターの周囲の透明帯の面積を測定した。
この透明な面積をペプチドの増殖阻害活性の尺度と見な
す。図４と表１とを比較すること。 表 Ｉ サポートに基づく組合せライブラリーから同定されたペ
プチドの生物学的活性 *ＩＤ数値は配列表に要約した配列番号に相当する。
Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ−１２ ＵＴ５８０の一晩培養物を４
０℃の軟寒天（ＬＢブロス中に０．７％アガロース）中
で１：３０に希釈し、３ｍｌの希釈済み細胞懸濁液をＬ
Ｂ寒天プレート上に広げた。フィルターディスク（４．
４ｍｍ直径）を凝固した上部寒天上に規則的な間隔で置
いた。各フィルターに、種々なペプチドストック溶液
（２０μＭ〜８０μＭ）の１種類（１０μｌ）を加え
た。寒天プレートを３７℃において一晩インキュベート
した。各フィルターの周囲の透明帯の面積を測定した。
この透明な面積をペプチドの増殖阻害活性の尺度と見な
す。図４と表１とを比較すること。 表 Ｉ サポートに基づく組合せライブラリーから同定されたペ
プチドの生物学的活性 *ＩＤ数値は配列表に要約した配列番号に相当する。
【表１】 a ペプチド１に由来する、リン酸化可能なアミノ酸残
基を有さないペプチド b ペプチド１に由来する、ヒスチジンの代わりにアス
パルテートを有するペプチド c ドデカペプチド４から誘導されるオクタペプチド d ＨＰｒ活性部位ループの配列を有するペプチド e マイクロタータープレート中でのｉｎ ｖｉｔｒｏ
酵素分析を標準化するためのビオチニル化ペプチド f Ａｃ：アセチル化ペプチド
基を有さないペプチド b ペプチド１に由来する、ヒスチジンの代わりにアス
パルテートを有するペプチド c ドデカペプチド４から誘導されるオクタペプチド d ＨＰｒ活性部位ループの配列を有するペプチド e マイクロタータープレート中でのｉｎ ｖｉｔｒｏ
酵素分析を標準化するためのビオチニル化ペプチド f Ａｃ：アセチル化ペプチド
【表２】表 ＩＩ ファージ展示によって同定されたペプチドの生物学的活
性 ** ＩＤ数値は配列表に要約した配列番号に相当する。 a ペプチドＮｏ．２２と２３はそれらのアミノ末端
に、Ｍ１３のコートタンパク質ｐＩＩＩによってコード
される３個の余分な残基（ＤＧＡ）を有する。Ａｃ：ア
セチル b ペプチドＮｏ．３０のアミノ酸配列は、ＨＰｒの活
性部位ループの配列に等しい。この配列はファージ展示
されるペプチドには見い出されなかったので、化学的に
合成して、比較のために用いた。 c 脱共役の率は非常に低い。これはＩＣ50（μＭ）を
乗じた１時間当たりのペプチド１μＭにつき消費される
ＮＡＤＨのμＭ数として算出される。この修正(modific
ation)は、酵素に対するペプチドの非常に多様なアフィ
ニティ（ＩＣ50）にも拘わらず、ホスホハイドロリシス
(phosphohydrolysis)の大体の速度の比較を可能にす
る。 参考文献 Ａｍｍｅｒ，Ｊ．，Ｂｒｅｎｎｅｎｓｔｕｈｌ，Ｍ．，
Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ，Ｐ．，Ｈｏｅｌｔｊｅ，Ｊ．
Ｖ．，及びＺａｅｈｌｅｒ，Ｈ．（１９７９）「大腸菌
におけるホスホエノールピルベート：糖ホスホトランス
フェラーゼ系を介した吸収中のストレプトゾトシンのリ
ン酸化」，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒ．１６，８０１〜８０７．Ａｍｓｔｅｒ
−Ｃｈｏｄｅｒ，Ｏ．とＷｒｉｇｈｔ，Ａ．（１９９
３）「大腸菌のｂｇｌ Ｏｐｅｒｏｎの転写調節は転写
アンチターミネーターのホスホトランスフェラーゼ系−
仲介リン酸化を包含する」，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃ
ｈ．５１，８３〜９０．Ｂｕｈｌ，Ａ．，Ｄａｎｉｅｌ
ｓ，Ｇ．Ａ．，及びＥｒｎｉ，Ｂ．（１９９２）「大腸
菌のグルコース輸送体。リン酸化活性を保有する、転座
活性の損傷した突然変異体」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６７，３８４７〜３８５１．Ｃｈｒｉｓｔｉａ
ｎ，Ｒ．Ｂ．，Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ，Ｒ．Ｎ．，Ｋｅ
ｒｒ．Ｊ．Ｍ．，Ｗａｎｇ，Ｌ．，及びＭａｌｃｏｌ
ｍ，Ｂ．Ａ．（１９９２）「バクテリオファージ中のペ
プチドライブラリーの構築、評価及び迅速スクリーニン
グのための簡単化方法」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２
７，７１１〜７１８．Ｃｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．とＫｅｌｌ
ｙ，Ｓ．Ｍ．（１９８７）「アデニル酸シクラーゼとサ
イクリックＡＭＰ受容体タンパク質とを欠いたＳａｌｍ
ｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ欠失突然変異
体」，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．５５，３０３５５〜
３０４３．Ｃｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．，Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉ
ｄｔ，Ｒ．Ｍ．，Ｆｌｅｔｃｈａｌｌ，Ｎ．Ｂ．及びＫ
ｅｌｌｙ，Ｓ．Ｍ．（１９８８）「連鎖球菌コロニー化
と毒性抗原とを発現する無毒性Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍδｃｙａδｃｒｐ経口ワクチン
菌株」，Ｖａｃｃｉｎｅ ６，１５５〜１６０．Ｅｂｅ
ｒｓｔａｄｔ，Ｍ．，Ｇｏｌｉｃ Ｇｒｄａｄｏｌｎｉ
ｋ，Ｓ．，Ｇｅｍｍｅｃｋｅｒ，Ｇ．，Ｋｅｓｓｌｅ
ｒ，Ｈ．，Ｂｕｈｒ，Ａ．及びＥｒｎｉ，Ｂ．（１９９
６）「大腸菌のグルコース輸送体のＩＩＢドメインの溶
液構造」，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（印刷中）。
性 ** ＩＤ数値は配列表に要約した配列番号に相当する。 a ペプチドＮｏ．２２と２３はそれらのアミノ末端
に、Ｍ１３のコートタンパク質ｐＩＩＩによってコード
される３個の余分な残基（ＤＧＡ）を有する。Ａｃ：ア
セチル b ペプチドＮｏ．３０のアミノ酸配列は、ＨＰｒの活
性部位ループの配列に等しい。この配列はファージ展示
されるペプチドには見い出されなかったので、化学的に
合成して、比較のために用いた。 c 脱共役の率は非常に低い。これはＩＣ50（μＭ）を
乗じた１時間当たりのペプチド１μＭにつき消費される
ＮＡＤＨのμＭ数として算出される。この修正(modific
ation)は、酵素に対するペプチドの非常に多様なアフィ
ニティ（ＩＣ50）にも拘わらず、ホスホハイドロリシス
(phosphohydrolysis)の大体の速度の比較を可能にす
る。 参考文献 Ａｍｍｅｒ，Ｊ．，Ｂｒｅｎｎｅｎｓｔｕｈｌ，Ｍ．，
Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ，Ｐ．，Ｈｏｅｌｔｊｅ，Ｊ．
Ｖ．，及びＺａｅｈｌｅｒ，Ｈ．（１９７９）「大腸菌
におけるホスホエノールピルベート：糖ホスホトランス
フェラーゼ系を介した吸収中のストレプトゾトシンのリ
ン酸化」，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒ．１６，８０１〜８０７．Ａｍｓｔｅｒ
−Ｃｈｏｄｅｒ，Ｏ．とＷｒｉｇｈｔ，Ａ．（１９９
３）「大腸菌のｂｇｌ Ｏｐｅｒｏｎの転写調節は転写
アンチターミネーターのホスホトランスフェラーゼ系−
仲介リン酸化を包含する」，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃ
