JPH10337191A - インターロイキン−１ベータ変換酵素様アポトーシス性プロテアーゼ１０ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 機能的ゲノミックスは生物情報学の種々の手
段に依存するところが多く、現在入手可能な多くの分子
生物学データベースから目的とする遺伝子配列を同定す
るものである。したがって、薬物の開発等には、さらな
る遺伝子およびその関連するポリペプチド／タンパク質
を同定し、特徴付ける必要がある。 【解決手段】 本発明は、（ｉ）配列番号２のアミノ酸
配列と、配列番号２の全長にわたって、少なくとも：
（ａ）７０％の同一性；（ｂ）８０％の同一性；（ｃ）
９０％の同一性；または（ｄ）９５％の同一性を有する
群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる単離された
ポリペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を有
してなる単離されたポリペプチド；または（ｉｉｉ）配
列番号２のアミノ酸配列である単離されたポリペプチド
からなる群より選択される単離されたポリペプチドを提
供するものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、１９９７年３月２７日出願の、
米国仮特許出願６０／０４２０３０の利益を請求するも
のである。

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリペプチドおよびかかるポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドに、治療および治療にて潜在的に有用で
あるアゴニスト、アンタゴニストおよび／または阻害剤
であるかもしれない化合物の同定におけるそれらの使用
に、およびかかるポリペプチドおよびポリヌクレオチド
の生産に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】薬剤
開発プロセスは、「機能的ゲノミックス」、すなわち、
高処理性ゲノム−または遺伝子−を基礎とする生物学を
取り入れることで、近年、根本的な変革を受けている。
この方法は、「位置的クローニング（positional cloni
ng）」を基礎とする以前の方法に速やかに取って代わる
ものである。生物学的機能である表現型または遺伝病が
同定され、その遺伝地図の位置に基づいて、逆に関与す
る遺伝子を追跡することもできる。機能的ゲノミックス
は生物情報学の種々の手段に依存するところが多く、現
在入手可能な多くの分子生物学データベースから目的と
する遺伝子配列を同定するものである。引き続き、薬剤
開発のための標的として、さらなる遺伝子およびその関
連するポリペプチド／タンパク質を同定し、特徴付ける
必要がある。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明はICE‐LAP‐10、
特にICE‐LAP‐10ポリペプチドおよびICE‐LAP‐10ポリ
ヌクレオチド、組換え材料およびその製法に関する。も
う一つ別の態様において、本発明は、とりわけ、癌、炎
症、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、慢性関節リウマ
チ、CNS炎症、小脳変性、アルツハイマー病、パーキン
ソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、頭部障害
損傷、および他の神経学的異常症、敗血症性ショック、
敗血症、卒中、骨粗鬆症、骨関節症、虚血性再潅流障
害、心血管疾患、腎臓病、肝臓病、虚血性障害、心筋梗
塞、低血圧、高血圧、AIDS、骨髄異形成症候群および他
の血液異常症、再生不能性貧血、男性型脱毛症、および
細菌性、真菌性、原生動物性およびウイルス性感染（以
下、「疾患」という）の治療を含め、そのようなポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関する。さ
らなる態様において、本発明は、本発明により得られる
材料を用いてアゴニストおよびアンタゴニスト／阻害剤
を同定する方法、およびICE‐LAP‐10の平衡異常に付随
する症状をその同定した化合物で治療する方法に関す
る。さらに別の態様において、本発明は不適当なICE‐L
AP‐10活性またはレベルに付随する疾患を検出するため
の診断アッセイに関する。

【０００４】

【発明の実施の形態】一の態様において、本発明はICE
‐LAP‐10ポリペプチドに関する。かかるペプチドは、
配列番号2のアミノ酸配列と、配列番号2の全長にわたっ
て、少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも
８０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９０％の
同一性、その上より好ましくは少なくとも９５％の同一
性、最も好ましくは少なくとも９７−９９％の同一性を
有するアミノ酸配列を有してなる単離されたポリペプチ
ドを包含する。このようなポリペプチドは配列番号２の
アミノ酸を有してなるものを包含する。

【０００５】本発明のさらなるペプチドは、アミノ酸配
列が、配列番号２のアミノ酸配列と、配列番号２の全長
にわたって、少なくとも７０％の同一性、好ましくは少
なくとも８０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも
９０％の同一性、その上より好ましくは少なくとも９５
％の同一性、最も好ましくは少なくとも９７−９９％の
同一性を有する単離されたポリペプチドを包含する。こ
のようなポリペプチドは配列番号２のポリペプチドを包
含する。

【０００６】本発明のさらなるペプチドは、配列番号１
に含まれる配列を有してなるポリヌクレオチドによりコ
ードされる単離されたポリペプチドを包含する。本発明
のポリペプチドはカスパーゼ（caspase）科のポリペプ
チドのメンバーであると考えられる。最近、インターロ
イキン−１β変換酵素（ICE）がプロ−IL−１βの成熟
かつ活性なIL−１βへの付着に関与し、さらに生物が望
ましくない細胞を排除する工程である、プログラムされ
た細胞死（またはアポトーシス）に関与することが見出
されたため、したがって本発明のペプチドは関心のある
ものである。ICEの哺乳動物相同体は多数あり、それら
は一緒になってICE／ced−３またはカスパーゼ科を構成
する。本発明は、構造的にシステインプロテアーぜのIC
E／ced−３またはカスパーゼ科に関連付けられるICE‐L
AP‐10に関するものである。

【０００７】セノルハブディティス・エレガンス（Caen
orhabditis elegans）線虫において、プログラムされた
細胞死の遺伝的経路が同定されている（Ellis,R.E.ら、
Annu. Rev. Cell Biol.、７：６６３−６９８（１９９
１））。細胞がセノルハブディティス・エレガンス（C.
elegans）にてプログラムされた細胞死に付されるに
は、２種の遺伝子、ced−３およびced−４が不可欠であ
る（Ellis,H.M.およびHorvitz, H.R.、Cell，４４：８
１７−８２９（１９８６））。これら２種の遺伝子の機
能を排除する劣性変異は、セノルハブディティス・エレ
ガンスの成長の間の正常なプログラムされた細胞死を妨
げる。脊椎動物におけるCed−３タンパク質に対する既
知のカウンターパートがICEである。ced−３とICEの間
の全体のアミノ酸同一性は２８％であり、１１５個のア
ミノ酸の領域（ced−３の２４６−３６０およびICEの１
６４−２７８の残基）で最高の同一性を示す（４３
％）。この領域は保存ペンタペプチドＱＡＣＲＧ（ced
−３の３５６−３６０の残基）を含有し、ICE機能に欠
くことのできないことが知られているシステインを含有
する。本発明のICE‐LAP‐10ポリペプチドも同じ保存ペ
ンタペプチドを有し、ICE機能に欠くことのできないシ
ステイン残基を有する。

【０００８】ced−３とICEの間の類似性は、ced−３が
システインプロテアーゼとして機能するだけでなく、IC
Eが脊椎動物のプログラムされた細胞死遺伝子として作
用することを示唆する。ced−３と脊椎動物のカウンタ
ーパートであるICEが、胚成長の間のプログラムされた
細胞死を制御する（Gagliarnini,V.ら、Science、２６
３：８２６−８２８（１９９４））。ICE mRNAは、末梢
血液単細胞、末梢血液リンパ球、末梢血液好中球、静止
および活性化末梢血液Ｔリンパ球、胎盤、Ｂリンパ芽球
系ＣＢ２３および単球白血病細胞系ＴＨＰ−１細胞を含
め、種々の組織中で検出されており（Cerretti, D.P.
ら、Science、２５６：９７−１００（１９９２））、
それはICEがプロ−IL−１βの他に別の基質を有するこ
とを示唆している。ICEが作用して細胞死を引き起こす
基質は現在のところ不明である。一の可能性は、それが
セノルハブディティス・エレガンスの細胞死遺伝子ced
−４の脊椎動物相同物であるかもしれないことである。
また、ICEは、細胞の生存に欠くことのできないタンパ
ク質をタンパク質分解的に切断することにより直接的に
細胞死を引き起こすかもしれない。

【０００９】哺乳動物遺伝子bcl−２が、リンパ球と称
される免疫細胞を細胞スイサイドより保護することが判
明した。また、crmＡ、ウシポックスウイルス遺伝子タ
ンパク質産物はICEタンパク質スプリット活性を阻害す
る。これらの特性を、以下、「ICE‐LAP‐10活性」また
は「ICE‐LAP‐10ポリペプチド活性」あるいは「ICE‐L
AP‐10の生物学的活性」という。これらの活性には、IC
E‐LAP‐10の抗原的および免疫原的活性、特に配列番号
２のポリペプチドの抗原的および免疫原的活性も含まれ
る。好ましくは、本発明のポリペプチドは、ICE‐LAP‐
10の少なくとも１つの生物学的活性を示す。

