JPH10502372A

JPH10502372A - 共通のサイトカイン受容体ガンマ鎖を操作することによるｔ細胞応答の変調方法

Info

Publication number: JPH10502372A
Application number: JP8503948A
Authority: JP
Inventors: ボウシオティス，バシリキ・エイ; ナドラー，リー・エム
Original assignee: ダナ−ファーバー・キャンサー・インスティテュート
Priority date: 1994-07-01
Filing date: 1995-06-30
Publication date: 1998-03-03
Also published as: EP1958966A2; DE69535713D1; US20040037808A1; CA2194239A1; DE69535713T2; AU2915295A; JP2007112815A; ATE386537T1; EP0768890B1; US6576236B1; DK0768890T3; ES2299174T3; WO1996001122A1; EP0768890A1

Abstract

(57)【要約】ＣＤ２８／Ｂ７相互作用を介する共同刺激を必要とせずにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体を介して刺激した場合、Ｔ細胞は、抗原特異的不応答またはアネルギーの状態に入る。本発明は、少なくとも一部は、共通のサイトカイン受容体γ鎖（例えば、インターロイキン−２受容体、インターロイキン−４受容体、インターロイキン−７受容体）を介するシグナル伝達がＴ細胞アネルギーの誘発を防止するという発見に基づいている。このγ鎖は、（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合）約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼに関連することが見いだされ、γ鎖を介するシグナル伝達は、ＪＡＫキナーゼのリン酸化を誘発する。したがって、サイトカイン受容体γ鎖を発現するＴ細胞による増殖を刺激または阻害するための方法が記載される。

Description

【発明の詳細な説明】共通のサイトカイン受容体ガンマ鎖を操作することによるＴ細胞応答の変調方法発明の背景抗原特異的Ｔ細胞応答の誘発は、Ｔ細胞上の細胞表面受容体と抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のリガンドとの間の複数の相互作用に関係する。一次相互作用は、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体と抗原提示細胞上の主な組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子／抗原性ペプチド複合体との間にある。この相互作用は、Ｔ細胞における一次抗原特異性活性化シグナルを誘発する。一次活性化シグナルに加えて、Ｔ細胞応答の誘発は、第２の共同刺激シグナルを必要とする。適正な共同刺激の不在下、ＴＣＲシグナル伝達は、Ｔ細胞においてアネルギーの状態を誘発することができる。アネルギー性Ｔ細胞に対する抗原の次なる適切な提供により、適正な応答が誘起されない［Ｓchwartz,Ｒ.Ｈ．（１９９０）Ｓcienc e ２４８：１３４９］。共同刺激シグナルは、ＣＤ２８などのＴ細胞表面受容体を介してＴ細胞において誘発され得る。例えば、Ｔ細胞の最適下限ポリクローナル刺激（例えば、抗− ＣＤ３抗体またはホルボールエステルによる、いずれも一次活性化シグナルを提供することができる）は、ＣＤ２８と抗−ＣＤ２８抗体との架橋結合によって効力を増すことができる［Ｌinsley,Ｐ.Ｓ.ら（１９９１）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７３：７２１；Ｇimmi,Ｃ.Ｄ.ら（１９９１）Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ８８：６５７５］。さらにまた、ＣＤ２８の刺激は、Ｔ細胞クローンにおけるアネルギーの誘発を防止することができる［Ｈarding,Ｆ.Ａ．（１９９２）Ｎature ３５６：６０７−６０９］。ＣＤ２８に対する天然リガンドは、ＡＰＣ上で定義された。ＣＤリガンドとしては、Ｂ７−１（ＣＤ８０）およびＢ７−２（Ｂ７０）などのタンパクのＢ７ファミリーのメンバーが挙げられる［Ｆreedman,Ａ.Ｓ.ら（１９８７）Ｊ,Ｉmmunol．１３７：３２６０−３２６７；Ｆreeman,Ｇ.Ｊ.ら（１９８９）Ｊ.Ｉmmunol．１４３：２７１４−２７２２；Ｆreeman,Ｇ.Ｊ.ら（１９９１）Ｊ.Ｅxp.Ｍed．１７４：６２５−６３１；Ｆreeman,Ｇ.Ｊ.ら（１９９３）Ｓcience ２６２：９０９−９１１；Ａzuma,Ｍ.ら（１９９３）Ｎature ３６６：７６−７９；Ｆreeman,Ｇ.Ｊ.ら（１９９３）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７８：２１８５−２１９２］。ＣＤ２８に加えて、Ｂ７ファミリーのタンパクは、ＣＴＬＡ４と称され、Ｔ細胞共同刺激において役割を果たすＣＤ２８に関係するＴ細胞上の別の表面受容体に結合することを示した［Ｌinsley,Ｐ.Ｓ．（１９９１）Ｊ .Ｅxp.Ｍed．１７４：５６１−５６９；Ｆreeman,Ｇ.Ｊ.ら（１９９３）Ｓcienc e ２６２：９０９−９１１］。ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４とタンパクのＢ７ファミリーとの受容体：リガンド関係、および共同刺激におけるこの相互作用の役割の解明により、共同刺激分子を結合するＴ細胞上の表面受容体の細胞外相互作用の操作に関係する治療的アプローチが導かれた。例えば、Ｂ７−１およびＢ７−２の両方に結合し、それらのＣＤ２８／ＣＴＬＡ４との相互作用を遮断するＣＴＬＡ４Ｉg融合タンパクを用いて、同種異系および異種移植片の拒絶を阻害した［例えば、Ｔurka,Ｌ.Ａ.ら（１９９２）Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ８９：１１１０２−１１１０５；Ｌens chow,Ｄ.Ｊ.ら（１９９２）Ｓcience ２５７：７８９−７９２を参照］。同様に、Ｂ７−１および／またはＢ７−２との反応性を有する抗体を用いて、in vitro でのＴ細胞増殖およびＩＬ−２産生を阻害し、in vivoでの抗原に対する一次免疫応答を阻害した［Ｈathcock Ｋ.Ｓ.ら（１９９３）Ｓcience ２６２：９０５ −９０７；Ａzuma,Ｍ.ら（１９９３）Ｎature ３６６：７６−７９；Ｐowers,Ｇ .Ｄ.ら（１９９４）Ｃell.Ｉmmunol．１５３：２９８−３１１；Ｃhen Ｃ.ら（９９４）Ｊ.Ｉmmunol．１５２：２１０５−２１１４］。一緒に、これらの研究は、Ｂ７−１およびＢ７−２などの共同刺激分子を結合するＴ細胞表面受容体によって媒介される共同刺激経路が免疫応答を操作するための望ましい標的であることを示す。発明の概要ＣＤ２８／Ｂ７相互作用を介する共同刺激を必要とせずにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体を介して刺激した場合、Ｔ細胞は、抗原特異的不応答またはアネルギーの状態に入る。本発明は、少なくとも一部は、共通のサイトカイン受容体γ鎖（例えば、インターロイキン−２受容体、インターロイキン−４受容体、インターロイキン−７受容体）を介するシグナル伝達がＴ細胞アネルギーの誘発を防止するという発見に基づいている。このγ鎖は、（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合）約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼに関連することが見いだされ、γ鎖を介するシグナル伝達は、ＪＡＫキナーゼのリン酸化を誘発する。本発明者らは、アネルギーを「γ_cシグナル伝達せずにＴＣＲ刺激により生じる不応答の状態」と定義することを提案する。したがって、本発明の１つの具体例は、サイトカイン受容体γ鎖を発現し、Ｔ細胞において通常不応答を生じる条件下（すなわち、共同刺激の欠乏）、一次活性化シグナルを受けたＴ細胞による増殖を刺激するための方法に関係する。Ｔ細胞不応答またはアネルギーは、サイトカイン受容体γ鎖に結合し、Ｔ細胞における細胞内シグナルを刺激する薬物とＴ細胞とを接触させて、Ｔ細胞増殖を生じさせることによって防止される。典型的には、該薬物は、受容体と架橋結合する能力を有する抗γ鎖抗体、またはインターロイキン−４もしくはインターロイキン −７などのγ鎖に結合する天然リガンドの可溶性形態である。別法としては、Ｔ細胞は、細胞内に作用して１１６kＤＪＡＫキナーゼのリン酸化を刺激する薬物と接触させることができる。in vivoでウイルス、細菌または寄生虫などの病原に対する免疫応答を誘発するために、病原またはその成分は、サイトカイン受容体γ鎖に結合し、Ｔ細胞において細胞内シグナルを刺激する薬物と共に投与することができる。同様に、腫瘍免疫性は、腫瘍抗原を発現する腫瘍細胞の存在下、対象体のＴ細胞をγ鎖刺激因子（例えば、架橋結合性抗γ鎖抗体）と接触させることによってin vivoまたはex vivoで腫瘍産生宿主（tumor bearing host）において誘発されることができる。本発明のもう１つの具体例は、サイトカイン受容体γ鎖を発現するＴ細胞において抗原に対する不応答を誘発するための方法に関する。Ｔ細胞は、抗原の存在下、in vivoまたはex vivoで、抗原に対するＴ細胞不応答を生じるサイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリーを阻害する薬物と接触させられる。かかる薬物は、細胞外に作用してγ鎖を介するシグナルのデリバリーを阻害することができ、例えば、阻害性もしくは遮断性抗γ鎖抗体、またはγ鎖の天然リガンドに結合してリガンドの該γ鎖への結合を阻害する薬物（例えば、抗−インターロイキン−２抗体、抗−インターロイキン−４抗体または抗−インターロイキン −７抗体）である。別法としては、薬物は、細胞外に作用してサイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリーを阻害することができ、例えば、γ鎖の１１６kＤＪＡＫキナーゼとの会合を阻害するか、または、γ鎖もしくはＪＡＫキナーゼまたはその両方のリン酸化を阻害する薬物である。Ｔ細胞不応答を誘発するための方法は、特に、移植片拒絶および移植片対宿主病の阻害ならびに自己免疫疾患の治療に有用である。Ｔ細胞上でサイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリーを刺激または阻害する薬物の同定方法もまた本発明の範囲内である。これらの具体例および本発明の他の具体例を本明細書にさらに詳細に説明する。図面の簡単な説明図１Ａ−Ｂは、ＬＢＬ−ＤＲ７による抗原投与後のＤＲ７特異的Ｔ細胞の増殖のグラフ図であり、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−７がＴ細胞アネルギーの誘発を妨げることができることを示す。パネルＡでは、Ｔ細胞は、ＣＴＬＡ４Ｉg との共同刺激を遮断しつつ、抗原（ＬＢＬ−ＤＲ７）による刺激によるアネルギー性シグナルを与えられた。パネルＢでは、Ｔ細胞は、共同刺激シグナルの不在下、抗原単独（ｔ−ＤＲ７）による刺激によるアネルギー性シグナルを与えられた。図２Ａ−Ｂは、ＬＢＬ−ＤＲ７による抗原投与後のＤＲ７特異的Ｔ細胞の増殖のグラフ図であり、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−７受容体の共通のγ鎖の架橋結合がＴ細胞アネルギーの誘発を妨げることを示す。