JPH0745517B2 - ペプチド、および環状ペプチドの製造方法 - Google Patents
ペプチド、および環状ペプチドの製造方法Info
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- JPH0745517B2 JPH0745517B2 JP2-515081A JP51508190A JPH0745517B2 JP H0745517 B2 JPH0745517 B2 JP H0745517B2 JP 51508190 A JP51508190 A JP 51508190A JP H0745517 B2 JPH0745517 B2 JP H0745517B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/585—Calcitonins
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Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、ペプチド、および環状ペプチドの製造方法に
関する。更に詳しくは、環状ペプチド、例えば、次式： で示される合成カルシトニン誘導体（エルカトニン）又
はその酸付加塩もしくは錯体を得る上で有用なペプチ
ド、および環状ペプチドの新規な製造方法に関する。
関する。更に詳しくは、環状ペプチド、例えば、次式： で示される合成カルシトニン誘導体（エルカトニン）又
はその酸付加塩もしくは錯体を得る上で有用なペプチ
ド、および環状ペプチドの新規な製造方法に関する。
背景技術
従来、強力な血清カルシウムおよびリン低下、骨形成促
進作用および骨吸収抑制作用、尿中リン排泄促進作用等
の優れた薬理作用を有するポリペプチドとして、カルシ
トニンが知られている。カルシトニンは、ヒトなどの各
種哺乳動物の甲状腺から、或いは、魚類、円口類、鳥類
の鰓後体から抽出採取され、そのアミノ酸一次配列が明
らかにされている。この配列に基づき類似構造の合成カ
ルシトニンも多く報告されている。これら動物由来カル
シトニンは、いずれも32個の構成アミノ酸からなるポリ
ペプチドであって、その１番目と７番目のアミノ酸がＬ
−システインであり、両者のメルカプト基がジスルフィ
ド結合を形成し、カルボキシル末端がプロリンアミドで
ある点で全て共通している。一方、これらの天然片カル
シトニンは、分子内にジスルフィド結合を有するため、
溶液中での安定性が十分でない。
進作用および骨吸収抑制作用、尿中リン排泄促進作用等
の優れた薬理作用を有するポリペプチドとして、カルシ
トニンが知られている。カルシトニンは、ヒトなどの各
種哺乳動物の甲状腺から、或いは、魚類、円口類、鳥類
の鰓後体から抽出採取され、そのアミノ酸一次配列が明
らかにされている。この配列に基づき類似構造の合成カ
ルシトニンも多く報告されている。これら動物由来カル
シトニンは、いずれも32個の構成アミノ酸からなるポリ
ペプチドであって、その１番目と７番目のアミノ酸がＬ
−システインであり、両者のメルカプト基がジスルフィ
ド結合を形成し、カルボキシル末端がプロリンアミドで
ある点で全て共通している。一方、これらの天然片カル
シトニンは、分子内にジスルフィド結合を有するため、
溶液中での安定性が十分でない。
そこで、合成カルシトニンとして、１番目及び７番目Ｌ
−システインを次式： で示されるα−Ｌ−アミノスベリン酸で置き換えるポリ
ペプチドの製造法が知られている。この方法では、次
式： （式中、Ｘは、水酸基、ペプチド化学に常用のカルボキ
シル基の保護基又はカルシトニンに相当するアミノ酸残
基若しくはペプチド残基を表し、各アミノ酸残基につい
てはペプチド化学に常用の保護基で保護されていてもよ
い） で示されるペプチドを液相中で環化反応に付し、各フラ
グメントを液相中で更にカップリングさせること（以
下、「液相合成法」という）により、目的とするカルシ
トニン誘導体を合成している［特公昭53−41677号公
報、特開昭61−112099号公報、特開昭63−203699号公
報、及びファルマシアレビューNo.3「新しい薬を求めて
生理活性ペプチド」（ファルマシアレビュー編集委員会
編）153−154頁参照］。
−システインを次式： で示されるα−Ｌ−アミノスベリン酸で置き換えるポリ
ペプチドの製造法が知られている。この方法では、次
式： （式中、Ｘは、水酸基、ペプチド化学に常用のカルボキ
シル基の保護基又はカルシトニンに相当するアミノ酸残
基若しくはペプチド残基を表し、各アミノ酸残基につい
てはペプチド化学に常用の保護基で保護されていてもよ
い） で示されるペプチドを液相中で環化反応に付し、各フラ
グメントを液相中で更にカップリングさせること（以
下、「液相合成法」という）により、目的とするカルシ
トニン誘導体を合成している［特公昭53−41677号公
報、特開昭61−112099号公報、特開昭63−203699号公
報、及びファルマシアレビューNo.3「新しい薬を求めて
生理活性ペプチド」（ファルマシアレビュー編集委員会
編）153−154頁参照］。
しかしながら、これらの方法では、アミノ酸の数が増す
につれて、ペプチドの溶解度が微妙に変化するので、適
当な溶媒を見出すのが次第に困難となる。またこのこと
に起因して、目的とするポリペプチドと、未反応物や副
生成物との分離の困難さも増大する。特に環化反応では
副反応物の生成を極力押さえる必要がある。従って、液
相合成法による従来の合成カルシトニン誘導体の製造方
法は、収率が低く、工業的に十分満足できる製法とは言
い難い。
につれて、ペプチドの溶解度が微妙に変化するので、適
当な溶媒を見出すのが次第に困難となる。またこのこと
に起因して、目的とするポリペプチドと、未反応物や副
生成物との分離の困難さも増大する。特に環化反応では
副反応物の生成を極力押さえる必要がある。従って、液
相合成法による従来の合成カルシトニン誘導体の製造方
法は、収率が低く、工業的に十分満足できる製法とは言
い難い。
従って、本発明の目的は、環状ペプチド、特にカルシト
ニン誘導体であるエルカトニンを収率よく製造するため
に有用なペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体を提供
することにある。
ニン誘導体であるエルカトニンを収率よく製造するため
に有用なペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体を提供
することにある。
本発明の他の目的は、環状ペプチド、特にカルシトニン
誘導体であるエルカトニンを収率よく製造できる新規か
つ工業的に有用な環状ペプチド又はその酸付加塩もしく
は錯体の製造方法を提供することにある。
誘導体であるエルカトニンを収率よく製造できる新規か
つ工業的に有用な環状ペプチド又はその酸付加塩もしく
は錯体の製造方法を提供することにある。
発明の開示
本発明者らは、上記目的を達成すべく、鋭意研究を重ね
た結果、（１）α−Ｌ−アミノスベリン酸の側鎖カルボ
キシル基を、Ｎ−末端アミノ酸のアミノ基と直接縮合し
て環化するのではなく、α−Ｌ−アミノスベリン酸の少
なくとも側鎖カルボキシル基にアミノ酸又はペプチドが
縮合したペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体を用
い、Ｃ−末端のカルボキシル基とＮ−末端のアミノ基と
の環化反応を行なうこと、（２）アルカリ金属塩の存在
下で、環化反応を行うこと、および（３）液相合成法と
固相合成法を有効に組み合わせて利用することにより、
前記目的を達成しうること見いだし本発明を完成した。
すなわち、本発明は、下記一般式（Ｉ）で表されるペプ
チド又はその酸付加塩もしくは錯体を提供する。
た結果、（１）α−Ｌ−アミノスベリン酸の側鎖カルボ
キシル基を、Ｎ−末端アミノ酸のアミノ基と直接縮合し
て環化するのではなく、α−Ｌ−アミノスベリン酸の少
なくとも側鎖カルボキシル基にアミノ酸又はペプチドが
縮合したペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体を用
い、Ｃ−末端のカルボキシル基とＮ−末端のアミノ基と
の環化反応を行なうこと、（２）アルカリ金属塩の存在
下で、環化反応を行うこと、および（３）液相合成法と
固相合成法を有効に組み合わせて利用することにより、
前記目的を達成しうること見いだし本発明を完成した。
すなわち、本発明は、下記一般式（Ｉ）で表されるペプ
チド又はその酸付加塩もしくは錯体を提供する。
［式中、ＡとＢは、下記（１）〜（５）
（１）A:Ser（X1）−Asn−Leu−Ser（X1）−Thr（X1）
−OH B:X2 （２）A:Ser（X1）−Asn−Leu−Ser（X1）−OH B:X2−Thr（X1） （３）A:Ser（X1）−Asn−Leu−OH B:X2−Ser（X1）−Thr（X1） （４）A:Ser（X1）−Asn−OH B:X2−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （５）A:Ser（X1）−OH B:X2−Asn−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （式中、X1は水素原子又は水酸基の保護基を示し、X2は
水素原子又はアミノ基の保護基を示す）の何れかの組合
せからなる基を示す。Ｘは水酸基、カルボキシル基の保
護基、Val−OHもしくはMet−OHで示されるアミノ酸残
基、下記一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） （式中、A1はValまたはMet、A2はSerまたはGlyを示す）
で表される低級ペプチド残基、又は下記一般式（VIII） −A1−Leu−A2−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A1
1−A12−A13−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A2
0−A21−A22−Pro−NH2 （VIII） （式中、A1、A2は前記に同じ。A3〜A22は、下記のアミ
ノ酸残基を示す。
−OH B:X2 （２）A:Ser（X1）−Asn−Leu−Ser（X1）−OH B:X2−Thr（X1） （３）A:Ser（X1）−Asn−Leu−OH B:X2−Ser（X1）−Thr（X1） （４）A:Ser（X1）−Asn−OH B:X2−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （５）A:Ser（X1）−OH B:X2−Asn−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （式中、X1は水素原子又は水酸基の保護基を示し、X2は
水素原子又はアミノ基の保護基を示す）の何れかの組合
せからなる基を示す。Ｘは水酸基、カルボキシル基の保
護基、Val−OHもしくはMet−OHで示されるアミノ酸残
基、下記一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） （式中、A1はValまたはMet、A2はSerまたはGlyを示す）
で表される低級ペプチド残基、又は下記一般式（VIII） −A1−Leu−A2−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A1
1−A12−A13−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A2
0−A21−A22−Pro−NH2 （VIII） （式中、A1、A2は前記に同じ。A3〜A22は、下記のアミ
ノ酸残基を示す。
A3 :Lys、ThrまたはAla
A4 :LeuまたはTyr
A5 :Ser、ThrまたはTrp
A6 :Gln、LysまたはArg
A7 :Glu、AspまたはAsn
A8 :LeuまたはPhe
A9 :HisまたはAsn
A10 :LysまたはAsn
A11 :Leu、PheまたはTyr
A12 :GlnまたはHis
A13 :ThrまたはArg
A14 :TyrまたはPhe
A15 :ProまたはSer
A16 :Arg、GlyまたはGln
A17 :ThrまたはMet
A18 :Asp、Ala、AsnまたはGly
A19 :Val、Ile、ThrまたはPhe
A20 :Ala、Val、ProまたはSer
A21 :GlyまたはGlu
A22 :ThrまたはAla）
で示されるペプチド残基、もしくは一般式（VIII）にお
いて少なくとも−A1−Leu−A2−A3を含み且つA1からA22
の順序に配列したペプチドフラグメントを示し、各アミ
ノ酸残基は保護基で保護されていてもよい］ 本発明は、下記一般式（II） ［式中、Ｄ−ＥはSer−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各
アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよい。Ｘは前
記に同じ。但し、Ｘが前記アミノ酸残基、低級ペプチド
残基、ペプチド残基またはペプチドフラグメントの場合
には、ＸにおけるＣ−末端アミノ酸のカルボキシル基及
び各アミノ酸残基の反応性基は保護基で保護されている
（以下、一般式（III）および（IV）において同じ）］ で表される環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体
を、次のような方法で製造する。
いて少なくとも−A1−Leu−A2−A3を含み且つA1からA22
の順序に配列したペプチドフラグメントを示し、各アミ
ノ酸残基は保護基で保護されていてもよい］ 本発明は、下記一般式（II） ［式中、Ｄ−ＥはSer−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各
アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよい。Ｘは前
記に同じ。但し、Ｘが前記アミノ酸残基、低級ペプチド
残基、ペプチド残基またはペプチドフラグメントの場合
には、ＸにおけるＣ−末端アミノ酸のカルボキシル基及
び各アミノ酸残基の反応性基は保護基で保護されている
（以下、一般式（III）および（IV）において同じ）］ で表される環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体
を、次のような方法で製造する。
（１）下記一般式（III）
（式中、Ｄは、Ser−OH、Ser−Asn−OH、Ser−Asn−Leu
−OH、Ser−Asn−Leu−Ser−OH又はSer−Asn−Leu−Ser
−Thr−OHを示し、Ｅは、Ｈ−Asn−Leu−Ser−Thr、Ｈ
−Leu−Ser−Thr、Ｈ−Ser−Thr、Ｈ−Thr又は水素原子
を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよ
い。Ｘは前記に同じ） で表されるペプチドを、化学的縮合反応（但し、蛋白分
解酵素による環化反応を除く）による環化反応に付す製
造方法。
−OH、Ser−Asn−Leu−Ser−OH又はSer−Asn−Leu−Ser
−Thr−OHを示し、Ｅは、Ｈ−Asn−Leu−Ser−Thr、Ｈ
−Leu−Ser−Thr、Ｈ−Ser−Thr、Ｈ−Thr又は水素原子
を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよ
い。Ｘは前記に同じ） で表されるペプチドを、化学的縮合反応（但し、蛋白分
解酵素による環化反応を除く）による環化反応に付す製
造方法。
（２）下記一般式（IV）
（式中、Ｆは、水酸基又は活性エステル残基を示し、Ｇ
は、Ｈ−Ser−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各アミノ酸
残基は保護基で保護されていてもよい。Ｘは前記に同
じ） で表されるペプチドを、アルカリ金属塩の存在下で環化
反応に付す製造方法。この製造方法において、α−Ｌ−
アミノスベリン酸の側鎖カルボキシル基には、アミノ酸
又はペプチドが縮合していなくてもよい。
は、Ｈ−Ser−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各アミノ酸
残基は保護基で保護されていてもよい。Ｘは前記に同
じ） で表されるペプチドを、アルカリ金属塩の存在下で環化
反応に付す製造方法。この製造方法において、α−Ｌ−
アミノスベリン酸の側鎖カルボキシル基には、アミノ酸
又はペプチドが縮合していなくてもよい。
また、本発明は、
下記一般式（IX）
［式中、A1〜A22は、前記に同じ。各アミノ酸残基は保
護基で保護されていてもよい］ で表わされる環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯
体の製造方法であって、 （１）下記一般式（IIIa） ［式中、Ｄは、Ser−OH、Ser−Asn−OH、Ser−Asn−Leu
−OH、Ser−Asn−Leu−Ser−OH又はSer−Asn−Leu−Ser
−Thr−OHを示し、Ｅは、Ｈ−Asn−Leu−Ser−Thr、Ｈ
−Leu−Ser−Thr、Ｈ−Ser−Thr、Ｈ−Thr又は水素原子
を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよ
い。Ｗは水酸基又は一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） （A1、A2は前記に同じ）で表される低級ペプチド残基を
示し、前記低級ペプチド残基において、Ｃ−末端アミノ
酸のカルボキシル基及び各アミノ酸残基の反応性基は保
護基で保護されている］ で表されるペプチドを、化学的縮合反応（但し、蛋白分
解酵素による環化反応を除く）により環化させるか、ま
たは（２）下記一般式（IVa） （式中、Ｆは、水酸基又は活性エステル残基を示し、Ｇ
は、Ｈ−Ser−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各アミノ酸
残基は保護基で保護されていてもよい。Ｗは前記に同
じ） で表されるペプチドを、アルカリ金属塩の存在下で環化
反応に付して、下記一般式（Ｖ） ［式中、Ｗは前記に同じ］ で表されるペプチドとし、次いで、前記一般式（Ｖ）で
表されるペプチドのＣ−末端アミノ酸のカルボキシル基
の保護基を脱離させ、固相反応樹脂上で合成した下記一
般式（VI）で表されるペプチド−樹脂と、固相法により
縮合させ、前記樹脂を除去する、環状ペプチド又はその
酸付加塩もしくは錯体の製造方法。
護基で保護されていてもよい］ で表わされる環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯
体の製造方法であって、 （１）下記一般式（IIIa） ［式中、Ｄは、Ser−OH、Ser−Asn−OH、Ser−Asn−Leu
−OH、Ser−Asn−Leu−Ser−OH又はSer−Asn−Leu−Ser
−Thr−OHを示し、Ｅは、Ｈ−Asn−Leu−Ser−Thr、Ｈ
−Leu−Ser−Thr、Ｈ−Ser−Thr、Ｈ−Thr又は水素原子
を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよ
い。Ｗは水酸基又は一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） （A1、A2は前記に同じ）で表される低級ペプチド残基を
示し、前記低級ペプチド残基において、Ｃ−末端アミノ
酸のカルボキシル基及び各アミノ酸残基の反応性基は保
護基で保護されている］ で表されるペプチドを、化学的縮合反応（但し、蛋白分
解酵素による環化反応を除く）により環化させるか、ま
たは（２）下記一般式（IVa） （式中、Ｆは、水酸基又は活性エステル残基を示し、Ｇ
は、Ｈ−Ser−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各アミノ酸
残基は保護基で保護されていてもよい。Ｗは前記に同
じ） で表されるペプチドを、アルカリ金属塩の存在下で環化
反応に付して、下記一般式（Ｖ） ［式中、Ｗは前記に同じ］ で表されるペプチドとし、次いで、前記一般式（Ｖ）で
表されるペプチドのＣ−末端アミノ酸のカルボキシル基
の保護基を脱離させ、固相反応樹脂上で合成した下記一
般式（VI）で表されるペプチド−樹脂と、固相法により
縮合させ、前記樹脂を除去する、環状ペプチド又はその
酸付加塩もしくは錯体の製造方法。
Ｙ−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A11−A12−A13
−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A20−A21−A22
−Pro−Resin （VI） ［Ｙは水素原子又はＨ−A1−Leu−A2−（A1及びA2は前
記に同じ）を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護され
ていてもよい。但し、Ｗが水酸基であるとき、ＹはＨ−
A1−Leu−A2−であり、Ｗが−A1−Leu−A2−OHであると
