JPH10505592A

JPH10505592A - 微生物細胞を殺傷又は抑制するための塩基性タンパク質組成物

Info

Publication number: JPH10505592A
Application number: JP8508427A
Authority: JP
Inventors: ヨハンセン，シャルロッテ
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1994-09-01
Filing date: 1995-09-01
Publication date: 1998-06-02
Also published as: WO1996006532A1; ES2154344T3; AU3341995A; PT778733E; EP0778733B1; EP0778733A1; DE69519675T2; DE69519675D1; GR3035550T3; DK0778733T3; ATE198119T1

Abstract

(57)【要約】微生物細胞を殺傷できる塩基性タンパク質又はペプチド、例えばプロタミン又は硫酸プロタミン、それとの組合せにおける細胞壁分解酵素及び／又はオキシドリダクターゼ、例えばII型エンドグリコシダーゼ、リゾチーム、キチナーゼ、ペルオキシダーゼ酵素系（EC１．11．１．７）又はラッカーゼ酵素（EC１．10．３．２）より本質的に成る組成物は殺菌、静菌、殺真菌及び／又は静真菌特性を有し、そして洗剤及び硬質表層洗浄用組成物において、並びに硬質表層上に存在する微生物細胞を殺傷するための、洗濯品の上に存在する微生物細胞を殺傷もしくはその微生物細胞の増殖を抑制するための、ヒト又は動物の皮膚、粘膜、創傷、打ち身の上にもしくは目の中に存在する微生物細胞を殺傷するための；更には食品、飲料品、化粧品、コンタクトレンズ製品、食品成分又は酵素組成物の保存のための方法において有用である。

Description

【発明の詳細な説明】微生物細胞を殺傷又は抑制するための塩基性タンパク質組成物本発明は微生物細胞を殺傷又は微生物細胞の増殖を抑制することのできる組成物、即ち、殺菌性、静菌性、殺真菌性及び／又は静真菌性組成物；微生物細胞を殺傷又は微生物細胞の増殖を抑制できる物質を含んで成る洗浄又は洗剤組成物；並びに硬質表層の上に、皮膚の上に又は洗濯品の中に存在している微生物細胞を殺傷するための方法、並びに食品、化粧品等を保存するための方法に関する。発明の背景化学添加物の利用を減らすことにおける公共の関心の高まっている現代において、例えば食品の保存のため、消毒剤として、並びに洗剤及び洗浄組成物の抗生物質成分として利用する抗生物質の自然代替物が考慮されている。このことは、生存細菌培養物(Jeppesen& Huss 1993)、並びに酵素、例えばラクトペルオキシダーゼ(Farrag & Marth 1992)、グルコースオキシダーゼ(Jeongら、1992)及びリゾチーム（Johansenら、1994）を利用する保存についての関心を高めた。プロタミンは魚類、鳥類、哺乳類等の精子の核の DNAに結合して見い出せる高アルギニン含有量を有する塩基性タンパク質である(Rodmanら、1984；Kossel 19 28)。プロタミンはヘパリンに対する解毒薬として(Joqnes 1973)、及びインスリンの担体として皮下投与したインスリンの吸収性を長期化するために(Brange 19 87)臨床的に利用されている。安定化剤としてのプロタミンの機能特性に対しても注目が浴びられている（Phillipsら1989）。プロタミンは抗菌作用を発揮することが示されているが(Hitsch 1958)、この観点はよく研究されていない。グラム陰性菌は往々にして、その外膜の有効な浸透バリヤー機能に基づいて多種の有害剤に対して耐性である（Nakac 1985）。しかしながら、プロタミン及びほとんどのその他のカチオン系ペプチドは一定環境下では明らかにグラム陰性菌の外膜を通り抜けることができ（Vaara 1992，Vaara & Vaara 1983）、おそらくそれはグラム陰性細胞のアニオン性のリポ多糖被覆表層に対するその結合能力の結果であろう。