JPH10330397A - サイトカイン調節剤およびサイトカインレベルの変化に関連する病状および状態における使用方法 - Google Patents
サイトカイン調節剤およびサイトカインレベルの変化に関連する病状および状態における使用方法Info
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- JPH10330397A JPH10330397A JP10144645A JP14464598A JPH10330397A JP H10330397 A JPH10330397 A JP H10330397A JP 10144645 A JP10144645 A JP 10144645A JP 14464598 A JP14464598 A JP 14464598A JP H10330397 A JPH10330397 A JP H10330397A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 変化したまたは異常なサイトカイン活性によ
り特徴付けられる状態を有する被験体におけるサイトカ
イン活性を調節する方法を提供すること。また、例え
ば、廃用性体調偏移、酸化窒素およびサイトカインによ
り媒介される疾患、有害な薬物反応、肥満症、敗血症性
ショック、およびガン化学療法によるまたは器官移植に
応答して起こる有害な副作用を包含する状態を処置する
方法を提供すること。 【解決手段】 強力なサイトカイン調節剤である新規な
ペプチド、および薬学的に許容可能なキャリアおよびサ
イトカイン調節剤を含有する薬学的組成物。このような
サイトカイン調節剤の被験体への投与は、サイトカイン
活性を増強するか、または抑制し得る。
り特徴付けられる状態を有する被験体におけるサイトカ
イン活性を調節する方法を提供すること。また、例え
ば、廃用性体調偏移、酸化窒素およびサイトカインによ
り媒介される疾患、有害な薬物反応、肥満症、敗血症性
ショック、およびガン化学療法によるまたは器官移植に
応答して起こる有害な副作用を包含する状態を処置する
方法を提供すること。 【解決手段】 強力なサイトカイン調節剤である新規な
ペプチド、および薬学的に許容可能なキャリアおよびサ
イトカイン調節剤を含有する薬学的組成物。このような
サイトカイン調節剤の被験体への投与は、サイトカイン
活性を増強するか、または抑制し得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、一般にペプチド化
学および分子病理学の分野に関し、さらに詳細には、新
規なサイトカイン調節剤およびサイトカインにより調節
される病理的過程および病状の制御における新規なサイ
トカイン調節剤の使用に関する。
学および分子病理学の分野に関し、さらに詳細には、新
規なサイトカイン調節剤およびサイトカインにより調節
される病理的過程および病状の制御における新規なサイ
トカイン調節剤の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】サイトカインは、環境的、機械的、およ
び病理学的ストレスを含む多くの異なる種類の誘導刺激
に応答して種々の細胞により産生される、分泌された溶
解性タンパク質のクラスである。リンパ球、炎症細胞お
よび造血細胞は、細胞の増殖、分化およびエフェクター
機能を制御することによって免疫応答を調節する種々の
サイトカインを分泌する。例えば、免疫応答の間でＴ細
胞刺激に応答する際に産生される調節サイトカインは、
免疫抑制的または免疫刺激的であり得る。サイトカイン
レベルの変化に関連する免疫応答および急性期の応答
は、例えば、廃用性体調偏移(disuse deconditionin
g)、移植、ガンの処置、敗血症性ショックおよび他の細
菌に関連する病状に関連する器官損傷のような器官損
傷、薬物有害作用、酸化窒素に媒介される組織損傷、お
よび糖尿病によって起こり得る。
び病理学的ストレスを含む多くの異なる種類の誘導刺激
に応答して種々の細胞により産生される、分泌された溶
解性タンパク質のクラスである。リンパ球、炎症細胞お
よび造血細胞は、細胞の増殖、分化およびエフェクター
機能を制御することによって免疫応答を調節する種々の
サイトカインを分泌する。例えば、免疫応答の間でＴ細
胞刺激に応答する際に産生される調節サイトカインは、
免疫抑制的または免疫刺激的であり得る。サイトカイン
レベルの変化に関連する免疫応答および急性期の応答
は、例えば、廃用性体調偏移(disuse deconditionin
g)、移植、ガンの処置、敗血症性ショックおよび他の細
菌に関連する病状に関連する器官損傷のような器官損
傷、薬物有害作用、酸化窒素に媒介される組織損傷、お
よび糖尿病によって起こり得る。
【０００３】サイトカインは、通常、組織に非常に低い
濃度で存在し、そしてその効果は、特定の細胞タイプの
高親和性のレセプターに結合することによって媒介され
る。種々のサイトカイン(例えば、インターロイキン(I
L)、インターフェロン(IFN)、コロニー刺激因子(CSF)お
よび腫瘍壊死因子(TNF))が、免疫応答、炎症応答、修復
応答および急性期の応答の間で産生され、そしてこれら
は、これらの応答の種々の局面を制御する。このような
免疫応答、炎症応答、修復応答または急性期応答の誘導
に続いて、種々のサイトカインの濃度は異なる時点で増
加または減少し得る。例えば、サイトカインのレベルの
上昇は、廃用性体調偏移を引き起こす宇宙飛行、固定
化、骨髄損傷、および寝たきり(bed rest)のような種々
の状況に関連する。宇宙飛行の間で、例えば、TNF、IL-
6、およびIL-2のレベルが、被験体が最初に無重量状態
に曝されるときに上昇し、そして宇宙から戻るときに再
び上昇する。
濃度で存在し、そしてその効果は、特定の細胞タイプの
高親和性のレセプターに結合することによって媒介され
る。種々のサイトカイン(例えば、インターロイキン(I
L)、インターフェロン(IFN)、コロニー刺激因子(CSF)お
よび腫瘍壊死因子(TNF))が、免疫応答、炎症応答、修復
応答および急性期の応答の間で産生され、そしてこれら
は、これらの応答の種々の局面を制御する。このような
免疫応答、炎症応答、修復応答または急性期応答の誘導
に続いて、種々のサイトカインの濃度は異なる時点で増
加または減少し得る。例えば、サイトカインのレベルの
上昇は、廃用性体調偏移を引き起こす宇宙飛行、固定
化、骨髄損傷、および寝たきり(bed rest)のような種々
の状況に関連する。宇宙飛行の間で、例えば、TNF、IL-
6、およびIL-2のレベルが、被験体が最初に無重量状態
に曝されるときに上昇し、そして宇宙から戻るときに再
び上昇する。
【０００４】サイトカインレベルの変化はまた、異常な
骨代謝、および固定化、骨髄損傷、または長期間の寝た
きりの間に起こる迅速な脱灰化に関連する。同様に、サ
イトカインレベルは、慢性の状況の間(例えば、器官損
傷への修復および自己免疫反応、サイクロスポリンの移
植被験体への投与に関連する腎毒性、ガン化学療法の
間)で、ならびに肥満の個体あるいは糖尿病、敗血症性
(エンドトキシン性)ショックまたは糸球体腎炎に罹った
個体で変化する。
骨代謝、および固定化、骨髄損傷、または長期間の寝た
きりの間に起こる迅速な脱灰化に関連する。同様に、サ
イトカインレベルは、慢性の状況の間(例えば、器官損
傷への修復および自己免疫反応、サイクロスポリンの移
植被験体への投与に関連する腎毒性、ガン化学療法の
間)で、ならびに肥満の個体あるいは糖尿病、敗血症性
(エンドトキシン性)ショックまたは糸球体腎炎に罹った
個体で変化する。
【０００５】TNF、CSF、インターフェロンおよびインタ
ーロイキンを含むサイトカインは、宿主防御応答、細胞
調節および細胞分化を媒介する。例えば、これらのサイ
トカインは、被験体において発熱を誘導し得、Ｔ細胞、
Ｂ細胞およびマクロファージの活性化を引き起こし得、
そして他のサイトカインのレベルに影響し得る。この他
のサイトカインは、カスケード効果を生じさせ、それに
より、他のサイトカインは第１のサイトカインの生物学
的レベルおよび作用を媒介する。
ーロイキンを含むサイトカインは、宿主防御応答、細胞
調節および細胞分化を媒介する。例えば、これらのサイ
トカインは、被験体において発熱を誘導し得、Ｔ細胞、
Ｂ細胞およびマクロファージの活性化を引き起こし得、
そして他のサイトカインのレベルに影響し得る。この他
のサイトカインは、カスケード効果を生じさせ、それに
より、他のサイトカインは第１のサイトカインの生物学
的レベルおよび作用を媒介する。
【０００６】サイトカインは、免疫刺激作用または免疫
抑制作用により免疫応答を調節し得る。例えば、IL-10
は、TNF、IL-1およびIL-6を含む多くの炎症性サイトカ
インの活性化をブロックするが、IL-12のような抗炎症
サイトカインをアップレギュレートする。マクロファー
ジおよび他の細胞タイプにより産生されるIL-10はま
た、肥満細胞および胸腺細胞の増殖を刺激し、そして単
球およびマクロファージの種々の機能を阻害する。この
単球およびマクロファージの阻害の結果として、Ｔ細胞
の活性もまた影響される。免疫系におけるIL-10の役割
全貌は、まだ理解され始めたばかりである。
抑制作用により免疫応答を調節し得る。例えば、IL-10
は、TNF、IL-1およびIL-6を含む多くの炎症性サイトカ
インの活性化をブロックするが、IL-12のような抗炎症
サイトカインをアップレギュレートする。マクロファー
ジおよび他の細胞タイプにより産生されるIL-10はま
た、肥満細胞および胸腺細胞の増殖を刺激し、そして単
球およびマクロファージの種々の機能を阻害する。この
単球およびマクロファージの阻害の結果として、Ｔ細胞
の活性もまた影響される。免疫系におけるIL-10の役割
全貌は、まだ理解され始めたばかりである。
【０００７】サイトカインは、多数の生物学的活性を有
し、１つ以上の細胞タイプと相互作用する。従って、１
つの特定のサイトカインまたは細胞タイプを標的して処
置の損傷性副作用を防ぐことが不可能である。サイトカ
イン活性の不必要なまたは制御されていない過剰抑制(o
ver-suppression)または過剰刺激(over-stimulation)に
起因する障害を防ぐためのより良いアプローチは、いず
れのサイトカインも除去または過剰発現することなく、
免疫応答に関与する関連または制御サイトカイン(単数
または複数)の発現を調節することである。このような
処置は、病理的または進行中の免疫応答を生じないかま
たは悪化させない。このようにして、病理的免疫媒介作
用(例えば、免疫抑制または自己免疫反応)が防がれ得、
そして恒常性が維持され得る。
し、１つ以上の細胞タイプと相互作用する。従って、１
つの特定のサイトカインまたは細胞タイプを標的して処
置の損傷性副作用を防ぐことが不可能である。サイトカ
イン活性の不必要なまたは制御されていない過剰抑制(o
ver-suppression)または過剰刺激(over-stimulation)に
起因する障害を防ぐためのより良いアプローチは、いず
れのサイトカインも除去または過剰発現することなく、
免疫応答に関与する関連または制御サイトカイン(単数
または複数)の発現を調節することである。このような
処置は、病理的または進行中の免疫応答を生じないかま
たは悪化させない。このようにして、病理的免疫媒介作
用(例えば、免疫抑制または自己免疫反応)が防がれ得、
そして恒常性が維持され得る。
【０００８】コルチコステロイド類はサイトカイン発現
を調節するために使用され得る。しかし、これらは完全
な免疫抑制を引き起こし得、そして「消耗」症候群、糖
尿病および骨粗しょう症を誘導するというような他の好
ましくない副作用を有する。同様に、非ステロイド抗炎
症薬(NSAID)(例えば、ケトロラク(Toradol；Syntex)
は、炎症および疼痛を処置する際に有効である。しか
し、NSAIDもまた、プロスタグランジン産生を阻害する
ことにより、好ましくない副作用を引き起こす。プロス
タグランジン産生への阻害は、胃潰瘍、出血および腎不
全を含む潜在性重症合併症をもたらし得る。
を調節するために使用され得る。しかし、これらは完全
な免疫抑制を引き起こし得、そして「消耗」症候群、糖
尿病および骨粗しょう症を誘導するというような他の好
ましくない副作用を有する。同様に、非ステロイド抗炎
症薬(NSAID)(例えば、ケトロラク(Toradol；Syntex)
は、炎症および疼痛を処置する際に有効である。しか
し、NSAIDもまた、プロスタグランジン産生を阻害する
ことにより、好ましくない副作用を引き起こす。プロス
タグランジン産生への阻害は、胃潰瘍、出血および腎不
全を含む潜在性重症合併症をもたらし得る。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】上記のようにサイトカ
インの異常発現により引き起こされる病状状態または正
常な免疫媒介機能を損うのを防ぐために、サイトカイン
レベルが正確に操作され、そして効率的に制御され得る
ならば、有利である。従って、被験体において、望まし
くない副作用を引き起こさずに、サイトカイン活性を調
節し得る薬剤に対する必要が存在する。さらに、サイト
カインレベルの変化に関連する病状および状態の処置に
使用され得る薬剤を同定する必要が存在する。本発明は
これらの必要を満たし、その上、関連の利点も提供す
る。
インの異常発現により引き起こされる病状状態または正
常な免疫媒介機能を損うのを防ぐために、サイトカイン
レベルが正確に操作され、そして効率的に制御され得る
ならば、有利である。従って、被験体において、望まし
くない副作用を引き起こさずに、サイトカイン活性を調
節し得る薬剤に対する必要が存在する。さらに、サイト
カインレベルの変化に関連する病状および状態の処置に
使用され得る薬剤を同定する必要が存在する。本発明は
これらの必要を満たし、その上、関連の利点も提供す
る。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明は、強力なサイト
カイン調節剤である新規ペプチドに関する。本明細書中
に開示するように、このようなサイトカイン調節剤は、
一般構造Ｘ1-Ｘ2-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Ｘ3、および
Ｘ4-Ｘ5-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Ｘ3を有し、ここで、Ｘ1、
Ｘ2、Ｘ3、Ｘ4、およびＸ5はアミノ酸またはアミン酸ア
ナログであり得る。本発明はまた、構造Ac-His-(D)Phe-
Arg-[(D)Trp(CH2)]-(NAc)Gly-NH2を有するサイトカイン
調節剤に関し、この構造は、還元された(D)Trpアナログ
を含有する。
カイン調節剤である新規ペプチドに関する。本明細書中
に開示するように、このようなサイトカイン調節剤は、
一般構造Ｘ1-Ｘ2-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Ｘ3、および
Ｘ4-Ｘ5-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Ｘ3を有し、ここで、Ｘ1、
Ｘ2、Ｘ3、Ｘ4、およびＸ5はアミノ酸またはアミン酸ア
ナログであり得る。本発明はまた、構造Ac-His-(D)Phe-
Arg-[(D)Trp(CH2)]-(NAc)Gly-NH2を有するサイトカイン
調節剤に関し、この構造は、還元された(D)Trpアナログ
を含有する。
【００１１】さらに、本発明は、薬学的に受容可能なキ
ャリアおよびサイトカイン調節剤(単数または複数)を含
有する薬学的組成物に関する。このようなサイトカイン
調節剤またはその配合物の被験体への投与は、個体にお
ける種々のサイトカインのレベルを変化させ得、これに
より、調節される特定のサイトカインに依存する免疫刺
激または免疫抑制となる。
ャリアおよびサイトカイン調節剤(単数または複数)を含
有する薬学的組成物に関する。このようなサイトカイン
調節剤またはその配合物の被験体への投与は、個体にお
ける種々のサイトカインのレベルを変化させ得、これに
より、調節される特定のサイトカインに依存する免疫刺
激または免疫抑制となる。
【００１２】本発明はまた、被験体におけるサイトカイ
ン活性の増強により調節する方法、およびサイトカイン
活性の変化または異常により部分的に特徴付けられる状
態、病状または傷害を処置する方法を提供する。このよ
うな状態、病状または傷害は、廃用性体調偏移、酸化窒
素およびサイトカインにより媒介される疾患、糖尿病、
肥満症、自己免疫疾患、敗血症性(エンドトキシン性)シ
ョック、糸球体腎炎、移植の間に起こる器官損傷、およ
びガン化学療法の有害作用(例えば、腎毒性)を包含す
る。
ン活性の増強により調節する方法、およびサイトカイン
活性の変化または異常により部分的に特徴付けられる状
態、病状または傷害を処置する方法を提供する。このよ
うな状態、病状または傷害は、廃用性体調偏移、酸化窒
素およびサイトカインにより媒介される疾患、糖尿病、
肥満症、自己免疫疾患、敗血症性(エンドトキシン性)シ
ョック、糸球体腎炎、移植の間に起こる器官損傷、およ
びガン化学療法の有害作用(例えば、腎毒性)を包含す
る。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明は、一般に、以下の構造を
有する新規サイトカイン調節剤に関する：Ｘ1−Ｘ2−Hi
s−(D)Phe−Arg−(D)Trp−Ｘ3、ここで
有する新規サイトカイン調節剤に関する：Ｘ1−Ｘ2−Hi
s−(D)Phe−Arg−(D)Trp−Ｘ3、ここで
【００１４】
【化２】
【００１５】ここで、Ｙは、Ｏ、Ｈ2またはＳであり；
Ｒ1は、Ｈ、ＣＯＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、ＣＨ2Ｐｈ、ＣＯＰ
ｈ、ＣＯＯ-ｔ-ブチル、ＣＯＯＣＨ2Ｐｈ、ＣＨ2ＣＯ-
（ポリエチレングリコール）、またはＡであり；Ｒ2は
ＨまたはＣＯＣＨ3であり；Ｒ3は、１個〜６個の炭素原
子を有する直鎖または分枝アルキル基、あるいは３個〜
６個の炭素原子を有する環状アルキル基であり；Ｒ4は
（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨＲ1、ま
たは（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨＡであり；Ｒ5は、ＯＨ、Ｏ
Ｒ3、ＮＨ2、ＳＨ、ＮＨＣＨ3、ＮＨＣＨ2Ｐｈ、または
Ａであり、そしてＲ6は、ＨまたはＲ3であり；そして、
ここで「Ｐｈ」はＣ6Ｈ5であり；「ｍ」は、１、２また
は３であり；「ｎ」は、０、１、２または３であり；そ
して「Ａ」は、以下の一般式を有する炭水化物である：
Ｒ1は、Ｈ、ＣＯＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、ＣＨ2Ｐｈ、ＣＯＰ
ｈ、ＣＯＯ-ｔ-ブチル、ＣＯＯＣＨ2Ｐｈ、ＣＨ2ＣＯ-
（ポリエチレングリコール）、またはＡであり；Ｒ2は
ＨまたはＣＯＣＨ3であり；Ｒ3は、１個〜６個の炭素原
子を有する直鎖または分枝アルキル基、あるいは３個〜
６個の炭素原子を有する環状アルキル基であり；Ｒ4は
（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨＲ1、ま
たは（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨＡであり；Ｒ5は、ＯＨ、Ｏ
Ｒ3、ＮＨ2、ＳＨ、ＮＨＣＨ3、ＮＨＣＨ2Ｐｈ、または
Ａであり、そしてＲ6は、ＨまたはＲ3であり；そして、
ここで「Ｐｈ」はＣ6Ｈ5であり；「ｍ」は、１、２また
は３であり；「ｎ」は、０、１、２または３であり；そ
して「Ａ」は、以下の一般式を有する炭水化物である：
【００１６】
【化３】
【００１７】本発明の１つの実施態様において、本ペプ
チドは、Ｘ1およびＸ2について上記の可変物のいずれか
を有し、そして特に、Ｘ3についてはＯＨを有する（Ｘ3
はＲ 5であり、ここでＲ5はＯＨである）。さらなる他の
実施態様においては、Ｙ、Ｒ 1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、および
Ｒ6は、上記可変物のいずれかであり得、そしてＲ3は、
３個〜６個の炭素原子を有する環状アルキル基である。
チドは、Ｘ1およびＸ2について上記の可変物のいずれか
を有し、そして特に、Ｘ3についてはＯＨを有する（Ｘ3
はＲ 5であり、ここでＲ5はＯＨである）。さらなる他の
実施態様においては、Ｙ、Ｒ 1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、および
Ｒ6は、上記可変物のいずれかであり得、そしてＲ3は、
３個〜６個の炭素原子を有する環状アルキル基である。
【００１８】上述の式により包含される例示的なペプチ
ドとしては、Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-N
H2；Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH2；およ
びAc-(シクロヘキシル)Gly-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp
-Gly-NH2が挙げられ、これらの各々は、サイトカイン活
性を調節し得る。
ドとしては、Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-N
H2；Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH2；およ
びAc-(シクロヘキシル)Gly-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp
-Gly-NH2が挙げられ、これらの各々は、サイトカイン活
性を調節し得る。
【００１９】本発明はまた、以下の構造を有する新規サ
イトカイン調節剤に関する：Ｘ4−Ｘ5−(D)Phe−Arg−
(D)Trp−Ｘ3、ここで、
イトカイン調節剤に関する：Ｘ4−Ｘ5−(D)Phe−Arg−
(D)Trp−Ｘ3、ここで、
【００２０】
【化４】
【００２１】ここで、Ｙは、Ｏ、Ｈ2またはＳであり；
Ｒ1は、Ｈ、ＣＯＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、ＣＨ2Ｐｈ、ＣＯＰ
ｈ、ＣＯＯ-ｔ-ブチル、ＣＯＯＣＨ2Ｐｈ、ＣＨ2ＣＯ-
（ポリエチレングリコール）、またはＡであり；Ｒ2は
ＨまたはＣＯＣＨ3であり；Ｒ4は（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨ
2、（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨＲ1、または（ＣＨ2）m−ＣＯ
ＮＨＡであり；Ｒ5は、ＯＨ、ＯＲ3、ＮＨ2、ＳＨ、Ｎ
ＨＣＨ3、ＮＨＣＨ2Ｐｈ、またはＡであり；そしてＲ6
は、ＨまたはＲ3であり；そして、ここで「Ｐｈ」はＣ 6
Ｈ5であり；「ｍ」は、１、２または３であり；「ｎ」
は、０、１、２または３であり；そして「Ａ」は、以下
の一般式を有する炭水化物である：
Ｒ1は、Ｈ、ＣＯＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、ＣＨ2Ｐｈ、ＣＯＰ
ｈ、ＣＯＯ-ｔ-ブチル、ＣＯＯＣＨ2Ｐｈ、ＣＨ2ＣＯ-
（ポリエチレングリコール）、またはＡであり；Ｒ2は
ＨまたはＣＯＣＨ3であり；Ｒ4は（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨ
2、（ＣＨ2）m−ＣＯＮＨＲ1、または（ＣＨ2）m−ＣＯ
ＮＨＡであり；Ｒ5は、ＯＨ、ＯＲ3、ＮＨ2、ＳＨ、Ｎ
ＨＣＨ3、ＮＨＣＨ2Ｐｈ、またはＡであり；そしてＲ6
は、ＨまたはＲ3であり；そして、ここで「Ｐｈ」はＣ 6
Ｈ5であり；「ｍ」は、１、２または３であり；「ｎ」
は、０、１、２または３であり；そして「Ａ」は、以下
の一般式を有する炭水化物である：
【００２２】
【化５】
【００２３】本発明の１つの実施態様において、本ペプ
チドは、３個〜５個のアミノ酸残基の短いアナログであ
り、Ｘ4およびＸ5については上記の可変物のいずれかを
有し、そして特に、Ｘ3についてはＯＨを有する（Ｘ3は
Ｒ5であり、ここでＲ5はＯＨである）。さらなる他の実
