JPH10501818A - 鋳型指向性環化 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 新規で効率的な固体支持体上でのペプチドの環化方法を開示する。本方法は、環状ペプチドを調製、および、スクリーニング用の環状ペプチドライブラリーの調製に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 鋳型指向性環化 発明の分野 本発明は、環状ペプチド、固体物に結合した環状ペプチド、および環状ペプチ ドライブラリーの調製方法に関する。 背景 ペプチドは、２つのチオール含有残基を必要とするジスルフィド結合形成、２ つの側鎖官能基の間のアミドまたはエステル結合形成、１つの側鎖官能基および 骨格αアミノまたはカルボキシ基の間のアミドまたはエステル結合形成、または 骨格αアミノまたはカルボキシ基の間のアミド結合形成といった多くの方法によ って環状構造に変換できる（環状ホモデティックペプチド）。伝統的に、これら の様々な環状化反応は高度に希釈された溶液中で行われた。例えば、ブラディ（ Brady）ら、ジェイ・オーグ・ケム（J．Org．Chem.）、１９７９年、第４４巻、 ３１０１−３１０５頁、およびマクマレー（McMurray）ら、テット・レット（Te t．Lett.）、１９９３年、第３４巻、８０５９−８０６２頁、参照。新規樹脂お よび直交保護基法の出現とともに、ペプチドを固体支持体に付着させたまま、こ れらの環化のうちいくつかを行うことができるようになった。ほとんどの固相ペ プチド合成法はカルボキシ末端の固体支持体への付着を必要とするので、環化が 側鎖官能基および／またはαアミノ基を必要とする場合、これはもっとも適して いる。例えば、側鎖アミド結合はアミン含有およびカルボキシル含有側鎖の間で 形成され、一方、ペプチドは樹脂に付着したままである。かくして、シラー（Sc hiller）ら、ジェイ・メド・ケム（J．Med．Chem.）、１９８５年、第２８巻、 １７６６−１７７１頁、ブービエ（Bouvier）ら、ジェイ・メド・ケム（J．Med ．Chem.）、１９９２年、第３５巻、１１４５−１１５５頁、プラウ・エス（Pla ue，S.）、イント・ペプチド・プロテイン・レス（Int．Peptide Protein Res.）、１９９０年、第３５巻、５１０−５１７頁、およびブルームバ ーグ（Bloomberg）ら、テット・レット（Tet．Lett.）、１９９３年、第３４巻 、４７０９−４７１２頁は、ペプチドの側鎖官能基の樹脂上環化の方法を記載し ている。同様に、ジスルフィド結合を介した環化ペプチドについて、プロックス (Ploux)ら、イント・ペプチド・プロテイン・レス(Int.Peptide Protein Res.) 、１９８７年、第２９巻、１６２−１６９頁、および、アルベリシオ（Alberici o）ら、イント・ペプチド・プロテイン・レス（Int．Peptide Protein Res.）、 １９９１年、第３７巻、４０２−４１３頁は、ペプチドが樹脂に付着したままの ペプチドの環化に関する方法を記載している。 環状ホモデティックペプチドの固相合成は、環化反応に遊離アミノおよびカル ボキシル末端の両方を必要とするので、より多くの試みが必要である。これに対 する一つのアプローチは、側鎖官能基を介したＣ末端アミノ酸の樹脂への付着、 および直交カルボキシル保護基を用いた脱保護ならびにアミノおよびカルボキシ ル末端の環化であった。このアプローチは、マクマレー・ジェイ(McMurray，J.) 、テット・レット（Tet．Lett.）、１９９１年、第３２巻、７６７９−７６８２ 頁、トレチャック（Trzeciak）ら、テット・レット（Tet．Lett.）、１９９２年 、第３３巻、４５５７−４５６０頁、およびトロメリン（Tromelin）ら、テット ・レット（Tet．Lett.）、１９９２年、第３３巻、５１９７−５２００頁により 記載されている。これは元来、側鎖が樹脂に付着できるアミノ酸のみがＣ末端に 位置できるので、調製できるペプチドの性質を制限する。 環状ホモデティックペプチド調製へのもう一つのアプローチは、オキシム樹脂 上での調製を包含し、それは、環化に付随して樹脂からペプチドを開裂させるた めのαアミノ基によるペプチド−樹脂結合の分子内アミノ分解を可能にする。こ れは、エサペイ（Osapay）ら、テット・レット（Tet．Lett.）、１９９０年、第 ４３巻、６１２１−６１２４頁、およびヒー（He）ら、ジェイ・アメリ・ケム・ ソサ（J．Amer．Chem．Soc.）、１９９３年、第１１５巻、８０６６−８０７２ 頁によって記載されている。この方法は、調製された配列においてより大きな融 通性を可能にするが、低収量により妨害される可能性がある。そうでなければ、 この方法では、側鎖が保護された環状中間体を樹脂から除去し、溶液脱保護工程 を必要とし、樹脂結合環状ホモデティックペプチドの合成は不可能である。 ペプチドを環化する新しい方法、詳細には、樹脂上でペプチドを環化する新し い方法が必要である。本発明は、樹脂上でのホモデティックペプチドの合成およ び環化のための簡便で多目的に使用できる方法を提供する。さらに、本明細書中 に記載するごとく、ペプチド中に環化を指向または促進するアミノ酸残基を取り 入れることによって、環状ペプチドの収率が改善されるかもしれない。 発明の概要 本発明の目的は、環状ホモデティックペプチドの新規合成方法を提供すること である。本発明のもう一つの目的は、樹脂結合環状ホモデティックペプチドの新 規合成方法を提供することである。さらにもう一つの本発明の目的は、生物活性 分子のスクリーニングに使用される環状ペプチドライブラリーを製造することで ある。 本発明の特徴は、ペプチドおよび樹脂の間に選択的で分裂可能な結合を提供す る最初の架橋基、および側鎖基を介したペプチドの樹脂への付着手段を提供する ２番目の架橋基との組み合わせである。本発明のさらにもう一つの特徴は、ペプ チド中の、環化反応を促進するアミノ酸配列およびアミノ酸残基の使用である。 一つの具体例において、本発明の好ましい特徴は、２番目の架橋基と環化を促進 する鋳型残基との組み合わせである。 詳細な説明 本発明者らは、環状ホモデティックペプチドおよびペプチドライブラリーの調 製のための２つの新しいアプローチを発展させ、組み合わせた。かくして、本発 明者らは鋳型に基づく環化を固相合成に適用し、固体支持体上での環状ホモデテ ィックペプチドの完全な合成および脱保護を可能にした。この方法の変法は、側 鎖脱保護環状ペプチドの樹脂からの遊離を可能にする。これらは、遊離または樹 脂結合環状ホモデティックペプチドのいずれかの合成、および環状ホモデティッ ク ペプチドライブラリー作成を可能にする。 一つの態様において、本発明は、構造： ［式中 いし１０アミノ酸残基のペプチドであり； Ｌは、リンカーであり；および で示される樹脂結合環状ホモデティックペプチドの合成方法であり、 上記方法は、 １）式（Ｉ）： Ｌ１は、固体支持体およびペプチドのカルボキシ末端の間のリンカーであり； Ｌ２は、アミノ酸側鎖上のリンカーであり； Ｐｇ¹は、ペプチドの反応側鎖官能基上の一つまたは複数の保護基であり； Ｐｇ²は、所望により、ペプチドのアミノ末端の保護基であってもよく； Ｓ１は、所望により、固体支持体に付着する保護官能基であってもよく、所望 により、リンカーＬ１を介してもよいが、ペプチドまたはＬ２に付着せず、 および、Ｓ１は共有結合を形成してＳ２と反応でき； Ｓ２は、所望により、共有結合を形成してＳ１と反応できる、Ｌ２上の保護官 能基であってもよい］ で示される直鎖状樹脂結合ペプチドを調製すること； ２）必要ならば、Ｓ１およびＳ２からいずれかの保護基を除去し、および、式（ ＩＩ）： で示される化合物を形成するために、Ｓ１およびＳ２の間に共有結合を形成する こと； させること、および必要ならば、遊離アミノ末端を提供するためにＰｇ²を除去 し、式（ＩＩＩ）： で示される化合物を形成すること； ４）アミノ末端およびカルボキシ末端を環化して、式（ＩＶ）： で示される化合物を形成すること；および ５）保護基Ｐｇ¹を除去して、式（Ｖ）： で示される化合物を形成することからなる。 この方法は、上記工程を行い、次いで、樹脂からペプチドを開裂させることに らのペプチドの開裂および側鎖保護基Ｐｇ¹の除去は、所望の遊離環状ペプチド を得るために行うことができる。そのペプチドは、リンカーＬ２およびそれが付 着しているアミノ酸の間の結合を開裂させることにより樹脂から除去される。 簡便さゆえに、本明細書中においていくつかの略号が使用される。