JPH10503475A

JPH10503475A - 血液眼関門透過性強化用パーミアビライザーペプチド

Info

Publication number: JPH10503475A
Application number: JP7527686A
Authority: JP
Inventors: エフ．グレイニー，ウィリアム
Original assignee: アルカームズ，インコーポレイテッド
Priority date: 1994-04-22
Filing date: 1995-04-20
Publication date: 1998-03-31
Also published as: US5585355A; CA2187459A1; WO1995028947A1; AU2289295A; AU703095B2; EP0758899A1

Abstract

(57)【要約】宿主の血流に存在する治療剤または診断剤に対する血液眼関門透過性は、パーミアビライザーペプチド、好ましくはブラジキニンまたはブラジキニン類似体を宿主の血流に投与することにより、強化される。本発明は、パーミアビライザーＡ−７等のパーミアビライザーペプチドを治療剤または診断剤と組み合わせて投与することにより、眼疾患の治療法または診断法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】血液眼関門透過性強化用パーミアビライザーペプチド背景技術血液眼関門（ＢＯＢ）は、眼組織および眼組織液に障壁を設けることで、特定の分子が血漿から眼に進入するのを防いでいる。眼に治療剤または診断剤を送達したいとき以外は、このＢＯＢの性質は一般に好ましい。ＢＯＢは強固に接合し合った毛細血管内皮細胞から成る。特定の疾患において、また創傷や手術やある種の薬剤が引き金となって血液眼関門の透過性が変化することがあるが、通常は適量の治療剤を眼に送達するには不十分である。全身投与（静脈内注射）、薬剤含有溶液の局所施用、薬剤徐放を目的として多孔性成分を眼に接触させる方法、または薬剤含有インプラントの挿入など複数の方法によって眼に送達させるべく薬剤が投与されているのが現状である。これらの送達法は、薬剤自体のＢＯＢ透過能力に限界があるために不適当であることが多い。また、眼に直接注射することによって薬剤を投与することもある。この手段は、不快感が大きいこと、傷害の危険性があること、および治療費がかさむという理由で不適当である。より適切な眼疾患治療および診断方法を提供するために、適量の治療剤または診断剤をＢＯＢを通過させて眼に送達する効果的かつ非侵襲的手段が求められている。発明の概要本発明は、宿主の血流中に存在する分子に対する宿主の血液眼関門透過性を強化する方法に関する。本発明の方法は、ブラジキニンまたはブラジキニン類似体から成るパーミアビライザーペプチドの有効量を宿主に投与することを特徴とする。好ましい態様においては、本明細書でＡ−７と称するブラジキニン類似体がＮ末端からＣ末端にかけてコア配列アルギニン−プロリン−ヒドロキシプロリン−グリシン−チエニルアラニン−セリン −プロリン−４−Ｍｅ−チロシン−（ＣＨ₂ＮＨ）アルギニン（配列番号１）を有する。式中、ＣＨ₂ＮＨは４−Ｍｅ−チロシンとアルギニンというアミノ酸の間の還元ペプチド結合を示す。ＢＯＢ透過性を強化する性質を有するものであればＡ−７配列の立体配座類似体も本発明に用いるパーミアビライザーとして好ましい。眼に送達しようとする分子は血流中に存在する内因性分子であってもよいし、パーミアビライザーペプチドと前後してまたは同時に併用投与される外因性分子であってもよい。本発明の長所の一つは、治療、予防、または診断上有用である併用投与分子または薬物に対する血液眼関門透過性を強化する実用的手段を提供するということである。パーミアビライザーペプチドは血管内（静脈内または動脈内）投与してもよいし、宿主の血流中に入れることができればいかなる経路でもよい。薬物を眼に直接注射するか、徐放を目的として眼に接触させた成分を利用して導入する方法とは対照的に、血管内投与は創傷度が大幅に低く、患者への不快感も少なく、麻酔の必要性も低い。