施態様においては、Ｘ4は存在せず、Ｘ5はＨまたはＣＯ
ＣＨ3であり、そしてＸ3はＲ5であり、サイトカイン調
節剤は、(D)Phe-Arg-(D)Trpのトリペプチドである。好
ましいペプチドとしては、His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-
NH2；Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH2；His-(D)Phe-
Arg-(D)Trp-OH；Ac-(D)Phe-Arg-Trp-NH2；およびシクロ
（His-(D)Phe-Arg-(D)Trp）が挙げられ、これらはサイ
トカイン活性を調節し得る。
チドは、３個〜５個のアミノ酸残基の短いアナログであ
り、Ｘ4およびＸ5については上記の可変物のいずれかを
有し、そして特に、Ｘ3についてはＯＨを有する（Ｘ3は
Ｒ5であり、ここでＲ5はＯＨである）。さらなる他の実
施態様においては、Ｘ4は存在せず、Ｘ5はＨまたはＣＯ
ＣＨ3であり、そしてＸ3はＲ5であり、サイトカイン調
節剤は、(D)Phe-Arg-(D)Trpのトリペプチドである。好
ましいペプチドとしては、His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-
NH2；Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH2；His-(D)Phe-
Arg-(D)Trp-OH；Ac-(D)Phe-Arg-Trp-NH2；およびシクロ
（His-(D)Phe-Arg-(D)Trp）が挙げられ、これらはサイ
トカイン活性を調節し得る。
【００２４】本明細書で使用される用語「調節する（re
gulate）」または「調節の」は、増強（enhancing）、
限定（limiting）、制限（restricting）、抑制（restr
aing）、調節(modulating)、または節制（moderating）
することにより制御することを意味する。このような調
節には、多面発現性効果、重複効果、相乗効果、または
拮抗効果が挙げられ、このような効果はサイトカインの
ような生物学的因子の活性により生じる。生物学的因子
は、カスケードまたはバイオフィードバック機構を介し
て直接または間接的に多様な生物学的機能に影響し得
る。
gulate）」または「調節の」は、増強（enhancing）、
限定（limiting）、制限（restricting）、抑制（restr
aing）、調節(modulating)、または節制（moderating）
することにより制御することを意味する。このような調
節には、多面発現性効果、重複効果、相乗効果、または
拮抗効果が挙げられ、このような効果はサイトカインの
ような生物学的因子の活性により生じる。生物学的因子
は、カスケードまたはバイオフィードバック機構を介し
て直接または間接的に多様な生物学的機能に影響し得
る。
【００２５】本明細書で使用される用語「サイトカイン
調節剤」は、サイトカインの生物学的活性を、増強、限
定、制限、抑制、調節または節制によりサイトカインの
活性を制御する因子を意味する。しかし、サイトカイン
調節剤は、一般的にサイトカイン活性を調節し得るが、
どのようにサイトカイン調節剤が作用して、変化したま
たは異常なサイトカインの活性により特徴付けられる状
態をもたらすかという特定の作用機構は提案されないこ
とが認識されるべきである。
調節剤」は、サイトカインの生物学的活性を、増強、限
定、制限、抑制、調節または節制によりサイトカインの
活性を制御する因子を意味する。しかし、サイトカイン
調節剤は、一般的にサイトカイン活性を調節し得るが、
どのようにサイトカイン調節剤が作用して、変化したま
たは異常なサイトカインの活性により特徴付けられる状
態をもたらすかという特定の作用機構は提案されないこ
とが認識されるべきである。
【００２６】サイトカインは当該分野において周知であ
り、これには腫瘍壊死因子（TNF）、コロニー刺激因子
（CSF）、インターフェロン（INF）、インターロイキン
（IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-５、IL-６、IL-７、IL-
８、IL-９、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、およ
びIL-15）、トランスフォーミング成長因子（TGF）、オ
ンコスタチンM（OSM）、白血病抑制因子（LIF）、血小
板活性化因子（PAF）、および宿主防御応答、細胞調節
および細胞分化を媒介する他の可溶性免疫調節ペプチド
（例えば、Kuby、Immunology第２版（W. H. Freeman an
d Co. 1994）を参照のこと；第13章を参照のこと、これ
は本明細書中に参考として援用される）が挙げられる
が、これらに限定されない。
り、これには腫瘍壊死因子（TNF）、コロニー刺激因子
（CSF）、インターフェロン（INF）、インターロイキン
（IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-５、IL-６、IL-７、IL-
８、IL-９、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、およ
びIL-15）、トランスフォーミング成長因子（TGF）、オ
ンコスタチンM（OSM）、白血病抑制因子（LIF）、血小
板活性化因子（PAF）、および宿主防御応答、細胞調節
および細胞分化を媒介する他の可溶性免疫調節ペプチド
（例えば、Kuby、Immunology第２版（W. H. Freeman an
d Co. 1994）を参照のこと；第13章を参照のこと、これ
は本明細書中に参考として援用される）が挙げられる
が、これらに限定されない。
【００２７】本発明のサイトカイン調節剤は、種々の状
態（例えば、病状、免疫応答、および炎症応答が挙げら
れる）で生じる１つ以上のサイトカインの異常なまたは
変化した発現を調節し得る。このような状態は、変化し
たまたは異常なサイトカイン活性により部分的に特徴付
けられ、それゆえ、１つ以上のサイトカイン調節剤によ
る調節に影響されるために、本発明の目的のためにとも
に考慮される。
態（例えば、病状、免疫応答、および炎症応答が挙げら
れる）で生じる１つ以上のサイトカインの異常なまたは
変化した発現を調節し得る。このような状態は、変化し
たまたは異常なサイトカイン活性により部分的に特徴付
けられ、それゆえ、１つ以上のサイトカイン調節剤によ
る調節に影響されるために、本発明の目的のためにとも
に考慮される。
【００２８】本明細書で使用される用語「により特徴付
けられる」は、少なくとも部分的な寄与または影響を意
味する。サイトカインの寄与は、状態の単独の、根本的
な因子、または主要な因子でさえあり得るが、そうであ
る必要はない。例えば、感染がサイトカインレベルを変
え、それゆえ感染はサイトカイン活性により特徴付けら
れる状態であるが、サイトカイン活性は感染状態の一部
分であるにすぎないことが当該分野で十分に理解され
る。
けられる」は、少なくとも部分的な寄与または影響を意
味する。サイトカインの寄与は、状態の単独の、根本的
な因子、または主要な因子でさえあり得るが、そうであ
る必要はない。例えば、感染がサイトカインレベルを変
え、それゆえ感染はサイトカイン活性により特徴付けら
れる状態であるが、サイトカイン活性は感染状態の一部
分であるにすぎないことが当該分野で十分に理解され
る。
【００２９】本明細書で使用される用語「変化したまた
は異常なサイトカイン活性により特徴付けられる状態」
は、全てのサイトカインに調節(regulated)または調節
(modurated)される病状および傷害を包含し、これに
は、傷害に関連する免疫プロセス、炎症プロセス、およ
び治癒プロセスが挙げられる。当業者は、健康な個体に
おいて見出されると予想されるサイトカインの正常なレ
ベルに比べて、特定のサイトカインの増加または減少し
たレベルまたは活性を検出することにより、このような
状態を認識し得る。このような正常なレベルを測定する
ための方法は、当該分野において周知である。
は異常なサイトカイン活性により特徴付けられる状態」
は、全てのサイトカインに調節(regulated)または調節
(modurated)される病状および傷害を包含し、これに
は、傷害に関連する免疫プロセス、炎症プロセス、およ
び治癒プロセスが挙げられる。当業者は、健康な個体に
おいて見出されると予想されるサイトカインの正常なレ
ベルに比べて、特定のサイトカインの増加または減少し
たレベルまたは活性を検出することにより、このような
状態を認識し得る。このような正常なレベルを測定する
ための方法は、当該分野において周知である。
【００３０】変化したまたは異常なサイトカイン活性に
より特徴付けられる状態には、廃用性体調偏移、器官移
植に応答して生じるような器官損傷；ガンの化学治療に
関連する有害な反応；肥満；フリーラジカルおよび一酸
化窒素の作用により媒介される糖尿病およびアテローム
硬化症のような疾患；細菌エンドトキシン敗血症および
関連するショック；痛み；悪液質；成人呼吸窮迫症候
群；および自己免疫または他の病原免疫原性（patho-im
munogenic）疾患または反応（例えば、アレルギー反応
またはアナフィラキシー、関節炎、炎症性腸疾患、糸球
体腎炎、全身性エリテマトーデス）、移植アテローム硬
化症、およびシャーガス病のような寄生体媒介性免疫機
能不全が挙げられるが、これらに限定されない。
より特徴付けられる状態には、廃用性体調偏移、器官移
植に応答して生じるような器官損傷；ガンの化学治療に
関連する有害な反応；肥満；フリーラジカルおよび一酸
化窒素の作用により媒介される糖尿病およびアテローム
硬化症のような疾患；細菌エンドトキシン敗血症および
関連するショック；痛み；悪液質；成人呼吸窮迫症候
群；および自己免疫または他の病原免疫原性（patho-im
munogenic）疾患または反応（例えば、アレルギー反応
またはアナフィラキシー、関節炎、炎症性腸疾患、糸球
体腎炎、全身性エリテマトーデス）、移植アテローム硬
化症、およびシャーガス病のような寄生体媒介性免疫機
能不全が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３１】サイトカイン調節剤は、例えば、本明細書
中で記載されるようなアミノ酸またはアミノ酸アナログ
を含むペプチドであり得る。上記で提供した例に加え
て、他のペプチド性サイトカイン調節剤の代表的な例に
は以下が挙げられる：
中で記載されるようなアミノ酸またはアミノ酸アナログ
を含むペプチドであり得る。上記で提供した例に加え
て、他のペプチド性サイトカイン調節剤の代表的な例に
は以下が挙げられる：
【００３２】
【化６】
【００３３】ここで、[(D)Trp(CH2)]は、(D)Trpのアナ
ログであり、ここでH2は、α-カルボニル酸素を置換
し、そして（NAc）Glyは、N-アセチル部分を有するグリ
シン誘導体である。
ログであり、ここでH2は、α-カルボニル酸素を置換
し、そして（NAc）Glyは、N-アセチル部分を有するグリ
シン誘導体である。
【００３４】上記のようなペプチド性サイトカイン調節
剤が、アミノ酸配列(D)Phe-Arg-(D)Trp、または(D)Trp
のアナログを有するコア構造、より好ましくは、コアア
ミノ酸配列 His-(D)Phe-Arg-(D)Trp、または(D)Trpのア
ナログにより、部分的に特徴付けられる。アミノ酸は、
それらの一般的に公知の３文字コードにより示され、お
よび(D)は、天然に存在するL-アミノ酸と対照的に、
「D」配置を有するアミノ酸を示す。特に配置を示さな
い場合、当業者はアミノ酸は(L)-アミノ酸であることを
理解する。上記で例示されたペプチドにおいて、「Nl
e」は、ノルロイシンについての３文字コードであり、
そして「Ph」は、「フェニル」基（C6H5）を示す。
剤が、アミノ酸配列(D)Phe-Arg-(D)Trp、または(D)Trp
のアナログを有するコア構造、より好ましくは、コアア
ミノ酸配列 His-(D)Phe-Arg-(D)Trp、または(D)Trpのア
ナログにより、部分的に特徴付けられる。アミノ酸は、
それらの一般的に公知の３文字コードにより示され、お
よび(D)は、天然に存在するL-アミノ酸と対照的に、
「D」配置を有するアミノ酸を示す。特に配置を示さな
い場合、当業者はアミノ酸は(L)-アミノ酸であることを
理解する。上記で例示されたペプチドにおいて、「Nl
e」は、ノルロイシンについての３文字コードであり、
そして「Ph」は、「フェニル」基（C6H5）を示す。
【００３５】上記のペプチドのようなサイトカイン調節
剤は、Merrifield（J.Am.Chem.Soc., 85:2149 (1964)、
これは本明細書に参考として援用される）の固相ペプチ
ド合成法の改変を用いて合成されたか、または当該分野
において周知の標準的な溶液法（例えば、Bodanzsky,
M.、Principles of Peptide Synthesis 第２改訂版（Sp
ringer-Verlag, 1988および1993）、これは本明細書に
参考として援用される、を参照のこと）を用いて合成さ
れ得る。Merrifieldの方法により調製されるペプチド
は、Applied Biosystems 431A-01 Peptide Synthesizer
（Mountain View, CA)のような自動化ペプチド合成装置
を用いるか、またはHoughten（Proc.Natl.Acad.Sci., U
SA 82:5131 (1985)、これは本明細書に参考として援用
される）により記載される手作業によるペプチド合成技
術を用いて合成され得る。
剤は、Merrifield（J.Am.Chem.Soc., 85:2149 (1964)、
これは本明細書に参考として援用される）の固相ペプチ
ド合成法の改変を用いて合成されたか、または当該分野
において周知の標準的な溶液法（例えば、Bodanzsky,
M.、Principles of Peptide Synthesis 第２改訂版（Sp
ringer-Verlag, 1988および1993）、これは本明細書に
参考として援用される、を参照のこと）を用いて合成さ
れ得る。Merrifieldの方法により調製されるペプチド
は、Applied Biosystems 431A-01 Peptide Synthesizer
（Mountain View, CA)のような自動化ペプチド合成装置
を用いるか、またはHoughten（Proc.Natl.Acad.Sci., U
SA 82:5131 (1985)、これは本明細書に参考として援用
される）により記載される手作業によるペプチド合成技
術を用いて合成され得る。
【００３６】ペプチドは、アミノ酸またはアミノ酸アナ
ログを用いて合成され、その活性基を、例えば、t-ブチ
ルジカーボネート（t-BOC)基、またはフルオレニルメト
キシカルボニル（FMOC）基を用いて必要に応じて保護し
た。アミノ酸およびアミノ酸アナログは、商業的に購入
し得る（Sigma Chemical Co.; Advanced Chemtec）か、
または当該分野で公知の方法を用いて合成され得る。固
相法を用いて合成されたペプチドは、樹脂に付着させ得
る。樹脂には、4-メチルベンズヒドリルアミン（MBH
A)、4-(オキシメチル)-フェニルアセトアミドメチル、
および4-(ヒドロキシメチル)フェノキシメチル-コポリ
(スチレン-１% ジビニルベンゼン）（Wang樹脂)（これ
らのすべては市販されている）、またはp-ニトロベンゾ
フェノンオキシムポリマー（オキシム樹脂）（De Grado
およびKaiser、J.Org.Chem. 47:3258(1982)（これは本
明細書に参考として援用される）により記載されるよう
に合成され得る）が挙げられる。
ログを用いて合成され、その活性基を、例えば、t-ブチ
ルジカーボネート（t-BOC)基、またはフルオレニルメト
キシカルボニル（FMOC）基を用いて必要に応じて保護し
た。アミノ酸およびアミノ酸アナログは、商業的に購入
し得る（Sigma Chemical Co.; Advanced Chemtec）か、
または当該分野で公知の方法を用いて合成され得る。固
相法を用いて合成されたペプチドは、樹脂に付着させ得
る。樹脂には、4-メチルベンズヒドリルアミン（MBH
A)、4-(オキシメチル)-フェニルアセトアミドメチル、
および4-(ヒドロキシメチル)フェノキシメチル-コポリ
(スチレン-１% ジビニルベンゼン）（Wang樹脂)（これ
らのすべては市販されている）、またはp-ニトロベンゾ
フェノンオキシムポリマー（オキシム樹脂）（De Grado
およびKaiser、J.Org.Chem. 47:3258(1982)（これは本
明細書に参考として援用される）により記載されるよう
に合成され得る）が挙げられる。
【００３７】当業者には、ペプチドに取り込まれるアミ
ノ酸またはアミノ酸のアナログの選択が、サイトカイン
調節剤に必要とされる特異的な物理的、化学的または生
物学的特徴に、部分的に依存することは公知である。こ
のような特徴は、サイトカイン調節剤が投与される経路
により、またはサイトカイン調節剤の活性が導かれる被
験体における位置によって、部分的に決定される。
ノ酸またはアミノ酸のアナログの選択が、サイトカイン
調節剤に必要とされる特異的な物理的、化学的または生
物学的特徴に、部分的に依存することは公知である。こ
のような特徴は、サイトカイン調節剤が投与される経路
により、またはサイトカイン調節剤の活性が導かれる被
験体における位置によって、部分的に決定される。
【００３８】ペプチドにおける反応基の選択的な修飾に
よってもまた、サイトカイン調節剤に対するさらに所望
の特徴を与え得る。ペプチドは、樹脂に付着したままで
操作され、アセチル化されたペプチドのようなＮ末端が
修飾された化合物が得られ得るか、あるいはフッ化水素
または等価な切断試薬を用いて樹脂から除去され、次い
で修飾され得る。Ｃ末端カルボキシ基を含む合成化合物
（Wang樹脂）は、樹脂からの切断後に修飾され得るか、
または、場合によっては、液相合成の前に修飾され得
る。ペプチドのＮ末端またはＣ末端を修飾するための方
法は、当該分野で周知であり、例えば、Ｎ末端のアセチ
ル化の方法、またはＣ末端のアミド化の方法が挙げられ
る。同様に、アミノ酸またはアミノ酸アナログの側鎖を
修飾する方法は、ペプチド合成の当業者に周知である。
ペプチド上に存在する反応基になされる改変の選択は、
当業者がサイトカイン調節剤において必要とする特徴に
より決定される。
よってもまた、サイトカイン調節剤に対するさらに所望
の特徴を与え得る。ペプチドは、樹脂に付着したままで
操作され、アセチル化されたペプチドのようなＮ末端が
修飾された化合物が得られ得るか、あるいはフッ化水素
または等価な切断試薬を用いて樹脂から除去され、次い
で修飾され得る。Ｃ末端カルボキシ基を含む合成化合物
（Wang樹脂）は、樹脂からの切断後に修飾され得るか、
または、場合によっては、液相合成の前に修飾され得
る。ペプチドのＮ末端またはＣ末端を修飾するための方
法は、当該分野で周知であり、例えば、Ｎ末端のアセチ
ル化の方法、またはＣ末端のアミド化の方法が挙げられ
る。同様に、アミノ酸またはアミノ酸アナログの側鎖を
修飾する方法は、ペプチド合成の当業者に周知である。
ペプチド上に存在する反応基になされる改変の選択は、
当業者がサイトカイン調節剤において必要とする特徴に
より決定される。
【００３９】特定の環状ペプチドはまた、効果的なサイ
トカイン調節剤であり得る。環状ペプチドは、例えば、
ペプチドのＮ末端のアミノ基とＣ末端のカルボキシル基
との間の共有結合の形成を誘導することにより得られ得
る。例えば、ペプチドシクロ(His-(D)Phe-Arg-(D)Tr
p）、これはHisと(D)Trpとの間の共有結合の形成の誘導
により生成され得、サイトカイン調節活性を有し得る。
あるいは、環状ペプチドは、末端の反応基と反応性のア
ミノ酸側鎖との間で、または２つの反応性アミノ酸側鎖
の間で共有結合を形成することにより得られ得る。当業
者には、特定の環状ペプチドの選択が、ペプチド上に存
在する反応基ならびにペプチドの所望の特徴により決定
されることが公知である。例えば、環状ペプチドは、イ
ンビボで安定性が増加し、溶解性が増加し、免疫原性が
減少するか、またはクリアランスが減少するサイトカイ
ン調節剤を提供し得る。
トカイン調節剤であり得る。環状ペプチドは、例えば、
ペプチドのＮ末端のアミノ基とＣ末端のカルボキシル基
との間の共有結合の形成を誘導することにより得られ得
る。例えば、ペプチドシクロ(His-(D)Phe-Arg-(D)Tr
p）、これはHisと(D)Trpとの間の共有結合の形成の誘導
により生成され得、サイトカイン調節活性を有し得る。
あるいは、環状ペプチドは、末端の反応基と反応性のア
ミノ酸側鎖との間で、または２つの反応性アミノ酸側鎖
の間で共有結合を形成することにより得られ得る。当業
者には、特定の環状ペプチドの選択が、ペプチド上に存
在する反応基ならびにペプチドの所望の特徴により決定
されることが公知である。例えば、環状ペプチドは、イ
ンビボで安定性が増加し、溶解性が増加し、免疫原性が
減少するか、またはクリアランスが減少するサイトカイ
ン調節剤を提供し得る。
【００４０】新しく合成されたペプチドは、下記（実施
例Iを参照のこと）に詳細に記載される逆相高速液体ク
ロマトグラフィー（RP-HPLC）か、またはペプチドの大
きさまたは電荷に基づいた他の分離法のような方法を用
いて精製され得る。さらに、精製ペプチドは、これらの
方法または他の周知の方法（例えば、アミノ酸分析、お
よび質量分光分析）を用いて特徴付けられ得る。これら
の方法は、下記に詳細に記載されている（実施例Ｉを参
照のこと）。
例Iを参照のこと）に詳細に記載される逆相高速液体ク
ロマトグラフィー（RP-HPLC）か、またはペプチドの大
きさまたは電荷に基づいた他の分離法のような方法を用
いて精製され得る。さらに、精製ペプチドは、これらの
方法または他の周知の方法（例えば、アミノ酸分析、お
よび質量分光分析）を用いて特徴付けられ得る。これら
の方法は、下記に詳細に記載されている（実施例Ｉを参
照のこと）。
【００４１】本発明はまた、１つまたは複数のサイトカ
イン調節剤および薬学的に受容可能なキャリアを含有す
る薬学的組成物に関連する。薬学的に受容可能なキャリ
アは当該分野で公知であり、これには生理学的に緩衝化
された生理食塩水、または他の緩衝液のような水性溶
液、あるいは溶媒、またはビヒクル（例えば、グリコー
ル、グリセロール、オリーブ油のような油、または注入
可能な有機エステル）が挙げられる。
イン調節剤および薬学的に受容可能なキャリアを含有す
る薬学的組成物に関連する。薬学的に受容可能なキャリ
アは当該分野で公知であり、これには生理学的に緩衝化
された生理食塩水、または他の緩衝液のような水性溶
液、あるいは溶媒、またはビヒクル（例えば、グリコー
ル、グリセロール、オリーブ油のような油、または注入
可能な有機エステル）が挙げられる。
【００４２】薬学的に受容可能なキャリアは、例えば、
サイトカイン調節剤を安定化させるか、またはこの薬剤
の吸収を増加させるために作用する生理学的に受容可能
な化合物を含み得る。このような生理学的に受容可能な
化合物には、例えば、炭水化物（例えば、グルコース、
スクロース、またはデキストラン）、抗酸化剤（例え
ば、アスコルビン酸、またはグルタチオン）、キレート
剤、低分子量タンパク質、または他の安定剤、あるいは
賦形剤が挙げられる。当業者には、生理学的に受容可能
な化合物を含む薬学的に受容可能なキャリアの選択が、
例えば、サイトカイン調節剤の投与経路、および特定の
サイトカイン調節剤の特定の生理-化学的特徴に依存し
ていることは公知である。
サイトカイン調節剤を安定化させるか、またはこの薬剤
の吸収を増加させるために作用する生理学的に受容可能
な化合物を含み得る。このような生理学的に受容可能な
化合物には、例えば、炭水化物（例えば、グルコース、
スクロース、またはデキストラン）、抗酸化剤（例え
ば、アスコルビン酸、またはグルタチオン）、キレート
剤、低分子量タンパク質、または他の安定剤、あるいは
賦形剤が挙げられる。当業者には、生理学的に受容可能
な化合物を含む薬学的に受容可能なキャリアの選択が、
例えば、サイトカイン調節剤の投与経路、および特定の
サイトカイン調節剤の特定の生理-化学的特徴に依存し
