JPH10500662A

JPH10500662A - 免疫アジュバントとして少ラメラ脂質小胞を含むワクチン

Info

Publication number: JPH10500662A
Application number: JP7522336A
Authority: JP
Inventors: ディー．ライト，クレイグ; エフ．エイチ．ウォラック，ドナルド
Original assignee: マイクロパックインコーポレイテッド
Priority date: 1994-02-24
Filing date: 1995-01-11
Publication date: 1998-01-20
Anticipated expiration: 2021-10-25
Also published as: CA2183435C; JP3836874B2; EP0746338A1; AU1566095A; CA2183435A1; DE69533693T2; WO1995022989A1; EP0746338A4; BR9506885A; EP0746338B1; ATE280585T1; DE69533693D1

Abstract

(57)【要約】本発明は、好ましくはインフルエンザに対する免疫を付与するアジュバント化ワクチン、及びアジュバント化ワクチンの製造方法を特徴とし、ここに、このアジュバントは、脂質小胞であり、好ましくは、非リン脂質少ラメラ脂質小胞である。このアジュバントの中央空隙内に抗原を封入することができ、或はこのアジュバントと溶液にて混合することができる。その上、このアジュバントは第２のアジュバントを運んで、更に、免疫応答を改善することができる。

Description

【発明の詳細な説明】免疫アジュバントとして少ラメラ脂質小胞を含むワクチン発明の背景本発明は、脂質小胞特に非リン脂質小胞がアジュバントとして働くアジュバント化ワクチン及び該ワクチンの製造法に関係する。免疫アジュバントは、抗原に対する免疫応答を増大させるワクチンの成分である。免疫アジュバントは、とりわけマクロファージを抗原に誘因し、次いで、その抗原を局所的リンパ節に提供することにより機能し、有効な抗原応答を開始する。アジュバントは又、抗原に対するキャリアー自身としても作用する。多くの公知の免疫アジュバント例えば完全フロイントアジュバント、みょうばん、水酸化アルミニウム及び不完全フロイントアジュバントは、抗原応答を開始するのに有効ではあるが、人体に望ましくない反応例えば注射部位における炎症を生じる。これらの副作用は、ヒトにおけるかかるアジュバントの使用を妨げ、別の免疫アジュバントの探究へと導いた。脂質小胞は、両親媒性物質例えば界面活性剤又はリン脂質により作られた実質的に球状の構造である。これらの球状小胞の脂質は、一般に、脂質二重層の形態例えば二重層間に水性容積を含む脂質二重層の多重タマネギ様シェルに組織化されている。ある型の脂質小胞は、様々な物質を封入して輸送するために使用することのできる構造化されてない中央空隙を有する。少ラメラ脂質小胞は、例えば、大きい、未構造化中央空隙を囲む２〜１０の周囲二重層を有する。最近まで、リポソーム技術は、主としてリン脂質からなる小胞に関するものであった。これは、主として、リン脂質が天然の膜の一次構造成分であり、それ故天然の膜を研究するためのモデル系として使用されてきたからである。しかしながら、リン脂質を合成膜として用いることに関しては多くの問題がある。イン・ビボ環境に置かれたリン脂質リポソームは、急速に分解される。その上、リン脂質は不安定であり、精製又は合成すると高価になる。更に、古典的リン脂質リポソームは、少ラメラ小胞ではなく多重ラメラ形態であって、特に親油性物質に対する乏しい運搬容量を有し、抗酸化剤と共に暗黒中で親油化しない限り棚もちが悪い。最後に、リン脂質は、殆どの製薬又はワクチン用に使うには分解するのが早過ぎる。これらの理由の故に、市販の非リン脂質両親媒性物質で製造したリポソームに対する関心が高まっている（例えば、米国特許第４，２１７，３４４号、米国特許第４，９１７，９５１号及び米国特許第４，９１１，９２８号を参照されたい）。これらの分子は、疎水性の「テイル」に結合した親水性のヘッド基を有し、長鎖脂肪酸、長鎖アルコール及びそれらの誘導体、長鎖アミン並びにポリオールスフィンゴ及びグリセロ脂質から誘導される。市販の両親媒性界面活性剤には、例えば、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテルのＢＲＩＪファミリー、ＳＰＡＮソルビタン脂肪酸エステル及びソルビタン脂肪酸エステルのＴＷＥＥＮポリオキシエチレン誘導体（すべて、デラウェア、Wilmington在、ICI Americas,Inc.