最後に、本発明は、上記治療を必要とする患者の眼に治療剤または診断剤を送達する方法において、眼に送達しようとする薬剤に対する血液眼関門透過性を強化する目的で有効量のパーミアビライザーペプチドとその薬剤とを併用投与することを特徴とする方法に関する。図面の簡単な説明図１はヒトの眼の模式図である。図２は、Ａ−７の存在下（●）および非存在下（○）で網膜に送達されたショ糖の相対濃度の経時変化を示すグラフである。図３は、Ａ−７の存在下（●）および非存在下（○）で硝子体液に送達されたショ糖の相対濃度の経時変化を示すグラフである。図４は、Ａ−７の存在下（●）および非存在下（○）で房水に送達されたショ糖の相対濃度の経時変化を示すグラフである。図５は、Ａ−７の存在下（●）および非存在下（○）で水晶体に送達されたショ糖の相対濃度の経時変化を示すグラフである。図６は、Ａ−７の存在下（●）および非存在下（○）で角膜に送達されたショ糖の相対濃度の経時変化を示すグラフである。発明の詳細な説明一般に、ＢＯＢは血液房水関門（ＢＡＢ）と血液網膜関門（ＢＲＢ）に分けることができる。これらの関門は眼を房水と硝子体液という２種類の組織液を含む３つの部分（前眼房、後眼房、硝子体腔）に分けている（図１）。前眼房は虹彩の前方にあり、後眼房は硝子体から前方に延びていて、毛様体突起、水晶体、および虹彩後部から成る。硝子体腔は後部が網膜で、前部が毛様体輪で区切られており、硝子体液を含んでいる。前眼房関門の細胞は後眼房の細胞と少し異なっている。前眼房の関門は血管上皮、基底膜、および虹彩支質でできている。後眼房関門は血管上皮、基底膜、支質、および２層の毛様体上皮でできている［コールら（Cole et al.）、1984，I n Davson，H.（ed.）The Eye．Vegetative Physiology and Biochemistry．New York，Academic Press，vol．1a，p 269 ；クンハ−バズ（Cunha-Vaz）、19 79，Surv．Opthalmol．23:279］。これらの細胞はいずれも強固な結合によって接合している。硝子体腔を保護する関門は、毛様体上皮、網膜色素上皮、および網膜血管の内側にある内皮層から成る。これらの細胞も強固な結合で接合しているが、網膜血管はＢＡＢよりさらに強固な結合を有している。本明細書で使用する場合、「血液眼関門」という用語は血液房水関門または血液網膜関門のいずれか一方または両者を合わせたもの、ならびに眼コンパートメント内にある強固な結合を有するその他のすべての系をいう。「血液網膜関門」および「血液硝子体関門」という用語は、硝子体腔を保護する関門を指すのに互換的に使用することができる。本発明は、宿主の血流中に存在する分子に対する宿主の血液眼関門透過性を強化する方法に関する。対象分子に対する血液眼関門透過性を強化することにより、該分子は血流から出て眼の間質液に入りやすくなる。パーミアビライザーペプチドの存在下で対象分子に対する血液眼関門透過性が強化されると、該分子はパーミアビライザーペプチドの非存在下よりも高い相対濃度で眼に到達できるようになる。本発明の目的のためには、対象分子に対する血液眼関門透過性を有意に強化する場合にその化合物は血液眼関門パーミアビライザーとなる。この効果は受容体関与事象を介して起きる。好ましいパーミアビライザーとしては、ペプチド、ペプトイド、またはブラジキニンやブラジキニン類似体のようなペプチド様物質（ peptidomimetics）が挙げられる。ブラジキニンはアルギニン−プロリン−プロリン−グリシン−フェニルアラニン−セリン−プロリン−フェニルアラニン−アルギニン（配列番号２）の配列を有する９アミノ酸から成る天然ペプチドである［レーニンジャー（Lehninger，A.L．）、1975，Biochemistry，p ．97］。類似体とは親化合物の構造誘導体をいう。ブラジキニンの類似体は、上記ブラジキニン構造中に存在するアミノ酸の数および／または配列の誘導体であって、血液眼関門透過性に対して同様またはより大きな作用を示す誘導体である化合物であってもよい。ペプチド結合を変更または修飾したり、Ｃ−末端伸張物やＮ−末端伸張物を付加するなどしてブラジキニン分子を修飾することができる。