ていることは公知である。
【００４３】上記のようなサイトカイン調節剤、または
サイトカイン調節剤を含む薬学的組成物は、被験体にお
ける病理学的に改変された（減少および上昇を含む）サ
イトカイン活性を調節するために、被験体に投与され得
る。例えば、ペプチドまたは組成物は、以下について処
置するために被験体に投与され得る：外傷的傷害、細菌
性敗血症、およびエンドトキシンショック、炎症、痛
み、悪液質、成人呼吸窮迫症候群、移植アテローム硬化
症、病原免疫原性疾患（例えば、関節炎、炎症性腸疾
患、全身性エリテマトーデス、および他の自己免疫不
全）、これらのそれぞれは、病理学的に上昇した炎症性
サイトカイン活性により特徴付けられる。
サイトカイン調節剤を含む薬学的組成物は、被験体にお
ける病理学的に改変された（減少および上昇を含む）サ
イトカイン活性を調節するために、被験体に投与され得
る。例えば、ペプチドまたは組成物は、以下について処
置するために被験体に投与され得る：外傷的傷害、細菌
性敗血症、およびエンドトキシンショック、炎症、痛
み、悪液質、成人呼吸窮迫症候群、移植アテローム硬化
症、病原免疫原性疾患（例えば、関節炎、炎症性腸疾
患、全身性エリテマトーデス、および他の自己免疫不
全）、これらのそれぞれは、病理学的に上昇した炎症性
サイトカイン活性により特徴付けられる。
【００４４】本明細書で使用される用語「病理学的に上
昇した」は、サイトカイン活性が正常な集団のこのよう
な被験体において予想される、および病理学的応答に関
連する活性の範囲よりも上昇したことをいう。例えば、
特定の組織に存在するIL-1βのようなIL-1活性の正常な
範囲は、集団の多くの被験体のサンプリングにより測定
され得る。サイトカインで誘導される病理学的効果によ
り特徴付けられる病状を有する被験体は、被験体中のサ
イトカイン活性が正常な範囲よりも病理学的に上昇する
ことを測定することにより容易に同定される。それは、
そして発熱のような病理学的応答を生じる。
昇した」は、サイトカイン活性が正常な集団のこのよう
な被験体において予想される、および病理学的応答に関
連する活性の範囲よりも上昇したことをいう。例えば、
特定の組織に存在するIL-1βのようなIL-1活性の正常な
範囲は、集団の多くの被験体のサンプリングにより測定
され得る。サイトカインで誘導される病理学的効果によ
り特徴付けられる病状を有する被験体は、被験体中のサ
イトカイン活性が正常な範囲よりも病理学的に上昇する
ことを測定することにより容易に同定される。それは、
そして発熱のような病理学的応答を生じる。
【００４５】さらに、下記により詳細に記載されるよう
に、ペプチドまたは薬学的組成物はまた、肥満、廃用性
体調偏移、および一酸化窒素により媒介される疾患（例
えば、糖尿病および糸球体腎炎）、移植アテローム硬化
症、複合性硬化症を処置するために用いられ得、ならび
にガン化学療法剤のネガティブな効果を減少させるため
に用いられ得、そして損傷に対して器官を保護するため
に用いられ得る。この損傷は、化学療法剤、抗菌剤（ア
ンホテリチン）、抗細菌剤（アミノグリコシド抗生物
質）、および抗ウイルス剤（アジドチミジン）により誘
導され、これらの全ては病理学的に変化したレベルのサ
イトカインに関連する。
に、ペプチドまたは薬学的組成物はまた、肥満、廃用性
体調偏移、および一酸化窒素により媒介される疾患（例
えば、糖尿病および糸球体腎炎）、移植アテローム硬化
症、複合性硬化症を処置するために用いられ得、ならび
にガン化学療法剤のネガティブな効果を減少させるため
に用いられ得、そして損傷に対して器官を保護するため
に用いられ得る。この損傷は、化学療法剤、抗菌剤（ア
ンホテリチン）、抗細菌剤（アミノグリコシド抗生物
質）、および抗ウイルス剤（アジドチミジン）により誘
導され、これらの全ては病理学的に変化したレベルのサ
イトカインに関連する。
【００４６】廃用性体調偏移 サイトカインレベルの変化が、廃用性体調偏移（例え
ば、宇宙飛行、固定化、脊髄損傷、寝たきり、および外
傷）を導く種々の状態と関連する。廃用性体調偏移をも
たらす他の状態の例は、例えば、模擬無重力、キャステ
ィング、および脱神経を包含する。従って、「廃用性体
調偏移」とは、上記の条件または当該分野において公知
である類似の条件によって引き起こされる状態をいう。
廃用性体調偏移は、身体の使用の抑制から生じる身体の
体調偏移およびその影響であり、そしてサイトカインレ
ベルの変化を特徴とする。
ば、宇宙飛行、固定化、脊髄損傷、寝たきり、および外
傷）を導く種々の状態と関連する。廃用性体調偏移をも
たらす他の状態の例は、例えば、模擬無重力、キャステ
ィング、および脱神経を包含する。従って、「廃用性体
調偏移」とは、上記の条件または当該分野において公知
である類似の条件によって引き起こされる状態をいう。
廃用性体調偏移は、身体の使用の抑制から生じる身体の
体調偏移およびその影響であり、そしてサイトカインレ
ベルの変化を特徴とする。
【００４７】例えば、宇宙飛行は、多くの免疫応答およ
びサイトカインネットワークを含む免疫応答の調節成分
を変える。宇宙飛行ならびに宇宙飛行のモデルシステム
は、インターロイキン類およびTNFを含む種々のサイト
カインの産生および活性化に影響を及ぼす。IL-6および
IL-2のレベルは、宇宙飛行の初日に上昇し、そして宇宙
飛行からの帰還後に再びに上昇する。
びサイトカインネットワークを含む免疫応答の調節成分
を変える。宇宙飛行ならびに宇宙飛行のモデルシステム
は、インターロイキン類およびTNFを含む種々のサイト
カインの産生および活性化に影響を及ぼす。IL-6および
IL-2のレベルは、宇宙飛行の初日に上昇し、そして宇宙
飛行からの帰還後に再びに上昇する。
【００４８】サイトカインはまた、破骨細胞の機能を調
節し、そしてIL-1およびTNFは、固定化、寝たきり、お
よび骨髄損傷によりもたらされる急速な脱灰または骨無
機質密度の損失と関係している。損傷後のサイトカイン
発現と逆行輸送の増大との相関は、サイトカインが末梢
神経の損傷に役割を果たすことを示唆する。寝たきり
は、ステロイドの関節内投与と組み合わされる場合、サ
イトカインに媒介される急性期の応答(acute phase res
ponse)に特に急速な全身作用を生じる。
節し、そしてIL-1およびTNFは、固定化、寝たきり、お
よび骨髄損傷によりもたらされる急速な脱灰または骨無
機質密度の損失と関係している。損傷後のサイトカイン
発現と逆行輸送の増大との相関は、サイトカインが末梢
神経の損傷に役割を果たすことを示唆する。寝たきり
は、ステロイドの関節内投与と組み合わされる場合、サ
イトカインに媒介される急性期の応答(acute phase res
ponse)に特に急速な全身作用を生じる。
【００４９】本発明のサイトカイン調節剤またはこのペ
プチドを含む組成物は、サイトカインレベルの変化と関
連する廃用性体調偏移のネガティブな効果を低減または
改善することにより廃用性体調偏移を処置するために用
いられ得る。ネガティブな効果は、例えば、筋重量、骨
密度、運動能力、および酸素消費量の損失、ならびに酸
化酵素および抗酸化酵素（例えば、筋組織におけるヒラ
メ筋クエン酸シンターゼ）のレベルの減少を包含する。
プチドを含む組成物は、サイトカインレベルの変化と関
連する廃用性体調偏移のネガティブな効果を低減または
改善することにより廃用性体調偏移を処置するために用
いられ得る。ネガティブな効果は、例えば、筋重量、骨
密度、運動能力、および酸素消費量の損失、ならびに酸
化酵素および抗酸化酵素（例えば、筋組織におけるヒラ
メ筋クエン酸シンターゼ）のレベルの減少を包含する。
【００５０】器官保護 サイトカインはまた、器官の損傷および器官保護に重要
な役割を果たす。例えば、サイトカインは、器官移植、
特に移植された器官の拒絶反応、移植アテローム硬化
症、虚血−再灌流、サイクロスポリン誘導腎毒症、心筋
梗塞、および脳卒中のような事象および状態に著しく影
響する。
な役割を果たす。例えば、サイトカインは、器官移植、
特に移植された器官の拒絶反応、移植アテローム硬化
症、虚血−再灌流、サイクロスポリン誘導腎毒症、心筋
梗塞、および脳卒中のような事象および状態に著しく影
響する。
【００５１】器官移植に関しては、サイトカイン、特に
腫瘍壊死因子(TNF)が同種異系移植片拒絶反応の重要な
メディエーターである。TNFの血清レベルの上昇は、腎
臓、肝臓、および心臓の同種異系移植片拒絶反応を被る
患者に生じる。TNFの存在のさらなる証拠が、ラットの
心臓および腎臓の同種異系移植ならびにヒトの腎臓およ
び肝臓移植を拒絶することにおいて示されている。腎移
植患者における急性の拒絶反応のエピソードは、血清IL
-6レベルの上昇を伴う。このようなエピソードの間のグ
ルココルチコイドの投与が、迅速で顕著なIL-6レベルの
低下および拒絶反応のエピソードの重篤度の軽減をもた
らすと、Rayら, J.Am.Soc.Nephr. 2(12): 5214-5221 (1
992)により報告された。本発明のサイトカイン調節剤
は、このような拒絶反応のエピソードおよびそれにより
生じる損傷の重篤度を軽減するのに同様に有用であり得
る。
腫瘍壊死因子(TNF)が同種異系移植片拒絶反応の重要な
メディエーターである。TNFの血清レベルの上昇は、腎
臓、肝臓、および心臓の同種異系移植片拒絶反応を被る
患者に生じる。TNFの存在のさらなる証拠が、ラットの
心臓および腎臓の同種異系移植ならびにヒトの腎臓およ
び肝臓移植を拒絶することにおいて示されている。腎移
植患者における急性の拒絶反応のエピソードは、血清IL
-6レベルの上昇を伴う。このようなエピソードの間のグ
ルココルチコイドの投与が、迅速で顕著なIL-6レベルの
低下および拒絶反応のエピソードの重篤度の軽減をもた
らすと、Rayら, J.Am.Soc.Nephr. 2(12): 5214-5221 (1
992)により報告された。本発明のサイトカイン調節剤
は、このような拒絶反応のエピソードおよびそれにより
生じる損傷の重篤度を軽減するのに同様に有用であり得
る。
【００５２】免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン）
の移植被験体への投与もまた、サイトカイン活性に影響
し、腎臓の損傷をもたらすサイクロスポリン誘導腎毒性
を生じる。サイトカインを調節する薬剤（例えば、本発
明の薬剤）は、サイクロスポリン誘導腎毒性を減少する
のに有効であり得る。
の移植被験体への投与もまた、サイトカイン活性に影響
し、腎臓の損傷をもたらすサイクロスポリン誘導腎毒性
を生じる。サイトカインを調節する薬剤（例えば、本発
明の薬剤）は、サイクロスポリン誘導腎毒性を減少する
のに有効であり得る。
【００５３】さらに、本発明のサイトカイン調節剤は、
虚血−再灌流に関連する器官損傷（糸球体濾過速度の減
少および腎臓における血管抵抗の増大のような損傷を含
む）に対して保護し得る。虚血−再灌流損傷はまた、サ
イトカインの上昇に関連している。IL-1およびTNFは、
心筋虚血を媒介し、そしてIL-1レベルの増大は骨格筋の
虚血の再灌流期の間に生じ得る。TNF放出の増大の後、
肝臓への中程度および重度の虚血損傷の両方が続く。
虚血−再灌流に関連する器官損傷（糸球体濾過速度の減
少および腎臓における血管抵抗の増大のような損傷を含
む）に対して保護し得る。虚血−再灌流損傷はまた、サ
イトカインの上昇に関連している。IL-1およびTNFは、
心筋虚血を媒介し、そしてIL-1レベルの増大は骨格筋の
虚血の再灌流期の間に生じ得る。TNF放出の増大の後、
肝臓への中程度および重度の虚血損傷の両方が続く。
【００５４】従って、本発明は、被験体にサイトカイン
調節剤を投与することにより、器官損傷に対して被験体
の器官を保護する方法を提供する。保護される器官損傷
は、器官移植、免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリ
ン）の投与、虚血−再灌流の結果の損傷、心筋梗塞、脳
卒中などのような状態または事象の結果であり得る。
調節剤を投与することにより、器官損傷に対して被験体
の器官を保護する方法を提供する。保護される器官損傷
は、器官移植、免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリ
ン）の投与、虚血−再灌流の結果の損傷、心筋梗塞、脳
卒中などのような状態または事象の結果であり得る。
【００５５】本明細書中で用いたように、「損傷」は、
器官全体への損傷（例えば、器官の機能不全）または器
官の組織への損傷を包含する。多くの例では、このよう
な損傷は、サイトカインレベルの上昇のみならずフリー
ラジカルの増大を伴う。例えば、虚血によりもたらされ
る活性化白血球細胞は酸素ラジカルを放出し、そしてア
グレッシブ(aggressive)メディエーター（例えば、白血
球に対して走化性であるサイトカインおよびPAF）を送
達する。これにより、酸素ラジカルおよびメディエータ
ー（例えば、サイトカイン）が循環し、虚血後損傷の増
大の原因となる。
器官全体への損傷（例えば、器官の機能不全）または器
官の組織への損傷を包含する。多くの例では、このよう
な損傷は、サイトカインレベルの上昇のみならずフリー
ラジカルの増大を伴う。例えば、虚血によりもたらされ
る活性化白血球細胞は酸素ラジカルを放出し、そしてア
グレッシブ(aggressive)メディエーター（例えば、白血
球に対して走化性であるサイトカインおよびPAF）を送
達する。これにより、酸素ラジカルおよびメディエータ
ー（例えば、サイトカイン）が循環し、虚血後損傷の増
大の原因となる。
【００５６】フリーラジカルまたはサイトカインを誘導
し得る損傷のタイプは、炎症、アテローム硬化症、血管
透過性の増大、線維症、および壊死を包含するが、これ
に限定されない。これらおよび他のタイプの損傷は、当
該分野で周知の方法により組織形態学的に評価され得
る。損傷はまた、しばしば、特定の器官または組織に特
異的である傾向があり、そして当該分野で周知の技術に
より日常的に測定され得る生理学的および生化学的パラ
メーターの変化により反映される器官機能不全により証
明され得る。例えば、腎臓損傷を示唆する腎機能不全
は、糸球体濾過速度および腎血流量の減少、ならびに腎
血管抵抗の増大を導き得る。組織および器官の損傷の初
期マーカーとして使用され得る生化学的パラメーターの
例は、酸化窒素またはマロンジアルデヒドのレベルの上
昇を包含する。マロンジアルデヒドは、脂質の過酸化の
副生成物であり、従って、フリーラジカルのレベルを示
唆する。あるいは、またはそれに加えて、細胞死のマー
カーである乳酸デヒドロゲナーゼのような酵素レベルの
上昇が評価され得る。
し得る損傷のタイプは、炎症、アテローム硬化症、血管
透過性の増大、線維症、および壊死を包含するが、これ
に限定されない。これらおよび他のタイプの損傷は、当
該分野で周知の方法により組織形態学的に評価され得
る。損傷はまた、しばしば、特定の器官または組織に特
異的である傾向があり、そして当該分野で周知の技術に
より日常的に測定され得る生理学的および生化学的パラ
メーターの変化により反映される器官機能不全により証
明され得る。例えば、腎臓損傷を示唆する腎機能不全
は、糸球体濾過速度および腎血流量の減少、ならびに腎
血管抵抗の増大を導き得る。組織および器官の損傷の初
期マーカーとして使用され得る生化学的パラメーターの
例は、酸化窒素またはマロンジアルデヒドのレベルの上
昇を包含する。マロンジアルデヒドは、脂質の過酸化の
副生成物であり、従って、フリーラジカルのレベルを示
唆する。あるいは、またはそれに加えて、細胞死のマー
カーである乳酸デヒドロゲナーゼのような酵素レベルの
上昇が評価され得る。
【００５７】本発明のサイトカイン調節剤の投与により
損傷に対して保護される器官は、心臓、腎臓、肝臓、
肺、脳、筋肉、皮膚、または骨を包含するが、これに限
定されない。本発明により保護され得る器官内の組織の
例は、皮膚の上皮である。移植され得る器官、または移
植被験体への免疫抑制剤の投与により生じるネガティブ
な副作用に関連する器官、ならびに虚血−再灌流、梗
塞、脳卒中、または細胞損傷または細胞死を導き得る他
の特定の状態または事象を受ける器官もまた包含する。
１より多い器官が同時に保護され得る。
損傷に対して保護される器官は、心臓、腎臓、肝臓、
肺、脳、筋肉、皮膚、または骨を包含するが、これに限
定されない。本発明により保護され得る器官内の組織の
例は、皮膚の上皮である。移植され得る器官、または移
植被験体への免疫抑制剤の投与により生じるネガティブ
な副作用に関連する器官、ならびに虚血−再灌流、梗
塞、脳卒中、または細胞損傷または細胞死を導き得る他
の特定の状態または事象を受ける器官もまた包含する。
１より多い器官が同時に保護され得る。
【００５８】ガン化学療法 本発明のサイトカイン調節剤またはこの薬剤を含む組成
物はまた、腎毒効果またはガン化学療法剤の他のネガテ
ィブな効果を軽減するためにガン化学療法に使用され得
る。
物はまた、腎毒効果またはガン化学療法剤の他のネガテ
ィブな効果を軽減するためにガン化学療法に使用され得
る。
【００５９】ガン化学療法剤（例えば、シスプラチン、
Taxol（登録商標）（タキソール（登録商標））、およ
びAdriamycin（登録商標）（ドキソルビシン））は、サ
イトカインの産生を誘導および増強する。微小管を安定
化する抗新生物剤であるTaxolは、TNFおよびIL-1の発現
を誘導し、そしてマクロファージにおけるTNFの産生を
増強する。IL-6およびTNFの濃度の上昇は、シスプラチ
ンを受けている患者に生じ、サイトカイン濃度は腎臓毒
性または肝臓毒性を経験する患者で特に上昇する。サイ
トカイン産生はまた、ガン患者において化学過温症(che
mo-hyperthermia)の間に増大する。シスプラチンを含む
過温症誘導性加熱溶液(hyperthermia-inducing heating
solution)を投与する場合に測定されるTNFおよびIL-6
レベルは、処置開始後30分以内に生じるIL-6の劇的な増
加を示した。TNF値は、わずかに上昇するのみであっ
た。
Taxol（登録商標）（タキソール（登録商標））、およ
びAdriamycin（登録商標）（ドキソルビシン））は、サ
イトカインの産生を誘導および増強する。微小管を安定
化する抗新生物剤であるTaxolは、TNFおよびIL-1の発現
を誘導し、そしてマクロファージにおけるTNFの産生を
増強する。IL-6およびTNFの濃度の上昇は、シスプラチ
ンを受けている患者に生じ、サイトカイン濃度は腎臓毒
性または肝臓毒性を経験する患者で特に上昇する。サイ
トカイン産生はまた、ガン患者において化学過温症(che
mo-hyperthermia)の間に増大する。シスプラチンを含む
過温症誘導性加熱溶液(hyperthermia-inducing heating
solution)を投与する場合に測定されるTNFおよびIL-6
レベルは、処置開始後30分以内に生じるIL-6の劇的な増
加を示した。TNF値は、わずかに上昇するのみであっ
た。
【００６０】実施例に示すように、ガン化学療法におけ
る本発明のサイトカイン調節剤の使用は、ガン化学療法
剤の腎毒効果を軽減し得る。さらに、ペプチドは、化学
療法薬物の他のネガティブな副作用（悪心、嘔吐、粘膜
炎症、食欲不振、疲労、および他の器官機能不全を包含
するがこれに限定されない）を軽減するためにガン化学
療法を受ける被験体に投与され得る。
る本発明のサイトカイン調節剤の使用は、ガン化学療法
剤の腎毒効果を軽減し得る。さらに、ペプチドは、化学
療法薬物の他のネガティブな副作用（悪心、嘔吐、粘膜
炎症、食欲不振、疲労、および他の器官機能不全を包含
するがこれに限定されない）を軽減するためにガン化学
療法を受ける被験体に投与され得る。
【００６１】酸化窒素およびサイトカインにより媒介さ
れる、糖尿病および糸球体腎炎を含む疾患 サイトカインおよび酸化窒素(NO)は両方とも、例えば、
糖尿病および糸球体腎炎を含む種々の疾患状態の重要な
メディエーターである。サイトカインおよびNOは、初期
のインスリン依存性糖尿病(insulin-dependent diabete
s mellitus)におけるβ細胞の損傷を調節する。IL-1、
γ-インターフェロン、およびTNFは、小島のNOを誘導す
る。NOの産生と平行して、IL-1、γ-インターフェロ
ン、およびTNFは、小島機能を損ない、グルコースレベ
ルを低下させ、そしてグルコース誘導インスリン放出を
減少させる。サイトカインにより生ずる小島細胞への有
害な効果のほとんどは、NO産生をブロックすることによ
り妨げられ得る。単離されたヒト小島が、単離された齧
歯類の小島よりもサイトカインおよびNOの抑制効果に対
してより耐性であることを示すいくつかの研究がある
が、サイトカインはNO生成へのそれらの効果に関係なく
ヒト小島機能を抑制し得る。
れる、糖尿病および糸球体腎炎を含む疾患 サイトカインおよび酸化窒素(NO)は両方とも、例えば、
糖尿病および糸球体腎炎を含む種々の疾患状態の重要な
メディエーターである。サイトカインおよびNOは、初期
のインスリン依存性糖尿病(insulin-dependent diabete
s mellitus)におけるβ細胞の損傷を調節する。IL-1、
γ-インターフェロン、およびTNFは、小島のNOを誘導す
る。NOの産生と平行して、IL-1、γ-インターフェロ
ン、およびTNFは、小島機能を損ない、グルコースレベ
ルを低下させ、そしてグルコース誘導インスリン放出を
減少させる。サイトカインにより生ずる小島細胞への有
害な効果のほとんどは、NO産生をブロックすることによ
り妨げられ得る。単離されたヒト小島が、単離された齧
歯類の小島よりもサイトカインおよびNOの抑制効果に対
してより耐性であることを示すいくつかの研究がある
が、サイトカインはNO生成へのそれらの効果に関係なく
ヒト小島機能を抑制し得る。
【００６２】サイトカインおよびNOはまた、糸球体腎炎
によりもたらされる傷害の程度に影響する。TNFおよびI
L-1は、腎炎における中の糸球体の傷害の重篤度を増大
し得、従って、糸球体の傷害の調節において臨床上重要
であり得る。Karkerら, Clin.Expt.Immunol. 90(2): 31
2-318 (1992)は、サイトカインを抑制する薬剤がアルブ
ミンレベルの上昇および腎糸球体腎炎における組織損傷
を減少するに効果的であることを報告している。他の研
究は、誘導性酸化窒素シンターゼ(iNOS)のインビボの誘
導が免疫複合性糸球体腎炎において生じることを示して
いる(Jansenら,Kid.Internat. 45(4): 1215-1219 (199
4))。
によりもたらされる傷害の程度に影響する。TNFおよびI
L-1は、腎炎における中の糸球体の傷害の重篤度を増大
し得、従って、糸球体の傷害の調節において臨床上重要
であり得る。Karkerら, Clin.Expt.Immunol. 90(2): 31
2-318 (1992)は、サイトカインを抑制する薬剤がアルブ
ミンレベルの上昇および腎糸球体腎炎における組織損傷
を減少するに効果的であることを報告している。他の研
究は、誘導性酸化窒素シンターゼ(iNOS)のインビボの誘
導が免疫複合性糸球体腎炎において生じることを示して
いる(Jansenら,Kid.Internat. 45(4): 1215-1219 (199
4))。
【００６３】本発明のサイトカイン調節剤は、酸化窒素
およびサイトカインにより媒介される疾患（例えば、糖
尿病および糸球体腎炎）を有する被験体を処置するため
に用いられ得る。本明細書中で用いるように、用語「処
置」は、NOおよびサイトカインにより媒介される特定の
疾患状態に関係する１またはそれ以上の徴候または状態
を軽減または緩和することを含む意味を包含する。例え
ば、糖尿病の処置は、糖尿病患者のグルコースレベルを
減少することにより明示され得る。
およびサイトカインにより媒介される疾患（例えば、糖
尿病および糸球体腎炎）を有する被験体を処置するため
に用いられ得る。本明細書中で用いるように、用語「処
置」は、NOおよびサイトカインにより媒介される特定の
疾患状態に関係する１またはそれ以上の徴候または状態
を軽減または緩和することを含む意味を包含する。例え
ば、糖尿病の処置は、糖尿病患者のグルコースレベルを
減少することにより明示され得る。
【００６４】体重に対するサイトカイン調節剤の効果 サイトカイン調節剤は、被験体の体重を減少させるのに
有用である。特に、この薬剤は、肥満被験体の体重を減