かくして、 Ａｌｏｃはアリルオキシカルボニルを意味し、β−Ａｌａはβ−アラニン（３− アミノプロパン酸）を意味し、ＢＨＡはベンツヒドリルアミン−ポリスチレン樹 脂を意味し、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニルを意味し、Ｂｎはベンジルを 意味し、ＢＯＰはヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ− トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムを意味し、ＤＢＵは１.８ジアゾビシク ロ［５.４.０］ウンデク−７−エンであり、ＤＰＰＡはジフェニルホスホリルア ジドであり、ＤＣＣはジシクロヘキシルカルボジイミドであり、ＤＭＡＰはジメ チルアミノピリジンであり、ＥＤＣはＮ−エチル−Ｎ’(ジメチルアミノプロピ ル)−カルボジイミドであり、ＤＭＦはジメチルホルムアミドを意味し、Ｆｍｏ ｃは９−フルオレニルメチルオキシカルボニルを意味し、ＨＢＴＵは（ヘキサフ ルオロリン酸１−ヒドロキシベンツトリアゾリルテトラメチル−ウロニウム）を 言い、ＨＭＢＡは４−（４−ヒドロキシメチル−３−メトキシ−フェニルオキシ ）酪酸を意味し、ＨＯＢＴは１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾールを意味し、Ｓ ｕｃはサクシニルを意味し、Ｈｙｐはヒドロキシプロリンを意味し、Ｚはベンジ ルオキシカルボニルを意味する。一般に、アミノ酸の略号は、ユー・ジェイ・バ イオケム（Eur．J．Biochem.）、第１５８巻、９頁、（１９８４年）において記 載されたごとく、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢジョイント・コミッション・オン・バイオ ケミカル・ノメンクリーチャー(Ｊoint Commission On Biochemical Nomenclatu re)に従う。 本明細書において使用される場合、アミノ酸はアミノ末端およびカルボキシ末 端を、好ましくは炭素骨格上に１,２−、１,３−、または１,４−置換パターン で有する化合物を包含する。αアミノ酸がもっとも好ましく、タンパク質中に見 いだされる２０の天然アミノ酸（グリシンを除くＬ−アミノ酸である）、対応す るＤ−アミノ酸、タンパク質中に見いだされない、生合成的に入手できるアミノ 酸（例えば、４−ヒドロキシ−プロリン、５−ヒドロキシ−リジン、シトルリン 、オルニチン、カナバニン、デンコリン酸、β−シアノアラニン）、および、ア ミノ−イソ酪酸、ノルロイシン、ノルバリン、Ｃαアルキル化およびＮαアルキ ル化アミノ酸、Ｄｔｃ、Ｔｐｒ、ホモシステインおよびホモセリンのごとき合成 によるαアミノ酸を包含する。βアラニンおよびγアミノ酪酸は１,３−および １,４−アミノ酸の例であり、その他多数が当該分野においてよく知られている 。スタチン様同等物（ＣＯＮＨ結合がＣＨＯＨによって置換されている、２つの アミノ酸からなるジペプチド）、ヒドロキシエチレン同等物（ＣＯＮＨ結合がＣ ＨＯＨＣＨ₂によって置換されている、２つのアミノ酸からなるジペプチド）、 還元アミド同等物（ＣＯＮＨ結合がＣＨ₂ＮＨ結合によって置換されている、２ つの アミノ酸からなるジペプチド）、およびチオアミド同等物（ＣＯＮＨ結合がＣＳ ＮＨによって置換されている、２つのアミノ酸からなるジペプチド）も、本発明 の有用な残基である。 本明細書において使用される場合、ペプチドは、アミド結合によって連結され たアミノ酸の配列を示す。本発明のペプチドは、３ないし１０アミノ酸残基、好 ましくは５ないし７残基のアミノ酸配列からなり、それぞれの残基はアミノおよ びカルボキシ末端を有することによって特徴付けされる。 本明細書において使用される場合、アミノ酸配列を囲んだ四角括弧の印は、環 状ペプチドを示し、そのアミノ末端はカルボキシ末端に連結されており、例えば 、αアミノ酸の場合は最初の残基のαアミノ基が最後の残基のカルボキシ基に連 結されている。 ピン、または固相ペプチド合成に適した他のかかる形態であってもよい。かかる 樹脂の例は、ベンツヒドリルアミンポリスチレン、アミノメチルポリスチレン、 ポリエチレングリコールーポリスチレン等である。かかる固体支持体は一般に市 販されている。かかる樹脂の典型は、テンタゲル^R（TentaGel^R）、ＰＥＧ−ＰＳ 、メリフィールド（Merrifield）およびシェパード（Sheppard）樹脂である。ポ リスチレン基盤樹脂は特に有用である。 本明細書において使用される場合、リンカーという語は、１原子または分子断 片（原子の集合）を共有結合によりもう一つの原子または分子断片に結合させる いかなる分子断片も意味する。典型的に、リンカーは、断片中において、エーテ ル、スルフィド、ジスルフィド、エステルまたはアミドのごとき介在機能部位で 所望により置換されたアルキレンまたはアリルアルキル基からなるであろう。か かる機能部位は普通、リンカーを創造（または２つの分子断片を結合させる）、 または既存のリンカーを破壊する（および分子断片に分離する）ために使用され るであろう。 ペプチド結合を形成するためのカップリング法は一般に当該分野においてよく 知られている。一般に、ボダンスキー（Bodansky）らによるザ・プラクティス・ オブ・ペプチド・シンセシス（The Practice of Peptide Synthesis）、スプリ ンガー−バーラグ（Springer-Verlag）、ベルリン（Berlin）、１９８４年で発 表されているペプチド合成の方法は技術を説明しており、本明細書に参照により 取り込まれる。典型的なカップリング法はカルボジイミド、活性化無水物および エステルおよびハロゲン化アシルを使用する。ＥＤＣ、ＤＣＣ、ＤＰＰＡ、ＰＰ Ａ、ＢＯＰ試薬、ＨＯＢｔ、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、および塩化オキザ リルのごとき試薬は典型的である。アリ（Ali）ら、ジェイ・メド・ケム（J．Me d．Chem.）、第２９巻、９８４頁（１９８６年）、およびシェイ・メド・ケム（ J．Med．Chem.）、第３０巻、２２９１頁（１９８７年）。アミノ酸の側鎖の反 応性官能基、例えば、不適切に反応を起こすかまたは合成の間妨害するような、 ヒドロキシル、メルカプタン、カルボン酸、アミノ、グアニジノ、イミダゾール 、またはインドール基のごとき官能基は、一般に合成の間保護される。保護基は 、かかる官能基の反応性を覆い隠すような基であるが、合成後期のある時点で除 去され元来の官能基を回復させるものである。反応性官能基のための適切な保護 基およびこれらの官能基を脱保護するための試薬は、グリーン（Greene）らによ るプロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTEHSIS）、第２版、ジョン・ウィレイ・アンド・サンズ （John Wiley and Sons）、ニューヨーク（New York）、１９９１年に開示され ている。脱保護は保護基の除去および水素原子による置換を示す。 Ｐｇ¹は、固相合成の間、アミノ酸残基上の側鎖官能基を保護するために使用 される選択的に除去可能な保護基である。 Ｐｇ²は、固相合成の間、ペプチドのアミノ酸残基のαアミノ基を保護するた めに使用される選択的に除去可能な保護基である。 リンカーＬ２は、選択的に開裂できる部位によってペプチド中のアミノ酸に付 着し、付着部位Ｓ１と共有結合を形成する２番目の付着部位Ｓ２を含有するラジ カル基である。好ましい具体例において、Ｌ２は、ペプチドの環化を引き起こす ために鋳型として働く残基に付着している。 Ｓ１は、リンカーＬ２上で２番目の付着部位Ｓ２と共有結合を形成する付着部 位である。Ｓ１の官能基がＳ２の官能基と反応できるならば、Ｓ１は固体支持体 上または固体支持体に付着したリンカー上に存在しているであろう。Ｌ１および ペプチドの間の結合が開裂される場合、Ｓ２部位の機能はペプチドが樹脂に結合 する２番目の経路を提供することであるので、Ｓ１はペプチドそれ自身の上に存 在しない必要がある。好ましい具体例において、Ｓ１はリンカーＬ１上に存在す る。本明細書において使用される場合、リンカーＬは、Ｓ１およびＳ２間の結合 形成の結果生じたペプチドおよび固体支持体間の連結であることは明かであろう 。Ｓ１がリンカーＬ１上に存在する場合、ＬはＬ１およびＬ２からなるであろう ；Ｓ１が固体支持体自身の上に存在する場合、ＬはＬ２のみからなるであろう。 付着部位Ｓ１がペプチドの固相合成の条件下で別の方法で反応する反応性の官能 基である場合、Ｓ２と結合を形成する前に除去される保護基によって保護される であろう。かかる保護基は他の保護基と直交しているべきであり、例えば、それ はＰｇ¹またはＰｇ²のごとき分子中の他の保護基に影響しない条件下で除去でき 、さらにそれは、成長するペプチド鎖中の成分アミノ酸残基のαアミノ基のため の保護基のごとき他の保護基を除去するために使用される条件に対して安定であ るべきである。