血液眼関門透過性を強化するパーミアビライザーたるブラジキニン類似体としてとくに好ましいものはペプチドＡ−７およびＡ−７の立体配座類似体である。Ａ−７はＮ末端からＣ末端にかけて下記の直鎖状アミノ酸配列を有する。アルギニン−プロリン−ヒドロキシプロリン−グリシン−チエニルアラニン−セリン−プロリン−４−Ｍｅ−チロシン−（ＣＨ₂ＮＨ）アルギニン（配列番号１）ペプチドＡ−７は下記の点で従来の直鎖状アミノ酸配列と異なっている。すなわち、フェニルアラニンと似ているがチエニル基がフェニル基に置換しているチエニルアラニンが５番目のアミノ酸である点、４位がメチル基で置換されているチロシンが８番目のアミノ酸である点、および８番目と９番目のアミノ酸の間のペプチド結合が還元ペプチド結合等量式すなわちＣＨ₂ＮＨで置換されている点が異なっている。Ａ−７のペプチド、ペプトイド、およびペプチド様物質類似体も、水溶液状態で正しい立体配座が可能であって、対象分子に対する血液眼関門透過性を強化する作用を示すものであれば、本発明の一部をなすものである。これらの組成物を本態様の「立体配座類似体」と称する。好ましいパーミアビライザーＡ−７は下記の点でブラジキニンと異なっている。すなわち、３番目のアミノ酸の位置でヒドロキシプロリンがプロリンを置換している点、５番目のアミノ酸の位置でチエニルアラニンがフェニルアラニンを置換している点、８番目のアミノ酸の位置で４−Ｍｅ−チロシンがフェニルアラニンを置換している点、および８番目と９番目のアミノ酸の間で還元ペプチド結合が従来のペプチド結合を置換している点が異なっている。本発明のパーミアビライザーＡ−７または立体配座類似体の特徴は、パーミアビライザーＡ−７または立体配座類似体が正しい立体配座をとって対象分子に対する血液眼関門透過性を強化する作用を示させるのに重要である。ブラジキニン、ブラジキニン類似体、およびパーミアビライザーＡ−７に対して行なうことができる修飾に関してさらに多くのまたさらに詳細な説明が米国特許第５，１１２，５９６号および５，２６８，１６４号に記載されているが、これらの特許は同一の譲渡人に譲渡されており、その内容は引例により本願に含まれるものとする。本発明は、宿主の血流中に存在する分子に対する宿主の血液眼関門透過性を強化する方法に関する。宿主は眼を有する生物であればいずれでもよく、ヒトや家畜（たとえばイヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ）などの哺乳類、ならびに実験目的に供せられる動物（たとえばモルモット、ラット、マウス、ウサギ）などが挙げられる。宿主の血流中に存在する分子は宿主にとって外来性のものであってよい。たとえば、該分子は眼疾患または眼障害に対して治療効果を示す薬剤であってよい。眼疾患および眼障害の例としては、エイズ関連サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）網膜炎などのウイルス感染症、細菌感染症または眼内炎（創傷や手術によって引き起こされる細菌または真菌感染症）、類嚢胞黄斑変性、糖尿病性網膜症、炎症、または腫瘍（たとえば網膜芽細胞腫）などが挙げられる。本発明において使用することができる治療剤の種類としては、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、および化学療法剤などが挙げられる。抗生物質の例としては、セファロスポリン、ペニシリン、およびキノリンなどが挙げられる。抗ウイルス剤の例としては、ガンシクロビルおよびホスカネットなどが挙げられる。抗炎症剤の例としては、ケトロラック、ネプロキセン、またはあらゆる非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）などが挙げられる。化学療法剤の例としては、カルボプラチンおよびシスプラチンなどが挙げられる。上記治療剤としては、投与後に代謝されて活性型薬物に変化するプロドラッグ型の薬剤も含まれる。宿主の血流中に存在する分子は、造影剤や染色剤などの診断剤であってもよい。