【００１０】本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク
質の形態であってもよく、あるいは融合タンパク質など
の大型のタンパク質の一部であってもよい。分泌または
リーダー配列、プロ配列、複数のヒスチジン残基のごと
き精製を促進する配列、または組換え操作の間の安定性
のための付加的な配列を含む付加的なアミノ酸配列を含
んでいることが有利なことがよくある。本発明はまた、
前記したポリペプチドの変種、すなわち、同類アミノ酸
置換により、それにより一の残基が同様の特性を有する
別のもので置換されている、対照と区別されるポリペプ
チドを包含する。典型的なかかる置換は、Ala、Val、Le
uおよびIleの間：SerおよびThrの間；酸性残基Aspおよ
びGluの間；AsnおよびGlnの間；ならびに塩基性残基Lys
およびArgの間；あるいは芳香族残基PheおよびTyrの間
におけるものである。数個、５ないし１０個、１ないし
５個、１ないし３個、１ないし２個または１個のアミノ
酸がいずれかの組み合わせで置換、欠失または付加され
ている変種が特に好ましい。

【００１１】いずれか適当な方法にて本発明のポリペプ
チドを製造することができる。かかるポリペプチドは、
単離された天然ポリペプチド、組換え技法で産生された
ポリペプチド、合成法により産生されたポリペプチド、
またはこれらの方法の組み合わせにより産生されたポリ
ペプチドを包含する。かかるポリペプチドの製造手段は
当該分野においてよく知られている。

【００１２】本発明のもう一つ別の態様はICE‐LAP‐10
のポリヌクレオチドに関する。かかるポリヌクレオチド
は、配列番号２のアミノ酸配列と、配列番号２の全長に
わたって、少なくとも７０％の同一性、好ましくは少な
くとも８０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９
０％の同一性、そう上さらに好ましくは少なくとも９５
％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列を有する単離されたポリヌクレオチドを包含す
る。この点において、少なくとも９７％の同一性を有す
るポリペプチドが特に好ましい。その一方で、少なくと
も９８−９９％の同一性を有するものがさらにより好ま
しく、少なくとも９９％の同一性を有するものが最も好
ましい。このようなポリヌクレオチドは配列番号２のポ
リペプチドをコードする配列番号１に含まれるヌクレオ
チド配列を有してなるポリヌクレオチドを包含する。

【００１３】本発明のさらなるポリヌクレオチドは、配
列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
と、そのコーディング配列全体にわたって、少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一
性、さらに好ましくは少なくとも９０％の同一性、そう
上さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性を有する
ヌクレオチド配列からなる単離されたポリヌクレオチド
を包含する。この点において、少なくとも９７％の同一
性を有するポリペプチドが特に好ましい。その一方で、
少なくとも９８−９９％の同一性を有するものがさらに
より好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するもの
が最も好ましい。

【００１４】本発明のさらなるポリヌクレオチドは、配
列番号１と、配列番号１の全長にわたって、少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一
性、さらに好ましくは少なくとも９０％の同一性、そう
上さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性を有する
ヌクレオチド配列からなる単離されたポリヌクレオチド
を包含する。この点において、少なくとも９７％の同一
性を有するポリペプチドが特に好ましい。その一方で、
少なくとも９８−９９％の同一性を有するものがさらに
より好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するもの
が最も好ましい。このようなポリヌクレオチドは、配列
番号１のポリヌクレオチドを有してなるポリヌクレオチ
ドならびに配列番号１のポリヌクレオチドを包含する。
本発明はまた、前記したすべてのポリヌクレオチドに相
補的なポリヌクレオチドを提供する。

【００１５】配列番号１のヌクレオチド配列は、ICE‐L
AP‐10と相同的である（Ich−２、TXまたはICE rel I
I）（Kamensら、JBC ２７０：１５２５０−１５２５
６、１９９５；Faucheuら、EMBO J １４：１９１４−１
９２２、１９９５；Mundayら、JBC ２７０：１５８７０
−１５８７６、１９９５）。配列番号１のヌクレオチド
配列はｃDNA配列であり、３７８個のアミノ酸のポリペ
プチド、配列番号２のポリペプチドをコードするポリペ
プチドコードの配列（ヌクレオチド７３ないし１２０
６）からなる。配列番号2のポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列は、配列番号１に含まれるポリペプチ
ドをコードする配列と同一であってもよく、または遺伝
暗号の重複性（縮重性）の結果として、配列番号２のポ
リペプチドをもコードする、配列番号１に含まれる配列
以外の配列であってもよい。

【００１６】本発明の好ましいポリペプチドおよびポリ
ヌクレオチドは、とりわけ、その相同的なポリペプチド
およびポリヌクレオチドと類似する生物学的機能／特性
を有すると考えられる。さらには、本発明の好ましいポ
リペプチドおよびポリヌクレオチドは少なくとも１つの
ICE‐LAP‐10活性を有する。

【００１７】ヒトの皮膚繊維芽細胞の細胞中のｍRNAか
ら由来のｃDNAライブラリーより標準的クローニングお
よびスクリーニング技法を用い、発現配列タグ（EST）
分析（Adams, M.D.ら、Science 252：1651-1656（199
1）；Adams, M.D.ら、Nature 355：632-634（1992）；A
dams, M.D.ら、Nature 377 Supp：3-174（1995））を用
いて、本発明のポリヌクレオチドを得ることができる。
ゲノムDNAライブラリーのごとき天然源から本発明のポ
リヌクレオチドを得ることもでき、あるいはよく知ら
れ、かつ商業上利用可能な方法を用いて合成することも
できる。

【００１８】本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリ
ペプチドの組換え生産に用いる場合、ポリヌクレオチド
はそれ自体、成熟ポリペプチドのコーディング配列を含
むものであってもよく；または読み枠中に、リーダーま
たは分泌配列、プレ、プロ、もしくはプレプロタンパク
質配列をコードするコーディング配列、または他の融合
ペプチド部分などの、他のコーディング配列を伴った、
成熟ポリペプチドのコーディング配列を含むものであっ
てもよい。例えば、融合ポリペプチドの精製を促進する
マーカー配列をコードすることもできる。本発明のこの
態様の特に好ましい具体例において、マーカー配列は、
ｐQEベクター（Qiagen,Inc.）で得られ、Gentzら、Pro
c. Natl. Acad. Sci., USA 86：821−824（1989）に記
載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチドである
か、またはＨＡタグである。ポリヌクレオチドはまた、
非コーディング５’および３’配列、例えば、転写され
た非翻訳配列、スプライスおよびポリアデニル化シグナ
ル、リボソーム結合部位およびｍRNAを安定化する配列
などを含有していてもよい。

【００１９】本発明のさらなる具体例は、配列番号２の
アミノ酸配列を有し、数個、例えば、５ないし１０個、
１ないし５個、１ないし３個、１ないし２個または１個
のアミノ酸残基がいずれかの組み合わせで置換、欠失ま
たは付加されているポリペプチドの変種をコードするポ
リヌクレオチドを包含する。配列番号１に含まれるヌク
レオチド配列と同一または十分に同一であるポリヌクレ
オチドは、ｃDNAおよびゲノムDNA用のハイブリダイゼー
ションプローブとして、または核酸増幅（PCR）反応用
のプライマーとして用いて本発明のポリペプチドをコー
ドする全長のｃDNAおよびゲノムクローンを単離し、配
列番号１に対して高い配列類似性を有する他の遺伝子
（ヒト以外の種からのホモログおよびオーソログをコー
ドする遺伝子を含む）のｃDNAおよびゲノムクローンを
単離することができる。典型的には、これらのヌクレオ
チド配列は、対照配列と７０％同一、好ましくは８０％
同一、より好ましくは９０％同一、最も好ましくは９５
％同一である。一般に、プローブまたはプライマーは少
なくとも１５個のヌクレオチド、好ましくは少なくとも
３０個のヌクレオチドを有し、少なくとも５０個のヌク
レオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは
３０と５０個の間のヌクレオチドを有する。

【００２０】ヒト以外の種からのホモログおよびオーソ
ログを含め、本発明のポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドは、適当なライブラリーをストリンジェント
なハイブリダイゼーション条件下で配列番号１の配列を
有する標識したプローブまたはそのフラグメントでスク
リーニングし、該ポリヌクレオチド配列を含有する完全
長のｃDNAおよびゲノムクローンを単離する工程からな
る方法により得ることができる。そのようなハイブリダ
イゼーション法は当業者に周知である。好ましいストリ
ンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％ホ
ルムアミド、５ｘSSC（１５０mM NaCl、１５mM クエン
酸ナトリウム）、５０mM リン酸ナトリウム（pH７.
６）、５ｘDenhardt's溶液、１０％硫酸デキストランお
よび２０マイクログラム／mlの変性切断サケ精子DNAを
有してなる溶液中で一夜４２℃でインキュベートし、つ
づいてそのフィルターを約６５℃で０.１ｘSSCにて洗浄
することを包含する。かくして、本発明はまた、適当な
ライブラリーを、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下、配列番号１の配列またはそのフラグメン
トを有する標識化プローブでスクリーニングすることに
より得られるポリヌクレオチドを包含する。

【００２１】当業者には、多くのケースにて、ポリペプ
チドをコードする領域がｃDNAの５’末端で切断されて
いる点で、単離されたｃDNA配列が不完全であることは
明らかであろう。これは、第１の鎖ｃDNA合成の間にｍR
NA鋳型のDNAコピーを終えることができない、逆転写酵
素、本質的に「プロセッシビティー（processivity）」
が低い酵素の結果である。