パネルＡでは、Ｔ細胞は、ＣＴＬＡ４Ｉgとの共同刺激を遮断しつつ、抗原（ＬＢＬ−ＤＲ７）による刺激によるアネルギー性シグナルを与えられた。パネルＢでは、Ｔ細胞は、共同刺激シグナルの不在下、抗原単独（ｔ−ＤＲ７）による刺激によるアネルギー性シグナルを与えられた。図３Ａ−Ｅは、免疫沈降フィルターの写真であり、Ｔ細胞のＩＬ−２、ＩＬ− ４またはＩＬ−７による刺激後のγ_cおよび１１６kＤのＪＡＫキナーゼの会合およびリン酸化を示す。パネルＡは、抗−ＩＬ−２Ｒγ抗体による１１６kＤＪＡＫキナーゼとγ_cとの共同免疫沈降、ならびに、抗ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０）の結合によるγ_cおよび１１６kＤＪＡＫキナーゼの両方のリン酸化を示す。１１６kＤタンパクは、抗−ＪＡＫ抗体（Ｒ８０）（パネルＢ）の結合によって示されるＪＡＫキナーゼファミリーメンバーであるが、ＪＡＫ１（パネルＣ）、ＪＡＫ２（パネルＤ）またはＴyk２（パネルＥ）に対する抗体を結合しない。図４Ａは、免疫沈降フィルターの写真であり、ＤＲ７特異的Ｔ細胞の、抗原性シグナルおよび抗原性シグナル単独（ｔ−ＤＲ７）ではなく共同刺激シグナル（ｔ−ＤＲ７／Ｂ７−１）による刺激の後の１１６kＤＪＡＫキナーゼのリン酸化を示す。図４Ｂは、免疫沈降フィルターの写真であり、ＤＲ７特異的Ｔ細胞の、抗原性シグナル（ｔ−ＤＲ７）およびＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７のいずれかによる刺激の後の１１６kＤＪＡＫキナーゼのリン酸化を示す。発明の詳細な説明本明細書で用いる場合、「共通のサイトカイン受容体ガンマ鎖」または「γ_c 」なる用語は、ある種のサイトカイン受容体によって共有されているポリペプチドサブユニットを意味し、インターロイキン−２受容体（ＩＬ−２）、インターロイキン−４受容体（ＩＬ−４）およびインターロイキン−７受容体（ＩＬ−７）が挙げられる。ガンマ鎖は、中程度の親和性（βγサブユニット）および高い親和性（αβγサブユニット）のＩＬ−２受容体に存在する。１つの具体例では、γ_cは、Ｔakeshita,Ｔら（１９９２）Ｓcience２５７：３７９−３８２に開示されているヌクレオチド配列によって、およびヒト染色体Ｘ_q１３にマッピングされる遺伝子によってコードされるポリペプチドである。ヒトγ_cをコードする核酸を得るために用いることができるオリゴヌクレオチドプライマーは、Ｎoguchi,Ｍ.ら（１９９３）Ｃell ７３：１４７−１５７；Ｐuck,Ｊ.Ｍ.ら（１９９３）Ｈum.Ｍol.Ｇenet.２：１０９９−１１０４；およびＤiＳanto,Ｊ.Ｐ. ら（１９９４）Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol．２４：４７５−４７９に開示されている。別の具体例では、γ_cは、約６４kＤのポリペプチドである。本発明の種々の態様は、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に説明する。Ｉ．共通のサイトカイン受容体ガンマ鎖を介して刺激する薬物Ａ．サイトカイン γ_cを介して刺激することができるサイトカインとしては、ＩＬ−２、ＩＬ− ４およびＩＬ−７が挙げられる。γ_cを利用する受容体に結合する別のサイトカインを用いて、γ_cを介して刺激することもできる。本明細書に記載するサイトカインは、市販のものである。例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−７は、ジェンザイム・コーポレーション（Ｇenzyme Ｃorp.）から入手することができる。Ｂ．抗−γ−鎖抗体 γ_cに結合する抗体またはそのフラグメントの刺激性形態を用いて、γ_cを介して刺激することができる。抗γ_c抗体の「刺激性形態」とは、γ_cに結合した後に γ_cを介して細胞内シグナルを誘発する抗体の形態を意味する。１つの具体例では、抗γ_c抗体の刺激性形態は、例えば二次抗体によって、架橋結合される可溶性抗体である。別の具体例では、抗−γ_cの刺激性形態は、抗体の固定化形態、例えば、培養プレートまたはビーズなどの固体支持体に結合した抗体である。刺激性抗体は、ポリクローナル抗血清またはモノクローナル抗体であってもよい。γ_cを結合する抗体は、当該技術分野で知られている標準的な技術によって調製することができる。動物をγ_c「免疫原」で免疫化することができる。本明細書では、「免疫原」なる用語は、γ_cに対する抗体の調製のために用いられる活性成分としてγ_cペプチドまたはタンパクを含有する組成物を示すために用いる。可溶性および膜結合γ_cタンパクまたはペプチドフラグメントは、共に、免疫原として用いるのに適している。例えば、γ_c免疫原は、γ_cを利用するサイトカイン受容体を発現する細胞であってもよい（例えば、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４ＲまたはＩＬ−７Ｒのγ_c含有形態を発現する細胞系）。免疫原として用いるための好ましい細胞は、本質的にγ_cを発現するＴ細胞である。別法としては、免疫原は、精製したγ_cタンパクまたはγ_cペプチドフラグメントであってよい。γ_c タンパクは、標準的な技術によって細胞から精製することができるか、または、 γ_cをコードする核酸［例えば、Ｔakeshita,Ｔ.ら（１９９２）Ｓcience ２５７：３７９−３８２に開示されているヌクレオチド配列を有する核酸］の宿主細胞における発現によって組換え的に産生することができる。γ_cペプチドフラグメントは、γ_cタンパクの予想されるアミノ酸配列に基づいて化学的に合成することができる［例えば、前掲のＴakeshitaに開示されている］。γ_cタンパクまたはペプチドの単離形態は、それ自体、免疫原として用いることもできるが、別法としては、化学的カップリングによることを含む慣用の技術によって適切なキャリアタンパクに結合することができる。単離したγ_cタンパクは、免疫原性または可溶性を増強するように、脂質または炭水化物などの非タンパク様物質で共有的または非共有的に修飾されることもできる。別法としては、単離したγ_cタンパクは、免疫原性を増強するために、ウイルス粒子、複製ウイルスまたは他の微生物と結合することができるか、または、その中に取り込まれることができる。免疫原としてタンパクまたはペプチドを使用する代わりに、いわゆる遺伝的免疫化のための免疫原としてγ_cタンパクまたはペプチドをコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）を用いることができる。かくして、「免疫原」なる用語は、抗体を生じさせるべきであるタンパクまたはペプチドをコードする核酸を含むことも意図する。遺伝的免疫化により抗体を生じさせるために、関心のあるタンパクをコードする核酸を含有する発現ベクター構築物（例えば、γ_cまたはそのペプチド）は、粒子（例えば、金の粒子）を該構築物で被覆し、該粒子を皮膚に注入することによって動物（例えば、マウス）の皮膚中に細胞内的にデリバリーされる。これにより、皮膚における抗原産生および特異的抗体応答の発生を生じる［例えば、Ｔang,Ｄ.Ｃ.ら（１９９２）Ｎature ３５６：１５２−１５４；Ｅisenbrau n,Ｍ.Ｄ.ら（１９９３）ＤＮＡＣell Ｂiol．１２：７９１−７９７；Ｗang,Ｂ .ら（１９９３）ＤＮＡＣell Ｂiol．１２：７９９−８０５を参照］。 γ_cに対するポリクローナル抗体は、一般に、標準的な方法によって動物において生じることができる。動物は、抗−γ_c力価安定期までブースター投与することができる。また、ミョウバンなどの凝集薬を用いて、免疫応答を増強することができる。次いで、抗体分子を哺乳動物から（例えば、血液から）回収し、タンパクＡクロマトグラフィーなどのよく知られている方法によって単離して、Ｉ gＧ画分を得ることができる。抗体の特異性を増強するために、抗体は、固相付着免疫原を用いてイムノアフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。該抗体を、免疫原が抗体分子と免疫反応するのに十分な時間、固相付着免疫原と接触させて、固相付着免疫複合体を形成する。結合した抗体は、標準的な方法によって複合体から分離される。本明細書で用いる場合、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」なる用語は、特定のエピトープと免疫反応する能力を有する抗原結合部位の１種のみを含有する抗体分子群を意味する。かくして、モノクローナル抗体組成物は、典型的には、免疫反応する特定のタンパクに対する単一の結合親和性を示す。好ましくは、本発明の方法で用いるモノクローナル抗体は、さらに、ヒト由来のγ_cタンパクと免疫反応するとして特徴付けられる。本発明の組成物および方法において有用なモノクローナル抗体は、γ_cのエピトープに指向される。γ_cのエピトープに対するモノクローナル抗体は、培養における連続細胞系による抗体分子の産生を提供する技術を用いることによって調製することができる。これらとしては、限定されないが、最初にＫohlerおよびＭilstein［１９７５、Ｎature ２５６：４９５−４９７］によって開示されたハイブリドーマ法、ならびに最近の、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法［Ｋozborら（１９８３）Ｉmmunol Ｔoday ４：７２］、ＥＢＶ−ハイブリドーマ法［Ｃole ら（１９８５）Ｍonoclonal Ａntibodies and Ｃancer Ｔherapy、Ａlan Ｒ.Ｌi ss,Ｉnc.、pp.７７−９６］およびトリオーマ法が挙げられる。本発明において有用なモノクローナル抗体を有効に得ることができる他の方法としては、ファージディスプレー法［Ｍarksら（１９９２）ＪＢiol Ｃhem １６００７−１６０１０］が挙げられる。１つの具体例では、本発明の方法において適用される抗体調製物は、ハイブリドーマ細胞系によって産生されたモノクローナル抗体である。ハイブリドーマ融合法は、まず、ＫohlerおよびＭilsteinによって紹介された［Ｋohlerら、Ｎatu re（１９７５）２５６：４９５−９７；Ｂrownら（１９８１）Ｊ.Ｉmmunol １２７：５３９−４６；Ｂrownら（１９８０）ＪＢiol Ｃhem ２５５：４９８０− ８３；Ｙehら（１９７６）ＰＮＡＳ７６：２９２７−３１；およびＹehら（１９８２）Ｉnt.Ｊ.Ｃancer ２９：２６９−７５］。かくして、本発明のモノクローナル抗体組成物は、以下の方法によって調製することができる：（ａ）γ_c免疫原により動物を免疫化する。好ましくは、ウサギ、ラットまたはマウスのような齧歯動物を用いる。次いで、該哺乳動物がγ_c免疫原と免疫反応する抗体分子を分泌する細胞を産生するのに十分な時間、該哺乳動物を維持する。このようにして産生した抗体分子を、免疫原タンパクの調製物との免疫反応性についてスクリーニングすることによって、かかる免疫反応を検出する。所望により、例えばγ_cの膜関連形態などのアッセイにおける抗体分子によって検出されるべきである形態のタンパクの調製物で抗体分子をスクリーニングするのが望ましい。これらのスクリーニング法は、当業者によく知られており、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）および／またはフローサイトメトリーである。（ｂ）次いで、望ましい抗体を分泌する各免疫化哺乳動物から取り出された抗体産生性細胞の懸濁液を調製する。十分な時間の後、該哺乳動物を殺し、体細胞抗体産生性リンパ球を得る。抗体産生性細胞は、感作された動物のリンパ節、脾臓および末梢血液から得られる。脾臓細胞が好ましく、当該技術分野においてよく知られている方法を用いて生理学的に許容できる培地中で個々の細胞に機械的に分離することができる。マウスリンパ球は、以下に記載するマウス骨髄腫との安定な融合を高いパーセンテージで与える。