診断用造影剤の例としては、陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）走査用⁶⁸ガリウム、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）用ガドリニウム系薬剤、およびシングルフォトン射出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）走査用⁹⁹Ｔｃ−ＤＴＰＡなどの放射標識された物質などが挙げられる。染色剤の例としては、フルオレセインおよびインドシアニングリーンなどが挙げられる。本発明はさらに、治療有効量の抗ウイルス剤および有効量のパーミアビライザーペプチドを投与することによって患者の眼のサイトメガロウイルス性網膜炎を治療する方法において、パーミアビライザーペプチドがブラジキニンまたはブラジキニン類似体であって該抗ウイルス剤に対する血液眼関門透過性を強化する効果を示すものであることを特徴とする治療方法に関する。また、本発明の方法は、治療有効量の化学療法剤および有効量のパーミアビライザーペプチドを患者に投与することによって網膜芽細胞腫を治療する方法において、パーミアビライザーペプチドがブラジキニンまたはブラジキニン類似体であって該化学療法剤に対する血液眼関門透過性を強化する効果を示すものであることを特徴とする方法に関する。宿主の血流への外因性分子の投与は、皮下、血管内、好ましくは静脈内または動脈内注射によるか、筋肉内注射によるか、経口投与によるか、目薬によるか、または分子を宿主の血流に送達するその他の経路によって非経口的に行なうことができる。分子の投与形態（たとえば液剤、乳剤、錠剤、カプセル剤など）は少なくとも一部は投与経路によって決まる。宿主の血流への外因性分子の投与とパーミアビライザーペプチドの投与は同時であってもよいし、時間的に前後してもよい。たとえば、治療薬を錠剤として経口投与した後でパーミアビライザーの血管内投与を行なうことができる。これにより、薬物が消化管に吸収されて血流に取り込まれた後で、パーミアビライザーを投与して薬物に対するＢＯＢの透過性を高めることができる。一方、パーミアビライザーは、薬物の静脈内注射の前、または同時に投与してもよい。したがって、本明細書で使用する場合、「併用投与」という用語は、外因性分子に対する血液眼関門透過性を強化するとともに血液から眼の間質成分への外因性分子の通過を最大化させるという作用を同時に発揮させるのに十分な血中濃度を得ることができる時点でパーミアビライザーペプチドと外因性分子を投与することをいう。また、血流を介して眼に送達させようとする分子は、宿主にとって内因性のものであってもよい。すなわち、該分子は宿主によって天然に合成、産生された生物製剤であってよい。そのような生物製剤の例としては、グルコースなどの糖類、およびエンケファリンや甲状腺刺激ホルモン放出因子などの小型ペプチドなどが挙げられる。有効量のブラジキニンまたはブラジキニン類似体とは、対象分子に対する血液眼関門透過性を有意に強化する量をいう。すなわち、有効量のブラジキニンまたはブラジキニン類似体は、十分な量の対象分子を血液から眼のコンパートメントへ通過させて治療効果または予防効果を発揮させるか診断手順を可能ならしめるように血液眼関門透過性を強化する量である。該有効量は対象個体ごとに決定され、少なくとも一部は対象個体のサイズ、疾患の種類、治療しようとする症状の程度、目標成績、ブラジキニン類似体の種類、対象個体のブラジキニン受容体結合親和性などを考慮して決定される。したがって、当該分野における通常の技術に熟練せる者であれば、上記要素を用いて常法により有効量を決定することができる。単数または複数のパーミアビライザーペプチドを適当な薬学的に許容される担体を利用して宿主に投与することができるが、その数は当該分野に熟練せる者にとって公知である。組成物中のパーミアビライザーペプチドの実際の量と濃度は、当該分野に熟練せる者であれば容易に確認することができる。パーミアビライザーペプチドに反応して起きる血液眼関門透過性強化は、血液から眼コンパートメントへ通過する分子の量のみならず、分子のタイプとも関係する。以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。