塩基性ペプチドの抗菌作用のメカニズムはわかっておらず、しかしそれは細胞質膜の中にチャンネルを形成せしめ、それ故電子輸送を自由にし、漏出を引き起こすことが提唱されている(Christensenら、1988；Hugo 1978；Ka ganら、1990)。それらは自己溶解酵素の活性化に基づき自己溶解を誘導するとも考えられている（Bierbaum & Sahl 1991）。一般に、プロタミンの如き高塩基性ペプチドの発生は自然では比較的稀である。しかしながら、研究されているもののうちのいくつかは抗菌特性を発揮することが見い出されている：例えばニシン(Sahl 1987)、デフェンシン（Lehrerら、1 993）、セクロピン(Christensenら、1988)、Pep ５（Bierbaum & Sahl 1987）及びメリチン（Vaara 1992）。抗菌活性は通常コロニー数の減少として、細菌懸濁物の吸収の低下として、又はアガ−プレート上の阻害ゾーンとして測定される（Trevors 1986）。しかしながら、これらの方法はプロタミンの如き塩基性のペプチド又はタンパク質の抗菌作用を検定するときには適切でないことがあり、その理由は Islamら（1984）に記載の通り正に帯電したプロタミンと負に帯電した細菌細胞との凝集による。そこで、本発明の目的は、無毒であり、生物を起源とし、容易に入手でき、そして比較的安価である天然活性化合物又は物質と、任意的にそれとの組合せにおけるその他の抗微生物性化合物又は物質とを含んで成る抗菌性及び／又は抗真菌性組成物の提供にあった。発明の概要この度驚くべきことに、生物を起源とする塩基性タンパク質又はペプチド、例えばプロタミン又は硫酸プロタミンによって微生物細胞を殺傷又は微生物細胞の増殖を抑制することが可能であることが発見された。一定の細菌又は菌類に関しては、所望の抗菌作用を得るために細胞壁分解酵素又はオキシドリダクターゼとこの塩基性タンパク質とを組合せることが必要でありうる。従って、プロタミンの増殖抑制作用及び非増殖性細胞に対するこの塩基性タンパク質の潜在的致死作用を研究した。上記の方法論的欠点に基づき、インピーダンス（impedimetric）測定法を利用し、そして伝統的なプレート測定法と比較させた（Firstenberg-Eden & Eden 1984；Connollyら、1993）。そこで、これらの発見を基礎として、本発明は微生物細胞を殺傷できる塩基性タンパク質又はペプチド、それとの組合せにおける細胞壁分解酵素、又はオキシドリダクターゼを含んで成る殺菌性、静菌性、殺真菌性及び／又は静真菌性組成物を提供する。別の観点において、本発明は微生物細胞を殺傷できる塩基性タンパク質又はペプチドと界面活性剤とを含んで成る洗剤又は洗浄組成物を提供する。かかる組成物はアルカリの域のpHを有し、そしてプロタミン及び硫酸プロタミンの如きかかる塩基性タンパク質はアルカリpHにおいてその至適抗菌作用を発揮することが見い出され、それ故かかるタンパク質は洗浄目的用の組成物に組込むのに非常に適切なタンパク質である。本発明の組成物は、抗菌性成分として、かかる成分を必要とする状況、例えば食品、飲料品、化粧品、コンタクトレンズ製品、食品成分又は酵素組成物の保存のために；例えばヒト又は動物の皮膚、粘膜、創傷、打ち身、又は目に使用するための消毒剤として；並びに硬質表層洗浄のための洗浄組成物への組込みのために有用である。図面本発明を更に図面により説明する。ここで：図１は TSBの中で25℃にて増殖しているイエルシニア・エンテロコリチカ(Yer sinia enterocolitica)の増殖に対するプロタミンの作用を示す。