少させるのに有用である。肥満症と非インスリン依存性
糖尿病(NIDDM)との間の関連は、当該分野で周知である
(HotamisligilおよびSpiegelman, Diabetes 43: 1271-1
278 (1994a)を参照のこと)。TNF-α発現の上昇が、肥満
個体の脂肪組織において検出されており、そしてこれら
の個体におけるNIDDMの発症に役割りを有することが示
唆されている(Hotamisligilら, J.Clin.Invest. 95: 24
09-2415 (1995))。しかし、TNFレセプターに結合する抗
体を用いてTNF活性を中和する努力は、ラットの肥満症
／糖尿病モデルであるZucker fa/faラットモデルにおい
て試験した場合、有意な体重の減少を示さなかった(Hot
amisligilら, J.Clin.Invest. 94: 1543-1549 (1994
b))。
有用である。特に、この薬剤は、肥満被験体の体重を減
少させるのに有用である。肥満症と非インスリン依存性
糖尿病(NIDDM)との間の関連は、当該分野で周知である
(HotamisligilおよびSpiegelman, Diabetes 43: 1271-1
278 (1994a)を参照のこと)。TNF-α発現の上昇が、肥満
個体の脂肪組織において検出されており、そしてこれら
の個体におけるNIDDMの発症に役割りを有することが示
唆されている(Hotamisligilら, J.Clin.Invest. 95: 24
09-2415 (1995))。しかし、TNFレセプターに結合する抗
体を用いてTNF活性を中和する努力は、ラットの肥満症
／糖尿病モデルであるZucker fa/faラットモデルにおい
て試験した場合、有意な体重の減少を示さなかった(Hot
amisligilら, J.Clin.Invest. 94: 1543-1549 (1994
b))。
【００６５】驚くべきことに、サイトカイン調節剤EX-2
の正常ラットまたは肥満ラットへの投与は、投与した用
量に依存して体重増加速度の有意な減少、または体重の
有意な減少をもたらした（実施例XXを参照のこと）。本
明細書中で用いるように、用語「体重の減少」は、その
期間において期待される正常な体重増加と比較して、体
重の実際の減少またはある時間にわたる体重増加速度の
減少を意味するために広範に使用される。実施例XXに示
すように、EX-2はまた、小さいが有意な、正常（非肥
満）ラットの体重の減少を生じた。これらの結果は、サ
イトカイン調節剤が体重の増加速度の減少および体重の
減少を生じ得ることを示す。
の正常ラットまたは肥満ラットへの投与は、投与した用
量に依存して体重増加速度の有意な減少、または体重の
有意な減少をもたらした（実施例XXを参照のこと）。本
明細書中で用いるように、用語「体重の減少」は、その
期間において期待される正常な体重増加と比較して、体
重の実際の減少またはある時間にわたる体重増加速度の
減少を意味するために広範に使用される。実施例XXに示
すように、EX-2はまた、小さいが有意な、正常（非肥
満）ラットの体重の減少を生じた。これらの結果は、サ
イトカイン調節剤が体重の増加速度の減少および体重の
減少を生じ得ることを示す。
【００６６】EX-2処置ラットにおいて観察される体重の
減少は、安静時酸素消費量の増大により決定される代謝
速度の増加と相関した。これらの結果は、サイトカイン
調節剤がまた、被験体の安静時酸素摂取量を増大させる
ために有用であることを示す。上で議論したように、サ
イトカイン調節剤はまた、例えば、廃用性体調偏移によ
り生じる最大酸素消費量の減少を弱め得る。被験体にお
ける最大酸素消費量を増大させる能力は、例えば、鬱血
性心不全または酸素摂取量の欠乏（例えば、体調偏移の
間に生じる酸素消費量の減少）により特徴付けられる他
の状態を被る被験体に有意な臨床的利点を提供し得る
（実施例XIIIを参照のこと）。さらに、廃用性体調偏移
の結果は、少なくとも約２週間のサイトカイン調節剤で
の反復処置が、被験体におけるポジティブな適応性の変
化を生じ得、そして酸素消費能および運動能力の増大を
もたらすことを示す。従って、サイトカイン調節剤は、
被験体内における酸素消費量を増大するためのさらなる
使用を見出す。本明細書で用いるように、用語「酸素消
費量の増大」または「酸素摂取量の増大」は、被験体に
よる安静時酸素摂取量または最大酸素摂取量の正常なベ
ースラインレベルより上の増大、あるいは安静時酸素消
費量または最大酸素消費量の予期される損失の減少を意
味するために広範に用いられる。
減少は、安静時酸素消費量の増大により決定される代謝
速度の増加と相関した。これらの結果は、サイトカイン
調節剤がまた、被験体の安静時酸素摂取量を増大させる
ために有用であることを示す。上で議論したように、サ
イトカイン調節剤はまた、例えば、廃用性体調偏移によ
り生じる最大酸素消費量の減少を弱め得る。被験体にお
ける最大酸素消費量を増大させる能力は、例えば、鬱血
性心不全または酸素摂取量の欠乏（例えば、体調偏移の
間に生じる酸素消費量の減少）により特徴付けられる他
の状態を被る被験体に有意な臨床的利点を提供し得る
（実施例XIIIを参照のこと）。さらに、廃用性体調偏移
の結果は、少なくとも約２週間のサイトカイン調節剤で
の反復処置が、被験体におけるポジティブな適応性の変
化を生じ得、そして酸素消費能および運動能力の増大を
もたらすことを示す。従って、サイトカイン調節剤は、
被験体内における酸素消費量を増大するためのさらなる
使用を見出す。本明細書で用いるように、用語「酸素消
費量の増大」または「酸素摂取量の増大」は、被験体に
よる安静時酸素摂取量または最大酸素摂取量の正常なベ
ースラインレベルより上の増大、あるいは安静時酸素消
費量または最大酸素消費量の予期される損失の減少を意
味するために広範に用いられる。
【００６７】ヒトにおけるガン化学療法により媒介され
るネガティブな副作用の処置 サイトカイン調節剤は、ガン治療剤のネガティブな副作
用を改善または軽減するために用いられ得る。サイトカ
イン調節剤は、ガンの処置法の間にガン治療剤と同時に
投与され得るか、または予防法において、例えば、Taxo
l（これは、乳ガンの再発を減少させるために投与され
る）と同時に投与され得る。
るネガティブな副作用の処置 サイトカイン調節剤は、ガン治療剤のネガティブな副作
用を改善または軽減するために用いられ得る。サイトカ
イン調節剤は、ガンの処置法の間にガン治療剤と同時に
投与され得るか、または予防法において、例えば、Taxo
l（これは、乳ガンの再発を減少させるために投与され
る）と同時に投与され得る。
【００６８】実施例XIXは、ガン化学療法剤（例えば、
サイトカインの産生を誘導および増強する、シスプラチ
ン、Taxol、およびAdriamycin）に関連する有害な副作
用を改善するためのサイトカイン調節剤EX-2の使用を開
示する。
サイトカインの産生を誘導および増強する、シスプラチ
ン、Taxol、およびAdriamycin）に関連する有害な副作
用を改善するためのサイトカイン調節剤EX-2の使用を開
示する。
【００６９】EX-2は、ガン化学療法またはガン化学予防
法を受けている、または受けようとする患者への静脈内
注入により投与され得る。例えば、シスプラチン、Taxo
l、Adriamycin、あるいは他の化学療法処置または放射
線医学処置が、化学療法または放射線療法により生じる
有害な副作用を軽減または阻害するために、サイトカイ
ン調節剤と同時に投与され得る。
法を受けている、または受けようとする患者への静脈内
注入により投与され得る。例えば、シスプラチン、Taxo
l、Adriamycin、あるいは他の化学療法処置または放射
線医学処置が、化学療法または放射線療法により生じる
有害な副作用を軽減または阻害するために、サイトカイ
ン調節剤と同時に投与され得る。
【００７０】哺乳動物におけるサイトカインレベルの上
昇 本発明のサイトカイン調節剤、またはこの薬剤を含む組
成物はまた、１つまたはそれより多いサイトカインの生
理学的レベルを上昇させるために用いられ得る。例え
ば、特定の状態は、サイトカインのレベルまたは活性を
減少し得、免疫応答または免疫系の全てまたは一部を阻
害し得る。薬理学的に有効な用量でのサイトカイン調節
剤の投与は、サイトカインのレベルまたは活性を増強し
得、その結果免疫抑制のレベルを低下させ得る。
昇 本発明のサイトカイン調節剤、またはこの薬剤を含む組
成物はまた、１つまたはそれより多いサイトカインの生
理学的レベルを上昇させるために用いられ得る。例え
ば、特定の状態は、サイトカインのレベルまたは活性を
減少し得、免疫応答または免疫系の全てまたは一部を阻
害し得る。薬理学的に有効な用量でのサイトカイン調節
剤の投与は、サイトカインのレベルまたは活性を増強し
得、その結果免疫抑制のレベルを低下させ得る。
【００７１】サイトカイン調節剤は、哺乳動物（例え
ば、ヒト）におけるIL-10のレベルを上昇し得る（図２
および図３を参照のこと）。IL-10は、いくつかの炎症
性サイトカイン（TNF、IL-1およびIL-6を含む）の活性
化をブロックし得、一方IL-12のようなサイトカインを
アップレギュレートし得る。IL-10はまた、肥満細胞お
よび胸腺細胞の増殖を刺激する。IL-10は、いくつかの
単球およびマクロファージの機能を阻害し、この機能
は、例えば、クラスII MHC発現；IL-1、IL-6、IL-8、CS
F、およびTNFの合成；および殺菌活性を低下させること
によるＴ細胞への抗原提示を含む。阻害される殺菌活性
は、窒素酸化物および殺菌性代謝物の産生を抑制するこ
とを包含する。単球およびマクロファージのIL-10媒介
阻害の結果、いくつかのタイプのヘルパーＴ細胞の活性
が阻害される。特に、細胞媒介機能の原因となるＴH１
細胞（例えば、遅延型過敏性細胞）および細胞傷害性Ｔ
細胞が阻害される。さらにＴH１細胞阻害の結果、ＴH２
細胞（特に、Ｂ細胞の活性、細菌および駆虫剤耐性、な
らびにアレルギー反応を増大するＴ細胞のサブセット）
の活性が増大される。本明細書中に開示するように、サ
イトカイン調節剤の投与は、哺乳動物におけるIL-10の
血奬レベルを上昇させ得（実施例XVIIおよびXVIIIなら
びに図２および図３を参照のこと）、従って、例えば、
被験体における免疫応答性を調節するために有用であり
得る。
ば、ヒト）におけるIL-10のレベルを上昇し得る（図２
および図３を参照のこと）。IL-10は、いくつかの炎症
性サイトカイン（TNF、IL-1およびIL-6を含む）の活性
化をブロックし得、一方IL-12のようなサイトカインを
アップレギュレートし得る。IL-10はまた、肥満細胞お
よび胸腺細胞の増殖を刺激する。IL-10は、いくつかの
単球およびマクロファージの機能を阻害し、この機能
は、例えば、クラスII MHC発現；IL-1、IL-6、IL-8、CS
F、およびTNFの合成；および殺菌活性を低下させること
によるＴ細胞への抗原提示を含む。阻害される殺菌活性
は、窒素酸化物および殺菌性代謝物の産生を抑制するこ
とを包含する。単球およびマクロファージのIL-10媒介
阻害の結果、いくつかのタイプのヘルパーＴ細胞の活性
が阻害される。特に、細胞媒介機能の原因となるＴH１
細胞（例えば、遅延型過敏性細胞）および細胞傷害性Ｔ
細胞が阻害される。さらにＴH１細胞阻害の結果、ＴH２
細胞（特に、Ｂ細胞の活性、細菌および駆虫剤耐性、な
らびにアレルギー反応を増大するＴ細胞のサブセット）
の活性が増大される。本明細書中に開示するように、サ
イトカイン調節剤の投与は、哺乳動物におけるIL-10の
血奬レベルを上昇させ得（実施例XVIIおよびXVIIIなら
びに図２および図３を参照のこと）、従って、例えば、
被験体における免疫応答性を調節するために有用であり
得る。
【００７２】サイトカイン調節剤またはこのペプチドを
含む薬学的組成物は、上記の任意の病状および状態を処
置するために用いられ得る。当業者には、サイトカイン
調節剤を含む薬学的組成物が、上昇したサイトカイン活
性を有する被験体に種々の経路により投与され得ること
が公知であり、これらの経路には、例えば、経口投与、
膣内投与、直腸投与、あるいは、静脈内投与、筋肉内投
与、皮下投与、眼窩内投与、包内投与、腹腔内投与、槽
内投与、または例えば、皮膚パッチまたは経皮イオン導
入法を用いる受動性または促進された経皮吸収によるよ
うな非経口投与が含まれる。さらに、この組成物は、注
入、挿管法、経口投与、または局所投与により投与され
得る。この後者は、例えば、軟膏または粉末の直接塗布
により受動性であり得るか、または例えば鼻用スプレー
または吸入を用いる能動性であり得る。サイトカイン調
節剤はまた、局所スプレーとして投与され得る。この場
合、組成物の１成分は適切なプロペラント(propellant)
である。薬学的組成物はまた、所望により、リポソー
ム、マイクロスフェア、または他のポリマーマトリック
スに組み込まれ得る(Gregoriadis, Liposome Technolog
y,第１巻 (CRC Press,Boca Raton, FL 1984)、これは、
本明細書中に参考として援用されている）。例えば、リ
ン脂質または他の脂質からなるリポソームは、製造およ
び投与が比較的簡便な、非毒性の生理学的に受容可能
な、そして代謝可能なキャリアである。
含む薬学的組成物は、上記の任意の病状および状態を処
置するために用いられ得る。当業者には、サイトカイン
調節剤を含む薬学的組成物が、上昇したサイトカイン活
性を有する被験体に種々の経路により投与され得ること
が公知であり、これらの経路には、例えば、経口投与、
膣内投与、直腸投与、あるいは、静脈内投与、筋肉内投
与、皮下投与、眼窩内投与、包内投与、腹腔内投与、槽
内投与、または例えば、皮膚パッチまたは経皮イオン導
入法を用いる受動性または促進された経皮吸収によるよ
うな非経口投与が含まれる。さらに、この組成物は、注
入、挿管法、経口投与、または局所投与により投与され
得る。この後者は、例えば、軟膏または粉末の直接塗布
により受動性であり得るか、または例えば鼻用スプレー
または吸入を用いる能動性であり得る。サイトカイン調
節剤はまた、局所スプレーとして投与され得る。この場
合、組成物の１成分は適切なプロペラント(propellant)
である。薬学的組成物はまた、所望により、リポソー
ム、マイクロスフェア、または他のポリマーマトリック
スに組み込まれ得る(Gregoriadis, Liposome Technolog
y,第１巻 (CRC Press,Boca Raton, FL 1984)、これは、
本明細書中に参考として援用されている）。例えば、リ
ン脂質または他の脂質からなるリポソームは、製造およ
び投与が比較的簡便な、非毒性の生理学的に受容可能
な、そして代謝可能なキャリアである。
【００７３】サイトカインは、局所的に（例えば、局在
感染部位で）発現され得るか、または、例えば、廃用性
体調偏移または免疫応答におけるように全身的に発現さ
れ得る。サイトカイン発現は、被験体内の発熱（熱）お
よび痛覚過敏（痛みに対する極度の感受性）、ならびに
被験体内で炎症応答を生成またはさらに寄与するマクロ
ファージおよび単球の活性化を誘導し得る。サイトカイ
ン発現が局所的または全身的であり得るために、当業者
は、被験体内のサイトカインの供給源および分布に基づ
いてサイトカイン調節剤の投与の特定の経路および方法
を選択する。例えば、全身性の状態（例えば、廃用性体
調偏移）を被る被験体において、サイトカイン調節剤を
含む薬学的組成物は、静脈内投与、経口投与、またはサ
イトカイン調節剤を全身的に分布させる別の方法により
投与され得る。しかし、局在化したサイトカイン発現に
より生じる病状（例えば、急性呼吸窮迫症候群）を患う
被験体において、サイトカイン調節剤は、適切な薬学的
に受容可能なキャリアに懸濁または溶解され得、そして
例えば鼻用スプレーを用いて肺に直接投与され得る。
感染部位で）発現され得るか、または、例えば、廃用性
体調偏移または免疫応答におけるように全身的に発現さ
れ得る。サイトカイン発現は、被験体内の発熱（熱）お
よび痛覚過敏（痛みに対する極度の感受性）、ならびに
被験体内で炎症応答を生成またはさらに寄与するマクロ
ファージおよび単球の活性化を誘導し得る。サイトカイ
ン発現が局所的または全身的であり得るために、当業者
は、被験体内のサイトカインの供給源および分布に基づ
いてサイトカイン調節剤の投与の特定の経路および方法
を選択する。例えば、全身性の状態（例えば、廃用性体
調偏移）を被る被験体において、サイトカイン調節剤を
含む薬学的組成物は、静脈内投与、経口投与、またはサ
イトカイン調節剤を全身的に分布させる別の方法により
投与され得る。しかし、局在化したサイトカイン発現に
より生じる病状（例えば、急性呼吸窮迫症候群）を患う
被験体において、サイトカイン調節剤は、適切な薬学的
に受容可能なキャリアに懸濁または溶解され得、そして
例えば鼻用スプレーを用いて肺に直接投与され得る。
【００７４】サイトカインの生物学的活性を調節するた
めに、サイトカイン調節剤は、有効用量で投与されなけ
ればならない。有効用量は、１注入あたり約0.0001〜0.
5mg/kg体重であり、または、別の様式の投与による有効
用量は、約0.0001〜100mg/kg体重である。全有効用量
は、ボーラスとしてまたは比較的短時間にわたる注入に
よるいずれかの単回用量として被験体に投与され得る
か、あるいは多回用量がより長期にわたって投与される
分割処置プロトコルを用いて投与され得る。当業者に
は、被験体内において有効用量を得るために必要なサイ
トカイン調節剤の濃度が、被験体の年齢および一般的健
康状態、ならびに投与経路および投与される処置数を含
む多くの因子に依存することが公知である。これらの因
子を考慮して、当業者は、サイトカイン活性を効果的に
調節するための有効量を得るために特定の用量を調整す
る。
めに、サイトカイン調節剤は、有効用量で投与されなけ
ればならない。有効用量は、１注入あたり約0.0001〜0.
5mg/kg体重であり、または、別の様式の投与による有効
用量は、約0.0001〜100mg/kg体重である。全有効用量
は、ボーラスとしてまたは比較的短時間にわたる注入に
よるいずれかの単回用量として被験体に投与され得る
か、あるいは多回用量がより長期にわたって投与される
分割処置プロトコルを用いて投与され得る。当業者に
は、被験体内において有効用量を得るために必要なサイ
トカイン調節剤の濃度が、被験体の年齢および一般的健
康状態、ならびに投与経路および投与される処置数を含
む多くの因子に依存することが公知である。これらの因
子を考慮して、当業者は、サイトカイン活性を効果的に
調節するための有効量を得るために特定の用量を調整す
る。
【００７５】サイトカインにより媒介される有害な生物
学的効果を防止または最少にするまたは排除することに
おけるサイトカイン調節剤およびサイトカイン調節剤の
有効性の例を、以下に提供し、そして表Ｉ〜Ｖにまとめ
る。以下に記載のように、サイトカイン調節剤（例え
ば、実施例IIに記載のペプチド）は、マウスにおけるサ
イトカインの発現を効果的に調節し得（実施例IIIおよ
びIV）、そして当該分野においてヒトにおける効能の予
測物として認識されるマウス、ラット、およびウサギの
モデル系を用いて示されるように、サイトカインに媒介
される痛み、腫脹、熱の軽減、および致死率の減少を提
供し得る（実施例Ｖ〜XII）。
学的効果を防止または最少にするまたは排除することに
おけるサイトカイン調節剤およびサイトカイン調節剤の
有効性の例を、以下に提供し、そして表Ｉ〜Ｖにまとめ
る。以下に記載のように、サイトカイン調節剤（例え
ば、実施例IIに記載のペプチド）は、マウスにおけるサ
イトカインの発現を効果的に調節し得（実施例IIIおよ
びIV）、そして当該分野においてヒトにおける効能の予
測物として認識されるマウス、ラット、およびウサギの
モデル系を用いて示されるように、サイトカインに媒介
される痛み、腫脹、熱の軽減、および致死率の減少を提
供し得る（実施例Ｖ〜XII）。
【００７６】本明細書中に記載の化合物は、炎症、痛
み、悪液質、および病原免疫原性疾患（例えば、関節
炎、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、および他
の自己免疫機能不全）のような状態（これらは、サイト
カイン活性の変化により特徴付けられる）の処置のため
の薬物として用いられ得る。さらに、これらの実施例
は、本発明のサイトカイン調節剤が、廃用性体調偏移の
ネガティブな局面の緩和（実施例XIII）、特に虚血−再
灌流傷害およびサイクロスポリン誘導腎毒性後の器官の
保護（実施例XIV）、ガン化学療法の腎毒性効果の低減
（実施例XV）、糖尿病および糸球体腎炎を包含する酸化
窒素に関連する疾患状態の処置（実施例XVI）、および
個体の体重の減少（実施例XX）に有用である証拠を提供
する。
み、悪液質、および病原免疫原性疾患（例えば、関節
炎、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、および他
の自己免疫機能不全）のような状態（これらは、サイト
カイン活性の変化により特徴付けられる）の処置のため
の薬物として用いられ得る。さらに、これらの実施例
は、本発明のサイトカイン調節剤が、廃用性体調偏移の
ネガティブな局面の緩和（実施例XIII）、特に虚血−再
灌流傷害およびサイクロスポリン誘導腎毒性後の器官の
保護（実施例XIV）、ガン化学療法の腎毒性効果の低減
（実施例XV）、糖尿病および糸球体腎炎を包含する酸化
窒素に関連する疾患状態の処置（実施例XVI）、および
個体の体重の減少（実施例XX）に有用である証拠を提供
する。
【００７７】本発明の薬剤がサイトカイン発現を調節
し、それゆえ、上記の状態の処置に有用であるさらなる
証拠が、実施例XVII〜XVIXに提供される。マウス（実施
例XVII）およびヒト（実施例XVIII)を含む哺乳動物にお
けるサイトカイン調節剤投与後のサイトカインレベルの
上昇は、本発明の薬剤が、サイトカインの発現および活
性を調節するさらなる証拠を提供する。
し、それゆえ、上記の状態の処置に有用であるさらなる
証拠が、実施例XVII〜XVIXに提供される。マウス（実施
例XVII）およびヒト（実施例XVIII)を含む哺乳動物にお
けるサイトカイン調節剤投与後のサイトカインレベルの
上昇は、本発明の薬剤が、サイトカインの発現および活
性を調節するさらなる証拠を提供する。
【００７８】以下の実施例は、本発明の例示を意図する
が、本発明を限定することを意図しない。
が、本発明を限定することを意図しない。
【００７９】
【実施例】実施例Ｉ （ペプチド性サイトカイン調節剤の合成）本実施例は、
ペプチド性サイトカイン調節剤の固相合成のための方法
を記載する。
ペプチド性サイトカイン調節剤の固相合成のための方法
を記載する。
【００８０】 Ａ．Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH2 アミノ酸配列 Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly
（「EX-1」）を有するペプチド性サイトカイン調節剤
を、Merrifield（1964）の固相ペプチド合成法の改変を
用いて合成した。本質的には、t-BOCグリシン誘導体を
含有するMBHA樹脂（Advanced Chemtech；Louisville、K
Y）を、固相ペプチド合成に適切な反応容器（Houghten
(1985)、前出を参照のこと）に添加した。樹脂を塩化メ
チレンで３回洗浄し、そしてt-BOC保護基を、塩化メチ
レン中に１〜２％のアニソールを含有するトリフルオロ
酢酸（TFA）を用いて除去した。次いで、樹脂を塩化メ
チレンで洗浄し、そしてジイソプロピルエチルアミンで
処理した。
（「EX-1」）を有するペプチド性サイトカイン調節剤
を、Merrifield（1964）の固相ペプチド合成法の改変を
用いて合成した。本質的には、t-BOCグリシン誘導体を
含有するMBHA樹脂（Advanced Chemtech；Louisville、K
Y）を、固相ペプチド合成に適切な反応容器（Houghten
(1985)、前出を参照のこと）に添加した。樹脂を塩化メ
チレンで３回洗浄し、そしてt-BOC保護基を、塩化メチ
レン中に１〜２％のアニソールを含有するトリフルオロ
酢酸（TFA）を用いて除去した。次いで、樹脂を塩化メ
チレンで洗浄し、そしてジイソプロピルエチルアミンで
処理した。
【００８１】ペプチドを、ジメチルホルムアミド中の3.