ラット、ウサギおよびカエルの体細胞を用いることもできる。所望のイムノグロブリンをコードする脾臓細胞染色体を、一般的にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの融合剤の存在下、脾臓細胞と骨髄腫細胞とを融合させることによって不死化させる。多くの骨髄腫細胞系のどれでも、標準的な方法に従って融合相手として用いることができる；例えば、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａg４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａg８.６５３またはＳp２／Ｏ −Ａg１４骨髄腫細胞。これらの骨髄腫系は、メリーランド州ロックヴィルのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａmerican Ｔype Ｃulture Ｃo llection）（ＡＴＣＣ）から入手可能である。次いで、融合していない親のミエローマまたはリンパ球細胞が最終的には死滅するＨＡＴ培地のごとき選択培地にて、所望ハイブリドーマを含む得られた細胞を増殖させる。ハイブリドーマー細胞のみが生き残り、限界希釈条件下で増殖でき、単離コロニーが得られる。例えば、免疫に用いられてた抗原を用いる免疫アッセイ法により、ハイブリドーマ上清を、所望特異性を有する抗体の存在に関してスクリーニングする。次いで、陽性クローンを限界希釈条件下でサブクローン化し、生じたモノクローナル抗体を単離することができる。他の蛋白および他の汚染物質を含まないようにするための抗体の単離精製のための種々の慣用的方法が存在する。モノクローナル抗体精製に通常用いられる方法は、硫酸アンモニウム沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー（Monoclonal Hybridoma Antibodies:Techniques And Applications,Hurell （編）、５１〜５２頁（CRC Press１９８２年）中、Zolaら記載部分参照）を包含する。これらの方法に従って得られたハイブリドーマを、当該分野で知られた方法を用いて、インビトロまたはインビボで増殖させることができる。一般的には、個々の細胞系をインビトロで、例えば、研究室の培養容器で増殖させ、高濃度の単一種のモノクローナル抗体を含有する培地をデカンテーション、濾過または遠心分離により集めることができる。別法として、元の融合に用いた体細胞ならびにミエローマ細胞を提供するために用いられるタイプの組織適合性動物中にハイブリドーマ試料を注射することによりモノクローナル抗体の収量を増大させることができる。融合細胞ハイブリッドにより産生される特異的モノクローナル抗体を分泌する腫瘍は注射された動物において増殖する。腹水または血清のごとき動物の体液は、高濃度のモノクローナル抗体を提供する。ヒト・ハイブリドーマまたはＥＢＶ−ハイブリドーマを用いる場合、マウスのごとき動物中に注射された異種移植片に対する拒絶反応を回避する必要がある。免疫欠損マウスまたはヌードマウスを用いてもよく、あるいはハイブリドーマを先ず放射線照射されたヌードマウス中で固形皮下腫瘍として継代し、そしてインビトロ培養し、次いで、プリスタンでプライムされ放射線照射されたヌードマウスに腹腔内注射し、大量の特異的ヒト・モノクローナル抗体を分泌する腹水腫瘍を増殖させてもよい。これらの組成物の製造に有用な培地および動物は、当該分野においてよく知られており、かつ市販されており、合成培地、同血統繁殖マウス等を包含する。典型的な合成培地は、４.５ｍｇ／ｌグルコース、２０ｍＭグルタミンおよび２０％ウシ胎児血清を補足されたダルベッコ（Dulbecco）の最小必須培地（ＤＭＥＭ；Dulbecco et al.(1959)Virol.8:396）である。典型的な同血統繁殖マウスはＢａｌｂ／ｃである。非ヒト対象において産生された抗体をヒトにおいて治療的に用いる場合には、それらの抗体は種々の外来度として認識され、免疫応答が患者において生じるかもしれない。全身的な免疫抑制よりも望ましい、この問題を最小にするかまたは除去するための１のアプローチは、キメラ抗体誘導体、すなわち、非ヒト動物可変領域およびヒト不変領域を結合した抗体分子を作成することである。かかる抗体は、上記モノクローナルおよびポリクローナル抗体の同等物であるが、ヒトに投与された場合、より免疫原性が小さく、それゆえ、患者によって耐えられるものである可能性が大きい。 γ_cと反応するキメラマウス−ヒト・モノクローナル抗体（すなわち、キメラ抗体）を、当該分野で知られた組み換えＤＮＡ法により製造することができる。例えば、ネズミ（または他の種）の抗−ヒトγ_c抗体分子の不変領域をコードする遺伝子を、ヒト・不変領域をコードする遺伝子で置換する（Robinson et al. 国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Akira et al.欧州特許出願第１８４，１８７号；Taniguchi,M.,欧州特許出願第第１７１,４９６号；Morrison et al.欧州特許出願第１７３,４９４号；Neuberger et al.ＰＣＴ出願公開ＷＯ８６／０１５３３；Cabilly et al.米国特許第４,８１６,５６７号；Cabilly et al.欧州特許出願第１２５,０２３号；Better et al.(Science 240:1041〜104 3(1988))；Liu e tal.(1987)PNAS 84:3439〜3443；Liu et al.(1987)J.Immunol. 139:3521〜3526；Sun et al.(1987)PNAS84:214〜218；Nishimura et al.(1987)C anc.Res.47:999〜1005；Wood et al.(1985)Nature 314:446〜449；およびShaw e t al.(1988)J.Natl.Cancer Inst.80:1553〜1559参照）。抗原結合に必要とされない可変領域部分をヒト・可変領域由来の同等部分で置換することによりキメラ抗体をさらに「ヒト化」することができる。「ヒト化」キメラ抗体の一般的レビューは、Morrison,S.L.(1985)Science 229:1202〜1207 およびOi e tal.(1986)BioTechniques 4:214により提供される。それらの方法は、少なくとも１つの重鎖または軽鎖由来の免疫グロブリン可変領域の全部または一部をコードする核酸配列を単離し、操作し、発現させることを包含する。かかる核酸のソースは当業者によく知られており、例えば、抗−γ_c抗体産生ハイブリドーマから得ることができる。次いで、キメラ抗体またはそのフラグメントをコードするｃＤＮＡを適当な発現ベクター中にクローン化することができる。別法として、ＣＤＲまたはＣＥＡ置換（Winterに付与された米国特許第５,２２５, ５３９号；Jones et al.(1986)Nature 321:552〜525；Verhoeyan et al.(1988)S cience 239:1534；およびBeidler et al.(1988)J.Immunol.141:4053〜4060参照）により適当な「ヒト化」抗体を得ることもできる。マウスまたは他の種由来のモノクローナル抗体をヒト化させることの代替手段として、ヒト・蛋白に指向されたヒト・モノクローナル抗体を得ることができる。ヒト・抗体レパートリーを担持しているトランスジェニックマウスが作成されており、ヒト・γ_c蛋白またはγ_c発現ヒト・細胞で免疫することができる。次いで、これらの免疫トランスジェニックマウス由来の脾臓細胞を用いて、ヒト・γ_c と特異的に反応するヒト・モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作成することができる(例えば、Wood et al.ＰＣＴ公開ＷＯ９１／００９０６、Ku cherlapati et al.ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１０７４１；Lonberg et al.ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０３９１８；Kay et al.ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０３９１７；Lonber g,N.et al.(1994)Nature 368:856〜859；Green,L.L.et al.(1994)Nature Genet.7:13〜21；Morrison,S.L.e tal.(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851 〜6855；Bruggeman et al.(1993)Year Immunol 7:33〜40；Tuaillon et al.(199 3)PNAS 90:3720〜3724；Bruggeman et al.(1991)Eur J Immunol 21:1323〜1326 参照)。組み換えＤＮＡ法の当業者によく知られた他の方法によっても本発明モノクローナル抗体組成物を製造することができる。特定の抗原特異性を抗体フラグメントを同定し単離するために、「組み合わせ抗体ディスプレイ（combinatorial an tibody display）と言われる別法が開発されており、これを用いてモノクローナル抗−γ_c抗体を製造することができる（組み合わせ抗体ディスプレイの説明には、例えば、Sastry et al.(1989)PNAS 86:5728；Huse et al.(1989)Science246 :1275；およびOrlandi et al.(1989)PNAS 86:3833参照）。上記のごとくγ_c免疫原で動物を免疫した後、得られるＢ細胞プールの抗体レパートリーをクローン化する。オリゴマープライマー混合物およびＰＣＲを用いることにより、多様な集団の免疫グロブリンの可変領域ＤＮＡ配列を直接得る方法が一般的に知られている。例えば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応した混合オリゴヌクレオチドプライマー、並びに、保存的な３’不変領域プライマーを、多くのネズミ抗体由来の重鎖および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅に用いることができる（Larrick et al.(1991)Biotechnique s 11:152〜156）。同様の方法を用いて、ヒト抗体由来のヒト・重鎖および軽鎖可変領域を増幅してもよい（Larrick et al.(1991)Methods:Companion to Metho ds in Enzymology 2:106〜110）。実例となる具体例において、標準的プロトコール（例えば、米国特許第４,６８３,２０２号；Orlandi et al.PNAS(1989)86:3833〜3837；Sastry et al.PNAS( 1989)86:5728〜5732；およびHuse et al.(1989)Science 246:1275〜1281）を用いて、活性化Ｂ細胞、例えば、末梢血細胞、骨髄、または脾臓調製物からＲＮＡを単離する。重鎖およびκならびにλ軽鎖のそれぞれの不変領域に特異的なプライマー、並びに、シグナル配列に特異的なプライマーを用いて第１鎖ｃＤＮＡを合成する。可変領域ＰＣＲプライマーを用いて、重鎖および軽鎖両方の可変領域を単独または一緒に増幅し、ディスプレイパッケージを得ることにおけるさらなる操作のための適当なベクター中に結合する。増幅プロトコールにおいて有用なオリゴヌクレオチドプライマーはユニークなものであってもよく、あるいは縮重したものであってもよく、あるいは縮重位置にイノシンを含むものであってもよい。