き、Ｙは水素原子である。Resinは固相反応樹脂を示
す。A3〜A22は前記に同じ］ 本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、溶
媒、その他に関し略号で表示する場合には、IUPAC、IUB
の規定、或いは当該分野における慣用の記号に従うもの
とする。以下に、それらの例を挙げる。ただし、アミノ
酸等に関し光学異性体がありうる場合は、特に明示がな
い限り、Ｌ体を示すものとする。
−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A20−A21−A22
−Pro−Resin （VI） ［Ｙは水素原子又はＨ−A1−Leu−A2−（A1及びA2は前
記に同じ）を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護され
ていてもよい。但し、Ｗが水酸基であるとき、ＹはＨ−
A1−Leu−A2−であり、Ｗが−A1−Leu−A2−OHであると
き、Ｙは水素原子である。Resinは固相反応樹脂を示
す。A3〜A22は前記に同じ］ 本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、溶
媒、その他に関し略号で表示する場合には、IUPAC、IUB
の規定、或いは当該分野における慣用の記号に従うもの
とする。以下に、それらの例を挙げる。ただし、アミノ
酸等に関し光学異性体がありうる場合は、特に明示がな
い限り、Ｌ体を示すものとする。
Ala:アラニン
Arg:アルギニン
Asn:アスパラギン
Asp:アスパラギン酸
Gln:グルタミン
Glu:グルタミン酸
Gly:グリシン
His:ヒスチジン
Ile:イソロイシン
Leu:ロイシン
Lys:リジン
Met:メチオニン
Phe:フェニルアラニン
Pro:プロリン
Ser:セリン
Thr:スレオニン
Tyr:チロシン
Val:バリン
Boc:tert−ブトキシカルボニル
Bzl:ベンジル
Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル
Tos:トシル
Cl−z:2−クロロベンジルオキシカルボニル
Br−z:2−ブロモベンジルオキシカルボニル
OMe:メチルエステル
OPac:フェナシルエステル
OBzl:ベンジルエステル
OSu:N−ヒドロキシコハク酸イミドエステル
HOSu:N−ヒドロキシコハク酸イミド
TFA:トリフルオロ酢酸
THF:テトラヒドロフラン
DMF:N,N−ジメチルホルムアミド
DMSO:ジメチルスルホキシド
NMP:N−メチルピロリドン
DCC:ジシクロヘキシルカルボジイミド
EDC:N−エチル−Ｎ′−ジメチルアミノプロピルカルボ
ジイミド HOBt:1−ヒドロキシベンゾトリアゾール 発明の詳細な説明 前記一般式（Ｉ）で表される本発明のペプチドは、α−
Ｌ−アミノスベリン酸の少なくとも側鎖カルボキシル基
にアミノ酸又はペプチドが縮合している。
ジイミド HOBt:1−ヒドロキシベンゾトリアゾール 発明の詳細な説明 前記一般式（Ｉ）で表される本発明のペプチドは、α−
Ｌ−アミノスベリン酸の少なくとも側鎖カルボキシル基
にアミノ酸又はペプチドが縮合している。
前記一般式（Ｉ）で表されるペプチドにおけるＡとＢの
組合せは、次の通りである。
組合せは、次の通りである。
（１）A:Ser（X1）−Asn−Leu−Ser（X1）−Thr（X1）
−OH B:X2 （２）A:Ser（X1）−Asn−Leu−Ser（X1）−OH B:X2−Thr（X1） （３）A:Ser（X1）−Asn−Leu−OH B:X2−Ser（X1）−Thr（X1） （４）A:Ser（X1）−Asn−OH B:X2−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （５）A:Ser（X1）−OH B:X2−Asn−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （式中、X1及びX2は前記に同じ） また、一般式（III）におけるＤとＥ、一般式（IV）に
おけるＦとＧの好ましい組合せも、前記ＡとＢの組合せ
と同様にSer−Asn−Leu−Ser−Thrで表されるペプチド
を形成する。但し、一般式（IV）におけるＦは、一般式
（III）におけるＤと異なり、水酸基又は活性エステル
残基であってもよい。
−OH B:X2 （２）A:Ser（X1）−Asn−Leu−Ser（X1）−OH B:X2−Thr（X1） （３）A:Ser（X1）−Asn−Leu−OH B:X2−Ser（X1）−Thr（X1） （４）A:Ser（X1）−Asn−OH B:X2−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （５）A:Ser（X1）−OH B:X2−Asn−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （式中、X1及びX2は前記に同じ） また、一般式（III）におけるＤとＥ、一般式（IV）に
おけるＦとＧの好ましい組合せも、前記ＡとＢの組合せ
と同様にSer−Asn−Leu−Ser−Thrで表されるペプチド
を形成する。但し、一般式（IV）におけるＦは、一般式
（III）におけるＤと異なり、水酸基又は活性エステル
残基であってもよい。
前記一般式（Ｉ）〜（IV）において、Ｘで表されるカル
ボキシル基の保護基は、カルボキシル基の保護基として
ペプチド化学に常用のものであれば特に制限はない。カ
ルボキシル基の保護基としては、例えば、メトキシ基、
エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキ
シ基、イソブトキシ基、scc−ブトキシ基、tert−ブト
キシ基などのアルコキシ基；シクロヘキシルオキシ基な
どのシクロアルキルオキシ基；ベンジルオキシ基、ｐ−
メトキシベンジルオキシ基、ｐ−ニトロベンジルオキシ
基、ｐ−クロロベンジルオキシ基、ｐ−ブロモベンジル
オキシ基、ベンズヒドリルオキシ基などの置換基を有し
ていてもよいアラルキルオキシ基；カルボベンゾキシヒ
ドラジノ基、tert−ブトキシカルボニルヒドラジノ基、
トリチルヒドラジノ基などの置換ヒドラジノ基およびフ
ェナシル基などが挙げられる。
ボキシル基の保護基は、カルボキシル基の保護基として
ペプチド化学に常用のものであれば特に制限はない。カ
ルボキシル基の保護基としては、例えば、メトキシ基、
エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキ
シ基、イソブトキシ基、scc−ブトキシ基、tert−ブト
キシ基などのアルコキシ基；シクロヘキシルオキシ基な
どのシクロアルキルオキシ基；ベンジルオキシ基、ｐ−
メトキシベンジルオキシ基、ｐ−ニトロベンジルオキシ
基、ｐ−クロロベンジルオキシ基、ｐ−ブロモベンジル
オキシ基、ベンズヒドリルオキシ基などの置換基を有し
ていてもよいアラルキルオキシ基；カルボベンゾキシヒ
ドラジノ基、tert−ブトキシカルボニルヒドラジノ基、
トリチルヒドラジノ基などの置換ヒドラジノ基およびフ
ェナシル基などが挙げられる。
前記一般式（Ｉ）〜（IV）において、Ｘで表されるアミ
ノ酸残基のうち、カルシトニンを構成するアミノ酸残基
としては、例えば、Val−OH、Met−OHが挙げられる。ま
た、Ｘで表されるペプチド残基は、カルシトニンを構成
するペプチド残基であれば特に制限されない。ペプチド
残基としては、例えば、前記一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） で表される低級ペプチド残基；下記一般式（VIII） −A1−Leu−A2−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A1
1−A12−A13−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A2
0−A21−A22−Pro−NH2 （VIII） （式中、A1〜A22は、前記に同じ） で示されるペプチド残基またはそのフラグメントが挙げ
られる。
ノ酸残基のうち、カルシトニンを構成するアミノ酸残基
としては、例えば、Val−OH、Met−OHが挙げられる。ま
た、Ｘで表されるペプチド残基は、カルシトニンを構成
するペプチド残基であれば特に制限されない。ペプチド
残基としては、例えば、前記一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） で表される低級ペプチド残基；下記一般式（VIII） −A1−Leu−A2−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A1
1−A12−A13−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A2
0−A21−A22−Pro−NH2 （VIII） （式中、A1〜A22は、前記に同じ） で示されるペプチド残基またはそのフラグメントが挙げ
られる。
上記カルシトニンを構成するアミノ酸残基、一般式（VI
I）で表されるペプチド残基−A1−Leu−A2や、一般式
（VIII）で表されるペプチド残基のフラグメントを有す
るペプチドは、カルシトニン合成用の中間体として好適
である。
I）で表されるペプチド残基−A1−Leu−A2や、一般式
（VIII）で表されるペプチド残基のフラグメントを有す
るペプチドは、カルシトニン合成用の中間体として好適
である。
前記一般式（VII）で表される低級ペプチド残基におい
て、カルシトニンを構成する好ましいペプチド残基は、
−Val−Leu−Gly−OHである。一般式（VIII）で表され
るペプチド残基において、カルシトニンを構成する好ま
しいペプチド残基は、 −Val−Leu−Gly−Lys−Leu−Ser−Gln−Glu−Leu−His
−Lys−Leu−Gln−Thr−Tyr−Pro−Arg−Thr−Asp−Val
−Gly−Ala−Gly−Thr−Pro−NH2である。
て、カルシトニンを構成する好ましいペプチド残基は、
−Val−Leu−Gly−OHである。一般式（VIII）で表され
るペプチド残基において、カルシトニンを構成する好ま
しいペプチド残基は、 −Val−Leu−Gly−Lys−Leu−Ser−Gln−Glu−Leu−His
−Lys−Leu−Gln−Thr−Tyr−Pro−Arg−Thr−Asp−Val
−Gly−Ala−Gly−Thr−Pro−NH2である。
前記一般式（Ｉ）〜（VI）及び（IX）で示されるペプチ
ドにおいて、各アミノ酸残基を保護する保護基には、ペ
プチド化学に常用の保護基が使用できる。
ドにおいて、各アミノ酸残基を保護する保護基には、ペ
プチド化学に常用の保護基が使用できる。
ペプチド化学に常用の保護基のうち、カルボキシル基の
保護基としては、前記Ｘで表されるカルボキシル基の保
護基と同様の基が挙げられる。
保護基としては、前記Ｘで表されるカルボキシル基の保
護基と同様の基が挙げられる。
アミノ基の保護基としては、例えば、Boc基、トリクロ
ロエチルオキシカルボニル基、tert−アミルオキシカル
ボニル基などの置換基を有していてもよいアルコキシカ
ルボニル基；シクロペンチルオキシカルボニル基、シク
ロヘキシルオキシカルボニル基などの置換基を有してい
てもよいシクロアルキルオキシカルボニル基;Z基、ｐ−
メトキシベンジルオキシカルボニル基、Cl−Ｚ基、ｐ−
クロロベンジルオキシカルボニル基、Br−Ｚ基、ｐ−ブ
ロモベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジル
オキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基
などの置換基を有していてもよいアラルキルオキシカル
ボニル基;Bzl基、ベンズヒドリル基、トリチル基などの
置換基を有していてもよいアラルキル基；トリフルオロ
アセチル基、フタリル基、ホルミル基、ベンゼンスルホ
ニル基、Tos基、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル基、
2,4−ジニトロフェニルスルフエニル基、ジフェニルフ
ォスフィノチオイル基などの置換基を有していてもよい
アシル基などが挙げられる。
ロエチルオキシカルボニル基、tert−アミルオキシカル
ボニル基などの置換基を有していてもよいアルコキシカ
ルボニル基；シクロペンチルオキシカルボニル基、シク
ロヘキシルオキシカルボニル基などの置換基を有してい
てもよいシクロアルキルオキシカルボニル基;Z基、ｐ−
メトキシベンジルオキシカルボニル基、Cl−Ｚ基、ｐ−
クロロベンジルオキシカルボニル基、Br−Ｚ基、ｐ−ブ
ロモベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジル
オキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基
などの置換基を有していてもよいアラルキルオキシカル
ボニル基;Bzl基、ベンズヒドリル基、トリチル基などの
置換基を有していてもよいアラルキル基；トリフルオロ
アセチル基、フタリル基、ホルミル基、ベンゼンスルホ
ニル基、Tos基、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル基、
2,4−ジニトロフェニルスルフエニル基、ジフェニルフ
ォスフィノチオイル基などの置換基を有していてもよい
アシル基などが挙げられる。
Argのグアニジノ基は、例えば、ニトロ基、Ｚ基、Tos基
などで保護できる。このグアニジノ基は、保護しなくて
もよい。
などで保護できる。このグアニジノ基は、保護しなくて
もよい。
Hisのイミダゾリル基は、保護しなくてもよいが、例え
ば、Bzl基、Tos基、Ｚ基、トリチル基、アダマンチルオ
キシカルボニル基、2,2,2−トリフルオロ−１−tert−
ブトキシカルボニルアミノエチル基、2,2,2−トリフル
オロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチル基な
どで保護できる。
ば、Bzl基、Tos基、Ｚ基、トリチル基、アダマンチルオ
キシカルボニル基、2,2,2−トリフルオロ−１−tert−
ブトキシカルボニルアミノエチル基、2,2,2−トリフル
オロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチル基な
どで保護できる。
Ser、Thr、Tyrのヒドロキシ基は、例えば、Bzl基、４−
メトキシベンジル基、４−メチルベンジル基、3,4−ジ
メチルベンジル基、４−クロロベンジル基、2,6−ジク
ロロベンジル基、４−ニトロベンジル基、ベンズヒドリ
ル基、Ｚ基、Cl−Ｚ基、Br−Ｚ基、テトラヒドロピラニ
ル基などで保護できる。ヒドロキシ基は保護されていな
くてもよい。
メトキシベンジル基、４−メチルベンジル基、3,4−ジ
メチルベンジル基、４−クロロベンジル基、2,6−ジク
ロロベンジル基、４−ニトロベンジル基、ベンズヒドリ
ル基、Ｚ基、Cl−Ｚ基、Br−Ｚ基、テトラヒドロピラニ
ル基などで保護できる。ヒドロキシ基は保護されていな
くてもよい。
前記一般式（Ｉ）（III）（IIIa）（IV）及び（IVa）で
表されるペプチドは、ペプチド合成の常法に従って、保
護基の着脱、縮合反応を繰返すことにより得ることがで
きる。すなわち、本発明で使用される原料及び中間体の
保護基としては、ペプチド合成で公知の手段、例えば、
加水分解、酸分解、還元、アミノリシス、ヒドラジノリ
シスなどにより容易に脱離する保護基が使用される。
表されるペプチドは、ペプチド合成の常法に従って、保
護基の着脱、縮合反応を繰返すことにより得ることがで
きる。すなわち、本発明で使用される原料及び中間体の
保護基としては、ペプチド合成で公知の手段、例えば、
加水分解、酸分解、還元、アミノリシス、ヒドラジノリ
シスなどにより容易に脱離する保護基が使用される。
前記一般式（Ｉ）、（III）及び（IV）で表されるペプ
チドのうち、Ｘが水酸基又はカルボキシル基の保護基で
あるペプチドは、例えば、Ｌ−アミノスベリン酸−α−
低級アルキルエステルの側鎖カルボキシル基及び／又は
アミノ基に、対応するアミノ酸を１個ずつ順次縮合した
り、２〜５個のアミノ酸からなるペプチドを縮合するこ
とにより得ることができる。但し、一般式（Ｉ）及び
（III）で表されるペプチドにおいて、Ｂ及びＥが水素
原子である場合や、一般式（IV）で表されるペプチドに
おいて、Ｇが水素原子である場合には、Ｌ−アミノスベ
リン酸−α−低級アルキルエステルのアミノ基を保護し
ておく必要がある。また、一般式（IV）で表されるペプ
チドにおいて、Ｆが水酸基である場合には、Ｌ−アミノ
スベリン酸−α−低級アルキルエステルの側鎖カルボキ
シル基を保護しておくのが好ましい。
チドのうち、Ｘが水酸基又はカルボキシル基の保護基で
あるペプチドは、例えば、Ｌ−アミノスベリン酸−α−
低級アルキルエステルの側鎖カルボキシル基及び／又は
アミノ基に、対応するアミノ酸を１個ずつ順次縮合した
り、２〜５個のアミノ酸からなるペプチドを縮合するこ
とにより得ることができる。但し、一般式（Ｉ）及び
（III）で表されるペプチドにおいて、Ｂ及びＥが水素
原子である場合や、一般式（IV）で表されるペプチドに
おいて、Ｇが水素原子である場合には、Ｌ−アミノスベ
リン酸−α−低級アルキルエステルのアミノ基を保護し
ておく必要がある。また、一般式（IV）で表されるペプ
チドにおいて、Ｆが水酸基である場合には、Ｌ−アミノ
スベリン酸−α−低級アルキルエステルの側鎖カルボキ
シル基を保護しておくのが好ましい。
より具体的には、前記一般式（Ｉ）で示されるペプチド
のうち、下記一般式： （式中、X1はBzl基、Ｘはカルボキシル基の保護基を示
す） で表されるペプチドは、例えば、次のようにして合成す
ることができる。すなわち、スレオニンにＮ保護ロイシ
ルセリンを、活性エステル法、混合酸無水物法、又はDC
C−HOBt法などの通常のペプチド合成法に従って縮合す
る。次いで、得られたトリペプチドに、Ｎ保護セリルア
スパラギン、Ｎ保護アミノスベリン酸−α−低級アルキ
ルエステルを順次縮合した後、Ｎ保護アミノスベリン酸
−α−低級アルキルエステルの保護基を脱離することに
より得ることができる。但し、スレオニンのカルボキシ
ル基を保護基で保護しておき、上記のようにして、アミ
ノ酸やペプチドを縮合した後、前記保護基を脱離するの
が好ましい。
のうち、下記一般式： （式中、X1はBzl基、Ｘはカルボキシル基の保護基を示
す） で表されるペプチドは、例えば、次のようにして合成す
ることができる。すなわち、スレオニンにＮ保護ロイシ
ルセリンを、活性エステル法、混合酸無水物法、又はDC
C−HOBt法などの通常のペプチド合成法に従って縮合す
る。次いで、得られたトリペプチドに、Ｎ保護セリルア
スパラギン、Ｎ保護アミノスベリン酸−α−低級アルキ
ルエステルを順次縮合した後、Ｎ保護アミノスベリン酸
−α−低級アルキルエステルの保護基を脱離することに
より得ることができる。但し、スレオニンのカルボキシ
ル基を保護基で保護しておき、上記のようにして、アミ
ノ酸やペプチドを縮合した後、前記保護基を脱離するの
が好ましい。
また、本発明に用いる前記一般式（III）で示されるペ
プチドのうち、下記一般式： （式中、Ｘはカルボキシル基の保護基を示す） で表されるペプチドは、例えば、次のようにして合成す
ることができる。すなわち、Ｌ−アミノスベリン酸−α
−低級アルキルエステルに、Ｎ保護スレオニンを活性エ
ステル法、混合酸無水物法などで縮合し、ついでＬ−ア
ミノスベリン酸の側鎖カルボキシル基を活性化させた
後、セリルアスパラギルロイシンと縮合し、得られたペ
ンタペプチドにＮ保護セリンを混合酸無水物法、活性エ
ステル法などの通常のペプチド合成法に従い縮合し、Ｎ
保護セリンの保護基を脱離することにより得られる。
プチドのうち、下記一般式： （式中、Ｘはカルボキシル基の保護基を示す） で表されるペプチドは、例えば、次のようにして合成す
ることができる。すなわち、Ｌ−アミノスベリン酸−α
−低級アルキルエステルに、Ｎ保護スレオニンを活性エ
ステル法、混合酸無水物法などで縮合し、ついでＬ−ア
ミノスベリン酸の側鎖カルボキシル基を活性化させた
後、セリルアスパラギルロイシンと縮合し、得られたペ
ンタペプチドにＮ保護セリンを混合酸無水物法、活性エ
ステル法などの通常のペプチド合成法に従い縮合し、Ｎ
保護セリンの保護基を脱離することにより得られる。
前記一般式（Ｉ）、（III）及び（VI）で表されるペプ
チドのうち、Ｘがアミノ酸残基又はペプチド残基である
ペプチドは、例えば、上記のようにしてアミノ酸やペプ
チドを縮合させたＬ−アミノスベリン酸−α−低級アル
キルエステルの保護基であるアルコキシ基を脱離し、カ
ルボキシル基を活性化した後、対応するアミノ酸を１
個、又は１個ずつ順次縮合したり、２個以上のアミノ酸
からなるペプチドを縮合することにより得ることができ
る。
チドのうち、Ｘがアミノ酸残基又はペプチド残基である
ペプチドは、例えば、上記のようにしてアミノ酸やペプ
チドを縮合させたＬ−アミノスベリン酸−α−低級アル
キルエステルの保護基であるアルコキシ基を脱離し、カ
ルボキシル基を活性化した後、対応するアミノ酸を１