例えば、Ｓ１およびＳ２間の結合がペプチド結合である場合、付 着部位Ｓ１は適切にはＡｌｏｃ基のごとき適切な保護基Ｐｇ³によって保護され るアミノ基であり；付着部位Ｓ２は適切には、アリルアルコールエステルのごと き適切な保護基Ｐｇ⁴によって保護されるカルボキシル基である。Ｆｍｏｃ基は 成分アミノ酸のαアミノ基のための適切な保護基Ｐｇ²であろう。他の適切な直 交する保護方法が当該分野において知られている。 しかしながら、珍しい具体例において、付着部位Ｓ１は固体支持体上にあり、 付着部位は固体支持体に付着するリンカー上にある。好ましい具体例において、 付着部位はリンカーＬ１それ自身に付着している。 Ｓ２はＳ１と共有結合を形成する付着部位であり、リンカーＬ２上に存在する 。付着部位Ｓ２が、ペプチドの固相合成の条件下で別の方法で反応する反応性の 官能基である場合、それは、Ｓ１で反応性基と結合を形成する前に除去される保 護基Ｐｇ⁴によって保護されるであろう。かかる保護基は他の保護基、およびペ プ チド−樹脂複合体における開裂部位に直交するべきであるが、これらの基は合成 手順の同時点で活性化されるので、かかる保護基はＰｇ³に対して直交する必要 はない。付着部位Ｓ１およびＳ２に適切な基を図示する： これらはＰｄ（Ｏ）によって開裂でき、Ｐｇ¹のための適切な直交保護基は、酸 によって開裂できるｔ−ブチル基類（ペンタメチレンクロマン−６−スルホニル （Ｐｍｃ）基によって保護されるＡｒｇを除く）であり、アミノ酸のαアミノ基 のためのＦｍｏｃ基は、塩基によって開裂される。反応性基および保護基の他の 組み合わせは当業者にとって明かであろう。 は、リンカーＬ１とカルボキシル基を介して最初のＮ保護アミノ酸をカップリン グさせ、次いで、残りの残基を次々にカップリングさせることによって、固相ペ プチド合成の通常の方法で合成される。そのペプチドは典型的には、Ｎ保護アミ ノ酸、樹脂へ添加された最後の残基のアミノ基の連続的脱保護によって行われる ペプチド合成、および次のＮ保護アミノ酸のカップリングから合成される。ある 例において、一つまたは複数のアミノ酸をリンカーＬ１に付着させ、次いで、支 持体にＬ１を付着させることはより効果的であろう。アミノ酸が反応性の官能基 を含有する側鎖を有する場合、これらの官能基は適切な保護基Ｐｇ¹によって保 護される。アミノ酸のアミノ基は適切な保護基Ｐｇ²によって保護される。 環化を指向する鋳型のために、ペプチドＱは、残基または残基の組み合わせが ペプチドのアミノ末端およびカルボキシ末端が近接しているコンフォメーション を好む二次構造をペプチドにとらせるような方法で合成される。かくして、鋳型 残基はアミノ酸残基または残基の組み合わせであり、コンフォメーション的に束 縛されて直鎖状ペプチドの環化を促進する。例えば、直鎖状ペプチドＨ−Ｄ−Ｔ ｒｐ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−ＯＨは、Ｐｒｏ残基がアミノ 末端およびカルボキシ末端を近接させ、環化反応を促進する低エネルギーのγタ ーンコンフォメーションをとるので、非常に容易に、かつほとんど定量的収量で 環化する。適切な鋳型は、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、Ａｉｂ、還元型ジペプチド同等物ま たはチオアミド同等物のごときアミノ酸を包含するγターンの誘導体、Ｄ−Ｐｒ ｏ−Ｐｒｏ（または、より一般的には、Ｄ−ＸがＤ形のアミノ酸であり、Ｎ−（ Ａｌｋ）Ｙがアミノ基上でアルキル化されているアミノ酸Ｙである、Ｄ−Ｘ−Ｎ −（Ａｌｋ）Ｙ）のごときジペプチドを包含するβターンの誘導体、または、非 ペプチドターン模倣物；および、環状ヘキサペプチドにおいて伸長した骨格コン フォメーションを誘導するＤ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏを包含するであろう。例 えば、かかる要素は、パイショフ（Peishoff）ら、ジェイ・メド・ケム（J．Med ．Chem.）、第３５巻、３９６２頁（１９９２年）によって開示されている。こ れらの要素は、それらが有する大きな塊（例えば、Ａｉｂ、Ｃα−メチルアミノ 酸、Ｎα−メチルアミノ酸）による立体的障害、または、環構造（例えば、Ｐｒ ｏ）の炭素骨格の要素を取り込むこと、または、隣接する残基に水素結合を形成 すること（例えば、チオアミド同等物、ジペプチド同等物）によって、ある結合 の回転が制限されることによりその効果を有する。他のコンフォメーション的制 限要素は、これらの原理を使用する技術から企画または選択されるであろう。 環化を促進するために直鎖状ペプチド配列中にその鋳型が導入されなければな らない。最初に樹脂への鋳型の付着、続いて鋳型から双方向へのペプチド鎖の伸 長はやっかいなアプローチである。Ｃ末端からの連続的伸長は、カップリングの 間にラセミ化をおこす危険性があり、カップリングの完了を容易に測定させない 。完全なＣ末端ペプチド部分を樹脂に連結した鋳型にカップリングすること、ま たは、鋳型−Ｃ末端ペプチド部分を樹脂にカップリングさせることは、どちらも 断片カップリングを意味し、それは本質的に効率の悪い方法であり、さらにペプ チドライブラリー作成には適さない。ペプチドの樹脂への付着、およびリンカー Ｌ２の付着の点を操作するために、鋳型または配列中の二次構造が誘導する要素 の利点をとることは可能である。 好ましい具体例において、骨格リンカーＬ２を介したペプチドの樹脂への結合 に使用される反応性部位Ｓ１と同様、リンカーＬ１が樹脂への２つの不安定な連 結からなるような方式でその方法は行われる。さらに、リンカーＬ２は鋳型残基 に付着する。以下の具体例において、鋳型アミノ酸残基はＣによって図示され、 式（Ｉ）に参照されるように、リンカーＬ１はＢ−Ａによって表され、反応性の 官能基Ｓ２はＢ−Ａ上に存在してＰｇ⁴によって保護され；リンカーＬ２はＤに よって表され、反応性の官能基Ｓ１はＤ上に存在してＰｇ³によって保護され； ペプチドＱは、アミノ酸の側鎖の官能基がペプチドの末端アミノ基の保護基を表 すＰｇ¹およびＰｇ²によって保護される、［ＡＡ¹−ＡＡ⁴］−Ｃ−［ＡＡ⁵−Ａ Ａ⁸］によって表される。 その方法に従って、適切に保護されたリンカーＢ−Ａはペプチド合成樹脂に付 着する。次いで、最初のアミノ酸がリンカーに付着し、次いで、ペプチド合成が 通常の固相ペプチド合成法によって行われる。適当な時点で、あらかじめ作成さ れ保護された、Ｃがアミノ酸であり、Ｄがテザ（tether）（例えば、Ｌ２）であ る、鋳型−テザＰｇ²−Ｃ（Ｄ−Ｐｇ⁴）が伸長するペプチド鎖にカップリングさ れる。直鎖状ペプチド合成の完了後、テザの反応性官能基上の保護基Ｐｇ⁴およ びリンカー（Ｌ１）の反応性官能基上の保護基Ｐｇ³を除去する。次いで、テザ およびリンカーをお互いにカップリングさせ、リンカーを介して樹脂上で環化し たペプチドを作成する。次いで、Ｃ末端アミノ酸およびリンカーＢ−Ａの間の結 合を開裂させ、鋳型−テザを介して樹脂に付着した直鎖状ペプチドを得る。アミ ノ末端保護基Ｐｇ²の開裂により、両方の末端が遊離した樹脂結合直鎖状ペプチ ドが得られ、環化が可能になる。次いで、環化が行われた後、側鎖保護基Ｐｇ¹ の開裂により完全に脱保護された樹脂結合環状ホモデティックペプチドが得られ る。この時点で、鋳型アミノ酸ＣおよびテザＤの間の結合は、所望により、ヒド ラジン分解、加水素分解、トリフルオロ酢酸またはＨＦのごとき通常の方法で選 択的に開裂し、遊離ペプチドを得ることができる。 このスキームの顕著な特徴は以下の通りである。樹脂はペプチド付着の２つの 部位を有するリンカーを取り入れており、そのうちの１つは一時的に覆い隠され ている。ペプチドはペプチド合成の通常の方法で合成でき、高収率のカップリン グ方法が行われ、ニンヒドリン試験によってカップリング完了の評価が可能であ る。保護された直鎖状ペプチドは、リンカーおよびペプチドの鋳型部分に付着し たテザの間に新たに合成された結合を介して樹脂に付着する。これにより、ペプ チドのアミノ末端およびカルボキシル末端が遊離し、高度に効果的な鋳型指向性 環化を樹脂に結合したペプチド上で行うことができる。 本方法は多くの直交的な開裂可能な保護基およびリンカーを必要とする。アミ ン保護基Ｐｇ²は、側鎖保護基Ｐｇ¹、テザ保護基Ｐｇ⁴、リンカー保護基Ｐｇ³、 鋳型ＣおよびテザＤの間の結合、およびカルボキシル末端アミノ酸およびリンカ −Ｂ−Ａの間の結合の存在下で開裂できなければならない。さらにそれは、Ｐｇ³ およびＰｇ⁴の開裂条件、および、カルボキシル末端アミノ酸およびリンカーＢ −Ａの間の結合の開裂条件に対して安定でなければならない。