JPH10330285A - 血糖降下剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】新規な血糖降下剤を提供する。 【解決手段】ＦＧＦ−１０を有効成分として含有する血
糖降下剤、特にＩＩ型糖尿病における血糖降下剤を提供
する。血糖降下剤の主流であるインスリンや経口血糖降
下剤と異なり、緩徐かつ適度な血糖値コントロール作用
を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は血糖降下剤、より詳
しくは、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）を有
効成分として含有する糖尿病治療用の血糖降下剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】近年、生活水準の向上により、欧米型の
食生活への変化、あるいは運動不足傾向の増加に伴っ
て、糖尿病および糖尿病性合併症の患者が増加してい
る。

【０００３】一般に糖尿病は、インスリン依存性（Ｉ
型、ＩＤＤＭ）とインスリン非依存性（ＩＩ型、ＮＩＤ
ＤＭ）とに分類され、糖尿病患者の９０％以上は後者で
ある。ＩＤＤＭの治療にはインスリン注射が、ＮＩＤＤ
Ｍの治療には、運動療法や食事療法と共にスルホニルウ
レアやビグアナイド系の経口糖尿病治療薬が選択される
［「今日の治療指針 ＴＯＤＡＹ‘Ｓ ＴＨＥＲＡＰＹ
１９９３」日野原重明、阿部正和監修、医学書院、４９
４から４９８頁］。しかし、未だに糖尿病に対する根本
的な薬物療法は確立されておらず、持続的な高血糖状態
に起因する視力障害や末梢神経障害、創傷治癒の遅延・
潰瘍化、肥満など種々の合併症を引き起こしているのが
現状である。

【０００４】一方、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−
１０）は、京都大学の伊藤らのグループが初めて、組換
え製法による発現および生理活性の確認を行った増殖因
子である［特願平８−２１４３７８］。構造的にはＦＧ
Ｆファミリーに属し、特にケラチノサイト増殖因子：Ｋ
ＧＦ−１とも呼ばれている線維芽細胞増殖因子７（ＦＧ
Ｆ−７）と約６０％のアミノ酸相同性を有する。また、
ほぼ同時期に、グラバー（Ｇｒｕｂｅｒ，Ｊ．Ｒ．）他
も、ＦＧＦ−１０と同じアミノ酸配列をコードする、Ｋ
ＧＦ−２遺伝子を発見している［Ｗｏ９６／２５４２
２：Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎ
ｃ．］。このＦＧＦ−１０（ＫＧＦ−２）は、上皮細胞
や骨細胞の増殖作用が確認されているものの、高血糖状
態の生体の血糖値を下げる作用は未だ報告されていな
い。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、糖尿
病患者の血糖値を安全にコントロールしうる、新規な血
圧降下剤を提供することにある。特に、インシュリン非
依存性であるＩＩ型糖尿病において有効な血圧降下剤を
提供する。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、種々の糖
尿病モデル動物にて、末梢投与された神経栄養因子が与
える影響を検討していたところ、ＩＩ型の糖尿病のモデ
ル動物の一種である高血糖自然発症マウス（ｏｂ／ｏｂ
マウス）［ハーバーグおよびコールマン、メタボリズ
ム、第２６巻、５９−９９頁（１９７７年）： Herber
g, L., and D. L.Coleman. 1977. Laboratory animals
exhibiting obesity and diabetes syndromes. Metabol
ism 26:59-99.］に、ＦＧＦ−１０を投与することによ
り血糖値を低下させうることを知った。この知見に基づ
き、更なる検討の結果、本発明を完成した。

【０００７】すなわち、本発明は、下記の医薬に関する
ものである。 （１）線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）、ある
いはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−２）を有効成
分として含有する血糖降下剤。 （２）配列番号：１のアミノ酸配列から成るポリペプチ
ド、もしくはその付加、欠失、あるいは置換改変体であ
る増殖因子を有効成分として含有する血糖降下剤。 （３）増殖因子が大腸菌宿主が産生する組換えタンパク
である（１）または（２）の血糖降下剤。 （４）糖尿病の治療に用いられる（１）ないし（３）の
血糖降下剤。 （５）糖尿病がインシュリン非依存性糖尿病（ＩＩ型糖
尿病、ＮＩＤＤＭ）である（４）の血糖降下剤。

