JPH10330266A - インスリン作用増強活性組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は、ラノスタン骨格または３,４−セ
コラノスタン骨格を有する化合物の少なくとも一種を有
効成分とするインスリン作用増強活性および分化誘導活
性を有する組成物に関する。 【解決手段】 式Ｉまたは式II： 【化１】 で示されるラノスタン骨格を有するトリテルペン類の少
なくとも１種、または式IIIまたは式IV： 【化２】 で示される３,４−セコラノスタン骨格を有するトリテ
ルペン類の少なくとも１種を有効成分として含むインス
リン作用増強活性、または分化誘導活性を有する組成
物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ラノスタン骨格ま
たは３,４−セコラノスタン骨格を有する化合物の少な
くとも一種を有効成分とするインスリン作用増強活性お
よび分化誘導活性を有する組成物、例えば、医薬製剤、
化粧用組成物、機能性食品、健康食品など、に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】細胞
が全能性を失いながら特殊な組織に分化することを細胞
の発生運命という。そのプログラムは、受精卵の遺伝子
にすでに書き込まれていたはずであるが、発生に伴って
特定の遺伝子のスイッチがオン、オフされる制御機構は
以前なぞのままである。遺伝子レベルでは、細胞分化と
は遺伝子発現の型が変化することであり、多くの遺伝子
の発現が一定のプログラムに従って遷移し分化した細胞
としての形質を備えるようになる。

【０００３】脂肪細胞は、筋肉、軟骨、骨などを生じる
中胚葉性の幹細胞から特定の分化プログラムの活性化に
よって誘導されるが、その遺伝子発現制御の機構につい
て、細胞の分化を制御するキーポイントの転写因子がＰ
ＰＡＲ（peroxisome proliferator-activated recepto
r：ペルオキシソーム増殖剤応答性レセプター）である
ことが明確になってきた。

【０００４】ところで、この発明者らはインスリン非依
存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ：non-insulin-dependent diab
etes）に対する治療薬として大きな期待を集めているシ
グリタゾン誘導体（ＴＺＤ）がインスリンの存在下前脂
肪細胞の分化を強く誘導することを見つけた。ＴＺＤに
よる活性化はＰＰＡＲに特異的であり、ＰＰＡＲγへの
親和性の強さが血糖降下作用の強さおよび脂肪細胞の分
化誘導活性の強さに相関することが判明している。すな
わち、糖尿病治療薬の評価の１つとしての指標となし得
ることになる。

【０００５】そこで、この発明者らは、シグリタゾン誘
導体のように、インスリンの存在下脂肪細胞の分化を誘
導するもののなかに糖尿病治療薬としての作用を持つも
のがあると考えた。白色脂肪細胞ＳＴ−１３前脂肪細胞
株を用いて、植物成分の分化誘導活性をスクリーニング
するうちに、茯苓成分に強い分化誘導活性があることを
知った。

【０００６】日本産および中国産の茯苓は伐採後３〜５
年を経た枯れたマツ類（Ｐinus spp.、アカマツなど）
の根の周囲に生じるサルノコシカケ科の菌類マツホド
（Poriacocos Wolf）を基原とするものである。その他
の外国産茯苓はマツ属のほか、ヒマラヤスギ、カシ、ウ
ルシ、その他の植物を宿主とする。不定形の塊状で表面
は暗褐色で松膚状、内部は白色または淡紅色である。菌
核の外層をはいで乾燥したものが茯苓である。味はやや
粘稠性で新鮮なものは特異な微かなにおいがある。漢方
では利水、鎮静薬として、利尿異常、心悸亢進などの治
療に用いられている。本発明において分離精製された６
種の化合物はすでに知られているが、これらの化合物が
分化誘導活性を有することはかって報告されていない。

【０００７】白色脂肪細胞ＳＴ−１３前脂肪細胞株はｄ
ｄＮマウス自然発生乳がんの同系移植細胞第２代の腫瘤
より分離樹立された前脂肪細胞から脂肪細胞に分化する
クローン化細胞株である。ウシ胎児血清とインスリンな
どの分化誘導因子の存在下飽和密度に到達すると、細胞
質内に急速に脂肪を蓄積し脂肪細胞へと分化誘導が可能
であることが知られている。

【０００８】本発明の化合物はインスリンの分化誘導活
性を増強させると同時に化合物それ自体も分化誘導活性
を有する。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明のインスリン作用
増強活性または分化誘導活性を有する組成物は下記の化
合物を有効成分として含むものである。ラノスタン骨格
を有する、式Ｉまたは式II：

【化５】 ［式中、Ｒ₁は、Ｈ、またはＣＨ₃であり、Ｒ_2Aは、β−
ＯＨ、β−ＯＣＯＣＨ₃、α−ＯＨ、α−ＯＣＯＣＨ₃で
あるか、または環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを
形成し、Ｒ₃およびＲ₅は、同一または異なって、Ｈ、ま
たはＯＨであり、Ｒ₄は、−Ｃ(＝ＣＨ₂)−Ｃ(ＣＨ₃)₂−
Ｒa（ここで、Ｒaは、ＨまたはＯＨを示す）、または−
ＣＨ＝Ｃ(ＣＨ₃)−Ｒb（ここで、Ｒbは、ＣＨ₃またはＣ
Ｈ₂ＯＨを示す）であり、Ｒ₆は、ＣＨ₃、またはＣＨ₂Ｏ
Ｈである。］で示されるトリテルペン類であり、さらに
具体的には、例えば、式Ｉ−ａ:

【化６】 で示されるポリポレン酸Ｃ、式II−ａ：

【化７】 で示されるパキマ酸、式Ｉ−ｂ：

【化８】 で示されるデヒドロパキマ酸、式II−ｂ：

【化９】 で示される３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキシトラ
メテノール酸、および式Ｉ−ｃ：