同様に、Ｐｇ³お よびＰｇ⁴は、Ｐｇ²除去の条件に安定で、Ｐｇ²、Ｐｇ¹、および鋳型Ｃおよびテ ザＤの間の結合、およびカルボキシル末端アミノ酸およびリンカーＢ−Ａの間の 結合の存在下で選択的に開裂できなければならない。カルボキシル末端アミノ酸 およびリンカーＢ−Ａの間の結合は、Ｐｇ²およびＰｇ¹および鋳型Ｃおよびテザ Ｄの間の結合の存在下で選択的に開裂できなければならない。 特殊な具体例において、そのアプローチが以下のスキームＩ−ＩＩＩに図示さ れている。スキームＩは、酸に不安定なリンカー（例えば、Ｌ１）の部分合成、 および樹脂への付着のためのペプチドの最初の残基を図示する。スキームＩＩは 、ペプチドの環化を指向するためにペプチドに取り込まれた、リンカー（例えば 、Ｌ２）に付着した、コンフォメーション的に制限された鋳型残基の合成を図示 する。スキームＩＩＩは、モデルペプチドのための樹脂上鋳型指向性環化の一般 的方法を図示する。 スキームＩＩＩに示した特殊な具体例において、樹脂はベンツヒドリルアミン 樹脂である。リンカーＢ−Ａ（例えば、Ｌ１）は２つの部分からなる：Ａはε− Ａｌｏｃ−Ｌｙｓであり、そのＬｙｓの側鎖は樹脂への２番目の付着部位を提供 し、Ｌｙｓ残基のカルボキシルはＢＨＡ樹脂にアミド結合を介して付着し；およ び、Ｂは４−（４’−ヒドロキシメチル−３−メトキシ）フェノキシ酪酸（ＨＭ ＰＢ）であり、そのＨＭＰＢのカルボキシルがＬｙｓ残基のαアミンに付着して 伸長するペプチドはヒドロキシメチル基に付着する。ｔ−ブチルを基礎とする保 護基によって保護されている側鎖を有するＦｍｏｃアミノ酸は、本方法、即ち、 Ｐｇ²がＦｍｏｃであり、Ｐｇ¹がｔ−ブチルを基礎とするか、またはＰＭＣであ る方法において使用される。鋳型残基は４−ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）であ り、テザＬ２は、サクシニル−β−アラニンであり、それはβ−Ａｌａカルボキ シル基を介してＨｙｐのヒドロキシルに付着する。サクシニルカルボキシル基は アリルエステル（Ｐｇ⁴）として保護される。Ｆｍｏｃ基は酸に安定であり、Ｐ ｄ（Ｏ）試薬に安定であるが、２級アミン類で開裂可能である。アリルエステル およびＡｌｏｃ基は、２級アミンおよび酸に対して安定であるが、Ｐｄ（Ｏ）試 薬で開裂可能である。ペプチドへのＨＭＰＢ連結は希酸（２％ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃ ｌ₂）で開裂可能であり、２級アミンおよびＰｄ（Ｏ）に対して安定である。ｔ −ブチルおよびＰｍｃ側鎖保護基は、２級アミンおよびＰｄ（Ｏ）に対し て安定であるが、強酸（９５％ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂）によって開裂可能である。 Ｈｙｐ鋳型およびテザのβ−Ａｌａの間のエステル連結は、上記すべての条件に 安定であるが、ヒドラジン分解によって開裂可能である。当業者は、直交性のた めに要求されるすべてことを満たすならば、同様に使用できる他の有用な保護基 スキームの可能性があることを認識するであろう。 液体中または固相支持体上で組み合わせ的なライブラリーを調製および試験す るための方法が知られており、例えば、ラム（Lam）ら、ネイチャー（Nature） 、第３５４巻、８２頁（１９９１年）およびＰＣＴ／ＵＳ９１／０４６６６（Ｗ Ｏ９２／０００９１）；ホートン（Houghton）ら、ネイチャー（Nature）、第３ ５４巻、８４頁（１９９１年）およびＰＣＴ／ＵＳ９１／０８６９４（ＷＯ９２ ／０９３００）に開示されている。かかる方法は、環状ホモデティックペプチド のライブラリーを得るための本発明方法との組み合わせであってもよい。例えば 、ペプチド鎖が出来上がるとき、固体支持体を各々発生したペプチドカップリン グでいくつかの同モルの基に分割し、異なるアミノ酸を各々の基と徹底的に反応 させ、その基を再び組み合わせ混合し、次いで、次のカップリングのために基を 再び分割してもよい。このようにして、得られた直鎖状ペプチド樹脂複合体は、 各々異なるアミノ酸配列を有するビーズからなるが、各々のビーズは特有のペプ チド配列を有するであろう。 ライブラリーは、ペプチド−樹脂複合体または遊離環状ペプチドの溶液のライ ブラリーであってもよい。当該分野において知られているごとく、これらのライ ブラリーは、標的分子に結合するか、または第２の分子の標的分子への結合を阻 害するペプチドを同定するために、標的分子または表面をスクリーニングする目 的に使用されてもよい。ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９３４５（ＷＯ９４／０８０５１ ）に開示されているように、暗号化方法は、かかる組み合わせ的ライブラリーの 活性ペプチドの検出を改良した本発明方法と組み合わせてもよい。 ライブラリーは、本方法に従って、ゲイセン（Geysen）ら、米国特許第５,１ ９４,３９２号および米国特許第４,５６２,１５７号によって開示されているミ モトープ（minotope）法を使用することにより、部分的に既知の組成のペプチド のグループを調製することによって、構築およびスクリーニングされてもよい。 活性ペプチドを部分的に開裂することによって樹脂ビーズをアッセイするための 、当該分野において知られている他の方法を適用してもよい。 以下の実施例は、化合物を作り使用する方法、ライブラリー、および本発明方 法を示すものであって、いかようにも制限するものではない。参照の簡便性のた めに、例えば、スキームＩＩＩにおける化合物５はＩＩＩ−５とするように、あ る化合物はスキームＩ−ＩＩＩにおいて示される数字によってラベルされる。 実施例Ｉ 酸に不安定なリンカーを予め負荷されたＦｍｏｃ−ロイシンの調製 ４［４−Ｎ^α−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−ロイシニル−オキシ メチル］−３−フェニルオキシ］酪酸（１）スキーム１ 乾ＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍｌ）およびピリジン（２.３ｍｌ、２８ミリモル）中 のＦｍｏｃ−ロイシン（１０ｇ、２８ミリモル）の撹拌した溶液に、フッ化シア ヌル（３.３ｍｌ、２８ミリモル）を滴下した。反応物をアルゴン存在下室温で ４時間撹拌し、不活性沈澱物を濾過除去し、冷Ｈ₂Ｏ（２ｘ２５０ｍｌ）で洗浄 し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、次いで、乾燥するまでエバポレートした。 ０℃の乾ＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍｌ）およびピリジン中の４（４−ヒドロキシメ チル-３−メトキシ−フェニルオキシ）酪酸（６.８０ｇ、２８ミリモル）の撹拌 した溶液に、ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍｌ）中のフッ化Ｆｍｏｃ−ロイシニルの溶液を 添加した。反応物を室温にまで温めて、次いで、１６時間撹拌した。次いで、反 応物を冷０.５ＮＨＣｌ水溶液で酸性化し、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳ Ｏ₄）、次いで、減圧下エバポレートした。シリカゲル（３０：７０：１）Ｅｔ ＯＡｃ／ｎ−ヘキサン／ＨＯＡｃ上でのフラッシュクロマトグラフィーによる精 製、およびトルエンからのエバポレーションを繰り返すことにより、標記化合物 を白色の固体として得た（１０.２５ｇ、６３％）。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、 ４００ＭＨｚ）δ０.９２（２ｘｄ、６Ｈ）、１.５５（ｍ、１Ｈ）、１.６８（ ｍ、２Ｈ）、２.１０（ｍ、２Ｈ）、２.５８（ｔ、２Ｈ）、３.７７（ｓ、３ Ｈ）、３.９９（ｔ、２Ｈ）、４.１９（ｔ、１Ｈ）、４.４０（ｍ、３Ｈ）、５. １０（ｄ、Ｊ＝１１.９Ｈｚ、１Ｈ）、５.１６（ｄ、Ｊ＝１１.９Ｈｚ、２Ｈ） 、５.２８（ｄ、Ｊ＝８.８Ｈｚ、１Ｈ）、６.３８（ｍ、１Ｈ）、６.４１（ｓ、 １Ｈ）、７.１９（ｍ、１Ｈ）、７.３０（ｔ、２Ｈ）、７.３９（ｔ、２Ｈ）、 ７.５８（ｄ、Ｊ＝７.４Ｈｚ、２Ｈ）、７.７５（ｄ、Ｊ＝７.５Ｈｚ、２Ｈ） 実施例２ Ｎ^α−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−Ｏ−（２−アリルオキシカル ボニル−プロピオニル−β−アラニニル）ヒドロキシプロリン（化合物ＩＩ−５ ）−リンカーを有する鋳型残基 ａ）Ｎ^α−（ｔ−ブトキシカルボニル）−ヒドロキシプロリンベンジルエステル （ＩＩ−１） メタノール（１００ｍｌ）および水（５０ｍｌ）中のＮ^α−ｔ−ブトキシカル ボニル−ヒドロキシプロリン（５ｇ、２１.