実施例１：眼コンパートメントへの¹⁴Ｃ−ショ糖取り込み量に及ぼすＡ−７の影響雌雄を問わないハートレー系モルモット成獣（２５０〜３００ｇ）を用いた。米国特許第５，２６８，１６４号に記載の方法によりパーミアビライザーＡ−７を作成した。該特許は同一譲渡人に譲渡されたものであり、引例により本願に含まれるものとする。¹⁴Ｃ−ショ糖（５６０ｍＣｉｍｍｏｌ^-1、New England Nucl ear社、Boston，MA）は、よく使われているモデル分子であり、これを用いてパーミアビライザーＡ−７による血液眼関門透過性強化を明らかにした。 o Co.，Inc．社、Fort Dodge，IA）で麻酔した後、頚部血管を外科的に露出させた。ここで用いた血管眼潅流（ＶＥＰ）法はズロコビックら（Zlokovic et al．）［1992，Exp．Eye Res.，54:471］によって記載済みの方法であり、眼を全身代謝変化から保護しつつ眼への薬剤取り込み量を調べることができる。以下、この方法について簡単にまとめる。シリコン管で体外潅流装置に接続した細径ポリエチレンカテーテルを右総頚動脈に挿入した。潅流開始直後に、対側頚動脈を結さくし、両側の頚静脈を切断して潅流液を自由に流出させた。潅流媒体は２０％の洗浄ヒツジ赤血球（ＲＢＣ）を下記組成から成る疑似血漿に懸濁させたものを用いた。１２３ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＫＣｌ、２．５ｍＭのＣａＣｌ₂・Ｈ₂Ｏ、２５ｍＭのＮａＨＣＯ₃、１．２ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄、１．８ｍＭのＭｇＣｌ₂ ・６Ｈ₂Ｏ、および５．５ｍＭのＤ−グルコースである。潅流媒体に９６％のＯ₂ と４％のＣＯ₂を吹き込み、３７．６℃に加温し、ライニンラビット（Rainin Ra bbit）蠕動ポンプ（Rainin Instruments社、Woburn，MA）を用いて水槽を介してレザバーから圧送した。管系はすべて低気体透過性シリコン製とし、金属はすべて医療用ステンレスを用いた。温度と潅流圧を連続的に記録し、酸塩基平衡状態を頻回モニターした。潅流圧を動物の血圧より少し高めに保つことで、全身循環由来のいかなる進入の可能性を排除した。パーミアビライザーＡ−７（合計用量１μｇ／ｋｇ）の添加の有無に分けて、ハーバード注射器ポンプ（Harvard Apparatus社、South Natick，MA）を用いて毎分０．２ｍｌの速度で５分間連続的に動脈輸液を行なうことで潅流媒体を眼に送達した。０．４ないし０．６μＣｉ／ｍｌ／分の速度で５分間潅流した後、１．５ないし４．５分間にわたり放射性同位体標識［¹⁴Ｃ］−ショ糖を潅流回路に導入した。いずれの実験でも、右総頚動脈を切断して動物を断頭することにより、潅流を停止させた。潅流停止後ただちに、２８Ｇ１／２マイクロファインIV針（デッドスペースなし）を用いて、できるだけ大容量（３０〜４０μｌ）の房水試料を０．５ｃｃのＵ−１００インスリン注射器で採取した。眼を摘出し、縁の後方１．５ｍｍの側方アプローチにより水晶体を迅速に切除した。水晶体を濾紙上にブロットして付着している房水をすべて除去するとともに、房水の放射能による上皮汚染を防止した。角膜を縁の前方約０．５ｍｍの位置で環状切除した。前眼房の除去後、硝子体を網膜表面から切除した。網膜を上皮層からかきとった。切除後すべての組織をブロットして隣り合う組織層および／または組織液による汚染を極力抑えた。血漿、房水、水晶体、角膜、網膜、および硝子体後部の試料を２ｍｌのベックマン組織ソルビュライザー（ＢＴＳ）−４５０および１６ｍｌのシンチラント（Beckman Ready Organic社、Fullerton，CA）で処理した。ベックマンＬＳ−７５００液体シンチレーションスペクトロメーターで放射活性を測定した。図２〜６および表Ｉと表ＩＩのデータは、Ａ−７の存在下または非存在下の４．５分間における血漿中の値に対する異なる眼組織液および眼組織中のトレーサー濃度の比率または百分率で示した［ズロコビック（Zlokovic）、同上］。