【０００８】以下、詳細に本発明を説明する。本明細書
において、「線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１
０）、あるいはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−
２）」とは、１９９６年に伊藤らによって発見されたＦ
ＧＦファミリーの細胞増殖因子［特願平８−２１４３７
８］で、配列番号：１のアミノ酸配列を有し、ＦＲＳＫ
細胞（上皮細胞系の培養細胞）などの増殖作用、ラット
骨形成促進を有するタンパク質を意味する。以後の説明
では、ＦＧＦ−１０の改変体、即ち、配列番号：１のア
ミノ酸配列から成るポリペプチドの付加、欠失、あるい
は置換改変体をも含めて、「ＦＧＦ−１０」と総称す
る。代表的な改変体の作成方法や活性の測定法は、特願
平８−２１４３７８号明細書に示されている。

【０００９】なお、天然ＦＧＦ−１０は糖鎖を有するタ
ンパク質であるが、糖鎖の有無、種類に関わらず、同種
の細胞増殖活性を有する限り、ＦＧＦ−１０という概念
に含まれるものとする。また、ＦＧＦ−１０成熟タンパ
ク質としては、（１）配列番号：１の４０位ロイシン
（Ｌｅｕ４０）から始まり、２０８位セリン（Ｓｅｒ２
０８）に終わる１６９アミノ酸のタンパク質、および、
（２）６９位セリン（Ｓｅｒ６９）に始まり、２０８位
セリン（Ｓｅｒ２０８）に終わる１４０アミノ酸のタン
パク質、が現在判明しているが、上記のようにＦＧＦ−
１０はこの二種の成熟タンパク質に限定されるものでは
ない。

【００１０】「血糖降下剤」とは、病的な高血糖状態に
ある患者に投与し、血糖値を下げる医薬を意味する。
「糖尿病」とは、通常１００〜１２０ｍｇ／ｄｌ程度に
コントロールされている血糖値が異常に上昇する病気で
ある。現在の診断基準では、血糖値が、グルコース７５
ｇ負荷２時間後で２００ｍｇ／ｄｌ以上、空腹時血糖が
１４０ｍｇ／ｄｌ以上となっている。一般に糖尿病は、
インシュリン産生細胞の減少を伴うインスリン依存性
（Ｉ型、ＩＤＤＭ）とインシュリン感受性の低下によっ
て生じるとされるインスリン非依存性（ＩＩ型、ＮＩＤ
ＤＭ）とに分類され、糖尿病患者の９０％以上は後者で
ある。前者は、若年発症型で、自己免疫的にインシュリ
ン産生細胞が破壊され、インシュリンの量が足りなくな
るとされている。ケトーシス傾向が強く、生命維持に継
続的なインシュリン注射が必須とされている。「インシ
ュリン非依存性糖尿病（ＩＩ型糖尿病、ＮＩＤＤＭ）」
は、主に中年以降に発症するタイプの糖尿病で、インシ
ュリンに対する体細胞の感受性鈍化が原因とされる。血
中インシュリン濃度はむしろ高い。ケトーシス傾向弱
く、緩慢な進行のため、インシュリン注射より経口の血
糖降下剤が常用されるが、高血糖が間接的に様々な合併
症状を引き起こす。本発明、本明細書においては糖質コ
ルチコイド等のステロイド剤を連投したときに生じる病
的な高血糖状態（ステロイド糖尿病）、クッシング症候
群（Ｃｕｓｈｉｎｇ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）や末端肥大症
に於ける高血糖状態も、正常ないしは高インシュリン状
態での糖尿、という意味でＩＩ型糖尿病に含めるものと
する。