個、又は１個ずつ順次縮合したり、２個以上のアミノ酸
からなるペプチドを縮合することにより得ることができ
る。
縮合反応では、（ａ）活性化された末端カルボキシル基
及び保護基で保護されたα−アミノ基を有するアミノ酸
やペプチドと、遊離のα−アミノ基及び保護基で保護さ
れたカルボキシル基を有するアミノ酸やペプチドとを反
応させてもよく、（ｂ）活性化されたα−アミノ基及び
保護されたカルボキシル基を有するアミノ酸やペプチド
と、遊離のカルボキシル基及び保護されたα−アミノ基
を有するアミノ酸やペプチドとを反応させてもよい。
及び保護基で保護されたα−アミノ基を有するアミノ酸
やペプチドと、遊離のα−アミノ基及び保護基で保護さ
れたカルボキシル基を有するアミノ酸やペプチドとを反
応させてもよく、（ｂ）活性化されたα−アミノ基及び
保護されたカルボキシル基を有するアミノ酸やペプチド
と、遊離のカルボキシル基及び保護されたα−アミノ基
を有するアミノ酸やペプチドとを反応させてもよい。
カルボキシル基の活性化は、例えば、酸アジド、酸無水
物、酸イミダゾリド、活性エステル、カルボジイミド、
N,N′−カルボニル−ジイミダゾールまたはイソオキゾ
リウム塩、例えば、ウッドワード反応剤などで処理する
ことにより行なうことができる。活性エステルとして
は、例えば、シアノメチルエステル、チオフェニルエス
テル、ｐ−ニトロチオフェニルエステル、ｐ−メタンス
ルホニルフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステ
ル、2,4−ジニトロフェニルエステル、2,4,6−トリクロ
ロフェニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、
OSu、Ｎ−ヒドロキシフタル酸イミドエステル、８−ヒ
ドロキノリンエステルまたはＮ−ヒドロキシピペリジン
エステルなどが挙げられる。
物、酸イミダゾリド、活性エステル、カルボジイミド、
N,N′−カルボニル−ジイミダゾールまたはイソオキゾ
リウム塩、例えば、ウッドワード反応剤などで処理する
ことにより行なうことができる。活性エステルとして
は、例えば、シアノメチルエステル、チオフェニルエス
テル、ｐ−ニトロチオフェニルエステル、ｐ−メタンス
ルホニルフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステ
ル、2,4−ジニトロフェニルエステル、2,4,6−トリクロ
ロフェニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、
OSu、Ｎ−ヒドロキシフタル酸イミドエステル、８−ヒ
ドロキノリンエステルまたはＮ−ヒドロキシピペリジン
エステルなどが挙げられる。
好ましい縮合反応は、カルボジイミド法、アジド法、活
性エステル法及び混合酸無水物法である。さらに好まし
い縮合反応は、縮合過程でのラセミ化を抑制する方法、
例えば、活性エステル法、カルボジイミド法やこれらを
組合せた方法、DCC−HOSu法などのカルボジイミド及び
ヒドロキシコハク酸イミドを用いる方法、DCC−HOBt
法、WSC−HOBt法などのカルボジイミド及びヒドロキシ
ベンゾトリアゾールを用いる方法である。なお、WSCは
前記EDCなどの水溶性カルボジイミドを示す。さらに好
ましい方法には、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びカ
ルボジイミド、又はヒドロキシコハク酸イミド及びカル
ボジイミドなどを用いる、いわゆるカルボジイミド−ア
ディティブ法が含まれる。
性エステル法及び混合酸無水物法である。さらに好まし
い縮合反応は、縮合過程でのラセミ化を抑制する方法、
例えば、活性エステル法、カルボジイミド法やこれらを
組合せた方法、DCC−HOSu法などのカルボジイミド及び
ヒドロキシコハク酸イミドを用いる方法、DCC−HOBt
法、WSC−HOBt法などのカルボジイミド及びヒドロキシ
ベンゾトリアゾールを用いる方法である。なお、WSCは
前記EDCなどの水溶性カルボジイミドを示す。さらに好
ましい方法には、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びカ
ルボジイミド、又はヒドロキシコハク酸イミド及びカル
ボジイミドなどを用いる、いわゆるカルボジイミド−ア
ディティブ法が含まれる。
一般式（III）で表されるペプチドから一般式（II）で
表される環状ペプチドを製造する方法の特徴は、一般式
（III）で表されるペプチドのＣ−末端アミノ酸の活性
化されたカルボキシル基と、Ｎ−末端アミノ酸のアミノ
基とを縮合環化する点にある。一般式（III）で表され
るペプチドから一般式（II）で表されるペプチドを得る
環化反応は、通常の化学的縮合反応に従って行なうこと
ができる。この環化反応は、アルカリ金属塩の存在下で
行なうのが好ましい。
表される環状ペプチドを製造する方法の特徴は、一般式
（III）で表されるペプチドのＣ−末端アミノ酸の活性
化されたカルボキシル基と、Ｎ−末端アミノ酸のアミノ
基とを縮合環化する点にある。一般式（III）で表され
るペプチドから一般式（II）で表されるペプチドを得る
環化反応は、通常の化学的縮合反応に従って行なうこと
ができる。この環化反応は、アルカリ金属塩の存在下で
行なうのが好ましい。
一般式（IV）で表されるペプチドから一般式（II）で表
される環状ペプチドを製造する方法の特徴は、一般式
（IV）で表されるペプチドを、アルカリ金属塩の存在下
で環化反応に付し、一般式（II）で表されるペプチドを
得る点にある。この環化反応は、一般式（IV）で表され
るペプチドにおいて、Ｆが水酸基又は活性エステル残基
である場合には、α−Ｌ−アミノスベリン酸の側鎖の活
性化されたカルボキシル基と、Ｎ−末端アミノ酸のアミ
ノ基との縮合反応により行なうことができる。その際、
Ser及びThrの水酸基は保護しておくのが好ましい。アル
カリ金属塩の存在下で反応する場合には、前記一般式
（IV）で表されるペプチドにおいて、Ｆが水酸基又は活
性エステル残基であっても円滑に環化反応を行なうこと
ができ、ペプチドの収率を高めることができる。
される環状ペプチドを製造する方法の特徴は、一般式
（IV）で表されるペプチドを、アルカリ金属塩の存在下
で環化反応に付し、一般式（II）で表されるペプチドを
得る点にある。この環化反応は、一般式（IV）で表され
るペプチドにおいて、Ｆが水酸基又は活性エステル残基
である場合には、α−Ｌ−アミノスベリン酸の側鎖の活
性化されたカルボキシル基と、Ｎ−末端アミノ酸のアミ
ノ基との縮合反応により行なうことができる。その際、
Ser及びThrの水酸基は保護しておくのが好ましい。アル
カリ金属塩の存在下で反応する場合には、前記一般式
（IV）で表されるペプチドにおいて、Ｆが水酸基又は活
性エステル残基であっても円滑に環化反応を行なうこと
ができ、ペプチドの収率を高めることができる。
アルカリ金属塩としてはリチウム、ナトリウム、カリウ
ム、ルビジウム、セシウムのハロゲン化物、例えば、フ
ッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物などが挙げられる。
これらのアルカリ金属塩は、単独又は適当に組み合わせ
て使用できる。
ム、ルビジウム、セシウムのハロゲン化物、例えば、フ
ッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物などが挙げられる。
これらのアルカリ金属塩は、単独又は適当に組み合わせ
て使用できる。
アルカリ金属塩の使用量は、円滑な環化反応を損わない
範囲であれば特に制限されないが、通常、環化させるペ
プチドに大して、アルカリ金属塩が0.01〜400当量、好
ましくは0.01〜100当量程度である。より具体的には、
アルカリ金属塩を、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩
化カリウム、塩化セシウムの混合物として用いる場合に
は、環化させるペプチドに対して、これらの塩をそれぞ
れ0.01〜100当量、好ましくは0.1〜20当量程度添加すれ
ばよい。
範囲であれば特に制限されないが、通常、環化させるペ
プチドに大して、アルカリ金属塩が0.01〜400当量、好
ましくは0.01〜100当量程度である。より具体的には、
アルカリ金属塩を、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩
化カリウム、塩化セシウムの混合物として用いる場合に
は、環化させるペプチドに対して、これらの塩をそれぞ
れ0.01〜100当量、好ましくは0.1〜20当量程度添加すれ
ばよい。
なお、前記一般式（II）で表される環状ペプチドの合成
において、活性基が保護されたアミノ酸又はペプチドを
用いる場合には、保護基で保護された生成ペプチドを、
慣用の保護基の脱離方法、好ましくは酸による脱離、例
えば、フッ化水素による脱離反応に供することにより、
環状ペプチドが得られる。
において、活性基が保護されたアミノ酸又はペプチドを
用いる場合には、保護基で保護された生成ペプチドを、
慣用の保護基の脱離方法、好ましくは酸による脱離、例
えば、フッ化水素による脱離反応に供することにより、
環状ペプチドが得られる。
前記一般式（Ｖ）で表される環状ペプチドにおけるＷ、
および前記一般式（VI）で表されるペプチド−樹脂にお
けるＹは、エルカトニンを構成するのが好ましい。すな
わち、（ａ）Ｗが水酸基であるとき、Ｙは、Ｈ−Val−L
eu−Gly−であるのが好ましく、（ｂ）Ｗが−Val−Leu
−Gly−OHであるとき、Ｙは、水素原子であるのが好ま
しい。ＷとＹの好ましい組合せは、上記（ｂ）の組合せ
である。さらに、一般式（VI）で表される好ましいペプ
チド−樹脂は、 Ｙ−Lys−Leu−Ser−Gln−Glu−Leu−His−Lys−Leu−G
ln−Thr−Tyr−Pro−Arg−Thr−Asp−Val−Gly−Ala−G
ly−Thr−Pro−Resin である。
および前記一般式（VI）で表されるペプチド−樹脂にお
けるＹは、エルカトニンを構成するのが好ましい。すな
わち、（ａ）Ｗが水酸基であるとき、Ｙは、Ｈ−Val−L
eu−Gly−であるのが好ましく、（ｂ）Ｗが−Val−Leu
−Gly−OHであるとき、Ｙは、水素原子であるのが好ま
しい。ＷとＹの好ましい組合せは、上記（ｂ）の組合せ
である。さらに、一般式（VI）で表される好ましいペプ
チド−樹脂は、 Ｙ−Lys−Leu−Ser−Gln−Glu−Leu−His−Lys−Leu−G
ln−Thr−Tyr−Pro−Arg−Thr−Asp−Val−Gly−Ala−G
ly−Thr−Pro−Resin である。
この製造方法の特徴は、前記一般式（IIIa）で表される
ペプチドを化学的縮合反応（但し、蛋白分解酵素による
環化反応を除く）により環化させるか、または前記一般
式（IVa）で表されるペプチドをアルカリ金属塩の存在
下で環化反応に付して、前記一般式（Ｖ）で示されるペ
プチドとし、次いで、前記一般式（Ｖ）で表されるペプ
チドのＣ−末端アミノ酸のカルボキシル基の保護基を脱
離させ、固相反応により合成した一般式（VI）で表され
るペプチドと、固相樹脂上で反応させ、環状ペプチド、
特にエルカトニンを得る点にある。より詳細には、一般
式（IIIa）で表されるペプチドを前記一般式（III）で
表されるペプチドの環化方法に従って環化するか、また
は一般式（IVa）で表されるペプチドを前記一般式（I
V）で表されるペプチドの環化方法にしたがって環化
し、得られた一般式（Ｖ）で表される環状ペプチド、す
なわち、１〜６番、または１〜９番までのアミノ酸から
なるフラグメントを、前記一般式（VI）で示される固相
反応樹脂上のペプチド、すなわち、７〜31番、または10
〜31番までのペプチドと固相法により縮合させる。一般
式（Ｖ）で表されるフラグメントのＣ−末端アミノ酸
は、縮合反応性及びラセミ化防止のため、グリシンであ
るのが好ましい。従って、エルカトニンは、一般式
（Ｖ）で表される環化したペプチドのうち、１〜９番の
アミノ酸からなるペプチドと、前記一般式（VI）で示さ
れる固相反応樹脂上のペプチドのうち、10〜31番のアミ
ノ酸からなるペプチドとを縮合させて合成するのが好ま
しい。
ペプチドを化学的縮合反応（但し、蛋白分解酵素による
環化反応を除く）により環化させるか、または前記一般
式（IVa）で表されるペプチドをアルカリ金属塩の存在
下で環化反応に付して、前記一般式（Ｖ）で示されるペ
プチドとし、次いで、前記一般式（Ｖ）で表されるペプ
チドのＣ−末端アミノ酸のカルボキシル基の保護基を脱
離させ、固相反応により合成した一般式（VI）で表され
るペプチドと、固相樹脂上で反応させ、環状ペプチド、
特にエルカトニンを得る点にある。より詳細には、一般
式（IIIa）で表されるペプチドを前記一般式（III）で
表されるペプチドの環化方法に従って環化するか、また
は一般式（IVa）で表されるペプチドを前記一般式（I
V）で表されるペプチドの環化方法にしたがって環化
し、得られた一般式（Ｖ）で表される環状ペプチド、す
なわち、１〜６番、または１〜９番までのアミノ酸から
なるフラグメントを、前記一般式（VI）で示される固相
反応樹脂上のペプチド、すなわち、７〜31番、または10
〜31番までのペプチドと固相法により縮合させる。一般
式（Ｖ）で表されるフラグメントのＣ−末端アミノ酸
は、縮合反応性及びラセミ化防止のため、グリシンであ
るのが好ましい。従って、エルカトニンは、一般式
（Ｖ）で表される環化したペプチドのうち、１〜９番の
アミノ酸からなるペプチドと、前記一般式（VI）で示さ
れる固相反応樹脂上のペプチドのうち、10〜31番のアミ
ノ酸からなるペプチドとを縮合させて合成するのが好ま
しい。
前記一般式（VI）で示される固相反応樹脂上のペプチド
は、アール・ビー・メリーフィールド［R.B.Merrifiel
d,j.Am.Chem.Soc.,85,2149（1963）］により開発された
方法に従い、対称酸無水物法、活性エステル法などを利
用して、官能基を適当な保護基で保護した保護アミノ酸
をカルボキシル末端より順次縮合させることにより合成
できる。
は、アール・ビー・メリーフィールド［R.B.Merrifiel
d,j.Am.Chem.Soc.,85,2149（1963）］により開発された
方法に従い、対称酸無水物法、活性エステル法などを利
用して、官能基を適当な保護基で保護した保護アミノ酸
をカルボキシル末端より順次縮合させることにより合成
できる。
担体としての樹脂は、特に限定されないが、目的ペプチ
ドのカルボキシル末端が酸アミドであることから、例え
ば、ベンズヒドリルアミン樹脂、ｐ−メチルベンズヒド
リルアミン樹脂、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸樹脂など
が挙げられる。
ドのカルボキシル末端が酸アミドであることから、例え
ば、ベンズヒドリルアミン樹脂、ｐ−メチルベンズヒド
リルアミン樹脂、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸樹脂など
が挙げられる。
固相反応樹脂上で環状ペプチドを反応させる方法は、通
常の固相法と同様に反応させればよく、一般式（Ｖ）で
表される環状ペプチド量は、固相反応樹脂に対して、例
えば、1.0〜3.0当量程度使用できる。
常の固相法と同様に反応させればよく、一般式（Ｖ）で
表される環状ペプチド量は、固相反応樹脂に対して、例
えば、1.0〜3.0当量程度使用できる。
固相反応樹脂上で合成された保護基を有するペプチド
を、慣用の保護基の脱離方法、好ましくは酸による脱離
反応、例えば、フッ化水素による脱離反応に供すること
により、環状ペプチドやエルカトニンが得られる。
を、慣用の保護基の脱離方法、好ましくは酸による脱離
反応、例えば、フッ化水素による脱離反応に供すること
により、環状ペプチドやエルカトニンが得られる。
反応生成物は、例えば、ゲル濾過法、イオン交換クロマ
トグラフィー、分配クロマトグラフィー、高速液体クロ
マトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー、電
気泳動法などの慣用の分離精製手段により、単離精製で
きる。
トグラフィー、分配クロマトグラフィー、高速液体クロ
マトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー、電
気泳動法などの慣用の分離精製手段により、単離精製で
きる。
本発明の方法により得られる環状ペプチドやエルカトニ
ンは、反応条件により、遊離のペプチド又はその塩の形
態で得られる。遊離のペプチドとその塩は、慣用の方法
により相互に変換可能である。遊離のペプチドを、薬理
的に許容できる塩とする場合には、例えば、塩酸、硫
酸、臭化水素酸、リン酸などの無機酸；ギ酸、酢酸、プ
ロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ
酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香
酸、サリチル酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホ
ン酸などの有機酸と反応させればよい。ペプチド及び合
成エルカトニンは、無機又は有機物質と錯体を形成す
る。このような物質としては、例えば、カルシウム、マ
グネシウム、アルミニウム、コバルト、亜鉛などの金属
から誘導される無機化合物、特にこれらの金属のリン酸
塩、ピロリン酸塩、ポリリン酸塩などのように僅かに可
溶性の塩、水酸化物、アルカリ金属のポリリン酸塩など
が挙げられる。
ンは、反応条件により、遊離のペプチド又はその塩の形
態で得られる。遊離のペプチドとその塩は、慣用の方法
により相互に変換可能である。遊離のペプチドを、薬理
的に許容できる塩とする場合には、例えば、塩酸、硫
酸、臭化水素酸、リン酸などの無機酸；ギ酸、酢酸、プ
ロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ
酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香
酸、サリチル酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホ
ン酸などの有機酸と反応させればよい。ペプチド及び合
成エルカトニンは、無機又は有機物質と錯体を形成す
る。このような物質としては、例えば、カルシウム、マ
グネシウム、アルミニウム、コバルト、亜鉛などの金属
から誘導される無機化合物、特にこれらの金属のリン酸
塩、ピロリン酸塩、ポリリン酸塩などのように僅かに可
溶性の塩、水酸化物、アルカリ金属のポリリン酸塩など
が挙げられる。
また、環状ペプチドや合成エルカトニンは、薬理作用を
長期に亘り発揮させるため、有機物質と併用してもよ
い。有機物質としては、例えば、非抗原性ゼラチン、カ
ルボキシメチルセルロース、アルギン酸のスルホン酸エ
ステル又はリン酸エステル、デキストラン、ポリエチレ
ングリコールなどのグリコール、フィチン酸、ポリグル
タミン酸、プロタミンなどが挙げられる。
長期に亘り発揮させるため、有機物質と併用してもよ
い。有機物質としては、例えば、非抗原性ゼラチン、カ
ルボキシメチルセルロース、アルギン酸のスルホン酸エ
ステル又はリン酸エステル、デキストラン、ポリエチレ
ングリコールなどのグリコール、フィチン酸、ポリグル
タミン酸、プロタミンなどが挙げられる。
産業上の利用可能性
本発明のペプチド、および製造方法により得られる環状
ペプチド、特にエルカトニンは、高カルシウム血症、骨
粗鬆症の治療などに使用できる。
ペプチド、特にエルカトニンは、高カルシウム血症、骨
粗鬆症の治療などに使用できる。
以下に、本発明の実施例及び参考例を示すが、本発明
は、これらの実施例に限定されるものではない。
は、これらの実施例に限定されるものではない。
実施例
実施例及び参考例におけるアミノ酸分析は、いずれも、
被検体を6N塩酸を用いて110℃で、24時間加水分解し、
これを減圧乾固した後、行なった。
被検体を6N塩酸を用いて110℃で、24時間加水分解し、
これを減圧乾固した後、行なった。
実施例１
1.15gに、氷冷下、TFA5mlを加えて溶解し、30分間放置
した後、エーテルで処理し、析出した生成物を濾取し、
水酸化カリウム上で真空乾燥し、 (CH2)5CO−Ser（Bzl）−Asn−OH ｜ TFA・Ｈ−Leu−Ser（Bzl）−Thr（Bzl）−HNCH−COOCH3
1.09g（収率97.1％）を得た。
した後、エーテルで処理し、析出した生成物を濾取し、
水酸化カリウム上で真空乾燥し、 (CH2)5CO−Ser（Bzl）−Asn−OH ｜ TFA・Ｈ−Leu−Ser（Bzl）−Thr（Bzl）−HNCH−COOCH3
1.09g（収率97.1％）を得た。
mp :85−88℃
▲［α］24 D▼:14.7°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.17（クロロホルム：メタノール：水
＝40:10:1）
得られた生成物をDMF1に溶解し、氷冷下で、Ｎ−メチ
ルモルホリン0.12mlで中和した後、NaCl70.1mg、KCl89.