【００２２】例えば、Rapid Amplification of cDNA en
ds（RACE）法に基づく方法のような（例えば、Frohman
ら、PNAS USA ８５、８９９８−９００２、１９８
８）、完全長のｃDNAを得るか、または短いｃDNAを伸長
させるのに利用可能であり、かつ当業者によく知られて
いる方法がいくつかある。例えば、該方法を変形したMa
rathon^TMテクノロジー（Clontech Laboratories Inc.）
により具現化された、最新の方法により、より長いｃDN
Aについての研究が著しく簡略された。Marathon^TMテク
ノロジーにおいて、選択された組織から抽出されたｍRN
Aを用いてｃDNAを調製し、「アダプター」配列を各末端
にライゲートする。ついで、核酸増幅（PCR）を行い、
遺伝子特異的かつアダプター特異的オリゴヌクレオチド
プライマーを用いて、ｃDNAの「欠損」５’末端を増幅
させる。その後、「入れ子」プライマー、すなわち、増
幅産物内でアニールするように設計されたプライマー
（典型的には、アダプター配列の３’をさらにアニール
するアダプター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列
の５’をさらにアニールする遺伝子特異的プライマー）
を用いて、PCR反応を繰返す。ついで、この反応の産物
をDNA配列決定により分析し、その産物を存在するｃDNA
に直接結合させて完全な配列を得るか、または５’プラ
イマーを設計するための新たな配列情報を用いて別個の
完全長のPCRを行うことによって、完全長のｃDNAを構築
することができる。

【００２３】本発明の組換えポリペプチドは、発現系を
有してなる遺伝子操作された宿主細胞より、当該分野に
て周知の方法により調製することができる。したがっ
て、さらなる態様において、本発明は、本発明のポリヌ
クレオチド（複数でも可）を含む発現系、かかる発現系
で遺伝子操作された宿主細胞および組換え技法による本
発明のポリペプチドの製造にも関する。無細胞翻訳系を
用い、本発明のDNA構築物から由来のRNAを用いてかかる
タンパク質を製造することもできる。

【００２４】組換え体を製造するために、宿主細胞を遺
伝子操作して、本発明のポリヌクレオチドについての発
現系もしくはそれらの一部を組み込むことができる。ポ
リヌクレオチドの宿主細胞への導入は、Davisら、Basic
Methods in Molecular Biology（1986）；Sambrook
ら、Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第２
版、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spri
ng Harbor、N.Y.（1989）のような、多くの標準的な実
験マニュアルに記載される方法により行うことができ
る。好ましいかかる方法は、例えば、リン酸カルシウム
トランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介ト
ランスフェクション、トランスベクション、マイクロイ
ンジェクション、陽イオン脂質媒介トランスフェクショ
ン、エレクトロポレーション、トランスダクション、ス
クレープ負荷、バリスティック導入または感染を包含す
る。

【００２５】適当な宿主の代表的なものとして、細菌細
胞、例えば連鎖球菌属（streptococci）、ブドウ球菌属
（staphylococci）、大腸菌（E.coli）、ストレプトミ
セス（Streptomyces）および枯草菌（Bacillus subtili
s）細胞；真菌細胞、例えば酵母細胞およびアスペルギ
ルス属（Aspergillus）細胞；昆虫細胞、例えばドロソ
フィラＳ２（Drosophila S2）およびスポドプテラＳｆ
９（Spodoptera Sf9）細胞；動物細胞、例えばCHO、CO
S、HeLa、Ｃ１２７、３Ｔ３、BHK、HEK２９３およびボ
ウズ（Bows）黒色腫細胞；ならびに植物細胞が挙げられ
る。

【００２６】多種の発現系、例えば、染色体、エピソー
ムおよびウイルス由来系、例えば細菌プラスミドから、
バクテリオファージから、トランスポゾンから、酵母エ
ピソームから、挿入エレメントから、酵母染色体エレメ
ントから、バキュロウイルス、パポバウイルスなどの、
例えばＳＶ４０、ワクシニアウイルス、アデノウイル
ス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウ
イルス等のウイルスから由来のベクター、ならびにその
組み合わせから由来のベクター、例えばコスミドおよび
ファージミドなどのプラスミドおよびバクテリオファー
ジ遺伝因子から由来のベクターを用いることができる。
発現系は発現を制御および引き起こす調節領域を含有し
ていてもよい。一般に、ポリヌクレオチドを保持、伸長
または発現させ、宿主にてポリペプチドを産生すること
のできるいずれの系またはベクターを使用してもよい。
種々の周知かつ慣用的な技法、例えば、Sambrookら、MO
LECULAR CLONING、A LABORATORY MANUAL（前掲）に記載
されている技法により、適当なヌクレオチド配列を発現
系に挿入できる。翻訳タンパク質を、小胞体内腔、周辺
腔または細胞外環境へ分泌させるために、適当な分泌シ
グナルを所望のポリペプチドに組み込むことができる。
これらのシグナルはポリペプチドに固有のシグナルであ
ってもよく、あるいは異種性のシグナルであってもよ
い。

【００２７】本発明のポリペプチドをスクリーニングア
ッセイにて用いるために発現させる場合、一般に、その
ポリペプチドを細胞表面で生成させることが好ましい。
この場合、スクリーニングアッセイに使用する前に細胞
を集めてもよい。ポリペプチドが培地中に分泌されるな
らば、培地を回収してポリペプチドを回収し精製するこ
とができる。細胞内に生成されるならば、まず細胞を溶
解し、次いで、ポリペプチドを回収しなければならな
い。本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたは
エタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換
クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフ
ィー、疎水相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含
め、周知の方法により、組換え細胞培養物から回収およ
び精製できる。高性能液体クロマトグラフィーを精製に
用いるのが最も好ましい。ポリペプチドが単離および／
または精製中に変性する場合、タンパク質を再生するた
めの周知方法を用い、再び活性な立体配座とすることが
できる。

【００２８】本発明はまた診断薬として用いるための本
発明のポリヌクレオチドの使用にも関する。機能不全に
関与する配列番号１のポリヌクレオチドにより特徴付け
られる遺伝子の変異形の検出は、遺伝子の過少発現、過
剰発現または発現の変化よりもたらされる疾患の診断ま
たは罹病し易さを特定することのできる診断手段を提供
する。遺伝子に変異のある個体は、種々の方法によりDN
Aレベルで検出できる。

【００２９】診断に供する核酸は、対象の細胞、例え
ば、血液、尿、唾液、組織生検または剖検材料より得る
ことができる。ゲノムDNAは、検出するのに直接使用し
てもよく、または分析の前にPCRもしくはその他の増幅
法を用いることにより酵素的に増幅させてもよい。RNA
またはcDNAもまた同じ方法で用いることができる。正常
な遺伝子型と比較して増幅産物の大きさが変化している
ことにより、欠失および挿入を検出できる。点突然変異
は、増幅DNAを標識化ICE‐LAP‐10のヌクレオチド配列
とハイブリッド形成させることにより同定できる。完全
に対合した配列はＲＮase消化により、または融解温度
の違いにより、誤対合二重螺旋から区別できる。DNA配
列の違いはまた、変性物質と共にまたは無しで、ゲル中
のDNAフラグメントの電気泳動の移動度の変化により、
または直接的DNA配列決定法により検出できる（例えばM
yersら、Science ２３０：１２４２（１９８５）を参照
のこと）。特異的な位置での配列の変化はまた、ヌクレ
アーゼ保護アッセイ、例えばRＮaseおよびＳ１保護また
は化学的切断法によっても明らかにすることができる
（Cottonら、Proc. Natl. Acad. Sci., USA，８５：４
３９７−４４０１（１９８５）を参照のこと）。もう１
つの具体例において、ICE‐LAP‐10のヌクレオチド配列
またはそのフラグメントからなるオリゴヌクレオチドプ
ローブのアレイ（array）を構築して、例えば遺伝的変
異の効果的なスクリーニングを行うことができる。アレ
イ法は周知であり、適用範囲が広く、その方法を用い
て、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変化を含め、
分子遺伝学における種々の問題と取り組むことができる
（例えば、M.Cheeら、Science、 Vol ２７４、６１０−
６１３頁（１９９６）を参照のこと）。

【００３０】診断アッセイは、記載した方法によりICE
‐LAP‐10遺伝子中の変異を検出することによる、疾患
の罹病性を診断または測定する方法を提供する。加え
て、かかる疾患は、対象から由来の試料より、異常に低
下または上昇したポリペプチドまたはmRNAのレベルを測
定することを特徴とする方法によって診断することがで
きる。発現の低下または上昇は、ポリヌクレオチドの定
量法として当該分野で周知の方法、例えば、PCR、RT‐P
CR、RNase保護、ノーザンブロッティングおよび他のハ
イブリダイゼーション法を用いてRNAレベルで測定でき
る。宿主から由来の試料中の本発明のポリペプチドなど
のタンパク質のレベルを決定するために用いることがで
きるアッセイ法は、当業者に周知である。このようなア
ッセイ法には、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセ
イ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイ
が挙げられる。

【００３１】かくしてもう一つ別の態様において、本発
明は、 （ａ）本発明のポリペプチド、好ましくは配列番号1の
ヌクレオチド配列、またはそのフラグメント； （ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチ
ド配列； （ｃ）本発明のポリペプチド、好ましくは配列番号2の
ポリペプチド、またはそのフラグメント；あるいは （ｄ）本発明のポリペプチドに対する、好ましくは配列
番号2のポリペプチドに対する抗体 を有してなる診断用キットに関する。