【化１０】 で示されるデヒドロトラメテノール酸（３β−ヒドロキ
シラノスタ−７,９(１１),２４−トリエン−２１−オイ
ックアシッド）を挙げることができる。好ましくは、パ
キマ酸およびデヒドロトラメテノール酸である。

【００１０】さらに、３,４−セコラノスタン骨格を有
する、式IIIまたは式IV：

【化１１】 ［式中、Ｒ₁およびＲ_2Bは、Ｈ、またはＣＨ₃であり、Ｒ
₃およびＲ₅は、同一または異なって、Ｈ、またはＯＨで
あり、Ｒ₄は、−Ｃ(＝ＣＨ₂)−Ｃ(ＣＨ₃)₂−Ｒa（ここ
で、Ｒaは、ＨまたはＯＨを示す）、または−ＣＨ＝Ｃ
(ＣＨ₃)−Ｒb（ここで、Ｒbは、ＣＨ₃またはＣＨ₂ＯＨ
を示す）であり、Ｒ₆は、ＣＨ₃、またはＣＨ₂ＯＨであ
る］で示されるトリテルペン類、さらに具体的には、例
えば、式III−ａ：

【化１２】 で示されるポリコ酸Ａ、式III−ｂ：

【化１３】 で示されるポリコ酸Ｂ、式III−ｃ：

【化１４】 で示されるポリコ酸Ｄを挙げることができる。

【００１１】本発明の化合物には一般に生体内において
遊離形と実質的に同様の生理活性または薬理活性を発揮
するもの、例えば、本発明の化合物の誘導体および医薬
的に許容される塩、付加塩、水和物などは本発明の技術
的範囲に含まれるものである。例えば、酢酸エステル、
メチル、エチルなどの低級アルキルエステルなどのエス
テル体、およびＮa、Ｋなどの塩を挙げることができ
る。

【００１２】本発明の組成物のインスリン作用増強活性
および分化誘導活性を有する化合物としては、少なくと
も式Ｉ〜IVにおいて２１位のカルボン酸またはその誘導
体が有効であると推測される。

【００１３】本発明はさらに、茯苓または茯苓皮の抽出
エキスを有効成分とするインスリン作用増強活性および
分化誘導活性を有する組成物に関する。

【００１４】

【発明の実施の形態】本発明の化合物および抽出エキス
は医薬製剤、外用剤、化粧用組成物、機能性食品、健康
食品などの組成物として用いられ得る。医薬製剤、外用
剤および化粧用組成物の例としては、錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤、注射剤、経皮吸収剤、軟膏剤、坐
剤、ローション剤、クリーム剤など、機能性食品および
健康食品の例としては、粉末、ペースト、細粒、顆粒、
錠剤型保健食品、ドリンク剤、グミ製剤、クッキー、キ
ャンデー（あめ）、ガムなどを挙げることができる。こ
れらの組成物は通常用いられる製法によって製造され得
る。

【００１５】本発明では、茯苓だけでなく、通常は薬用
として用いられない茯苓皮からも成分を抽出して本発明
の化合物およびエキスを得ている。抽出溶媒としては、
低級アルコール、例えば、メタノール、エタノール、プ
ロピルアルコール、イソプロピルアルコール、エチレン
グリコールならびにプロピレングリコールなど、および
これらの水性媒体、エーテル、およびこれらの溶媒の混
合物を挙げることができる。好ましくは、メタノール、
エタノールまたはエーテルである。抽出溶媒がエタノー
ルおよびエーテルである場合は上記活性を有する化合物
がより選択的に抽出されるため、エタノールおよびエー
テル抽出エキスは強いインスリン作用増強活性および分
化誘導活性を示す。

【００１６】本発明の化合物は、茯苓から例えば次のよ
うにして得ることができる。市販の茯苓をメタノール、
メタノールなどを含む水性溶媒、または水を用いて、還
流しながら１〜３時間かけて抽出する。濾過後得られた
抽出液を減圧下で溶媒を留去し、得られた抽出エキスを
各種のクロマトグラフィーを用いて分離精製する。また
場合によっては、Ｎ−クロロメチルフタルイミドにより
エステル化を行ない、分離後、加水分解し精製する。ま
た得られた化合物はエステル化、アシル化等で誘導体化
する。例えば、ポリポレン酸Ｃ、パキマ酸、デヒドロパ
キマ酸、３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキシトラメ
テノール酸、ポリコ酸Ａおよびポリコ酸Ｂは次のように
して分離精製する。

【００１７】ポリポレン酸Ｃ、パキマ酸、デヒドロパキ
マ酸および３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキシトラ
メテノール酸の分離精製方法 分離精製操作を下記の表１に示す。

【表１】

【００１８】茯苓１５ｋｇを水浴上メタノールで還流し
ながら１時間抽出する。濾過後得られた抽出液を減圧下
で溶媒留去し、メタノール抽出エキス８６.４ｇを得
た。ついで、内径１２ｃｍ、長さ８０ｃｍのシリカゲル
カラムクロマトを用い、クロロホルム−メタノール（５
０：１）で順次溶出し、フラクションＡ〜Ｄを得た。フ
ラクションＡは過剰のクロロホルムを加えると沈殿を生
じた。この沈殿物を９０％メタノール溶液を溶媒とし
て、逆相系分取高速液体クロマトグラフィーに繰り返し
付し、ポリポレン酸Ｃ（３３ｍｇ）、パキマ酸（５００
ｍｇ）およびデヒドロパキマ酸（１００ｍｇ）を得た。
さらにフラクションＢの沈殿物の一部をアセトニトリル
に懸濁し、Ｎ−クロロメチルフタルイミドとトリエチル
アミンを加え１時間還流した。冷却後、減圧下にて溶媒
留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトを用い、ｎ−
ヘキサン−酢酸エチル（２：１）で順次溶出し、メチル
フタルイミドエステル体を得た。０.１Ｎ 水酸化ナトリ
ウム−エタノールで部分加水分解を行い、３−Ｏ−アセ
チル−１６α−ヒドロキシトラメテノール酸（１００ｍ
ｇ）を得た。