増殖はコンダクタンスの％変化として測定している；図２は、プロタミン非存在下でのコロニー計数に対して、TSB中で25℃でのコンダクタンス▲（シェワネラ・ピュトレファシエンス(Shewanella putrefaciens )株Ａ２）又はキャパシタンス■（リステリア・モノサイトジェンス（Listeria monocytogenes）株Ｏ32）を相関させた検量曲線を示す；図３は、pHに依存させた、グラム陰性菌シュードモナス・アエルギノーザ（Ps eudomonas aeruginosa）に対する様々な濃度のプロタミンの作用を示す；図４は、細胞濃度に依存させた（接種量 log CFU／ml）、グラム陽性菌リステリア・モノサイトジェンスに対する様々な濃度のプロタミンの作用を示す；図５は、細胞濃度に依存させた（接種量 log CFU／ml）、グラム陰性菌シェワネラ・ピュトレファシエンスに対する様々な濃度のプロタミンの作用を示す；図６は、細胞濃度に依存させた、グラム陰性菌シェワネラ・ピュトレファシエンスに対する本発明の組成物（様々な濃度のプロタミン及びリゾチーム）の相乗作用を示す応答表層プロットである。発明の詳細な説明本明細書において、「殺菌性」なる語は細菌細胞を殺傷できることと解される。本明細書において、「静菌性」なる語は細菌の増殖を抑制できる、即ち細菌細胞の増殖を抑制することと解される。本明細書において、「殺真菌性」なる語は真菌細胞を殺傷できることと解される。本明細書において、「静真菌性」なる語は真菌の増殖を抑制できる、即ち真菌細胞の増殖を抑制することと解される。「増殖性細胞」なる語は、適当な栄養素にアクセスしており、それ故再生／増殖可能な細胞と解される。「非増殖性細胞」なる語は、生存してるが休止中の細胞、即ち、増殖しておらず、分裂しておらず、増殖しておらず、且つ活発でない状態にあり、代謝過程が最低限となっている細胞をいう。「細胞壁分解酵素」なる語は、細胞壁の成分、例えばペプチドグリカン、例えばムレイン及びシュードムレイン；キチン；並びにテイコ酸を分解する酵素と解される。本発明の組成物において有用な細胞壁分解酵素はII型エンドグリコシダーゼ、例えば本明細書に引用して組入れる EP-A2-0,425,018号に開示されている II型エンドグリコシダーゼ、リゾチーム及びキチナーゼである。「哺乳類の細胞において存在するアミノ酸」なる語は、哺乳類の一部であるタンパク質を構成する20種のアミノ酸、即ち、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンをいう。好ましくは、本発明の組成物の塩基性ペプチド又はタンパク質は１又は複数の上記の20種のアミノ酸より成る。即ち、この塩基性ペプチド又はタンパク質は、例えばニシン及びPep ５の如き、細菌からは回収できないことがある。「オキシドリダクターゼ」なる語は酵素命名法(Enzyme Nomenclature)（1992 ）に従ってEC１に分類される酵素、即ち、EC１．１（ドナーのCH−OH基に作用する）、EC１．２（ドナーのアルデヒド又はオキソ基に作用する）、EC１．３（ドナーのCH−CH基に作用する）、EC１．４（ドナーのCH−NH₂基に作用する）、EC １．５（ドナーのCH−NH基に作用する）、EC１．６（NADH又は NADPHに作用する）、EC１．７（ドナーとしてのその他の窒素含有化合物に作用する）、EC１．８（ドナーの硫黄基に作用する）、EC１．９（ドナーのヘム基に作用する）、EC１．10（ドナーとしてのジフェノール及び近縁物質に作用する）、EC１．11（アクセプターとしてのペルオキシドに作用する）、EC１．12（ドナーとしての水素に作用する）、EC１．13(分子状酸素の組込みをもって単独ドナーに作用する(オキシゲナーゼ))、EC１．14（分子状酸素の組込みをもって対合ドナーに作用する）、EC１．15（アクセプターとしてのスーパーオキサイド基に作用する）、EC１． 16（金属イオンを酸化する）、EC１．17（−CH₂−基に作用する）、EC１．18（ドナーとしての還元フェレドキシンに作用する）、EC１．19（ドナーとして還元フラボドキシンに作用する）、及びEC１．97（その他のオキシドリダクターゼ）に分類される任意の酵素を意味する。