5mg、LiCl50.9mg、CsCl202mg、EDC・HCl0.45g、HOBt・H
2O0.35gを加えた。室温で96時間攪拌した後、減圧濃縮
した。残渣にH2O100mlを加え、生成した油状物をH2O50m
lで洗浄した後、50％メタノール50mlを加え、40℃で30
分間インキュベートした。生成した不溶物を濾過し、濾
液を、イオン交換樹脂を充填したカラム（0.8×5cm）に
通した。溶出液を減圧濃縮し、残渣を真空乾燥して上記
目的物からなる粉末0.72g（収率70.3％）を得た。
ルモルホリン0.12mlで中和した後、NaCl70.1mg、KCl89.
5mg、LiCl50.9mg、CsCl202mg、EDC・HCl0.45g、HOBt・H
2O0.35gを加えた。室温で96時間攪拌した後、減圧濃縮
した。残渣にH2O100mlを加え、生成した油状物をH2O50m
lで洗浄した後、50％メタノール50mlを加え、40℃で30
分間インキュベートした。生成した不溶物を濾過し、濾
液を、イオン交換樹脂を充填したカラム（0.8×5cm）に
通した。溶出液を減圧濃縮し、残渣を真空乾燥して上記
目的物からなる粉末0.72g（収率70.3％）を得た。
mp :201−201℃
▲［α］25 D▼：−24.7°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.50（クロロホルム：メタノール＝9:1）
アミノ酸分析値：
Asp1.09（１）、Thr0.97（１）、Ser1.63（２）、Leu1.
22（１）、アミノスベリン酸1.09（１） 実施例２ Boc−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBz
l）−Leu−His（Tos）−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Gln−Thr
（Bzl）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bz
l）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH−樹脂756mgに、30％TFAの塩化メチレン溶液20m
lを加え、室温で30分間撹拌した。樹脂を塩化メチレン2
0mlで1.5分間×６回、７％Ｎ−メチルモルホリンの塩化
メチレン溶液20mlで1.5分間×２回、次いで塩化メチレ
ン20mlで1.5分間×６回それぞれ洗浄して、 Ｈ−Lys（C1−Ｚ）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBz
l）−Leu−His（Tos）−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Gln−Thr
（Bzl）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bz
l）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH−樹脂を得た。
22（１）、アミノスベリン酸1.09（１） 実施例２ Boc−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBz
l）−Leu−His（Tos）−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Gln−Thr
（Bzl）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bz
l）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH−樹脂756mgに、30％TFAの塩化メチレン溶液20m
lを加え、室温で30分間撹拌した。樹脂を塩化メチレン2
0mlで1.5分間×６回、７％Ｎ−メチルモルホリンの塩化
メチレン溶液20mlで1.5分間×２回、次いで塩化メチレ
ン20mlで1.5分間×６回それぞれ洗浄して、 Ｈ−Lys（C1−Ｚ）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBz
l）−Leu−His（Tos）−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Gln−Thr
（Bzl）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bz
l）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH−樹脂を得た。
上記樹脂をNMP20mlに加え、さらに
215mg、HOBt・H2O64.5mg及びDCC86.8mgを加え、室温で4
8時間撹拌した。反応終了後、樹脂をNMP、DMF、メタノ
ール、塩化メチレンの順で洗浄した後、減圧乾燥し目的
物 Lys（C1−Ｚ）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBzl）−
Leu−His（Tos）−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Gln−Thr（Bz
l）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−A
sp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−N
H−樹脂834mgを得た。
8時間撹拌した。反応終了後、樹脂をNMP、DMF、メタノ
ール、塩化メチレンの順で洗浄した後、減圧乾燥し目的
物 Lys（C1−Ｚ）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBzl）−
Leu−His（Tos）−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Gln−Thr（Bz
l）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−A
sp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−N
H−樹脂834mgを得た。
実施例３
樹脂834mgに、アニソール0.9mlとフッ化水素9.0mlを加
え、０℃で１時間撹拌した後、過剰のフッ化水素を減圧
留去し、残渣をエチルエーテルで洗浄した後、1M酢酸水
溶液50mlにて抽出し、凍結乾燥して、粗エルカトニン35
2mgを得た。
え、０℃で１時間撹拌した後、過剰のフッ化水素を減圧
留去し、残渣をエチルエーテルで洗浄した後、1M酢酸水
溶液50mlにて抽出し、凍結乾燥して、粗エルカトニン35
2mgを得た。
得られた粗エルカトニン352mgを、陽イオン交換樹脂を
充填したカラム上に注入し、酢酸アンモニウム緩衝液に
よる直線型濃度勾配溶出を行なった。溶出液を高速液体
クロマトグラフィーにより分析し、目的とするエルカト
ニンを高濃度に含む画分を集めて凍結乾燥し、中間精製
エルカトニン100mgを得た。
充填したカラム上に注入し、酢酸アンモニウム緩衝液に
よる直線型濃度勾配溶出を行なった。溶出液を高速液体
クロマトグラフィーにより分析し、目的とするエルカト
ニンを高濃度に含む画分を集めて凍結乾燥し、中間精製
エルカトニン100mgを得た。
得られた中間精製エルカトニン100mgを高速液体クロマ
トグラフィー（カラム：東ソー（株）製、TSK GEL ODS
120T、2.15×30cm、溶出:0.1％TFA/CH3CN＝63/37、流
速:8ml/分）にて分取精製し、エルカトニン・TFA塩70mg
を得た。
トグラフィー（カラム：東ソー（株）製、TSK GEL ODS
120T、2.15×30cm、溶出:0.1％TFA/CH3CN＝63/37、流
速:8ml/分）にて分取精製し、エルカトニン・TFA塩70mg
を得た。
このエルカトニン・TFA塩を、陽イオン交換樹脂を充填
したカラム上に注入し、酢酸アンモニウム水溶液による
pH勾配溶出を行なった。吸収波長280nmの画分を集めて
凍結乾燥し、エルカトニン酢酸塩の粉末64mgを得た。
したカラム上に注入し、酢酸アンモニウム水溶液による
pH勾配溶出を行なった。吸収波長280nmの画分を集めて
凍結乾燥し、エルカトニン酢酸塩の粉末64mgを得た。
mp :240℃（分解）
▲［α］20 D▼：−93.1°（Ｃ＝0.25、0.1M酢酸水溶
液） Rf :0.39（水:n−ブタノール：酢酸 ＝5:4:1の上層） アミノ酸分析値： Asp2.07（２）、Thr3.69（４）、Ser2.59（３）、Glu3.
03（３）、Gly3.13（３）、Ala1.10（１）、Val2.06
（２）、Leu5.29（５）、Tyr1.03（１）、Lys2.08
（２）、His0.84（１）、Arg1.02（１）、Pro2.03
（２）、アミノスベリン酸1.05（１） 参考例１ Boc−Thr（Bzl）−OH7.74gをTHF40mlに溶解し、−15℃
に冷却し、Ｎ−メチルモルホリン2.56ml、次いでイソブ
チルクロロホルメイト3.30mlを滴下した後、−15℃で１
分間撹拌し、該当する混合酸無水物を調製した。この反
応液をＬ−アミノスベリン酸−α−メチルエステル5.08
gとトリエチルアミン3.50mlとを含むDMF溶液と混合し、
０℃で５分間、室温で１時間撹拌した後、減圧濃縮し
た。残渣に酢酸エチル400mlを加え、10％クエン酸100ml
で２回、飽和食塩水100mlで２回、冷却した５％重曹水1
00mlで５回、飽和食塩水100mlで２回の順で洗浄した。
各洗浄水は順次酢酸エチル300mlで２回抽出した。酢酸
エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、
目的物からなる油状物11.56gを得た。
液） Rf :0.39（水:n−ブタノール：酢酸 ＝5:4:1の上層） アミノ酸分析値： Asp2.07（２）、Thr3.69（４）、Ser2.59（３）、Glu3.
03（３）、Gly3.13（３）、Ala1.10（１）、Val2.06
（２）、Leu5.29（５）、Tyr1.03（１）、Lys2.08
（２）、His0.84（１）、Arg1.02（１）、Pro2.03
（２）、アミノスベリン酸1.05（１） 参考例１ Boc−Thr（Bzl）−OH7.74gをTHF40mlに溶解し、−15℃
に冷却し、Ｎ−メチルモルホリン2.56ml、次いでイソブ
チルクロロホルメイト3.30mlを滴下した後、−15℃で１
分間撹拌し、該当する混合酸無水物を調製した。この反
応液をＬ−アミノスベリン酸−α−メチルエステル5.08
gとトリエチルアミン3.50mlとを含むDMF溶液と混合し、
０℃で５分間、室温で１時間撹拌した後、減圧濃縮し
た。残渣に酢酸エチル400mlを加え、10％クエン酸100ml
で２回、飽和食塩水100mlで２回、冷却した５％重曹水1
00mlで５回、飽和食塩水100mlで２回の順で洗浄した。
各洗浄水は順次酢酸エチル300mlで２回抽出した。酢酸
エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、
目的物からなる油状物11.56gを得た。
参考例２
からなる油状物6.58gをTHF40mlに溶解し、氷冷下で、HO
Su1.53g及びDCC2.74gのTHF溶液を加えて、４℃で20時間
撹拌した。ジシクロヘキシルウレア（DCU）よりなる白
色物質を除去し、THFを留去して、目的物からなる油状
物7.87gを得た。
Su1.53g及びDCC2.74gのTHF溶液を加えて、４℃で20時間
撹拌した。ジシクロヘキシルウレア（DCU）よりなる白
色物質を除去し、THFを留去して、目的物からなる油状
物7.87gを得た。
参考例３
Boc−Ser（Bzl）−Asn−OHの製造
Ｈ−Asn−OH・H2O4.50gをH2O80mlに懸濁し、氷冷下、ト
リエチルアミン4.20ml及びBoc−Ser（Bzl）−OSu14.13g
のTHF溶液80mlを加え、室温で20時間撹拌した後、THFを
留去した。残った水溶液を、氷冷下、1Mクエン酸でpH3
に調整した後、生成した油状物を酢酸エチル200mlで抽
出し、飽和食塩水50mlで２回洗浄した。無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥した後、減圧濃縮した。残渣をエーテル／石
油エーテル（2/1混合液）で処理して固化し、メタノー
ル−イソプロピルエーテルより再沈澱化して、Boc−Ser
（Bzl）−Asn−OH8.74g（収率71.2％）を得た。
リエチルアミン4.20ml及びBoc−Ser（Bzl）−OSu14.13g
のTHF溶液80mlを加え、室温で20時間撹拌した後、THFを
留去した。残った水溶液を、氷冷下、1Mクエン酸でpH3
に調整した後、生成した油状物を酢酸エチル200mlで抽
出し、飽和食塩水50mlで２回洗浄した。無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥した後、減圧濃縮した。残渣をエーテル／石
油エーテル（2/1混合液）で処理して固化し、メタノー
ル−イソプロピルエーテルより再沈澱化して、Boc−Ser
（Bzl）−Asn−OH8.74g（収率71.2％）を得た。
mp :135−139℃
▲［α］22 D▼:10.2°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.54（クロロホルム：メタノール：酢酸
＝7:2:1）
アミノ酸分析値：
Asp1.14（１）、Ser0.86（１）
参考例４
Boc−Ser（Bzl）−Asn−OH5.45gに、氷冷下、TFA35mlを
加えて溶解し、30分間放置した後、エーテル／石油エー
テル（1/2混合液）で処理し、析出した生成物を濾取
し、水酸化カリウム上で真空乾燥してＨ−Ser（Bzl）−
Asn−OH・TFAを得た。
加えて溶解し、30分間放置した後、エーテル／石油エー
テル（1/2混合液）で処理し、析出した生成物を濾取
し、水酸化カリウム上で真空乾燥してＨ−Ser（Bzl）−
Asn−OH・TFAを得た。
得られた生成物をDMF35mlに溶解し、これを氷冷下、ト
リエチルアミンで中和した後、 7.87gのDMF溶液35mlを加えた。０℃で１時間、４℃で40
時間撹拌した後、少量の不溶物を濾過した後、減圧濃縮
した。残渣に酢酸エチル300mlを加え、冷却した10％ク
エン酸50mlで３回、H2O50mlで２回の順で洗浄した後、
減圧濃縮した。残渣にエタノール30mlを加え留去する操
作を３回繰返して脱水した後、エーテル処理して固化
し、メタノール−エーテルより再沈澱化して、上記目的
物9.07g（収率86.8％）を得た。
リエチルアミンで中和した後、 7.87gのDMF溶液35mlを加えた。０℃で１時間、４℃で40
時間撹拌した後、少量の不溶物を濾過した後、減圧濃縮
した。残渣に酢酸エチル300mlを加え、冷却した10％ク
エン酸50mlで３回、H2O50mlで２回の順で洗浄した後、
減圧濃縮した。残渣にエタノール30mlを加え留去する操
作を３回繰返して脱水した後、エーテル処理して固化
し、メタノール−エーテルより再沈澱化して、上記目的
物9.07g（収率86.8％）を得た。
mp :126−128℃
▲［α］26 D▼:4.6°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.49（クロロホルム：メタノール：水
＝70:30:3）
アミノ酸分析値：
Asp1.11（１）、Thr0.97（１）、Ser0.81（１）、アミ
ノスベリン酸1.11（１） 参考例５ 8.88gに氷冷下、TFA60mlを加えて溶解し、40分間放置し
た後、エーテル／ヘキサン（1/2混合液）で処理し、生
成した油状物を、冷却下、ヘキサンで洗浄した後、水酸
化カリウム上で真空乾燥した。
ノスベリン酸1.11（１） 参考例５ 8.88gに氷冷下、TFA60mlを加えて溶解し、40分間放置し
た後、エーテル／ヘキサン（1/2混合液）で処理し、生
成した油状物を、冷却下、ヘキサンで洗浄した後、水酸
化カリウム上で真空乾燥した。
得られた生成物をDMF60mlに溶解し、これを氷冷下、ト
リエチルアミンで中和した後、Boc−Ser（Bzl）−OSu5.