より入手可能）が含まれる。かかる両親媒性物質を含む少ラメラ小胞は、水溶性及び水不混和性物質に対して高い運搬特性を提供する。水不混和性物質に対する高い容量は、古典的リン脂質多重ラメラリポソームを超える独特の利点を表す。少ラメラ脂質小胞は、広範囲の種々のリン脂質及び非リン脂質界面活性剤を、それらの一次構造物質として含むことができる。少ラメラ脂質小胞は、高脂質含量を有する物質好ましくは非リン脂質物質からなる実質的に球状の構造であり、脂質二重層形態に組織化されている。これらの２〜１０の周囲二重層は、それらの脂質二重層間に散在し又、不定形の中心空隙内にも封入された水性容積を封入する。或は、不定形の中央空隙は、実質的に、水不混和性物質例えば油又はワックスで満たすことができる。少ラメラ脂質小胞は、容易に未構造化中央空隙を大量の水性又は油性物質の輸送に適合させ得るので輸送用ビヒクルとしての利点を有する。上記のように、特異的免疫応答を刺激するには、２つの成分即ち抗原又は免疫学的に特異的な物質及びアジュバント（抗原に対する免疫応答を増大させる成分）が必要である。慣用のアジュバントは、抗原に対するビヒクルとして及び非特異的な免疫学的刺激として働くことができる。本発明者は、少ラメラ脂質小胞が有効な免疫学的アジュバントであることを発見した。従って、インフルエンザに対して免疫付与するためのアジュバント化したワクチンを提供することは、この発明の目的である。この発明の他の目的は、哺乳動物において免疫応答を剌激するアジュバント化したワクチンを提供することであり、ここに、このアジュバントは、非特異的免疫刺激剤、アジュバント／抗原キャリアーとして又は化学的アジュバントのキャリアーとして作用する非リン脂質少ラメラ脂質小胞である。この発明の更なる目的は、哺乳動物におけるウイルス感染の治療に有用なアジュバント化ワクチンの製造方法を提供することである。この発明のこれらの及び他の目的及び特徴は、下記の説明及び請求の範囲から明らかとなろう。発明の要約本発明は、アジュバント化ワクチン（好ましくはインフルエンザに対する免疫付与のためのアジュバント化ワクチン）及びアジュバント化ワクチンの製造方法を特徴とし、ここに、アジュバントは脂質小胞好ましくは非リン脂質少ラメラ脂質小胞である。このアジュバントの中央空隙内に抗原を封入し、或は抗原をアジュバントを用いて溶液に混合させることができる。更に、このアジュバントは、第２のアジュバントを運んで更に免疫応答を改善することができる。抗原は、好ましくは、インフルエンザ抗原であり、ホルマリン不活性化した全ウイルス、ホルマリン不活性化したウイルスサブユニット、又は組換えＤＮＡ技術により生成した抗原が含まれ得る。一具体例において、アジュバント化ｆｌｕワクチンを製造するが、該例により、好適アジュバントである少ラメラ脂質小胞を別個に製造し、次いで、このアジュバントを抗原と混合する。或は、抗原を封入している少ラメラ脂質小胞を形成することによりアジュバント化ワクチンを製造することができる。この発明の一具体例におけるアジュバントは、脂質二重層を有しない大きい不定形の中央空隙を囲む、水性層により分離され実質的に球形のシェルの形態に配置された約２〜１０の二重層を有する少ラメラ脂質小胞である。これらの脂質二重層は、好ましくは、一次脂質成分として、次の非リン脂質物質の１つ以上を有する：ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレングリセリルモノ及びジエステル、グリセリルモノ及びジステアレート、シュークロースジステアレート、プロピレングリコールステアレート、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アシルアミド、グリセリルモノ及びジエステル、ジメチルアシルアミン、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪アルコール、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀グリコールモノエステル、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪酸、及びこれらの混合物。一層好ましくは、この混合物は、更に、コレステロール、コレステロール誘導体、ヒドロコーチゾン、フィトステロール及びこれらの混合物からなる群より選択する少なくとも１種のステロール、電荷生成剤、及びこれらの小胞に取込まれるべき任意の脂溶性又は水溶性物質を含む。本発明のこれらの小胞は、抗原を封入するために用いることのできる中央空隙を有し、水溶性物質又は水不混和性の油状溶液の何れかを運ぶ。