ｈ．５１，８３〜９０．Ｂｕｈｌ，Ａ．，Ｄａｎｉｅｌ
ｓ，Ｇ．Ａ．，及びＥｒｎｉ，Ｂ．（１９９２）「大腸
菌のグルコース輸送体。リン酸化活性を保有する、転座
活性の損傷した突然変異体」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６７，３８４７〜３８５１．Ｃｈｒｉｓｔｉａ
ｎ，Ｒ．Ｂ．，Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ，Ｒ．Ｎ．，Ｋｅ
ｒｒ．Ｊ．Ｍ．，Ｗａｎｇ，Ｌ．，及びＭａｌｃｏｌ
ｍ，Ｂ．Ａ．（１９９２）「バクテリオファージ中のペ
プチドライブラリーの構築、評価及び迅速スクリーニン
グのための簡単化方法」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２
７，７１１〜７１８．Ｃｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．とＫｅｌｌ
ｙ，Ｓ．Ｍ．（１９８７）「アデニル酸シクラーゼとサ
イクリックＡＭＰ受容体タンパク質とを欠いたＳａｌｍ
ｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ欠失突然変異
体」，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．５５，３０３５５〜
３０４３．Ｃｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．，Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉ
ｄｔ，Ｒ．Ｍ．，Ｆｌｅｔｃｈａｌｌ，Ｎ．Ｂ．及びＫ
ｅｌｌｙ，Ｓ．Ｍ．（１９８８）「連鎖球菌コロニー化
と毒性抗原とを発現する無毒性Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍδｃｙａδｃｒｐ経口ワクチン
菌株」，Ｖａｃｃｉｎｅ ６，１５５〜１６０．Ｅｂｅ
ｒｓｔａｄｔ，Ｍ．，Ｇｏｌｉｃ Ｇｒｄａｄｏｌｎｉ
ｋ，Ｓ．，Ｇｅｍｍｅｃｋｅｒ，Ｇ．，Ｋｅｓｓｌｅ
ｒ，Ｈ．，Ｂｕｈｒ，Ａ．及びＥｒｎｉ，Ｂ．（１９９
６）「大腸菌のグルコース輸送体のＩＩＢドメインの溶
液構造」，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（印刷中）。
【００３８】Ｅｂｅｒｓｔａｄｔ，Ｍ．，Ｇｏｌｉｃ
Ｇｒｄａｄｏｌｎｉｋ，Ｓ．，Ｇｅｍｍｅｃｋｅｒ，
Ｇ．，Ｋｅｓｓｌｅｒ，Ｈ．，Ｂｕｈｒ，Ａ．，Ｌａｎ
ｚ．Ｒ．及びＥｒｎｉ，Ｂ．（１９９６）「大腸菌のグ
ルコース輸送体；ＩＩＢGlcのホスホシステイン形のＮ
ＭＲ特徴付けとＩＩＡGlcサブユニットとのその結合界
面（Ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ
ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ；ＮＭＲ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐ
ｈｏｓｐｈｏｃｙｓｔｅｉｎｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｔｈ
ｅ ＩＩＢGlcｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｂｉｎ
ｄｉｎｇ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｗｉｔｈｔｈｅ ＩＩ
ＡGlcｓｕｂｕｎｉｔ）」，提出中．Ｅｒｎｉ，Ｂ．
（１９９２）「細菌ホスホトランスフェラーゼ系による
グルコースと他の炭水化物のグループ転座」，Ｉｎｔ．
Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１３７Ａ，１２７〜１４８．Ｅｒ
ｎｉ，Ｂ．，Ｔｒａｃｈｓｅｌ，Ｈ．，Ｐｏｓｔｍａ
ｎ，Ｐ．Ｗ．，及びＲｏｓｅｎｂｕｓｈ，Ｊ．Ｐ．（１
９８２）「細菌ホスホトランスフェラーゼ系．Ｓａｌｍ
ｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの膜からのグル
コース特異性酵素ＩＩの可溶化と精製」，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２５７，１３７２６〜１３７３０．Ｆｅ
ｌｉｃｉ，Ｆ．，Ｌｕｚｚａｇｏ，Ａ．及びＣｏｒｔｅ
ｓｅ，Ｒ．（１９９３）「ファージ展示ペプチドによる
不連続エピトープの模造，ＩＩ．ファージペプチドライ
ブラリーからのＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓ
ｉｓ毒素に対する保護モノクローン抗体によって認識さ
れるクローンの選択」，Ｇｅｎｅ，１２８，２１〜２
７．Ｈｕｒｌｅｙ，Ｊ．Ｈ．，Ｆａｂｅｒ，Ｈ．Ｒ．，
Ｗｏｒｔｈｙｌａｋｅ，Ｄ．，Ｍｅａｄｏｗ，Ｎ．
Ｄ．，Ｒｏｓｅｍａｎ，Ｓ．，Ｐｅｔｔｉｇｒｅｗ，
Ｄ．Ｗ．及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｓ．Ｊ．（１９９
３）「大腸菌ＩＩＩGlcとグリセロールキナーゼとの調
節複合体の構造」，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９，６７３〜
６７７．Ｊｉａ，Ｚ．Ｃ．Ｑｕａｉｌ，Ｊ．Ｗ．，Ｗａ
ｙｇｏｏｄ，Ｅ．Ｂ．及びＤｅｌｂａｅｒｅ，Ｌ．Ｔ．
Ｊ．（１９９３ａ）「大腸菌ヒスチジン含有ホスホキャ
リヤータンパク質ＨＰｒの２．０Å解像度構造−再測
定」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，２２４９０〜
２２５０１．Ｊｉａ，Ｚ．Ｃ．，Ｖａｎｄｏｎｓｅｌａ
ａｒ，Ｍ．，Ｑｕａｉｌ，Ｊ．Ｗ．及びＤｅｌｂａｅｒ
ｅ，Ｌ．Ｔ．Ｊ．（１９９３ｂ）「ヒスチジン含有ホス
ホキャリヤータンパク質の１．６Å解像度構造で明らか
にされた活性中心Ｔｏｒｓｉｏｎ−Ａｎｇｌｅ菌株」，
Ｎａｔｕｒｅ，３６１，９４〜９７．Ｋａｌｂｉｔｚｅ
ｒ，Ｈ．Ｒ．とＨｅｎｇｓｔｅｎｂｅｒｇ，Ｗ．（１９
９３）「二次元Ｈ−Ｉ−ＮＭＲ分光法によって測定した
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ−ａｕｒｅｕｓからのヒ
スチジン含有タンパク質（ＨＰｒ）の溶液構造」，Ｅｕ
ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１６，２０５〜２１４．Ｋ
ｅｌｌｙ，Ｓ．Ｍ．，Ｂｏｓｅｃｋｅｒ，Ｂ．Ａ．，Ｃ
ｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．（１９９２）「Ｓａｌｍｏｎｅｌｌ
ａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓの弱毒突然変異体の保護
特性の特徴付け」，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０，
４８８１〜４８９０．Ｌｅｎｇｅｌｅｒ，Ｊ．Ｗ．，Ｊ
ａｈｒｅｉｓ，Ｋ．及びＷｅｈｍｅｉｅｒ，Ｕ．Ｆ．
（１９９４）「ホスホエノールピルベート依存性ホスホ
トランスフェラーゼ系の酵素ＩＩ：炭水化物の輸送にお
けるそれらの構造と機能」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．Ａｃｔａ １１８８，１〜２８．Ｌｉａｏ，
Ｄ．Ｉ．，Ｓｉｌｖｅｒｔｏｎ，Ｅ．，Ｓｅｏｋ，Ｙ．
Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｂ．Ｒ．，Ｐｅｔｅｒｋｏｆｓｋｙ，
Ａ．，Ｄａｖｉｅｓ，Ｄ．Ｒ．（１９９６）「糖輸送に
おける第１段階：大腸菌ＰＥＰの酵素Ｉのアミノ末端ド
メインの結晶構造，糖ホスホトランスフェラーゼ系及び