【００１１】（製造）本発明の血糖降下剤に用いるＦＧ
Ｆ−１０は、固有の生理活性を示すもので有れば、天然
抽出品、遺伝子組換え品を問わず、精製して本発明に使
用することができる。ＦＧＦ−１０の生産方法として
は、（１）ＦＧＦ−１０産生組織からの抽出、（２）Ｆ
ＧＦ−１０産生細胞（初代培養細胞や株化細胞）の培養
および抽出、（３）組換えＤＮＡを導入した宿主細胞の
培養および抽出などが考えられるが、一般的には、
（３）組換えＤＮＡを導入した宿主からの抽出が大量生
産に適している。組換え技術によるＦＧＦ−１０の製造
方法を以下に簡単に記載するが、詳細は、特願平８−２
１４３７８に記載されている。

【００１２】（組換え工程）配列番号：２で示されるＤ
ＮＡ配列を含むＦＧＦ−１０のｃＤＮＡを発現ベクター
に組み込む。ベクターとしては、適当な大腸菌、枯草
菌、酵母、動物昆虫細胞等の宿主内で増殖できるプラス
ミドやファージが選ばれるが、例えば、大腸菌由来のｐ
ＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５［ジーン（Ｇｅｎｅ）４巻１
２１頁（１９７８）］、枯草菌由来ｐＵＢ１１０［バイ
オケミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケ
ーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．）１１２巻，６７８頁（１９８３）］、
ＣＯＳ細胞に好適なｐＣＤＭ８等が挙げられる。ｃＤＮ
Ａをプラスミドに組み込む方法としては、常法が、マニ
アティス（Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ）他、モレキュラー・
クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎ
ｇ）、コールドスプリング ハーバー ラボラトリー
（Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ ｈａｒｂａｒ ｌａｂ．）
２３９頁（１９８２）に記載されている。

【００１３】（宿主）宿主は、ベクターの導入により形
質転換され、ＦＧＦ−１０を産生できる生物や培養細胞
であれば、特に限定されない。細菌としては、大腸菌、
枯草菌（バチルス類）等、酵母としては、サッカロマイ
セス属、トルラ属、ピキア属等、動物細胞としては、Ｃ
ＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞等が代表例である。
培養昆虫細胞、真菌、植物細胞、単細胞系だけでなく、
目的蛋白質遺伝子を組み込まれた昆虫や哺乳類、植物も
宿主の範疇に入る。

【００１４】（活性測定）形質転換体から、公知の方
法、例えば、コロニー・ハイブリダイゼイション法［ジ
ーン（Ｇｅｎｅ），１０巻 ６３頁（１９８０）］およ
びＤＮＡ塩基配列決定法［プロシーディングス オブ
ナショナル アカデミー オブサイエンス（Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）７４巻５６０頁
（１９７７）］を用い、所望のクローンを選出する。ま
た、ＣＯＳ細胞にて一過性に発現させ、培養上清の生理
活性を評価してクローン選択することも可能である。発
現されたＦＧＦ−１０蛋白の生理活性は、ＦＲＳＫ細胞
などの上皮細胞の増殖促進作用を測定することにより評
価できる。

【００１５】（精製）組換え技術により生産されたＦＧ
Ｆ−１０蛋白は、生化学の分野で常用される精製方法に
て精製が可能である。イオン交換クロマトグラフィー、
ゲル濾過、逆相ＨＰＬＣ、硫安沈澱、限外濾過、ＳＤＳ
−ＰＡＧＥなどが適宜組み合わせて用いられるが、ＦＧ
Ｆ類の場合、特にヘパリン等のリガンドを用いたアフィ
ニティークロマトグラフィー、抗体カラムクロマトグラ
フィーなどが大量精製に好適である。ＦＧＦ−１０蛋白
に対する抗体は、ポリクローナル、モノクローナル共
に、自体公知の方法で作製し得る。ＦＧＦ−１０特異的
抗体は抗体カラムに使用出来るだけでなく、ＥＬＩＳＡ
等の免疫化学的定量法に使用できる。