【００１９】ポリコ酸Ａおよびポリコ酸Ｂの分離精製方
法（表１参照） 上記のフラクションＤをさらにシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー及び逆相系分取高速液体クロマトグラフィ
ーに繰り返し付し、ポリコ酸Ａ（１００ｍｇ）およびポ
リコ酸Ｂ（３０ｍｇ）を得た。また、必要に応じ、通常
用いられる適当な溶媒を使って再結晶による精製を行っ
てもよい。

【００２０】ポリポレン酸Ｃ 無色針状結晶 ｍｐ：２７３〜２７５° [α]_D ²⁵ ＋２°(ピリジン) ＥＩ−ＭＳ（m/z）：４８２［Ｍ⁺］ ＨＲ−ＭＳ（m/z）：４８２.３３８３［Ｍ⁺］(Ｃ₃₁Ｈ₄₆
Ｏ₄) （計算値４８２.３３９８） ＵＶλmax(MeOH) nm：２４２(logε＝４.２５) ＩＲνmax(KBr) cm^-1：１７１０，１６８０

【００２１】パキマ酸 無色針状結晶 ｍｐ：２９６〜２９８° [α]_D ²⁵ ＋６°(ピリジン) ＥＩ−ＭＳ（m/z）：５２８［Ｍ⁺］ ＨＲ−ＭＳ（m/z）：５２８.３８２６［Ｍ⁺］(Ｃ₃₃Ｈ₅₂
Ｏ₅) （計算値５２８.３８１７） ＩＲνmax(KBr) cm^-1：１７３０，１６８０

【００２２】 デヒドロパキマ酸 無色針状晶 ｍｐ：２６８〜２７０° [α]_D ²⁵ ＋４１°(ピリジン) ＥＩ−ＭＳ（m/z）：５２６［Ｍ⁺］，５０８，４９３，４３３ 元素分析 Ｃ₃₃Ｈ₅₀Ｏ₅ 計算値 Ｃ；７５.２５，Ｈ；９.５９ 実測値 Ｃ；７５.０４，Ｈ；９.６１ ＵＶλmax(EtOH) nm：２４２(logε＝４.１０) ＩＲνmax(KBr) cm^-1：１７３０，１６８０

【００２３】３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキシト
ラメテノール酸 無色針状晶 ｍｐ＞３００゜ [α]_D ²⁵ ＋７°(ピリジン) ＥＩ−ＭＳ（m/z）：５１４［Ｍ⁺］，４８１，４２１，
３１６ ＨＲ−ＭＳ（m/z）：５１４.３６２９［Ｍ⁺］(Ｃ₃₂Ｈ₅₀
Ｏ₅) （計算値５１４.３６５８） ＩＲνmax(KBr) cm^-1：１７３７，１７０７

【００２４】デヒドロトラメテノール酸 無色針状晶 mp２５４−２５５゜ ［α］_Ｄ ^２５ ＋２９゜（ピリジン） ＥＩ−ＭＳ（m／z）：４５４［Ｍ］⁺，４３６，４２１ ＨＲ−ＭＳ（m／z）：４５４.３４５３［Ｍ］⁺ （Ｃ₃₀
Ｈ₄₆Ｏ₃） （計算値：４５４.３４４７） ＵＶλmax(EtOH) nm：２３５（logε＝３.８），２４
２（４.１），２５３（３.８） ＩＲνmax(KBr) cm^-1：１７０２

【００２５】ポリコ酸Ａ 無色針状晶 ｍｐ：２４８〜２４９° [α]_D ²⁵ ＋２２°(メタノール) ＥＩ−ＭＳ（m/z）：４９８［Ｍ⁺］，４８０，４２５，
４０７ ＨＲ−ＭＳ（m/z）：４９８.３３６２［Ｍ⁺］(Ｃ₃₁Ｈ₄₆
Ｏ₅) （計算値４９８.３３４５） ＵＶλmax(EtOH) nm：２４２(logε＝４.１１) ＩＲνmax(KBr) cm^-1：１７０３，１６４０

【００２６】ポリコ酸Ｂ 無晶形粉末 [α]_Ｄ＋１５°(メタノール) ＥＩ−ＭＳ（m/z）：４８４［Ｍ⁺］，４６６，４１１，
３９３ ＨＲ−ＭＳ（m/z）：４８４.３１２３［Ｍ⁺］(Ｃ₃₀Ｈ₄₄
Ｏ₅) （計算値４８４.３１８９） ＵＶλmax(EtOH) nm：２４２（logε＝４.０９） ＩＲνmax(KBr) cm^-1：１７０７，１６３９

【００２７】ポリコ酸Ｄ 無晶形粉末 ［α］_D ²⁵ ＋１１゜（メタノール） ＦＡＢ−ＭＳ（m／z）：５３７［Ｍ＋Ｎa］⁺ ＵＶ λ max（logε） nm：２３５（logε＝３.８），
２４２（４.１），２５３（３.８） ＩＲνmax(KBr) cm^-1：１７１０，１６３９

【００２８】分化誘導活性試験 細胞分化とは遺伝子発現の型が変化することであり、多
くの遺伝子の発現が一定のプログラムに従って遷移し分
化した細胞としての形質を備えるようになる。脂肪細胞
の場合、分化にともなう最も顕著な形質変化は、脂肪代
謝酵素の量と、その活性調節にかかわるホルモン受容−
応答系の変動でありこれらは分化後期の指標となる。