【００３２】このようないずれのキットにおいても、
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が実質的な成分か
らなることは明らかであろう。かかるキットは、疾患ま
たは罹病し易さ、特に、とりわけ、癌、炎症、自己免疫
疾患、アレルギー、喘息、慢性関節リウマチ、CNS炎
症、小脳変性、アルツハイマー病、パーキンソン病、多
発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、頭部障害損傷、およ
び他の神経学的異常症、敗血症性ショック、敗血症、卒
中、骨粗鬆症、骨関節症、虚血性再潅流障害、心血管疾
患、腎臓病、肝臓病、虚血性障害、心筋梗塞、低血圧、
高血圧、AIDS、骨髄異形成症候群および他の血液異常
症、再生不能性貧血、男性型脱毛症、および細菌性、真
菌性、原生動物性およびウイルス性感染の診断に有用で
あろう。

【００３３】本発明のヌクレオチド配列は染色体の同定
にも価値がある。該配列は、個々のヒト染色体上の特定
の位置を特異的に標的とし、これとハイブリッド形成し
うる。本発明に従って、関連する配列を染色体にマッピ
ングする工程は、それらの配列を遺伝子関連疾患と関連
づける重要な第１工程である。配列を正確な染色体位置
にマッピングしたならば、染色体上の配列の物理的位置
を遺伝地図のデータと関連づけることができる。かかる
データは、例えば、V. McKusick, Mendelian Inheritan
ce in Man（Johns Hopkins University Welch Medical
Libraryからオンラインで利用できる）にて見られる。
ついで、連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺
伝）により、同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子
と疾患との関係を同定する。罹病個体と未罹病個体との
間のcDNAまたはゲノム配列の相違も測定することができ
る。いくつかまたはすべての罹病個体において変異が観
察されるが、正常個体においては観察されない場合、そ
の変異は該疾患の原因である可能性がある。

【００３４】本発明のポリペプチドもしくはそれらのフ
ラグメントまたはそのアナログ、あるいはそれらを発現
する細胞を免疫原として用いて、本発明のポリペプチド
に対して免疫特異的な抗体を得ることもできる。「免疫
特異的」なる語は、抗体が先行技術における他の関連ポ
リペプチドに対するアフィニティーよりも、本発明のポ
リペプチドに対して実質的により大きなアフィニティー
を有することを意味する。

【００３５】本発明のポリペプチドに拮抗して生じる抗
体は、ポリペプチドまたはエピトープ担持フラグメン
ト、アナログまたは細胞を、動物、好ましくはヒト以外
の動物に、通常の実験法を用いて投与することにより得
ることができる。モノクローナル抗体の産生には、連続
的セルライン培養により得られる抗体を提供するいずれ
の方法も用いることができる。例えば、ハイブリドーマ
法（Kohler,G.およびMilstein,C.、Nature 256：495-49
7（1975）、トリオーマ法、ヒトB-細胞ハイブリドーマ
法（Kozborら、Immunology Today 4：72（1983）および
EBV-ハイブリドーマ法（Coleら、MONOCLONAL ANTIBODIE
S AND CANCER THERAPY、７７−９６頁、Alan R. Liss,
Inc.,（1985））が挙げられる。

【００３６】米国特許第４９４６７７８号に記載される
方法などの、一本鎖抗体を産生するのに記載された技術
を適用して、本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
を産生できる。また、トランスジェニックマウスまたは
他の哺乳動物を含め、他の生物を用いて、ヒト化抗体を
発現させることができる。前記した抗体を用いて、ポリ
ペプチドを発現するクローンを単離または同定してもよ
く、あるいはアフィニティークロマトグラフィーにより
ポリペプチドを精製してもよい。本発明のポリペプチド
に対する抗体を用いて、とりわけ、疾患を治療してもよ
い。

【００３７】さらなる態様において、本発明は、本発明
のポリペプチドまたはそのフラグメントと、種々のサブ
クラス（IgG、IgM、IgA、IgE）の重鎖または軽鎖のイム
ノグロブリンの定常領域の種々の部分とを有してなる遺
伝子操作された可溶性融合タンパク質に関する。イムノ
グロブリンとしては、ヒトIgG、特にIgG１の重鎖の定常
部であり、融合がヒンジ領域で起こる。具体的には、血
液凝固因子（Xa）で切断可能な切断配列を組み込むこと
により、Fc部を簡単に取り除くことができる。さらに
は、本発明は、遺伝子操作によるこれら融合タンパク質
の製法、ならびに薬物スクリーニング、診断および治療
におけるその使用に関する。本発明のさらなる態様はま
た、かかる融合タンパク質をコートするポリヌクレオチ
ドに関する。融合タンパク質技法は、例えば、国際特許
出願WO９４／２９４５８およびWO９４／２２９１４に開
示されている。

【００３８】本発明の別の態様は、哺乳動物における免
疫学的応答を誘起する方法であって、抗体および／また
はＴ細胞免疫応答を生じさせるに十分な本発明のポリペ
プチドまたはそのフラグメントを哺乳動物に接種して、
とりわけ、前記した疾患から該動物を防御することから
なる方法に関する。本発明のもう１つ別の態様は、哺乳
動物における免疫学的応答を誘導する方法であって、本
発明のポリペプチドを、ポリヌクレオチドの発現を指令
し、インビボにてポリペプチドをコードするベクターを
介してデリバリーし、かかる免疫学的応答を誘発させ、
抗体を産生し、該動物を疾患から保護することからなる
方法に関する。

【００３９】本発明のさらなる態様は免疫学的／ワクチ
ン処方（組成物）であって、哺乳動物宿主中に導入され
た場合、その哺乳動物にて本発明のポリペプチドに対す
る免疫学的応答を誘導する処方（該組成物は本発明のポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドを含んでなる）に関
する。ワクチン処方は、さらに適当な担体を含んでいて
もよい。ポリペプチドは胃で分解されるかもしれないた
め、好ましくは非経口的（例えば、皮下、筋肉内、静脈
内、皮内注射）に投与する。非経口投与に適した処方
は、抗酸化剤、バッファー、静菌剤および処方を患者の
血液と等張にする溶質を含有してもよい水性および非水
性滅菌注射用溶液；ならびに懸濁剤または増粘剤を含ん
でいてもよい水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。
処方を１回投与または複数回投与用容器、例えば、密封
アンプルおよびバイアルに入れて提供してもよく、使用
直前に滅菌液体担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態
にて保存してもよい。またワクチン処方は、水中油系お
よび当該分野で知られた他の系などの処方の免疫原性を
高めるためのアジュバント系を含んでいてもよい。用量
は、ワクチンの個々の活性に依存しており、通常の実験
により容易に決定することができる。

【００４０】本発明のポリペプチドは、多くの病態、特
に前記した疾患を含め、多くの生物学的機能に関与して
いる。したがって、該ポリペプチドの機能を刺激または
阻害する化合物を同定するスクリーニング方法を見出す
ことが望まれている。よって、さらなる態様において、
本発明は、該ポリペプチドの機能を刺激するかまたは阻
害する化合物を同定するためのスクリーニング方法を提
供する。一般に、アゴニストまたはアンタゴニストは、
前記した疾患の治療または予防目的に用いられる。化合
物は、種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化
学ライブラリーおよび天然物の混合物から同定すること
ができる。そのように同定されたアゴニスト、アンタゴ
ニストまたは阻害剤は、場合によっては、該ポリペプチ
ドの、天然または修飾された基質、リガンド、レセプタ
ー、酵素などであってもよく、あるいはその構造または
機能を模倣したものであってもよい（Coliganら、Curre
ntProtocols in Immunology 1（2）：第5章（1991）を
参照のこと）。

【００４１】スクリーニング方法は、候補化合物に直接
または間接的に結合した標識により、候補化合物と、ポ
リペプチド、または該ポリペプチドを有する細胞もしく
は膜、あるいはその融合タンパク質との結合を簡単に測
定することができる。別法として、スクリーニング方法
は標識した競合物との競合に関与するものであってもよ
い。さらには、これらのスクリーニング法は、該ポリペ
プチドを有する細胞に適当な検出系を用い、候補化合物
が該ポリペプチドの活性化または阻害により発せられる
シグナルを生じるかどうかを試験することもできる。一
般に、活性化阻害剤を既知のアゴニストの存在下で検定
し、候補化合物の存在によりそのアゴニストが活性化に
及ぼす効果を観察する。本質的に活性なポリペプチド
を、アゴニストまたは阻害剤の不在下、候補化合物が該
ポリペプチドの活性化の阻害をもたらすかどうかを試験
することにより、逆アゴニストまたは阻害剤についての
スクリーニング法に用いることができる。さらには、該
スクリーニング法は、簡潔に言えば、候補化合物を本発
明のポリペプチドを含有する溶液と一緒にして混合物を
形成させ、その混合物中のICE‐LAP‐10活性を測定し、
その混合物中のICE‐LAP‐10活性を標体と比較する工程
からなる。前記した、Fc部とICE‐LAP‐10ポリペプチド
とから調製されるような融合タンパク質をまた、高処理
スクリーニングアッセイに用いて、本発明のポリペプチ
ドのアンタゴニストを同定することもできる（D. Benne
ttら、J Mol Recognition、８：５２−５８（１９９
５）；およびK. Johansonら、J Biol Chem、２７０（１
６）：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこ
と）。