34gのDMF溶液40mlを加えた。０℃で30分間、室温で12時
間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル300ml
を加え、10％クエン酸50mlで２回、H2O50mlで２回の順
で洗浄した後、減圧濃縮した。残渣にエタノール30mlを
加え留去する操作を３回繰返して脱水した後、イソプロ
ピルエーテル処理して固化し、メタノール−イソプロピ
ルエーテルより再沈澱化して、上記目的物8.60g（収率7
9.0％）を得た。
リエチルアミンで中和した後、Boc−Ser（Bzl）−OSu5.
34gのDMF溶液40mlを加えた。０℃で30分間、室温で12時
間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル300ml
を加え、10％クエン酸50mlで２回、H2O50mlで２回の順
で洗浄した後、減圧濃縮した。残渣にエタノール30mlを
加え留去する操作を３回繰返して脱水した後、イソプロ
ピルエーテル処理して固化し、メタノール−イソプロピ
ルエーテルより再沈澱化して、上記目的物8.60g（収率7
9.0％）を得た。
mp :132−133℃
▲［α］25 D▼:6.5°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.56（クロロホルム：メタノール：水
＝70:30:3）
アミノ酸分析値：
Asp1.17（１）、Thr1.01（１）、Ser1.70（２）、アミ
ノスベリン酸1.12（１） 実施例４ 8.38gに、氷冷下、TFA50mlを加えて溶解し、30分間放置
した後、エーテル−石油エーテル（1:2混合液）で処理
し、生成した油状物を、冷却下、石油エーテルで洗浄し
た後、水酸化カリウム上で真空乾燥した。
ノスベリン酸1.12（１） 実施例４ 8.38gに、氷冷下、TFA50mlを加えて溶解し、30分間放置
した後、エーテル−石油エーテル（1:2混合液）で処理
し、生成した油状物を、冷却下、石油エーテルで洗浄し
た後、水酸化カリウム上で真空乾燥した。
得られた生成物をDMF60mlに溶解し、氷冷下、トリエチ
ルアミンで中和した後、Boc−Leu−OSu3.00gのDMF溶液2
0mlを加えた。０℃で30分間、室温で16時間撹拌した
後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル300mlを加え、10
％クエン酸50mlで２回、H2O50mlで２回の順で洗浄した
後、減圧濃縮した。残渣にエタノール30mlを加え留去す
る操作を３回繰返して脱水した後、エーテル処理して固
化し、メタノール−イソプロピルエーテルより再沈澱化
して上記目的物7.92g（収率84.6％）を得た。
ルアミンで中和した後、Boc−Leu−OSu3.00gのDMF溶液2
0mlを加えた。０℃で30分間、室温で16時間撹拌した
後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル300mlを加え、10
％クエン酸50mlで２回、H2O50mlで２回の順で洗浄した
後、減圧濃縮した。残渣にエタノール30mlを加え留去す
る操作を３回繰返して脱水した後、エーテル処理して固
化し、メタノール−イソプロピルエーテルより再沈澱化
して上記目的物7.92g（収率84.6％）を得た。
mp :150−151℃
▲［α］26 D▼:3.3°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.60（クロロホルム：メタノール：水
＝70:30:3）
アミノ酸分析値：
Asp1.11（１）、Thr0.98（１）、Ser1.67（２）、Leu1.
14（１）、アミノスベリン酸0.91（１） 参考例６ 0.76gをDMF40mlに溶解し、氷冷下、2N水酸化ナトリウム
水溶液0.78mlを加えた。０℃で２時間撹拌した後、2N水
酸化ナトリウム水溶液0.40mlを追加した。０℃で１時間
撹拌した後、2N塩酸で中和し、減圧濃縮した。残渣にH2
O20mlを加え、氷冷下、2N塩酸でpH3に調整し、析出した
生成物を濾取して、上記目的物0.70g（収率94.6％）を
得た。
14（１）、アミノスベリン酸0.91（１） 参考例６ 0.76gをDMF40mlに溶解し、氷冷下、2N水酸化ナトリウム
水溶液0.78mlを加えた。０℃で２時間撹拌した後、2N水
酸化ナトリウム水溶液0.40mlを追加した。０℃で１時間
撹拌した後、2N塩酸で中和し、減圧濃縮した。残渣にH2
O20mlを加え、氷冷下、2N塩酸でpH3に調整し、析出した
生成物を濾取して、上記目的物0.70g（収率94.6％）を
得た。
mp :166−169℃
▲［α］25 D▼：−19.4°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.64（クロロホルム：メタノール：水
＝70:30:3）
アミノ酸分析値：
Asp1.10（１）、Thr0.98（１）、Ser1.62（２）、Leu1.
19（１）、アミノスベリン酸1.10（１） 参考例７ Boc−Leu−Gly−OPacの製造 TosOH・Ｈ−Gly−OPac9.87gをDMF30mlに溶解し、−15℃
に冷却下、Ｎ−メチルモルホリンでpH7に調整した。
19（１）、アミノスベリン酸1.10（１） 参考例７ Boc−Leu−Gly−OPacの製造 TosOH・Ｈ−Gly−OPac9.87gをDMF30mlに溶解し、−15℃
に冷却下、Ｎ−メチルモルホリンでpH7に調整した。
一方、Boc−Leu−OH・H2O7.48g、HOBt・H2O4.59gをDMF1
0ml−THF30mlの混合液に溶解し、０℃に冷却下、DCC6.1
9gのTHF溶液20mlを加え、０℃に冷却下、30分間撹拌し
た。この溶液を前記の溶液へ加え、−15℃で１時間、０
℃で２時間、４℃で一晩撹拌した。反応終了後、析出し
た沈澱物を濾取し、減圧濃縮した後、残渣を酢酸エチル
200mlに溶解し、10％クエン酸水溶液、５％重曹水、飽
和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。減圧濃縮した後、残渣に石油エーテルを加え、生じ
た沈澱を濾取し、目的物Boc−Leu−Gly−OPac8.93g（収
率81.3％）を得た。
0ml−THF30mlの混合液に溶解し、０℃に冷却下、DCC6.1
9gのTHF溶液20mlを加え、０℃に冷却下、30分間撹拌し
た。この溶液を前記の溶液へ加え、−15℃で１時間、０
℃で２時間、４℃で一晩撹拌した。反応終了後、析出し
た沈澱物を濾取し、減圧濃縮した後、残渣を酢酸エチル
200mlに溶解し、10％クエン酸水溶液、５％重曹水、飽
和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。減圧濃縮した後、残渣に石油エーテルを加え、生じ
た沈澱を濾取し、目的物Boc−Leu−Gly−OPac8.93g（収
率81.3％）を得た。
mp :113−113.5℃
▲［α］20 D▼：−29.4°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.66（酢酸エチル：ヘキサン＝2:1）
アミノ酸分析値：
Gly0.95（１）、Leu1.05（１）
参考例８
Boc−Val−Leu−Gly−OPacの製造
Boc−Leu−Gly−OPac4.00gに、冷却下、4N塩酸／ジオキ
サン50mlを加えて溶解し、１時間放置した後、減圧濃縮
し半量にした。残液にエーテル−石油エーテルを加えて
析出した沈澱を濾取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥し
た。得られた乾燥物をDMF40mlに溶解し、−５℃に冷却
下、Ｎ−メチルモルホリンでpH7に調整した。一方、Boc
−Val−OH2.57g、HOBt・H2O1.81gをDMF20mlに溶解し、
氷冷下、DCC2.44gのTHF溶液15mlを加え、氷冷下で30分
間、−５℃で20分間撹拌した。この溶液を前記の溶液へ
加え、−４℃で１時間、４℃で３日間撹拌した。反応終
了後、減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル150mlで抽出し、
この酢酸エチル溶液を、1Nクエン酸水溶液、飽和重曹
水、飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで
乾燥した。減圧濃縮した後、残渣にエチルエーテルを加
え、生じた沈澱を濾取し、目的とするBoc−Val−Leu−G
ly−OPac4.12g（収率84.4％）を得た。
サン50mlを加えて溶解し、１時間放置した後、減圧濃縮
し半量にした。残液にエーテル−石油エーテルを加えて
析出した沈澱を濾取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥し
た。得られた乾燥物をDMF40mlに溶解し、−５℃に冷却
下、Ｎ−メチルモルホリンでpH7に調整した。一方、Boc
−Val−OH2.57g、HOBt・H2O1.81gをDMF20mlに溶解し、
氷冷下、DCC2.44gのTHF溶液15mlを加え、氷冷下で30分
間、−５℃で20分間撹拌した。この溶液を前記の溶液へ
加え、−４℃で１時間、４℃で３日間撹拌した。反応終
了後、減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル150mlで抽出し、
この酢酸エチル溶液を、1Nクエン酸水溶液、飽和重曹
水、飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで
乾燥した。減圧濃縮した後、残渣にエチルエーテルを加
え、生じた沈澱を濾取し、目的とするBoc−Val−Leu−G
ly−OPac4.12g（収率84.4％）を得た。
mp :148.5−151℃
▲［α］26 D▼：−21.5°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.51（クロロホル：メタノール：酢酸
＝90:10:1）
参考例９
Boc−Val−Leu−Gly−OPac506mgに、冷却下、TFA5mlを
加えて溶解し、30分間放置した、石油エーテルを加え、
生成した油状物を石油エーテルで数回洗浄し、水酸化カ
リウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDMF20mlに
溶解し氷冷下、Ｎ−メチルモルホリンでpH7に調整し
た。
加えて溶解し、30分間放置した、石油エーテルを加え、
生成した油状物を石油エーテルで数回洗浄し、水酸化カ
リウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDMF20mlに
溶解し氷冷下、Ｎ−メチルモルホリンでpH7に調整し
た。
HOBt・H2O113mg及びEDC・HCl141mgを前記溶液に加え、
室温で31時間撹拌した。反応終了後、減圧濃縮し、残渣
に、氷冷下、10％クエン酸水溶液を加えて固化させ、さ
らに1Nクエン酸水溶液、５％重曹水、H2Oの順で洗浄し
減圧濃縮した。この乾燥物をさらにメタノール−酢酸エ
チルで再沈澱させ、沈澱物を濾取し、目的物 296mg（収率45.3％）を得た。
室温で31時間撹拌した。反応終了後、減圧濃縮し、残渣
に、氷冷下、10％クエン酸水溶液を加えて固化させ、さ
らに1Nクエン酸水溶液、５％重曹水、H2Oの順で洗浄し
減圧濃縮した。この乾燥物をさらにメタノール−酢酸エ
チルで再沈澱させ、沈澱物を濾取し、目的物 296mg（収率45.3％）を得た。
mp :263℃（分野）
▲［α］25 D▼：−17.9°（Ｃ＝１、DMSO）
Rf :0.57（クロロホルム：メタノール＝6:1）
アミノ酸分析値：
Asp1.04（１）、Thr0.93（１）、Ser1.51（２）、Gly1.
10（１）、Val1.10（１）、Leu2.29（２）、アミノスベ
リン酸1.04（１） 参考例10 296mgをDMF15mlに溶解し、これに酢酸7ml及び亜鉛末131
0mgを加え、50時間撹拌した。反応終了後、濾過し、濾
液を濃縮した後、残渣に水を加え沈澱物を濾取し、さら
に水で洗浄し、五酸化二リンの存在下で減圧乾燥した。
この乾燥物をさらにメタノール−エチルエーテルで再沈
澱させ、沈澱物を濾取し、目的物 233mg（収率86.4％）を得た。
10（１）、Val1.10（１）、Leu2.29（２）、アミノスベ
リン酸1.04（１） 参考例10 296mgをDMF15mlに溶解し、これに酢酸7ml及び亜鉛末131
0mgを加え、50時間撹拌した。反応終了後、濾過し、濾
液を濃縮した後、残渣に水を加え沈澱物を濾取し、さら
に水で洗浄し、五酸化二リンの存在下で減圧乾燥した。
この乾燥物をさらにメタノール−エチルエーテルで再沈
澱させ、沈澱物を濾取し、目的物 233mg（収率86.4％）を得た。
mp :265℃（分野）
▲［α］25 D▼：−17.9°（Ｃ＝１、DMSO）
Rf :0.46（クロロホルム：メタノール：水
＝70:30:3）
アミノ酸分析値：
Asp1.05（１）、Thr0.93（１）、Ser1.53（２）、Gly1.
12（１）、Val1.11（１）、Leu2.24（２）、アミノスベ
リン酸1.02（１） 参考例11 Boc−Lys（C1−Ｚ）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBz
l）−Leu−His（Tos）−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Gln−Thr
（Bzl）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bz
l）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH樹脂の製造 パラメチルベンズヒドリルアミンポリスチレン樹脂（0.
42ミリモルNH2/g樹脂、１％ジビニルベンゼン、100〜20
0メッシュ：（株）ペプチド研究所製）1.19gを出発担体
として、固相法により、下記アミノ酸誘導体（いずれも
（株）ペプチド研究所製）を、順次、縮合・脱Boc反応
に付す。
12（１）、Val1.11（１）、Leu2.24（２）、アミノスベ
リン酸1.02（１） 参考例11 Boc−Lys（C1−Ｚ）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBz
l）−Leu−His（Tos）−Lys（Cl−Ｚ）−Leu−Gln−Thr
（Bzl）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bz
l）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH樹脂の製造 パラメチルベンズヒドリルアミンポリスチレン樹脂（0.