ＨＰｒとのホスホトランスファー複合体のモデル」，Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅ，４，８６１〜８７２．ＬｉＣａｌｓ
ｉ，Ｃ．，Ｃｒｏｃｅｎｚｉ，Ｔ．Ｓ．，Ｆｒｅｉｒ
ｅ，Ｅ．及びＲｏｓｅｍａｎ，Ｓ．（１９９１）「細菌
ホスホトランスフェラーゼ系による糖輸送．Ｓａｌｍｏ
ｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの酵素Ｉの構造的
及び熱力学的ドメイン」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
６６，１９５１９〜１９５２７．Ｌｕｘ，Ｒ．，Ｊａｈ
ｒｅｉｓ，Ｋ．，Ｂｅｔｔｅｎｂｒｏｏｋ，Ｋ．，Ｐａ
ｒｋｉｎｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．及びＬｅｎｇｅｌｅｒ，Ｊ．
Ｗ．（１９９５）「大腸菌のＰＴＳ炭水化物吸収系と化
学走性シグナリング経路との間の連絡リンク」，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２，１１
５８３〜１１５８７．Ｍａｏ，Ｑ．，Ｓｃｈｕｎｋ，
Ｔ．，Ｆｌｕｅｋｉｇｅｒ，Ｋ．及びＥｒｎｉ，Ｂ．
（１９９５）「大腸菌の精製マンノースホスホトランス
フェラーゼ系の、リン脂質小胞中への機能的再構成」，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，５２５８〜５２６
５．Ｍａｒｔｉｎ−Ｖｅｒｓｔｒａｅｔｅ，Ｉ．，Ｄｅ
ｂａｒｂｏｕｉｌｌｅ，Ｍ．，Ｋｌｉｅｒ，Ａ．及びＲ
ａｐｏｐｏｒｔ，Ｇ（１９９４）「Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓの野生型及び切頭ＬｅｖＲと、レバナ
ーゼ・オペロンの上流活性化配列との相互作用」，Ｊ．
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４１，１７８〜１９２． Ｍａｙ
ａｈａｒａ，Ｈ．，Ｈｉｒａｎｏ，Ｈ．，Ｓａｉｔｏ
ｈ，Ｔ．及びＯｇａｗａ，Ｋ．（１９６７）「非特異性
アルカリホスファターゼの活性の超化学的実証のための
新規なクエン酸鉛方法」，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｅ，１
１，８８． Ｍｅｉｎｓ，Ｍ．，Ｊｅｎｏ，Ｐ．，Ｍｕ
ｅｌｌｅｒ，Ｄ．，Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｗ．Ｊ．，Ｒｏｓ
ｅｎｂｕｓｃｈ，Ｊ．Ｐ．及びＥｒｎｉ，Ｂ（１９９
３）「大腸菌のグルコース輸送体のシステインリン酸
化」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，１１６０４〜
１１６０９．Ｍｅａｄｏｗ，Ｎ．Ｄ．，Ｆｏｘ，Ｄ．
Ｋ．及びＲｏｓｅｍａｎ，Ｓ．（１９９０）「細菌ホス
ホエノールピルベート：グリコースホスホトランスフェ
ラーゼ系」，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５
９，４９７〜５４２．Ｍｕｋｈｉｊａ，Ｓ．及びＥｒｎ
ｉ，Ｂ．（１９９０）「大腸菌のＮ−アセチルグルコサ
ミンの輸送体のＮｉ2+アフィニティ・クロマトグラフィ
ーによる精製と、機能的再構成」，ｊ．ｂＩＯＬ．ｃＨ
ＥＭ．２７１，１４８１９〜１４８２４．Ｎｉｓｈｉｋ
ａｗａ，Ｙ．，Ｓｃｏｔｌａｎｄ，Ｓ．Ｍ．，Ｓｍｉｔ
ｈ，Ｈ．Ｒ．，Ｗｉｌｌｓｈａｗ，Ｇ．Ａ．及びＲｏｗ
ｅ，Ｂ．（１９９５）「ベロ細胞毒素産生大腸菌血清群
０１５５７ａｎ０１１１の接着力のカタボライト抑
制」，Ｍｉｃｒｏｂ．Ｐａｔｈｏｇ．１８，２２３〜２
２９．Ｐｏｓｔｍａ，Ｐ．Ｗ．，Ｌｅｎｇｅｌｅｒ，
Ｊ．Ｗ．及びＪａｃｏｂｓｏｎ，Ｇ．Ｒ．（１９９３）
「細菌におけるホスホエノールピルベート：炭水化物ホ
スホトランスフェラーゼ系」，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒ
ｅｖ．５７，５４３〜５９４．Ｐｏｗｅｌｌ．Ｂ．
Ｓ．，Ｃｏｕｒｔ．Ｄ．Ｌ．，Ｉｎａｄａ，Ｔ．，Ｎａ
ｋａｍｕｒａ，Ｙ．，Ｍｉｃｈｏｔｅｙ，Ｖ．，Ｃｕ
ｉ，Ｘ．，Ｒｅｉｚｅｒ，Ａ．，Ｓａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．
及びＲｅｉｚｅｒ，Ｊ．（１９９５）「大腸菌のｒｐｏ
Ｎオペロン内でコードされるホスホトランスフェラーゼ
系の新規なタンパク質．酵素ＩＩＡNtrはｅｒａts突然
変異体の有機窒素上での増殖と条件致死率とに影響を及
ぼす」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，４８２２〜
４８３９．Ｒａｊａｇｏｐａｌ，Ｐ．，Ｗａｙｇｏｏ
ｄ，Ｅ．Ｂ．及びＫｌｅｖｉｔ，Ｒ．Ｅ．（１９９４）
「ヒスチジンリン酸化の構造的結果：Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓと大腸菌とのヒスチジン含有タンパ
ク質のホスホヒスチジン形のＮＭＲ特徴付け」，Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３，１５２７１〜１５２８２．
Ｒｏｏｓｓｉｅｎ，Ｆ．Ｆ．，Ｂｒｉｎｋ，Ｊ．及び
Ｒｏｂｉｌｌａｒｄ，Ｇ．Ｔ．（１９８３）「平衡状態
におけるピルビン酸キナーゼ交換反応を介した［32Ｐ］
ホスホエノールピルベートを合成するための簡単な方
法」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．７
６０，１８５〜１８７．Ｒｅｉｚｅｒ，Ｊ．，Ｈｏｉｓ
ｃｈｅｎ，Ｃ．，Ｒｅｉｚｅｒ，Ａ．，Ｐｈａｍ，Ｔ．
Ｎ．及びＳａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．（１９９３）「細菌ホス
ホエノールピルベート−糖ホスホトランスフェラーゼ系
のエネルギー共役タンパク質酵素ＩとＨＰｒとの配列分
析と進化関係」，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２，５０６
〜５２１． Ｓａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．（１９９３）「腸内
細菌におけるホスホトランスフェラーゼ系のタンパク質
に関係する調節相互作用」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃ
ｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５１，６
２〜６８．Ｓａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．とＲｅｉｚｅｒ，Ｊ．
（１９９４）「細菌ホスホトランスフェラーゼ系：３０
年後の新規なフロンティア」，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ．Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．１３，７５５〜７６４．Ｓａ
ｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．，Ｃｈａｖａｕｘ，Ｓ．，Ｄｅｕｔｓ
ｃｈｅｒ，Ｊ．，Ｒｅｉｚｅｒ，Ｊ．及びＹｅ，Ｊ．
Ｊ．（１９９５）「グラム陰性菌対グラム陽性菌のタン
パク質リン酸化と炭素代謝調節」，ＴＩＢＳ，２０，２
６７〜２７１． Ｓｃｏｔｔ，Ｊ．Ｋ．とＳｍｉｔｈ，
Ｇ．Ｐ．（１９９０）「エピトープライブラリーによる
ペプチドリガンドの探索」，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，