この水不混和性油状溶液は、二重層の形成に用いられる水不混和性及び脂質不混和性の両方の物質で作られる。この不定形中央空隙に見出される水不混和性油状物質には、大豆油、スクアレン油、スクアラン油、ゴマ油、オリーブ油、キャノラ油（canola o il）、コーン油、菜種油、紅花油、ヒマワリ油、魚油、ペトロラタム、アボカド油、トリグリセリド油脂、香油、水不溶性ビタミン、及びこれらの混合物が含まれ得る。これらの物質は、二重層を形成する特定の脂質の利用により生ずる利益に加えて薬理学的利益を提供する。この発明は、更に、アジュバント化ワクチンの製造方法を特徴とする。このアジュバントは、水又は油充填小胞例えば水不混和性油状溶液で満たされた不定形中央空隙を有する小胞を含んでよく、これらは、米国特許第４，９１１，９２８号に開示された「ホットローディング」技術又は米国特許第５，１６０，６６９号に記載された「コールドローディング」技術の何れかを用いて形成することができる（これらの開示を、本明細書中に、参考として援用する）。何れの場合においても、非リン脂質物質を脂質二重層に取込むべき任意のステロール又は親油性物質と共にブレンドすることにより脂質相を形成して均一な脂質相を形成する。「ホットローディング」技術においては、これらの小胞に封入すべき任意の水不混和性油状物質を、既に形成した脂質相中でブレンドして親油相を形成する。これらの小胞中に封入されるべき油溶性又は油懸濁可能性の抗原を、最初に油に分散させる。用語「分散させる」は、ここで用いる場合は、溶解又は懸濁液若しくはコロイドを形成して流動相を生成することを含む。一度親油相ができたならば、それを水性相（例えば、水、塩溶液、又は脂質を水和するのに用いられる任意の他の水溶液）（抗原を含んでもよい）と、剪断混合条件下でブレンドしてアジュバントを形成する。「剪断混合」とは、ここで用いる場合、１ｍｍのオリフィスを通る５〜５０ｍ／秒の相対流に等しい剪断を意味する。別法において、このワクチンを、Wallach等の米国特許第５，１６０，６６９号に記載された「コールドローディング」技術によって、このアジュバントの不定形中央空隙内に取込むことができる。この発明の範囲及び応用は、下記の詳細な説明から明らかとなろう。図面の簡単な説明図１は、マウスにおけるアジュバント化インフルエンザＡワクチンの１回の接種の４２日後の平均ＩＦＡ結果のグラフである。図２は、ウサギにおけるアジュバント化インフルエンザＡワクチンの２回の接種の２７日後の平均ＩＦＡ値を示している。図３は、ウサギにおけるアジュバント化インフルエンザＡワクチンの２回の接種の２７日後の平均ＨＩ値を示している。発明の詳細な説明本発明は、ワクチンを接種した哺乳動物における抗原応答を増大させる少ラメラ脂質小胞のワクチンにおけるアジュバントとしての利用に関係する。これらのワクチンは、好ましくは、非リン脂質小胞であり、抗原は、好ましくは、インフルエンザ抗原である。少ラメラ脂質小胞は、免疫応答を種々の方法で、非特異的刺激剤として、抗原のキャリアーとして、更なるアジュバントのキャリアーとして及びこれらの組合せとして剌激するように作用する。少ラメラ脂質小胞は、例えば、抗原を、予備形成した小胞と、その抗原がそれらの小胞に対して細胞外に残るように混合することによりワクチンを製造する場合には、非特異的免疫刺激剤として作用する。この小胞の中央空隙内に抗原を封入することにより、これらの小胞は、免疫刺激剤及び抗原のキャリアーの両者として作用する。或は、これらの小胞は、この出願が部分継続である米国特許出願第０８／００５，００８号（１９９３年１月１５日出願、表題「Method of Inhibiting Viral Reprodu ction」）に記載されたように、抗原と融合することにより、抗原のキャリアーとして作用することができる。この具体例において、抗原（エンベロープのあるウイルス）を少ラメラ脂質小胞と混合するとき、このウイルスとアジュバントは融合し、核酸は変性してウイルスは不活性化される。この不活性化ウイルス／アジュバントハイブリッドは、次いで、ワクチンとして有用である。その上、この小胞は、更なるアジュバントを、中央空隙又は二重層間にて運ぶように働くことができる。下記の実施例は、この発明の効果を明確に説明するであろう。実施例１インフルエンザＡ抗原Ｈ３Ｎ２（Ｂｅｉｊｉｎｇ）を含むアジュバント化ワクチンを、非リン脂質少ラメラ脂質小胞をアジュバントとして用いて製造した。２つの配合物（即ち、非特異的免疫刺激剤及びキャリアーアジュバント配合物）のアジュバント活性を、各組成物の平均間接蛍光アッセイ（ＩＦＡ）を用いて、図１に示すように、抗原単独の該活性と比較した。