「ペルオキシダーゼ酵素系」なる語は、ペルオキシダーゼ（EC１．11．１）と、過酸化水素の起源、即ち、過酸化水素又は過酸化水素の in situ産生のための過酸化水素前駆体、例えば過炭酸塩もしくは過硼酸塩、又は過酸化水素生成酵素系、例えばオキシドリダクターゼとオキシダーゼ用の基質、又はアミノ酸オキシダーゼと適当なアミノ酸、又はペルオキシカルボン酸もしくはその塩、との組合せと解される。有用なペルオキシダーゼの例はラクトペルオキシダーゼ、西洋のサビペルオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ生産株ミキソコッカス・ビレセンス（Myxococcus v irescens）DSM 8593、ミキソコッカス・フルバス（M．fulvus）DSM 8969、又はミキソコッカス・キサンタス（M．xanthus）DSN 8970の培養物、ペルオキシダーゼ生産株コラロコッカス(Corallococcus)属、好ましくはコラロコッカス・コラロイデス(C．coralloides)DSM 8967 もしくはコラロコッカス・エキシギュウス（C．exiquus）DSM 8969の培養物から生成可能なペルオキシダーゼである。ラクトペルオキシダーゼの場合、チオシアナートを基質として利用してよい。ラッカーゼは酵素による基質の酸化を触媒する酵素である。これらは微生物、植物及び動物起源に由来することで知られる。より詳しくは、ラッカーゼ（EC１．10．３．２）は電子アクセプターとして分子状酸素に機能するオキシドリダクターゼである。大気に由来する分子状酸素は通常十分な量で存在しており、従って処理媒質に追加の酸素を加えることは通常必要とされない。本発明の組成物において有用なラッカーゼ酵素の例はコプリヌス・シネレウス(Coprinus cinereus )株 IFO 30116に由来するラッカーゼ、又はコプリヌス・シネレウスに由来するラッカーゼのそれと同一の免疫化学特性を有するラッカーゼ、又はWO91／05839 に開示のマイセリオフトラ・サーモフィル（Myceliophthora thermophile）の株より獲得できるラッカーゼである。「微生物細胞」なる語は細菌又は菌類細胞を意味する。「微生物を起源とする」なる語は、当該物質又は化合物が生物学的材料、例えばヒト、動物又は植物から回収又は再生されるものであることを意味する。同様に、「微生物を起源とする」なる語は、当該物質もしくは化合物が微生物材料、例えば細菌、菌類、酵母から回収もしくは再生されるものであること、又は親もしくは天然物質もしくは化合物が微生物により産生可能であることを意味する。「生物学的材料」なる語は、自然から得られうる生存材料又は自然から得られうる以前生存していた材料を意味する。「合成ポリペプチド」なる語は合成アセンブリー、即ち、ペプチドモノマーより成る鎖を意味する。本組成物において有用なポリペプチドは塩基性ポリペプチド、即ちポリリジン及びポリアルギニン、並びにそのコポリマーである。ポリペプチドは約 100個未満のアミノ酸の鎖長を有することが好ましいが、約1000kD未満のポリペプチドが有用と考えられる。好ましくは、本発明の組成物において用いられるポリペプチドはほぼ同一の鎖長又は分子量をもつものとするが、しかし様々な鎖長又は分子量をもつポリペプチドの混合物も有用である。本発明の組成物の塩基性タンパク質は組換タンパク質であってよいと考えられる。プロタミンの場合、このプロタミンは組換プロタミン、即ち、タンパク質をコードする DNA配列をクローニングし、次いでこの DNA配列で細胞を形質転換させ、そして宿主、即ち適当な菌類又は細菌宿主の中で発現させることにより作られたものと考えられうる。組換プロタミン／硫酸プロタミンは当業者に慣用の標準技術に従ってクローニング及び発現できうる。本発明の組成物において利用する好適な塩基性タンパク質はプロタミン、硫酸プロタミン、デフェンシン、マガイニン、メリチン、セクロピン及びプロテグリンである；より好ましいのはプロタミン及び硫酸プロタミンである。