制限エンドヌクレアーゼ認識配列をプライマー中に包含させて、ベクター中の発現のために前以て決定された読み枠中に増幅フラグメントをクローン化することができる。ディスプレイパッケージの集団によって、好ましくは、糸状ファージ由来のものによって、免疫により得られた抗体レパートリーからクローン化されたＶ−遺伝子ライブラリーを発現させて抗体ディスプレイライブラリーを形成することができる。理想的には、ディスプレイパッケージは、非常に大規模で多様な抗体ディスプレイライブラリーのサンプリング、各アフィニティー分離ラウンド後の迅速ソーティング、および精製ディスプレイパッケージからの抗体遺伝子の容易な単離を可能にするシステムからなる。ファージディスプレイライブラリーを得るための市販キット（例えば、the Pharmacia Recombinant Phage Antibody Syste m,カタログ番号２７−９４００−０１；およびStratagene SurfZAP^TMphage disp lay kit,カタログ番号２４０６１２）のほかに、多様な抗−γ_c抗体ディスプレイライブラリーの生成において特に都合のよい方法および試薬の例は、例えば、 Ladner et al.米国特許第５,２２３,４０９号；Kang et al.国際公開ＷＯ９２／１８６１９；Dower et al.国際公開ＷＯ９１／１７２７１；Winter et al.国際公開９２／２０７９１；Markland et al.国際公開ＷＯ９２／１５６７９；Breit 1ing et al.国際公開ＷＯ９３／０１２８８；McCafferty et al.国際公開ＷＯ９２／０１０４７；Garrard et al.国際公開ＷＯ９２／０９６９０；Ladner et al .国際公開ＷＯ９０／０２８０９；Fuchs et al.(1991)Bio/Technology 9:1370〜 1372;Hay et al.(1992)Hum Antibod Hybridomas 3:81〜85；Huse et al.(1989)S cience 246:1275〜1281；Griffiths et al.(1993)EMBO J 12:725〜734；Hawkins et al(1992)J Mol Biol 226:889〜896；Clackson et al.(1991)Nature 352:624 〜628；Gram et al.(1992)PNAS 89:3576〜3580；Garrard et al.(1991)Bio/Tech nology 9:1373〜1377；Hoogenboom et al.(1991)Nuc Acid Res 19:4133〜 4137；およびBarbas et al.(1991)PNAS 88:7978〜7982において見いだすことができる。ある具体例において、フレキシブルリンカーにより結合された重鎖および軽鎖のＶ領域ドメインを、同じポリペプチド上に発現させて１本鎖Ｆ、フラグメントを得ることができ、次いで、１本鎖Ｆ_v遺伝子を所望発現ベクターまたはファージゲノム中にクローン化する。一般的には、McCafferty et al.,Nature(1990)34 8:552〜554に記載されているように、フレキシブルリンカー（Ｇｌｙ₄−Ｓｅｒ）により結合された抗体の完全なＶ_HおよびＶ_Lドメインを用いて、ディスプレイパッケージを抗原アフィニティーに基づいて分離可能としうる１本鎖抗体を作成することができる。次いで、γ_cと免疫反応する単離１本鎖Ｆ_v抗体を、本発明方法に使用する医薬調合品中に処方することができる。ディスプレイパッケージ（例えば、糸状ファージ）表面にディスプレイされたならば、抗体ライブラリーをγ_c蛋白またはそのフラグメントでスクリーニングしてγ_cに特異性を有する抗体を発現するパッケージを同定し単離する。選択された抗体をコードしている核酸をディスプレイパッケージから（例えば、ファージゲノムから）回収し、標準的な組み換えＤＮＡ法により他の発現ベクター中にサブクローン化することができる。Ｃ．他の刺激剤ガンマ鎖を介して刺激を行うサイトカイン受容体の共通ガンマ鎖に対する天然リガンドのペプチドフラグメントまたは修飾形態も、本発明に包含される。例えば、γ_cを介する刺激能を保持しているＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７のペプチドフラグメントまたは修飾形態を用いることができる。さらに、γ_cに結合し、それを介して刺激を行うペプチド模倣物および他の小型分子（例えば、薬剤）を用いてもよい。γ_cを介して刺激を行う修飾サイトカイン、ペプチドフラグメント、ペプチド模倣物または小型分子を、本明細書記載のスクリーニングアッセイを用いるスクリーニング物質により同定することができる。別法として、合理的なドラッグデザインを用いてγ_cと相互作用する分子を設計することもできる。本発明により企図される別のタイプの刺激剤はγ_cに対する刺激リガンドをコードしている核酸である。例えば、Ｔ細胞応答を刺激し、アネルギー誘導を防止するための遺伝子治療として、抗−γ_c抗体（またはそのフラグメント）または γ_cを含む受容体に結合するサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７）をコードしている核酸（例えば、ＤＮＡ）を、インビトロで細胞に導入することができ、あるいは対象にインビボ投与することができる。細胞における蛋白またはペプチド発現用の組み換え発現ベクター（例えば、組み換えウイルスベクター）、およびインビトロならびにインビボでの遺伝子治療核酸デリバリー機構は当該分野においてよく知られている。可溶性かつ分泌形態の抗−γ_c抗体またはサイトカインをコードしている発現ベクターを用い、その後細胞から分泌されて活性化Ｔ細胞（例えば、培養されたもの、またはインビボでのもの）上のγ_c含有表面サイトカイン受容体に結合するγ_cリガンドを細胞内で産生させてアネルギー誘導を防止することができる。別のタイプのγ_c刺激剤は、細胞内で作用してγ_cにより媒介されるシグナルの引き金を引くものである。かくして、この引き金は、γ_cまたはγ_c含有受容体の細胞外部分に結合しないが、むしろ、γ_cの結合に関連した細胞内シグナル（例えば、第２メッセンジャー）を模倣するかまたは誘導する。１の具体例において、細胞内で作用してγ_cにより媒介されるシグナルの引き金を引く剤は、γ_cのホスホリレーションを刺激する。もう１つの具体例において、剤は１１６ｋＤのＪＡＫキナーゼのホスホリレーションを刺激する。ＩＩ．共通のサイトカイン受容体γ鎖を介するシグナリングを阻害する剤Ａ．抗γ−鎖抗体阻害的またはブロックをする形態の抗体またはそのフラグメントであって、γ_c に結合するがγ_cを介して刺激を行わないものを用いて、γ_cを介するシグナリングを阻害することができる。抗−γ_c抗体の「阻害的形態」は、γ_cに結合するが、結合した場合にγ_cを介する細胞内シグナルを誘導しない形態の抗体をいう。そのうえ、好ましくは、抗−γ_c抗体は、γ_cのその天然のリガンドとの相互作用を阻害または防止し、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７によるγ_c を介するシグナリングを阻害または防止する。１の具体例において、阻害的形態の抗−γ_c抗体は、γ_cとクロスリンクしない可溶性抗体である。もう１つの具体例において、阻害的形態の抗−γ_cは、γ_cに結合するが、γ_cを介するシグナルを誘導しないＦａｂまたはＦ_vフラグメントのごとき抗体フラグメントである。上記のような標準的方法論を用いて阻害的抗−γ_c抗体およびそのフラグメントを製造することができる。Ｂ．抗−サイトカイン抗体 γ_cを含む受容体に結合するサイトカインを中和する抗体（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７に対する中和抗体）またはそのフラグメントを用いて γ_cを介するシグナルを阻害することもできる。用語「中和抗体」は、サイトカインに結合し、Ｔ細胞上のその受容体との相互作用を阻害または防止する抗体をいう。ＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７のごときサイトカインに対する抗体は市販されているか、または上記のような標準的方法論を用いて製造することができる。Ｃ．他の阻害剤 γ鎖を介するシグナリングを阻害するサイトカイン受容体の共通のγ鎖に対する天然リガンドのペプチドフラグメントまたは修飾形態も、本発明により包含される。例えば、γ_cに結合する能力を保持しているが、もはやγ_cを介する刺激を行うことのできない、ＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７のペプチドフラグメントまたは修飾形態を用いることができる。さらに、それゆえ、γ_cに結合し、γ_c への天然サイトカインリガンドのの結合を阻害または防止するペプチド模倣物および他の小型分子（例えば、薬剤）を用いてγ_cを介する細胞内シグナリングを阻害することができる。細胞内γ_cシグナリングを阻害する修飾サイトカイン、ペプチドフラグメント、ペプチド模倣物または小型分子を、本明細書記載のスクリーニングアッセイを用いるスクリーニング物質により同定することができる。別法として、合理的なドラッグデザインを用いて、天然サイトカインリガンド（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７）のγ_cとの結合をブロックする分子を設計することもできる。本発明によるもう１つのタイプの阻害剤は、γ_cをコードしている核酸に対してアンチセンスである核酸である（例えば、γ_c遺伝子のコーディングまたは調節領域に対してアンチセンス）。例えば、Ｔ細胞応答を阻害し、抗原特異的アネルギーを誘導するための遺伝子治療として、アンチセンス核酸（例えばＤＮＡ）をインビトロで細胞に導入し、あるいは対象にインビボ投与することができる。アンチセンス核酸は、γ_cアンチセンス核酸の発現を導く方向のγ_c ｃＤＮＡもしくは遺伝子またはその一部を含んでいるオリゴヌクレオチドまたは組み換え発現ベクターであってよい。当該分野で知られているインビトロまたはインビボでの遺伝子治療に適したデリバリーシステムによってアンチセンス核酸をインビトロまたはインビボにおいてＴ細胞に導入することができる。もう１つの形態のγ_c阻害剤は、細胞内で作用してγ_cにより媒介されるシグナルを阻害するものである。かくして、この剤は、γ_c含有受容体の細胞外部分への天然サイトカインリガンドの結合をブロックしないが、むしろγ_cの結合に関する細胞内シグナル（例えば、第２メッセンジャー）を阻害する。１の具体例において、細胞内で作用してγ_cにより媒介されるシグナルを阻害する剤は、γ_cのホスホリレーションを阻害する。もう１つの具体例において、剤は、１１６ｋＤのＪＡＫキナーゼのホスホリレーションを阻害する。さらにもう１つの具体例において、剤は、γ_cと１１６ｋＤのＪＡＫキナーゼとの間の相互作用または結合を阻害する。ＩＩＩ．ガンマ鎖刺激剤の治療的使用 γ_cを介する細胞内シグナルを刺激する剤を用いて、Ｔ細胞における抗原特異的アネルギーの誘導を防止し、Ｔ細胞の増殖を刺激することにより、抗原に対するＴ細胞応答を刺激することができる。γ_cを介する刺激は、本来的にはＴ細胞アネルギーを誘導しうる条件下でＴ細胞に対する抗原の提示が起こる免疫応答を促進、延長および／または維持することに関して治療的に有用でありうる。例えば、腫瘍抗原に特異的なＴ細胞は、共刺激シグナルの不存在下で腫瘍細胞表面上の腫瘍抗原でのＴ細胞の刺激によってアネルギー化しやすい可能性がある（例えば、Ｂ７−１またはＢ７−２のごとき共刺激分子を発現しない腫瘍細胞はＴ細胞をアネルギー化させる可能性があり、そのことにより、抗腫瘍応答を下方修正する）。したがって、腫瘍抗原特異的シグナルの存在下でγ_cを介して腫瘍抗原特異的Ｔ細胞を刺激することによって抗腫瘍応答を促進することができる。