（データが百分率で示されている場合、比率に１００を乗じた。）下記の式を用いて比率を計算した。Ｃ_房水またはＣ_硝子体液／Ｃ_血漿＝（ＤＰＭ／ｍｌ房水または硝子体液）／（ＤＰＭ／ｍｌ血漿）Ｃ_水晶体またはＣ_角膜またはＣ_網膜／Ｃ_血漿＝（ＤＰＭ／ｇ水晶体または角膜または網膜）／（ＤＰＭ／ｍｌ血漿）図中の影部分は対照試料における誤差範囲を示す。パーミアビライザーＡ−７の存在下および非存在下の血液から眼コンパートメントへの［¹⁴Ｃ］−ショ糖の単方向輸送速度（Ｋ_IN）を［¹⁴Ｃ］−ショ糖添加後３．０分と４．５分の間の期間について計算した。数学的処理は公知の理論輸送モデル（単数または複数）［ダブソンとマシェット（Davson and Matchett）、1 953，J．Physiol．122:11-32；ディマッティオ（DiMattio）、1989，Invest．Op hthalmol．Vis．Sci．30:2320-2330およびExp．Eye Res．49:873-885］ならびに溶質交換動態初期段階に基づくものである。すなわち、単方向コンパートメント輸送速度は既報［ズロコビック（Zlok ovic）、同上］に従って推定した。多くの時点での取り込み量測定を行ない、単方向輸送速度定数Ｋ_INおよび初期トレーサー分布容積Ｖ_Iを下記式を用いて計算した。式中、Ｔは潅流時間を示す。Ｋ_IN（血漿−房水または硝子体液）＝［Ｃ_{房水または硝子体液}／Ｃ_血漿］Ｔ＋Ｖ_I（房水または硝子体液／血漿）Ｋ_IN（血漿−水晶体、角膜または網膜）＝［Ｃ水_{晶体、角膜、または網膜}／Ｃ_血漿］Ｔ＋Ｖ_I（水晶体、角膜、または網膜／血漿］それぞれのＫ_IN値およびＶ_I値は、被験コンパートメントにおいて直線性から有意な隔たりがなかった期間の実験データ測定時点に対する最適直線フィットに対応する直線の勾配と縦軸切片として、直線回帰分析によりグラフから推定した。結果は分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって比較し、多変数比較値はボンフェローニ法［ポスナー（Posner）、1986，Fundamentals of Biostatistics, Duxbury P ress，Boston，MA］によって補正した。ｐ＜０．０５を統計的に有意とした。結果は平均±ＳＥで示した。表Ｉは、Ａ−７（１μｇ／ｋｇ）の存在下および非存在下でのＶＥＰ開始後１．５分、３．０分、および４．５分の時点での異なる眼組織液および眼組織への［¹⁴Ｃ］−ショ糖の取り込み量をまとめたものである。上記時点における各コンパートメント中の［¹⁴Ｃ］−ショ糖の量は、眼コンパートメント中に出現する血漿［¹⁴Ｃ］−ショ糖濃度の百分率で表した（ｗ／ｗ、平均プラス範囲）。３．０ないし４．５分の期間について計算した単方向輸送速度（Ｋ_IN）も表Ｉに示した。ショ糖の網膜取り込み量は、ＶＥＰ開始後１．５ないし４．５分ではビヒクル処理対照動物と比べて３〜４．５倍増加した（図２）。硝子体液へのショ糖取り込み量の増加もＶＥＰ開始後４．５分の時点で見られた。網膜の場合とは対照的に、Ａ−７は早い時点では硝子体液によるショ糖取り込み量に影響を及ぼさなかった（図３）。血液硝子体関門に対するＡ−７の作用の遅れは、取り込み量値が網膜におけるものより１桁低いことで支持されるように、おそらくは硝子体液に到達する前に網膜層を通過する初期ショ糖拡散に起因する時間的ずれ、ならびに硝子体ゲルを通過するショ糖の拡散速度が比較的遅いことによって説明できるであろう。有意な血液房水関門透過性強化がＶＥＰ開始後４．５分の時点で見られたが（図４）、水晶体（図５）および角膜（図６）中のショ糖取り込み量の増加も同時に見られた。Ａ−７の存在下および非存在下の網膜および水晶体へのショ糖進入の動態を図２と図５に示す。Ａ−７は、いずれの組織においてもショ糖取り込み量の初期直線勾配を顕著に増大させた。Ａ−７の存在下では、網膜および水晶体のショ糖Ｋ_IN値はそれぞれ６．７倍および６．５倍高かった（表Ｉ）。ＶＥＰ開始後３分以内にはショ糖の房水透過性や硝子体液透過性の初期増加はなかったが（表Ｉ）、Ａ−７存在下の房水透過性について３分後から４．