アジュバント配合物を、自動化シリンジ機械、特に５ｃｃシリンジ機械を用いて製造した。このアジュバントは又、米国特許第４，９１１，９２８号に示した一般的手順によっても作成することができた。簡単に言えば、これらの小胞壁の脂質成分を流動状態にまで加熱し、シリンジ機械の第１構成要素中に置いた。水性成分（この場合、抗原Ｆｌｕｚｏｎｅ（商標）を含んでいる（下記参照））を加熱してシリンジ機械の第２構成要素中に置いた。次いで、これらの物質を、剪断混合を用いて、小胞が形成されて抗原が中央空隙中に封入されるまで混合した。しかしながら、この実施例及び以下の実施例においては、米国特許第４，９１１，９２８号に記載された手動の技術（活栓で接続された２つのシリンジ）又はフローデバイス例えばＮｏｖａＭｉｘ（商標）小胞形成機を含む適当な剪断を達成する任意の方法を用いることができる。ＮｏｖａＭｉｘ（商標）システムの基本的詳細は、米国特許第４，８９５，４５２号に記載されており、その開示を本明細書中に参考として援用する。この実施例で用いた抗原は、Ｆｌｕｚｏｎｅ（商標）（Connaughtからのホルマリン不活性化した洗浄剤抽出したインフルエンザワクチン）であった。この実施例で用いたアジュバントの配合を、下記の表１及び２に示す。アジュバントが抗原を封入する第１のワクチン製剤のために、表１の配合に従ってワクチンを作成した。希釈剤が水であり、抗原を含まない第２のワクチン製剤を、下記の表２の配合に従って作成した。第２のワクチン製剤のためのアジュバントを、上記の方法により製造し、次いで、１：１０に希釈する。希釈したアジュバントのうち、１００μｌを、各動物への注射用に、２．４μｇのＦｌｕｚｏｎｅ抗原に加える。１０匹の７週齢のＣ₃Ｈ雌マウスの３グループに、各ワクチン製剤を注射し、その結果、マウス当り２．４μｇの抗原が与えられた。このマウスの第１のグループは、抗原単独の１回の注射を受け、第２グループは、アジュバントに取込ませた抗原の１回の注射を受け、そして、第３のマウスのグループは、１〜１０倍希釈のアジュバントと混合させた抗原の１回の注射を受けた。４２日目における平均ＩＦＡを示す図１から分かるように、これらのアジュバント化ワクチンは、単独の抗原を有意に超えて抗原応答を改善した。抗原を封入しているアジュバントは、単独の抗原を超える対数増加を示し、希釈したアジュバントは、７／１０対数増加を示す。実施例２この実施例においては、Hazelton Labsからのニュージーランドアルビノウサギを、アジュバント化インフルエンザＡ（Ｂｅｉｊｉｎｇ）Ｈ３Ｎ２ワクチンで免疫化して、本発明のアジュバント配合物を単独の抗原と及びヒトにおける使用に適さない他の２つのアジュバントと比較した。６匹のウサギの各グループ（雄３匹及び雌３匹）に、各動物当り９．８μｇのインフルエンザＡＨ３Ｎ２抗原を注射した。この抗原は、ニワトリ卵にて生成された全ウイルス製剤であり、ホルマリン不活性化して遠心分離及びカラム濾過により精製したものである。それぞれの場合に、１／２ミリリットルのワクチンを、各ウサギに０日目及び１４日目に筋肉内注射した。図２及び３のデータを、２７日目の採血から測定した。第１グループのウサギは単独の抗原を受け、第２グループのウサギは、蛋白質１μｇ当り１６μｇのみょうばんでアジュバント化された抗原（Resorptar Armo ur Pharmaceuticals）を受けた。第３グループは、１：１混合物（ｖ／ｖ）不完全フロイント（Sigma Chemical）でアジュバント化した抗原を受けた。第４グループのウサギは、実施例１に記載のようにして製造した下記の表３に示した配合により製造した少ラメラ脂質小胞に封入した抗原を受け、第５グループは、アジュバント特に下記の表４に示した配合によって製造した少ラメラ脂質小胞を伴う溶液１：１（ｖ／ｖ）にて９．８μｇの抗原を受けた。図２及び３から分かるように、本発明によるアジュバント化ワクチンは、公知のアジュバントと等しいか又は増大した抗体応答及び抗原性を有する。平均ＩＦＡ結果を上記のように計算した。平均ＨＩ（血球凝集阻止）アッセイ値を、当業者に公知のニワトリ赤血球を用いる試験から得たが、この結果は、このワクチンの保護能力と相関している。前述の実施例は、単に、説明のためのものであり、当業者は、同じ結果を達成する他の材料及び方法を決定することができる。