従来、サケ由来のプロタミンはグラム陽性菌の増殖に対して殺菌作用を有することがわかっていた（1000μｇ／ml）。Islamら（1984）はそれが増殖を阻害することを見い出したが、その作用が殺菌性なのか静菌性なのかは決定していない。その他の研究はプロタミンがグラム陰性菌に対して有効でないと報告している (Islamら1984；Vanagimotoら1992)。この所見に反して、プロタミンはグラム陽性菌、グラム陰性菌及び菌類に対して有効であることがこの度見い出された。このことは硫酸プロタミンに適用される。多くの塩基性ペプチドの第一の抗菌作用は、細胞質膜に侵入し、電子輸送を破綻し、そして細胞内化合物の漏出を誘導するその能力にあると提唱されている。この理論に拘束されるわけではないが、このメカニズムは以下の実施例に記載してある実験において試験した株の一部に対するプロタミンの作用をある程度説明しうる。別の観点において、本発明は微生物細胞を殺傷できる塩基性タンパク質又はペプチドと界面活性剤とを含んで成る洗浄又は洗剤組成物に関する。この洗剤又は洗浄組成物は更に洗剤又は洗浄組成物に通常利用されているその他の酵素を含んで成りうる。好ましくは、本発明の洗剤又は洗浄組成物はプロテアーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ及びリパーゼより成る群から選ばれる少なくとも一種の酵素を含んで成る。この洗剤又は洗浄組成物の界面活性剤は好ましくは洗浄界面活性剤、より好ましくはアニオン、非イオン、両性、双イオン性及びカチオン界面活性剤より成る群から選ばれる清浄界面活性剤である。好適な態様において、この洗剤又は洗浄組成物は塩基性タンパク質としてプロタミン又は硫酸プロタミンを、細胞で殺傷又は細胞の増殖を抑制するのに有効な量、好ましくは１mlの洗浄液又は洗濯液当り１〜4000μｇ、より好ましくは１ml の洗浄液又は洗濯液当り１〜2000μｇ、特に１mlの洗浄液又は洗濯液当り５〜10 00μｇに相当する量で含んで成る。更なる観点において、本発明は様々な目的のための本発明の組成物の利用に関する。即ち、本発明は硬質表層上に存在する微生物細胞を殺傷するための方法に関連し、この方法は当該表層を、本発明の洗浄組成物、好ましくはプロタミン又は硫酸プロタミンを細胞を殺傷するのに有効な量で含んで成る組成物と接触させることを含んで成る。また、別の観点において、本発明は洗濯品の上に存在する微生物細胞を殺傷する又は微生物細胞の増殖を抑制する方法に関連し、この方法は当該洗濯品を本発明の洗剤組成物、好ましくはプロタミン又は硫酸プロタミンを細胞を殺傷するのに又は細胞の増殖を抑制するのに有効な量で含んで成る組成物と接触させることを含んで成る。更なる別の観点において、本発明は食品、飲料品、化粧品、例えばローション、クリーム、ゲル、石けん、シャンプー、コンディショナー、制汗剤；コンタクトレンズ製品、食品成分又は酵素組成物の保存のための方法に関連し、この方法は保存処理していない食品、飲料品、化粧品、コンタクトレンズ、食品成分又は酵素組成物の中に、微生物細胞の増殖を阻害するのに有効な量の塩基性タンパク質もしくは塩基性ペプチド又は本発明の組成物を、好ましくはプロタミンもしくは硫酸プロタミン又はプロタミンもしくは硫酸プロタミンを含んで成る組成物を組込むことを含んで成る。更なる別の観点において、本発明はヒト又は動物の皮膚、粘膜、創傷、打ち身の上に、又は目の中に存在している微生物細胞を殺傷する方法に関連し、この方法は殺傷すべき細胞をその細胞を殺傷するのに有効な量の塩基性タンパク質又はペプチド、好ましくはプロタミン又は硫酸プロタミンと接触させることを含んで成る。即ち、本発明の組成物及び／又はこれらの組成物の中に利用される塩基性ペプチド又はタンパク質、特にプロタミン及び硫酸プロタミンは消毒薬として、例えばざ瘡、目の中の感染症、皮膚感染症の処置において、制汗剤において；コンタクトレンズの洗浄及び消毒、等において有用でありうる。本発明を以下の非限定的な実施例により更に説明する。