【００４２】また、ポリヌクレオチド、ポリペプチドお
よび本発明のポリペプチドに対する抗体を用いて、細胞
中のmRNAおよびポリペプチドの産生に対する添加した化
合物の効果を検出するためのスクリーニング法を形成す
ることもできる。例えば、ELISA検定を、当該分野にて
知られている標準方法により、モノクローナルおよびポ
リクローナル抗体を用いて、ポリペプチドの分泌または
細胞結合レベルを測定するように構成してもよい。この
検定を用いて適宜操作した細胞または組織からポリペプ
チドの産生を阻害または強化しうる薬剤（その各々は、
アンタゴニストまたはアゴニストとも称される）を見つ
けることもできる。

【００４３】該ポリペプチドを用いて、当該分野にて知
られている標準的レセプター結合方法を介して、膜結合
または可溶性レセプターを同定することができる。これ
らは、限定されるものではないが、ポリペプチドを放射
性同位元素（例えば、¹²⁵Ｉ）で標識化するか、化学的
に修飾する（例えば、ビオチニル化）か、または検出ま
たは精製に適するペプチド配列に融合させ、推定レセプ
ター源（細胞、細胞膜、細胞上澄、組織抽出物、体液）
と一緒にインキュベートする、リガンド結合および架橋
検定を包含する。他の方法は、表面プラスモン共鳴およ
び分光学などの生物物理的方法を包含する。これらのス
クリーニング方法はまた、たとえあるとしても、ポリペ
プチドのそのレセプターへの結合と競合する該ポリペプ
チドのアゴニストおよびアンタゴニストを同定するのに
用いることができる。このような検定を行うための標準
的方法は、当該分野にてよく知られている。

【００４４】潜在的なポリペプチドのアンタゴニストの
例は、抗体、またはある場合には、ポリペプチドの、場
合によっては、リガンド、基質、レセプター、酵素など
に密接に関連するオリゴヌクレオチドまたはタンパク
質、例えば、リガンド、基質、レセプター、酵素などの
フラグメント、または該ポリペプチドの活性が妨げられ
るように、本発明のポリペプチドに結合するが、応答を
惹起しない、小型分子を包含する。

【００４５】かくしてもう一つ別の態様において、本発
明は、本発明のポリペプチドについてのアゴニスト、ア
ンタゴニスト、リガンド、レセプター、基質、酵素な
ど；またはかかるポリペプチドの産生を低下または亢進
させる化合物を同定するためのスクリーニング用キット
であって、 （ａ）本発明のポリペプチド； （ｂ）本発明のポリペプチドを発現する組換え細胞； （ｃ）本発明のポリペプチドを発現する細胞膜；または （ｄ）本発明のポリペプチドに対する抗体 からなり、ポリペプチドが、好ましくは、配列番号２の
ポリペプチドであるスクリーニング用キットに関する。
このようないずれのキットにおいても、（ａ）、
（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が実質的な成分からなるこ
とは明らかであろう。

【００４６】本発明のポリペプチドをまた、 （ａ）第１に、該ポリペプチドの３次元構造を測定し； （ｂ）その３次元構造を、アゴニスト、アンタゴニスト
または阻害剤の類似する反応性または結合性部位（複数
でも可）について推定し、 （ｃ）その推定結合性または反応性部位に結合または反
応すると予測される候補化合物を合成し、および （ｄ）その候補化合物が、実際に、アゴニスト、アンタ
ゴニストまたは阻害剤であるかどうかを試験する ことによって、構造を基礎とする該ポリペプチドのアゴ
ニスト、アンタゴニストまたは阻害剤の設計方法に用い
てもよいことは明らかであろう。この方法が、通常、相
互作用性プロセスであることも明らかであろう。

【００４７】さらなる態様において、本発明は、過剰ま
たは過少発現のいずれかのICE‐LAP‐10ポリペプチド活
性に関連する、例えば、癌、炎症、自己免疫疾患、アレ
ルギー、喘息、慢性関節リウマチ、CNS炎症、小脳変
性、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化
症、筋萎縮性側索硬化症、頭部障害損傷、および他の神
経学的異常症、敗血症性ショック、敗血症、卒中、骨粗
鬆症、骨関節症、虚血性再潅流障害、心血管疾患、腎臓
病、肝臓病、虚血性障害、心筋梗塞、低血圧、高血圧、
AIDS、骨髄異形成症候群および他の血液異常症、再生不
能性貧血、男性型脱毛症、および細菌性、真菌性、原生
動物性およびウイルス性感染などの、異常な症状の治療
方法を提供する。

【００４８】ポリペプチドの活性が過剰な場合、いくつ
かの方法を用いることができる。１の方法は、例えば、
リガンド、基質、レセプター、酵素などの結合を遮断す
ることにより、または別のシグナルを阻害することによ
り、ポリペプチドの機能を阻害するのに効果的な量に
て、前記した阻害化合物（アンタゴニスト）を、所望に
より医薬上許容される担体と組み合わせてその治療を必
要とする対象に投与し、そのことにより異常な症状を改
善することからなる。もう１つ別の方法において、内在
性ポリペプチドと競争してリガンド、基質、酵素、レセ
プターなどとの結合能を有する可溶形のポリペプチドを
投与してもよい。かかる競争物質の典型例として、ICE
‐LAP‐10ポリペプチドのフラグメントが挙げられる。

【００４９】さらにもう１つ別の方法において、発現遮
断法を用いて内在性ICE‐LAP‐10をコードする遺伝子の
発現を阻害してもよい。公知のかかる方法は、内部生成
した、あるいは別個に投与されたアンチセンス配列の使
用からなる（例えば、Oligodeoxynucleotides as Antis
ense Inhibitors of Gene Expression，CRC Press，Boc
a Raton, FL（1988）中、O'Connor、J.Neurochem 56：5
60（1991）を参照のこと）。別法として、遺伝子と共に
三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを供給するこ
ともできる（例えば、Leeら、Nucleic Acids Res 6：30
73（1979）；Cooneyら、Science 241：456（1988）；De
rvanら、Science 251：1360（1991）を参照のこと）。
これらのオリゴマーはそれ自体投与することができ、あ
るいは関連するオリゴマーをインビボで発現させること
もできる。

【００５０】ICE‐LAP‐10およびその活性の過少発現に
関連する異常な症状を治療するのに、またいくつかの方
法が利用可能である。１の方法は、本発明のポリペプチ
ドを活性化する治療上有効量の化合物（すなわち、前記
のアゴニスト）を医薬上許容される担体とともに対象に
投与し、そのことにより異常な状態を改善することから
なる。別法として、遺伝子治療を用いて、対象中の関連
細胞によるICE‐LAP‐10の内因的生成を有効ならしめて
もよい。例えば、前記のごとく、複製欠損レトロウイル
スベクターにて発現するように、本発明のポリヌクレオ
チドを操作してもよい。ついで、該レトロウイルス発現
構築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードするRN
A含有のレトロウイルスプラスミドベクターでトランス
ダクションしたパッケージング細胞中に導入して、パッ
ケージング細胞が目的とする遺伝子を含む感染性ウイル
ス粒子を生成するようにしてもよい。これらのプロデュ
ーサー細胞を対象に投与して細胞をインビボで操作し、
インビボでポリペプチドを発現するようにしてもよい。
遺伝子治療の概説としては、Human Molecular Genetic
s,T.Strachan and A. P. Read, BIOS Scientific Publi
shers Ltd（1996）中、第２０章、Gene Therapy and ot
her Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches
（およびその中の引用文献）を参照のこと。別法は、治
療量の本発明のポリペプチドを適当な医薬担体と組み合
わせて投与することである。

【００５１】さらなる態様において、本発明は、治療上
有効量のポリペプチド、例えば、可溶形の本発明のポリ
ペプチド、アゴニスト／アンタゴニストペプチドまたは
小型分子の化合物を、医薬上許容される担体または賦形
剤と組み合わせてなる医薬組成物を提供する。かかる担
体としては、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、
水、グリセロール、エタノール、およびその組み合わせ
を包含するが、これらに限定されない。本発明は、さら
には、前記した本発明の組成物の１種またはそれ以上の
成分を充填した、１個またはそれ以上の容器を含んでな
る医薬パックおよびキットにも関する。本発明のポリペ
プチドおよび他の化合物を単独で使用してもよく、ある
いは治療化合物のごとき他の化合物と一緒に使用しても
よい。

【００５２】組成物は、例えば全身系または経口投与に
よる、投与経路に適合しているであろう。全身系投与の
好ましい形態は、典型的には静脈注射による注射を包含
する。皮下、筋肉内または腹腔内などの他の注射経路を
用いることもできる。全身系投与のための別の手段は、
胆汁酸塩またはフシジン酸などの浸透剤または他の界面
活性剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。加え
て、本発明のポリペプチドまたは他の化合物が腸溶処方
またはカプセル処方に処方されるならば、経口投与も可
能である。これらの化合物の投与は、膏薬、パスタ、ゲ
ル等の形態にて、局所的および／または局在化であって
もよい。