６ミリモル）の撹拌した溶液に、Ｃ ｓＨＣＯ₃（４.２ｇ、２１.６ミリモル）を添加した。１５分間撹拌後、溶液を 乾燥するまでエバポレートし、メタノール（２ｘ１００ｍｌ）から２回、次いで 、最終的にＤＭＦ（１００ｍｌ）から再エバポレートした。残渣をＤＭＦ（１０ ０ｍｌ）中に入れて室温で撹拌しながら、臭化ベンジル（３.１ｍｌ、２６ミリ モル）を一度に添加した。次いで、反応物をアルゴン存在下５０℃で１６時間撹 拌した。得られた懸濁液を減圧下でエバポレートし、酢酸エチル（１５０ｍｌ） 中に入れてＨ₂Ｏ（１５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、エバポレート した。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン中の５０ ％酢酸エチル）による精製により、標記化合物（１）スキーム１を澄明な油状物 質として得た（６.７５ｇ、２１ミリモル）。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、２５０ＭＨｚ）アミドロトマーズの混合物δ１.３５ および１.４６（２ｘｓ、９Ｈ）、１.８０（ｂｒｓ、１Ｈ）、２.０８（ｍ、１ Ｈ）、２.３０（ｍ、１Ｈ）、２.９２−３.６９（ｍ、２Ｈ）、４.４８（ｍ、２ Ｈ）、５.１６および５.１９（ｓおよびｄｄ、２Ｈ）、７.３５（ｓ、５Ｈ） ｂ）Ｎ^α−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｏ−［Ｎ^β−（ベンジルオキシカルボ ニル）−β−アラニニル）ヒドロキシプロリンベンジルエステル（ＩＩ−２） トルエン（５０ｍｌ）中のＣｂｚ−β−アラニン（５ｇ、２２.４ミリモル） の撹拌した溶液に、塩化オキザリル（２０ｍｌ）を一度に添加し、引き続いて反 応を開始するために１滴のＤＭＦを添加した。反応物を１６時間撹拌し、次いで 、減圧下でエバポレートした。トルエン（２ｘ５０ｍｌ）からの再エバポレーシ ョンにより次の工程で使用する対応する酸塩化物が得られた。 ＣＨ₂Ｃｌ₂（７５ｍｌ）中の実施例１の化合物（６.７５ｇ、２１ミリモル） の撹拌した０℃の溶液に、ピリジン（１.８２ｍｌ、２２.５ミリモル）、引き続 いてＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍｌ）中の上記酸塩化物の溶液を添加した。次いで、反応 物を室温に温め、１６時間撹拌した。減圧下でエバポレートした後、残渣を酢酸 エチル（１５０ｍｌ）に入れて、Ｈ₂Ｏ（１５０ｍｌ）、１Ｎ ＨＣｌ水溶液（１ ５０ｍｌ）、ブライン（１５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、エバポ レートした。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン中 の４０％酢酸エチル）による精製により、標記化合物を澄明な油状物質として得 た（４.３０ｇ、３８％）。 ¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、２５０ＭＨｚ）アミドロ トマーズの混合物δ１.３６および１.４５（２ｘｓ、９Ｈ）、２.１９（ｍ、１ Ｈ）、２.３７（ｍ、１Ｈ）、２.５４（ｔ、２Ｈ）、３.４６（ｍ、２Ｈ）、３. ６９（ｍ、２Ｈ）、４.４２（ｄｔ、１Ｈ）、５.０９（ｓ、２Ｈ）、５.１６（ ｓ、２Ｈ）、５.１６−５.３０（ｍ、２Ｈ）、７.３５（ｓ、１０Ｈ） ｃ）Ｎ^α−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｏ−（２−アリルオキシカルボニル− プロピオニル−β−アラニニル）ヒドロキシプロリン（ＩＩ−４） メタノール（７５ｍｌ）中の実施例２（ｂ）の化合物（４.２０ｇ、８ミリモ ル）の溶液を、パー（Parr）の装置で５５ｐｓｉ Ｈ₂、１０％炭素上Ｐｄで６時 間水素化した。セライトパッドで触媒を濾過除去し、氷酢酸（４ｘ５０ｍｌ）で 洗浄した後、濾液を減圧下でエバポレートし、メタノール（２ｘ５０ｍｌ）から 再エバポレートしてＮα−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｏ−（β−アラニニル ）ヒドロキシプロリンベンジルエステル（ＩＩ−３）（２.３６ｇ、９８％）を 白色の固体として得た。 無水コハク酸（２４ｇ、２４０ミリモル）にアリルアルコール（２５ｍｌ、３ ６０ミリモル）を添加した。反応物をＡｒ存在下で１６時間還流し、室温に冷却 し、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（４００ｍｌ）に溶解し、Ｅｔ₂Ｏ（２００ｍｌ）で 洗浄し、冷３Ｎ ＨＣｌ水溶液で酸性化して、酢酸エチル（３００ｍｌ）で抽出 し、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、次いで、減圧下エバボレートし てコハク酸モノアリルエステル（３６.０２ｇ、９５％）を得た。 トルエン（５０ｍｌ）中のコハク酸モノアリルエステル（１３.７５ｇ、８７ ミリモル）の撹拌した溶液に、塩化オキザリル（２０ｍｌ、２３０ミリモル）を 添加した。反応物を１６時間室温で撹拌し、次いで、減圧下でエバボレートした 。トルエン（２ｘ５０ｍｌ）からの再エバポレーションにより、以下のカップリ ング反応で使用するサクシニルクロリドモノアリルエステル（１４.６８ｇ、９ ６％）を澄明な液体として得た。 （４：１）ジオキサン／Ｈ₂Ｏ（１００ｍｌ）中のＮα−（ｔ−ブトキシカル ボニル）−Ｏ−（β−アラニニル）ヒドロキシプロリンベンジルエステル（２. ３６ｇ、７.８ミリモル）の撹拌した０℃の溶液に、ＮａＨＣＯ₃（１.６ｇ、１ ９ミリモル）を添加し、引き続いて上記サクシニルクロリドモノアリルエステル （２.０ｇ、１１ミリモル）を１５分以上かけて滴下した。反応物を室温にし、 １６時間撹拌した。１Ｎ ＨＣｌ水溶液で酸性化した後、その溶液をＣＨＣｌ₃（ １５０ｍｌ）で抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、乾燥するま でエバポレートした。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（９７： ３：１）ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ／ＨＯＡｃによる精製により、標記化合物（４） スキーム１を白色の固体として得た（１.８１ｇ、５３％）。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）アミドロトマーズの混合物δ１.４４ および１.４８（２ｘｓ、９Ｈ）、２.１１−２.５０（ｍ、２Ｈ）、２.７５（ｔ 、４Ｈ）、３.０１（ｔ、２Ｈ）、３.７０（ｍ、２Ｈ）、４.０１（ｍ、２Ｈ） 、 ４.３５（ｍ、２Ｈ）、４.６０（ｄ、Ｊ＝５.６Ｈｚ、２Ｈ）、５.２４（ｄ、J ＝７.５Ｈｚ、１Ｈ）、５.３２（ｄｄ、２Ｈ）、５.９０（ｍ、１Ｈ）；ＭＳ（ ＥＳ）ｍ／ｚ４４３.０［Ｍ＋Ｈ］⁺、ｍ／ｚ４４１.２［Ｍ−Ｈ］^- ｄ）Ｎ^α−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−Ｏ−（２−アリルオキシ カルボニル−プロピオニル−β−アラニニル）ヒドロキシプロリン（ＩＩ−５） ＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍｌ）中の実施例２（ｃ）の化合物（１.８１ｇ、４.１ミリモ ル）の撹拌した溶液にトリフルオロ酢酸（４５ｍｌ）を添加した。４５分間撹拌 後、反応物を減圧下で乾燥するまでエバポレートした。ＣＨＣｌ₃／トルエンで 数回再エバポレートすることにより、脱保護されたＴＦＡ塩（１.８７ｇ）を泡 状物質として得た。 ＣＨＣｌ₃（７５ｍｌ）中の上記ＴＦＡ塩の撹拌した溶液に、Ｅｔ₃Ｎ（１.１ ５ｍｌ、８.２ミリモル）、引き続いてＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボ ニル）サクシンイミド（１.５２ｇ、４.５ミリモル）を添加した。６時間撹拌後 、その溶液を１Ｎ ＨＣｌ水溶液（１０ｍｌ）で酸性化して、ブラインで洗浄し 、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、乾燥するまでエバポレートした。