【００２９】本発明の化合物の分化誘導活性の試験に、
分化後期のマーカーとして、トリアシルグリセロール染
色（：細胞を中性ホルマリンで固定後oil red O染色す
ると細胞内に蓄積したトリアシルグリセロールが赤色に
染まる）およびトリアシルグリセロールの定量（：細胞
内のトリアシルグリセロールをイソプロピルアルコール
で抽出し、アセチルアセトン法で定量する）を行った。

【００３０】インスリン添加試験は、本発明の化合物の
白色脂肪細胞ＳＴ−１３前脂肪細胞株に対するインスリ
ンの分化誘導活性に与える影響（インスリン作用増強活
性）を試験するためのものであり、インスリン無添加試
験は本発明の化合物自体のＳＴ−１３前脂肪細胞に対す
る分化誘導活性（インスリン様活性）を試験するための
ものである。

【００３１】Ａ．トリアシルグリセロール染色 細胞を中性ホルマリンで固定後、oil red Ｏ（ｐ−ジメ
チルアミノアゾベンゼン−Ｏ−カルボン酸を０.１ｇと
り、エタノール１００mlに溶かす）で染色すると、細胞
内に蓄積したトリアシルグリセロールは赤色に染まる。 Ｉ．材料 白色脂肪細胞ＳＴ−１３前脂肪細胞株 パキマ酸 １０^-5Ｍ ポリコ酸Ａ １０^-5Ｍ デヒドロトラメテノール酸 １０^-5Ｍ 茯苓皮メタノールエキス ０.１μg／mL ＤＭＳＯ ０.１％ シグリタゾン（陽性対照） １μg／mL 対照１０％ＦＣＳインスリン＋、およびインスリン−

【００３２】II．結果 図１に示すように、コントロールは赤色に染色された細
胞がないため、全く分化されていないことがわかる。一
方、インスリンのみの添加では僅かに分化していること
がわかる。ＤＭＳＯおよびインスリン添加では、インス
リン単独のときと変わらないため、ＤＭＳＯは影響はな
い。陽性対照のシグリタゾンは、インスリンのみの添加
に比べて、赤色に染色された細胞が多く、インスリンの
分化誘導作用を増強している。茯苓メタノールエキスも
またインスリンの分化誘導作用を増強している。同様
に、パキマ酸、デヒドロトラメテノール酸、ポリコ酸Ａ
にもインスリン作用増強活性が見られる。

【００３３】 Ｂ．トリアシルグセロールの定量 Ｉ．材料 白色脂肪細胞ＳＴ−１３前脂肪細胞株 ポリコ酸 Ｂ １０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ ポリコ酸 Ｄ １０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ ポリコ酸 Ａ １０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ ポリポレン酸 Ｃ １０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ ３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキシトラメテノール酸 １０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ デヒドロパキマ酸 １０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ パキマ酸 １０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ デヒドロトラメテノール酸 １０^-5Ｍ、１０^-6Ｍ 茯苓エーテルエキス １０μg／ml、１μg／ml 茯苓エタノールエキス １０μg／ml、１μg／ml 茯苓水エキス １０μg／ml、１μg／ml 茯苓皮メタノールエキス １０μg／ml、１μg／ml シグリタゾン １μg／ml(３×１０^-6Ｍ)、 ０.１μg／ml(３×１０^-7Ｍ) ＤＭＳＯ ０.１％、０.０１％ 対照 １０％ＦＣＳインスリン＋、およびインスリン−

【００３４】II．実験方法 (1)ＳＴ−１３前脂肪細胞の継代培養 ＳＴ−１３前脂肪細胞株はｄｄＮマウス自然発生乳癌の
同系移植第２代の腫瘤より分離樹立された前脂肪細胞か
ら脂肪細胞に分化するクローン化細胞株である。ＳＴ−
１３前脂肪細胞の継代培養方法は、培養液を吸引除去
後、ＰＢＳ（−）で２〜３回洗浄し、トリプシン（採集
濃度０.０２％）とＥＤＴＡ（最終濃度０.０５％）を添
加したＰＢＳ（−）で細胞を分散し継代培養液で培養し
た。 １．継代培養液 ２．ＤＭＥＭ（グルコース４５００mg／mＬ）、ＨＡＭ
Ｆ−１２、［ＤＭＥＭ：ＨＡＦＡ−１２＝１：１］ ３．１０％ウシ血清（胎児血清を用いると、血清中の未
同定の分子誘導因子により脂肪細胞に分化するため、未
分化な細胞として維持ができなくなる） ４．硫酸カナマイシン（６０μg／mＬ）

【００３５】(2)ＳＴ−１３前脂肪細胞の分化誘導 継代するときと同様に細胞を分散し、３×１０³／cm²の
密度で継代培養液を用いて培養した。２４時間後に誘導
培養液に交換した。この誘導培養液へ被験化合物１０^-6
Ｍ，１０^-5Ｍ、エキスは１０μg／mＬ、１μg／mＬの濃
度で０.１％ＤＭＳＯに溶解し、それぞれインスリン５
μg／mＬを添加した場合と添加しない場合で２週間培養
した。細胞分化のマーカーとしては細胞内のトリアシル
グリセロールをイソプロピルアルコールで抽出し、アセ
チルアセトン法で定量した。なお、陽性対照としてシグ
リタゾン１μg／mＬ（３×１０^-6Ｍ）、０.１μg／mＬ
（３×１０^-7Ｍ）を用いた。