例えば、上記γ_c刺激剤を腫瘍を有する対象に投与することができる。別法として、腫瘍を有する対象由来のＴ細胞を腫瘍細胞ならびにγ_c刺激剤とインビトロで接触させ、次いで、対象に再投与することができる。さらに、病原体を有する対象に本明細書記載のγ_c刺激剤を投与することによりウイルス、細菌、真菌、寄生虫等のごとき病原体に対するＴ細胞応答を促進し延長することができる。γ_cを介するＴ細胞の刺激によってワクチン接種の効率を増大させることもできる。例えば、ワクチンをγ_c刺激剤と一緒に投与してワクチン接種物質に対する免疫応答を促進することができる。ＩＶ．γ鎖阻害剤の治療的使用本発明のγｃ阻害剤を使用すれば、抗原に対するＴ細胞応答を阻害することができ、さらには、再攻撃の際に抗原にＴ細胞が応答しないように、抗原特異的Ｔ細胞アネルギーを誘導することができる。Ｔ細胞応答を阻害し、アネルギーを誘導するためには、抗原特異的シグナル存在下にて、Ｔ細胞をγｃ阻害剤と接触させる。抗原に対するＴ細胞の応答は、イン・ビトロ(in vitro)またはイン・ビボ (in vivo)のいずれかの本発明の方法により阻害することができる。イン・ビトロ(in vitro)でＴ細胞を阻害するためには、Ｔ細胞への抗原提示細胞(例えば、アロ抗原特異的応答を阻害する同種異系細胞)とともにγｃ阻害剤をＴ細胞と接触させる。Ｔ細胞応答を阻害し、イン・ビボ(in vivo)でアネルギーを誘導するためには、γｃ阻害剤を対象に投与する。この場合、Ｔ細胞は、イン・ビボ(in vivo)の内因性刺激(例えば、イン・ビボ(in vivo)で抗原提示細胞によって提示される自己抗原または外来抗原)によるＴＣＲ/ＣＤ３複合体を介した所望の抗原刺激を受ける。別法として、抗原刺激をγｃ阻害剤と同時投与することもできる (例えば、アレルゲン特異的アネルギーを誘導するためには、該アレルゲンをγ ｃ阻害剤と同時投与し得る)。さらに、γｃ阻害剤と一緒の抗-ＣＤ３抗体のごとき、非-特異的試薬でＴＣＲ/ＣＤ３複合体を介したシグナルを伝達させることによって、非特異的にＴ細胞応答を阻害し得る。加えてまたは別法として、Ｔ細胞応答を阻害し、対象にアネルギーを誘導するためには、Ｂ７-１またはＢ７-２のいずれかとＣＤ２８との相互作用によって媒介される同時刺激シグナルのごとき、同時刺激シグナルをイン・ビボ(in vivo) で受けることからＴ細胞を阻害または妨害することも有利となり得る。したがって、Ｔ細胞をγｃ阻害剤と接触させることに加えて、ＣＤ２８、Ｂ７-１またはＢ７-２に結合する遮断分子のごとき、Ｔ細胞における同時刺激シグナルの生成を阻害する他の剤とＴ細胞とを接触させることもできる。適当な遮断分子の例には、抗-ＣＤ２８Ｆａｂフラグメント、抗-Ｂ７-１または抗-Ｂ７-２遮断抗体（すなわち、ＣＤ２８-Ｂ７-１/Ｂ７-２相互作用は遮断するが、Ｔ細胞に同時刺激シグナルは誘導しない抗体)およびＣＴＬＡ４、ＣＤ２８、Ｂ７-１またはＢ７- ２の可溶化形(例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白質)が含まれる。加えて、遮断分子の組合せ、例えば、抗Ｂ７-１抗体および抗Ｂ７-２抗体を用いることもできる。抗原へのＴ細胞応答を阻害し、抗原特異的アネルギーを誘導する本発明の方法は、以下のサブセクションでより詳細に記載するごとく、Ｔ細胞応答を低下調節することが望ましい種々の臨床状況に適用し得る。Ａ．器官移植/ＧＶＨＤ：Ｔ細胞アネルギーの誘導は、(例えば、移植片-対-宿主疾患(ＧＶＨＤ)を阻害するために)細胞、組織、皮膚および器官の移植の状況、ならびに骨髄移植に有用である。例えば、アロ反応性Ｔ細胞のアネルギー化は、組織移植における組織破壊を低下し、一般化された免疫抑制を必要とせずに長期の移植寛容を生じ得る。典型的に、組織移植においては、移植片の拒絶反応は、Ｔ細胞による外来としてのその認識につづく、移植片を破壊する免疫反応を通して始まる。γｃ阻害剤は、移植細胞と共に移植受容者に投与して、アロ抗原特異的Ｔ細胞非応答を誘導することができる。ＣＴＬＡ４ＩｇのごときＣＤ２８/ ＣＴＬＡ４Ｉｇを介する同時シグナルを阻害する剤は、γｃ阻害剤と同時投与し得る。前記したアプローチは、骨髄移植の状況に同様に適用して、供与者骨髄からのアロ反応性Ｔ細胞を特異的にアネルギー化し得る。供与者骨髄は、移植する前に、受容者からの細胞(例えば、造血細胞)およびγｃ阻害剤とイン・ビトロ(in vitr o)でインキュベートし得る。Ｔ細胞における同時刺激シグナルの生成を阻害するさらなる剤(例えば、抗Ｂ７-１および/または抗Ｂ７-２抗体、ＣＴＬＡ４Ｉｇほか)を、該インキュベート物に含ませることができる。ついで、処理した骨髄を受容者に投与し、その受容者をγｃ阻害剤単独、または同時シグナルを阻害する剤と組み合わせてイン・ビボ(in vivo)でさらに処理し得る。組織移植拒絶反応またはＧＶＨＤを予防する特定のγｃ阻害剤の効率は、ヒトにおける効率の予測である動物モデルを使用して検査し得る。使用し得る適当な系の例には、ラットにおける同種異系心臓移植およびマウスにおける異種間膵臓島細胞移植が含まれ、その双方を用いて、Ｌenschowら，Ｓcience，257:789-792 (1992)およびＴurkaら，Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.USA，89:11102-11105(1992)記載と同様にして、イン・ビボ(in vivo)のＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白質の免疫抑制効果を測定することができる。加えて、ＧＶＨＤのネズミ類モデル(Ｐaul編，Ｆ undamental Ｉmmunology，Ｒaven Ｐress社，Ｎew Ｙork，1989，pp846-847)を用いて、γｃ阻害剤を用いたＴ細胞非応答を誘導する効果を、その疾患の進展に対して測定することができる。Ｂ．自己免疫疾患：本発明の方法による抗原特異的Ｔ細胞非応答の誘導は、自己免疫疾患の治療にも治療的に有用となり得る。多くの自己免疫疾患は、自己の組織に反応性であるＴ細胞の不適当な活性化の結果生じ(すなわち、自己抗原に対して反応性である)、それは、その疾患の病理に関与するサイトカインおよび自己抗体の産生を促進する。したがって、自己反応性Ｔ細胞の活性化を予防することによって、疾患病徴を低下または除去し得る。γｃ阻害剤の投与を用いて、自己抗原に対するＴ細胞応答を阻害し得、自己抗原特異的アネルギーを誘導し得る。自己免疫疾患を治療するためには、γｃ阻害剤を、治療を要する対象に投与する。別法として、公知の自己抗原を有する自己免疫疾患については、該自己抗原を該阻害剤と共に対象に同時投与し得る。この方法を用いれば、糖尿病、（変形関節炎、幼年性変形関節炎、骨関節炎、乾癬性関節炎を含む）関節炎、多発性硬化症、重症筋無力症、全身紅斑エリテマトーデス、自己免疫疾患甲状腺炎、（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）皮膚炎、乾癬、ショーグレーン症候群の二次乾性角結膜炎を含むショーグレーン症候群、円形脱毛症、節足動物口咬反応に起因するアレルギー反応、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、喘息、アレルギー性喘息、皮膚の紅斑エリテマトーデス、浮腫性硬化症、膣炎、直腸肛門炎、薬疹、レプロシー反応群、結節性紅斑レプロシー、自己免疫疾患性葡萄膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死出血性脳疾患、自然発生の両進行性知覚神経聴覚失調症、無形成貧血、純赤血球貧血、自然発生の血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェグネル肉芽腫症、慢性活性肝炎、スティーブン−ジョンソン症候群、自然発生のスプルー、偏平苔癬、クローン病、グレイブス眼病、サルコイドーシス、原発性胆汁硬変、葡萄膜炎後期、間質性肺線維症を包含する種々の自己免疫疾患および自己免疫成分を有する疾患を治療することができる。自己免疫疾患を予防し、または緩和することにおけるγｃ架橋剤の効率は、ヒト自己免疫疾患のよく特徴付けられた数多くの動物モデルを用いて測定し得る。例には、ネズミ類の実験的自己免疫疾患脳炎、ＭＲＬ/lpr/lprマウスまたはＮＺＢハイブリッドマウスにおける全身狼瘡紅斑、ネズミ類自己免疫疾患コラーゲン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢラットにおける真性糖尿病、ならびにネズミ類実験重症筋無力症(Ｐaul編，Ｆundamental Ｉmmunology，Ｒaven Ｐress社，Ｎew Ｙork，1989，pp.840-856参照)が包含される。Ｃ．アレルギー：アトピー性アレルギーにおけるＩｇＥ抗体応答は、非常にＴ細胞依存性であって、従って、アレルゲン特異的Ｔ細胞応答の阻害およびアレルゲン特異的アネルギーの誘導は、アレルギーおよびアレルギー反応の治療に治療的に有用となり得る。例えば、γｃ阻害剤は、アレルゲンに暴露した対象に投与して、アレルゲン特異的Ｔ細胞にアポトーシスを誘導し、それによって対象におけるアレルギー応答を低下調節することができる。γｃ阻害剤のアレルギー対象者に対する投与は、アレルゲンへの環境的な暴露によってか、または該対象にアレルゲンを同時投与することによって行い得る。アレルギー反応は天然には全身的または局所となり得、アレルゲンの侵入経路および肥満細胞または好塩基球へのＩｇＥの沈殿パターンに依存し得る。かくして、γｃ阻害剤を適当に投与することによって局所的または全身的にＴ細胞応答を阻害することが必要となり得る。例えば、１つの具体例において、γｃ阻害剤およびアレルゲンをアレルギー対象に皮下的に同時投与する。Ｄ．抗原-特異的アネルギーの誘導：Ｔ細胞非応答を誘導する本発明の方法は、いずれの抗原(例えば、蛋白質)に実質的に適用して、対象中のその抗原に対してＴ細胞をアネルギー化し得る。かくして、アネルギー化すべきＴ細胞に対する所望の抗原をγｃ阻害剤と共に対象に投与し得る。該抗原は、可溶性形、または担体もしくは支持体(例えば、ビーズ)に結合して投与し得る。この基本的なアプローチは、治療目的の潜在的な免疫原性分子を利用する治療用の補助として広範に適用されている。例えば、増加しつつある多種の治療アプローチは、臨床疾患治療用に、抗体、融合蛋白質ほかのごとき蛋白質性分子を利用する。かかる分子の使用の治療的な制限は、それらが、治療する対象の治療分子に対して指向された免疫応答を誘起し得ることである(例えば、ヒト対象におけるネズミ類モノクローナル抗体の効率は、ヒト対象における抗体に対する免疫応答の誘導によって妨害される)。抗原特異的Ｔ細胞非応答を誘導する本発明の方法は、これらの治療状況に適用して、免疫応答を誘起することなく、対象における治療分子の長期使用を可能ならしめる。例えば、治療抗体(例えば、ヒト対象における抗体に特異的なＴ細胞を典型的に活性化するネズミ類mＡｂ)に対するＴ細胞応答をアネルギー化するためには、該治療抗体をγｃ阻害剤と共に対象(例えば、ヒト)に投与する。該方法には、さらに、ＣＴＬＡ４Ｉｇのごとき、ＣＤ２８/ＣＴＬＡ４-媒介同時刺激シグナルを阻害する剤の投与が含まれ得る。Ｖ．治療形のγ鎖刺激または阻害剤の投与本発明の剤は、イン・ビボ(in vivo)の医薬投与に適した生物学的和合性形で対象に投与して、Ｔ細胞応答を刺激するか、または阻害する。「イン・ビボ(in vivo)の投与に適した生物学的和合性形」とは、いずれの毒性効果も剤の治療効果によって減殺される、投与すべき剤の形態を意味する。対象なる語は、免疫応答を誘起し得るいずれの生きている生物、例えば、哺乳動物をも包含することを意図する。対象の例には、ヒト、サル、イヌ、ネコ、ネズミ、ラットおよびそのれらのトランスジェニック種が含まれる。