５分後までの間で推定した見かけＫ_IN値は９．１３±３．６６μｌ／分／ｇであったのに対し、対照動物では１．１３±０．３４μｌ／分／ｇであった。硝子体液中の対照Ｋ_IN 値は取り込み量が極めて少なかったために測定不能であったが、ＶＥＰ開始後３分から４．５分の間の硝子体液へのショ糖取り込み量の増加に基づき、Ａ−７存在下の推定値０．８４μｌ／分／ｇが得られた。角膜では、ＶＥＰ開始後３分から４．５分の期間で推定されたＫ_IN値は対照では２．２６±０．７５μｌ／分／ｇであり、Ａ−７群では１６．２０＋３．４２μｌ／分／ｇであった。Ａ−７の存在下および非存在下の房水、硝子体液、および角膜透過性のＫ_IN値の差は有意性が高かった（ｐ≦０．０１）。実施例２：生理機能に及ぼすＡ−７の影響上記のようにして連続５分間の動脈輸液を行なうことによって、潅流媒体に溶かしたＡ−７をモルモットの眼に用量漸増加的に投与した。体重１ｋｇあたり０、１、３、および１０μｇの用量で投与を開始してから潅流を行なって最初の１分以内に、動物の体重、呼吸率、血圧（ｍｍＨｇ）、および心拍数を測定した。結果を表ＩＩに示す。本明細書で説明した研究で使用したＡ−７投与量の１μｇ／ｋｇでは、上記のいずれの測定項目にも有意変化は見られなかった。実施例３：［³Ｈ］−ガンシクロビルの取り込み量に及ぼすＡ−７の影響これらの実験に用いた方法は上記実施例１で用いたものと同様である。ここでは、Ａ−７の動脈輸液を５分間行なった後、１．５ないし４．５分間にわたり［³ Ｈ］−ガンシクロビル（２２Ｃｉｍｍｏｌ^-1、New England Nuclear社、Boston ，MA）を投与した。上記のようにして眼コンパートメントを切除し、［³Ｈ］− ガンシクロビルの取り込み量を調べた。結果を表ＩＩＩに示した。ＶＥＰ開始後１．５ないし４．５分で網膜への取り込み量は対照ビヒクルと比べて２倍に増加した。同じ期間に、水晶体へのガンシクロビル取り込み量も有意（１．５〜２倍）に増加した。測定期間内にはＡ−７はその他のコンパートメントへのガンシクロビル取り込み量を実質的に増加させなかった。０ないし３．０分の期間について計算した網膜と水晶体のＫ_IN値はＡ−７の存在下でそれぞれ２．６倍および１．３倍高かった。実施例４：Ａ−７の静脈内投与後の網膜および水晶体への³Ｈ−ガンシクロビルの取り込み量に及ぼすＡ−７の影響これらの実験の方法は、以下の変更を加えた以外は実施例１で用いたものと同じである。ここでは、総頚動脈ではなく右頚静脈に［³Ｈ］−ガンシクロビル（２２Ｃｉｍｍｏｌ^-1、Moravek社、Brea，CA）を注射した。Ａ−７を５分間静脈内投与した後、［³Ｈ］−ガンシクロビルを投与し、１．５または４．５分後に動物を屠殺した。実施例１で説明したようにして水晶体と網膜を切除した。結果を表ＩＶに示した。網膜の［³Ｈ］−ガンシクロビル取り込み量はビヒクル処理した対照動物より２倍以上に増加した（ｐ＝０．００１）。同じ期間において水晶体への取り込み量の有意な（１．８〜２倍）増加も見られた（ｐ＝０．０１５）。均等物当業者であれば、単なる日常的実験手段により、本明細書に記載された発明の具体的態様に対する多くの均等物を認識し、あるいは確認することができるであろう。そのような均等物は、下記クレームに記載されるような本発明の範疇に含まれるものである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年４月２０日【補正内容】英文明細書第２８、２９頁の補正６．血液眼関門透過性の該パーミアビライザーペプチドと該分子が、該宿主に静脈内併用投与される請求項１記載の方法。７．該分子が治療剤を含む請求項１記載の方法。８．該分子が診断用造影剤を含む請求項１記載の方法。９．眼の疾患の治療または診断に有用な、患者の眼に治療剤または診断剤を送達するための方法であって、血液眼関門のパーミアビライザーペプチドの有効量と治療剤または診断剤とを併用投与することからなり、該パーミアビライザーペプチドが、ブラジキニンまたはブラジキニン類似体であって、静脈内に投与されかつ該治療剤または診断剤に対する血液眼関門の透過性を強化するために有効なものである方法。１０．