2当量のN-ホルミル-BOC保護化D-トリプトファンおよび
3.0当量のジシクロヘキシルカルボジイミドの添加によ
り伸長した。反応を、ニンヒドリンを用いてモニター
し、そして25分間進行させた。その後、樹脂を塩化メチ
レンを用いて洗浄した。ジトルリル-BOCアルギニンを用
いて、次いで、それぞれの所望の保護化アミノ酸で、完
全なヘプタペプチドが合成されるまで、この手順を繰り
返した。
2当量のN-ホルミル-BOC保護化D-トリプトファンおよび
3.0当量のジシクロヘキシルカルボジイミドの添加によ
り伸長した。反応を、ニンヒドリンを用いてモニター
し、そして25分間進行させた。その後、樹脂を塩化メチ
レンを用いて洗浄した。ジトルリル-BOCアルギニンを用
いて、次いで、それぞれの所望の保護化アミノ酸で、完
全なヘプタペプチドが合成されるまで、この手順を繰り
返した。
【００８２】ヘプタペプチドの合成後、トリプトファン
残基のN-ホルミル保護基を、DMF中の20％ピペリジンを
用いて除去し、そして樹脂を塩化メチレンで洗浄した。
ペプチドを、10％のアニソールを含有する無水フッ化水
素（HF）を用いて樹脂から切断し、反応混合物を濃縮
し、そして残渣を酢酸溶液で抽出した。酢酸画分（溶解
サンプルを含有する）を取り出し、そして残渣を水で洗
浄した。洗液を酢酸画分に加え、合わせたサンプルを濃
縮した。得られた粗ペプチドを、RP-HPLC（Vydac、C-18
カラム、30分にわたる１〜60％溶液Ｂのグラジエントを
用いる（溶液Ａは0.1％TFA／水であり、そして溶液Ｂは
0.1%TFA／アセトニトリルである））により精製した。
残基のN-ホルミル保護基を、DMF中の20％ピペリジンを
用いて除去し、そして樹脂を塩化メチレンで洗浄した。
ペプチドを、10％のアニソールを含有する無水フッ化水
素（HF）を用いて樹脂から切断し、反応混合物を濃縮
し、そして残渣を酢酸溶液で抽出した。酢酸画分（溶解
サンプルを含有する）を取り出し、そして残渣を水で洗
浄した。洗液を酢酸画分に加え、合わせたサンプルを濃
縮した。得られた粗ペプチドを、RP-HPLC（Vydac、C-18
カラム、30分にわたる１〜60％溶液Ｂのグラジエントを
用いる（溶液Ａは0.1％TFA／水であり、そして溶液Ｂは
0.1%TFA／アセトニトリルである））により精製した。
【００８３】このペプチドは、RP-HPLC（Vydac C-18カ
ラム、24％の一定の溶液Ｂを用いる；溶液Ａおよび溶液
Ｂは上記の通りである；吸収を215nmで測定した）によ
り、97％の純度であることが測定された。精製ヘプタペ
プチドの質量を、BioIon 20 Mass Analyzer飛行時間型
検出器を用いるプラズマ脱離質量分析法により測定し
た。EX-1ペプチドの質量は、942.7であると測定され、
これは、本質的に予測された分子量と同一であった（MS
(M＋1)＝942.2）。
ラム、24％の一定の溶液Ｂを用いる；溶液Ａおよび溶液
Ｂは上記の通りである；吸収を215nmで測定した）によ
り、97％の純度であることが測定された。精製ヘプタペ
プチドの質量を、BioIon 20 Mass Analyzer飛行時間型
検出器を用いるプラズマ脱離質量分析法により測定し
た。EX-1ペプチドの質量は、942.7であると測定され、
これは、本質的に予測された分子量と同一であった（MS
(M＋1)＝942.2）。
【００８４】 Ｂ．His-(D)Phe-Arg-[(D)Trp(CH2)]-(NAc)Gly-NH2 本発明のサイトカイン調節剤は、アミノ酸配列 His-(D)
Phe-Arg-[(D)Trp(CH2)]-(NAc)Gly-NH2を有し、以下の改
変を除いて、上記のように合成され、そして精製され
た。Boc-(D)Trpを、クロロギ酸メチルおよびN,O-ジメチ
ルヒドロキシルアミン塩酸塩を用いて対応するN,O-ジメ
チルヒドロキサメートに転換した。リチウムアルミニウ
ムヒドリドによるトリプトファンアミドの還元により、
Boc-(D)Trpアルデヒドを得た。
Phe-Arg-[(D)Trp(CH2)]-(NAc)Gly-NH2を有し、以下の改
変を除いて、上記のように合成され、そして精製され
た。Boc-(D)Trpを、クロロギ酸メチルおよびN,O-ジメチ
ルヒドロキシルアミン塩酸塩を用いて対応するN,O-ジメ
チルヒドロキサメートに転換した。リチウムアルミニウ
ムヒドリドによるトリプトファンアミドの還元により、
Boc-(D)Trpアルデヒドを得た。
【００８５】Boc-(D)Trpアルデヒドおよびナトリウムシ
アノボロヒドリドのDMF溶液を、１％酢酸を含有するDMF
中でRinkアミド樹脂に結合したグリシンに加えた。還元
的アミノ化が完了した後、二級アミンを無水酢酸でアセ
チル化し、そして樹脂を１：１のトリフルオロ酢酸およ
び塩化メチレンで振盪し、Boc基を除去した。残りのア
ミノ酸の連続的なカップリングをペプチド合成機（Appl
ied Biosystems）で行い、ペプチド His-(D)Phe-Arg-
[(D)Trp(CH2)]-(NAc)Gly-NH2を生成した。ペプチドを樹
脂から切断し、そして上記のように精製した。
アノボロヒドリドのDMF溶液を、１％酢酸を含有するDMF
中でRinkアミド樹脂に結合したグリシンに加えた。還元
的アミノ化が完了した後、二級アミンを無水酢酸でアセ
チル化し、そして樹脂を１：１のトリフルオロ酢酸およ
び塩化メチレンで振盪し、Boc基を除去した。残りのア
ミノ酸の連続的なカップリングをペプチド合成機（Appl
ied Biosystems）で行い、ペプチド His-(D)Phe-Arg-
[(D)Trp(CH2)]-(NAc)Gly-NH2を生成した。ペプチドを樹
脂から切断し、そして上記のように精製した。
【００８６】実施例II （アセチル化されたペプチド性サイトカイン調節剤の調
製）本実施例は、N-アセチル化されたペプチド性サイト
カイン調節剤の調製のための方法を記載する。
製）本実施例は、N-アセチル化されたペプチド性サイト
カイン調節剤の調製のための方法を記載する。
【００８７】ヘプタペプチド Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-
(D)Trp-Gly-NH2を、実施例I.A.に記載のように合成し
た。しかし、新しく合成したペプチドを樹脂から切断す
る前に、ペプチドのアミノ末端を、無水酢酸、ジイソプ
ロピルエチルアミン、および塩化メチレンで２時間、サ
ンプルを処理することによりアセチル化したことを除
く。アセチル化後、上記のように、ヘプタペプチドを樹
脂から切断し、RP-HPLCにより精製し、そして質量分析
法により特徴付けした。実施例IIのアセチル化したヘプ
タペプチドは、ここで、EX-2と称し、98％の純度である
ことが測定され、質量は985.2ダルトンであると測定さ
れた。これは、予想される分子量と同一であった。
(D)Trp-Gly-NH2を、実施例I.A.に記載のように合成し
た。しかし、新しく合成したペプチドを樹脂から切断す
る前に、ペプチドのアミノ末端を、無水酢酸、ジイソプ
ロピルエチルアミン、および塩化メチレンで２時間、サ
ンプルを処理することによりアセチル化したことを除
く。アセチル化後、上記のように、ヘプタペプチドを樹
脂から切断し、RP-HPLCにより精製し、そして質量分析
法により特徴付けした。実施例IIのアセチル化したヘプ
タペプチドは、ここで、EX-2と称し、98％の純度である
ことが測定され、質量は985.2ダルトンであると測定さ
れた。これは、予想される分子量と同一であった。
【００８８】実施例ＩおよびIIに記載の同様な方法を用
いて、以下に示す、本発明の他のサイトカイン調節剤を
合成した：Ac-(シクロヘキシル)Gly-Gln-His-(D)Phe-Ar
g-(D)Trp-Gly-NH2（「EX-3」）；Ac-(D)Phe-Arg-(D)Trp
-NH2（「EX-4」）；Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH2
（「EX-5」）；およびAc-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-NH
2（「EX-6」）。Ac-His-(D)Phe-Arg-[(D)Trp(CH2)]-(NA
c)Gly-NH2を、実施例Ｉ.B.に記載の方法を用いて調製し
た。しかし、ペプチドを樹脂から切断する前に、ペプチ
ドを過剰の無水酢酸を用いてアセチル化したことを除
く。
いて、以下に示す、本発明の他のサイトカイン調節剤を
合成した：Ac-(シクロヘキシル)Gly-Gln-His-(D)Phe-Ar
g-(D)Trp-Gly-NH2（「EX-3」）；Ac-(D)Phe-Arg-(D)Trp
-NH2（「EX-4」）；Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH2
（「EX-5」）；およびAc-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-NH
2（「EX-6」）。Ac-His-(D)Phe-Arg-[(D)Trp(CH2)]-(NA
c)Gly-NH2を、実施例Ｉ.B.に記載の方法を用いて調製し
た。しかし、ペプチドを樹脂から切断する前に、ペプチ
ドを過剰の無水酢酸を用いてアセチル化したことを除
く。
【００８９】実施例III （マウスにおけるリポ多糖誘導腫瘍壊死因子レベルの低
下）本実施例は、リポ多糖類（LPS；エンドトキシン）
処置マウスにおける腫瘍壊死因子（TNF）レベルの低下
についての２つのサイトカイン調節剤の効果を記載す
る。
下）本実施例は、リポ多糖類（LPS；エンドトキシン）
処置マウスにおける腫瘍壊死因子（TNF）レベルの低下
についての２つのサイトカイン調節剤の効果を記載す
る。
【００９０】約20ｇ重のBalb/c雌マウスを２群（コント
ロール群および処置群）に分けた。0.9％生理食塩水中
のLPSを５mg/kgで、コントロールマウスに腹腔内（IP）
注射により投与した。処置群のマウスを、最初に、生理
食塩水中30μgのEX-2または150μgのEX-3を用いてIP注
射を行い、次いで、EX-2またはEX-3を投与した１分後
に、コントロール群について記載したように、このマウ
スにLPSを投与した。
ロール群および処置群）に分けた。0.9％生理食塩水中
のLPSを５mg/kgで、コントロールマウスに腹腔内（IP）
注射により投与した。処置群のマウスを、最初に、生理
食塩水中30μgのEX-2または150μgのEX-3を用いてIP注
射を行い、次いで、EX-2またはEX-3を投与した１分後
に、コントロール群について記載したように、このマウ
スにLPSを投与した。
【００９１】血液サンプルを、LPS投与後、４時間まで
の種々の時間で、処置マウスおよびコントロールマウス
の眼窩腔から採取した。血漿を、3000×ｇで５分間の遠
心分離により分離し、次いで１％ウシ血清アルブミンを
含有する１×リン酸緩衝化生理食塩水（pH 7.4）の４容
量で希釈した。100μlの血清サンプルを、TNF-α（Genz
yme；Cambridge MA）についてELISAによりアッセイし
た。
の種々の時間で、処置マウスおよびコントロールマウス
の眼窩腔から採取した。血漿を、3000×ｇで５分間の遠
心分離により分離し、次いで１％ウシ血清アルブミンを
含有する１×リン酸緩衝化生理食塩水（pH 7.4）の４容
量で希釈した。100μlの血清サンプルを、TNF-α（Genz
yme；Cambridge MA）についてELISAによりアッセイし
た。
【００９２】各群からの６匹のマウスの平均（+/- SE
M）のTNF-αレベルを測定し、そしてTNFレベルの減少パ
ーセントを算出した。表Ｉに示すように、EX-2でマウス
を処置することにより、未処置のコントロールマウスと
比較して、TNF-αのレベルにおいて50％の減少を生じ
た。同様に、EX-3でマウスを処置することにより、未処
置のコントロールマウスと比較して、TNF-αのレベルに
おいて56％の減少を生じ、そしてEX-4での処置は53％の
減少を生じた（表II）。これらの結果は、本発明のペプ
チドがLPS誘導サイトカイン活性を抑制し得ることを示
す。
M）のTNF-αレベルを測定し、そしてTNFレベルの減少パ
ーセントを算出した。表Ｉに示すように、EX-2でマウス
を処置することにより、未処置のコントロールマウスと
比較して、TNF-αのレベルにおいて50％の減少を生じ
た。同様に、EX-3でマウスを処置することにより、未処
置のコントロールマウスと比較して、TNF-αのレベルに
おいて56％の減少を生じ、そしてEX-4での処置は53％の
減少を生じた（表II）。これらの結果は、本発明のペプ
チドがLPS誘導サイトカイン活性を抑制し得ることを示
す。
【００９３】
【表１】
【００９４】
【表２】
【００９５】実施例IV （マウスにおけるリポ多糖誘導インターロイキン−６レ
ベルの低下）本実施例は、LPS処置マウスにおけるイン
ターロイキン−６（IL-6）レベルの低下についてのサイ
トカイン調節剤の効果を記載する。
ベルの低下）本実施例は、LPS処置マウスにおけるイン
ターロイキン−６（IL-6）レベルの低下についてのサイ
トカイン調節剤の効果を記載する。
【００９６】Balb/cマウスを、上記、実施例IIIに記載
するように、群分けし、そして処置した。上記のよう
に、血液サンプルを、６時間までの種々の時間で、眼窩
腔から得て、血清を採取し、そして希釈した。100μlの
アリコートを、Starnesら、J.Immunol. 145：4185-4194
(1990)（これは、本明細書において参考として援用さ
れる）の方法の改変により、IL-6特異的ELISAを用いてI
L-6レベルについてアッセイした。
するように、群分けし、そして処置した。上記のよう
に、血液サンプルを、６時間までの種々の時間で、眼窩
腔から得て、血清を採取し、そして希釈した。100μlの
アリコートを、Starnesら、J.Immunol. 145：4185-4194
(1990)（これは、本明細書において参考として援用さ
れる）の方法の改変により、IL-6特異的ELISAを用いてI
L-6レベルについてアッセイした。
【００９７】各群からの６匹のマウスの平均（+/- SE
M）のIL-6レベルを測定し、そしてIL-6の減少パーセン
トを算出した。表Ｉに示すように、EX-2でのマウスの処
置により、未処置のコントロールマウスと比較して、IL
-6のレベルにおいて60％の減少を生じた。
M）のIL-6レベルを測定し、そしてIL-6の減少パーセン
トを算出した。表Ｉに示すように、EX-2でのマウスの処
置により、未処置のコントロールマウスと比較して、IL
-6のレベルにおいて60％の減少を生じた。
【００９８】実施例Ｖ （カラゲナン誘導の足の腫脹）本実施例は、炎症および
痛みを軽減させるための２つのサイトカイン調節剤の効
果を記載する。
痛みを軽減させるための２つのサイトカイン調節剤の効
果を記載する。
【００９９】カラゲナン誘導の足の腫脹を、Hiltzおよ
びLipton、Peptides 11：979-982 (1990)；Vingerら、F
ed. Proc. 46：118-126 (1987)；およびVinegarら、J.
Pharmacol. Expt. Therap. 166：96-103 (1969)（これ
らのそれぞれは、本明細書中に参考として援用される）
の方法の改変を用いて誘導した。簡潔に記すと、成熟雌
のBalb/cマウスに、７mg/kgケトアミンおよび0.6mg/kg
ロムプンの腹腔内注射により麻酔をかけた。足蹠厚を、
スプリング加重ミクロメーター（Swiss Precision Inst
ruments）を用いて計測した。足蹠厚を、1/100インチの
単位で表した。ベースライン測定を行った後、マウス
に、0.2mlの生理学的食塩水（コントロール）または0.2
ml生理食塩水中の種々の用量のEX-2もしくはEX-3（処
置）のいずれかを後足の足蹠に注射した。最初の注射
を、0.15％のκ-カラゲナン（Sigma Chemical Co.；St.
Louis、MO.）の0.02mlの注射の直後に行った。
びLipton、Peptides 11：979-982 (1990)；Vingerら、F
ed. Proc. 46：118-126 (1987)；およびVinegarら、J.
Pharmacol. Expt. Therap. 166：96-103 (1969)（これ
らのそれぞれは、本明細書中に参考として援用される）
の方法の改変を用いて誘導した。簡潔に記すと、成熟雌
のBalb/cマウスに、７mg/kgケトアミンおよび0.6mg/kg
ロムプンの腹腔内注射により麻酔をかけた。足蹠厚を、
スプリング加重ミクロメーター（Swiss Precision Inst
ruments）を用いて計測した。足蹠厚を、1/100インチの
単位で表した。ベースライン測定を行った後、マウス
に、0.2mlの生理学的食塩水（コントロール）または0.2
ml生理食塩水中の種々の用量のEX-2もしくはEX-3（処
置）のいずれかを後足の足蹠に注射した。最初の注射
を、0.15％のκ-カラゲナン（Sigma Chemical Co.；St.