３８６〜３９０．Ｓｅｏｋ，Ｙ．Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｂ．
Ｒ．，Ｚｈｕ，Ｐ．Ｐ．及びＰｅｔｅｒｋｏｆｓｋｙ，
Ａ．（１９９６）「ホスホリル供与体特異性に関する大
腸菌ホスホエノールピルベート：糖ホスホトランスフェ
ラーゼ系の酵素Ｉのカルボキシル末端ドメインの重要
性」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，９３，３４７〜３５１．Ｔｉｔｇｅｍｅｙｅｒ，
Ｆ．，Ｍａｓｏｎ，Ｒ．Ｅ．及びＳａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．
（１９９４）「ホスホエノールピルベート：糖ホスホト
ランスフェラーゼ系のグルコース特異性酵素ＩＩＡによ
る大腸菌のラフィノース透過酵素の調節」，Ｊ．Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ．１７６，５４３〜５４６．ｖａｎ Ｎｕ
ｌａｎｄ，Ｎ．Ａ．Ｊ．，Ｂｏｅｌｅｎｓ，Ｒ．，Ｓｃ
ｈｅｅｋ，Ｒ．Ｍ．及びＲｏｂｉｌｌａｒｄ，Ｇ．Ｔ．
（１９９５）「ＮＭＲ−ＮＯＥデータからの制御分子動
力学によって測定された大腸菌からのヒスチジン含有ホ
スホキャリヤータンパク質ＨＰｒのリン酸化形の高解像
度構造」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４６，１８０〜１
９３．ｖａｎ Ｎｕｌａｎｄ，Ｎ．Ａ．Ｊ．，Ｇｒｏｔ
ｚｉｎｇｅｒ，Ｊ．，Ｄｉｊｋｓｔｒａ，Ｋ．，Ｓｃｈ
ｅｅｋ，Ｒ．Ｍ．及びＲｏｂｉｌｌａｒｄ，Ｇ．Ｔ．
（１９９２）「多次元ＮＭＲ分光法を用いた、大腸菌か
らのヒスチジン含有ホスホキャリヤータンパク質ＨＰｒ
の三次元溶液構造の測定」，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈ．
２１０，８８１〜８９１．ｖａｎ Ｎｕｌａｎｄ，Ｎ．
Ａ．Ｊ．，Ｈａｎｇｙｉ，Ｉ．Ｗ．，ｖａｎ Ｓｃｈａ
ｉｋ，Ｒ．Ｃ．，Ｂｅｒｅｎｄｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｃ．，
ｖａｎ Ｇｕｎｓｔｅｒｅｎ，Ｗ．Ｆ．，Ｓｃｈｅｅ
ｋ，Ｒ．Ｍ．及びＲｏｂｉｌｌａｒｄ，Ｇ．Ｔ．（１９
９４）「核磁気共鳴核オーバーハウザー効果データから
の制御分子動力学によって測定された大腸菌からのヒス
チジン含有ホスホキャリヤータンパク質ＨＰｒの高解像
度構造」，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈ．５１，８３〜９
０．Ｗｅｂｅｒ，Ｌ．，Ｗａｌｌｂａｕｍ，Ｓ．，Ｂｒ
ｏｇｅｒ，Ｃ．及びＧｕｂｅｒｎａｔｏｒ，Ｋ．（１９
９５）「遺伝学的アルゴリズムによる組合せ化合物ライ
ブラリーの生物学的活性の最適化」，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈ
ｅｍ．１０７，２４５２〜２４５４．Ｗｉｔｔｅｋｉｎ
ｄ，Ｍ．，Ｒａｊａｇｏｐａｌ，Ｐ．，Ｂｒａｎｃｈｉ
ｎｉ，Ｂ．Ｒ．，Ｒｅｉｚｅｒ，Ｊ．，Ｓａｉｅｒ，
Ｍ．Ｈ．Ｊｒ．及びＫｌｅｖｉｔ，Ｒ．Ｅ．（１９９
２）「二次元ＮＭＲ分光法によるＢａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｕｂｔｉｌｉｓからのホスホキャリヤータンパク質ＨＰ
ｒの溶液構造」，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１，１３６
３〜１３７６．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｋ．（１９８８）
「生物学における電子顕微鏡による細胞化学及び免疫化
学のアルカリホスファターゼ」（Ｏｇａｗａ，Ｋ．とＢ
ａｒｋａ，Ｔ．編集）ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ． 配列表 （１）一般的情報： （ｉ）出願人： （Ａ）名称：ＡＲＰＩＤＡ （Ｂ）街：Ｄａｍｍｓｔｒａｓｓｅ ３６ （Ｃ）市：Ｍｕｅｎｃｈｅｎｓｔｅｉｎ （Ｄ）州：ＢＬ （Ｅ）国：スイス （Ｆ）郵便番号：ＣＨ−４１４２ （Ｇ）電話：＋４１ ６１ ４１７ ９６ ６０ （Ｈ）テレファックス：＋４１ ６１ ４１７ ９６
６１ （ii）発明の名称：ターゲット系 （iii）配列数：３２ （iv）コンピューター読み取り形式： （Ａ）媒体型：フロッピーディスク （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭ ＰＣ コンパーティブ
ル （Ｃ）オペレーティング・システム：ＰＣ−ＤＯＳ／Ｍ
Ｓ−ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウウェア：Ｐａｔｅｎｔｉｎ Ｒｅｌｅａ
ｓｅ＃１．０，バージョン＃１．３０（ＥＰＯ） （２）配列番号：１に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：７アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１：
Ｇｒｄａｄｏｌｎｉｋ，Ｓ．，Ｇｅｍｍｅｃｋｅｒ，
Ｇ．，Ｋｅｓｓｌｅｒ，Ｈ．，Ｂｕｈｒ，Ａ．，Ｌａｎ
ｚ．Ｒ．及びＥｒｎｉ，Ｂ．（１９９６）「大腸菌のグ
ルコース輸送体；ＩＩＢGlcのホスホシステイン形のＮ
ＭＲ特徴付けとＩＩＡGlcサブユニットとのその結合界
面（Ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ
ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ；ＮＭＲ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐ
ｈｏｓｐｈｏｃｙｓｔｅｉｎｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｔｈ
ｅ ＩＩＢGlcｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｂｉｎ
ｄｉｎｇ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｗｉｔｈｔｈｅ ＩＩ
ＡGlcｓｕｂｕｎｉｔ）」，提出中．Ｅｒｎｉ，Ｂ．
（１９９２）「細菌ホスホトランスフェラーゼ系による
グルコースと他の炭水化物のグループ転座」，Ｉｎｔ．
Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１３７Ａ，１２７〜１４８．Ｅｒ
ｎｉ，Ｂ．，Ｔｒａｃｈｓｅｌ，Ｈ．，Ｐｏｓｔｍａ
ｎ，Ｐ．Ｗ．，及びＲｏｓｅｎｂｕｓｈ，Ｊ．Ｐ．（１
９８２）「細菌ホスホトランスフェラーゼ系．Ｓａｌｍ
ｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの膜からのグル
コース特異性酵素ＩＩの可溶化と精製」，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２５７，１３７２６〜１３７３０．Ｆｅ
ｌｉｃｉ，Ｆ．，Ｌｕｚｚａｇｏ，Ａ．及びＣｏｒｔｅ
ｓｅ，Ｒ．（１９９３）「ファージ展示ペプチドによる
不連続エピトープの模造，ＩＩ．ファージペプチドライ
ブラリーからのＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓ
ｉｓ毒素に対する保護モノクローン抗体によって認識さ
れるクローンの選択」，Ｇｅｎｅ，１２８，２１〜２
７．Ｈｕｒｌｅｙ，Ｊ．Ｈ．，Ｆａｂｅｒ，Ｈ．Ｒ．，
Ｗｏｒｔｈｙｌａｋｅ，Ｄ．，Ｍｅａｄｏｗ，Ｎ．
Ｄ．，Ｒｏｓｅｍａｎ，Ｓ．，Ｐｅｔｔｉｇｒｅｗ，
Ｄ．Ｗ．及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｓ．Ｊ．（１９９
３）「大腸菌ＩＩＩGlcとグリセロールキナーゼとの調