該疾患がサイトメガロウイルス網膜炎である請求項９記載の方法。１１．患者の眼のサイトメガロウイルス網膜炎を治療するための方法であって、抗ウイルス剤の治療上有効量とパーミアビライザーペプチドの有効量を該患者に併用投与することからなり、該パーミアビライザーペプチドが、ブラジキニンまたはブラジキニン類似体であって、静脈内に投与されかつ該抗ウイルス剤に対する血液眼関門の透過性を強化するために有効なものである方法。１２．患者の眼の網膜芽細胞腫を治療するための方法であって、化学療法剤の治療上有効量とパーミアビライザーペプチドの有効量を該患者に併用投与することからなり、該パーミアビライザーペプチドが、ブラジキニンまたはブラジキニン類似体であって、静脈内に投与されかつ該化学療法剤に対する血液眼関門の透過性を強化するために有効なものである方法。１３．パーミアビライザーペプチドを宿主に静脈内投与する際に、該宿主の血流に存在する分子に対する宿主の血液眼関門の透過性を強化するための薬剤製造におけるパーミアビライザーペプチドの使用であって、該パーミアビライザーペプチドがブラジキニンまたはブラジキニン類似体を含む使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．宿主の血流中に存在する分子に対する宿主の血液眼関門透過性を強化するための方法であって、該血液眼関門のパーミアビライザーペプチドの有効量を該宿主に静脈内投与することからなり、該パーミアビライザーペプチドは、ブラジキニンまたはブラジキニン類似体を含み、該パーミアビライザーペプチドは、該作用剤に対する血液眼関門透過性を強化するために有効である方法。２．宿主がヒトである請求項１記載の方法。３．ブラジキニン類似体が、ＮＨ₂−アルギニン−プロリン−ヒドロキシプロリン−グリシン−チエニルアラニン−セリン−プロリン−４−Ｍｅ−チロシン−￥（ＣＨ₂ＮＨ）アルギニン−ＣＯＯＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を有するペプチドまたはその立体配座類似体を含む請求項２記載の方法。４．ブラジキニンまたはブラジキニン類似体が血液房水関門を透過させるものである、請求項１記載の方法。５．ブラジキニンまたはブラジキニン類似体が血液網膜関門を透過させるものである、請求項１記載の方法。６．血液眼関門透過性の該パーミアビライザーペプチドと該分子が、該宿主に静脈内併用投与される請求項１記載の方法。７．該分子が治療剤を含む請求項１記載の方法。８．該分子が診断用造影剤を含む請求項１記載の方法。９．眼の疾患の治療または診断に有用な、患者の眼に治療剤または診断剤を送達するための方法であって、血液眼関門のパーミアビライザーペプチドの有効量を併用投与することからなり、該パーミアビライザーペプチドがブラジキニンまたはブラジキニン類似体であり、および治療剤または診断剤、該パーミアビライザーペプチドが、該治療剤または診断剤に対する血液眼関門の透過性を強化するために有効である方法。１０．該疾患がサイトメガロウイルス網膜炎である請求項９記載の方法。１１．患者の眼のサイトメガロウイルス網膜炎を治療するための方法であって、抗ウイルス剤の治療上有効量とパーミアビライザーペプチドの有効量を該患者に併用投与することからなり、該パーミアビライザーペプチドがブラジキニンまたはブラジキニン類似体であり、該パーミアビライザーペプチドが、該抗ウイルス剤に対する血液眼関門の透過性を強化するために有効である方法。１２．患者の眼の網膜芽細胞腫を治療するための方法であって、化学療法剤の治療上有効量とパーミアビライザーペプチドの有効量を該患者に併用投与することからなり、該パーミアビライザーペプチドがブラジキニンまたはブラジキニン類似体であり、該パーミアビライザーペプチドが、該化学療法剤に対する血液眼関門の透過性を強化するために有効である方法。１３．パーミアビライザーペプチドを宿主に静脈内投与する際に、該宿主の血流に存在する分子に対する宿主の血液眼関門の透過性を強化するための薬剤製造におけるパーミアビライザーペプチドの使用であって、該パーミアビライザーペプチドがブラジキニンまたはブラジキニン類似体を含む使用。