【００３６】III．結果 図２はＳＴ−１３前脂肪細胞に対するインスリンの分化
誘導活性に与える本発明の化合物の影響を示すものであ
る。被験化合物が２列に記載されているのはそれぞれ濃
度が異なるものを示し、左が１０^-5Ｍであり、右は１０
^-6Ｍである。結果は被験物質の８種類の化合物すべての
１０^-5Ｍ濃度のポリコ酸Ｂ、ポリコ酸Ｄ、ポリコ酸Ａ、
ポリポレン酸Ｃ、３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキ
シトラメテノール酸、デヒドロパキマ酸、パキマ酸、デ
ヒドロトラメテノール酸および茯苓エーテルエキス、茯
苓エタノールエキス、茯苓皮メタノールエキスがインス
リンの分化誘導活性を増大させることを示している。特
に、ポリポレン酸Ｃ、パキマ酸、デヒドロトラメテノー
ル酸、茯苓エーテルエキス、茯苓エタノールエキス、茯
苓皮メタノールエキスには強い活性が観察される。

【００３７】図３は本発明の被験物質自体のＳＴ−１３
前脂肪細胞に対する分化誘導活性を示すものである。１
０^-5Ｍのポリポレン酸Ｃ、パキマ酸およびデヒドロトラ
メテノール酸の３種の化合物および茯苓エーテルエキス
は明らかな分化誘導活性を示している。特に、パキマ酸
およびデヒドロトラメテノール酸は強い活性が観察され
ている。また、残りの５種の被験化合物および茯苓水エ
キスおよび茯苓皮メタノールエキスの分化誘導活性は濃
度依存性であるから、濃度を上げることによって分化誘
導活性を現し得ることを示している。

【００３８】急性毒性試験 (1)試験化合物 ポリコ酸Ａ (2)試験方法 ＢＤＦ₁雄性マウス４週令５匹を使用し、１週間動物室
で馴化後、１８時間絶食させてから試験化合物を０.５
％ＣＭＣ−Ｎａに懸濁して、経口投与した（投与容量
０.１ｍｌ／１０ｇ体重）。 (3)試験結果 １０００ｍｇ／ｋｇの用量をマウスに投与しても死亡例
はなく、異常症状も認められなかった。従って、試験化
合物の毒性は低い。

【００３９】有効な投与量及び投与方法 本発明で用いられる化合物はそのまま、あるいは慣用の
製剤担体と共に動物及び人に投与することができる。本
発明の組成物の投与形態としては、特に限定がなく、必
要に応じ適宜選択して使用することができ、錠剤、カプ
セル剤、顆粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、経皮吸収
剤、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤、坐剤等の非経
口剤が挙げられる。

【００４０】経口剤としての有効量は、患者の年令、体
重、疾患の程度により異なるが、通常成人で本発明の化
合物の重量として１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは１０ｍｇ〜
５００ｍｇを、１日数回に分けての服用が適当である。
経口剤は、例えば、乳糖、デンプン、ショ糖、ブドウ
糖、マンニトール、コンスターチ、無機塩類等を用いて
常法に従って製造される。

【００４１】これらの製剤には、必要に応じて上記の賦
形剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、乳化剤、滑
沢剤、湿潤剤、流動化剤、保存剤、矯味剤、着色剤、香
料等を使用することができる。

【００４２】例えば、結合剤にはデンプン、デキストリ
ン、アラビアゴム末、ヒドロキシプロピルスターチ、結
晶セルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、
カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、ポリビニルピロリドンを挙げること
ができる。

【００４３】崩壊剤としては、デンプン、ヒドロキシプ
ロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウ
ム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキ
シメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロ
ース、ポリビニルピロリドンがある。

【００４４】界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリ
ウム、大豆レシチン、卵黄レシチン、ショ糖脂肪酸エス
テル、ポリソルベート８０が挙げられる。

【００４５】滑沢剤の例には、タルク、ロウ類、水素添
加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネ
シウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミ
ニウムがある。

【００４６】流動化剤としては、軽質無水ケイ酸、乾燥
水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケ
イ酸マグネシウムを挙げることができる。

【００４７】また、本発明の化合物は、懸濁液、乳化
剤、シロップ剤、エリキシル剤としても投与することが
でき、これらの剤形には、矯味矯臭剤、着色剤が含まれ
ていてもよい。

【００４８】本発明の組成物は、さらに、食品の形態と
しても摂取され得、例えば、クッキー、グミ、ガムなど
の形態でもよい。これらの食品は通常の製造方法によっ
て製造することができる。

【００４９】非経口剤として発癌予防効果を発揮するた
めには、患者の年齢、体重、疾患の程度により異なる
が、通常成人で本発明の化合物の重量として１日０.１
ｍｇ〜５ｍｇまでの皮下注射、筋肉注射が適当と思われ
る。

【００５０】この非経口剤は常法に従って製造され、希
釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖
水溶液、注射用植物油、ゴマ油、落花生油、大豆油、ト
ウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレング
リコール等を用いることができる。さらに必要に応じ
て、殺菌剤、防腐剤、安定剤等を加えてもよい。

【００５１】その他の非経口剤としては、外用液剤、ゲ
ル状軟膏等の経皮吸収剤、直腸内投与のための坐剤等が
挙げられ、常法に従って製造される。

【００５２】例えば、ローション剤には、通常用いられ
る添加剤が含まれていてもよく、懸濁剤として、アラビ
アゴム、トラガント、デキストリン、メチルセルロー
ス、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキ
シプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、
アルギン酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、ポ
リビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ベントナ
イト、ビーガム、無水ケイ酸等が挙げられる。

【００５３】乳化剤として、石ケン、ラウリル硫酸ナト
リウム、ソルビタン、脂肪酸エステル、ポリオキシエチ
レンソルビタン、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、
モノグリセリド等が挙げられる。