実施例１プロタミンの殺菌性及び静菌性作用材料及び方法細菌、接種物、培地及び試薬本研究において利用する細菌を以下の表１に列挙する。ストック培養物は 0.5 ％のグルコース、２％の脱脂粉乳、４％のグリセロールを有するトリプトンダイズ培養液(TSB)(Oxoid CM129)の中に維持し、そして−80℃で保存した。ストック培養物由来の細胞を TSBプレート(1.2％の寒天を有するTSB)の上に引き、そして25℃で48ｈインキュベートする。一の細菌コロニーを５mlの TSBの中に接種し、そして25℃で24〜36ｈ増殖させる。この培養物を接種物として使用する。 1.2 ％の寒天を有する TSBをプレート計測のために用い、この計測は表層接種及び25℃でのプレートのインキュベーションにより行った。無菌ペプトン食塩水 (0.1％のペプトン、0.85％のNaCl)を用いて10倍希釈品を調製した。サケ由来のプロタミン(Ｐ−40005)をSigma Chemical Company（St．Lonis，US A）より入手し、蒸留水の中に溶かし、フィルター除菌し(0.2μｍ)、そしてその調製の直後使用した。株は以下より入手した (a) Fish Pathology Laboratory，Royal Veterinary and Agricultural Unive rsity，Denmark。 (b) Dept．for Veterinary Microbiology and Hygiene，Royal Veterinary an d Agricultural University，Denmark。 (c) Environmental and Food Laboratory，Skovlunde，Denmark。 (d) Department of Biotechnology，Technical University of Denmark。 (e) Campden Food and Drink Association，Chipping Campden，United Kingd om。 (f) Department of Clinical Microbiology Statens Seruminstitut，Denmark 。 (h) Gramら、1990。 (m) Ben Embarek 及びHuss，1993。 (n) Chung，Steen及びHansen，1994。インピーダンス測定所定容量(1.0ml)の TSB培地を Bactometer(商標)ウェルに加えた。プロタミン溶液(0.1ml)をこのウェルに移し入れ、これをシールし、Bactometer B123-2(bio Merieux UK Ltd．UK)に接続し、そして培地の電気コンダクタンスの有意に検出可能な上昇が記録されるまで25℃でインキュベートし、そして検出時間（DT）を記録した（最大 100ｈ）。検出は通常細胞濃度が10⁶〜10⁷cfu／mlに達したときに行う。グラム陽性株についてはキャパシタンスシグナルをモニターし、一方グラム陰性株についてはコンダクタンスの変化を利用した。増殖性細胞に対するプロタミンの作用増殖性細胞に対するプロタミンの抗菌活性をBactometerモジュールで測定した。ウェル（１mlの TSB及び 0.1mlのプロタミン溶液を含む）に10^-4希釈率の接種培養物 0.1mlを接種し、ウェルの最終細胞濃度を約10³cfu／mlとした。プロタミンの濃度は調べた株の感度に依存して１から4000μｇ／mlに変えた。最小阻害濃度(MIC)はDTの消失をもたらすプロタミンの最低濃度として決定した。 DTが測定されないとき、細胞に対する致死／抑制作用は全ウェル容量をプレート培養することにより試験した。非増殖性細胞に対するプロタミンの作用 10^-3に希釈した１mlの接種物を 250mlの TSBに接種し（約10³cfu／ml）、そして25℃で24ｈインキュベートした。細胞を遠心により回収し（2000×ｇで10分）、0.067Ｍの無菌リン酸ナトリウムバッファーpH7.0(Weisner 1984)で２回洗い、そしてこのバッファーの中に再懸濁させた。