シリカゲル上でのフ ラッシュクロマトグラフィー（１００：４：１）ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ／ＨＯＡ ｃによる精製により、標記化合物（５）スキーム１を白色の固体として得た（２ .１１ｇ、９１％）。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ２.３０（ｍ、 １Ｈ）、２.４０（ｍ、１Ｈ）、２.４６（ｔ、２Ｈ）、２.５３（ｔ、２Ｈ）、 ２.６８（ｔ、２Ｈ）、３.５０（ｍ、２Ｈ）、３.７２（ｍ、２Ｈ）、４.２２（ ｄｔ、１Ｈ）、４.３２−４.５３（ｍ、３Ｈ）、４.５５（ｄ、Ｊ＝５.６Ｈｚ、 ２Ｈ）、５.２２−５.３５（ｍ、３Ｈ）、５.８８（ｍ、１Ｈ）、６.２８（ｍ、 １Ｈ）、７.２３−７.４５（ｍ、４Ｈ）、７.５５（ｍ、２Ｈ）、７.７１（ｄ、 Ｊ＝７.５Ｈｚ、１Ｈ）、７.７６（ｄ、Ｊ＝７.５Ｈｚ、１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ） ｍ／ｚ５６５.２［Ｍ＋Ｈ］⁺、ｍ／ｚ５６３.０［Ｍ−Ｈ］^- 実施例３ モデル環状ペプチド（４）スキームＩＩＩの調製 シクロ−（Ｄ−トリプトファニル−Ｄ−アスパルチル−ヒドロキシプロリル−Ｄ −バリニル−ロイシン）（ＩＩＩ−４） リジン再付着部位（ＩＩＩ−１）を有する保護された直鎖状ペプチド酸不安定 樹脂が、以下の一般的合成方法に従ったＦｍｏｃ−Ｎε−（Ａｌｏｃ）−リジン 、Ｆｍｏｃ−ロイシル−ＨＭＢＡ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−バリン、Ｆｍｏｃ−（Ｏ−β Ａｌａ−Ｓｕｃ−Ｏアリル）−ヒドロキシプロリン（ＩＩ−５）、Ｆｍｏｃ−（ Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−Ｄ−アスパラギン酸、およびＦｍｏｃ−Ｎⁱⁿ−Ｂｏｃ−Ｄ−ト リプトファンの連続したカップリングおよび脱保護によって市販のベンツヒドリ ルアミン樹脂（１.１８ミリモル／ｇ）上に構築された。 一般的カップリング方法 ＨＢＴＵ（３モル等量）を小さいエルレンマイヤーフラスコ中で振り混ぜなが らＤＭＦに溶解した。この溶液にＦｍｏｃ−アミノ酸（３モル等量）、引き続い てＮ−メチルモルフォリン（８モル等量）を添加した。次に、この溶液をロッカ ーベッセル中の樹脂（１モル等量）およびＨＯＢｔ（３モル等量）に添加し、２ 時間振盪した。反応をカイザー試験でチェックして、反応終了後、ＤＭＦ（４ｘ ）次いで、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｘ）で洗浄した。 一般的Ｆｍｏｃ脱保護法 Ｆｍｏｃ保護基を、ペプチド樹脂をＤＭＦ中の２０％ピペリジンで処理する（ １ｘ５分および１ｘ１５分）ことによって除去した。次いで、樹脂をＤＭＦ（４ ｘ）で洗浄した。 （１：１）ＤＭＳＯ／ＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）中の調製された樹脂ペプチド、 Ｆｍｏｃ−（Ｂｏｃ）Ｄ−Ｔｒｐ−（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）Ｄ−Ａｓｐ−（Ｏ−β−Ａ ｌａ−Ｓｕｃ−Ｏアリル）Ｈｙｐ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−ＨＭＢＡ−（Ａｌｏｃ ）Ｌｙｓ−ＢＨＡ（ＩＩＩ−１）（２ｇ、０.８ミリモル）に、酢酸（４６０μ ｌ、８ミリモル）、（Ｐｈ₃Ｐ）₂ＰｄＣｌ₂（２４ｍｇ、３４μモル）、引き続 いてＢｕ₃ＳｎＨ（８６２μｌ、３.２ミリモル）をＡｒ存在下室温で撹拌しなが ら添加した。３０分間撹拌後、樹脂を濾過し、（１：１）ＤＭＳＯ／ＣＨ₂Ｃｌ₂ （２ｘ５０ｍｌ）で洗浄した。反応を２回繰り返し、（１：１）ＤＭＳＯ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂（２ｘ５０ｍｌ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｘ５０ｍｌ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１ｘ５０ ｍｌ）中のＮ−メチルモルフォリン、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｘ５０ｍｌ）、次いで、ｎ −ヘキサン（２ｘ５０ｍｌ）で洗浄した。部分的に脱保護されたペプチド樹脂１ .９７ｇを減圧乾燥後に得た。カイザー試験では遊離アミン陽性であった。 ＤＭＦ（１０ｍｌ）中の上記樹脂ペプチド（１.８４ｇ、０.７５ミリモル）に 、Ａｒ存在下、撹拌しながらＨＯＢｔ（０.２２ｇ、１.６ミリモル）、Ｎ−メチ ルモルフォリン（０.４５ｍｌ、１.６ミリモル）、引き続いてＨＢＴＵ（０.６ ０ｇ、１.６ミリモル）を添加した。１６時間撹拌後、樹脂ペプチドを濾過し、 ＤＭＦ（２ｘ５０ｍｌ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｘ５０ｍｌ）、およびｎ−ヘキサン（ ２ｘ５０ｍｌ）で洗浄した。カイザー試験では遊離アミン陰性であった。 ＤＭＦ（５０ｍｌ）中の２０％ピペリジンで上記樹脂ペプチドを５分間処理し 、次いで、再びＤＭＦ（５０ｍｌ）中の２０％ピペリジンで1５分間処理し、濾 過し、ＤＭＦで洗浄し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（４ｘ１０ｍｌ）中の５％トリフルオロ酢酸 および５％アニソールの溶液で各々２分間処理した。次に、得られたヒドロキシ プロリル側鎖付着直鎖状ペプチド樹脂を、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｘ５０ｍｌ）、ＣＨ₂ Ｃｌ₂中の１０％Ｎ−メチルモルフォリン、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｘ５０ｍｌ）、およ びｎ−ヘキサン（２ｘ５０ｍｌ）で洗浄し、減圧下乾燥後、１.２２ｇの樹脂ペ プチドを得た。カイザー試験では遊離アミン陽性であった。 ＤＭＦ（１０ｍｌ）中の上記樹脂ペプチド（１.２０ｇ、０.７４ミリモル）に 、Ａｒ存在下室温で撹拌しながら、ＨＯＢｔ（０.１７ｇ、１.２ミリモル）、Ｎ −メチルモルフォリン（０.３３ｍｌ、３.０ミリモル）、引き続いてＨＢＴＵ（ ０.４５ｇ、１.２ミリモル）を添加した。２４時間撹拌後樹脂を濾過し、ＤＭＦ （２ｘ５０ｍｌ）、（１：１）ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（２ｘ５０ｍｌ）、ＣＨ₂Ｃ ｌ₂（２ｘ５０ｍｌ）、およびｎ−ヘキサン（２ｘ５０ｍｌ）で洗浄した。１.２ ２ｇのペプチド樹脂（２）スキーム３を減圧下乾燥後に得た。カイザー試験では 遊離アミン陰性であった。 ＥｔＯＨ（５ｍｌ）中の上記ペプチド樹脂（２）スキーム３の一部に（０.５ １ｇ、０.３１ミリモル）、ＮＨ₂ＮＨ₂１水和物（２００μｌ、４.１ミリモル） を添加した。４８時間撹拌後、樹脂を濾過し、ＭｅＯＨ（２ｘ２０ｍｌ）で洗浄 した。粗保護環状ペプチド（６６ｍｇ、２９％）が、濾液のエバポレーションお よび減圧下乾燥により得られた。シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー （ＣＨＣｌ₃中の３％ＭｅＯＨ）による精製によって、分析学上純粋な物質（３ ）スキーム３（４４ｍｇ）を白色の固体として得た。ＴＬＣ Ｒｆ＝０.２８（ ５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃）； ¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ０. ７１（ｄ、Ｊ＝６.５Ｈｚ、６Ｈ）、０.８６（ｄ、Ｊ＝６.６Ｈｚ、３Ｈ）、０. ９３（ｄ、Ｊ＝６.７Ｈｚ、３Ｈ）、１.２０（ｍ、１Ｈ）、１.４０（ｍ、１Ｈ ）、１.４３（ｓ、９Ｈ）、１.５３（ｍ、２Ｈ）、１.６７（ｓ、９Ｈ）、１.８ ５（ｍ、２Ｈ）、２.４０（ｄｄ、１Ｈ）、２.７５（ｍ、１Ｈ）、２.８２（ｄ ｄ、１Ｈ）、３.１６（ｍ、１Ｈ）、３.２８（ｄ、Ｊ＝６.１Ｈｚ、２Ｈ）、３. ５０（Ｄ、Ｊ＝４.５Ｈｚ、２Ｈ）、３.７８（ｄｄ、１Ｈ）、４.００（ｔ、１ Ｈ）、４.６２（ｍ、１Ｈ）、４.７８（ｄｄ、１Ｈ）、４.９５（ｄｄ、１Ｈ） 、５.１２（ｍ、１Ｈ）、６.１２（ｄ、Ｊ＝８.０Ｈｚ、１Ｈ）、７.１０（ｍ、 １Ｈ）、７.２４（ｍ、２Ｈ）、７.３３（ｔ、１Ｈ）、７.４４（ｓ）１Ｈ）、 ７.５４（ｄ、Ｊ＝７.８Ｈｚ、１Ｈ）、７.７４（ｄ、Ｊ＝９.７Ｈｚ、１Ｈ）、 ８.１５（ｄ、１Ｈ）;ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ７８３.