節複合体の構造」，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９，６７３〜
６７７．Ｊｉａ，Ｚ．Ｃ．Ｑｕａｉｌ，Ｊ．Ｗ．，Ｗａ
ｙｇｏｏｄ，Ｅ．Ｂ．及びＤｅｌｂａｅｒｅ，Ｌ．Ｔ．
Ｊ．（１９９３ａ）「大腸菌ヒスチジン含有ホスホキャ
リヤータンパク質ＨＰｒの２．０Å解像度構造−再測
定」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，２２４９０〜
２２５０１．Ｊｉａ，Ｚ．Ｃ．，Ｖａｎｄｏｎｓｅｌａ
ａｒ，Ｍ．，Ｑｕａｉｌ，Ｊ．Ｗ．及びＤｅｌｂａｅｒ
ｅ，Ｌ．Ｔ．Ｊ．（１９９３ｂ）「ヒスチジン含有ホス
ホキャリヤータンパク質の１．６Å解像度構造で明らか
にされた活性中心Ｔｏｒｓｉｏｎ−Ａｎｇｌｅ菌株」，
Ｎａｔｕｒｅ，３６１，９４〜９７．Ｋａｌｂｉｔｚｅ
ｒ，Ｈ．Ｒ．とＨｅｎｇｓｔｅｎｂｅｒｇ，Ｗ．（１９
９３）「二次元Ｈ−Ｉ−ＮＭＲ分光法によって測定した
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ−ａｕｒｅｕｓからのヒ
スチジン含有タンパク質（ＨＰｒ）の溶液構造」，Ｅｕ
ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１６，２０５〜２１４．Ｋ
ｅｌｌｙ，Ｓ．Ｍ．，Ｂｏｓｅｃｋｅｒ，Ｂ．Ａ．，Ｃ
ｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．（１９９２）「Ｓａｌｍｏｎｅｌｌ
ａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓの弱毒突然変異体の保護
特性の特徴付け」，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０，
４８８１〜４８９０．Ｌｅｎｇｅｌｅｒ，Ｊ．Ｗ．，Ｊ
ａｈｒｅｉｓ，Ｋ．及びＷｅｈｍｅｉｅｒ，Ｕ．Ｆ．
（１９９４）「ホスホエノールピルベート依存性ホスホ
トランスフェラーゼ系の酵素ＩＩ：炭水化物の輸送にお
けるそれらの構造と機能」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．Ａｃｔａ １１８８，１〜２８．Ｌｉａｏ，
Ｄ．Ｉ．，Ｓｉｌｖｅｒｔｏｎ，Ｅ．，Ｓｅｏｋ，Ｙ．
Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｂ．Ｒ．，Ｐｅｔｅｒｋｏｆｓｋｙ，
Ａ．，Ｄａｖｉｅｓ，Ｄ．Ｒ．（１９９６）「糖輸送に
おける第１段階：大腸菌ＰＥＰの酵素Ｉのアミノ末端ド
メインの結晶構造，糖ホスホトランスフェラーゼ系及び
ＨＰｒとのホスホトランスファー複合体のモデル」，Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅ，４，８６１〜８７２．ＬｉＣａｌｓ
ｉ，Ｃ．，Ｃｒｏｃｅｎｚｉ，Ｔ．Ｓ．，Ｆｒｅｉｒ
ｅ，Ｅ．及びＲｏｓｅｍａｎ，Ｓ．（１９９１）「細菌
ホスホトランスフェラーゼ系による糖輸送．Ｓａｌｍｏ
ｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの酵素Ｉの構造的
及び熱力学的ドメイン」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
６６，１９５１９〜１９５２７．Ｌｕｘ，Ｒ．，Ｊａｈ
ｒｅｉｓ，Ｋ．，Ｂｅｔｔｅｎｂｒｏｏｋ，Ｋ．，Ｐａ
ｒｋｉｎｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．及びＬｅｎｇｅｌｅｒ，Ｊ．
Ｗ．（１９９５）「大腸菌のＰＴＳ炭水化物吸収系と化
学走性シグナリング経路との間の連絡リンク」，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２，１１
５８３〜１１５８７．Ｍａｏ，Ｑ．，Ｓｃｈｕｎｋ，
Ｔ．，Ｆｌｕｅｋｉｇｅｒ，Ｋ．及びＥｒｎｉ，Ｂ．
（１９９５）「大腸菌の精製マンノースホスホトランス
フェラーゼ系の、リン脂質小胞中への機能的再構成」，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，５２５８〜５２６
５．Ｍａｒｔｉｎ−Ｖｅｒｓｔｒａｅｔｅ，Ｉ．，Ｄｅ
ｂａｒｂｏｕｉｌｌｅ，Ｍ．，Ｋｌｉｅｒ，Ａ．及びＲ
ａｐｏｐｏｒｔ，Ｇ（１９９４）「Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓの野生型及び切頭ＬｅｖＲと、レバナ
ーゼ・オペロンの上流活性化配列との相互作用」，Ｊ．
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４１，１７８〜１９２． Ｍａｙ
ａｈａｒａ，Ｈ．，Ｈｉｒａｎｏ，Ｈ．，Ｓａｉｔｏ
ｈ，Ｔ．及びＯｇａｗａ，Ｋ．（１９６７）「非特異性
アルカリホスファターゼの活性の超化学的実証のための
新規なクエン酸鉛方法」，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｅ，１
１，８８． Ｍｅｉｎｓ，Ｍ．，Ｊｅｎｏ，Ｐ．，Ｍｕ
ｅｌｌｅｒ，Ｄ．，Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｗ．Ｊ．，Ｒｏｓ
ｅｎｂｕｓｃｈ，Ｊ．Ｐ．及びＥｒｎｉ，Ｂ（１９９
３）「大腸菌のグルコース輸送体のシステインリン酸
化」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，１１６０４〜
１１６０９．Ｍｅａｄｏｗ，Ｎ．Ｄ．，Ｆｏｘ，Ｄ．
Ｋ．及びＲｏｓｅｍａｎ，Ｓ．（１９９０）「細菌ホス
ホエノールピルベート：グリコースホスホトランスフェ
ラーゼ系」，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５
９，４９７〜５４２．Ｍｕｋｈｉｊａ，Ｓ．及びＥｒｎ
ｉ，Ｂ．（１９９０）「大腸菌のＮ−アセチルグルコサ
ミンの輸送体のＮｉ2+アフィニティ・クロマトグラフィ
ーによる精製と、機能的再構成」，ｊ．ｂＩＯＬ．ｃＨ
ＥＭ．２７１，１４８１９〜１４８２４．Ｎｉｓｈｉｋ
ａｗａ，Ｙ．，Ｓｃｏｔｌａｎｄ，Ｓ．Ｍ．，Ｓｍｉｔ
ｈ，Ｈ．Ｒ．，Ｗｉｌｌｓｈａｗ，Ｇ．Ａ．及びＲｏｗ
ｅ，Ｂ．（１９９５）「ベロ細胞毒素産生大腸菌血清群
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制」，Ｍｉｃｒｏｂ．Ｐａｔｈｏｇ．１８，２２３〜２
２９．Ｐｏｓｔｍａ，Ｐ．Ｗ．，Ｌｅｎｇｅｌｅｒ，
Ｊ．Ｗ．及びＪａｃｏｂｓｏｎ，Ｇ．Ｒ．（１９９３）
「細菌におけるホスホエノールピルベート：炭水化物ホ
スホトランスフェラーゼ系」，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒ
ｅｖ．５７，５４３〜５９４．Ｐｏｗｅｌｌ．Ｂ．
Ｓ．，Ｃｏｕｒｔ．Ｄ．Ｌ．，Ｉｎａｄａ，Ｔ．，Ｎａ
ｋａｍｕｒａ，Ｙ．，Ｍｉｃｈｏｔｅｙ，Ｖ．，Ｃｕ
ｉ，Ｘ．，Ｒｅｉｚｅｒ，Ａ．，Ｓａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．
及びＲｅｉｚｅｒ，Ｊ．（１９９５）「大腸菌のｒｐｏ
Ｎオペロン内でコードされるホスホトランスフェラーゼ
系の新規なタンパク質．酵素ＩＩＡNtrはｅｒａts突然
変異体の有機窒素上での増殖と条件致死率とに影響を及
ぼす」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，４８２２〜
４８３９．Ｒａｊａｇｏｐａｌ，Ｐ．，Ｗａｙｇｏｏ
ｄ，Ｅ．Ｂ．及びＫｌｅｖｉｔ，Ｒ．Ｅ．（１９９４）
「ヒスチジンリン酸化の構造的結果：Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓと大腸菌とのヒスチジン含有タンパ