42ミリモルNH2/g樹脂、１％ジビニルベンゼン、100〜20
0メッシュ：（株）ペプチド研究所製）1.19gを出発担体
として、固相法により、下記アミノ酸誘導体（いずれも
（株）ペプチド研究所製）を、順次、縮合・脱Boc反応
に付す。
Boc−Pro−OH 430mg
Boc−Thr（Bzl）−OH 618mg
Boc−Gly−OH 350mg
Boc−Ala−OH 378mg
Boc−Gly−OH 350mg
Boc−Val−OH 434mg
Boc−Asp（OBzl）−OH 647mg
Boc−Thr（Bzl）−OH 618mg
Boc−Arg（Tos）−OH 1008mg×２
Boc−Pro−OH 430mg
Boc−Tyr（Br−Ｚ）−OH 989mg
Boc−Thr（Bzl）−OH 618mg
Boc−Gln−OH 492mg×２
Boc−Leu−OH 500mg
Boc−Lys（Cl−Ｚ）−OH 830mg
Boc−His（Tos）−OH 818mg
Boc−Leu−OH 500mg
Boc−Glu（OBzl）−OH 674mg
Boc−Gln−OH 492mg×２
Boc−Ser（Bzl）−OH 590mg
Boc−Leu−OH 500mg
Boc−Lys（Cl−Ｚ）−OH 830mg
これらのアミノ酸誘導体のうち、Boc−Arg（Tos）−OH
及びBoc−Gln−OHの縮合は、DCC−HOBt法により、アミ
ノ酸誘導体のHOBtエステルを形成させ縮合反応に供し
た。但し、この縮合反応は繰返し２回行なった。その他
のアミノ酸誘導体についてはDCC法によりアミノ酸誘導
体の対称酸無水物を形成させ縮合反応に供した。
及びBoc−Gln−OHの縮合は、DCC−HOBt法により、アミ
ノ酸誘導体のHOBtエステルを形成させ縮合反応に供し
た。但し、この縮合反応は繰返し２回行なった。その他
のアミノ酸誘導体についてはDCC法によりアミノ酸誘導
体の対称酸無水物を形成させ縮合反応に供した。
このようにして、Boc−Lys（C1−Ｚ）−Leu−Ser（Bz
l）−Gln−Glu（OBzl）−Leu−His（Tos）−Lys（Cl−
Ｚ）−Leu−Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Ar
g（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−
Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH−樹脂2.18gを得た。
l）−Gln−Glu（OBzl）−Leu−His（Tos）−Lys（Cl−
Ｚ）−Leu−Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Br−Ｚ）−Pro−Ar
g（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−
Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH−樹脂2.18gを得た。
実施例５
108mgにTFA0.4mlを加えて溶解し、室温で１時間放置し
た。減圧下、TFAを留去した後、イソプロピルエーテル
で処理し、析出した生成物を濾取し、イソプロピルエー
テルで洗浄した後、水酸化カリウム上で減圧乾燥し、目
的物102mg（収率97.1％）を得た。
た。減圧下、TFAを留去した後、イソプロピルエーテル
で処理し、析出した生成物を濾取し、イソプロピルエー
テルで洗浄した後、水酸化カリウム上で減圧乾燥し、目
的物102mg（収率97.1％）を得た。
mp :170−172℃
▲［α］24 D▼:3.7°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.19（クロロホルム：メタノール：水
＝40:10:1）
参考例12
（１）Boc−Ser（Bzl）−OPacの製造
Boc−Ser（Bzl）−OH14.77gおよび臭化フェナシル9.95g
を酢酸エチル100mlに溶解し、氷冷下、トリエチルアミ
ン7mlを加え、１時間、次いで室温で４時間撹拌した。
反応混合物を、飽和重曹水、次いで飽和食塩水で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮した。
残渣をｎ−ヘキサンで処理して固化させ、酢酸エチル−
ｎ−ヘキサンより再沈澱し、目的物18.1g（収率87.6
％）を得た。
を酢酸エチル100mlに溶解し、氷冷下、トリエチルアミ
ン7mlを加え、１時間、次いで室温で４時間撹拌した。
反応混合物を、飽和重曹水、次いで飽和食塩水で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮した。
残渣をｎ−ヘキサンで処理して固化させ、酢酸エチル−
ｎ−ヘキサンより再沈澱し、目的物18.1g（収率87.6
％）を得た。
mp :67−68℃
▲［α］24 D▼：−9.8°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.87（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
（２）Boc−Leu−Ser（Bzl）−OPacの製造
Boc−Ser（Bzl）−OPac9.5gに、氷冷下、TFA20mlを加え
て溶解し、室温で１時間放置した。溶液を再度氷冷し、
4N塩酸／ジオキサン5.8mlを添加し、撹拌振盪した後、
ｎ−ヘキサンを加えた。析出した沈澱を濾取し、水酸化
カリウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDMF20ml
に溶解し、−10℃以下の冷却下、Ｎ−メチルモルホリン
2.35mlを加え、pHを７に調整した。
て溶解し、室温で１時間放置した。溶液を再度氷冷し、
4N塩酸／ジオキサン5.8mlを添加し、撹拌振盪した後、
ｎ−ヘキサンを加えた。析出した沈澱を濾取し、水酸化
カリウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDMF20ml
に溶解し、−10℃以下の冷却下、Ｎ−メチルモルホリン
2.35mlを加え、pHを７に調整した。
一方、Boc−Leu−OH・H2O5.73gおよびHOBt・H2O3.87gを
DMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、EDC・HCl
4.85gの冷DMF溶液50mlを添加し、氷冷下、30分間撹拌し
た。
DMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、EDC・HCl
4.85gの冷DMF溶液50mlを添加し、氷冷下、30分間撹拌し
た。
この溶液を再度−10℃以下に冷却した後、先のDMF溶液
へ加え、−15℃〜−10℃で２時間、次いで４℃で20時間
撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残渣
を酢酸エチルで抽出した。抽出液を、1Nクエン酸水溶液
で５回、飽和食塩水で５回、飽和重曹水で10回、さらに
飽和食塩水で５回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥し、減圧濃縮した。残渣にジエチルエーテル／石油エ
ーテル（1/4混合液）を加えて固化させ、酢酸エチル−
ジエチルエーテル／石油エーテル（1/3混合液）より再
沈澱し、目的物9.71g（収率80.1％）を得た。
へ加え、−15℃〜−10℃で２時間、次いで４℃で20時間
撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残渣
を酢酸エチルで抽出した。抽出液を、1Nクエン酸水溶液
で５回、飽和食塩水で５回、飽和重曹水で10回、さらに
飽和食塩水で５回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥し、減圧濃縮した。残渣にジエチルエーテル／石油エ
ーテル（1/4混合液）を加えて固化させ、酢酸エチル−
ジエチルエーテル／石油エーテル（1/3混合液）より再
沈澱し、目的物9.71g（収率80.1％）を得た。
mp :100−101℃
▲［α］24 D▼：−17.1°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.66（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
（３）Boc−Leu−Ser（Bzl）−OHの製造
Boc−Leu−Ser（Bzl）−OPac9.71gを90％酢酸水溶液100
mlに溶解し、氷冷下、亜鉛末36.1gを加え、室温で３時
間撹拌した。反応終了後、反応混合液を濾過し、濾液を
濃縮した後、酢酸エチルで抽出した。抽出液を、1Nクエ
ン酸水溶液で５回、飽和食塩水で５回洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣に石油エーテ
ルを加えて固化させ、酢酸エチル−石油エーテルで再沈
澱し、目的物6.97g（収率92.7％）を得た。
mlに溶解し、氷冷下、亜鉛末36.1gを加え、室温で３時
間撹拌した。反応終了後、反応混合液を濾過し、濾液を
濃縮した後、酢酸エチルで抽出した。抽出液を、1Nクエ
ン酸水溶液で５回、飽和食塩水で５回洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣に石油エーテ
ルを加えて固化させ、酢酸エチル−石油エーテルで再沈
澱し、目的物6.97g（収率92.7％）を得た。
mp :73−75℃
▲［α］24 D▼:3.0°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.31（クロロホルム：メタノール：水
＝85:15:1）
Boc−Ser（Bzl）−OPac2.0gに、氷冷下、4N塩酸／ジオ
キサン5mlを加えて溶解し、室温で１時間放置した後、
ｎ−ヘキサンで処理した。析出した生成物を濾取し、水
酸化カリウム上で真空乾燥し、HCl・Ｈ−Ser（Bzl）−O
Pacを得た。得られた生成物をDMF5mlに溶解し、−10℃
以下の冷却下、Ｎ−メチルモルホリンで中和した。
キサン5mlを加えて溶解し、室温で１時間放置した後、
ｎ−ヘキサンで処理した。析出した生成物を濾取し、水
酸化カリウム上で真空乾燥し、HCl・Ｈ−Ser（Bzl）−O
Pacを得た。得られた生成物をDMF5mlに溶解し、−10℃
以下の冷却下、Ｎ−メチルモルホリンで中和した。
2.61gおよびHOBt・H2O0.89gをDMF10mlに溶解し、−10℃
以下に冷却した後、EDC・HCl1.11gの冷DMF溶液30mlを加
え、氷冷下、30分間撹拌した。
以下に冷却した後、EDC・HCl1.11gの冷DMF溶液30mlを加
え、氷冷下、30分間撹拌した。
この溶液を再度−10℃以下に冷却した後、先のDMF溶液
へ添加し、−15℃〜−10℃で２時間、次いで４℃で18時
間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残
渣を、酢酸エチル／ジエチルエーテル（1/1混合液）で
抽出した。抽出液を、1nクエン酸水溶液で５回、飽和食
塩水で５回、飽和重曹水で10回、次いで飽和食塩水で５
回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮
した。残渣を、ジエチルエーテル／石油エーテル（1/4
混合液）で処理して固化させ、酢酸エチル−ジエチルエ
ーテル／石油エーテル（1/1混合液）で再沈澱し、目的
物2.44g（（収率64.4％）を得た。
へ添加し、−15℃〜−10℃で２時間、次いで４℃で18時
間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残
渣を、酢酸エチル／ジエチルエーテル（1/1混合液）で
抽出した。抽出液を、1nクエン酸水溶液で５回、飽和食
塩水で５回、飽和重曹水で10回、次いで飽和食塩水で５
回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮
した。残渣を、ジエチルエーテル／石油エーテル（1/4
混合液）で処理して固化させ、酢酸エチル−ジエチルエ
ーテル／石油エーテル（1/1混合液）で再沈澱し、目的
物2.44g（（収率64.4％）を得た。
mp :65−67℃
▲［α］24 D▼：−5.2°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.64（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
2.3gに、氷冷下、TFA5mlを加えて溶解し、室温で１時間
放置した。溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン2.2m
lを添加し、撹拌振盪した後、ジエチルエーテル／石油
エーテル（1/1混合液）を加えた。析出した沈澱物を濾
取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥
物をDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−
メチルモルホリンで中和した。
放置した。溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン2.2m
lを添加し、撹拌振盪した後、ジエチルエーテル／石油
エーテル（1/1混合液）を加えた。析出した沈澱物を濾
取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥
物をDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−
メチルモルホリンで中和した。
一方、Boc−Leu−Ser（Bzl）−OH・1.61gおよびHOBt・H
2O0.66gをDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、
EDC・HCl0.82gの冷DMF溶液30mlを加え、氷冷下、30分間
撹拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却した後、先
のDMF溶液に添加し、−15℃〜−10℃で２時間、次いで
４℃で56時間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧
濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。抽出液を、1Nク
エン酸水溶液で５回、飽和食塩水で５回、飽和重曹水で
10回、さらに飽和食塩水で５回洗浄した後、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣にジエチルエー
テル／石油エーテル（1/1混合液）を加えて固化させ
る。酢酸エチル−ジエチルエーテルより再沈澱し、目的
物1.47g（収率46.8％）を得た。
2O0.66gをDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、
EDC・HCl0.82gの冷DMF溶液30mlを加え、氷冷下、30分間
撹拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却した後、先
のDMF溶液に添加し、−15℃〜−10℃で２時間、次いで
４℃で56時間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧
濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。抽出液を、1Nク
エン酸水溶液で５回、飽和食塩水で５回、飽和重曹水で
10回、さらに飽和食塩水で５回洗浄した後、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣にジエチルエー
テル／石油エーテル（1/1混合液）を加えて固化させ
る。酢酸エチル−ジエチルエーテルより再沈澱し、目的
物1.47g（収率46.8％）を得た。
mp :96−98℃
▲［α］24 D▼：−11.2°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.68（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
1.35gを、氷冷下、TFA5mlに溶解し、室温で１時間放置
した。溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン0.94gを
添加し、撹拌振盪した後、ジエチルエーテルで処理し
た。析出した沈澱物を濾取し、水酸化カリウム上で減圧
乾燥した。得られた乾燥物を、DMF10mlに溶解し、−10
℃以下に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリンで中和し
た。
した。溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン0.94gを
添加し、撹拌振盪した後、ジエチルエーテルで処理し
た。析出した沈澱物を濾取し、水酸化カリウム上で減圧
乾燥した。得られた乾燥物を、DMF10mlに溶解し、−10
℃以下に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリンで中和し
た。
一方、Boc−Asn−OH0.44g及びHOBt・H2O0.32gをDMF10ml
に溶解し、−10℃以下に冷却した後、EDC・HCl0.40gの
冷DMF溶液20mlを加え、氷冷下、30分間撹拌した。この
溶液を再度−10℃以下に冷却した後、先のDMF溶液に添
加し、−10℃〜−５℃で30分間、氷冷下で２時間、次い
で４℃で21時間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減
圧濃縮し、残渣に、氷冷下、1Nクエン酸水溶液を加えて
固化させ、沈澱物を濾取した後、1Nクエン酸水溶液、H2
O、飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄し、五酸化二リンの存
在下、減圧乾燥した。この乾燥物をメタノールに懸濁さ
せ、酢酸エチル／ジエチルエーテル（1/2混合液）を加
え、沈澱物を濾取し、目的物1.22g（収率81.9％）を得
た。
に溶解し、−10℃以下に冷却した後、EDC・HCl0.40gの
冷DMF溶液20mlを加え、氷冷下、30分間撹拌した。この
溶液を再度−10℃以下に冷却した後、先のDMF溶液に添
加し、−10℃〜−５℃で30分間、氷冷下で２時間、次い
で４℃で21時間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減
圧濃縮し、残渣に、氷冷下、1Nクエン酸水溶液を加えて
固化させ、沈澱物を濾取した後、1Nクエン酸水溶液、H2
O、飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄し、五酸化二リンの存
在下、減圧乾燥した。この乾燥物をメタノールに懸濁さ
せ、酢酸エチル／ジエチルエーテル（1/2混合液）を加
え、沈澱物を濾取し、目的物1.22g（収率81.9％）を得
た。
mp :177−179℃
▲［α］24 D▼：−12.7°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.54（クロロホルム：メタノール：水
＝85:15:1）
0.63gを90％酢酸水溶液7mlに溶解し、氷冷下、亜鉛末1.
04gを加え、室温で３時間攪拌した。反応終了後、反応
混合液を濾過し、濾液を濃縮した後、残渣にH2Oを加え
固化させる。沈澱物を濾取し、H2O、25mMのEDTAを含有
する50mM重炭酸アンモニウム緩衝液（pH8.0）、H2O、1N
クエン酸水溶液、次いでH2Oで洗浄し、五酸化二リンの
存在下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエチルエーテ
ルで再沈澱し、目的物0.41g（収率71.9％）を得た。
04gを加え、室温で３時間攪拌した。反応終了後、反応
混合液を濾過し、濾液を濃縮した後、残渣にH2Oを加え
固化させる。沈澱物を濾取し、H2O、25mMのEDTAを含有
する50mM重炭酸アンモニウム緩衝液（pH8.0）、H2O、1N
クエン酸水溶液、次いでH2Oで洗浄し、五酸化二リンの
存在下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエチルエーテ
ルで再沈澱し、目的物0.41g（収率71.9％）を得た。
mp :174−176℃
▲［α］24 D▼：−8.7°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.35（クロロホルム：メタノール：水
＝40:10:1）
アミノ酸分析値：
Asp1.13（１）、Thr0.95（１）、Ser1.52（２）、Leu1.
21（１）、アミノスベリン酸1.18（１） 実施例６ 108mgにTFA0.4mlを加えて溶解し、室温で１時間放置し
た。減圧下、溶液中のTFAを留去した後、イソプロピル
エーテルで処理した。析出した生成物を濾取し、イソプ
ロピルエーテルで洗浄した後、水酸化カリウム上で減圧
乾燥し、目的物101mg（収率96.2％）を得た。
21（１）、アミノスベリン酸1.18（１） 実施例６ 108mgにTFA0.4mlを加えて溶解し、室温で１時間放置し
た。減圧下、溶液中のTFAを留去した後、イソプロピル
エーテルで処理した。析出した生成物を濾取し、イソプ
ロピルエーテルで洗浄した後、水酸化カリウム上で減圧
乾燥し、目的物101mg（収率96.2％）を得た。
mp :94−97℃
▲［α］24 D▼:3.3°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.20（クロロホルム：メタノール：水
＝40:10:1）
参考例13
（１）Boc−Leu−OPacの製造
Boc−Leu−OH・H2O4.99gおよび臭化フエナシル3.98gを
酢酸エチル100mlに溶解し、氷冷下、トリエチルアミン
2.8mlを加え、１時間、次いで室温で４時間撹拌した。
反応混合物を飽和重曹水、次いで飽和食塩水で洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮した。残渣
をｎ−ヘキサンで処理して固化させ、酢酸エチル−ｎ−
ヘキサンより再沈澱し、目的物6.6g（収率94.4％）を得
た。
酢酸エチル100mlに溶解し、氷冷下、トリエチルアミン
2.8mlを加え、１時間、次いで室温で４時間撹拌した。
反応混合物を飽和重曹水、次いで飽和食塩水で洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮した。残渣
をｎ−ヘキサンで処理して固化させ、酢酸エチル−ｎ−
ヘキサンより再沈澱し、目的物6.6g（収率94.4％）を得
た。
mp :71−72℃
▲［α］24 D▼：−47.5°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.80（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1
（２）Boc−Ser（Bzl）−Asn−Leu−OPacの製造
Boc−Leu−OPac2.0gを、氷冷下、TFA5mlに溶解し、室温
で１時間放置した。溶液を再度氷冷した後、4N塩酸／ジ
オキサン1.43mlを添加し、撹拌振盪した後、ｎ−ヘキサ
ンで処理した。析出した沈澱物を濾取し、水酸化カリウ
ム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDMF5mlに溶解
し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリンで
中和した。
で１時間放置した。溶液を再度氷冷した後、4N塩酸／ジ
オキサン1.43mlを添加し、撹拌振盪した後、ｎ−ヘキサ
ンで処理した。析出した沈澱物を濾取し、水酸化カリウ
ム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDMF5mlに溶解
し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリンで
中和した。
一方、Boc−Ser（Bzl）−Asn−OH2.34gおよびHOBt・H2O
0.96gをDMF1.0mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、E
DC・HCl1.21gの冷DMF溶液30mlを加え、氷冷下で30分間
撹拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDM
F溶液に添加し、−10℃〜−５℃で30分間、氷冷下で１
時間、次いで４℃で16時間撹拌した。反応終了後、反応
混合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸水溶液を加えて
固化させ、沈澱物を濾取し、1Nクエン酸水溶液、H2O、
飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二リンの
存在下、減圧乾燥した。乾燥物を酢酸エチル−ジエチル
エーテルで再沈澱し、目的物2.33g（収率63.5％）を得
た。
0.96gをDMF1.0mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、E
DC・HCl1.21gの冷DMF溶液30mlを加え、氷冷下で30分間
撹拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDM
F溶液に添加し、−10℃〜−５℃で30分間、氷冷下で１
時間、次いで４℃で16時間撹拌した。反応終了後、反応
混合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸水溶液を加えて
固化させ、沈澱物を濾取し、1Nクエン酸水溶液、H2O、
飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二リンの
存在下、減圧乾燥した。乾燥物を酢酸エチル−ジエチル
エーテルで再沈澱し、目的物2.33g（収率63.5％）を得
た。
mp :133−135℃
▲［α］24 D▼：−9.6°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.33（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
Boc−Ser（Bzl）−Asn−Leu−OPac2.11gを、氷冷下、TF
A7mlに溶解し、室温で１時間放置した。溶液を再度氷冷
し、4N塩酸／ジオキサン2.5mlを加え、撹拌振盪した
後、ジエチルエーテルで処理した。析出した沈澱物を濾
取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥
物をDMF5mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−メ
チルモルホリンで中和した。
A7mlに溶解し、室温で１時間放置した。溶液を再度氷冷
し、4N塩酸／ジオキサン2.5mlを加え、撹拌振盪した
後、ジエチルエーテルで処理した。析出した沈澱物を濾
取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥
物をDMF5mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−メ
チルモルホリンで中和した。
一方、
2.44gおよびHOBt・H2O0.84gをDMF12mlに溶解し、−10℃
以下に冷却した後、EDC・HCl1.04gの冷DMF溶液20mlを加
え、氷冷下で30分間撹拌した。溶液を再度−10℃以下に
冷却し、先のDMF溶液に添加し、−10℃〜−５℃で30分
間、氷冷下で２時間、次いで４℃で60時間撹拌した。反
応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸
水溶液を加えて固化させる。沈澱物を濾取し、1Nクエン
酸水溶液、H2O、飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄した後、
五酸化二リンの存在下、減圧乾燥し、乾燥物をメタノー
ルで洗浄し、目的物2.45g（収率77.5％）を得た。
以下に冷却した後、EDC・HCl1.04gの冷DMF溶液20mlを加
え、氷冷下で30分間撹拌した。溶液を再度−10℃以下に
冷却し、先のDMF溶液に添加し、−10℃〜−５℃で30分
間、氷冷下で２時間、次いで４℃で60時間撹拌した。反
応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸
水溶液を加えて固化させる。沈澱物を濾取し、1Nクエン
酸水溶液、H2O、飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄した後、
五酸化二リンの存在下、減圧乾燥し、乾燥物をメタノー
ルで洗浄し、目的物2.45g（収率77.5％）を得た。
mp :184−186℃
▲［α］24 D▼：−8.4°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.39（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
2.3gを、氷冷下、TFA6mlに溶解し、室温で１時間放置し
た。溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン1.7mlを加
え、撹拌振盪した後、ジエチルエーテルで処理した。沈
澱物を濾取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥した。得ら
れた乾燥物をDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した
後、Ｎ−メチルモルホリンで中和した。
た。溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン1.7mlを加
え、撹拌振盪した後、ジエチルエーテルで処理した。沈
澱物を濾取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥した。得ら
れた乾燥物をDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した
後、Ｎ−メチルモルホリンで中和した。
一方、Boc−Ser（Bzl）−OH1.0gおよびHOBt・H2O0.57g
をDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、EDC・HC
l0.71gの冷DMF溶液20mlを加え、氷冷下で30分間撹拌し
た。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDMF溶液
に添加し、−15℃〜−10℃で２時間、次いで４℃で20時
間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残
渣に1Nクエン酸水溶液を加えて固化させ、沈澱物を濾取
した。1Nクエン酸水溶液、H2O、飽和重曹水、次いでH2O
で洗浄した後、五酸化二リンの存在下、減圧乾燥した。
乾燥物をメタノールに懸濁し、酢酸エチル／ジエチルエ
ーテル（1/2混合液）を加え、沈澱物を濾取し、目的物
1.91g（収率70.7％）を得た。
をDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、EDC・HC
l0.71gの冷DMF溶液20mlを加え、氷冷下で30分間撹拌し
た。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDMF溶液
に添加し、−15℃〜−10℃で２時間、次いで４℃で20時
間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残
渣に1Nクエン酸水溶液を加えて固化させ、沈澱物を濾取
した。1Nクエン酸水溶液、H2O、飽和重曹水、次いでH2O
で洗浄した後、五酸化二リンの存在下、減圧乾燥した。
乾燥物をメタノールに懸濁し、酢酸エチル／ジエチルエ
ーテル（1/2混合液）を加え、沈澱物を濾取し、目的物
1.91g（収率70.7％）を得た。
mp :178−180℃
▲［α］24 D▼：−4.1°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.51（クロロホルム：メタノール：水
＝85:15:1）
1.58gを90％酢酸水溶液20mlに溶解し、氷冷下、亜鉛末
2.59gを加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、濾
過し、濾液を濃縮した後、残渣にH2Oを加えて固化させ
る。沈澱物を濾取し、H2O、25mMのEDTAを含有する50mM
重炭酸アンモニウム緩衝液（pH8.0）、H2O、1Nクエン酸
水溶液、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二リンの存在
下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエチルエーテルで
再沈澱し、目的物1.20g（収率84.5％）を得た。
2.59gを加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、濾
過し、濾液を濃縮した後、残渣にH2Oを加えて固化させ
る。沈澱物を濾取し、H2O、25mMのEDTAを含有する50mM
重炭酸アンモニウム緩衝液（pH8.0）、H2O、1Nクエン酸
水溶液、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二リンの存在
下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエチルエーテルで
再沈澱し、目的物1.20g（収率84.5％）を得た。
mp :159−161℃
▲［α］24 D▼:1.0°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.30（クロロホルム：メタノール：水
40:10:1）
アミノ酸分析値：
Asp1.16（１）、Thr0.93（１）、Ser1.52（２）、Leu1.