４［Ｍ＋Ｈ］⁺、ｍ／ｚ７８１ .２［Ｍ−Ｈ］^- 樹脂ペプチド（ＩＩＩ−２）の残り（０.７１ｇ、０.４４ミリモル）に、トリ フルオロ酢酸（１０ｍｌ）中の１０％アニソールの溶液を添加した。１５分間撹 拌後、樹脂を濾過し、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）中の１０％アニソールでさ らに１５分間再処理した。完全に脱保護されたペプチド樹脂をＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｘ ２５ｍｌ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂中のＮ−メチルモルフォリン（２ｘ２５ｍｌ）、ＣＨ₂ Ｃｌ₂（２ｘ２５ｍｌ）、およびｎ−ヘキサン（２ｘ２５ｍｌ）で洗浄した。 ＥｔＯＨ（５ｍｌ）中の上記ペプチド樹脂に、ＮＨ₂ＮＨ₂モノ水和物（３００ μｌ）を添加した。４８時間撹拌後、樹脂を濾過し、ＭｅＯＨ（２ｘ２０ｍｌ） で洗浄した。濾液を減圧下エバポレートし、粗生成物をヒドラジン塩として得た （７７.０ｍｇ、２９％）。ＹＭＣ−ＯＤＳ（Ｓ−５０）カラム上てのフラッシ ュクロマトグラフィーによる精製（３０−５０％ＣＨ₃ＣＮ、０.１％ＴＦＡ、Ｈ ２Ｏ）によって、標記化合物（ＩＩＩ−４）を凍結乾燥された白色粉末として得 た（３７ｍｇ）。さらに１０３ｍｇの粗環状ペプチド（全６８％）を、残った樹 脂をメタノール（２ｍｌ）中の無水ヒドラジン（２ｍｌ）に適用し、さらにＡｒ 存在下６０℃で４８時間撹拌し、濾過し、メタノール（２ｘ２０ｍｌ）で洗浄し 、濾液を乾燥するまでエバポレートすることにより得た。ＨＰＬＣＫ'＝５.２１ ハミルトン（Hamilton）ＰＲＰ−１カラム、３０％ＣＨ₃ＣＮ、０.１％ＴＦＡ／ ０.１％ＴＦＡ、Ｈ₂Ｏで溶出；Ｋ'＝５.３１ ２０分間勾配２０−８０％ＣＨ₃ ＣＮ、０.１％ＴＦＡ／０.１％ＴＦＡ、Ｈ₂Ｏ；ＴＬＣＲｆ＝０.８１（４：１： １）ｎ−ブタノール／ＨＯＡｃ／Ｈ₂Ｏ、Ｒｆ＝０.８１（１５：３：１２：１０ ）ｎ−ブタノール／ＨＯＡｃ／Ｈ₂Ｏ／ピリジン；¹Ｈ−ＮＭＲ（ｄ6−ＤＭＳＯ 、４００ＭＨｚ）δ０.６１（ｄ、Ｊ＝６.６Ｈｚ、３Ｈ）、０.７３（ｄ、Ｊ＝ ６.３Ｈｚ、３Ｈ）、０.８２（ｄ、Ｊ＝６.７Ｈｚ、３Ｈ）、０.８７（ｄ、Ｊ＝ ６.７Ｈｚ、３Ｈ）、１.００（ｍ、１Ｈ）、１.１５（ｍ、１Ｈ）、１.２１（ｍ 、１Ｈ）、１.６０（ｍ、１Ｈ）、１.６８（ｍ、１Ｈ）、２.３２（ｄｄ、１Ｈ ）、２.５１（ｍ、１Ｈ）、２.７９（ｄｄ、１Ｈ）、２.８８（ｄｄ、１Ｈ）、 ３.０９（ｄｄ、１Ｈ）、３.１９（ｄｄ、１Ｈ）、３.４７（ｄｄ、１Ｈ）、３. ９８（ｍ、１Ｈ）、４.１１（ｄｄ、１Ｈ）、４.２６（ｍ、２Ｈ）、４.３４（ ｄｄ、１Ｈ）、５.００（ｍ、１Ｈ）、６.９８（ｔ、１Ｈ）、７.０５（ｔ、１ Ｈ９、７.１４（ｄ、Ｊ＝１.９Ｈｚ、１Ｈ）、７.３２（ｄ、Ｊ＝８.１Ｈｚ、１ Ｈ）、７.３８（ｄ、Ｊ＝１０.３Ｈｚ、１Ｈ）、７.５２（ｄ、Ｊ＝７.９Ｈｚ、 １Ｈ）、７.８０（ｄ、Ｊ＝９.２Ｈｚ、１Ｈ）、８.７７（ｄ、Ｊ＝５.０Ｈｚ、 １Ｈ）、８.８０（ｄ、Ｊ＝８.１Ｈｚ、１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ６２７.２[ Ｍ＋Ｈ]⁺、ｍ／ｚ６４９.２［Ｍ＋Ｎａ］⁺、ｍ／ｚ６２５.２［Ｍ−Ｈ］^- 実施例４ モデルライブラリーの調製 以下のライブラリーを実施例３に概説した実験方法に従って、ただし、ファル カ（Furka）によって記載された標準的スプリット−アンド−コンバイン法（エ イ・ファルカ（A．Furka）、エム・セバスチャン（M．Sebestyen）、エム・アス ゲドム（M．Asgedom）、ジー・ジブス（G．Dibσ）、イント・ジェイ・ペプト・ プロト・レス（Int．J．Pept．Prot．Res.）１９９１年第３７巻、４８７−４９ ３頁）を使用して調製した。 ライブラリーはすべて一般式シクロ［ＡＡ１−ＡＡ２−Ｈｙｐ−ＡＡ４−ＡＡ５ ］を有する。 ライブラリー１ （８化合物） シクロ［ＡＡ１−ＡＡ２−Ｈｙｐ−ＡＡ４−ＡＡ５］ ［式中Ａ＝Ｄ−ＴｒｐまたはＤ−Ｇｌｎ Ｂ＝Ｄ−ＡｓｐまたはＤ−Ａｌａ Ｃ＝Ｄ−ＶａｌまたはＤ−Ｔｈｒ Ｄ＝Ｌｅｕである］ ２.０ｇのＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＨＭＰＢ−Ｌｙｓ（ε−Ａｌｏｃ）−ＢＨＡか ら開始して、樹脂を半分に分割し、アミノ末端を実施例３のようにして脱保護し た。一方をＦｍｏｃ−Ｄ−Ｖａｌとカップリングさせ、もう一方をＦｍｏｃ−Ｄ −Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）とカップリングさせた。次いで、その２つの樹脂を再び一 緒にして、脱保護し、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（β−Ａｌａ−Ｓｕｃ−Ｏ−アリル）と カップリングさせた。樹脂を再び半分に分割し、脱保護し、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｓ ｐ（ｔ−Ｂｕ）またはＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｌａのいずれかとカップリングさせた。 樹脂を再び一緒にして、混合し、半分に分割し、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ ）またはＦｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｎのいずれかとカップリングさせた。樹脂を再び一 緒にして、ペプチジル樹脂の混合物について実施例３のようにして合成を続けた 。 そのペプチジル樹脂のうち１ｇからヒドラジン分解後２９４ｍｇの単離生成物 が得られた（理論上の９８％）。生成物はｈｐｌｃおよびｈｐｌｃ／ｍａｓｓス ペクトロメトリー解析により約等量比で８つの期待されるペプチドのみを含有し ていた。 ライブラリー２（１０，０００化合物） シクロ［ＡＡ１−ＡＡ２−Ｈｙｐ−ＡＡ４−ＡＡ５］ ［式中、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ４＝Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｇｌｙ、 Ｄ−Ｎｖａ、Ｄ−Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ（Ｍｅ）、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｔｙｒ、 Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−Ｌｙｓ ＡＡ５＝Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｎｖａ、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（Ｍｅ）、 Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、またはＬｙｓである］ 配列のＮ末端アミノ酸のカップリング後、樹脂試料を再び一緒にはせずに、む しろ別々にしておき、以下に挙げる１０個のサブライブラリーを作る。 サブライブラリー２.１ａ ＡＡ−１＝Ｇｌｙ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から３７.６ｍｇの生成物を得た（理論上の４６ ％）。サブライブラリー２.１ｂ ＡＡ−１＝Ｄ−Ｎｖａ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から７５.１ｍｇの生成物を得た（理論上の８６ ％）。 サブライブラリー２.１ｃ ＡＡ−１＝Ｄ−Ｓｅｒ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から７７.２ｍｇの生成物を得た（理論上の９２ ％）。 サブライブラリー２.１ｄ ＡＡ−１＝Ｄ−Ｓｅｒ（Ｍｅ） ３００ｍｇのペプチジル樹脂から６９.６ｍｇの生成物を得た（理論上の７５ ％）。 サブライブラリー２.１ｅ ＡＡ−１＝Ｄ−Ａｓｐ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から５８.５ｍｇの生成物を得た（理論上の５６ ％）。 サブライブラリー２.１ｆ ＡＡ−１＝Ｄ−Ａｓｎ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から５３.