ク質のホスホヒスチジン形のＮＭＲ特徴付け」，Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３，１５２７１〜１５２８２．
Ｒｏｏｓｓｉｅｎ，Ｆ．Ｆ．，Ｂｒｉｎｋ，Ｊ．及び
Ｒｏｂｉｌｌａｒｄ，Ｇ．Ｔ．（１９８３）「平衡状態
におけるピルビン酸キナーゼ交換反応を介した［32Ｐ］
ホスホエノールピルベートを合成するための簡単な方
法」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．７
６０，１８５〜１８７．Ｒｅｉｚｅｒ，Ｊ．，Ｈｏｉｓ
ｃｈｅｎ，Ｃ．，Ｒｅｉｚｅｒ，Ａ．，Ｐｈａｍ，Ｔ．
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ホエノールピルベート−糖ホスホトランスフェラーゼ系
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析と進化関係」，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２，５０６
〜５２１． Ｓａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．（１９９３）「腸内
細菌におけるホスホトランスフェラーゼ系のタンパク質
に関係する調節相互作用」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃ
ｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５１，６
２〜６８．Ｓａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．とＲｅｉｚｅｒ，Ｊ．
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年後の新規なフロンティア」，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ．Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．１３，７５５〜７６４．Ｓａ
ｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．，Ｃｈａｖａｕｘ，Ｓ．，Ｄｅｕｔｓ
ｃｈｅｒ，Ｊ．，Ｒｅｉｚｅｒ，Ｊ．及びＹｅ，Ｊ．
Ｊ．（１９９５）「グラム陰性菌対グラム陽性菌のタン
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ペプチドリガンドの探索」，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，
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Ｒ．，Ｚｈｕ，Ｐ．Ｐ．及びＰｅｔｅｒｋｏｆｓｋｙ，
Ａ．（１９９６）「ホスホリル供与体特異性に関する大
腸菌ホスホエノールピルベート：糖ホスホトランスフェ
ラーゼ系の酵素Ｉのカルボキシル末端ドメインの重要
性」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，９３，３４７〜３５１．Ｔｉｔｇｅｍｅｙｅｒ，
Ｆ．，Ｍａｓｏｎ，Ｒ．Ｅ．及びＳａｉｅｒ，Ｍ．Ｈ．
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ランスフェラーゼ系のグルコース特異性酵素ＩＩＡによ
る大腸菌のラフィノース透過酵素の調節」，Ｊ．Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ．１７６，５４３〜５４６．ｖａｎ Ｎｕ
ｌａｎｄ，Ｎ．Ａ．Ｊ．，Ｂｏｅｌｅｎｓ，Ｒ．，Ｓｃ
ｈｅｅｋ，Ｒ．Ｍ．及びＲｏｂｉｌｌａｒｄ，Ｇ．Ｔ．
（１９９５）「ＮＭＲ−ＮＯＥデータからの制御分子動
力学によって測定された大腸菌からのヒスチジン含有ホ
スホキャリヤータンパク質ＨＰｒのリン酸化形の高解像
度構造」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４６，１８０〜１
９３．ｖａｎ Ｎｕｌａｎｄ，Ｎ．Ａ．Ｊ．，Ｇｒｏｔ
ｚｉｎｇｅｒ，Ｊ．，Ｄｉｊｋｓｔｒａ，Ｋ．，Ｓｃｈ
ｅｅｋ，Ｒ．Ｍ．及びＲｏｂｉｌｌａｒｄ，Ｇ．Ｔ．
（１９９２）「多次元ＮＭＲ分光法を用いた、大腸菌か
らのヒスチジン含有ホスホキャリヤータンパク質ＨＰｒ
の三次元溶液構造の測定」，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈ．
２１０，８８１〜８９１．ｖａｎ Ｎｕｌａｎｄ，Ｎ．
Ａ．Ｊ．，Ｈａｎｇｙｉ，Ｉ．Ｗ．，ｖａｎ Ｓｃｈａ
ｉｋ，Ｒ．Ｃ．，Ｂｅｒｅｎｄｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｃ．，
ｖａｎ Ｇｕｎｓｔｅｒｅｎ，Ｗ．Ｆ．，Ｓｃｈｅｅ
ｋ，Ｒ．Ｍ．及びＲｏｂｉｌｌａｒｄ，Ｇ．Ｔ．（１９
９４）「核磁気共鳴核オーバーハウザー効果データから
の制御分子動力学によって測定された大腸菌からのヒス
チジン含有ホスホキャリヤータンパク質ＨＰｒの高解像
度構造」，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈ．５１，８３〜９
０．Ｗｅｂｅｒ，Ｌ．，Ｗａｌｌｂａｕｍ，Ｓ．，Ｂｒ
ｏｇｅｒ，Ｃ．及びＧｕｂｅｒｎａｔｏｒ，Ｋ．（１９
９５）「遺伝学的アルゴリズムによる組合せ化合物ライ
ブラリーの生物学的活性の最適化」，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈ
ｅｍ．１０７，２４５２〜２４５４．Ｗｉｔｔｅｋｉｎ
ｄ，Ｍ．，Ｒａｊａｇｏｐａｌ，Ｐ．，Ｂｒａｎｃｈｉ
ｎｉ，Ｂ．Ｒ．，Ｒｅｉｚｅｒ，Ｊ．，Ｓａｉｅｒ，
Ｍ．Ｈ．Ｊｒ．及びＫｌｅｖｉｔ，Ｒ．Ｅ．（１９９
２）「二次元ＮＭＲ分光法によるＢａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｕｂｔｉｌｉｓからのホスホキャリヤータンパク質ＨＰ
ｒの溶液構造」，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１，１３６
３〜１３７６．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｋ．（１９８８）
「生物学における電子顕微鏡による細胞化学及び免疫化
学のアルカリホスファターゼ」（Ｏｇａｗａ，Ｋ．とＢ
ａｒｋａ，Ｔ．編集）ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ． 配列表 （１）一般的情報： （ｉ）出願人： （Ａ）名称：ＡＲＰＩＤＡ （Ｂ）街：Ｄａｍｍｓｔｒａｓｓｅ ３６ （Ｃ）市：Ｍｕｅｎｃｈｅｎｓｔｅｉｎ （Ｄ）州：ＢＬ （Ｅ）国：スイス （Ｆ）郵便番号：ＣＨ−４１４２ （Ｇ）電話：＋４１ ６１ ４１７ ９６ ６０ （Ｈ）テレファックス：＋４１ ６１ ４１７ ９６
６１ （ii）発明の名称：ターゲット系 （iii）配列数：３２ （iv）コンピューター読み取り形式： （Ａ）媒体型：フロッピーディスク （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭ ＰＣ コンパーティブ
ル （Ｃ）オペレーティング・システム：ＰＣ−ＤＯＳ／Ｍ
Ｓ−ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウウェア：Ｐａｔｅｎｔｉｎ Ｒｅｌｅａ
ｓｅ＃１．０，バージョン＃１．３０（ＥＰＯ） （２）配列番号：１に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：７アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１：