【００５３】必要な用量範囲は、本発明のペプチドまた
は他の化合物の選択、投与経路、処方の性質、対象の症
状の性質、および顧問医の判断に依存する。しかしなが
ら、適当な用量は対象１ｋｇ当たり０.１ないし１００
μｇの範囲である。しかし、使用可能な種々の化合物お
よび種々の投与経路の効力の違いを考慮すれば、必要な
用量は広範囲なものと思われる。例えば、経口投与には
静脈注射よりも多い用量が必要であると考えられる。当
該分野においてよく知られた最適化のための標準的な経
験的慣用操作を用いてこれらの用量の変更を行うことが
できる。

【００５４】しばしば「遺伝子治療」と称される前記し
た治療方法において、治療に用いられるポリペプチドを
対象中において内在的に得ることもできる。よって、例
えば、レトロウイルスプラスミドベクターを用いて対象
由来の細胞をDNAまたはRNAなどのポリヌクレオチドで操
作し、ポリペプチドをエクスビボでコードしてもよい。
次いで、細胞を対象に導入する。

【００５５】ポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列
は価値ある情報源を形成し、それを用いて類似するホモ
ロジーのさらなる配列が同定される。これは、その配列
をコンピューター読み取り可能な媒体に貯蔵し、ついで
その貯蔵データを用い、GCCなどの周知の検索手段を用
いて配列データベースを検索することにより最も容易に
行うことができる。したがって、さらなる態様におい
て、本発明は、配列番号１の配列を有してなるポリヌク
レオチドおよび／またはそれによりコードされるポリペ
プチド配列を、その中に貯蔵したコンピューター読み取
り媒体を提供するものである。

【００５６】以下の定義は、上記に汎用されているある
種の用語の理解を容易にするために提供されるものであ
る。本明細書で用いる「抗体」は、ポリクローナルおよ
びモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、およびヒト化
抗体、ならびにＦａｂの産物または他の免疫グロブリン
発現ライブラリーを含め、Ｆａｂフラグメントを包含す
る。「単離」とは、「人間の手により」天然の状態から
変えられたことを意味する。「単離」された組成物また
は物質が天然に存在する場合、その本来の環境から変え
られるかもしくは取り除かれ、またはその両方がなされ
たことを意味する。例えば、天然の状態で生存動物に存
在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」
されていないが、その天然状態で共存する物質から分離
されているその同一のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドは、本明細書に用いる用語である、「単離」がなさ
れている。

【００５７】「ポリヌクレオチド」とは、一般に、修飾
されていないRNAもしくはDNA、または修飾されたRNAも
しくはDNAであってよい、いずれかのポリリボヌクレオ
チドまたはポリデオキシリボヌクレオチドをいう。「ポ
リヌクレオチド」は、一本鎖および二本鎖DNA、一本鎖
および二本鎖領域の混合物であるDNA、一本鎖および二
本鎖RNA、および一本鎖および二本鎖領域の混合物であ
るRNA、一本鎖もしくはより典型的には二本鎖、または
一本鎖および二本鎖領域の混合物であってもよいDNAお
よびRNAを含むハイブリッド分子を包含するが、これに
限定されるものではない。加えて、「ポリヌクレオチ
ド」は、RNAもしくはDNAまたはRNAとDNAの両方を含む三
本鎖領域をいう。ポリヌクレオチドなる用語はまた、一
つまたはそれ以上の修飾された塩基を含有するDNAまた
はRNA、ならびに安定性またはその他の理由で修飾され
た骨格を有するDNAまたはRNAを包含する。「修飾され
た」塩基は、例えば、トリチル化された塩基およびイノ
シンなどの通常でない塩基を包含する。種々の修飾がDN
AおよびRNAに対してなされている。よって、「ポリヌク
レオチド」は、典型的には天然において見いだされるよ
うな化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態のポ
リヌクレオチド、ならびにウイルスおよび細胞に特徴的
な化学的形態のDNAおよびRNAを包含する。また、「ポリ
ヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと称さ
れる比較的短いポリヌクレオチドも包含する。

【００５８】「ポリペプチド」は、ペプチド結合により
互いに結合している２個またはそれ以上のアミノ酸を有
してなるペプチドまたはタンパク質あるいは修飾された
ペプチド結合により互いに結合している２個またはそれ
以上のアミノ酸を有してなるペプチドまたはタンパク
質、すなわち、ペプチドアイソスターをいう。「ポリペ
プチド」は、通常、ペプチド、オリゴペプチドまたはオ
リゴマーと称される短鎖、およびタンパク質と称される
長鎖の両方をいう。ポリペプチドは遺伝子によりコード
された２０種のアミノ酸とは異なるアミノ酸を含有して
もよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセッシングな
どの自然の工程により、または当業者に周知の化学修飾
技法により修飾されたアミノ酸配列を含有する。このよ
うな修飾は基本テキストにて、およびさらに詳細な研究
論文にて、ならびに膨大な研究文献において詳しく記載
されている。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およ
びアミノまたはカルボキシル末端を含め、ポリペプチド
のどこででも起こり得る。同一の型の修飾が所定のポリ
ペプチドの幾つかの部位で、同一または異なる程度で存
在し得ることは理解されよう。また、所定のポリペプチ
ドは多くの型の修飾を含んでいてもよい。ポリペプチド
はユビキチネーションの結果として分岐していてもよ
く、分岐しているかまたはしていない、環状であっても
よい。環状、分岐および分岐した環状ポリペプチドは翻
訳後の天然プロセスにより生じたものであってもよく、
または合成法により製造されたものであってもよい。修
飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、ア
ミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌ
クレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質
または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトー
ルの共有結合、交差架橋、環化、ジスルフィド結合形
成、脱メチル化、交差架橋共有結合形成、システイン形
成、ピログルタメート形成、ホルミル化、ガンマ−カル
ボキシル化、糖鎖形成、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキ
シル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、
タンパク質分解的プロセッシング、リン酸化、プレニル
化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化な
どのトランスファーRNA媒介のタンパク質へのアミノ酸
付加、ならびにユビキチネーションを包含する（例え
ば、PROTEINS‐STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES、
第２版、T.E.Creighton、W.H.Freemanand Company、New
York（1993）およびPOSTTRANSLATIONAL COVALENT MODI
FICATION OF PROTEINS、B.C.Johnson編、Academic Pres
s、New York（1983）のWold,F.、Posttranslational Pr
otein Modifications：Perspectives and Prospects、1
〜12頁；Seifterら、“Analysis for protein modifica
tions and nonproteincofactors”、Meth.Enzymol. 18
2：626-646（1990）およびRattanら、“ProteinSynthes
is：Posttranslational Modifications and Aging"、An
n.N.Y.Acad.Sci.663：48-62（1992）を参照のこと）。

【００５９】「変種」は、対照ポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドとは異なるが、本質的な特性は保持してい
る、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドをいう。典型
的なポリヌクレオチドの変種は、別の対照ポリヌクレオ
チドとはヌクレオチド配列が異なる。変種のヌクレオチ
ド配列における変化は、対照ポリヌクレオチドによりコ
ードされるポリペプチドのアミノ酸配列と変わっていて
もよく、変わっていなくてもよい。ヌクレオチドの変化
は、後記するように、対照配列によりコードされるポリ
ペプチドにおいてアミノ酸置換、付加、欠失、融合およ
び末端切断をもたらしうる。典型的なポリペプチドの変
種は、別の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異な
る。一般に、差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配
列が、全体的に極めて類似しており、多くの領域で同一
であるように限定される。変種および対照ポリペプチド
は、１またはそれ以上の置換、付加、欠失のいずれかの
組み合わせにより、アミノ酸配列にて異なっていてもよ
い。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝暗号に
よりコードされたものであってもなくてもよい。ポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドの変種は、対立遺伝子変
種のような天然物であってもよく、または天然に発生す
ることが知られていない変種であってもよい。ポリヌク
レオチドおよびポリペプチドの天然に生じない変種は、
突然変異誘発技術により、または直接的合成により製造
できる。

【００６０】「同一性」は、ヌクレオチド配列またはア
ミノ酸配列のある程度の同一性をいう。一般に、配列は
最高の対合が得られるように配置される。「同一性」自
体は、当該分野にて認識されている意義を有しており、
公開されている方法を用いて計算することができる（例
えば、：COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY，Lesk,A.M.
編、Oxford University Press、New York、1988年；BIO
COMPUTING：INFORMATICS AND GENOME PROJECTS、Smith,
D.W.編、Academic Press、New York、1993年；COMPUTER
ANALYSIS OF SEQUENCE DATA，PARTＩ，Griffin,A.M.お
よびGriffin,H.G.編、Humana Press、New Jersey、1994
年；SEQUENCE ANALYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY，von He
inje,G.、Academic Press、1987年；およびSEQUENCE AN
ALYSIS PRIMER，Gribskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍ
Stockton Press、New York、1991年を参照のこと）。二
つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の間の同
一性を測定するのに多数の方法があるが、「同一性」な
る用語は当業者に周知である（Carillo,H.およびLipto
n,D.，SIAM J.Applied Math.，48：1073（1988））。２
つの配列間の同一性または類似性を測定するために通常
用いられる方法は、Guide to Huge Computers、Martin
J. Bishop,編、Academic Press、San Diego、1994年、
およびCarillo,H.およびLipton,D.，SIAM J.Applied Ma
th.，48：1073（1988）に開示されている方法を包含す
るが、これらに限定されるものではない。同一性および
類似性を決定するための方法はコンピュータープログラ
ムに集成されている。二つの配列間の同一性および類似
性を測定するための好ましいコンピュータープログラム
法は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux,J.ら、N
ucleic Acids Research 12（1）：387（1984））、BLAS
TP、BLASTN、FASTA（Atschul,S.F.ら、J.Molec.Biol. 2
15：403（1990））を包含するが、これらに限定される
ものではない。