Louis、MO.）の0.02mlの注射の直後に行った。
【０１００】後足の足蹠厚を６時間の間、１時間毎に計
測し、厚さの変化を測定し、そしてEX-2での処置による
腫脹の減少パーセントを算出した。表ＩおよびIIに示す
ように、１μgのEX-2または１μgのEX-3の腹腔内注射
は、２時間目に計測したとき、カラゲナン誘導の腫脹
を、それぞれ45％または49％減少させた。
測し、厚さの変化を測定し、そしてEX-2での処置による
腫脹の減少パーセントを算出した。表ＩおよびIIに示す
ように、１μgのEX-2または１μgのEX-3の腹腔内注射
は、２時間目に計測したとき、カラゲナン誘導の腫脹
を、それぞれ45％または49％減少させた。
【０１０１】実施例VI （リポ多糖誘導致死率）本実施例は、LPS投与により誘
導される敗血症からの致死率を減少させる際の、サイト
カイン調節剤（EX-2、およびEX-3、およびEX-4）の効果
を記載する。
導される敗血症からの致死率を減少させる際の、サイト
カイン調節剤（EX-2、およびEX-3、およびEX-4）の効果
を記載する。
【０１０２】これらの実験を、Rivierら、Endocrinolog
y 125：2800-2805 (1989)（これは、本明細書中で参考
として援用される）により報告された情報に基づいて行
った。成熟雌のBalb/cマウスに、自由に餌および水を与
えた。マウスに、40時間の間、４時間毎に、0.2mlの生
理食塩水中の30〜300μgのEX-2、EX-3、またはEX-4（処
置群）あるいは0.2mlの生理的食塩水単独（コントール
群）を腹腔内注射した（各群10匹のマウス）。最初の注
射の直後、0.2mlの生理的食塩水中の0.6mgのLPSエンド
トキシンを、それぞれのマウスに投与した。LPS注射
後、EX-2または生理食塩水を、処置マウスまたはコント
ロールマウスに、それぞれ４時間毎に36時間にわたり投
与した。
y 125：2800-2805 (1989)（これは、本明細書中で参考
として援用される）により報告された情報に基づいて行
った。成熟雌のBalb/cマウスに、自由に餌および水を与
えた。マウスに、40時間の間、４時間毎に、0.2mlの生
理食塩水中の30〜300μgのEX-2、EX-3、またはEX-4（処
置群）あるいは0.2mlの生理的食塩水単独（コントール
群）を腹腔内注射した（各群10匹のマウス）。最初の注
射の直後、0.2mlの生理的食塩水中の0.6mgのLPSエンド
トキシンを、それぞれのマウスに投与した。LPS注射
後、EX-2または生理食塩水を、処置マウスまたはコント
ロールマウスに、それぞれ４時間毎に36時間にわたり投
与した。
【０１０３】表ＩおよびIIに示すように、3.3mgのEX-
2、EX-3、またはEX-4の投与（それぞれ300μgの11回の
注射）により、コントロールマウスと比較して、それぞ
れ83％、86％、および75％の生存の増加を生じた。これ
らの結果は、本発明のサイトカイン調節剤の腹腔内投与
により、LPS誘導敗血症による致死率を低下させ得るこ
とを示す。
2、EX-3、またはEX-4の投与（それぞれ300μgの11回の
注射）により、コントロールマウスと比較して、それぞ
れ83％、86％、および75％の生存の増加を生じた。これ
らの結果は、本発明のサイトカイン調節剤の腹腔内投与
により、LPS誘導敗血症による致死率を低下させ得るこ
とを示す。
【０１０４】実施例VII （インターロイキンー1β誘導痛覚過敏の低減）本実施
例は、痛みの予防を提供する際のサイトカイン調節剤
（EX-2）の効果を記載する。
例は、痛みの予防を提供する際のサイトカイン調節剤
（EX-2）の効果を記載する。
【０１０５】これらの実験を、Pooleら、Br. J. Pharma
col. 106：489-492 (1992)；Follenfantら、Br. J. Pha
rmacol. 98：41-43 (1989)；および、RandallおよびSel
lito、Arch. Internatl. Pharmacodyn. 111：409-419
(1957)（これらのそれぞれは、本明細書中で参考として
援用される）に記載される方法の改変を用いて行った。
成熟雄Sprague-Dawleyラット（175〜275ｇ）を、可変圧
力計測器（IITC LifeSciences；Woodland Hills、CA）
を用いて、足圧(paw pressure)技術により痛覚過敏につ
いて試験した。ラットを生活環境に順応させ、そして訓
練期間の開始に先立ち、３日間手を触れて馴らした。痛
覚過敏実験を開始すべき前日に、各ラットをソックス(s
ock)に入れ、そして２通りの足圧力試験を15分間隔で行
った。その翌日、ラットは、各動物が回避反射（例え
ば、全身的なもがき(struggling)および／またはうめき
(vocalization)）を示す圧力（mmHg）を決定するために
予備試験を行った。約５〜10％のラットは応答せず、そ
してさらなる実験から除外した。
col. 106：489-492 (1992)；Follenfantら、Br. J. Pha
rmacol. 98：41-43 (1989)；および、RandallおよびSel
lito、Arch. Internatl. Pharmacodyn. 111：409-419
(1957)（これらのそれぞれは、本明細書中で参考として
援用される）に記載される方法の改変を用いて行った。
成熟雄Sprague-Dawleyラット（175〜275ｇ）を、可変圧
力計測器（IITC LifeSciences；Woodland Hills、CA）
を用いて、足圧(paw pressure)技術により痛覚過敏につ
いて試験した。ラットを生活環境に順応させ、そして訓
練期間の開始に先立ち、３日間手を触れて馴らした。痛
覚過敏実験を開始すべき前日に、各ラットをソックス(s
ock)に入れ、そして２通りの足圧力試験を15分間隔で行
った。その翌日、ラットは、各動物が回避反射（例え
ば、全身的なもがき(struggling)および／またはうめき
(vocalization)）を示す圧力（mmHg）を決定するために
予備試験を行った。約５〜10％のラットは応答せず、そ
してさらなる実験から除外した。
【０１０６】足圧力に応答した動物を、１ml/kgの容量
で種々の濃度のEX-2（処置）または生理食塩水単独（コ
ントロール）を腹腔内注射により、前処置した。20分
後、100μlのIL-1β（１U/100μl）を、足底内注射を介
してラットに投与した。IL-1投与の２時間後、ラットを
２つのさらなる足圧力試験に供し、そしてコントロール
ラットと比較して、EX-2処置ラットに適用し得た圧力の
mmHgにおける増加を測定した。表Ｉに示すように、１μ
gのEX-2での処置は、コントロールラットと比較して、
ラットが125％まで耐える圧力量を増加させた。
で種々の濃度のEX-2（処置）または生理食塩水単独（コ
ントロール）を腹腔内注射により、前処置した。20分
後、100μlのIL-1β（１U/100μl）を、足底内注射を介
してラットに投与した。IL-1投与の２時間後、ラットを
２つのさらなる足圧力試験に供し、そしてコントロール
ラットと比較して、EX-2処置ラットに適用し得た圧力の
mmHgにおける増加を測定した。表Ｉに示すように、１μ
gのEX-2での処置は、コントロールラットと比較して、
ラットが125％まで耐える圧力量を増加させた。
【０１０７】実施例VIII （成人呼吸窮迫症候群）この実施例は、LPS処置ラット
において呼吸窮迫症候群を最小にすることにおける、サ
イトカイン調節剤EX-2の効果を記載する。
において呼吸窮迫症候群を最小にすることにおける、サ
イトカイン調節剤EX-2の効果を記載する。
【０１０８】これらの実験を、Ulichら、Am. J. Patho
l. 141:61-68 (1992)およびWheeldenら、Lab. Animals
26:29-37 (1992)に記載された方法の改変を用いて行っ
た。これらの文献はそれぞれ本明細書中に参考として援
用されている。雄Harlan Sprague-Dawlwyラットを、70
mg/kgのケタミンと6 mg/kgのロムパン（rompun）の混合
物を用いて腹腔内に注射して麻酔をかけた。２〜３cmの
切開部を麻酔をかけた各ラットの頚部に作成し、そして
その気管を周囲軟組織の鈍的剥離により露出した。ラッ
トをほぼ垂直な平板につるし、そして気管内注射は、喉
頭の１cm後方の点に、１ccシリンジに装着した25G×1/2
インチ針を露出した気管に挿入することにより行った。
l. 141:61-68 (1992)およびWheeldenら、Lab. Animals
26:29-37 (1992)に記載された方法の改変を用いて行っ
た。これらの文献はそれぞれ本明細書中に参考として援
用されている。雄Harlan Sprague-Dawlwyラットを、70
mg/kgのケタミンと6 mg/kgのロムパン（rompun）の混合
物を用いて腹腔内に注射して麻酔をかけた。２〜３cmの
切開部を麻酔をかけた各ラットの頚部に作成し、そして
その気管を周囲軟組織の鈍的剥離により露出した。ラッ
トをほぼ垂直な平板につるし、そして気管内注射は、喉
頭の１cm後方の点に、１ccシリンジに装着した25G×1/2
インチ針を露出した気管に挿入することにより行った。
【０１０９】各ラットは、0.5ml/kgの生理食塩液または
0.5ml/kgの10mg/ml（５mg/kg）LPSエンドトキシンを、
ゆっくりの気管内投与を介して受けた。LPSエンドトキ
シンの投与直後、ラットに、生理食塩液（コントロー
ル）または種々の濃度のEX-2を含む生理食塩液（処置）
のいずれかの１ml/kgを腹腔内に注射した。ラットを、
１〜２分間高くした位置に維持し、LPSおよび生理食塩
液の肺への分布を容易にした。切開部を閉じ、そしてラ
ットを回復させた。気管内注射の２および４時間後、生
理食塩液またはEX-2を再度、それぞれコントロールおよ
び処置ラットに投与した。
0.5ml/kgの10mg/ml（５mg/kg）LPSエンドトキシンを、
ゆっくりの気管内投与を介して受けた。LPSエンドトキ
シンの投与直後、ラットに、生理食塩液（コントロー
ル）または種々の濃度のEX-2を含む生理食塩液（処置）
のいずれかの１ml/kgを腹腔内に注射した。ラットを、
１〜２分間高くした位置に維持し、LPSおよび生理食塩
液の肺への分布を容易にした。切開部を閉じ、そしてラ
ットを回復させた。気管内注射の２および４時間後、生
理食塩液またはEX-2を再度、それぞれコントロールおよ
び処置ラットに投与した。
【０１１０】気管内投与の６時間後に、ラットに再麻酔
をかけ、心臓穿刺により瀉血した。血清を採取し、保存
した。頚部および胸部を開いて気管および肺を露出さ
せ、肺を27G×3/4インチ針を用いて６×５mlの生理食塩
液で洗浄し、そして洗浄液をプールした。
をかけ、心臓穿刺により瀉血した。血清を採取し、保存
した。頚部および胸部を開いて気管および肺を露出さ
せ、肺を27G×3/4インチ針を用いて６×５mlの生理食塩
液で洗浄し、そして洗浄液をプールした。
【０１１１】気管支肺胞洗浄液中の全多形核白血球（PM
N；好中球）をEX-2処置ラットで計数し、そしてコント
ロールラットにおける数と比較した。表Ｉに示すよう
に、100μg/kgのEX-2での処置は、LPS処置肺におけるPM
N浸潤の増加を58％阻害した。
N；好中球）をEX-2処置ラットで計数し、そしてコント
ロールラットにおける数と比較した。表Ｉに示すよう
に、100μg/kgのEX-2での処置は、LPS処置肺におけるPM
N浸潤の増加を58％阻害した。
【０１１２】実施例IX （インターロイキン-1βまたはリポ多糖誘導性体温上昇
の阻害）この実施例は、２つの異なる薬剤に応じてラッ
トにおいて体温上昇を阻害することにおける、サイトカ
イン調節剤、EX-2、EX-3、およびEX-4の効果を記載す
る。
の阻害）この実施例は、２つの異なる薬剤に応じてラッ
トにおいて体温上昇を阻害することにおける、サイトカ
イン調節剤、EX-2、EX-3、およびEX-4の効果を記載す
る。
【０１１３】雄Wistarラット（45〜75日齢）を、ラット
の正常体温に対して熱的中性（thermoneutral）である2
6℃に保持された温度制御された室内に入れ、そしてテ
スト前の24時間、自由に食餌および水にアクセスできる
室内に維持した。研究の朝、ラットを同定のために印を
付け、そして体重を量った。各ラットの体温を、ストレ
スを最小にするように設計された調節ケージに動物を置
き、そして温度プローブ（YSIプローブ＃402）を動物の
直腸中に３〜５cm挿入することによって測定した。体温
を安定化された読みの15秒後に記録した。測定を各ラッ
トに対するベースライン温度を確立するために１時間後
に繰り返した。
の正常体温に対して熱的中性（thermoneutral）である2
6℃に保持された温度制御された室内に入れ、そしてテ
スト前の24時間、自由に食餌および水にアクセスできる
室内に維持した。研究の朝、ラットを同定のために印を
付け、そして体重を量った。各ラットの体温を、ストレ
スを最小にするように設計された調節ケージに動物を置
き、そして温度プローブ（YSIプローブ＃402）を動物の
直腸中に３〜５cm挿入することによって測定した。体温
を安定化された読みの15秒後に記録した。測定を各ラッ
トに対するベースライン温度を確立するために１時間後
に繰り返した。
【０１１４】ベースライン温度が確立された後、ラット
に、生理食塩液、IL-1β、またはLPSエンドトキシンを
腹腔内に注射した。次いで、ラットに、生理食塩液（コ
ントロール）あるいはEX-2、EX-3、またはEX-4（処置）
の種々の濃度のいずれかを腹腔内に注射した。ラットの
体温を１時間毎に６時間測定し、そしてIL-1βまたはLP
Sによる体温の上昇のEX-2、EX-3、またはEX-4による阻
害を測定した。
に、生理食塩液、IL-1β、またはLPSエンドトキシンを
腹腔内に注射した。次いで、ラットに、生理食塩液（コ
ントロール）あるいはEX-2、EX-3、またはEX-4（処置）
の種々の濃度のいずれかを腹腔内に注射した。ラットの
体温を１時間毎に６時間測定し、そしてIL-1βまたはLP
Sによる体温の上昇のEX-2、EX-3、またはEX-4による阻
害を測定した。
【０１１５】表Ｉに示すように、500μg/kgのEX-2での
処置は、IL-1で誘導された熱を52％阻害した。さらに、
50または150μg/kgのEX-2での処置は、LPS注射６時間後
に測定した場合、LPSで誘導された熱をそれぞれ45％ま
たは52％阻害した。さらに、150μg/kgのEX-3またはEX-
4での処置は、LPSで誘導された熱をそれぞれ57％または
52％阻害した（表II）。これらの結果は、本発明の種々
のサイトカイン調節剤が熱を効果的に下降させ得ること
を示す。
処置は、IL-1で誘導された熱を52％阻害した。さらに、
50または150μg/kgのEX-2での処置は、LPS注射６時間後
に測定した場合、LPSで誘導された熱をそれぞれ45％ま
たは52％阻害した。さらに、150μg/kgのEX-3またはEX-
4での処置は、LPSで誘導された熱をそれぞれ57％または
52％阻害した（表II）。これらの結果は、本発明の種々
のサイトカイン調節剤が熱を効果的に下降させ得ること
を示す。
【０１１６】実施例Ｘ （マウスにおけるアラキドン酸誘導耳腫脹の低減）この
実施例は、EX-2およびEX-3が、マウスにおいてアラキド
ン酸誘導耳腫脹を低減し得ることを示す。
実施例は、EX-2およびEX-3が、マウスにおいてアラキド
ン酸誘導耳腫脹を低減し得ることを示す。
【０１１７】実験を、18〜23グラムの体重の雌Balb/cマ
ウスを用いて行った。生理食塩液あるいは100μgのEX-2
またはEX-3を、アラキドン酸（AA）の局所塗布の30分前
に腹腔内に投与した。10μlのピペットを用いて、10μl
のAA溶液（100mg/mlエタノール；Calbiochem-Novabioch
em；San Diego CA）を各マウスの右耳の内表面および外
表面に塗布した。10μlのエタノール単独を、各マウス
の左耳の内表面および外表面に塗布した。
ウスを用いて行った。生理食塩液あるいは100μgのEX-2
またはEX-3を、アラキドン酸（AA）の局所塗布の30分前
に腹腔内に投与した。10μlのピペットを用いて、10μl
のAA溶液（100mg/mlエタノール；Calbiochem-Novabioch
em；San Diego CA）を各マウスの右耳の内表面および外
表面に塗布した。10μlのエタノール単独を、各マウス
の左耳の内表面および外表面に塗布した。
【０１１８】耳の厚さを、AA塗布の直前および60分後
に、手持ち型のバネ付カリパス（hand-held spring loa
ded caliper）を用いて測定した。耳の厚さの増加を、A
A処置耳で観察された変化からコントロール耳で観察さ
れた変化を差し引くことにより算出した。各群（生理食
塩液およびコントロール）の値は、各群における個々の
マウスで観察された腫脹の平均である。腫脹の減少の割
合は、生理食塩液コントロール群で観察された腫脹に基
づく。表ＩおよびIIに示すように、EX-2およびEX-3は、
AAで誘導された耳の腫脹をそれぞれ72％および62％減少
した。
に、手持ち型のバネ付カリパス（hand-held spring loa
ded caliper）を用いて測定した。耳の厚さの増加を、A
A処置耳で観察された変化からコントロール耳で観察さ
れた変化を差し引くことにより算出した。各群（生理食
塩液およびコントロール）の値は、各群における個々の
マウスで観察された腫脹の平均である。腫脹の減少の割
合は、生理食塩液コントロール群で観察された腫脹に基
づく。表ＩおよびIIに示すように、EX-2およびEX-3は、
AAで誘導された耳の腫脹をそれぞれ72％および62％減少
した。
【０１１９】実施例XI （ウサギにおけるモルヒネ誘導呼吸抑制の低減）この実
施例は、EX-2およびEX-3がウサギにおいてモルヒネによ
り誘導される呼吸の抑制を低減し得ることを示す。
施例は、EX-2およびEX-3がウサギにおいてモルヒネによ
り誘導される呼吸の抑制を低減し得ることを示す。
【０１２０】雄Sheltonウサギ（３〜４kg）を押さえ
て、前肢のすぐ後ろの胸郭のまわりに呼吸変換器（Mode
l F-RCT；Grass Instruments；Quincy MA）を取り付け
た。この変換器を、EKGケーブルを介してグラスポリグ
ラフ（grass polygraph）に接続した。25Gバタフライ針
を用いて辺縁耳静脈をカニュレーションすることによ
り、薬物投与のための静脈内ラインを確立した。
て、前肢のすぐ後ろの胸郭のまわりに呼吸変換器（Mode
l F-RCT；Grass Instruments；Quincy MA）を取り付け
た。この変換器を、EKGケーブルを介してグラスポリグ
ラフ（grass polygraph）に接続した。25Gバタフライ針
を用いて辺縁耳静脈をカニュレーションすることによ
り、薬物投与のための静脈内ラインを確立した。
【０１２１】ウサギの呼吸を安定化させ、次いで、硫酸
モルヒネ（２mg/kg、0.5ml生理食塩液中）を静脈内注射
により投与し、そして呼吸数および深度を10分間モニタ
ーした。モルヒネの第２回目の用量を投与し、次いで、
10分後、EX-2またはEX-3（10μg/kg、0.5ml生理食塩液
中）を静脈内投与し、そしてウサギを20分間モニターし
た。EX-2またはEX-3（20μg/kg、1.0ml生理食塩液中）
の２回の追加用量を20分間の間隔で、すなわち、最初の
モルヒネ注射後40分および60分に投与した。
モルヒネ（２mg/kg、0.5ml生理食塩液中）を静脈内注射
により投与し、そして呼吸数および深度を10分間モニタ
ーした。モルヒネの第２回目の用量を投与し、次いで、
10分後、EX-2またはEX-3（10μg/kg、0.5ml生理食塩液
中）を静脈内投与し、そしてウサギを20分間モニターし
た。EX-2またはEX-3（20μg/kg、1.0ml生理食塩液中）
の２回の追加用量を20分間の間隔で、すなわち、最初の
モルヒネ注射後40分および60分に投与した。
【０１２２】結果を、ベースライン値からの変化の割合
として算出し、そして実験の最後（80分）での処置群の
平均値からコントロール群の平均値を引いた差として表
した。表ＩおよびIIに示すように、EX-2およびEX-3は、
ウサギにおけるモルヒネ誘導呼吸抑制をそれぞれ50％お
よび65％低減した。
として算出し、そして実験の最後（80分）での処置群の
平均値からコントロール群の平均値を引いた差として表
した。表ＩおよびIIに示すように、EX-2およびEX-3は、
ウサギにおけるモルヒネ誘導呼吸抑制をそれぞれ50％お
よび65％低減した。
【０１２３】実施例XII （TNF-αレベルおよびLPS誘導致死率の低下における経
口投与されたサイトカイン調節剤の効果）この実験は、
マウスでのLPS誘導されたTNF-αレベルおよび致死率の
低下における種々のサイトカイン調節剤の経口効果を記
載する。
口投与されたサイトカイン調節剤の効果）この実験は、
マウスでのLPS誘導されたTNF-αレベルおよび致死率の
低下における種々のサイトカイン調節剤の経口効果を記
載する。
【０１２４】LPS誘導された致死率の研究を、Rivier
ら、前述、1989により報告された情報に基づいて行っ
た。成熟雌Balb/cマウスを、任意に食餌および水を与え
た。マウスに、100μl生理食塩液中の150μgまたは300
μgのEX-2、EX-3、EX-5、またはEX-6を、ガバージュに
より４時間毎に40時間投与した（それぞれ1.65mgおよび
3.3mgの総容量）。コントロールマウスに100μlの生理
食塩液単独を投与した。サイトカイン調節剤または生理
食塩液の最初の投与の直後に、0.2ml生理食塩液中の0.6
mgのLPSを腹腔内注射により投与した。3.3mgのEX-5（63
％）、1.65mgのEX-6（68％）、または3.3mgのEX-5（44
％）を投与したマウスにおいて、コントロールマウス
（０％）またはEX-2またはEX-3を投与したマウス（０％
〜11％）と比較して、統計学的に有意な生存率の増加を
観察した。
ら、前述、1989により報告された情報に基づいて行っ
た。成熟雌Balb/cマウスを、任意に食餌および水を与え
た。マウスに、100μl生理食塩液中の150μgまたは300
μgのEX-2、EX-3、EX-5、またはEX-6を、ガバージュに
より４時間毎に40時間投与した（それぞれ1.65mgおよび
3.3mgの総容量）。コントロールマウスに100μlの生理
食塩液単独を投与した。サイトカイン調節剤または生理
食塩液の最初の投与の直後に、0.2ml生理食塩液中の0.6
mgのLPSを腹腔内注射により投与した。3.3mgのEX-5（63
％）、1.65mgのEX-6（68％）、または3.3mgのEX-5（44
％）を投与したマウスにおいて、コントロールマウス
（０％）またはEX-2またはEX-3を投与したマウス（０％
〜11％）と比較して、統計学的に有意な生存率の増加を
観察した。
【０１２５】経口投与されたサイトカイン調節剤がLPS
誘導TNF-αレベルを低下する能力も検査した。Balb/c雌
マウス（20g）に、100μl生理食塩液中の150μgまたは3
00μgのEX-2、EX-3、EX-5、またはEX-6を、ガバージュ
により投与した。コントロールマウスに100μlの生理食
塩液単独を投与した。１分後に、0.1mgのLPSを腹腔内注
射により投与した。サンプルを採取し、そしてTNF-αレ
ベルを上記の実施例IIIに記載のように測定した。
誘導TNF-αレベルを低下する能力も検査した。Balb/c雌
マウス（20g）に、100μl生理食塩液中の150μgまたは3
00μgのEX-2、EX-3、EX-5、またはEX-6を、ガバージュ
により投与した。コントロールマウスに100μlの生理食
塩液単独を投与した。１分後に、0.1mgのLPSを腹腔内注
射により投与した。サンプルを採取し、そしてTNF-αレ
ベルを上記の実施例IIIに記載のように測定した。
【０１２６】各群（ｎ＝９〜20）のマウスにおける平均
TNF-αレベルを測定し、そしてTNF-αレベルの低下の割
合を算出した。TNF-αレベルは、150μgのEX-3（49
％）；300μgのEX-3（40％）、または300μgのEX-5（44
％）を投与したマウスにおいて、コントロールマウス
（０％）およびEX-2を投与したマウス（26％〜28％）と
比較して、有意に低下した。これらの結果は、本発明の
種々のサイトカイン調節剤が経口投与された場合に有効
であることを示す。
TNF-αレベルを測定し、そしてTNF-αレベルの低下の割
合を算出した。TNF-αレベルは、150μgのEX-3（49
％）；300μgのEX-3（40％）、または300μgのEX-5（44
％）を投与したマウスにおいて、コントロールマウス
（０％）およびEX-2を投与したマウス（26％〜28％）と