【００５４】湿潤剤として、グリセリン、プロピレング
リコール、ソルビトール、１，３−ブチレングリコー
ル、dl-ピロリドンカルボン酸、乳酸ナトリウム等が挙
げられる。

【００５５】保存剤として、パラオキシ安息香酸エステ
ル類、塩化ベンザルコニウム等が挙げられる。これらを
用いて、常法に従ってローション剤を調製する。

【００５６】次に、本発明の製剤例を示して、本発明を
さらに詳細に説明するが、本発明はこれにより何ら制限
されるものではない。

【００５７】 上記の処方に従って均一に混合し、打錠機にて圧縮成形
して一錠２００ｍｇの錠剤を得た。この錠剤一錠には、
ポリポレン酸Ｃが２０ｍｇ含まれており、成人一日３〜
６錠を数回に分けて服用する。

【００５８】 上記の処方に従って、、およびの一部を均一に
混合し、成形圧縮した後、粉砕し、、およびの残
量を加えて混合し、打錠機にて圧縮成形して一錠２００
ｍｇの錠剤を得た。この錠剤一錠には、ポリコ酸Ａが２
０ｍｇ含まれており、成人一日３〜６錠を数回に分けて
服用する。

【００５９】 上記の処方に従って均一に混合し、ねつ和した。押し出
し造粒機により造粒後、乾燥し、１２号のふるいを通し
て顆粒剤を得た。この顆粒剤１ｇにはパキマ酸が２０ｍ
ｇ含まれており、成人１日３〜６ｇを数回に分けて服用
する。

【００６０】 上記の処方に従って均一に混合し、圧縮成形機で圧縮成
形後、破砕機で砕き、３０号のふるいを通して細粒剤を
得た。この細粒剤１ｇにはデヒドロパキマ酸が２０ｍｇ
含まれており、成人１日３〜６ｇを数回に分けて服用す
る。

【００６１】 上記の処方に従って均一に混合し、２２０ｍｇを２号カ
プセルに充填した。このカプセル剤１粒には、ポリポレ
ン酸Ｃが２０ｍｇ含まれており、成人１日３〜６粒を数
回に分けて服用する。

【００６２】 上記の処方に従ってをとに溶解し、これにを加
えて乳化し、注射剤を得た。

【００６３】 上記の処方に従ってにとを加えて混合する。これ
に別にをの１部で膨潤させたものに加え均一に混和
した後、撹拌下にさらにの残部を加えて、十分に練り
会わせてゲル状軟膏剤を得た。

【００６４】 上記の処方に従ってをに加えて溶解分散させ、これ
にを加えて溶融させてから、十分に練り合わせる。さ
らに金型に充填し、冷却させて１個約１.８ｇの坐剤を
得た。

【００６５】 実施例９ ３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキシトラメテノール酸 １.０ｇ サラシミツロウ ０.１ｇ セタノール １.５ｇ ラウリル硫酸ナトリウム ０.５ｇ グリセリン ５.０ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０.２ｇ パラオキシ安息香酸プロピル ０.２ｇ精製水 適量 計 １００.０ｇ 上記の処方に従って、原料、、、およびを水
浴上で約７０℃に加温して溶かす。別におよびを全
量の約２／３容量の精製水に溶かし、これを約７０℃に
加温し、この混液を絶えずかきまぜつつある油相中に加
え、４０℃になるまでかきまぜたのち、残りの精製水を
加えて全量とし、十分に混和して製し、３−Ｏ−アセチ
ル−１６α−ヒドロキシトラメテノール酸を１％含有す
るローション剤を得た。

【００６６】 実施例１０ クリーム剤 (1)ポリコ酸Ｂ １.０ｇ (2)スクワラン １０.０ｇ (3)ミリスチン酸イソプロピル ７.０ｇ (4)ベヘニルアルコール １.０ｇ (5)セトステアリルアルコール ５.５ｇ (6)ステアリン酸モノグリセリン ２.０ｇ (7)ｄ−α−トコフェロール ０.０５ｇ (8)ＰＯＥ（２０）モノステアリン酸ソルビタン ２.０ｇ (9)キサンタンガム ０.１ｇ (10)１，３−ブチレングリコール ２.０ｇ (11)グリセリン ３.０ｇ (12)ソルビトール ５.０ｇ (13)パラベン ０.２ｇ (14)ｐＨ調製剤 適量(15)精製水 適量 計 １００.０ｇ 上記の処方に従って、原料(2)〜(3)を秤量し、８０〜９
０℃に加温溶解し、油相とする。原料(9)、(10)を混和
し、原料(11)〜(13)、(15)を加え、８０〜９０℃に加
温、撹拌、溶解し、水相賭する。水相に原料(1)、(14)
を加え、撹拌下、油相を水相に添加し、ホモミキサーを
用いて乳化後、撹拌しながら室温まで冷却し、ポリコ酸
Ｂを１％含有するクリーム剤を得た。

【００６７】 溶かしたとをよく混ぜ合わせ、よく混ぜ合わせた
を撹拌しつつ加え、さらに３００メッシュの網でふるっ
たを混ぜながら加えた。さらに、を混ぜながら加
えた。これを手で練り棒状にしてラップで包み冷蔵庫で
１時間寝かした。これを５ｍｍの輪切りにしてオーブン
で１７０℃、２０分間焼いた。