【００１６】（製剤）製剤としては、注射剤、経口剤、
液剤、凍結乾燥品いずれも用いることが出来るが、特に
皮下投与用注射製剤が好ましい。これら非経口投与製剤
には、当該分野にて公知の安定化剤、担体を用いること
ができ、使用時に等張溶液として用いるのが好ましい。
医薬担体としては、例えば、アルブミン等の血漿由来蛋
白、グリシン等のアミノ酸、マンニトール等の糖を用い
ることができ、通常、皮下あるいは筋肉内投与用凍結乾
燥製剤に用いられる。また、水溶製剤、凍結乾燥製剤と
して使用する場合、凝集を防ぐためにＴｗｅｅｎ８０な
どの界面活性剤を添加するのが好ましい。長期の薬効を
要する場合は、公知のタンパク除放性製剤担体を用いて
製剤する事もできる。

【００１７】（使用方法）本発明の血糖降下剤は、主成
分がＦＧＦ−１０の場合は、通常成人キログラムあたり
０．５μｇ〜５ｍｇを静脈内、皮下、または筋肉内投与
する。投与回数は投与量、投与経路や患者の症状により
適宜増減されるものであるが、月一回から一日三回の投
与が可能であり、一般的には週１から５回、数週間の投
薬治療が行われる。この治療により、血糖値はゆっくり
と減少し、従来の血圧降下剤にない適度な血糖値の低下
と安定が得られる。ＦＧＦ−１０による血糖降下作用
は、従来の知見から説明できるものではないが、少なく
とも、インシュリンあるいはＩＧＦの作用とは全く異な
る、新しい薬理機序を介したものであると考えられる。

【００１８】（毒性）正常マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、
雄性、５週齢：日本チャールスリバー社）に一週間、お
よび肥満型糖尿病マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｌｅｐ＜
ｏｂ＞、雌性、６週齢：日本チャールスリバー社、Ｊａ
ｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に二週間、最大５
ｍｇ／ｋｇのＦＧＦ−１０を腹腔内、あるいは皮下投与
したが、体重減少や死亡例はなかった。一般的に毒性は
低いと考えられる。

【００１９】

【発明の効果】本発明の血糖降下剤は、インスリンのよ
うに急激な低血糖を起こすこと無く、緩徐に高血糖状態
を改善する。

【００２０】

【実施例】以下、本発明を実施例にて説明する。 （ＦＧＦ−１０の発現および精製）ヒトＦＧＦ−１０の
構造遺伝子に相当するＤＮＡ断片（配列番号：２）と、
大腸菌発現ベクターであるｐＥＴ１１ｃ（ストラタジー
ン社）をＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化し、アガロー
スゲル電気泳動にて分取することにより直鎖化したベク
ターＤＮＡをライゲーションし、大腸菌ＪＭ１０９を形
質転換することによりクローン化した。これらの中から
ＦＧＦ−１０ｃＤＮＡが正しい方向に挿入されたプラス
ミドを単離し、塩基配列の確認を行い、ｐＥＴ−ｈＦＧ
Ｆ−１０を得た。これを用いて大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ
３）を形質転換した。得られた組換えクローンのうちの
１つをＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ−ｈＦＧＦ−１０と
名づけ、これを用いてヒトＦＧＦ−１０の発現生産を行
った。

【００２１】（培養）ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ−ｈ
ＦＧＦ−１０をアンピシリン１００μｇ／ｍｌを含むＬ
Ｂ培地１０ｍｌに植菌したものを４本用意し、３７℃で
一晩前培養を行った。翌日それぞれ全量を１００μｇ／
ｍｌを含むＴＢ培地５００ｍｌ×４本に植え込み３７℃
で振とう培養した。ＯＤ６００＝０．８に達した時点で
ＩＰＴＧを最終濃度が１ｍＭになるように添加し、培養
温度を２８℃に下げてさらに６時間培養を継続した。

【００２２】（抽出精製）培養液を遠心分離し、得られ
た菌体を５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０にて１
回洗浄し、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２μｇ／ｍｌロイペプチ
ン、２μｇ／ｍｌペプスタチン、１ｍＭ ＰＭＳＦを含
む５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０に懸濁した。
超音波破砕により菌体を破砕し、ベックマンＪ２−２１
Ｍ／Ｅ高速冷却遠心機にてＪＡ−２０ローターを用い
て、１５０００回転で１時間遠心分離することにより上
清を採取した。ＨｉＴｒａｐ Ｈｅｐａｒｉｎ（５ｍ
ｌ，ファルマシア）を５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ
８．０で平衡化し、先に調製した菌体破砕上清をアプラ
イした。続いて５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０
で溶出液のＡ２６０がベースラインに戻るまで洗浄した
後、連続的にＮａＣｌ濃度勾配を３Ｍまで増加させるこ
とにより、蛋白を溶出した。組換えヒトＦＧＦ−１０に
相当する約１９ｋＤａの蛋白は約１．２Ｍ ＮａＣｌの
位置に溶出された。なお、流速は２ｍｌ／分で行った。