細菌懸濁物の 450nmでの吸収(OD450 )をPerkin Elmer Lamda２高度計（Uber lingen，Germany）で測定して 1.0に合わせた（約10⁸cfu／ml）。この細胞懸濁物を無菌リン酸バッファーで10⁵及び10³ cfu／mlの濃度に希釈した。プロタミンを０，50，100 及び500 μｇ／ml濃度で細胞懸濁物（10³，10⁵及び10⁸cfu／ml）に加え、そしてその懸濁物を25℃で24ｈインキュベートした。検量曲線一連の10倍希釈系列物をプロタミンの加えていない10⁸cfu／mlの懸濁物から調製した。10倍希釈列のcfu／mlを TSB中のキャパシタンス又はコンダクタンスと相関させた検量曲線を最低８希釈段階を利用して各株について構築した。プロタミン処理懸濁物 0.1mlをBactometerウェル中の TSBに接種し、そしてDT 測定した。このDTを上記の検量曲線を利用してコロニー計測数に変換させた。即ち、コロニー計測はプロタミン処理懸濁物に対して直接は行わず、その理由はプロタミンは細菌細胞の著しい凝集を引き起こすからである。 DTを測定しないとき、全ウェル内容物を寒天プレートに分注し、プロタミンが殺菌又は静菌作用を有するか否かを評価した。結果 TSB 中で増殖する細胞のキャピタンス又はコンダクタンスDTから決定した MIC 値を表２に示す。グラム陽性株はグラム陰性株よりもプロタミンに対して感受性であった。グラム陽性株について決定された MIC値は20から1000μｇ／mlに変動し、そしてグラム陰性株については 500μｇ／mlから4000μｇ／ml以上に至るまで変動した。ブロコトリックス・サーモスファクタが最も感受性の株であり、そして20μｇ／ ml TSBのプロタミン濃度は、Bactometerでの 100ｈのインキュベーションの後のウェルの内容物をプレート培養して測定することにより、接種物全ての殺傷を引き起こした（10³cfu／ml）。1000μｇ／mlのプロタミン濃度はリステリア・モノサイトジェンス及びスタフィロコッカス・アウレス（10³cfu／ml）の２種の株に対して 100％の致死作用をもたらした。Ｓ．アウレスに対するプロタミンの MIC は 500μｇ／mlであったが、この濃度は致死作用はもたなかった。アエロモナス・ソルビア及びイエルシニア・エンテロコリチカについてのDTはプロタミン濃度の上昇とともに上昇し、遅退期の延長を示唆する。しかしながら、この培養物は完全には抑制されず、そして MICは決定しなかった。Ａ．ソルビアの10³cfu／mlの懸濁物についてのDTは4000μｇ／mlでインキュベートしたときは33ｈであり、それに対しプロタミンを加えないと12ｈであった。Ｙ．エンテロコリチカについては、10³cfu／mlの検出時間は4000μｇ／mlのプロタミンを加えると21ｈから60ｈに延長した（図１参照）。アエロモナス・サルモンシデ及びシュードモナス・フルオレセンスは4000及び3000μｇ／ml TSBの濃度のプロタミンそれぞれにより阻害された。即ち、100時間のインキュベーションの後にコンダクタンスの変化は認められなかったが、生存細胞がウェルから単離された。シェワネラ・ピュトレファシエンス（Ａ２），（Ａ11）及び（Ａ22）、並びにビブリオ・アンギラルムは1000μｇ／ml TSBの濃度のプロタミンにより抑制され、そしてビブリオ・パラヘモリチカス及びＳ．ピュトレファシエンス（Ａ６）は 500μｇ／ml TSBにより抑制された。Ｓ．ピュトレファシエンスがプロタミンにより殺傷された唯一のグラム陰性菌であり、即ち2000μｇ／ mlのプロタミンは試験した４種の株全ての接種物（10³cfu／ml）を 100％殺傷した。非増殖性細胞に対するプロタミンの殺菌作用をＳ．ピュトレファシエンスの４種の株及びＬ．モノサイトジェンスの２種の株について試験した。プロタミン処理後、検出時間を測定し、そして特定の株について作表した検量曲線（図２）を利用して細胞計測数へと変換した。