21（１）、アミノスベリン酸1.17（１） 実施例７ 108mgにTFA0.4mlを加えて溶解し、室温で１時間放置し
た。減圧下、溶液中のTFAを留去した後、イソプロピル
エーテルで処理した。析出した生成物を濾取し、イソプ
ロピルエーテルで洗浄した後、水酸化カリウム上で減圧
乾燥し、目的物104mg（収率99.0％）を得た。
21（１）、アミノスベリン酸1.17（１） 実施例７ 108mgにTFA0.4mlを加えて溶解し、室温で１時間放置し
た。減圧下、溶液中のTFAを留去した後、イソプロピル
エーテルで処理した。析出した生成物を濾取し、イソプ
ロピルエーテルで洗浄した後、水酸化カリウム上で減圧
乾燥し、目的物104mg（収率99.0％）を得た。
mp :157−160℃
▲［α］24 D▼：−7.5°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.30（クロロホルム：メタノール：水
＝40:10:1）
参考例14
（１）Boc−Ser（Bzl）−Asn−Leu−Ser（Bzl）−OPac
の製造 Boc−Leu−Ser（Bzl）−OPac1.8gを、氷冷下、TFA5mlに
溶解し、室温で１時間放置した。再度氷冷した溶液に、
4N塩酸／ジオキサン2.6mlを添加し、撹拌振盪した後、
ジエチルエーテルを加えて、析出した沈澱物を濾取し、
水酸化カリウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDM
F5mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−メチルモ
ルホリンで中和した。
の製造 Boc−Leu−Ser（Bzl）−OPac1.8gを、氷冷下、TFA5mlに
溶解し、室温で１時間放置した。再度氷冷した溶液に、
4N塩酸／ジオキサン2.6mlを添加し、撹拌振盪した後、
ジエチルエーテルを加えて、析出した沈澱物を濾取し、
水酸化カリウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDM
F5mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−メチルモ
ルホリンで中和した。
一方、Boc−Ser（Bzl）−Asn−OH1.47gおよびHOBt・H2O
0.60gをDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、ED
C・HCl0.76gの冷DMF溶液30mlを加え、氷冷下で30分間撹
拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDMF
溶液に添加し、−10℃〜−５℃で30分間、氷冷下で１時
間、次いで４℃で20時間撹拌した。反応終了後、反応混
合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸水溶液を加えて固
化させ、沈澱物を濾取し、1Nクエン酸水溶液、H2O、飽
和重曹水、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二リンの存
在下、減圧乾燥した。メタノール−ジエチルエーテルよ
り再沈澱し、目的物2.38g（収率85.3％）を得た。
0.60gをDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、ED
C・HCl0.76gの冷DMF溶液30mlを加え、氷冷下で30分間撹
拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDMF
溶液に添加し、−10℃〜−５℃で30分間、氷冷下で１時
間、次いで４℃で20時間撹拌した。反応終了後、反応混
合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸水溶液を加えて固
化させ、沈澱物を濾取し、1Nクエン酸水溶液、H2O、飽
和重曹水、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二リンの存
在下、減圧乾燥した。メタノール−ジエチルエーテルよ
り再沈澱し、目的物2.38g（収率85.3％）を得た。
mp :156−158℃
▲［α］24 D▼：−10.4°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.34（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
Boc−Ser（Bzl）−Asn−Leu−Ser（Bzl）−OPac2.2g
を、氷冷下、TFA7mlに溶解し、室温で１時間放置した。
溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン2.0mlを加え、
撹拌振盪した後、ジエチルエーテルで処理して、析出し
た沈澱物を濾取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥した。
得られた乾燥物をDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却
した後、Ｎ−メチルモルホリンを加えて中和した。
を、氷冷下、TFA7mlに溶解し、室温で１時間放置した。
溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン2.0mlを加え、
撹拌振盪した後、ジエチルエーテルで処理して、析出し
た沈澱物を濾取し、水酸化カリウム上で減圧乾燥した。
得られた乾燥物をDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却
した後、Ｎ−メチルモルホリンを加えて中和した。
一方、
2.0g及びHOBt・H2O0.68gをDMF12mlに溶解し、−10℃以
下に冷却した後、EDC・HCl0.85gの冷DMF溶液20mlを加
え、氷冷下で30分間撹拌した。この溶液を再度冷却した
後、先のDMF溶液に添加し、−10℃〜−５℃で30分間、
氷冷下で１時間、次いで４℃で62時間撹拌した。反応終
了後、反応混合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸水溶
液を加えて固化させ、沈澱物を濾取した後、1Nクエン酸
水溶液、H2O、飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄し、五酸化
二リンの存在下、減圧乾燥した。乾燥物をメタノールで
洗浄し、目的物2.5g（収率78.1％）を得た。
下に冷却した後、EDC・HCl0.85gの冷DMF溶液20mlを加
え、氷冷下で30分間撹拌した。この溶液を再度冷却した
後、先のDMF溶液に添加し、−10℃〜−５℃で30分間、
氷冷下で１時間、次いで４℃で62時間撹拌した。反応終
了後、反応混合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸水溶
液を加えて固化させ、沈澱物を濾取した後、1Nクエン酸
水溶液、H2O、飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄し、五酸化
二リンの存在下、減圧乾燥した。乾燥物をメタノールで
洗浄し、目的物2.5g（収率78.1％）を得た。
mp :178−180℃
▲［α］24 D▼：−6.5°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.53（クロロホルム：メタノール：水
＝85:15:1）
2.4gを90％酢酸水溶液30mlに溶解し、氷冷下、亜鉛末3.
94gを加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、反応
混合液を濾過し、濾液を濃縮した後、残渣にH2Oを加え
て固化させる。沈澱物を濾取し、H2O、25mMのEDTAを含
有する50mM重炭酸アンモニウム緩衝液（pH8.0）、H2O、
1Nクエン酸水溶液、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二
リンの存在下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエチル
エーテルで再沈澱し、目的物1.95g（収率90.1％）を得
た。
94gを加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、反応
混合液を濾過し、濾液を濃縮した後、残渣にH2Oを加え
て固化させる。沈澱物を濾取し、H2O、25mMのEDTAを含
有する50mM重炭酸アンモニウム緩衝液（pH8.0）、H2O、
1Nクエン酸水溶液、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二
リンの存在下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエチル
エーテルで再沈澱し、目的物1.95g（収率90.1％）を得
た。
mp :175−177℃
▲［α］24 D▼：−1.6°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.32（クロロホルム：メタノール：水
＝40:10:1）
アミノ酸分析値：
Asp1.19（１）、Thr0.86（１）、Ser1.64（２）、Leu1.
26（１）、アミノスベリン酸1.05（１） 実施例８ 108mgにTFA0.4mlを加えて溶解し、室温で１時間放置し
た。減圧下、TFAを留去した後、イソプロピルエーテル
で処理した、析出した生成物を濾取し、イソプロピルエ
ーテルで洗浄した後、水酸化カリウム上で減圧乾燥し、
目的物102mg（収率97.1％）を得た。
26（１）、アミノスベリン酸1.05（１） 実施例８ 108mgにTFA0.4mlを加えて溶解し、室温で１時間放置し
た。減圧下、TFAを留去した後、イソプロピルエーテル
で処理した、析出した生成物を濾取し、イソプロピルエ
ーテルで洗浄した後、水酸化カリウム上で減圧乾燥し、
目的物102mg（収率97.1％）を得た。
mp :165−167℃
▲［α］24 D▼:3.6°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.28（クロロホルム：メタノール：水
＝40:10:1）
参考例15
（１）Boc−Thr（Bzl）−OPacの製造
Boc−Thr（Bzl）−OH6.19gおよび臭化フェナシル3.98g
を酢酸エチル100mlに溶解し、氷冷下、トリエチルアミ
ン2.8mlを加え１時間、次いで室温で４時間撹拌した。
反応混合液を、飽和重曹水、次いで飽和食塩水で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮し、目
的物8.44g（収率98.7％）を得た。
を酢酸エチル100mlに溶解し、氷冷下、トリエチルアミ
ン2.8mlを加え１時間、次いで室温で４時間撹拌した。
反応混合液を、飽和重曹水、次いで飽和食塩水で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮し、目
的物8.44g（収率98.7％）を得た。
6.1gをH2O50mlに溶解し、氷冷下、トリエチルアミン4.2
mlおよびｔ−ブチルジカルボナート7.2gの冷ジオキサン
／H2O（4/1混合液）溶液を加え、氷冷下で15分間、次い
で室温で30分間撹拌した。反応終了後、反応混合液中の
ジオキサンを留去し、水層を、氷冷下、トリエチルアミ
ンを加えてpH10とし、酢酸エチルで洗浄した後、水層を
2Mクエン酸水溶液を用いてpH2に調整し、酢酸エチルで
抽出した。抽出液を1Nクエン酸水溶液次いで飽和食塩水
で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮
した。残渣にｎ−ヘキサンを加え、析出した沈澱を濾取
し、、酢酸エチル−ｎ−ヘキサンより再沈澱し、目的物
8.03g（収率88.2％）を得た。
mlおよびｔ−ブチルジカルボナート7.2gの冷ジオキサン
／H2O（4/1混合液）溶液を加え、氷冷下で15分間、次い
で室温で30分間撹拌した。反応終了後、反応混合液中の
ジオキサンを留去し、水層を、氷冷下、トリエチルアミ
ンを加えてpH10とし、酢酸エチルで洗浄した後、水層を
2Mクエン酸水溶液を用いてpH2に調整し、酢酸エチルで
抽出した。抽出液を1Nクエン酸水溶液次いで飽和食塩水
で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮
した。残渣にｎ−ヘキサンを加え、析出した沈澱を濾取
し、、酢酸エチル−ｎ−ヘキサンより再沈澱し、目的物
8.03g（収率88.2％）を得た。
mp :50−51℃
▲［α］24 D▼：−17.6°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.38（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
（３）Boc−Leu−Ser（Bzl）−Thr（Bzl）−OPacの製造
Boc−Thr（Bzl）−OPac2.0gを、氷冷下、4N塩酸／ジオ
キサン5mlに溶解し、室温で１時間放置した後、ｎ−ヘ
キサンで処理した。析出した沈澱物を濾取し、水酸化カ
リウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDMF5mlに溶
解し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリン
を加えて中和した。
キサン5mlに溶解し、室温で１時間放置した後、ｎ−ヘ
キサンで処理した。析出した沈澱物を濾取し、水酸化カ
リウム上で減圧乾燥した。得られた乾燥物をDMF5mlに溶
解し、−10℃以下に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリン
を加えて中和した。
一方、Boc−Leu−Ser（Bzl）−OH2.01gおよびHOBt・H2O
0.83gをDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、ED
C・HCl1.04gの冷DMF溶液30mlを加え、氷冷下で30分間撹
拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDMF
溶液に添加し、−15℃〜−10℃で２時間、次いで４℃で
20時間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮
し、残渣を酢酸エチルで抽出し、抽出液を、1Nクエン酸
水溶液、飽和食塩水、飽和重曹水、次いで飽和食塩水で
洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し
た。残渣に石油エーテルを加えて固化させ、沈澱物を濾
取し、酢酸エチル−ジエチルエーテル／石油エーテル
（1/4混合液）より再沈澱し、目的物2.54g（収率75.6
％）を得た。
0.83gをDMF10mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、ED
C・HCl1.04gの冷DMF溶液30mlを加え、氷冷下で30分間撹
拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDMF
溶液に添加し、−15℃〜−10℃で２時間、次いで４℃で
20時間撹拌した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮
し、残渣を酢酸エチルで抽出し、抽出液を、1Nクエン酸
水溶液、飽和食塩水、飽和重曹水、次いで飽和食塩水で
洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し
た。残渣に石油エーテルを加えて固化させ、沈澱物を濾
取し、酢酸エチル−ジエチルエーテル／石油エーテル
（1/4混合液）より再沈澱し、目的物2.54g（収率75.6
％）を得た。
mp :53−55℃
▲［α］24 D▼：−14.2°（Ｃ＝１、メタノール）
Rf :0.68（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
（４）Boc−Ser（Bzl）−Asn−Leu−Ser（Bzl）−Thr
（Bzl）−OPacの製造 Boc−Leu−Ser（Bzl）−Thr（Bzl）−OPac2.4gを、氷冷
下、TFA7mlに溶解し、室温で１時間放置した。溶液を再
度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン2.5mlを添加し、撹拌振
盪した後、ジエチルエーテル／石油エーテル（1/1混合
液）を加え、析出した沈澱物を濾取し、水酸化カリウム
上で減圧乾燥した。この乾燥物をDMF10mlに溶解した
後、−10℃以下に冷却し、Ｎ−メチルモルホリンを加え
て中和した。
（Bzl）−OPacの製造 Boc−Leu−Ser（Bzl）−Thr（Bzl）−OPac2.4gを、氷冷
下、TFA7mlに溶解し、室温で１時間放置した。溶液を再
度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン2.5mlを添加し、撹拌振
盪した後、ジエチルエーテル／石油エーテル（1/1混合
液）を加え、析出した沈澱物を濾取し、水酸化カリウム
上で減圧乾燥した。この乾燥物をDMF10mlに溶解した
後、−10℃以下に冷却し、Ｎ−メチルモルホリンを加え
て中和した。
一方、Boc−Ser（Bzl）−Asn−OH2.12gおよびHOBt・H2O
0.87gをDMF20mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、ED
C・HCl1.09gの冷DMF溶液40mlを加え、氷冷下で30分間撹
拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDMF
溶液に加え、−10℃〜−５℃で30分間、氷冷下で２時
間、次いで４℃で45時間撹拌した。反応終了後、反応混
合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸水溶液を加えて固
化させ、沈澱物を濾取し、1Nクエン酸水溶液、H2O、飽
和重曹水、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二リンの存
在下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエチルエーテル
より再沈澱し、目的物2.83g（収率84.0％）を得た。
0.87gをDMF20mlに溶解し、−10℃以下に冷却した後、ED
C・HCl1.09gの冷DMF溶液40mlを加え、氷冷下で30分間撹
拌した。この溶液を再度−10℃以下に冷却し、先のDMF
溶液に加え、−10℃〜−５℃で30分間、氷冷下で２時
間、次いで４℃で45時間撹拌した。反応終了後、反応混
合液を減圧濃縮し、残渣に1Nクエン酸水溶液を加えて固
化させ、沈澱物を濾取し、1Nクエン酸水溶液、H2O、飽
和重曹水、次いでH2Oで洗浄した後、五酸化二リンの存
在下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエチルエーテル
より再沈澱し、目的物2.83g（収率84.0％）を得た。
mp :154−156℃
▲［α］24 D▼：−6.2°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.36（クロロホルム：メタノール：水
＝90:10:1）
Boc−Ser（Bzl）−Asn−Leu−Ser（Bzl）−Thr（Bzl）
−OPac2.7gを、氷冷下、TFA8mlに溶解し、室温で１時間
放置した。溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン2.0m
lを添加し、撹拌振盪した後、ジエチルエーテルを加え
て、析出した沈澱物を濾取し、水酸化カリウム上で減圧
乾燥した。この乾燥物をDMF10mlに溶解し、−10℃以下
に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリンを加えて中和し
た。
−OPac2.7gを、氷冷下、TFA8mlに溶解し、室温で１時間
放置した。溶液を再度氷冷し、4N塩酸／ジオキサン2.0m
lを添加し、撹拌振盪した後、ジエチルエーテルを加え
て、析出した沈澱物を濾取し、水酸化カリウム上で減圧
乾燥した。この乾燥物をDMF10mlに溶解し、−10℃以下
に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリンを加えて中和し
た。
一方、
1.8gおよびHOBt・H2O1.0gをDMF30mlに溶解し、−10℃以
下に冷却した後、EDC・HCl1.24gの冷DMF溶液40mlを加
え、氷冷下で30分間撹拌した。この溶液を再度−10℃以
下に冷却した後、先のDMF溶液に添加し、−10℃〜−５
℃で30分間、氷冷下で２時間、次いで４℃で65時間撹拌
した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残渣に1N
クエン酸水溶液を加えて固化させ、沈澱物を濾取し、1N
クエン酸水溶液、H2O、飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄し
た後、五酸化二リンの存在下、減圧乾燥した。乾燥物を
メタノールに懸濁し、酢酸エチル／ジエチルエーテル
（1/2混合液）を加え、沈澱物を濾取し、目的物2.77g
（収率86.6％）を得た。
下に冷却した後、EDC・HCl1.24gの冷DMF溶液40mlを加
え、氷冷下で30分間撹拌した。この溶液を再度−10℃以
下に冷却した後、先のDMF溶液に添加し、−10℃〜−５
℃で30分間、氷冷下で２時間、次いで４℃で65時間撹拌
した。反応終了後、反応混合液を減圧濃縮し、残渣に1N
クエン酸水溶液を加えて固化させ、沈澱物を濾取し、1N
クエン酸水溶液、H2O、飽和重曹水、次いでH2Oで洗浄し
た後、五酸化二リンの存在下、減圧乾燥した。乾燥物を
メタノールに懸濁し、酢酸エチル／ジエチルエーテル
（1/2混合液）を加え、沈澱物を濾取し、目的物2.77g
（収率86.6％）を得た。
mp :165−167℃
▲［α］24 D▼：−8.8°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.50（クロロホルム：メタノール：水
＝85:15:1）
1.44gを90％酢酸水溶液15mlに溶解し、氷冷下、亜鉛末
2.37gを加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、反
応混合液を濾過し、濾液を濃縮した後、残渣にH2Oを加
えて固化させる。沈澱物を濾取し、H2O、25mMのEDTAを
含有する50mM重炭酸アンモニウム緩衝液（pH8.0）、H
2O、1Nクエン酸水溶液、次いでH2Oで洗浄した後、五酸
化二リンの存在下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエ
チルエーテルで再沈澱し、目的物1.13g（収率86.8％）
を得た。
2.37gを加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、反
応混合液を濾過し、濾液を濃縮した後、残渣にH2Oを加
えて固化させる。沈澱物を濾取し、H2O、25mMのEDTAを
含有する50mM重炭酸アンモニウム緩衝液（pH8.0）、H
2O、1Nクエン酸水溶液、次いでH2Oで洗浄した後、五酸
化二リンの存在下、減圧乾燥した。乾燥物をDMF−ジエ
チルエーテルで再沈澱し、目的物1.13g（収率86.8％）
を得た。
mp :183−185℃
▲［α］24 D▼：−2.5°（Ｃ＝１、DMF）
Rf :0.40（クロロホルム：メタノール：水
＝40:10:1）
アミノ酸分析値：
Asp1.13（１）、Thr0.93（１）、Ser1.54（２）、Leu1.