【００６１】例示として、本発明のポリヌクレオチド配
列は、配列番号１の対照配列と同一、すなわち、１００
％同一であってもよく、あるいは該ヌクレオチド配列は
対照配列と比較してある一定の数までのヌクレオチドが
変わっているものも包含する。かかる変化は、少なくと
も１個のヌクレオチドの欠失、トランジションおよびト
ランスバージョンを含む置換、または挿入からなる群よ
り選択され、この変化は対照ヌクレオチド配列の５’ま
たは３’末端の位置で、またはこれら末端位置の間のど
こで起こってもよく、対照配列のヌクレオチドの間に、
または対照配列内の１またはそれ以上の隣接する基中に
個々に点在していてもよい。ヌクレオチド変化の数は、
配列番号１のヌクレオチドの総数に各々同一性のパーセ
ントの百分率（１００で割った数）を掛け、その積を配
列番号１のヌクレオチドの総数から減ずるか、あるい
は： ｎ_n≦Ｘ_n−（Ｘ_n・ｙ） （ここで、ｎ_nはヌクレオチド変化の数であり、Ｘ_nは配
列番号１のヌクレオチドの総数であり、ｙは５０％では
０.５０、６０％では０.６０、７０％では０.７０、８
０％では０.８０、８５％では０.８５、９０％では０.
９０、９５％では０.９５、９７％では０.９７または１
００％では１.００であり、Ｘ_nとｙの積をＸ_nから減じ
る前に、その端数を切り捨てて最も近い整数とする）に
より決定される。配列番号２のポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドの変化は、このコード配列にてノン
センス、ミスセンスまたはフレームシフト変異を形成
し、このような変化の後のポリヌクレオチドによりコー
ドされるポリペプチドに変化をもたらす。

【００６２】同様に、本発明のポリペプチド配列は、配
列番号２の対照配列と同一、すなわち、１００％同一で
あってもよく、あるいは該ポリペプチド配列は対照配列
と比較してある一定の数までのアミノ酸が変わってお
り、％同一性が１００％より小さいものも包含する。か
かる変化は、少なくとも１個のアミノ酸の欠失、保存お
よび非保存置換を含む置換、または挿入からなる群より
選択され、この変化は対照ポリペプチド配列のアミノま
たはカルボキシ末端の位置で、またはこれら末端位置の
間のどこで起こってもよく、対照配列のアミノ酸の間
に、または対照配列内の１またはそれ以上の隣接する基
中に個々に点在していてもよい。所定の％同一性でのア
ミノ酸の変化の数は、配列番号２のアミノ酸の総数に各
々同一性のパーセントの百分率（１００で割った数）を
掛け、その積を配列番号２のアミノ酸の総数から減ずる
か、あるいは： ｎ_a≦Ｘ_a−（Ｘ_a・ｙ） （ここで、ｎ_aはアミノ酸変化の数であり、Ｘ_aは配列番
号２のアミノ酸の総数であり、ｙは７０％では０.７
０、８０％では０.８０、８５％では０.８５などであ
り、Ｘ_aとｙの積をＸ_aから減じる前に、その端数を切り
捨てて最も近い整数とする）により決定される。

【００６３】「融合タンパク質」は、２種の、無関係で
あることがしばしばである、融合した遺伝子またはその
フラグメントでコードされるタンパク質をいう。一例に
おいて、ＥＰ−Ａ−０４６４は、イムノグロブリン分子
の定常領域の種々の部分と、他のヒトタンパク質または
その部分を一緒にしてなる融合タンパク質を開示する。
多くの場合、融合タンパク質の一部としてイムノグロブ
リンFc領域を用いることが治療または診断にて有利であ
り、例えば、改良された薬物動態学特性が得られる［例
えば、ＥＰ−Ａ ０２３２２６２を参照のこと］。他
方、ある使用では、融合タンパク質が発現され、検出さ
れ、かつ精製された後、Fc部を除去できることが望まし
い。限定されるものではないが、本願明細書に列挙され
る特許および特許出願を含め、すべての文献は、たとえ
十分に開示されているとしても、各個々の文献が限定的
かつ個々に本明細書に組み込まれることを示していて
も、出典明示により本明細書の一部とするものである。

【００６４】配列情報 配列番号１

【表１】

【００６５】配列番号２

【表２】

【００６６】

【配列表】

（１）一般的情報 （ｉ）出願人： クリスティン・ケイ・キクリー （ｉｉ）発明の名称： インターロイキン−１β変換酵
素様アポトーシス （ｉｉｉ）配列の数：２ （ｉｖ）郵送先 （Ａ）名称：スミスクライン・ビーチャム・コーポレイ
ション （Ｂ）通り名：スウェードランド・ロード・７０９ （Ｃ）都市名：キング・オブ・プルシア （Ｄ）州名：PA （Ｅ）国名：USA （Ｆ）郵便番号：19406 （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）オペレーティング・システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：Windowsバージョン２.０用FastSE
Q （ｖ）現出願データ： （Ａ）出願番号：不明 （Ｂ）出願日：１９９８年２月１１日 （Ｃ）分類番号： （ｖｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号：６０／０４２０３０ （Ｂ）出願日：１９９７年３月２７日 （ｖｉｉｉ）代理人情報： （Ａ）名称：ハン、ウィリアム・ティ （Ｂ）登録番号：34344 （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＨ５００１３ （ｉｘ）テレコミュニケーション情報： （Ａ）電話番号：６１０−２７０−５２１９ （Ｂ）ファックス番号：610-270-5090 （Ｃ）テレックス番号：

【００６７】（２）配列番号１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２０７１塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号１： CCGGGTCGAC CCACGCGTCC GCGGACGCGT GGGCTCCTTC AAGGCAGTAG GAAGATACTA 60 AGCTTATTAT CTATGGCTGA AGACAAACAC AACAAAAACC CACTTAAGAT GTTGGAATCT 120 TTGGGCAAAG AACTCATTTC TGGCCTTTTG GATGACTTTG TGGAAAAAAA TGTCCTGAAA 180 TTGGAGGAAG AGGAGAAGAA AAAAATTTAT GATGCCAAAC TTCAAGACAA AGCCCGGGTC 240 TTGGTTGATT CTATACGACA GAAAAACCAA GAGGCAGGTC AAGTCTTTGT TCAAACTTTC 300 CTAAACATAG ACAAAAATTC CACCAGTATA AAAGCTCCTG AGGAAACTGT GGCTGGACCA 360 GATGAGTCAG TGGGATCTGC AGCTACCCTC AAGCTTTGCC CTCATGAAGA ATTCCTGAAA 420 CTGTGTAAAG AAAGGGCTGG AGAGATCTAT CCAATAAAGG AGAGAAAGGA CCGCACTCGT 480 CTGGCTCTCA TCATATGCAA CACAGAGTTT GATCATATGC CTCCCAGGAA TGGGGCTGCC 540 CTTGACATCC TTGGAATGAA GCAGCTGCTT GAGGGTCTTG GCTACACTGT GGAAGTGGAA 600 GAGAAACTCA CAGCCAGGGA CATGGAATCA GTGCTGTGGA AATTTGCTGC ACGTGAAGAG 660 CACAAATCCT CAGACAGTAC ATTCTTGGTG TTCATGTCTC ATGGCATCCT GGATGGGATC 720 TGTGGGACTA TGCACAGTGA GGAAGAACCA GATGTGTTAC CTTATGATAC CATCTTCCGG 780 ACATTCAACA ACCGTAATTG CCTCAGTCTA AAGGACAAAC CTAAAGTCAT CATTGTCCAG 840 GCCTGCAGAG GTGCAAATCG TGGGGAATTG TGGGTCAGTG ACTCTCCACC AGCCTTGGCA 900 GACAGCTTTT CACAGTCATC CGAGAACCTG GAAGAGGATG CTGTTTACAA GACCCATGTA 960 GAGAAGGACT TCATTGCTTT CTGTTCCTCA ACTCCACATA ATGTGTCCTG GAGAGACATA 1020 AAAAAAGGTT CTCTCTTCAT TACACGACTC ATCACATGCT TCCAAAAATA TGCTTGGTGC 1080 TGTCATCTTG AGGAAGTATT TAGGAAGGTA CAACAATCAT TTGAAAAACC AAATGTTAAA 1140 GCCCAGATGC CCACTGTTGA ACGACTCTCT ATGACAAGAT ATTTCTACCT CTTTCCTGGC 1200 AACTGAAAAT AAAAATCACA GGAAATTCAA CCATTTATCA GCTTCAAGAA GCATTTTTAT 1260 CAGCACAGCA TCCATGTTTA ACCTTTTGTC TTTCATTAAA GTGAAAACAT ATGAACTGTT 1320 CTTTGGGGTC CTCTAAGAAA GAATAGAATT TCAATTAAAA CAATGGATGG ATGGAAATAA 1380 AGTAGAAGAA GAAAACTGGA TTTTCTTGTT ATATTGCATA TAATGCCTGC ACTTTACTGA 1440 GTGAAGAGAA CTAGTCATGA CTTGCCCTCA GCAGCAGGGT GAAAGGAGAT GGTGCACATC 1500 TGGAGACAAG GACCAAAAAC TGGGTCACCT GCTCCTTTGA TCACTCATCA AACCTTGCAA 1560 CTAGAATTAT TTGGAAGAAT ATTTCTAATT TATTATTTAA CCAACATCAT AGGTCAAGTT 1620 CAATTTTTTT TCAGAAAGTT GTTATGGTAC CTATGCATCT TTCTTCTTAT CCATAAATTA 1680 ATTTGCTTTC TTGTTGATGA TTTTTCATTC CAGATTTCCA AGCTTCAGGA AAATTTTGTT 1740 ATTTAGCAAA CACTTGGTAA TTGTCTAAAA TAAATTGGGC CCTTTGATTT AAGATGGTAT 1800 AATTGGGTGT GCTTGTATAG AAAGACAGAC ATTATTAGAT ACAGAACATC CAAGAGTGTG 1860 GGAAATGTCA GCAATGGGAA AGAAAATGTT AAATTTTCTG GAAAGTGAAT GTCAGTAGAG 1920 GAATTTTAGC AACATGGCCA TCTGAGCCAC TGACTAAGGA GATGTACCAC TTCAATTACA 1980 TACATGCAGA ATGCTGAATA GATATATCAG GACATGCTGA ACTGTATTAC AAATAAAATG 2040 ATTCTCTAGA TATCAAAAAA AAAAAAAAAA A 2071