本明細書に記載する本発明の剤の投与は、治療有効量のγｃ刺激または阻害剤単独、または他の治療分子(例えば、ＣＤ２８に対する刺激または遮断抗体、Ｂ７-１またはＢ７-２遮断抗体、ＣＴＬＡ４Ｉｇほかのごとき、同時刺激分子(例えば、Ｂ７-１および/またはＢ７-２)の受容体（例えば、ＣＤ２８/ＣＴＬＡ４）を介したシグナルを刺激するか、または阻害する剤)および医薬上許容し得る担体との組合せを包含するいずれの薬理学的形態とすることもできる。本発明の治療有効量の治療組成物の投与は、所望の結果を達成するのに要する投与量および期間で有効な量と規定する。例えば、治療有効量のγｃ刺激または阻害剤は、個人の疾病状態、年齢、性別および体重、ならびに該個人に所望の応答を誘起する剤の能力のごとき因子に従って変動し得る。投与量様式を調節すれば、最適な治療応答を供することができる。例えば、数回に分割した用量を毎日投与することができ、あるいは該用量は治療状況の緊急性によって示されるように比例的に減少することができる。有効化合物は、注射(皮下、静脈内ほか)、経口投与、吸入、経皮適用または直腸投与によるごとき、慣用的様式で投与し得る。投与経路に依存して、該有効化合物を物質でコートして、該化合物を不活化し得る酵素、酸および他の天然条件の作用から該化合物を保護することができる。非経口投与以外によって剤を投与するためには、該リガンドの不活化を予防する物質で該リガンドをコートするか、または該リガンドと同時投与することが必要となり得る。剤は、適当な担体または希釈剤中で個人に投与し得、酵素阻害剤と同時投与し得、あるいは、リポソームのごとき適当な担体中で投与し得る。医薬上許容し得る希釈剤には、生理食塩水および緩衝水溶液が包含される。酵素阻害剤には、膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート (ＤＥＰ)およびトラシロール(trasylol)が包含される。リポソームには、水-油- 水型乳化物、ならびに、慣用的なリポソーム(Ｓtrejanら，(1984)Ｊ.Ｎeuro-imm unol.7:27)が包含される。また、有効化合物は、非経口または腹膜内でも投与し得る。また、分散物は、グリセリン、液体ポリエチレングリコールおよびその混合液中、ならびに油性物中でも調製し得る。保存および使用の任意の条件下にて、これらの調製物は、保存料を含有して、微生物の増殖を予防し得る。注射用途に適した医薬組成物には、滅菌水溶液(水溶性である場合)または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末が包含される。すべての場合において、該組成物は、無菌でなければならず、注射適性が存在する範囲で流動性でなければならない。それは、製造および保存の条件下にて安定でなければならず、細菌および糸状菌のごとき微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。担体は、溶媒、または例えば、水、エタノール、ポリオール (例えば、グリセリン、ポリエチレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールほか)を含有する分散媒質、ならびにその適当な混合物とし得る。適当な流動性は、例えば、レシチンのごときコーティング剤を使用することによって、分散液の場合には所望の粒子サイズを維持することによって、および、界面活性剤を使用することによって維持し得る。微生物の作用の予防は、種々の抗殺菌剤および抗糸状菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールほかによって達成し得る。多くの場合、例えば、砂糖、マンニトール、ソルビトールのごとき多価アルコール、塩化ナトリウムのような浸透圧調整剤を組成物中に含ませるのが望ましい。注射組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅延する剤、例えば、アルミニウムモノステアレートおよびゼラチンを含有させることによって行い得る。滅菌注射溶液は、所望により前記に列挙した１または組合せの成分を入れた適当な溶媒中に必要な量の有効化合物を取り込ませ、つづいて濾過滅菌することによって調製し得る。一般的に、分散液は、有効化合物を、基本分散媒質および前記に列挙したものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに取り込ませることによって調製する。滅菌注射溶液調製用の滅菌粉末の場合においては、好ましい製法は、有効成分の粉末＋予め濾過滅菌したその溶液からのさらなる所望の成分を供する真空乾燥および凍結乾燥である。前記のごとく、有効化合物を適当に保護する場合、該化合物は、例えば、不活性希釈剤または同化性の食用担体と共に、経口投与し得る。本明細書で用いる「医薬上許容し得る担体」には、分散媒質、コーティング剤、抗細菌剤および抗糸状菌剤、浸透圧調整剤および吸収遅延剤ほかのいずれかおよびすべてが包含される。医薬上有効な物質としてのかかる媒質および剤の使用は当該分野でよく知られている。有効化合物と不和合性であるいずれの慣用的媒質または剤の範囲を除いて、治療組成物におけるそれらの使用は予期される。補充有効化合物も、該組成物に組込ませ得る。投与および投与量の均一性の容易より、非経口組成物は投与量単位形に処方化することが特に有利である。本明細書で用いる投与量単位形とは、治療すべき哺乳動物対象用の単位投与量に適した物理学的分離単位をいい；各単位は、所望の医薬担体と結合して望ましい治療効果を発揮するように算出された所定量の有効化合物を含有する。本発明の投与量単位形の詳細は、(ａ)有効化合物のユニークな特性および達成すべき特定の治療効果、および(ｂ)個人の感受性を治療するためのかかる有効化合物を化合する技術の固有の制限によって書き取られ、直接依存する。 IV ．スクリーニング分析本発明のもう１つの態様はγ_cを通じたシグナリングを阻害または刺激する薬剤の同定のためのスクリーニング分析に関する。１の具体例において、γ_cを通じたシグナリングを阻害する薬剤の同定方法は、試験される基質の存在下または非存在下で、一次活性化シグナルを刺激する第一の薬剤（例えば、抗−ＣＤ３抗体または抗原提示細胞によって提示される抗体）およびγ_cを通じたシグナルを刺激する第二の薬剤（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７あるいはγ_c と交差する抗体）とサイトカインレセプターを発現するＴ細胞を接触させることを含有する。Ｔ細胞の増殖を測定し、γ_cを通じたシグナリングを阻害する基質を、Ｔ細胞の増殖を阻害する基質の能力に基づき同定する（すなわち、Ｔ細胞の増殖応答は、基質の非存在下における増殖応答と比較して、基質の存在下において阻害される）。Ｔ細胞増殖は、トリチル化されたチミジンの取り込みのような標準的な分析によって測定できる。代わりに、試験する基質の存在下または非存在下で、上記記載の第一および第二の薬剤でのＴ細胞の刺激に続き、γ_cおよび１１６ｋＤＪＡＫキナーゼ間の会合、γ_cのリン酸化または１１６ＪＡＫキナーゼのリン酸化のような細胞内応答を測定できる。γ_cを通じたシグナリングを阻害する基質は、γ_cと１１６ｋＤＪＡＫキナーゼの会合を阻害する基質の能力、γ_cのリン酸化および１１６ＪＡＫキナーゼのリン酸化の能力に基づき同定することができる。γ_cおよび１１６ｋＤＪＡＫキナーゼ間の会合は、実施例３に記載されるように、コイムノプリシピテーションアッセイにより測定できる。γ_cおよび１１６ＪＡＫキナーゼのリン酸化は、実施例３に記載されるように、抗−ホスホチロシン抗体を用いて分析できる。代わりに、スクリーニング分析は、γ_cを通じた細胞内シグナルを刺激する薬剤を同定するのに用いることができる。１の具体例において、このようなスクリーニング分析は、試験される基質の存在下または非存在下で、一次活性化シグナルを刺激する薬剤（例えば、抗−ＣＤ３抗原または抗原提示細胞によって表される抗原）と、γ_cを誘導するサイトカインレセプター（ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−７Ｒ）を発現するＴ細胞を接触させ、しかしＣＤ２８／ＣＴＬＡ４を通じた共刺激シグナルを誘導せず、次いでＴ細胞の増殖を測定することを包含する。一次活性化シグナルを刺激する薬剤のみでのＴ細胞の刺激はＴ細胞におけるアネルギーの誘導とＴ細胞増殖の欠如に帰する。γ_cを通じたシグナルを刺激する基質は、Ｔ細胞におけるアネルギーの誘導を予防する能力に基づいて同定することができる。すなわち、刺激基質の存在下では、Ｔ細胞は、増殖し、再投与に際して抗原に応答するであろう。代わりに、γ_cまたは１１６ｋＤＪＡＫキナーゼのリン酸化のような細胞内応答が測定できる。γ_cを通じて刺激する薬剤は、 γ_cまたは１１６ｋＤＪＡＫキナーゼのリン酸化を誘導する基質の能力にもとづき同定できる。もう１つの具体例において、米国特許第５,２８３,１７３号およびＰＣＴ出願ＷＯ９４／１０３００に記載されるツーハイブリッド分析システムは、γ_cおよび１１６ｋＤＪＡＫキナーゼの間の相互作用を阻害する薬剤を同定するのに用いられる。ツーハイブリッド分析システムを行うためのキットは、クロンテク，パロ・アルト，カリフォルニア（Clontech，Palo Alto，CA）から商業的に入手可能である。代わりに、γ_cおよび／または１１６ｋＤＪＡＫキナーゼのグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ融合蛋白を調製でき、これらをγ_cおよび１１６ｋＤＪＡＫキナーゼ間の相互作用を阻害する薬剤を同定するために用いた。例えば、１の蛋白のＧＳＴ融合を作り、試験される基質の存在下または非存在下で他の蛋白の標識した調製およびグルタチオン−アガロースと沈降したγ_c− １１６ｋＤＪＡＫキナーゼ複合体とインキュベートする。γ_cおよび１１６ｋＤＪＡＫキナーゼの相互作用を阻害する基質はＧＳＴ融合蛋白と沈降する標識化された蛋白の量を減少させる基質の能力に基づき同定できる。本発明は以下の実施例によってさらに例示され、これは限定と解されるべきではない。本出願を通じて引用される全ての文献、特許および公開された特許出願の内容はここに引用して本明細書の一部とする。実施例１：ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−７はＴ細胞におけるアネルギー誘導を予防する実施例において、ヒト・アロ抗原特異的Ｔ細胞クローナルモデルシステムを使用した。ＩＩＬＡ−ＤＲ７ヒト・アロ抗原特異的Ｔ細胞クローンであるＴＣ−３およびTＣ−４（ＣＤ４⁺，ＣＤ８^-，ＣＤ２８⁺，Ｂ７^-）を、標準的方法論により得た。さまざまな実験において、ＤＲ７−特異的Ｔ細胞クローンを、ＤＲ７⁺ リンホブラストイド細胞系（ＬＢＬ−ＤＲ７）またはＤＲ−７のみを発現するよう感染させたＮＩＨ−３Ｔ３細胞（ｔ−ＤＲ７）またはＤＲ−７およびＢ７−１を発現するよう感染させたＮＩＨ−３Ｔ３細胞（ｔ−ＤＲ７／Ｂ７−１）と共に培養した。ＬＢＬ−ＤＲ７はＥＢＶでトランスフォームしたリンホブラストイドＢ−細胞系であり、これはＨＬＡ−ＤＲ７とホモジガスであって、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３およびＩＣＡＭ−１を強力に発現する。ＮＩＨ−３Ｔ３細胞トランスフェクタントはギンミ，シィ・ディ（Gimmi，C．D.）ら（１９９３）［プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ，ユー・エス・エイ(Proc．Natl．Acad．Sci．USA)９０：６５８６］に記載されている。さまざまな実験において、異なるサイトカインまたは抗体を培養に添加した。それぞれの実験の前に、Ｔ細胞クローンを、アロ抗体による再刺激無しでＩＬ−２中において１０ないし１４日休止させた。使用に先立ち、細胞は、刺激無しでまたはＩＬ−２無しで一晩培養した。最初の一連の実験において、アロ抗原−特異的（すなわち、ＤＲ７−特異的）Ｔ細胞クローンを、初代培養において１）ＬＢＬ−ＤＲ７、２）培地中でまたは様々なサイトカインの存在下でのＬＢＬ−ＤＲ７およびＣＴＬＡ４−Ｉｇ、３）ｔ−ＤＲ７／Ｂ７−１または４）培地中でまたは様々なサイトカインの存在下でのｔ−ＤＲ７とインキュベートする。