【００６８】実施例１２ グミ製剤 茯苓皮エタノールエキスを含有したグミ製剤を以下のよ
うにして製造した。 （１）グミ製剤生地の調製 ゼラチン ７０ｇ 砂糖 ４００ｇ 水あめ ４７０ｇ クエン酸 １３ｇ １／５濃縮果汁 ６０ｇ （ピーチ、グレープ、オレンジ、イチゴ、マスカット等） 色素 ２ｇ香料 ２ｇ 計 １０１８ｇ 表に示される配合に従い、をに混合し、約１３０℃
まで煮詰めた。一方、をその１.５倍量の水で膨潤さ
せた後、約６０℃で加温溶解させておき、これを素早く
前述の煮詰めた糖に混合した。これに、別途調製した
、、、の混合溶液を添加して撹拌、混合した
後、加水して水分２１重量％のグミ生地を調製した。そ
してこのグミ生地の温度が低下し（約４０℃）固化する
直前に、あらかじめ微粉末化した茯苓皮エタノールエキ
スを下記の表に示す割合で素早く加え、を固体の状態で
均一に分散させ、グミ製剤生地を調製した。

【００６９】 （２）グミ製剤の固化 次に、充分に乾燥させたコーンスターチをトレーの中に
敷き詰め表面を平らにし、グミ製剤を形成する凸型をコ
ーンスターチ表面に押し付けて一個当たり１０ｇを充填
できるスターチモールドを準備した。グミ製剤生地を注
射器に充填し、先に作成したスターチモールド中に１０
ｇずつ定量的にデポジットした。よって、グミ製剤一個
あたりに含有される茯苓皮エタノールエキスの量は５０
ｍｇとなった。

【００７０】室温で約２４時間エージングして固化させ
た後、グミ製剤をスターチモールドから取り出しオイル
コーティングした。エージング中にグミ製剤の水分含量
は減少し、１８重量％となった。水分は変化してもグミ
製剤一個当たりの茯苓皮エタノールエキスの含有量は５
０ｍｇである。また、グミ製剤のＡｗ（水分活性）は２
０℃で０．６８であり、常温で流通、保存しても問題の
ない値であった。

【００７１】実施例１３ グミ製剤 スプレードライにより造粒した茯苓皮エタノールエキス
を含有したグミ製剤を次のようにして製造した。まず、
茯苓皮エタノールエキス１００ｇおよびグラニュー糖２
０ｇを水１０００ｇに懸濁または溶解した。この懸濁液
をスプレードライ（スプレードライヤー Ｌ−８型：大
川原化工機社製）し、乾燥粉体７６ｇを得た。この乾燥
粉体７.２ｇおよびグミ生地９９２.８ｇを用い、実施例
１２と同様にしてグミ製剤生地を調製した。次いで、こ
のグミ製剤生地５ｇずつをスターチモールド中にデボジ
ットし、茯苓皮エタノールエキス３０ｍｇを含有するグ
ミ製剤を得た。

【００７２】実施例１４ 茯苓皮エタノールエキス入り飴（キャンディー）の製造 水飴７７.４８kg、グラニュー糖６６.７１kg、茯苓エタ
ノール抽出エキス０.９４kgおよび黒糖１４.８４kgを配
合加熱器を用いて１０２〜１０９℃にて溶解した。６０
℃にて３０分撹拌し、バキュームクラッカーで水分が２
％になるまで濃縮した。これに少量の香料を加えて取り
ナベ中で混合し、冷却機を用いて冷却後混和した。バッ
チロールおよびサイジングローラーで圧延し、スタンピ
ングマシンを用いて成型して冷却コンベアーで室温まで
冷却した。金属探知機にかけた後、目視検査をした。こ
れに、グラニュー糖２２.２kg、色素少量、アラビアゴ
ム０.１８kgおよびその他のものを加えてシロップ調整
して糖衣した。室温で１時間放置して乾燥させて艶出し
させ、室温で一夜放置して乾燥させて目視検査した。茯
苓皮エタノールエキス入り飴（キャンディー）約１６３
kgを得た。

【００７３】実施例１５ 茯苓皮エタノールエキス入りクッキーの製造 三温糖２０kgおよびショートニング１０kgを秤量して撹
拌および混合した。これに茯苓皮エタノールエキス１kg
および甘味料０.２kgおよび適量の香料などの液体原料
類を加え、撹拌および混合し、大豆タンパク１６kg、大
豆繊維４kgなどのその他の原料類２０kgを加え、再度撹
拌および混合した。これに卵２０kgおよび小麦粉３０kg
を加えて練り合わせて生地を作成した。生地を厚さ４mm
のローラーにかけて、成型器で型を抜く。型抜きしたも
のをバンドオーブンに入れて、１８０℃で１５分間焼き
上げた。冷却後約１００kgの茯苓皮エタノールエキス入
りクッキー１００kgを得た。

【００７４】実施例１６ 茯苓皮エタノールエキス入り無糖チューインガムの製造 通常使用される味ガムベースは、天然樹脂１０〜３０重
量％、酢酸ビニル樹脂１０〜３０重量％、合成ゴム１０
〜３０重量％、エステルガム５〜２０重量％、ワックス
類１０〜４０重量％、乳化剤１〜１０重量％および充填
剤５〜２０重量％等の割合で使用される。このガムベー
スに砂糖、ブドウ糖、水飴等の糖類、栄養素および香料
などを加え、常法により混合される。香料としては天然
香料、合成香料などの油脂香料が適当であるが、特に限
定されない。例えば、ミント系香料（ペパーミント、ス
ペアミント、メントール等）、フルーツ系香料（シトラ
ス、ミックスフルーツ、ストロベリー、グレープ、チェ
リー等）、スパイス系香料（シナモン、クローブ、アネ
トール、リコリス、シソ、ローズマリ他）等が挙げられ
る。

【００７５】チューインガムの製造工程は、公知の方法
に従って良い。例えば、一般にガムの原料を混合練成し
（ガム仕上がり温度４０〜６０℃）、適宜の厚さと幅で
押し出し、ロール圧延後、冷却、裁断、熟成などの工程
によって製造される。