【００６８】（２）配列番号２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３７７アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号２： Ｍｅｔ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａｓｎ
Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｌｙｓ ２０ ２５
３０ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ａｌａ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｙｓ ５０ ５５
６０ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｖａｌ
Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ａｓｐ ６５ ７０
７５ ８０ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｐｒｏ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｐｒｏ ８５
９０ ９５ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｇｌｕ １００ １０５
１１０ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｒｇ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｉｌｅ １１５ １２０
１２５ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ
Ａｌａ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ １３０ １３５
１４０ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｓｎ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｌｅｕ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｇｌｕ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｇｌｕ
Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ａｌａ １８０ １８５
１９０ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ
Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｍｅｔ １９５ ２００
２０５ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ２１０ ２１５
２２０ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ
Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ａｓｎ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｌｙｓ
Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｇｌｎ ２４５
２５０ ２５５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｕ
Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｐｒｏ ２６０ ２６５
２７０ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｇｌｎ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ２７５ ２８０
２８５ Ａｓｐ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ
Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｃｙｓ ２９０ ２９５
３００ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｔｒｐ
Ａｒｇ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｓｅｒ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｃｙｓ
Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｃｙｓ ３２５
３３０ ３３５ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｌｙｓ ３４０ ３４５
３５０ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｔｈｒ
Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｔｈｒ ３５５ ３６０
３６５ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｓｎ ３７０ ３７５

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＸ Ａ６１Ｋ 39/395 ＡＢＮＮ ＡＥＤ 48/00 ＡＤＵ 39/00 ＡＢＹ Ｃ０７Ｋ 16/40 39/395 ＡＢＪ Ｃ１２Ｎ 1/15 ＡＢＮ 1/19 48/00 ＡＤＵ 1/21 Ｃ０７Ｋ 16/40 9/48 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/00 ＺＮＡＣ 1/19 21/08 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/50 ＺＮＡＰ 9/48 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｐ 21/00 ＺＮＡ 33/68 ＺＮＡ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＢ Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＢＡ Ｇ０１Ｎ 33/50 ＺＮＡ ＡＤＸ 33/53 ＡＥＤ 33/68 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列と、配列
   番号２の全長にわたって、少なくとも： （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有する群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる単
   離されたポリペプチド； （ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を有してなる単離さ
   れたポリペプチド；または （ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列である単離された
   ポリペプチド からなる群より選択される単離されたポリペプチド。
2. 【請求項２】（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列と、配列
   番号２の全長にわたって、少なくとも： （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列か
   らなる単離されたポリヌクレオチド； （ｉｉ）配列番号２のポリペプチドをコードするヌクレ
   オチド配列と、その全長にわたって、少なくとも： （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有するヌクレオチド配列からなる単離されたポリヌク
   レオチド； （ｉｉｉ）配列番号１のヌクレオチド配列と、配列番号
   １の全長にわたって、少なくとも： （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有するヌクレオチド配列を有してなる単離されたポリ
   ヌクレオチド； （ｉｖ）配列番号２のポリペプチドをコードするヌクレ
   オチド配列を有してなる単離されたポリヌクレオチド； （ｖ）配列番号１のポリヌクレオチドである単離された
   ポリペプチド；または （ｖｉ）ストリンジェントな条件下、適当なライブラリ
   ーを配列番号１の配列またはそのフラグメントを有する
   標識化プローブを用いてスクリーニングすることで得ら
   れる単離されたポリヌクレオチド； あるいは該単離されたポリヌクレオチドに相補的なヌク
   レオチド配列を有してなるポリヌクレオチドからなる群
   より選択される単離されたポリペプチド。
3. 【請求項３】 請求項１のポリペプチドに対して免疫特
   異的な抗体。
4. 【請求項４】（ｉ）請求項１のポリペプチドの活性また
   は発現の強化を必要とする対象の治療方法であって、 （ａ）該ポリペプチドに対して治療上有効量のアゴニス
   トを対象に投与し；および／または （ｂ）インビボにて該ポリペプチド活性を生成するよう
   な形態にて、該ポリペプチドをコードするヌクレオチド
   配列を有してなる単離されたポリヌクレオチドを対象に
   付与することからなる方法、または （ｉｉ）請求項１のポリペプチドの活性または発現の阻
   害を必要とする対象の治療方法であって、 （ａ）該ポリペプチドに対する治療上有効量のアンタゴ
   ニストを対象に投与し、および／または （ｂ）該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の
   発現を阻害する核酸分子を対象に投与し、および／また
   は （ｃ）そのリガンド、基質またはレセプターについて該
   ポリペプチドと競合する治療上有効量のポリペプチドを
   対象に投与することからなる方法。
5. 【請求項５】 対象での請求項１のポリペプチドの発現
   または活性に関連付けられる対象の疾患または罹病し易
   さの診断方法であって、 （ａ）該対象のゲノム中の該ポリペプチドをコードする
   ヌクレオチド配列における変異の有無を測定し；および
   ／または （ｂ）該対象から由来の試料中の該ポリペプチドの発現
   の存在または量について分析する ことからなる方法。
6. 【請求項６】 請求項１のポリペプチドの機能を刺激ま
   たは阻害する化合物を同定するためのスクリーニング法
   であって、 （ａ）候補化合物と直接または間接的に結合した標識に
   より、候補化合物と該ポリペプチド（あるいは該ポリペ
   プチドを有する細胞または膜）との結合またはその融合
   タンパク質を測定する方法、 （ｂ）標識された競合物質の存在下で、候補化合物と該
   ポリペプチド（あるいは該ポリペプチドを有する細胞ま
   たは膜）との結合またはその融合タンパク質を測定する
   方法、 （ｃ）該ポリペプチドを有する細胞または細胞膜に対し
   て適当な検出系を用い、該候補化合物が該ポリペプチド
   の活性化または阻害により発せられるシグナルを生じる
   かどうかを試験する方法、 （ｄ）候補化合物を請求項１のポリペプチドを含有する
   溶液と混ぜて混合物を形成し、その混合物中のポリペプ
   チドの活性を測定し、その混合物の活性を標体と比較す
   る方法、または （ｅ）例えば、ELISAアッセイを用い、候補化合物の、
   細胞中の該ポリペプチドをコードするmRNAおよび該ポリ
   ペプチドの産生に対する効果を検出する方法 からなる群より選択される方法。
7. 【請求項７】 請求項１のポリペプチドのアゴニストま
   たはアンタゴニスト。
8. 【請求項８】 適合可能な宿主細胞にある場合に、請求
   項１のポリペプチドの産生能を有するポリヌクレオチド
   からなる発現系。
9. 【請求項９】 請求項８の発現系または請求項１のポリ
   ペプチドを発現する細胞膜を有してなる宿主細胞。
10. 【請求項１０】 請求項１のポリペプチドを産生するの
    に十分な条件下で、請求項９の宿主細胞を培養し、該ポ
    リペプチドをその培養体から回収することからなる請求
    項１のポリペプチドの産生法。
11. 【請求項１１】 宿主細胞が、適用な培養条件下、請求
    項１のポリペプチドを産生するように、細胞を請求項８
    の発現系で形質転換またはトランスフェクションするこ
    とからなる請求項９に記載の宿主細胞の産生法。
12. 【請求項１２】 請求項１１の方法により産生される組
    換え宿主細胞または請求項１のポリペプチドを発現する
    その細胞膜。