比較して、有意に低下した。これらの結果は、本発明の
種々のサイトカイン調節剤が経口投与された場合に有効
であることを示す。
【０１２７】実施例XIII （ラットにおける廃用性体調偏移）この実験は、ラット
における14日の廃用性体調偏移に関連するネガティブな
効果を改良することにおける、サイトカイン調節剤EX-2
の効果を記載する。
における14日の廃用性体調偏移に関連するネガティブな
効果を改良することにおける、サイトカイン調節剤EX-2
の効果を記載する。
【０１２８】成熟雄Sprague-Dawleyラット（355〜365
g）をこの研究に用いた。動物を、標準的なラットケー
ジに個別に入れ、４日間トレッドミルに慣らした。翌
日、ベースラインの尾出血を、次いで最大トレッドミル
ストレス試験を明後日に行った。ストレス試験の翌日、
動物を、適切な処置群およびコントロール群に分け、そ
して動物を懸垂ケージ中にその尾によって懸垂させる
が、これは無重力をシミュレートし、そのため動物を体
調偏移させる。コントロール動物の他の群を、懸垂ケー
ジで用いるものと同様の格子床を有する標準的なラット
ケージ中に入れた。全ての動物を１ケージにつき１匹ず
つ入れ、任意に食餌および水を供給した。体重および食
餌摂取を毎日測定した。動物に、１μg/kg体重または５
μg/kg体重のEX-5（処置）、あるいは１ml/kg体重の生
理食塩液（コントロール）を１日２回腹腔内注射により
投与した。10日目に、全動物を、動物が疲労に達するま
でトレッドミル上でストレス試験した。最大VO2および
走行時間のデータを採取し、懸垂前の結果と比較した。
14日目に、全動物を屠殺し、そして血液、組織、および
器官をさらなる分析のために採取した。全ての手順およ
び試験を、研究者の主観を避けるために盲検で行った。
群間の統計学的有意性（ｐ＜0.05）を、多重比較のため
のStudent-Newman-Keuls検定を用いるANOVAにより評価
した。全てのデータは平均±標準誤差（SE）として報告
される。
g）をこの研究に用いた。動物を、標準的なラットケー
ジに個別に入れ、４日間トレッドミルに慣らした。翌
日、ベースラインの尾出血を、次いで最大トレッドミル
ストレス試験を明後日に行った。ストレス試験の翌日、
動物を、適切な処置群およびコントロール群に分け、そ
して動物を懸垂ケージ中にその尾によって懸垂させる
が、これは無重力をシミュレートし、そのため動物を体
調偏移させる。コントロール動物の他の群を、懸垂ケー
ジで用いるものと同様の格子床を有する標準的なラット
ケージ中に入れた。全ての動物を１ケージにつき１匹ず
つ入れ、任意に食餌および水を供給した。体重および食
餌摂取を毎日測定した。動物に、１μg/kg体重または５
μg/kg体重のEX-5（処置）、あるいは１ml/kg体重の生
理食塩液（コントロール）を１日２回腹腔内注射により
投与した。10日目に、全動物を、動物が疲労に達するま
でトレッドミル上でストレス試験した。最大VO2および
走行時間のデータを採取し、懸垂前の結果と比較した。
14日目に、全動物を屠殺し、そして血液、組織、および
器官をさらなる分析のために採取した。全ての手順およ
び試験を、研究者の主観を避けるために盲検で行った。
群間の統計学的有意性（ｐ＜0.05）を、多重比較のため
のStudent-Newman-Keuls検定を用いるANOVAにより評価
した。全てのデータは平均±標準誤差（SE）として報告
される。
【０１２９】体重は、処置にかかわらず、全ての懸垂し
た動物について有意に減少した。食餌摂取は、群間で有
意な差はなかった。動物の全てをストレス試験に供し、
運動時間および最大VO2を測定した。同様に、酸化酵素
のヒラメ筋クエン酸シンターゼのレベルおよび脛骨の骨
密度を測定した。
た動物について有意に減少した。食餌摂取は、群間で有
意な差はなかった。動物の全てをストレス試験に供し、
運動時間および最大VO2を測定した。同様に、酸化酵素
のヒラメ筋クエン酸シンターゼのレベルおよび脛骨の骨
密度を測定した。
【０１３０】表IIIに要約されるように、EX-2は、廃用
性体調偏移に関連する多くのパラメータに有意な効果を
示す。低用量のEX-2（１または５μg/kg）の１日２回注
射は、運動時間、最大VO2、ヒラメ筋クエン酸シンター
ゼのレベル、および脛骨の骨密度の脱馴化効果を有意に
減少させた。より具体的には、EX-2は、生理食塩液コン
トロールと懸垂した動物との間の減少を比較した場合、
運動時間および最大VO 2の両運動実行パラメータをそれ
ぞれ44％および80％有意に低下させた。ヒラメ筋クエン
酸シンターゼは50％低下した。脛骨の骨密度の測定は、
EX-2が懸垂誘導骨密度の鉱物質除去を50％低下させるこ
とを示した。これらの結果は、本発明のサイトカイン調
節剤の投与が不使用による脱馴化のネガティブ効果を低
減させることを示す。
性体調偏移に関連する多くのパラメータに有意な効果を
示す。低用量のEX-2（１または５μg/kg）の１日２回注
射は、運動時間、最大VO2、ヒラメ筋クエン酸シンター
ゼのレベル、および脛骨の骨密度の脱馴化効果を有意に
減少させた。より具体的には、EX-2は、生理食塩液コン
トロールと懸垂した動物との間の減少を比較した場合、
運動時間および最大VO 2の両運動実行パラメータをそれ
ぞれ44％および80％有意に低下させた。ヒラメ筋クエン
酸シンターゼは50％低下した。脛骨の骨密度の測定は、
EX-2が懸垂誘導骨密度の鉱物質除去を50％低下させるこ
とを示した。これらの結果は、本発明のサイトカイン調
節剤の投与が不使用による脱馴化のネガティブ効果を低
減させることを示す。
【０１３１】
【表３】
【０１３２】実施例XIV （器官保護）この実施例は、２つのラットモデルである
虚血−再潅流モデルおよびサイクロスポリン誘導腎毒性
モデルにおいて腎損傷を妨げることにおけるサイトカイ
ン調節剤EX-2の効果を記載する。
虚血−再潅流モデルおよびサイクロスポリン誘導腎毒性
モデルにおいて腎損傷を妨げることにおけるサイトカイ
ン調節剤EX-2の効果を記載する。
【０１３３】Ａ．虚血−再潅流傷害：これらの実験を、
サイトカイン調節特性を有するペプチドであるEX-2が、
再潅流誘導血管収縮および腎動脈を締め付けることから
生じる糸球体濾過速度の低下を改善させ得るかどうかを
測定するために行った。比較として、NSAIDケトロラク
を同じモデルに用いた。
サイトカイン調節特性を有するペプチドであるEX-2が、
再潅流誘導血管収縮および腎動脈を締め付けることから
生じる糸球体濾過速度の低下を改善させ得るかどうかを
測定するために行った。比較として、NSAIDケトロラク
を同じモデルに用いた。
【０１３４】Sprague-Dawleyラット（250〜300g）にIna
ctin（120mg/kg）で麻酔をかけた。深い麻酔が確実にな
った後、ラットを、ポリエチレン（PE）チューブ（PE 2
40）を用いて気管に、頚静脈、大腿動脈、膀胱（この３
つのカニュレーションについてはPE 50）に、および左
尿管（伸縮性PE 50）にカニュレーションした。カニュ
レーションが完了すると、左腎臓の上に２cmの脇腹の切
開を行い、そして腎盂および血管束（vascular bundl
e）を露出した。左腎動脈の周囲を取りまく組織を動脈
から穏やかに切除した。露出させた腎動脈を、小さな血
管交差クランプを用いて１時間締め付けた。
ctin（120mg/kg）で麻酔をかけた。深い麻酔が確実にな
った後、ラットを、ポリエチレン（PE）チューブ（PE 2
40）を用いて気管に、頚静脈、大腿動脈、膀胱（この３
つのカニュレーションについてはPE 50）に、および左
尿管（伸縮性PE 50）にカニュレーションした。カニュ
レーションが完了すると、左腎臓の上に２cmの脇腹の切
開を行い、そして腎盂および血管束（vascular bundl
e）を露出した。左腎動脈の周囲を取りまく組織を動脈
から穏やかに切除した。露出させた腎動脈を、小さな血
管交差クランプを用いて１時間締め付けた。
【０１３５】締め付けの直前に、EX-2（50または500μg
/kg）、ケトロラク（KETO、１mg/kg）、またはビヒクル
を、静脈内（iv）投与した。締め付け（虚血）の１時間
後、腎動脈または神経のいずれかを損傷することを避け
ることに気を付けて、クランプを穏やかに除去した。3
Ｈ-イヌリン（NEN/Dupont；Wilmington、DE）の注入
（リン酸緩衝化生理食塩液（PBS）中、0.6μCi/ml）
（２ml/時間）を４μCi/時間の一定の速度で開始した。
再潅流の60分後、糸球体濾過速度（GFR）、腎血漿流量
（RPF）、および腎血管抵抗（RVR）を、２回の30分採取
時間で評価した。次いで、腎臓を分析用に取り出した。
擬手術および締め付けたラットを上記の群についてのコ
ントロールとして用いた。対則の腎機能を用いて測定期
間中のラット腎機能の安定性を測定した。結果は、EX-2
が、糸球体濾過速度の上昇および血管抵抗の減少をもた
らすことを示す（表IV）。このデータは、本発明のサイ
トカイン調節剤が、虚血−再潅流に関連する損傷に対し
て腎臓を保護することを示す。
/kg）、ケトロラク（KETO、１mg/kg）、またはビヒクル
を、静脈内（iv）投与した。締め付け（虚血）の１時間
後、腎動脈または神経のいずれかを損傷することを避け
ることに気を付けて、クランプを穏やかに除去した。3
Ｈ-イヌリン（NEN/Dupont；Wilmington、DE）の注入
（リン酸緩衝化生理食塩液（PBS）中、0.6μCi/ml）
（２ml/時間）を４μCi/時間の一定の速度で開始した。
再潅流の60分後、糸球体濾過速度（GFR）、腎血漿流量
（RPF）、および腎血管抵抗（RVR）を、２回の30分採取
時間で評価した。次いで、腎臓を分析用に取り出した。
擬手術および締め付けたラットを上記の群についてのコ
ントロールとして用いた。対則の腎機能を用いて測定期
間中のラット腎機能の安定性を測定した。結果は、EX-2
が、糸球体濾過速度の上昇および血管抵抗の減少をもた
らすことを示す（表IV）。このデータは、本発明のサイ
トカイン調節剤が、虚血−再潅流に関連する損傷に対し
て腎臓を保護することを示す。
【０１３６】
【表４】
【０１３７】Ｂ．シクロスポリン誘導腎毒性：この実験
を、EX-2が、糸球体濾過速度（GFR）および腎血流量の
減少、ならびにサイクロスポリンＡでの免疫抑制処置に
より誘導される体液および電解質のホメオスタシスの不
全を軽減し得るかどうかを確かめるために行った。
を、EX-2が、糸球体濾過速度（GFR）および腎血流量の
減少、ならびにサイクロスポリンＡでの免疫抑制処置に
より誘導される体液および電解質のホメオスタシスの不
全を軽減し得るかどうかを確かめるために行った。
【０１３８】第１の研究では、サイクロスポリンＡ（Cs
A）処置の開始時に240〜290gの体重範囲の雄Sprague-Da
wleyラット（ｎ＝43）を、４つの重量を合わせた群に分
けた。群は、以下のようであった：（１）コントロー
ル：CsAなし、EX-2なし、CsAビヒクル（PBS）経口投与
およびEX-2ビヒクル（これもPBS）腹腔内投与のみでの
処置；（２）CsA：CsAでの処置（PBS中50mg/kgを毎日８
時30分に９日間経口投与した）およびPBS（EX-2ビヒク
ル）の腹腔内注射；（３）CsAおよび50μg：２群と同一
のCsA処置に加えてEX-2での処置（50μg/kgを毎日８時
および17時にEX-2ビヒクルで腹腔内投与した）；および
（４）CsAおよび500μg：２群および３群と同一のCsA処
置、およびEX-2の用量が500μg/kg体重であること以外
は３群と同様のEX-2処置プロトコル。深い麻酔を確認し
た後、ラットを、気管（PE 240）、頚静脈、大腿動脈、
および膀胱（この３つのカニュレーションについてはPE
50）にカニュレーションした。カニュレーションの
後、3Ｈ-イヌリンの注入を、測定期間の50分前に開始し
て、糸球体濾過速度、腎血流量、および腎血漿流量を評
価した。腎血流量をイヌリン抽出法により測定した。研
究の最後に、腎臓を組織学的分析用に取り出した。
A）処置の開始時に240〜290gの体重範囲の雄Sprague-Da
wleyラット（ｎ＝43）を、４つの重量を合わせた群に分
けた。群は、以下のようであった：（１）コントロー
ル：CsAなし、EX-2なし、CsAビヒクル（PBS）経口投与
およびEX-2ビヒクル（これもPBS）腹腔内投与のみでの
処置；（２）CsA：CsAでの処置（PBS中50mg/kgを毎日８
時30分に９日間経口投与した）およびPBS（EX-2ビヒク
ル）の腹腔内注射；（３）CsAおよび50μg：２群と同一
のCsA処置に加えてEX-2での処置（50μg/kgを毎日８時
および17時にEX-2ビヒクルで腹腔内投与した）；および
（４）CsAおよび500μg：２群および３群と同一のCsA処
置、およびEX-2の用量が500μg/kg体重であること以外
は３群と同様のEX-2処置プロトコル。深い麻酔を確認し
た後、ラットを、気管（PE 240）、頚静脈、大腿動脈、
および膀胱（この３つのカニュレーションについてはPE
50）にカニュレーションした。カニュレーションの
後、3Ｈ-イヌリンの注入を、測定期間の50分前に開始し
て、糸球体濾過速度、腎血流量、および腎血漿流量を評
価した。腎血流量をイヌリン抽出法により測定した。研
究の最後に、腎臓を組織学的分析用に取り出した。
【０１３９】第２の研究では、サイクロスポリン処置の
開始時に240〜290gの体重範囲の雄Sprague-Dawleyラッ
ト（ｎ＝31）を、４つの重量を合わせた群に分けた。こ
の研究の時間経過およびプロトコルは以下を除いて第１
の研究と一致した：（１）CsAの日用量を、30mg/kgに減
らし、そして皮下（SC）投与した；および（２）EX-2の
50μg/kg用量を、200μg/kgの１日２回用量に代えた。5
00μg/kg用量のEX-2をこの研究で繰り返した。腎血液動
力学を測定し、そして細胞外液量も評価した。
開始時に240〜290gの体重範囲の雄Sprague-Dawleyラッ
ト（ｎ＝31）を、４つの重量を合わせた群に分けた。こ
の研究の時間経過およびプロトコルは以下を除いて第１
の研究と一致した：（１）CsAの日用量を、30mg/kgに減
らし、そして皮下（SC）投与した；および（２）EX-2の
50μg/kg用量を、200μg/kgの１日２回用量に代えた。5
00μg/kg用量のEX-2をこの研究で繰り返した。腎血液動
力学を測定し、そして細胞外液量も評価した。
【０１４０】CsA処置は、データのばらつきのために、
これらの研究において腎血流量を有意に減少させなかっ
た。しかし、EX-2処置は血流量をコントロールとの差が
ない値に改善した。第２の研究において、細胞外液量
（ECF）を測定する場合、コントロール群および処置群
間でECFの差はなかった（コントロールでは27.6±1.9、
CsAおよびビヒクルでは27.5±1.7、CsA＋200μg/kg EX-
2では26.2±0.9、およびCsA＋500μg/kg EX-2では25.7
±1.4％）。
これらの研究において腎血流量を有意に減少させなかっ
た。しかし、EX-2処置は血流量をコントロールとの差が
ない値に改善した。第２の研究において、細胞外液量
（ECF）を測定する場合、コントロール群および処置群
間でECFの差はなかった（コントロールでは27.6±1.9、
CsAおよびビヒクルでは27.5±1.7、CsA＋200μg/kg EX-
2では26.2±0.9、およびCsA＋500μg/kg EX-2では25.7
±1.4％）。
【０１４１】尿タンパク質排泄も測定し、そしてデータ
は、EX-2処置がGFRの有意な増加にもかかわらずCsA処置
ラットと比較して、尿タンパク質排泄を増加しなかった
ことを示した。EX-2は、CsAおよびビヒクルコントロー
ルと比較して、両方の研究においてGFRを有意に増加さ
せ、そして腎血流量をコントロールと差がない値に回復
させた。EX-2処置の結果としてECFに変化はなく、そし
て糸球体濾過速度に標準化される尿タンパク質排泄を減
少させる傾向があった。２つの実験の結果を図1aおよび
図1bに示し、これは、本発明のサイトカイン調節剤がサ
イクロスポリン誘導腎毒性およびそれにより生じる損傷
を低減させることの証拠を提供する。
は、EX-2処置がGFRの有意な増加にもかかわらずCsA処置
ラットと比較して、尿タンパク質排泄を増加しなかった
ことを示した。EX-2は、CsAおよびビヒクルコントロー
ルと比較して、両方の研究においてGFRを有意に増加さ
せ、そして腎血流量をコントロールと差がない値に回復
させた。EX-2処置の結果としてECFに変化はなく、そし
て糸球体濾過速度に標準化される尿タンパク質排泄を減
少させる傾向があった。２つの実験の結果を図1aおよび
図1bに示し、これは、本発明のサイトカイン調節剤がサ
イクロスポリン誘導腎毒性およびそれにより生じる損傷
を低減させることの証拠を提供する。
【０１４２】実施例XV （ガン化学療法）この実施例は、サイトカイン調節剤で
あるEX-2のガン化学療法剤の腎毒性効果を低減させる効
果を記載する。
あるEX-2のガン化学療法剤の腎毒性効果を低減させる効
果を記載する。
【０１４３】雄Sprague-Dawleyを用いて、シスプラチン
（CDDP）投与後の腎機能へのEX-2の影響を測定した。全
ラットにCDDP（４mg/kg、腹腔内）を投与し、３つの処
置群に分けた（ｎ＝６／群）。群は以下のとおりであっ
た：（１）ビヒクルおよび滅菌PBSの投与、３回／日；
（２）EX-2を５μg/kgの用量で投与、３回／日；および
（３）EX-2の用量が50μg/kgであったこと以外は２群と
同様、３回／日。
（CDDP）投与後の腎機能へのEX-2の影響を測定した。全
ラットにCDDP（４mg/kg、腹腔内）を投与し、３つの処
置群に分けた（ｎ＝６／群）。群は以下のとおりであっ
た：（１）ビヒクルおよび滅菌PBSの投与、３回／日；
（２）EX-2を５μg/kgの用量で投与、３回／日；および
（３）EX-2の用量が50μg/kgであったこと以外は２群と
同様、３回／日。
【０１４４】3Ｈ-イヌリンの注入（PBS中、0.6μCi/m
l）（２ml/時間）を、手術調製期間の最後で開始した。
連続注入を腎機能測定の60分前に開始し、研究の最後ま
で維持した。糸球体濾過を、２回の30分期間においてイ
ヌリンクリアランス法により評価し、そして腎血流量
（RBF）および腎血漿流量（RPF）を、２回目のGFR測定
期間の最後にサンプリングした左腎臓の腎静脈血からの
イヌリン抽出法（動脈対腎静脈イヌリン濃度）により測
定した。尿排出量も、尿流量および水の分割排泄（frac
tional excretion）の両方を測定するためにモニターし
た。尿電解質（Na+およびK+）濃度を炎光光度法（Model
51 Ca、Bacharch, Inc.；Pittsburgh、PA）により分析
し、そして尿タンパク質濃度を測定した。測定期間の最
後に、腎臓を組織学的分析用に取り出した。３つのCDDP
投与したラット（CDDPを４mg/kgで腹腔内）における腎
機能へのEX-2の種々の処置用量の影響を表Ｖに要約す
る。データは、本発明のサイトカイン調節剤が、糸球体
濾過速度、腎血漿流量、および腎血流量を増加させ、そ
れによりガン化学療法剤の腎毒性を低減させることを示
す。
l）（２ml/時間）を、手術調製期間の最後で開始した。
連続注入を腎機能測定の60分前に開始し、研究の最後ま
で維持した。糸球体濾過を、２回の30分期間においてイ
ヌリンクリアランス法により評価し、そして腎血流量
（RBF）および腎血漿流量（RPF）を、２回目のGFR測定
期間の最後にサンプリングした左腎臓の腎静脈血からの
イヌリン抽出法（動脈対腎静脈イヌリン濃度）により測
定した。尿排出量も、尿流量および水の分割排泄（frac
tional excretion）の両方を測定するためにモニターし
た。尿電解質（Na+およびK+）濃度を炎光光度法（Model
51 Ca、Bacharch, Inc.；Pittsburgh、PA）により分析
し、そして尿タンパク質濃度を測定した。測定期間の最
後に、腎臓を組織学的分析用に取り出した。３つのCDDP
投与したラット（CDDPを４mg/kgで腹腔内）における腎
機能へのEX-2の種々の処置用量の影響を表Ｖに要約す
る。データは、本発明のサイトカイン調節剤が、糸球体
濾過速度、腎血漿流量、および腎血流量を増加させ、そ
れによりガン化学療法剤の腎毒性を低減させることを示
す。
【０１４５】
【表５】
【０１４６】実施例XVI （酸化窒素およびサイトカインにより媒介される疾病の
処置）この実施例は、誘導性酸化窒素シンターゼ（iNO
S）を阻害すること、ならびにストレプトゾトシン（str
eptozotozin）誘導糖尿病においておよび糸球体腎炎の
減少したアルブミンレベルにおいてグルコースを減少さ
せることについての、EX-2の効果を記載する。
処置）この実施例は、誘導性酸化窒素シンターゼ（iNO
S）を阻害すること、ならびにストレプトゾトシン（str
eptozotozin）誘導糖尿病においておよび糸球体腎炎の
減少したアルブミンレベルにおいてグルコースを減少さ
せることについての、EX-2の効果を記載する。
【０１４７】Ａ．誘導性酸化窒素シンターゼ（iNOS）：
ラットの大動脈平滑筋細胞（RASMC）を、Gelsterfer
ら、Circ. Res. 62:749-756 (1988)（これは参考として
本明細書中に援用されている）の既に公表されている手
順を用いて雄ラット（325〜350g）から単離した。細胞
を、マウス抗α-アクチン抗体および抗マウスIgG FITC
複合体を用いて、抗α-アクチンについての間接免疫蛍
光染色により陽性のものを平滑筋細胞として同定した。
細胞を、T-75組織培養フラスコ（Corning Delbelco's G
lass, Inc.；Corning、NY）中、50％F12ならびに10％ウ
シ血清、0.2g/lのL-グルタミン、ペニシリン（100U/m
l）、およびストレプトマイシン（0.1mg/ml)を追加した
50％ダルベッコの改変イーグル培地（DMEM）で培養させ
た。
ラットの大動脈平滑筋細胞（RASMC）を、Gelsterfer
ら、Circ. Res. 62:749-756 (1988)（これは参考として
本明細書中に援用されている）の既に公表されている手
順を用いて雄ラット（325〜350g）から単離した。細胞
を、マウス抗α-アクチン抗体および抗マウスIgG FITC
複合体を用いて、抗α-アクチンについての間接免疫蛍
光染色により陽性のものを平滑筋細胞として同定した。
細胞を、T-75組織培養フラスコ（Corning Delbelco's G
lass, Inc.；Corning、NY）中、50％F12ならびに10％ウ
シ血清、0.2g/lのL-グルタミン、ペニシリン（100U/m
l）、およびストレプトマイシン（0.1mg/ml)を追加した
50％ダルベッコの改変イーグル培地（DMEM）で培養させ
た。
【０１４８】１〜５継代中の細胞を以下のビヒクル、LP
S（１μg/ml）、IL-1β（10 U/ml）、またはTNF-α（10
0 U/ml）のうちの１つで６時間前処置した。同様の群に
おいて、EX-2の0.1または１μMを、LPS、IL-1β、また
はTMF-αの添加の10分前に加えた。６時間後、細胞をEa
rleの平衡化塩類溶液で洗浄し、100μMのL-ニトロアル
ギニンメチルエステル（L-NAME）のビヒクルとともに30
分間インキュベートした。１mM L-アルギニンの存在ま
たは非存在下において、cGMPの蓄積を、0.3mM 3-イソブ
チル-1-メチルキサンチン（IBMX）への曝露後に測定し
た。次いで、培地を迅速に吸引し、500μlの0.1N HClを
各ウエルに添加して反応を停止し、cGMPを抽出した。30
分後、HCl抽出物を採取し、そして1.0Ｎの熱NaOHを加
え、ゴム冠ポリスマンを用いてウエルから掻き取ること
によって、細胞残余物をウエルから取り出した。HCl抽
出物をRIAによりcGMPについて分析し、NaOH可溶化細胞
残余物をタンパク質測定用に用いた。
S（１μg/ml）、IL-1β（10 U/ml）、またはTNF-α（10
0 U/ml）のうちの１つで６時間前処置した。同様の群に
おいて、EX-2の0.1または１μMを、LPS、IL-1β、また
はTMF-αの添加の10分前に加えた。６時間後、細胞をEa
rleの平衡化塩類溶液で洗浄し、100μMのL-ニトロアル
ギニンメチルエステル（L-NAME）のビヒクルとともに30
分間インキュベートした。１mM L-アルギニンの存在ま
たは非存在下において、cGMPの蓄積を、0.3mM 3-イソブ
チル-1-メチルキサンチン（IBMX）への曝露後に測定し
た。次いで、培地を迅速に吸引し、500μlの0.1N HClを
各ウエルに添加して反応を停止し、cGMPを抽出した。30
分後、HCl抽出物を採取し、そして1.0Ｎの熱NaOHを加
え、ゴム冠ポリスマンを用いてウエルから掻き取ること