実験で用いられるサイトカインおよび使用されるサイトカインの濃度は以下の通りである：ＩＬ−２（５０Ｕ／ｍｌ）；ＩＬ−４（５ｎｇ／ｍｌ）（ゲンザイム，ケンブリッジ，マサチューセッツ(Genzy me，Cambridge，MA)）；ＩＬ−６（３０ｎｇ／ｍｌ）（ゲンザイム(Genzyme)）；ＩＬ−７(１０ｎｇ／ｍｌ)(ゲンザイム(Genzyme))；ＩＬ−１２（１０Ｕ／ｍｌ）（ゼネティックス・インスティテュート，ケンブリッジ，マサチューセッツ (Genetics Institute，Cambridge，MA)；ＴＮＦα（５００Ｕ／ｍｌ）（ゲンザイム(Genzyme)）；ＩＦＮγ（５００Ｕ／ｍｌ）（バイオゲン，ケンブリッジ，マサチューセッツ(Biogen，Cambridge，MA)）。使用に先立ち、ＬＢＬ−ＤＲ７細胞およびＮＩＨ３Ｔ３トランスフェクタントをマイトマイシン−Ｃで処理した。いくつかの実験において、ＬＢＬ−ＤＲ７細胞に放射線照射（９６００ｒａｄｓ）した。Ｔ細胞クローンは初代培養で２４時間培養した。初代培養に続き、Ｔ細胞をフィコールによってＬＢＬ−ＤＲ７から、パーコールによってＮＩＨ３Ｔ３トランスフェクタントから分離し、培地中ＩＬ−２無しで１２時間再び培養した。それぞれの集団は二次培養においてＬＢＬ−ＤＲ７スティミュレーターを連続して再び投与した。試料を培養し、増殖を［³Ｈ］−チミジン（１μＣｉ）の取り込みによって測定した。ＬＢＬ−ＤＲ７で刺激したＴ細胞の結果を図１、パネルＡに示す。ＮＩＨ−３Ｔ３トランスフェクタントで刺激したＴ細胞の結果を図１、パネルＢに示す。結果は再投与における応答を示し、三連培養の手段によって発現する。同一の結果がＴＣ−３およびＴＣ−４クローンの両方について得られた。ＨＬＡ−ＤＲ７ホモジガスリンホブラストイド細胞系（ＬＢＬ−ＤＲ７）またはＨＬＡ−ＤＲ７およびＢ７−１共刺激分子を発現させるトランスフェクタント（ｔ−ＤＲ７／Ｂ７ −１）に続き、ＨＬＡ−ＤＲ７−特異的アロ反応Ｔ細胞クローンはＬＢＬ−ＤＲ７細胞での二回目の再投与について顕著に増殖する。対照的に、Ｔ細胞クローンの初代培養が、Ｂ７ファミリー媒介の共刺激を阻害するためのＣＴＬＡ４−Ｉｇの存在下でいずれかのＬＢＬ−ＤＲ７細胞と共にあるか、あるいはＨＬＡ−ＤＲ７のみを発現するトランスフェクタント（ｔ−ＤＲ７）と共にある場合、アネルギーが起こり、ＬＢＬ−ＤＲ７細胞での再投与に応答しなかった。ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、またはＩＬ−１２の変化する濃度を、初代培養に、ＬＢＬ−ＤＲ７およびＣＴＬＡ４−Ｉｇまたはｔ−ＤＲ７と共に添加することによっては、アネルギーの誘導を予防できなかった。これは幾分驚くべきである、なぜなら、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１２はそれぞれそれのみでＴ細胞クローンの増殖を誘導できない。対照的に、ＬＢＬ−ＤＲ７およびＣＴＬＡ４−Ｉｇまたはｔ−ＤＲ７との初代培養へのＩＬ−２、ＩＬ− ４またはＩＬ−７の添加は、アネルギーの誘導を予防した。実施例２：ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−７レセプターの共通のγ−鎖の刺激はＴ細胞中におけるアネルギーを予防する。細胞外ＩＬ−２、ＩＬ−４、およびＩＬ−７の添加のみはアロ抗原−特異的アネルギーの誘導を阻害し（実施例１参照）、これらのサイトカインはγ_cを共有するので、初代培養間のγ_cシグナリングはアネルギーの予防と関連するであろうことを試験した。この問題を処理するために、特異的なｍＡｂｓを使用した。様々な抗体が、１）ＩＬ−２レセプターのαまたはβ鎖（αＩＬ−２Ｒαおよび αＩＬ−２Ｒβ）、２）ＩＬ−４またはＩＬ−７の通常のレセプターの鎖（αＩＬ−４ＲおよびαＩＬ−７Ｒ）、および３）ＩＬ−２、ＩＬ−４、およびＩＬ− ７レセプターの共通のγ鎖（αγ_c）に指向された。ＬＢＬ−ＤＲ７およびＣＴＬＡ４−Ｉｇまたはｔ−ＤＲ７とのＴ細胞クローンの初代培養は、ウサギ抗マウスＩｇ（ＲａＭ）と交差するｍＡｂｓのそれぞれと一緒であった。初代培養および再投与が実施例１に記載されるように行われた。ＩＬ−２Ｒαに対する抗体（ＩｇＧ２ａ）(デイ・エイ・フォックス(D．A．Fox))ら（１９８４）ジェイ・イムノル(J．Immunol.)１３３：１５２０）(コウルタ(Coulter))、ＩＲ−２Ｒβ（ＩｇＧ）（エム・カミオ(M．Kamio)ら（１９９０）イント・イムノル(Int．Immuno l.)２：５２１）（コウルタ(Coulter)）、ＩＬ−４Ｒ（ＩｇＧ１）（ダブリュ・シィ・ファンスロウ(W．C．Fanslow)ら（１９９３）ブラッド(Blood)８１：２９９８）(ゲンザイム(Genzyme))、ＩＬ−７Ｒ（ＩｇＧ１）（アール・ジー・ゴッドウィン(R．G．Goodwin)ら(１９９０)［セル(Cell)６０：９４１］またはγ_c（ＩｇＧ１）(ティ・ナカライ(T．Nakarai))ら（１９９４）ジェイ・イクスプ・メド(J．Exp．Med.)１８０：２４１）およびＲａＭが全て１０μｇ／ｍｌの濃度で用いられた。ビオチン化されたγ_c抗体が使用され、交差がストレプトアビジン（１０μｇ／ｍｌ）で、ビオチンを含まないＲＰＭＩ中で行われた。同一の結果が、ＴＣ−３およびＴＣ−４クローンの両方により得られた。ＬＢＬ−ＤＲ７で刺激したＴ細胞の結果が、図２、パネルＡに示される。ｔ− ＤＲ７で刺激したＴ細胞の結果は図２、パネルＢに示される。初代培養におけるＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−４ＲまたはＩＬ−７Ｒの交差はアネルギーの誘導を予防しない。対照的に、初代培養中のγ_cの交差はアネルギーの誘導により予防され、再投与において両方の増殖および再投与におけるＩＬ−２分泌という結果になり、これは、アネルギーを起こさない対照細胞で観察されるものに匹敵する。これらの結果は、ＴＣＲシグナリングの存在下では、普通のγ鎖交差は十分であって、アネルギーの誘導を予防することを示す。さらに、これらのデータは、アネルギーの誘導を予防するＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−７の普通の効果が、γ_cシグナリング経路を通じて媒介されるという仮説を支持する。実施例３：Ｔ細胞におけるアネルギー誘発の防止は、１１６kＤＪＡＫキナーゼのリン酸化に関連する。 γ_cを介して媒介される共通のシグナル伝達経路が次のＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−７刺激を同定することがでるかを試験するために、Ｔ細胞クローンＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７を用いて培養し、細胞溶解物を抗γ_cmＡbを用いて免疫沈降させた。アロ抗原特異的ヒトヘルパーＴ細胞クローンをＩＬ−２を含まない無Ｄ−ＭＥＭ血清培地中で１２時間インキュベートし、次いで、培地ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＴＮＦα、またはＩＬ−１２を用いて１５分間刺激した。細胞を、１０mＭトリス−ＨＣｌ（pＨ７.６）、５mＭＥＤＴＡ、５０m ＭＮaＣl、３０mＭリン酸ナトリウム、５０mＭＮaＦＩ、１mＭオルトバナジウム酸ナトリウム、５μg／mlアプロチニン、１μg／mlペプスタチン、および２μ g／mlダイズトリプシン阻害薬、１mＭフェニルメチルスルホニルフルオリドおよび０.５％ＮＰ−４０［シグマ（Ｓigma）］を含有する溶解緩衝液を用いて溶解せさた。図３のパネルＡにおいて示される実験のために、免疫沈降は、抗γ_c抗体を用いて行われ、タンパクＡ−セファロース上で免疫複合体を単離し、溶解緩衝液で３回洗浄し、６〜１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ勾配液で分析した。ニトロセルロース膜に移動したタンパクを、１０％ウシ血清アルブミンを含有するＴＢＳＴ（２０mＭトリスＨＣl、pＨ７.６、１３７mＭＮaＣl、０.１％トゥィーン−２０）中で振盪することによって、室温で１時間ブロックした。ホスホチロシンタンパクの検出のために、ブロットを、４Ｇ１０抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（１：２０００）と一緒に室温で６０分間インキュベートした。該ブロットを洗浄緩衝液（５０mＭトリス−ＨＣl、pＨ７.６、２００mＭＮaＣl、０.１％トゥィーン−２０）で３回洗浄し、次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヒツジ抗マウスＩgＧ（１：５０００）［イリノイ州アーリントン・ハイツ、アマーシャム（Ａmersham）］と一緒に６０分間インキュベートした。ブロットを、洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、増強したケミルミネッセンス基質［アマーシャム（Ａmersham）］と一緒にインキュベートし、Ｘ線フィルムに暴露し、現像した。ＥＣＬイムノデプレション（immunodepletion）の後、イムノブロットを、５０℃で１時間、６２.５mＭトリス−ＨＣl（pＨ６.８）、３％ｗ／ｖＳＤＳおよび１００mＭβ−メルカプトエタノール中でインキュベートすることによってストリッピングした。図３に示される他の実験のために、膜をブロックし、抗ＪＡＫ（Ｒ８０）（１：１０００）抗体（パネルＢ）またはＪＡＫＩ（パネルＣ）、ＪＡＫ２（パネルＤ）およびＴyk２（パネルＥ）に対するペプチド特異的mＡbのいずれかと一緒に再プローブし、前記と同様に洗浄および検出した。図３のパネルＡは、γ_cの６４kＤバンドが１１６kＤのバンドと一緒に共沈することを示す。抗ホスホチロシンmＡbを用いるウェスターンブロッティングは、チロシン残基上の６４kＤおよび１１６kＤの両方のバンドのリン酸化を示した。これらの結果は、γ_cが物理的に１１６kＤ分子に関連しており、ＩＬ−２、ＩＬ −４またはＩＬ−７によるＴ細胞の刺激によりγ_cと一緒に共リン酸化されることを示唆している。さらにまた、これらの結果は、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４ＲおよびＩＬ−７Ｒシグナル変換におけるγ_cの重要な役割を支持する。１１６kＤリン酸化基質がタンパクキナーゼ（ＪＡＫキナーゼ）のヤーヌス（Ｊanus）ファミリーのメンバーであったかを判定するために、ＪＡＫファミリーメンバーの機能性カルボキシ末端キナーゼドメイン（ＪＨ１）に対して指向するポリクローナル抗体（Ｒ８０）を用いた。抗γ_cmＡbを用いた免疫沈降の後、共通のＪＡＫキナーゼ（Ｒ８０）に対する抗体を用いたブロッティングは、γ_cと一緒に共沈した１１６kＤバンドがＲ８０によって認識されたことを示した（図３のパネルＢ）。対照的に、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２およびＴyk２に対するペプチド特異的mＡbによるイムノブロットの再ブロッティングは、１１６kＤバンドがこれらのmＡbのいずれによっても認識されなかったことを示した（各々、図３のパネルＣ、ＤおよびＥ）。これらの結果は、γ_cシグナル伝達により、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２およびＴyk２とは異なる１１６kＤＪＡＫキナーゼファミリーメンバーのリン酸化を生じることを示す。 γ鎖シグナル伝達により、１１６kＤＪＡＫキナーゼのリン酸化およびアネルギーの予防が生じるので、１１６kＤＪＡＫキナーゼのリン酸化が、アネルギーの誘発を防止した種々の条件下で誘発されたが試験された。