【００２３】（製剤例）本発明のＦＧＦ−１０製剤のう
ち、代表的なものである皮下投与用水溶／凍結乾燥製剤
は、以下のように製造することができる。 （１）精製組換えＦＧＦ−１０：１ｍｇに対し、グリシ
ン０．３４ｍｇ、マンニトール９ｍｇ、非イオン性界面
活性剤：ポリソルベート８０、０．２ｍｇを加え、燐酸
緩衝液１ｍｌ（ｐＨ７．４、５ｍＭ）に溶解させ、上記
溶液を凍結乾燥する。（２）１５０ｍＭ塩化ナトリウ
ム、０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０を含有する１０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）でＦＧＦ−１０を５ｍｇ／ｍｌ
になるように調製し、ＦＧＦ−１０水溶液を得る。
（３）１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％Ｔｗｅｅ
ｎ８０を含有する１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
でＦＧＦ−１０を５ｍｇ／ｍｌになるように調製した。
続いて、マンニトールを１０ｍｇ／ｍｌになるように添
加し、ＦＧＦ−１０水溶液を得る。無菌的にバイアル充
填し、常法に従って凍結乾燥して、ＦＧＦ−１０凍結乾
燥製剤を得る。バイアル内に窒素を封入し、打栓する。

【００２４】（薬理試験）一群１０匹の肥満型糖尿病ｏ
ｂｅｓｅ（ｏｂ／ｏｂ）マウス［Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｌ
ｅｐ＜ｏｂ＞、雌性、６週齢：日本チャールスリバー
社、Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ］を自由摂
食させ、１および５ｍｇ／ｋｇのＦＧＦ−１０を一日一
回二週間投与した（皮下投与）。対照群（Ｎ＝５）には
生理食塩水を投与した。また、一群５匹の正常マウス
［Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、雄性、４週齢：日本チャールスリ
バー社］を自由摂食させ、１および５ｍｇ／ｋｇのＦＧ
Ｆ−１０を一日一回一週間投与した（腹腔内投与）。全
ての群において最後の投与の５時間後に腹部大動脈より
採血し、血清を得た。血中グルコース濃度は、超微量多
目的生化学自動分析装置ＣＨＥＭ１［ヘキソキナーゼ
法、バイエル］を用いて測定した。

【００２５】ＦＧＦ−１０を用いて得られた結果を表１
および表２に示す。スチューデントｔ検定により、ＦＧ
Ｆ−１０投与群と対照群の血糖値の有意差を検定した。 表１：ｏｂ／ｏｂマウスの血糖値 血糖値（平均値±ＳＤ） （ｍｇ／ｄｌ） 対照群 ４５３±１７ ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）投与群 ３０７±４２＊＊ ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋｇ）投与群 ３５５±２７＊＊ ＊＊：ｐ＜０．０１

【００２６】 表２：正常マウスの血糖値 血糖値（平均値±ＳＤ） （ｍｇ／ｄｌ） 対照群 ２１５±１７ ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）投与群 ２２４±１５ ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋｇ）投与群 ２０９±３２

【００２７】表１に示すようにＦＧＦ−１０を投与され
た糖尿病モデル群では、血中グルコース濃度が、対照群
に比べて有意に減少したが、正常マウスの場合、血糖値
は下がらなかった（表２）。低血糖を起こしやすいイン
スリンとは異なり、ＦＧＦ−１０では血糖値を正常域に
調節する作用が期待される。