21（１）、アミノスベリン酸1.19（１） 実施例９ 101mgをDMF100mlに溶解し、氷冷下、Ｎ−メチルモルホ
リン10.2μｌを加え、中和した。次いでHOBt・H2O16.8m
g、EDC・HCl21.1mgを添加し、室温で24時間撹拌するこ
とにより、目的とする環化物 69mgを得た。
21（１）、アミノスベリン酸1.19（１） 実施例９ 101mgをDMF100mlに溶解し、氷冷下、Ｎ−メチルモルホ
リン10.2μｌを加え、中和した。次いでHOBt・H2O16.8m
g、EDC・HCl21.1mgを添加し、室温で24時間撹拌するこ
とにより、目的とする環化物 69mgを得た。
Claims (19)
- 【請求項１】下記一般式（Ｉ） ［式中、ＡとＢは、下記（１）〜（５） （１）A:Ser（X1）−Asn−Leu−Ser（X1）−Thr（X1）
−OH B:X2 （２）A:Ser（X1）−Asn−Leu−Ser（X1）−OH B:X2−Thr（X1） （３）A:Ser（X1）−Asn−Leu−OH B:X2−Ser（X1）−Thr（X1） （４）A:Ser（X1）−Asn−OH B:X2−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （５）A:Ser（X1）−OH B:X2−Asn−Leu−Ser（X1）−Thr（X1） （式中、X1は水素原子又は水酸基の保護基を示し、X2は
水素原子又はアミノ基の保護基を示す）の何れかの組合
せからなる基を示す。Ｘは水酸基、カルボキシル基の保
護基、Val−OHもしくはMet−OHで示されるアミノ酸残
基、下記一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） （式中、A1はValまたはMet、A2はSerまたはGlyを示す）
で表される低級ペプチド残基、又は下記一般式（VIII） −A1−Leu−A2−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A1
1−A12−A13−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A2
0−A21−A22−Pro−NH2 （VIII） （式中、A1、A2は前記に同じ。A3〜A22は、下記のアミ
ノ酸残基を示す。 A3 :Lys、ThrまたはAla A4 :LeuまたはTyr A5 :Ser、ThrまたはTrp A6 :Gln、LysまたはArg A7 :Glu、AspまたはAsn A8 :LeuまたはPhe A9 :HisまたはAsn A10 :LysまたはAsn A11 :Leu、PheまたはTyr A12 :GlnまたはHis A13 :ThrまたはArg A14 :TyrまたはPhe A15 :ProまたはSer A16 :Arg、GlyまたはGln A17 :ThrまたはMet A18 :Asp、Ala、AsnまたはGly A19 :Val、Ile、ThrまたはPhe A20 :Ala、Val、ProまたはSer A21 :GlyまたはGlu A22 :ThrまたはAla） で示されるペプチド残基、もしくは一般式（VIII）にお
いて少なくとも−A1−Leu−A2−A3を含み且つA1からA22
の順序に配列したペプチドフラグメントを示し、各アミ
ノ酸残基は保護基で保護されていてもよい］ で表されるペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体。 - 【請求項２】Ｘで表されるカルボキシル基の保護基が、
アルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、置換基を有し
ていてもよいアラルキルオキシ基、置換ヒドラジノ基又
はフェナシル基である請求項１記載のペプチド又はその
酸付加塩もしくは錯体。 - 【請求項３】Ｘが、 −Val−Leu−Gly−OH;又は −Val−Leu−Gly−Lys−Leu−Ser−Gln−Glu−Leu−His
−Lys−Leu−Gln−Thr−Tyr−Pro−Arg−Thr−Asp−Val
−Gly−Ala−Gly−Thr−Pro−NH2で示されるペプチド残
基である請求項１記載のペプチド又はその酸付加塩もし
くは錯体。 - 【請求項４】アミノ酸残基のカルボキシル基の保護基
が、アルコキシ基、シクロアルキルオキシ基、置換基を
有していてもよいアラルキルオキシ基、置換ヒドラジノ
基、又はフェナシル基である請求項１記載のペプチド又
はその酸付加塩もしくは錯体。 - 【請求項５】アミノ酸残基のアミノ基の保護基が、置換
基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基
を有していてもよいシクロアルキルオキシカルボニル
基、置換基を有していてもよいアラルキルオキシカルボ
ニル基、置換基を有していてもよいアラルキル基、又は
置換基を有していてもよいアシル基である請求項１記載
のペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体。 - 【請求項６】下記一般式（II） ［式中、Ｄ−ＥはSer−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各
アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよい。Ｘは水
酸基、カルボキシル基の保護基、Val−OHもしくはMet−
OHで示されるアミノ酸残基、下記一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） （式中、A1はValまたはMet、A2はSerまたはGlyを示す）
で表される低級ペプチド残基、又は下記一般式（VIII） −A1−Leu−A2−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A1
1−A12−A13−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A2
0−A21−A22−Pro−NH2 （VIII） （式中、A1、A2は前記に同じ。A3〜A22は、下記のアミ
ノ酸残基を示す。 A3 :Lys、ThrまたはAla A4 :LeuまたはTyr A5 :Ser、ThrまたはTrp A6 :Gln、LysまたはArg A7 :Glu、AspまたはAsn A8 :LeuまたはPhe A9 :HisまたはAsn A10 :LysまたはAsn A11 :Leu、PheまたはTyr A12 :GlnまたはHis A13 :ThrまたはArg A14 :TyrまたはPhe A15 :ProまたはSer A16 :Arg、GlyまたはGln A17 :ThrまたはMet A18 :Asp、Ala、AsnまたはGly A19 :Val、Ile、ThrまたはPhe A20 :Ala、Val、ProまたはSer A21 :GlyまたはGlu A22 :ThrまたはAla） で示されるペプチド残基、もしくは一般式（VIII）にお
いて少なくとも−A1−Leu−A2−A3を含み且つA1からA22
の順序に配列したペプチドフラグメントを示し、前記ア
ミノ酸残基、低級ペプチド残基、ペプチド残基およびペ
プチドフラグメントにおいて、Ｃ−末端アミノ酸のカル
ボキシル基及び各アミノ酸残基の反応性基は保護基で保
護されている］で表される環状ペプチド又はその酸付加
塩もしくは錯体の製造方法であって、 下記一般式（III） （式中、Ｄは、Ser−OH、Ser−Asn−OH、Ser−Asn−Leu
−OH、Ser−Asn−Leu−Ser−OH又はSer−Asn−Leu−Ser
−Thr−OHを示し、Ｅは、Ｈ−Asn−Leu−Ser−Thr、Ｈ
−Leu−Ser−Thr、Ｈ−Ser−Thr、Ｈ−Thr又は水素原子
を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよ
い。Ｘは前記に同じ）で表されるペプチドを、化学的縮
合反応（但し、蛋白分解酵素による環化反応を除く）に
より環化される、環状ペプチド又はその酸付加塩もしく
は錯体の製造方法。 - 【請求項７】環化反応を、アルカリ金属塩の存在下で行
なう請求項６記載の環状ペプチド又はその酸付加塩もし
くは錯体の製造方法。 - 【請求項８】下記一般式（II） ［式中、Ｄ−ＥはSer−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各
アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよい。Ｘは水
酸基、カルボキシル基の保護基、Val−OHもしくはMet−
OHで示されるアミノ酸残基、下記一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） （式中、A1はValまたはMet、A2はSerまたはGlyを示す）
で表される低級ペプチド残基、又は下記一般式（VIII） −A1−Leu−A2−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A1
1−A12−A13−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A2
0−A21−A22−Pro−NH2 （VIII） （式中、A1、A2は前記に同じ。A3〜A22は、下記のアミ
ノ酸残基を示す。 A3 :Lys、ThrまたはAla A4 :LeuまたはTyr A5 :Ser、ThrまたはTrp A6 :Gln、LysまたはArg A7 :Glu、AspまたはAsn A8 :LeuまたはPhe A9 :HisまたはAsn A10 :LysまたはAsn A11 :Leu、PheまたはTyr A12 :GlnまたはHis A13 :ThrまたはArg A14 :TyrまたはPhe A15 :ProまたはSer A16 :Arg、GlyまたはGln A17 :ThrまたはMet A18 :Asp、Ala、AsnまたはGly A19 :Val、Ile、ThrまたはPhe A20 :Ala、Val、ProまたはSer A21 :GlyまたはGlu A22 :ThrまたはAla） で示されるペプチド残基、もしくは一般式（VIII）にお
いて少なくとも−A1−Leu−A2−A3を含み且つA1からA22
の順序に配列したペプチドフラグメントを示し、前記ア
ミノ酸残基、低級ペプチド残基、ペプチド残基およびペ
プチドフラグメントにおいて、Ｃ−末端アミノ酸のカル
ボキシル基及び各アミノ酸残基の反応性基は保護基で保
護されている］で表される環状ペプチド又はその酸付加
塩もしくは錯体の製造方法であって、 下記一般式（IV） （式中、Ｆは、水酸基又は活性エステル残基を示し、Ｇ
は、Ｈ−Ser−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各アミノ酸
残基は保護基で保護されていてもよい。Ｘは前記に同
じ） で表されるペプチドを、アルカリ金属塩の存在下で環化
反応に付す、環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯
体の製造方法。 - 【請求項９】アルカリ金属塩が、リチウム、ナトリウ
ム、カリウム、ルビジウム、セシウムのハロゲン化物で
ある請求項８記載の環状ペプチド又はその酸付加塩もし
くは錯体の製造方法。 - 【請求項１０】環化させるペプチドに対するアルカリ金
属塩の量が0.01〜400当量である請求項８記載の環状ペ
プチド又はその酸付加塩もしくは錯体の製造方法。 - 【請求項１１】（１）カルボジイミド、（２）ヒドロキ
シベンゾトリアゾール及びカルボジイミド、又は（３）
ヒドロキシコハク酸イミド及びカルボジイミドを用いて
反応させる請求項６乃至10のいずれかの項に記載の環状
ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体の製造方法。 - 【請求項１２】下記一般式（IX） ［式中、A1〜A22は、下記のアミノ酸残基を示し、各ア
ミノ酸残基は保護基で保護されていてもよい。 A1 :ValまたはMet A2 :SerまたはGly A3 :Lys、ThrまたはAla A4 :LeuまたはTyr A5 :Ser、ThrまたはTrp A6 :Gln、LysまたはArg A7 :Glu、AspまたはAsn A8 :LeuまたはPhe A9 :HisまたはAsn A10 :LysまたはAsn A11 :Leu、PheまたはTyr A12 :GlnまたはHis A13 :ThrまたはArg A14 :TyrまたはPhe A15 :ProまたはSer A16 :Arg、GlyまたはGln A17 :ThrまたはMet A18 :Asp、Ala、AsnまたはGly A19 :Val、Ile、ThrまたはPhe A20 :Ala、Val、ProまたはSer A21 :GlyまたはGlu A22 :ThrまたはAla］ で表わされる環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯
体の製造方法であって、 （１）下記一般式（IIIa） ［式中、Ｄは、Ser−OH、Ser−Asn−OH、Ser−Asn−Leu
−OH、Ser−Asn−Leu−Ser−OH又はSer−Asn−Leu−Ser
−Thr−OHを示し、Ｅは、Ｈ−Asn−Leu−Ser−Thr、Ｈ
−Leu−Ser−Thr、Ｈ−Ser−Thr、Ｈ−Thr又は水素原子
を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護されていてもよ
い。Ｗは水酸基又は一般式（VII） −A1−Leu−A2−OH （VII） （A1、A2は前記に同じ）で表される低級ペプチド残基を
示し、前記低級ペプチド残基において、Ｃ−末端アミノ
酸のカルボキシル基及び各アミノ酸残基の反応性基は保
護基で保護されている］ で表されるペプチドを、化学的縮合反応（但し、蛋白分
解酵素による環化反応を除く）により環化させるか、ま
たは（２）下記一般式（IVa） （式中、Ｆは、水酸基又は活性エステル残基を示し、Ｇ
は、Ｈ−Ser−Asn−Leu−Ser−Thrを示し、各アミノ酸
残基は保護基で保護されていてもよい。Ｗは前記に同
じ） で表されるペプチドを、アルカリ金属塩の存在下で環化
反応に付して、下記一般式（Ｖ） ［式中、Ｗは前記に同じ］ で表されるペプチドとし、次いで、前記一般式（Ｖ）で
表されるペプチドのＣ−末端アミノ酸のカルボキシル基
の保護基を脱離させ、固相反応樹脂上で合成した下記一
般式（VI）で表されるペプチド−樹脂と、固相法により
縮合させ、前記樹脂を除去する、環状ペプチド又はその
酸付加塩もしくは錯体の製造方法。 Ｙ−A3−A4−A5−A6−A7−A8−A9−A10−A11−A12−A13
−A14−A15−A16−A17−A18−A19−Gly−A20−A21−A22
−Pro−Resin （VI） ［Ｙは水素原子又はＨ−A1−Leu−A2−（A1及びA2は前
記に同じ）を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護され
ていてもよい。但し、Ｗが水酸基であるとき、ＹはＨ−
A1−Leu−A2−であり、Ｗが−A1−Leu−A2−OHであると
き、Ｙは水素原子である。Resinは固相反応樹脂を示
す。A3〜A22は前記に同じ］ - 【請求項１３】一般式（VI）で表されるペプチド−樹脂
が、 Ｙ−Lys−Leu−Ser−Gln−Glu−Leu−His−Lys−Leu−G
ln−Thr−Tyr−Pro−Arg−Thr−Asp−Val−Gly−Ala−G
ly−Thr−Pro−Resin ［式中、Ｙは水素原子又はＨ−A1−Leu−A2−（A1はVal
またはMet、A2はSerまたはGlyを示す）で表されるペプ
チド残基を示し、各アミノ酸残基は保護基で保護されて
いてもよい。Resinは固相反応樹脂を示す］ である請求項12記載の環状ペプチド又はその酸付加塩も
しくは錯体の製造方法。 - 【請求項１４】Ｗが−Val−Leu−Gly−OHであり、Ｙが
水素原子である請求項12記載の環状ペプチド又はその酸
付加塩もしくは錯体の製造方法。 - 【請求項１５】固相反応樹脂が、ベンズヒドリルアミン
樹脂、ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、又はｐ−
ヒドロキシ安息香酸樹脂である請求項12記載の環状ペプ
チド又はその酸付加塩もしくは錯体の製造方法。 - 【請求項１６】固相反応樹脂に対する一般式（Ｖ）で表
される環状ペプチドの量が、1.0〜3.0当量である請求項
12記載の環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体の
製造方法。 - 【請求項１７】固相反応樹脂上で合成された保護基を有
するペプチドを、保護基の脱離反応に供する請求項12記
載の環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯体の製造
方法。 - 【請求項１８】脱離反応が、酸による脱離反応である請
求項17記載の環状ペプチド又はその酸付加塩もしくは錯
体の製造方法。 - 【請求項１９】脱離反応が、フッ化水素による脱離反応
である請求項17記載の環状ペプチド又はその酸付加塩も
しくは錯体の製造方法。
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