Ｔ細胞クローンを、ｔ−ＤＲ７またはｔ−ＤＲ７／Ｂ７−１のいずれかの培地を用いて２４時間培養した。培養後、Ｔ細胞を、パーコール（Ｐercoll）勾配液によりトランスフェクタントから分離し、溶解し、次いで、Ｒ８０を用いて免疫沈降させた。細胞溶解物を調製し、共通にＪＡＫ（Ｒ８０）抗体を用いて免疫沈降させ、前記と同様に、４Ｇ１０抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（１：２０００）を用いるイムノブロット分析法を行った。ｔ−ＤＲ７／Ｂ７−１培養（非アネルギー化条件）により、１１６kＤタンパクの有意なリン酸化が生じた（図４のパネルＡ）。対照的に、ｔ−ＤＲ７培養（アネルギー化条件）後は、培地対照と比較して１１６k Ｄタンパクのリン酸化の有意な増加はなかった。ＴＮＦαまたはＩＬ−１２の存在下ではなくＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＬ−７の存在下でのｔ−ＤＲ７細胞によるＴ細胞クローンの培養は、アネルギーの誘発を防止するだけではなく、１１６kdタンパクのリン酸化を生じた（図４のパネルＢ）。前記の結果は、γ_cシグナル伝達がアネルギーの防止において重要な工程を表すことを示す。末端シグナル伝達メカニズムに関して、γ_c架橋結合の機能的結果は、他の受容体鎖の架橋結合がこの機能的効果を誘発しないので、アネルギーの防止のために重要であると思われる。これらの結果は、Ｔ細胞生存および機能の調節におけるγ_cの中心的な役割を強調する。実質的には、すべてのネズミおよびヒト胸腺細胞は、γ_cを発現するので［Ｃao,Ｘ.ら（１９９３）Ｐroc.Ｎatl .Ａcad.Ｓci.９０：８４６４］、γ_cを介してシグナル伝達することができるサイトカインの過剰は、Ｔ細胞アネルギーおよび／またはクローナル検出の誘発に対して宿主を保護することは、驚くべきことではない。ＣＤ２８共同刺激は、ＩＬ−２蓄積を誘発し、ＵＬ−２受容体発現を増強するので、この経路は、ＩＬ− ２を介するアネルギーの誘発を防止する際に非常に有効であり、一方、γ_cを介するシグナル伝達の能力を有する他のサイトカインは、他の微小環境におけるアネルギーの誘発を防止するのに同等に有効である。例えば、骨髄間質細胞の産生［Ｈenney,Ｃ.Ｓ.（１９８９）Ｉmmunol Ｔoday １０：１７０］は、骨髄微小環境におけるアネルギーの誘発を防止するようなメカニズムを提供する。さらに、より最近開示された、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５を含むサイトカインもまた、 γ_cを介してシグナル伝達することができ、したがって、アネルギーの誘発を防止することができるサイトカインの能力範囲が広がる。等価当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の具体例についての多くの等価物を用いて認識するか、または、確かめることができるであろう。かかる等価物は、以下の請求の範囲によって包含される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 39/12 9455−4ＣＡ６１Ｋ 39/395 ＡＢＡＦ 39/395 ＡＢＡ 9455−4ＣＡＥＤＧＡＥＤ 9051−4Ｃ 37/02

Claims

【特許請求の範囲】１．サイトカイン受容体γ鎖に結合し、かつ、Ｔ細胞における細胞内シグナルを刺激する薬物（ただし、該薬物は、天然のインターロイキン−２からなってはいない）とＴ細胞とを接触させて、Ｔ細胞増殖を生じさせることを特徴とする、サイトカイン受容体γ鎖を発現し、Ｔ細胞において通常不応答を生じる条件下、一次活性化シグナルを受けたＴ細胞による増殖を刺激するための方法。２．薬物がインターロイキン−４またはインターロイキン−７である請求項１記載の方法。３．薬物が抗γ鎖抗体である請求項１記載の方法。４．Ｔ細胞をin vivoで薬物と接触させる請求項１記載の方法。５．さらに、Ｔ細胞において一次活性化シグナルを刺激する薬物、およびγ鎖に結合し、Ｔ細胞における細胞内シグナルを刺激する薬物の両方とＴ細胞とを接触させることからなる請求項１記載の方法。６．さらに、Ｔ細胞における共同刺激シグナルを刺激する薬物とＴ細胞とを接触させることからなる請求項５記載の方法。７．Ｔ細胞における一次活性化シグナルを刺激する薬物が抗原である請求項５記載の方法。８．抗原がウイルス、細菌および寄生虫からなる群から選択される病原である請求項７記載の方法。９．抗原が腫瘍抗原である請求項７記載の方法。１０．Ｔ細胞をin vivoで抗原と接触させる請求項７記載の方法。１１．細胞内に作用してドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合に約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼのリン酸化を刺激する薬物とＴ細胞とを接触させて、Ｔ細胞増殖を生じさせることを特徴とする、サイトカイン受容体γ鎖を発現し、Ｔ細胞において通常不応答を生じる条件下、一次活性化シグナルを受けたＴ細胞による増殖を刺激するための方法。１２．Ｔ細胞をin vivoで薬物と接触させる請求項１１記載の方法。１３．さらに、Ｔ細胞における一次活性化シグナルを刺激する薬物、および細胞内に作用してドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合に約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼのリン酸化を刺激する薬物の両方とＴ細胞とを接触させることからなる請求項１１記載の方法。１４．さらに、Ｔ細胞における共同刺激シグナルを刺激する薬物とＴ細胞とを接触させることからなる請求項１３記載の方法。１５．Ｔ細胞における一次活性化シグナルを刺激する薬物が抗原である請求項１４記載の方法。１６．抗原がウイルス、細菌および寄生虫からなる群から選択される病原である請求項１５記載の方法。１７．抗原が腫瘍抗原である請求項１５記載の方法。１８．Ｔ細胞をin vivoで抗原と接触させる請求項１５記載の方法。１９．抗原の存在下、サイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリーを阻害する薬物とＴ細胞とを接触させて、抗原に対するＴ細胞不応答を生じさせることを特徴とする、サイトカイン受容体γ鎖を発現するＴ細胞における抗原に対する不応答を誘発するための方法。２０．薬物が細胞外に作用して、サイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリーを阻害する請求項１９記載の方法。２１．薬物がサイトカイン受容体γ鎖を介するＴ細胞における細胞内シグナルを刺激することなくサイトカイン受容体γ鎖に結合する請求項２０記載の方法。２２．薬物が抗γ鎖抗体である請求項２１記載の方法。２３．薬物がサイトカイン受容体γ鎖の天然リガンドに結合して、リガンドのサイトカイン受容体γ鎖への結合を阻害する請求項２０記載の方法。２４．薬物が抗インターロイキン−２抗体、抗−インターロイキン−４抗体および抗−インターロイキン−７抗体からなる群から選択される請求項２３記載の方法。２５．薬物が細胞内に作用して、サイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリーを阻害する請求項１９記載の方法。２６．薬物が、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合に約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼとサイトカイン受容体γ鎖との会合を阻害する請求項２５記載の方法。２７．薬物が、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合に約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼのチロシンリン酸化を阻害する請求項２５記載の方法。２８．薬物がサイトカイン受容体γ鎖のチロシンリン酸化を阻害する請求項２５記載の方法。２９．薬物が、サイトカイン受容体γ鎖、およびドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合に約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼの両方のチロシンリン酸化を阻害する請求項２５記載の方法。３０．Ｔ細胞をin vivoで薬物と接触させる請求項１９記載の方法。３１．さらに、Ｔ細胞を抗原と接触させることからなる請求項１９記載の方法。３２．抗原が同種異系抗原である請求項３１記載の方法。３３．抗原が自己抗原である請求項３１記載の方法。３４．Ｔ細胞をin vitroで抗原および薬物と接触させ、さらに、対象体にＴ細胞を投与することからなる請求項３１記載の方法。３５．抗原が同種異系細胞または異種細胞の表面上にあり、対象体が同種異系細胞または異種細胞の宿主である請求項３４記載の方法。３６．対象体が、自己免疫疾患または不適切または異常な免疫応答に関連する障害に罹っている請求項３４記載の方法。３７．サイトカイン受容体γ鎖を発現するドナーＴ細胞を、宿主抗原を発現する細胞およびＴ細胞上でサイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリー阻害する薬物と接触させて、宿主抗原を発現する細胞に対するドナーＴ細胞不応答を生じさせることを特徴とする、骨髄移植宿主における移植片対宿主病の阻害方法。３８．薬物が抗−γ鎖抗体である請求項３７記載の方法。３９．薬物がサイトカイン受容体γ鎖の天然リガンドと結合して、リガンドのサイトカイン受容体γ鎖への結合を阻害する請求項３７記載の方法。４０．薬物が抗−インターロイキン−２抗体、抗−インターロイキン−４抗体および抗−インターロイキン−７抗体からなる群から選択される請求項３９記載の方法。４１．薬物が、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合に約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼとサイトカイン受容体γ鎖との会合を阻害する請求項３９記載の方法。４２．薬物がドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合に約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼのチロシンリン酸化を阻害する請求項３９記載の方法。４３．薬物がサイトカイン受容体γ鎖のチロシンリン酸化を阻害する請求項３９記載の方法。４４．薬物が、サイトカイン受容体γ鎖、およびドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって測定した場合に約１１６kＤの分子量を有するＪＡＫキナーゼの両方のチロシンリン酸化を阻害する請求項３９記載の方法。４５．ａ）サイトカイン受容体γ鎖を発現するＴ細胞を、（１）Ｔ細胞における一次活性化シグナルを刺激する第１薬物、（２）サイトカイン受容体γ鎖を介する細胞内シグナルを刺激する第２薬物、および（３）サイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリーを阻害する能力について試験されるべき第３薬物と接触させ、ｂ）Ｔ細胞増殖の存在を判断すること（ここで、Ｔ細胞増殖の阻害は、第３薬物がサイトカイン受容体γ鎖を介するＴ細胞へのシグナルのデリバリーを阻害することを示す）を特徴とする、Ｔ細胞上でサイトカイン受容体γ鎖を介するシグナルのデリバリーを阻害する薬物の同定方法。４６．第２薬物がサイトカインである請求項４５記載の方法。４７．サイトカインがインターロイキン−２、インターロイキン−４およびインターロイキン−７からなる群から選択される請求項４６記載の方法。