かかる他の材料及び方法は、後述の請求の範囲に含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物において、イン・ビボで、インフルエンザに対する抗原応答を生成するためのワクチンであって、該ワクチンは、抗原的に有効量のインフルエンザ抗原及びアジュバントを含み、該アジュバントは、非リン脂質物質を一次壁形成成分として有する少ラメラ脂質小胞を含み、ここに、該少ラメラ脂質小胞は不定形の中央空隙を囲む２〜１０の二重層を有し、そして該非リン脂質物質を、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレングリセリルモノ及びジエステル、グリセリルモノ及びジステアレート、シュークロースジステアレート、プロピレングリコールステアレート、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アシルアミド、グリセリルモノ及びジエステル、ジメチルアシルアミン、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪アルコール、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀グリコールモノエステルＣ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪酸、並びに該非リン脂質物質の混合物よりなる群から選択する、上記のワクチン。２．前記の抗原及び前記のアジュバントを前記のワクチン中で混合する、請求項１に記載のワクチン。３．前記の抗原を前記のアジュバント中に封入する、請求項１に記載のワクチン。４．前記の抗原を前記の不定形中央空隙内に封入する、請求項１に記載のワクチン。５．前記の抗原を、ホルマリン不活性化全ウイルスから誘導した抗原、ホルマリン不活性化ウイルスサブユニットから誘導した抗原、及び組換えＤＮＡ技術により生成した抗原よりなる群から選択する、請求項１に記載のワクチン。６．前記の抗原を、ホルマリン不活性化した洗浄剤抽出したインフルエンザウイルス及びインフルエンザＡＨ３Ｎ２よりなる群から選択する、請求項５に記載のワクチン。７．前記の少ラメラ脂質小胞が、更に、コレステロール、コレステロール誘導体、ヒドロコーチゾン、フィトステロール及びこれらの混合物よりなる群から選択する少なくとも１種のステロールを含む、請求項１に記載のワクチン。８．前記の少ラメラ脂質小胞が、水不混和性油状物質を含む不定形中央空隙を含む、請求項１に記載のワクチン。９．前記の水不混和性油状物質を、大豆油、スクアレン油、ゴマ油、オリーブ油、キャノラ油、コーン油、菜種油、紅花油、ヒマワリ油、魚油、ペトロラタム、アボカド油、トリグリセリド油脂、香油、水不溶性ビタミン及びこれらの混合物よりなる群から選択する、請求項８に記載のワクチン。１０．哺乳動物をインフルエンザに対して免疫にする方法であって、該方法は、該動物に、インフルエンザ抗原及びアジュバントを含むワクチンを投与するステップを含み、ここに該アジュバントは非リン脂質少ラメラ脂質小胞を含み、該非リン脂質少ラメラ脂質小胞は、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレングリセリルモノ及びジエステル、グリセリルモノ及びジステアレート、シュークロースジステアレート、プロピレングリコールステアレート、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アシルアミド、グリセリルモノ及びジエステル、ジメチルアシルアミン、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪アルコール、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀グリコールモノエステル、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪酸、並びに該非リン脂質物質の混合物よりなる群から選択する非リン脂質物質を含む、上記の方法。１１．前記の投与ステップを、前記のワクチンの筋肉内投与、腹腔内投与、及び経口投与よりなる群から選択する、請求項１０に記載の方法。１２．前記の抗原及び前記のアジュバントを前記のワクチン中で混合する、請求項１０に記載の方法。１３．前記の抗原を前記のアジュバント内に封入する、請求項１０に記載の方法。１４．前記の少ラメラ脂質小胞が不定形中央空隙を囲む２〜１０の二重層を有する、請求項１０に記載の方法。１５．前記の抗原を前記の不定形中央空隙内に封入する、請求項１４に記載の方法。１６．前記の抗原を、ホルマリン不活性化全ウイルスから導いた抗原、ホルマリン不活性化ウイルスサブユニットから導いた抗原、及び組換えＤＮＡ技術により生成した抗原よりなる群から選択する、請求項１０に記載の方法。１７．