【００７６】上記の通常使用されている味ガムベース９
５kg、軟化剤２kg、色素１kg、香料１kgおよび茯苓皮エ
タノール抽出エキス１kgをミキサー内で約２０分間十分
混合練成し（ガム仕上がり温度５０℃）、ついで、エク
ストリーダ（練成押出し機）内のスクリューで再び練り
ながらシート状に押出し、冷風で約１０℃に冷却後、パ
ウダーシュガーをかけ、ついで、連続的に圧延ロールに
かけ、最終的に１.２mmの厚さに延ばした。ロールカッ
ターでシートをガムの長手方向の幅約７２mmに切断し、
温度２０〜２５℃、湿度４５〜５５％のエージングルー
ムにて約１５時間貯蔵・熟成させて品質を安定させた。
その後、小さな短冊型（７２mm×１９mm）に切断し、重
さ３.２g、厚さ１.２mmの茯苓皮エタノールエキス入り
ガム約９６kgを得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明の化合物のＳＴ−１３前脂肪細胞に対
する分化誘導活性に与える影響を示す顕微鏡写真であ
る。

【図２】 本発明の化合物のＳＴ−１３前脂肪細胞に対
するインスリンの分化誘導活性に与える影響を示す棒グ
ラフである。

【図３】 本発明の化合物自体のＳＴ−１３前脂肪細胞
に対する分化誘導活性を示す棒グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｃ 62/38 Ｃ０７Ｃ 62/38 69/16 69/16 69/732 69/732 Ｚ Ｃ０７Ｊ 9/00 Ｃ０７Ｊ 9/00 // Ａ２１Ｄ 13/08 Ａ２１Ｄ 13/08 Ａ２３Ｇ 3/00 １０１ Ａ２３Ｇ 3/00 １０１ 3/30 3/30 Ａ６１Ｋ 35/84 Ａ６１Ｋ 35/84 Ａ

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式Ｉまたは式II： 【化１】 ［式中、Ｒ₁は、Ｈ、またはＣＨ₃であり、 Ｒ_2Aは、β−ＯＨ、β−ＯＣＯＣＨ₃、α−ＯＨ、α−
   ＯＣＯＣＨ₃であるか、または環を構成する炭素原子と
   ともにＣ＝Ｏを形成し、 Ｒ₃およびＲ₅は、同一または異なって、Ｈ、またはＯＨ
   であり、 Ｒ₄は、−Ｃ(＝ＣＨ₂)−Ｃ(ＣＨ₃)₂−Ｒa（ここで、Ｒa
   は、ＨまたはＯＨを示す）、または−ＣＨ＝Ｃ(ＣＨ₃)
   −Ｒb（ここで、Ｒbは、ＣＨ₃またはＣＨ₂ＯＨを示す）
   であり、 Ｒ₆は、ＣＨ₃、またはＣＨ₂ＯＨである。］で示される
   ラノスタン骨格を有するトリテルペン類の少なくとも１
   種、または、式IIIまたは式IV： 【化２】 ［式中、Ｒ₁およびＲ_2Bは、Ｈ、またはＣＨ₃であり、 Ｒ₃およびＲ₅は、同一または異なって、Ｈ、またはＯＨ
   であり、 Ｒ₄は、−Ｃ(＝ＣＨ₂)−Ｃ(ＣＨ₃)₂−Ｒa（ここで、Ｒa
   は、ＨまたはＯＨを示す）、または−ＣＨ＝Ｃ(ＣＨ₃)
   −Ｒb（ここで、Ｒbは、ＣＨ₃またはＣＨ₂ＯＨを示す）
   であり、 Ｒ₆は、ＣＨ₃、またはＣＨ₂ＯＨである］で示される３,
   ４−セコラノスタン骨格を有するトリテルペン類の少な
   くとも１種を有効成分として含むインスリン作用増強活
   性を有する組成物。
2. 【請求項２】 上記ラノスタン骨格を有するトリテルペ
   ン類が、ポリポレン酸Ｃ、パキマ酸、デヒドロパキマ
   酸、３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキシメテノール
   酸、デヒドロトラメテノール酸、または上記３,４−セ
   コラノスタン骨格を有するトリテルペン類が、ポリコ酸
   Ａ、ポリコ酸Ｂもしくはポリコ酸Ｄである、請求項１記
   載の組成物。
3. 【請求項３】 茯苓または茯苓皮の抽出エキスを有効成
   分とするインスリン作用増強活性を有する組成物。
4. 【請求項４】 式Ｉまたは式II： 【化３】 ［式中、Ｒ₁、Ｒ_2A、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅およびＲ₆は、前記
   と同じ意味である］で示されるラノスタン骨格を有する
   トリテルペン類の少なくとも１種、または式IIIまたは
   式IV： 【化４】 ［式中、Ｒ₁、Ｒ_2B、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅およびＲ₆は、前記
   と同じ意味である］で示される３,４−セコラノスタン
   骨格を有するトリテルペン類の少なくとも１種を有効成
   分として含む分化誘導活性を有する組成物。
5. 【請求項５】 上記ラノスタン骨格を有するトリテルペ
   ン類が、ポリポレン酸Ｃ、パキマ酸、デヒドロパキマ
   酸、３−Ｏ−アセチル−１６α−ヒドロキシメテノール
   酸、デヒドロトラメテノール酸、または上記３,４−セ
   コラノスタン骨格を有するトリテルペン類が、ポリコ酸
   Ａ、ポリコ酸Ｂもしくはポリコ酸Ｄである、請求項１記
   載の組成物。
6. 【請求項６】 有効成分として茯苓または茯苓皮の抽出
   エキスを含む、分化誘導活性を有する組成物。