【００３９】（２）配列番号：２に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：７アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２：
【００４０】(２）配列番号：３に関する情報： （ｉ）配列特徴： （Ａ）長さ：７アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：３：
【００４１】（２）配列番号：４に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１２アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ／注釈＝“Ｘａａは
任意のアミノ酸であることができる” （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：２ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ／注釈＝“Ｘａａは
任意のアミノ酸であることができる” （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１１ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ／注釈＝“Ｘａａは
任意のアミノ酸であることができる” （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１２ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ／注釈＝“Ｘａａは
任意のアミノ酸であることができる” （xi）配列：配列番号：４：
任意のアミノ酸であることができる” （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：２ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ／注釈＝“Ｘａａは
任意のアミノ酸であることができる” （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１１ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ／注釈＝“Ｘａａは
任意のアミノ酸であることができる” （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１２ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ／注釈＝“Ｘａａは
任意のアミノ酸であることができる” （xi）配列：配列番号：４：
【００４２】（２）配列番号：５に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：８アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：５：
【００４３】（２）配列番号：６に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：８アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：６：
【００４４】（２）配列番号：７に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：８アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：７：
【００４５】（２）配列番号：８に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：８アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：８：
【００４６】（２）配列番号：９に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：８アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：９：
【００４７】（２）配列番号：１０に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：９アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１０：
【００４８】（２）配列番号：１１に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：９アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｐｒｏ／注釈＝“ビオチン
分子は位置１においてＰｒｏに共有結合する” （xi）配列：配列番号：１１：
分子は位置１においてＰｒｏに共有結合する” （xi）配列：配列番号：１１：
【００４９】（２）配列番号：１２に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：４アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１２：
【００５０】（２）配列番号：１３に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：４アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｔｒｐ／注釈＝“Ｔｒｐは
アセチル化される” （xi）配列：配列番号：１３：
アセチル化される” （xi）配列：配列番号：１３：
【００５１】（２）配列番号：１４に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１５アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１４：
【００５２】（２）配列番号：１５に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１５アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１１ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｔｒｐ／注釈＝“Ｔｒｐは
アセチル化される” （xi）配列：配列番号：１５：
アセチル化される” （xi）配列：配列番号：１５：
【００５３】（２）配列番号：１６に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１０アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１６：
【００５４】（２）配列番号：１７に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１０アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１７：
【００５５】（２）配列番号：１８に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１０アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （xi）配列：配列番号：１８：
【００５６】（２）配列番号：１９に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１０アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１９：
【００５７】（２）配列番号：２０に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１０アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２０：