前記の抗原を、ホルマリン不活性化した洗浄剤抽出したインフルエンザウイルス及びインフルエンザＡＨ３Ｎ２よりなる群から選択する、請求項１０に記載の方法。１８．前記の少ラメラ脂質小胞が、更に、コレステロール、コレステロール誘導体、ヒドロコーチゾン、フィトステロール、及びこれらの混合物よりなる群から選択する少なくとも１種のステロールを含む、請求項１０に記載の方法。１９．前記の少ラメラ脂質小胞が、水不混和性油状物質を含む不定形中央空隙を含む、請求項１０に記載の方法。２０．前記の水不混和性油状物質を、大豆油、スクアレン油、ゴマ油、オリーブ油、キャノラ油、コーン油、菜種油、紅花油、ヒマワリ油、魚油、ペトロラタム、アボカド油、トリグリセリド油脂、香油、水不溶性ビタミン、及びこれらの混合物よりなる群から選択する、請求項１９に記載の方法。２１．下記のステップを含む、アジュバント化インフルエンザワクチンの製造方法：不定形中央空隙を囲む２〜１０の脂質二重層を有する非リン脂質少ラメラ脂質小胞であって、該非リン脂質少ラメラ脂質小胞が、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレングリセリルモノ及びジエステル、グリセリルモノ及びジステアレート、シュークロースジステアレート、プロピレングリコールステアレート、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アシルアミド、グリセリルモノ及びジエステル、ジメチルアシルアミン、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪アルコール、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀グリコールモノエステル、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪酸、並びに該非リン脂質物質の混合物よりなる群から選択する非リン脂質物質を含む、上記の非リン脂質少ラメラ脂質小胞を含むアジュバントを形成し、そして該アジュバントをインフルエンザ抗原と混合する。２２．前記の抗原を前記のアジュバントの不定形中央空隙内に封入する、請求項２１に記載の方法。２３．前記の抗原を、ホルマリン不活性化全ウイルスから導いた抗原、ホルマリン不活性化ウイルスサブユニットから導いた抗原、及び組換えＤＮＡ技術により生成した抗原よりなる群から選択する、請求項２１に記載の方法。２４．前記の抗原を、ホルマリン不活性化した洗浄剤抽出したインフルエンザウイルス及びインフルエンザＡＨ３Ｎ２よりなる群から選択する、請求項２１に記載の方法。２５．前記の少ラメラ脂質小胞が、更に、コレステロール、コレステロール誘導体、ヒドロコーチゾン、フィトステロール、及びこれらの混合物よりなる群から選択する少なくとも１種のステロールを含む、請求項２１に記載の方法。２６．前記の少ラメラ脂質小胞が、水不混和性油状物質を含む不定形中央空隙を含む、請求項２１に記載の方法。２７．前記の水不混和性油状物質を、大豆油、スクアレン油、ゴマ油、オリーブ油、キャノラ油、コーン油、菜種油、紅花油、ヒマワリ油、魚油、ペトロラタム、アボカド油、トリグリセリド油脂、香油、水不溶性ビタミン、並びにこれらの混合物よりなる群から選択する、請求項２９に記載のワクチン。２８．アジュバント化インフルエンザワクチンの製造方法であって、該方法が次のステップ：非リン脂質物質を含む親油相を調製し、ここに、該非リン脂質物質は、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレングリセリルモノ及びジエステル、グリセリルモノ及びジステアレート、シュークロースジステアレート、プロピレングリコールステアレート、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アシルアミド、グリセリルモノ及びジエステル、ジメチルアシルアミン、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪アルコール、Ｃ₁₂ 〜Ｃ₂₀グリコールモノエステル、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪酸、並びに該非リン脂質物質の混合物よりなる群から選択し、インフルエンザ抗原を含む水相を調製し、該親油相を該水相と剪断混合して、不定形中央空隙を囲む２〜１０の脂質二重層を有する少ラメラ脂質小胞を形成し、ここに該抗原は該空隙に封入されることを含む、上記の方法。２９．前記の抗原を、ホルマリン不活性化全ウイルスから導いた抗原、ホルマリン不活性化ウイルスサブユニットから導いた抗原、及び組換えＤＮＡ技術により生成した抗原よりなる群から選択する、請求項２８に記載の方法。