【００２８】配列番号：１ 配列の長さ：２０８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Met Trp Lys Trp Ile Leu Thr His Cys Ala Ser Ala Phe Pro His Leu 1 5 10 15 Pro Gly Cys Cys Cys Cys Cys Phe Leu Leu Leu Phe Leu Val Ser Ser 20 25 30 Val Pro Val Thr Cys Gln Ala Leu Gly Gln Asp Met Val Ser Pro Glu 35 40 45 Ala Thr Asn Ser Ser Ser Ser Ser Phe Ser Ser Pro Ser Ser Ala Gly 50 55 60 Arg His Val Arg Ser Tyr Asn His Leu Gln Gly Asp Val Arg Trp Arg 65 70 75 80 Lys Leu Phe Ser Phe Thr Lys Tyr Phe Leu Lys Ile Glu Lys Asn Gly 85 90 95 Lys Val Ser Gly Thr Lys Lys Glu Asn Cys Pro Tyr Ser Ile Leu Glu 100 105 110 Ile Thr Ser Val Glu Ile Gly Val Val Ala Val Lys Ala Ile Asn Ser 115 120 125 Asn Tyr Tyr Leu Ala Met Asn Lys Lys Gly Lys Leu Tyr Gly Ser Lys 130 135 140 Glu Phe Asn Asn Asp Cys Lys Leu Lys Glu Arg Ile Glu Glu Asn Gly 145 150 155 160 Tyr Asn Thr Tyr Ala Ser Phe Asn Trp Gln His Asn Gly Arg Gln Met 165 170 175 Tyr Val Ala Leu Asn Gly Lys Gly Ala Pro Arg Arg Gly Gln Lys Thr 180 185 190 Arg Arg Lys Asn Thr Ser Ala His Phe Leu Pro Met Val Val His Ser 195 200 205

【００２９】配列番号：２ 配列の長さ：６９０ｂｐ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源 生物名：ヒト 配列 CTTCCAGTAT GTTCCTTCTG ATGAGACAAT TTCCAGTGCC GAGAGTTCCA GTACA ATG 58 TGG AAA TGG ATA CTG ACA CAT TGT GCC TCA GCC TTT CCC CAC CTG CCC 106 GGC TGC TGC TGC TGC TGC TTT TTG TTG CTG TTC TTG GTG TCT TCC GTC 154 CCT GTC ACC TGC CAA GCC CTT GGT CAG GAC ATG GTG TCA CCA GAG GCC 202 ACC AAC TCT TCT TCC TCC TCC TTC TCC TCT CCT TCC AGC GCG GGA AGG 250 CAT GTG CGG AGC TAC AAT CAC CTT CAA GGA GAT GTC CGC TGG AGA AAG 298 CTA TTC TCT TTC ACC AAG TAC TTT CTC AAG ATT GAG AAG AAC GGG AAG 346 GTC AGC GGG ACC AAG AAG GAG AAC TGC CCG TAC AGC ATC CTG GAG ATA 394 ACA TCA GTA GAA ATC GGA GTT GTT GCC GTC AAA GCC ATT AAC AGC AAC 442 TAT TAC TTA GCC ATG AAC AAG AAG GGG AAA CTC TAT GGC TCA AAA GAA 490 TTT AAC AAT GAC TGT AAG CTG AAG GAG AGG ATA GAG GAA AAT GGA TAC 538 AAT ACC TAT GCA TCA TTT AAC TGG CAG CAT AAT GGG AGG CAA ATG TAT 586 GTG GCA TTG AAT GGA AAA GGA GCT CCA AGG AGA GGA CAG AAA ACA CGA 634 AGG AAA AAC ACC TCT GCT CAC TTT CTT CCA ATG GTG GTA CAC TCA TAGAG 684 GAAGGC 690

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２８

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２８】

【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：２０８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Met Trp Lys Trp Ile Leu Thr His Cys Ala Ser Ala Phe Pro His Leu 1 5 10 15 Pro Gly Cys Cys Cys Cys Cys Phe Leu Leu Leu Phe Leu Val Ser Ser 20 25 30 Val Pro Val Thr Cys Gln Ala Leu Gly Gln Asp Met Val Ser Pro Glu 35 40 45 Ala Thr Asn Ser Ser Ser Ser Ser Phe Ser Ser Pro Ser Ser Ala Gly 50 55 60 Arg His Val Arg Ser Tyr Asn His Leu Gln Gly Asp Val Arg Trp Arg 65 70 75 80