【００５８】（２）配列番号：２１に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：６アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２１：
【００５９】（２）配列番号：２２に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：９アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２２：
【００６０】（２）配列番号：２３に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：９アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｘａａ／注釈＝“Ａｓｐは
アセチル化される” （xi）配列：配列番号：２３：
アセチル化される” （xi）配列：配列番号：２３：
【００６１】（２）配列番号：２４に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：６アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２４：
【００６２】（２）配列番号：２５に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：６アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２５：
【００６３】（２）配列番号：２６に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：６アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２６：
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【００６５】（２）配列番号：２８に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：６アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２８：
【００６６】（２）配列番号：２９に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：６アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：２９：
【００６７】（２）配列番号：３０に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：９アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：３０：
【００６８】（２）配列番号：３１に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１３アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：３１：
【００６９】（２）配列番号：３２に関する情報： （i）配列特徴： （Ａ）長さ：１４アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子種類：ペプチド （ix）特徴 （Ａ）名称／キー：ペプチド （Ｂ）位置：１ （Ｃ）他の情報：／ラベル＝Ｍｅｔ／注釈＝“Ｍｅｔは
アセチル化される” （xi）配列：配列番号：３２：
アセチル化される” （xi）配列：配列番号：３２：
【００７０】
【図１】細菌ホスホエノールピルベート依存性ホスホト
ランスフェラーゼ系。
ランスフェラーゼ系。
【図２】組合せライブラリーからの阻害性化合物のスク
リーニング、選択及び特徴付けの分析法。
リーニング、選択及び特徴付けの分析法。
【図３】ファージ展示ライブラリーから酵素Ｉ結合ペプ
チドの選択。
チドの選択。
【図４】Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１２ ＵＴ５８０の増殖阻
害。
害。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｑ 1/04 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＺ
Claims (10)
- 【請求項１】 特定の抗菌剤の薬物ターゲット系であ
って、（ａ）系の一部ではない、自然に若しくは非特異
的内因性ホスホヒドロラーゼの影響下で加水分解するホ
スホリル基受容体を用いることによって、又は（ｂ）ホ
スホトランスフェラーゼ系の酵素の少なくとも１種をブ
ロックするか若しくは不活化する化学化合物によってホ
スホトランスフェラーゼ系を阻害することによって細菌
ホスホトランスフェラーゼ系を脱共役又は阻害すること
を含む薬物ターゲット系。 - 【請求項２】 系の一部ではない、自然に加水分解す
るホスホリル基受容体を用いることによって、細菌ホス
ホトランスフェラーゼ系を脱共役する又は阻害すること
を含む、請求項１記載の薬物ターゲット系。 - 【請求項３】 系の一部ではない、非特異的内因性ホ
スホヒドロラーゼの影響下で加水分解するホスホリル基
受容体を用いることによって、細菌ホスホトランスフェ
ラーゼ系を脱共役することを含む、請求項１又は２に記
載の薬物ターゲット系。 - 【請求項４】 ホスホトランスフェラーゼ系の酵素の
少なくとも１種をブロックするか若しくは不活化する化
学化合物によってホスホトランスフェラーゼ系活性を阻
害することを含む、請求項１記載の薬物ターゲット系。 - 【請求項５】 ホスホトランスフェラーゼ系の酵素の
少なくとも１種をブロックする化学化合物によって細菌
ホスホトランスフェラーゼ系を阻害することを含む、請
求項１又は４に記載の薬物ターゲット系。 - 【請求項６】 ホスホトランスフェラーゼ系の酵素の
少なくとも１種を不活化する化学化合物によって細菌ホ
スホトランスフェラーゼ系を阻害することを含む、請求
項１又は４に記載の薬物ターゲット系。 - 【請求項７】 下記式： ＫＫＦＨＬＲＫ 配列番号： １ ＫＫＦＡＬＲＫ 配列番号： ２ ＫＫＦＤＬＲＫ 配列番号： ３ ＸＸＫＫＷＨＬＲＫＲＸＸ 配列番号： ４ ＫＫＷＨＬＲＫＲ 配列番号： ５ ＫＧＷＨＫＲＫＫ 配列番号： ６ ＫＫＷＨＲＲＫＫ 配列番号： ７ ＫＫＷＨＫＲＫＫ 配列番号： ８ ＫＫＦＨＩＲＫＲ 配列番号： ９ ＰＮＧＬＨＴＲＰＡ 配列番号：１０ Ｂｉｏ−ＰＮＧＬＨＴＲＰＡ 配列番号：１１ ＷＨＫＲ 配列番号：１２ Ａｃ−ＷＨＫＲ 配列番号：１３ で示されるペプチド配列。
- 【請求項８】 下記式： ＧＬＲＦＧＫＴＲＶＨＹＬＶＬＧ 配列番号：１４ ＳＧＲＫＳＴＲＶＨＨＷＬＬＶＬ 配列番号：１５ ＫＭＳＲＨＲＫＰＧＡ 配列番号：１６ ＳＳＬＲＧＨＲＷＶＹ 配列番号：１７ ＫＩＳＲＨＧＫＲＧＫ 配列番号：１８ ＫＩＳＲＨＧＲＰＴＧ 配列番号：１９ ＲＩＨＦＩＰＲＲＧＲ 配列番号：２０ ＲＬＨＹＬＦ 配列番号：２１ ＤＧＡＲＬＨＹＬＦ 配列番号：２２ ＡｃＤＧＡＲＬＨＹＬＦ 配列番号：２３ ＲＨＷＳＩＦ 配列番号：２４ ＲＨＲＴＬＦ 配列番号：２５ ＲＨＹＬＬＦ 配列番号：２６ ＲＨＩＴＳＬ 配列番号：２７ ＲＨＩＴＬＦ 配列番号：２８ ＭＳＲＨＲＮ 配列番号：２９ ＰＮＧＬＨＴＲＰＡ 配列番号：３０ ＭＲＬＬＫＴＬＣＦＧＬＣＧ 配列番号：３１ ＡｃＭＲＬＬＫＴＬＣＦＶＧＬＣＧ 配列番号：３２ で示されるペプチド配列。
- 【請求項９】 請求項１〜６のいずれかに従って同定
された抗菌剤と慣用的賦形剤とを含有することを含む、
伝染性疾患を治療するための薬剤組成物。 - 【請求項１０】 請求項７又は８のいずれかに記載の
ペプチドの１種以上を含有することを含む薬剤組成物。
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