３０．前記の抗原を、ホルマリン不活性化した洗浄剤抽出したインフルエンザウイルス及びインフルエンザＡＨ３Ｎ２よりなる群から選択する、請求項２８に記載の方法。３１．前記の親油相が、更に、コレステロール、コレステロール誘導体、ヒドロコーチゾン、フィトステロール、及びこれらの混合物よりなる群から選択する少なくとも１種のステロールを含む、請求項２８に記載の方法。３２．該少ラメラ脂質小胞の不定形中央空隙が水不混和性油状物質を含む、請求項２８に記載の方法。３３．前記の水不混和性油状物質を、大豆油、スクアレン油、ゴマ油、オリーブ油、キャノラ油、コーン油、菜種油、紅花油、ヒマワリ油、魚油、ペトロラタム、アボカド油、トリグリセリド油脂、香油、水不溶性ビタミン、並びにこれらの混合物よりなる群から選択する、請求項３２に記載の方法。３４．アジュバントが、水不混和性油状物質及び抗原を含む実質的に不定形の中央空隙を有する少ラメラ脂質小胞を含む、アジュバント化ワクチンを形成する方法であって、該少ラメラ脂質小胞は、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレングリセリルモノ及びジエステル、グリセリルモノ及びジステアレート、シュークロースジステアレート、プロピレングリコールステアレート、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アシルアミド、グリセリルモノ及びジエステル、ジメチルアシルアミン、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪アルコール、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀グリコールモノエステル、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪酸、並びにこれらの混合物よりなる群から選択する非リン脂質物質を含み、該方法は、下記のステップ：不定形中央空隙内に水性物質を有する少ラメラ脂質小胞を予備形成し、該少ラメラ脂質小胞は、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレングリセリルモノ及びジエステル、グリセリルモノ及びジステアレート、シュークロースジステアレート、プロピレングリコールステアレート、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アシルアミド、グリセリルモノ及びジエステル、ジメチルアシルアミンＣ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪アルコール、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀グリコールモノエステル、Ｃ₁₂〜Ｃ₂₀脂肪酸、並びに該非リン脂質物質よりなる群から選択する非リン脂質物質を含み、そして該予備形成した少ラメラ脂質小胞を、剪断混合条件下で、該中央空隙に取り込まれるべき抗原を含む水不混和性物質と、該水不混和性物質と該抗原とが該予備形成した小胞に取り込まれ、それにより該少ラメラ脂質小胞の不定形中央空隙が実質的に該水不混和性物質で満たされるように混合することを含む、上記の方法。３５．前記の少ラメラ脂質小胞に取込まれない任意の前記の水不混和性物質及び抗原から、前記の少ラメラ脂質小胞を分離するステップを、更に含む、請求項３４に記載の方法。３６．前記の少ラメラ脂質小胞が、不定形中央空隙を囲む２〜１０の二重層を有する、請求項３４に記載の方法。３７．前記の抗原を、ホルマリン不活性化全ウイルスから導いた抗原、ホルマリン不活性化ウイルスサブユニットから導いた抗原、及び組換えＤＮＡ技術により生成した抗原よりなる群から選択する、請求項３４に記載の方法。３８．前記の抗原を、ホルマリン不活性化した洗浄剤抽出したインフルエンザウイルス及びインフルエンザＡＨ３Ｎ２よりなる群から選択する、請求項３４に記載の方法。３９．前記の少ラメラ脂質小胞が、更に、コレステロール、コレステロール誘導体、ヒドロコーチゾン、フィトステロール、及びこれらの混合物よりなる群から選択する少なくとも１種のステロールを含む、請求項３４に記載の方法。４０．前記の水不混和性油状物質を、大豆油、スクアレン油、ゴマ油、オリーブ油、キャノラ油、コーン油、菜種油、紅花油、ヒマワリ油、魚油、ペトロラタム、アボカド油、トリグリセリド油脂、香油、水不溶性ビタミン、及びこれらの混合物よりなる群から選択する、請求項３４に記載の方法。