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２８

【補正方法】変更

【補正内容】 Lys Leu Phe Ser Phe Thr Lys Tyr Phe Leu Lys Ile Glu Lys Asn Gly 85 90 95 Lys Val Ser Gly Thr Lys Lys Glu Asn Cys Pro Tyr Ser Ile Leu Glu 100 105 110 Ile Thr Ser Val Glu Ile Gly Val Val Ala Val Lys Ala Ile Asn Ser 115 120 125 Asn Tyr Tyr Leu Ala Met Asn Lys Lys Gly Lys Leu Tyr Gly Ser Lys 130 135 140 Glu Phe Asn Asn Asp Cys
Lys Leu Lys Glu Arg Ile Glu Glu Asn Gly 145 150 155 160 Tyr Asn Thr Tyr Ala Ser Phe Asn Trp Gln His Asn Gly Arg Gln Met 165 170 175 Tyr Val Ala Leu Asn Gly Lys Gly Ala Pro Arg Arg Gly Gln Lys Thr 180 185 190 Arg Arg Lys Asn Thr Ser Ala His Phe Leu Pro Met Val Val His Ser 195 200 205

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２９】配列番号：２ 配列の長さ：６９０ｂｐ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源 生物名：ヒト 配列 CTTCCAGTAT GTTCCTTCTG ATGAGACAAT TTCCAGTGCC GAGAGTTCCA GTACA ATG 58 TGG AAA TGG ATA CTG ACA CAT TGT GCC TCA GCC TTT CCC CAC CTG CCC 106 GGC TGC TGC TGC TGC TGC TTT TTG TTG CTG TTC TTG GTG TCT TCC GTC 154 CCT GTC ACC TGC CAA GCC CTT GGT CAG GAC ATG GTG TCA CCA GAG GCC 202 ACC AAC TCT TCT TCC TCC TCC TTC TCC TCT CCT TCC AGC GCG GGA AGG 250

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】 CAT GTG CGG AGC TAC AAT CAC CTT CAA GGA GAT GTC CGC TGG AGA AAG 298 CTA TTC TCT TTC ACC AAG TAC TTT CTC AAG ATT GAG AAG AAC GGG AAG 346 GTC AGC GGG ACC AAG AAG GAG AAC TGC CCG TAC AGC ATC CTG GAG ATA 394 ACA TCA GTA GAA ATC GGA GTT GTT GCC GTC AAA GCC ATT AAC AGC AAC 442 TAT TAC TTA GCC ATG AAC AAG AAG GGG AAA CTC TAT GGC TCA AAA GAA 490

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】 TTT AAC AAT GAC TGT AAG CTG AAG GAG AGG ATA GAG GAA AAT GGA TAC 538 AAT ACC TAT GCA TCA TTT AAC TGG CAG CAT AAT GGG AGG CAA ATG TAT 586 GTG GCA TTG AAT GGA AAA GGA GCT CCA AGG AGA GGA CAG AAA ACA CGA 634 AGG AAA AAC ACC TCT GCT CAC TTT CTT CCA ATG GTG GTA CAC TCA TAGAG 684 GAAGGC 690

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１
   ０）、あるいはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−
   ２）を有効成分として含有する血糖降下剤。
2. 【請求項２】配列番号：１のアミノ酸配列から成るポリ
   ペプチド、もしくはその付加、欠失、あるいは置換改変
   体である増殖因子を有効成分として含有する血糖降下
   剤。
3. 【請求項３】増殖因子が大腸菌宿主が産生する組換えタ
   ンパクである請求項１または２の血糖降下剤。
4. 【請求項４】糖尿病の治療に用いられる請求項１ないし
   ３の血糖降下剤。
5. 【請求項５】糖尿病がインシュリン非依存性糖尿病（Ｉ
   Ｉ型糖尿病、ＮＩＤＤＭ）である請求項４の血糖降下
   剤。