によって、細胞残余物をウエルから取り出した。HCl抽
出物をRIAによりcGMPについて分析し、NaOH可溶化細胞
残余物をタンパク質測定用に用いた。
【０１４９】雄Sprague-Dawleyラットに55mg/kgのペン
トバルビタールの腹腔内投与により麻酔をかけた。カテ
ーテルを、血液の回収および薬物投与のために、それぞ
れ頚動脈および頚静脈中に挿入した。EX-2または生理食
塩液を１つの群の６匹のラットに与えた。１時間後、ラ
ットはまだ麻酔下であったが、血液をヘパリン処置した
シリンジ中に回収し、血漿を遠心分離により得た。RASM
Cを、コントロールまたはEX-2処置動物からの血漿とと
もにインキュベートし、そしてLPSまたはIL-1βによるI
NOSの誘導を阻害する血漿成分の能力を上記のように測
定した。
トバルビタールの腹腔内投与により麻酔をかけた。カテ
ーテルを、血液の回収および薬物投与のために、それぞ
れ頚動脈および頚静脈中に挿入した。EX-2または生理食
塩液を１つの群の６匹のラットに与えた。１時間後、ラ
ットはまだ麻酔下であったが、血液をヘパリン処置した
シリンジ中に回収し、血漿を遠心分離により得た。RASM
Cを、コントロールまたはEX-2処置動物からの血漿とと
もにインキュベートし、そしてLPSまたはIL-1βによるI
NOSの誘導を阻害する血漿成分の能力を上記のように測
定した。
【０１５０】放射性リガンド（125Ｉ-スクシニルcGMP-
チロシンメチルエステル）を、HunterおよびGreenwood
Nature、94:495-496 (1962)（これは本明細書中に参考
として援用されている）の方法により、キャリアを含ま
ない125Ｉを用いて調製した。ヨウ化反応産物を、Patel
およびLindent、Anal. Biochem. 168:417-425 (1988)
（これは参考として本明細書中に援用されている）の手
順に従ってRP-HPLCにより分離した。cGMPに対するモノ
クローナル抗体を用いて、Brookerら、Science 191:270
-276 (1976)（これは本明細書中に参考として援用され
ている）に開示されるようなGammaflowTM自動RIAシステ
ムで、RIAを行った。cGMPの標準ストック溶液（20μM）
を、0.1N HCl中に調製し、そしてこの溶液の吸光度を日
常的に分光光度計（Shimadzu、UV 160U）によりモニタ
ーした。標準希釈物（0.63〜80nM）をストック溶液から
作成した。cGMPを含むHCl抽出物を直接的にRIAに用い
た。結果は以下の表Ｖに要約され、そして、EX-2が誘導
性酸化窒素シンターゼを阻害し得、それによりNO産生の
レベルおよびそれに関連するネガティブな効果（例え
ば、糖尿病または糸球体腎炎）を低減し得ることを示
す。
チロシンメチルエステル）を、HunterおよびGreenwood
Nature、94:495-496 (1962)（これは本明細書中に参考
として援用されている）の方法により、キャリアを含ま
ない125Ｉを用いて調製した。ヨウ化反応産物を、Patel
およびLindent、Anal. Biochem. 168:417-425 (1988)
（これは参考として本明細書中に援用されている）の手
順に従ってRP-HPLCにより分離した。cGMPに対するモノ
クローナル抗体を用いて、Brookerら、Science 191:270
-276 (1976)（これは本明細書中に参考として援用され
ている）に開示されるようなGammaflowTM自動RIAシステ
ムで、RIAを行った。cGMPの標準ストック溶液（20μM）
を、0.1N HCl中に調製し、そしてこの溶液の吸光度を日
常的に分光光度計（Shimadzu、UV 160U）によりモニタ
ーした。標準希釈物（0.63〜80nM）をストック溶液から
作成した。cGMPを含むHCl抽出物を直接的にRIAに用い
た。結果は以下の表Ｖに要約され、そして、EX-2が誘導
性酸化窒素シンターゼを阻害し得、それによりNO産生の
レベルおよびそれに関連するネガティブな効果（例え
ば、糖尿病または糸球体腎炎）を低減し得ることを示
す。
【０１５１】Ｂ．誘導された糖尿病 雄Sprague-Dawleyラットに65mg/kgのストレプトゾトシ
ン（STZ）を尾静脈を介して静脈内投与した。ラットを
２つの群に分けた。第１群にはEX-2、150μg/kgを８時
間毎に72時間投与し、そして第２群はコントロールであ
った。血液サンプルを、最初の72時間については８時間
毎に、次いで、観察期間の最後までは12時間または24時
間毎エーテル麻酔下で回収した。血漿サンプルを、グル
コースアッセイキット（Trinder、Sigma Chemical C
o.）を用いてグルコースについてアッセイした。以下の
表VIに示すように、EX-2は血中グルコースレベルの72％
低下をもたらす。
ン（STZ）を尾静脈を介して静脈内投与した。ラットを
２つの群に分けた。第１群にはEX-2、150μg/kgを８時
間毎に72時間投与し、そして第２群はコントロールであ
った。血液サンプルを、最初の72時間については８時間
毎に、次いで、観察期間の最後までは12時間または24時
間毎エーテル麻酔下で回収した。血漿サンプルを、グル
コースアッセイキット（Trinder、Sigma Chemical C
o.）を用いてグルコースについてアッセイした。以下の
表VIに示すように、EX-2は血中グルコースレベルの72％
低下をもたらす。
【０１５２】Ｃ．遺伝性糖尿病：雄Zuckerラットは、例
えば、Wardら、Ann. Clin. Lab. Sci.、24:266-277 (19
94)（これは本明細書中に参考として援用されている）
に記載されるような、遺伝性インスリン非依存性糖尿病
（NIDDM）の十分に樹立されたラットモデルである。18
匹の雄Zuckerラットを用いて慢性疾患であるNIDDMへのE
X-2の効果を研究した。ラットを２つの群に配し、生理
食塩液または25μg/kgのEX-2のいずれかを約３カ月間８
時間毎に投与した。血液サンプルを、尾のクリップによ
り採取し、そして尿サンプルを、24時間代謝ケージ中に
動物を入れることにより採取した。血漿インスリンをRI
Aキット（Amersham Life Sciences、Arlington Height
s、IL）を用いてアッセイした。尿タンパク質を市販の
タンパク質アッセイキット（Coomassie Plus、Pierce、
Rockford、IL）を用いてアッセイした。体重測定をMett
ler Toledo上載天秤を用いて行った。表VIに示すよう
に、EX-2は、インスリンの39％低下、尿タンパク質の87
％低下、および体重の約100グラム減少（32％低下；実
施例XXを参照のこと）をもたらした。
えば、Wardら、Ann. Clin. Lab. Sci.、24:266-277 (19
94)（これは本明細書中に参考として援用されている）
に記載されるような、遺伝性インスリン非依存性糖尿病
（NIDDM）の十分に樹立されたラットモデルである。18
匹の雄Zuckerラットを用いて慢性疾患であるNIDDMへのE
X-2の効果を研究した。ラットを２つの群に配し、生理
食塩液または25μg/kgのEX-2のいずれかを約３カ月間８
時間毎に投与した。血液サンプルを、尾のクリップによ
り採取し、そして尿サンプルを、24時間代謝ケージ中に
動物を入れることにより採取した。血漿インスリンをRI
Aキット（Amersham Life Sciences、Arlington Height
s、IL）を用いてアッセイした。尿タンパク質を市販の
タンパク質アッセイキット（Coomassie Plus、Pierce、
Rockford、IL）を用いてアッセイした。体重測定をMett
ler Toledo上載天秤を用いて行った。表VIに示すよう
に、EX-2は、インスリンの39％低下、尿タンパク質の87
％低下、および体重の約100グラム減少（32％低下；実
施例XXを参照のこと）をもたらした。
【０１５３】
【表６】
【０１５４】Ｄ．糸球体腎炎：雄Sprague-Dawleyラット
（体重194〜248g）を、フロイントの完全アジュバント
（Sigma Chemical Co.）中の１mgの正常ウサギIgG（Sig
ma Chemical Co.）の皮下注射によって免疫した。EX-2
を、実験期間全体にわたり１日当たり３回（１回の注射
につき100μg/kg）投与した。７日後、ラットに、陰茎
背静脈を介して静脈内に1.5mlの腎毒性血清を注射し
た。尿、血漿、および血清を、腎毒性血清注射の前、注
射後４、６、24、48、および96時間に採取した。全ラッ
トは、24時間アルブミン排出により示されるように、４
時間から96時間まで漸増するタンパク尿を有する急性糸
球体腎炎を発生した。タンパク尿を免疫電気泳動により
測定した。結果は表VIの下方に要約され、そして、本発
明のサイトカイン調節剤が、糸球体腎炎に見られるアル
ブミンレベルの上昇を緩和することを示し、これは糖尿
病状態の改善の徴候である。
（体重194〜248g）を、フロイントの完全アジュバント
（Sigma Chemical Co.）中の１mgの正常ウサギIgG（Sig
ma Chemical Co.）の皮下注射によって免疫した。EX-2
を、実験期間全体にわたり１日当たり３回（１回の注射
につき100μg/kg）投与した。７日後、ラットに、陰茎
背静脈を介して静脈内に1.5mlの腎毒性血清を注射し
た。尿、血漿、および血清を、腎毒性血清注射の前、注
射後４、６、24、48、および96時間に採取した。全ラッ
トは、24時間アルブミン排出により示されるように、４
時間から96時間まで漸増するタンパク尿を有する急性糸
球体腎炎を発生した。タンパク尿を免疫電気泳動により
測定した。結果は表VIの下方に要約され、そして、本発
明のサイトカイン調節剤が、糸球体腎炎に見られるアル
ブミンレベルの上昇を緩和することを示し、これは糖尿
病状態の改善の徴候である。
【０１５５】要約として、上記データは、本発明のサイ
トカイン調節剤が誘導性酸化窒素シンターゼレベルを阻
害し、それによりNOの産生を減少させることを示す。サ
イトカイン調節剤はまた、糖尿病、糸球体腎炎、アテロ
ーム硬化症、および多発性硬化症のような酸化窒素が組
織損傷の一因になる特定の疾病の処置に有用である。
トカイン調節剤が誘導性酸化窒素シンターゼレベルを阻
害し、それによりNOの産生を減少させることを示す。サ
イトカイン調節剤はまた、糖尿病、糸球体腎炎、アテロ
ーム硬化症、および多発性硬化症のような酸化窒素が組
織損傷の一因になる特定の疾病の処置に有用である。
【０１５６】実施例XVII （マウスにおけるIL-10のレベルの上昇）この実施例
は、哺乳動物におけるIL-10のレベルの上昇におけるEX-
2の効果を、例証実施例として、EX-2投与後のマウス血
漿での上昇を用いて記載する。
は、哺乳動物におけるIL-10のレベルの上昇におけるEX-
2の効果を、例証実施例として、EX-2投与後のマウス血
漿での上昇を用いて記載する。
【０１５７】図２は、マウス血漿中でも示された、EX-2
のIL-10誘導効果を示す。EX-2を、1.0μg/マウス〜100
0.0μg/マウスの範囲の用量で、19匹のマウスに腹腔内
投与した。結果は、5.0pg/ml〜23.0pg/mlの範囲のIL-10
レベルにおいて用量依存的上昇を示した。
のIL-10誘導効果を示す。EX-2を、1.0μg/マウス〜100
0.0μg/マウスの範囲の用量で、19匹のマウスに腹腔内
投与した。結果は、5.0pg/ml〜23.0pg/mlの範囲のIL-10
レベルにおいて用量依存的上昇を示した。
【０１５８】実施例XVIII （ヒトにおけるIL-10のレベルの上昇）この実施例は、
ヒト被験体におけるサイトカイン調節剤EX-2のサイトカ
イン増強効果を示す。
ヒト被験体におけるサイトカイン調節剤EX-2のサイトカ
イン増強効果を示す。
【０１５９】EX-2を、８名の健康な男性ボランティアに
200または500μg/kgのいずれかの用量で静脈内注入によ
り投与した。血漿IL-10レベルは、200μg/kgのEX-2の投
与後、４名中２名のボランティアで上昇し（図3a）、そ
して500μg/kgのEX-2の投与後、４名中４名のボランテ
ィアで上昇した（図3b）。結果は、200μg/kgのEX-2を
受けた被験者においてIL-10の85％上昇を、そして500μ
g/kgのEX-2を受けた被験者において230％の上昇を示
す。
200または500μg/kgのいずれかの用量で静脈内注入によ
り投与した。血漿IL-10レベルは、200μg/kgのEX-2の投
与後、４名中２名のボランティアで上昇し（図3a）、そ
して500μg/kgのEX-2の投与後、４名中４名のボランテ
ィアで上昇した（図3b）。結果は、200μg/kgのEX-2を
受けた被験者においてIL-10の85％上昇を、そして500μ
g/kgのEX-2を受けた被験者において230％の上昇を示
す。
【０１６０】実施例XIX （ヒトにおいてガン化学療法により生じる有害な副作用
の処置）この実施例は、サイトカインの産生を誘導かつ
増強するシスプラチン、Taxol、またはAdriamycinを用
いるガン化学療法に関連する有害な副作用を緩和するこ
とにおける、EX-2のようなサイトカイン調節剤の有用性
を記載する。
の処置）この実施例は、サイトカインの産生を誘導かつ
増強するシスプラチン、Taxol、またはAdriamycinを用
いるガン化学療法に関連する有害な副作用を緩和するこ
とにおける、EX-2のようなサイトカイン調節剤の有用性
を記載する。
【０１６１】例えば、EX-2は、化学療法を行っているま
たは化学療法を行いかけている患者に、静脈内注入によ
り投与され得る。例えば、患者は、シスプラチン、Taxo
l、Adriamycin、または他の適切な化学療法剤、あるい
は放射線処置を受けるように予定され得る。EX-2は、約
１〜1000μg/kgの用量で、好ましくは500μg/kgの注入
用量で投与され得る。用量は、連続点滴によりまたは断
続的なボーラスにより投与され得る。
たは化学療法を行いかけている患者に、静脈内注入によ
り投与され得る。例えば、患者は、シスプラチン、Taxo
l、Adriamycin、または他の適切な化学療法剤、あるい
は放射線処置を受けるように予定され得る。EX-2は、約
１〜1000μg/kgの用量で、好ましくは500μg/kgの注入
用量で投与され得る。用量は、連続点滴によりまたは断
続的なボーラスにより投与され得る。
【０１６２】実施例XX （サイトカイン調節剤の投与による体重の減少）この実
施例は、サイトカイン調節剤の投与が被験体の体重の減
少を引き起こし得ることを示す。
施例は、サイトカイン調節剤の投与が被験体の体重の減
少を引き起こし得ることを示す。
【０１６３】成熟Zucker脂肪過多ラット（fa/fa；325〜
350g）または非肥満Zuckerラット（Fa/+；250〜275g）
のそれぞれを２つの群に分けた。fa/faおよびFa/+ラッ
トのそれぞれの１つの群は250μg/kgのEX-2を、１日３
回、86日間、次いで１日２回の処置をさらに29日間腹腔
内（ip）注射により受けた。fa/faおよびFa/+ラットの
他の群は、同じスケジュールで生理食塩液を受けた。
350g）または非肥満Zuckerラット（Fa/+；250〜275g）
のそれぞれを２つの群に分けた。fa/faおよびFa/+ラッ
トのそれぞれの１つの群は250μg/kgのEX-2を、１日３
回、86日間、次いで１日２回の処置をさらに29日間腹腔
内（ip）注射により受けた。fa/faおよびFa/+ラットの
他の群は、同じスケジュールで生理食塩液を受けた。
【０１６４】EX-2の投与は、fa/faおよびFa/+ラットの
体重増加における有意な減少を引き起こした（図４を参
照のこと）。具体的には、生理食塩液処置fa/faラット
は105日の処置の間に約360g増加したが、EX-2処置fa/fa
ラットは275gのみの増加であり、これは体重増加の24％
の減少を示す。明らかに、この体重の減少は精巣上体の
脂肪パッド重量の減少に相関し、これは、やせた筋肉量
ではなく、脂肪重量がEX-2の投与により減少することを
示した。Fa/+ラットでは、体重増加量の低下はより適度
であったが、さらに、やせた筋肉量よりもむしろ脂肪量
に相関していた。これらの結果は、サイトカイン調節剤
が、脂肪の蓄積を減少させることにより、正常および肥
満の被験体において体重増加量を低下させ得ることを示
す。
体重増加における有意な減少を引き起こした（図４を参
照のこと）。具体的には、生理食塩液処置fa/faラット
は105日の処置の間に約360g増加したが、EX-2処置fa/fa
ラットは275gのみの増加であり、これは体重増加の24％
の減少を示す。明らかに、この体重の減少は精巣上体の
脂肪パッド重量の減少に相関し、これは、やせた筋肉量
ではなく、脂肪重量がEX-2の投与により減少することを
示した。Fa/+ラットでは、体重増加量の低下はより適度
であったが、さらに、やせた筋肉量よりもむしろ脂肪量
に相関していた。これらの結果は、サイトカイン調節剤
が、脂肪の蓄積を減少させることにより、正常および肥
満の被験体において体重増加量を低下させ得ることを示
す。
【０１６５】他の実験では、fa/faラットは、0.5〜10mg
/kgのEX-2を、１日２回、14日間（１〜20mg/日）受け
た。体重増加量の低下率を各群で観察した。さらに、20
mg EX-2/日で処置したラットは体重の約10％減少を示し
た。この体重の消失は、コントロールと比較して、EX-2
処置ラットによる消費の増加に相関した。これらの結果
は、サイトカイン調節剤が被験体の体重を減少させるに
有用であることを示す。
/kgのEX-2を、１日２回、14日間（１〜20mg/日）受け
た。体重増加量の低下率を各群で観察した。さらに、20
mg EX-2/日で処置したラットは体重の約10％減少を示し
た。この体重の消失は、コントロールと比較して、EX-2
処置ラットによる消費の増加に相関した。これらの結果
は、サイトカイン調節剤が被験体の体重を減少させるに
有用であることを示す。
【０１６６】上に提供した実施例を参照して本発明を記
載したが、種々の改変が本発明から逸脱することなく当
業者により行われ得ることが理解されるべきである。従
って、本発明は上記の請求の範囲に述べられる。
載したが、種々の改変が本発明から逸脱することなく当
業者により行われ得ることが理解されるべきである。従
って、本発明は上記の請求の範囲に述べられる。
【図１】 図1aおよび1bは、サイトカイン調節剤がサイ
クロスポリン誘導腎毒性によって起こる糸球体濾過率の
減少を有効に抑制することを示す。
クロスポリン誘導腎毒性によって起こる糸球体濾過率の
減少を有効に抑制することを示す。
【図２】 図２は、EX-2がマウス血漿中のIL-10レベル
を上昇させることを示す。
を上昇させることを示す。
【図３】 図3aおよび3bは、EX-2がヒト血漿中のIL-10
レベルを誘導することを示す。
レベルを誘導することを示す。
【図４】 図４は、EX-2で処置した肥満ラット(fa/fa)
および正常ラット(Fa/+)の体重を示す。
および正常ラット(Fa/+)の体重を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ // Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＡ Ａ６１Ｋ 45/00 ＡＤＵ ＡＢＥ 37/02 ＡＢＡ ＡＢＮ ＡＢＥ ＡＣＤ ＡＢＮ ＡＣＶ ＡＣＤ ＡＤＤ ＡＣＶ ＡＤＰ ＡＤＤ ＡＧＺ ＡＤＰ 45/00 ＡＤＵ ＡＧＺ (71)出願人 598021513 Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ２，Ｒｏｏｍ 138, 3550 Ｇｅｎｅｒａｌ Ａｔｏｍｉｃｓ Ｃｏｕｒｔ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａ ｌｉｆｏｒｎｉａ 92121，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ (72)発明者 ビバリー イー． ガーテン アメリカ合衆国 カリフォルニア 92122, サン ディエゴ， ガールストランド ストリート 6114 (72)発明者 アリー アンダビリビー アメリカ合衆国 カリフォルニア 92122, サン ディエゴ， トスカナ ウェイ ナンバーエフ−115 5340 (72)発明者 アマレシュ バス アメリカ合衆国 カリフォルニア 92129, サン ディエゴ， ビア ホンドナド ナンバービー 15058 (72)発明者 パトリック ファーガン アメリカ合衆国 カリフォルニア 92025, エスコンディード， ガム トリー グ レン 3738 (72)発明者 リチャード エイ． ホーテン アメリカ合衆国 カリフォルニア 92014, デル マー， ランチョ ビエジョ 4939 (72)発明者 コスタス シー． ローリス アメリカ合衆国 カリフォルニア 92007, カーディフ バイ ザ シー， ラグー ン ビュー ドライブ 2363 (72)発明者 ポール オムホルト アメリカ合衆国 カリフォルニア 92128, サン ディエゴ， シャロン レーン 11988 (72)発明者 マーク ジェイ． スート アメリカ合衆国 カリフォルニア 92121, サン ディエゴ， ピクラス ストリー ト 12465 (72)発明者 パトリシア エイ． ウェーバー アメリカ合衆国 カリフォルニア 92119, サン ディエゴ， ベル ブルフ アベ ニュー 6556 (72)発明者 ロナルド アール． テューティル アメリカ合衆国 カリフォルニア 92025, エスコンディード， ビスタ デル セ ムブラド 2704
Claims (1)
- 【請求項１】X5-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X3で表されるペプ
チド：ここで、X5は、HまたはCOCH3であり； 【化１】 ここで、Yは、O、H2またはSであり；R1は、H、COCH3、C
2H5、CH2Ph、COPh、COOCH2PhまたはCOO-t-ブチルであ
り；R5は、OH、OR3、NH2、SH、NHCH3またはNHCH2Phであ
り；R6は、HまたはR3であり；そしてR3は、１個〜６個
の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキル基、あるい
は３個〜６個の炭素原子を有する環状アルキル基であ
り；そして、ここで「Ph」はC6H5であり；そして「ｎ」
は、０、１、２または３である。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/400,983 US5786332A (en) | 1995-03-06 | 1995-03-06 | Cytokine restraining agents and methods of use in pathologies and conditions associated with altered cytokine levels |
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| US08/400.983 | 1995-09-12 | ||
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| US08/484.262 | 1995-09-12 | ||
| US08/527,056 US5726156A (en) | 1995-03-06 | 1995-09-12 | Cytokine regulatory agents and methods of use in pathologies and conditions associated with altered cytokine levels |
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|---|---|---|---|
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| JP10144645A Withdrawn JPH10330397A (ja) | 1995-03-06 | 1998-05-26 | サイトカイン調節剤およびサイトカインレベルの変化に関連する病状および状態における使用方法 |
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| JP8527041A Expired - Fee Related JP2810240B2 (ja) | 1995-03-06 | 1996-03-05 | サイトカイン調節剤およびサイトカインレベルの変化に関連する病状および状態における使用方法 |
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