６ｍｇの生成物を得た（理論上の５０ ％）。 サブライブラリー２.１ｇ ＡＡ−１＝Ｄ−Ｐｈｅ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から６１.５ｍｇの生成物を得た（理論上の５７ ％）。 サブライブラリー２.１ｈ ＡＡ−１＝Ｄ−Ｔｒｐ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から６７.０ｍｇの生成物を得た（理論上の６２ ％）。 サブライブラリー２.１ｉ ＡＡ−１＝Ｄ−Ｔｙｒ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から７３.７ｍｇの生成物を得た（理論上の６９ ％）。 サブライブラリー２.１ｊ ＡＡ−１＝Ｄ−Ｌｙｓ ３００ｍｇのペプチジル樹脂から６９.４ｍｇの生成物を得た（理論上の６４ ％）。 上記方法に従って、樹脂をＡＡ２、ＡＡ４およびＡＡ５の位置で切断せず、そ の後各々のサブライブラリーを別々にして同じ手順を使用して行い、サブライブ ラリー２.２.ａ−ｊ、２.４.ａ−ｊおよび２.５.ａ−ｊ（２.ｘ.ａ−ｊは、ペプ チドのｘの位置に既知のアミノ酸が単離および同定される様々なサブライブラリ ーを表現するために使用する）を調製した。 実施例５ 実施例４のペプチドライブラリーを、ニューロキニン３（ＮＫ３）に結合する 化合物、またはプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）による試験物質のリン酸化を阻 害する化合物を同定するためのアッセイにおいてスクリーニングする。酵素阻害 アッセイは、ＰＫＣに関してイーガン（Egan）ら、アナル・バイオケム（Anal． Biochem.）、１９８８年、第１７５巻、５５２頁、およびアレクザンダー（Alex ander）ら、バイオケム・ジェイ（Biochem．J.）、１９９０年、第２６８巻、３ ０３頁に記載されている、ヒト・ＰＫＣαおよびＰＫＣβ受容体のためのクロー ンを使用する方法に従って行う。ＮＫ３受容体に関する結合アッセイは、マック ナイト（McKnight）ら、ブル・ジェイ・ファーマコル（Br．J．Pharmacol.）、 １９９１年、第１０４巻、３３５−３６０頁記載のようにして行うことができる 。 実施例４のサブライブラリー２.１.ａ−ｊを使用したかかるアッセイの結果を 以下の表１に示す。 ライブラリーの解析は、ズッカーマン（Zuckermann）ら、ジエイ・メド・ケム （J．Med．Chem.）、１９９４年、第３７巻、２６７８−２６８５頁、およびア ーブ（Erb）ら、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・ サイエンシーズ・ＵＳＡ（Proc．Natl．Acad．Sci．USA）、１９９４年、第９１ 巻、１１４２２−１１４２６頁に開示されている方法に従って、単一の化合物が同 定されるまで活性サブライブラリーの再合成を繰り返すことによって行われる。 本発明は、前記具体例の観点に限定されるものではなく、記載された方法の様 々な修飾は当業者に明かであろう。かかる修飾された方法は、本発明内に包含さ れ、以下の請求の範囲の意図によってのみ限定される。本明細書中に挙げた様々 な出版物の内容は当該分野の状態を記載するものであり、発表されたそれ全体を 本明細書に取り込む。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ニューランダー，ケネス・アレン アメリカ合衆国19382ペンシルベニア州 ウエスト・チェスター、セイジ・ロード・ ウエスト 911番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式： ［式中 １０アミノ酸残基のペプチドであり； Ｌはリンカーであり；および で示される固体支持体に結合した環状ホモデティックペプチドの製法であって、 １）式（Ｉ）： ［式中、 Ｌ１は固体支持体およびペプチドのカルボキシ末端の間のリンカーであり； Ｌ２はアミノ酸側鎖上のリンカーであり； Ｐｇ¹はペプチドの反応性側鎖官能基上の１またはそれ以上の保護基であり； Ｐｇ²はペプチドのアミノ末端の任意の保護基であり； Ｓ１は固体支持体に付着する所望により保護されていてもよい官能基であり、 所望により、リンカーＬ１を介してもよいが、ペプチドまたはＬ２に付着せ ず、Ｓ２と反応可能であって、共有結合を形成し； Ｓ２はＳ１と反応可能であり、共有結合を形成する、Ｌ２上の所望により保護 されていてもよい官能基である］ で示される直鎖状樹脂結合ペプチドを調製し； ２）必要ならば、Ｓ１およびＳ２からいずれかの保護基を除去し、Ｓ１およびＳ ２の間に共有結合を形成して、式（ＩＩ）： で示される化合物を形成し； ば、Ｐｇ²を除去し、遊離アミノ末端を得、式（ＩＩＩ）： で示される化合物を形成し； ４）ペプチドのアミノ末端およびカルボキシ末端を環化して、式（ＩＶ）： で示される化合物を形成し；および ５）いずれかの保護基Ｐｇ¹を除去して、式（Ｖ）： で示される化合物を形成する ことからなることを特徴とする方法。 ２．さらに、該環状ペプチドをリンカーＬ２から開裂させることからなる、環 状ホモデティックペプチドを調製するための請求項１記載の方法。 記載の方法。 ４．Ｐｇ¹およびＰｇ²がＰｇ³およびＰｇ⁴に対して直交して保護された官能基 である請求項１記載の方法。 求項１記載の方法。 ６．環化を指向付ける残基がＰｒｏ、Ｈｙｐ、Ａｉｂ、Ｐｒｏ−Ｄ−Ｐｒｏま たはＤ−Ｘ−Ｎ（Ａｌｋ）Ｙであり、Ｄ−ＸがＤ−配置のアミノ酸であり、Ｎ− （Ａｌｋ）Ｙがα−アミノ基上でアルキル化されるアミノ酸Ｙまたはその誘導体 である請求項３記載の方法。 方法。 ８．付着部位Ｓ１はリンカーＬ１上にある請求項１記載の方法。 ９．Ｌ２が である請求項１記載の方法。 10．Ｌ１が である請求項１記載の方法。 11．Ｌが −ＣＯ(ＣＨ₂)₂ＮＨＣＯ(ＣＨ₂)₂ＣＯＮＨ(ＣＨ₂)₄Ｎ(ＨＭＢＡ)ＣＯ− である請求項１記載の方法。 ペプチドのライブラリーを調製するための請求項１記載の方法。 13．第１反応性部位Ｓ１が所望により保護されていてもよいアミノ基であり、 第２反応性部位Ｓ２が所望により保護されていてもよいカルボキシル基である請 求項１記載の方法。 14．第１反応性部位Ｓ１が所望により保護されていてもよいカルボキシル基で あり、第２反応性部位Ｓ２が所望により保護されていてもよいアミノ基である請 求項１記載の方法。 15．Ｓ１およびＳ２における保護基がＰｇ¹またはＰｇ²を除去することなく開 裂される請求項１記載の方法。 請求項１記載の方法。 17．環化を指向付ける残基がＨｙｐである請求項６記載の方法。 18．請求項２の方法にて製造される環状ペプチド。 19．請求項２の方法にて製造される環状ペプチドのライブラリー。 20．式： シクロ［ＡＡ１−ＡＡ２−Ｈｙｐ−ＡＡ５−ＡＡ６］ ［式中、 ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３＝Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｄ −Ｎｖａ、Ｄ−Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ（Ｍｅ）、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔ ｒｐまたはＤ−Ｌｙｓ；および ＡＡ４がＡｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｎｖａ、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（Ｍｅ） 、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＬｙｓを意味する］ で示される環状ペプチドのライブラリー。 21．請求項１に従って製造される固体支持体に結合した環状ペプチドのライブ ラリー。 22．式： ［式中、 ち少なくとも１つの残基がＨｙｐである、３ないし１０アミノ酸残基のペプチド であり； Ｌは式：−ＣＯ(ＣＨ₂)₂ＮＨＣＯ(ＣＨ₂)₂ＣＯＮＨ(ＣＨ₂)₄Ｎ(ＨＭＢＡ)ＣＯ− のリンカーであり；および ミノメチルポリスチレン樹脂を意味する］ で示される請求項１に従って製造した固体支持体に結合した環状ペプチドのライ ブラリー。 であって、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ４およびＡＡ５がＤ−およびＬ−形の天然アミ ノ酸の群より選択されるアミノ酸残基である請求項２３記載のライブラリー。 24．式： ［式中、ＰｇはＢｏｃまたはＦｍｏｃを意味する］ で示される化合物。