Ｓ．ピュトレファシエンスの感度は株間で変動した。以下の表３参照のこと（各株についてコード及び備考については表１も参照のこと）。株Ａ２及びＡ11は感度において似ており、そしてＡ６及びＡ22よりも耐性であった。即ち、100μｇのプロタミン／mlはＳ．ピュトレファシエンス株Ａ６及びＡ22を低細胞濃度で懸濁したときに殺傷した（10⁵及び10³cfu／ml ）。同じレベルはＳ．ピュトレファシエンス株Ａ２及びA11に対して 100％致死的でなかったが、しかし細胞数は90〜99.9％に低下した。当初の細胞数は吸収測定により概算した。 100 及び 500μｇ／mlでのプロタミンは非増殖性Ｌ．モノサイトジェンス細胞に対しては作用せず、そして1000μｇ／mlにプロタミン濃度を上げることは非増殖性Ｌ．モノサイトジェンスに対するプロタミンの致死作用を何ら引き起こさなかった。これらの結果はサルミン（サイのプロタミン）が 100〜4000μｇ／mlの濃度においていく種かのグラム陰性菌の遅退期を有意に延長することを示した。プロタミンは、バッファーの中に懸濁した細胞に比べ、活発に増殖するＬ．モノサイトジェンス細胞に対してより有効であった。シェワネラ・ピュトリファシエンスに対するプロタミンの殺菌作用は増殖性及び非増殖性細胞の双方に対して認められた。2000μｇ／mlのプロタミン濃度が増殖性Ｓ．ピュトレファシエンス（10³cfu ／ml）を殺傷するのに必要とされ、一方非増殖性細胞はわずか50μｇ／mlで殺傷された。細胞濃度を高めると、プロタミンの殺菌作用は低下し、おそらくは高い細胞／プロタミン比の結果であろう。この研究において利用したインピーダンス法は、細胞凝集を引き起こすカチオンタンパク質の抗菌活性の測定にとって有用であることが証明された。未処理細胞の検出時間と cfuとの間に優れた相関関係があった。図２参照。プロタミン処理細胞と cfuとの相関は未処理細胞についての相関（データーは示さず）と統計学的に類似していたが、プロタミン処理細胞のプレート培養は細胞計測に対する高度の変動を引き起こした。プロタミンは試験した株全ての増殖を抑制し、それはほとんどの耐性細胞についての遅退期の延長又は試験した株のいくつか、特にグラム陽性菌に対する致死的な作用として決定できた。プロタミンが天然であり、且つ無毒であることは、それを例えば腐敗菌及び食品由来病原体の制御にとっての有大な期待間をもたらせうる抗菌性タンパク質にする。実施例２塩基性タンパク質と酵素との最小阻害濃度の対比様々な物質の最小阻害濃度(MIC)を実施例１に記載の通りにして決定した。以下の物質を決定した：プロタミン（Ａ）、硫酸プロタミン（Ｂ）、ペルオキシダーゼ酵素系(即ち、ラクトペルオキシダーゼ／グルコースオキシダーゼ(Ｃ)) 、スブチリシンＡ（Ｄ）、約６kDの平均分子量を有するポリアルギニン（Ｅ）及びリゾチーム(Ｆ)(150000単位／mg；Johansen Cら、1994)。その結果を以下の表４において示す。プロタミン及び硫酸プロタミンは試験した株全てを抑制するのに非常に有効な物質であり、一方ポリアルギニンはシュードモナス種を除く全ての株を抑制するのに有効である。リステリア・モノサイトジェンスに対するリゾチームの作用を除き、試験したどの酵素も何ら作用を示さなかった。実施例３プロタミンの抗菌作用に対するpH及び細胞濃度の影響プロタミンの抗菌作用に対するpHの影響を実施例１記載の材料及び方法を利用して試験した。その結果を図３に示し、そしてプロタミンの抗菌作用が有意にpHに依存することを明確に実証する。低いpHでは、プロタミン（１mg／ml）はグラム陰性菌シュードモナス・アエルギノーザに対する作用をもたないが、高いpHでは、プロタミン（１mg／ml）は検出時間を32ｈから71ｈに延長した。pHとプロタミンとの相互関係は試験した株全てについて認められた。更に、プロタミンの殺菌作用に対する細胞濃度の影響を実施例１記載の材料及び方法を利用して試験した。即ち、細胞濃度をプロタミン濃度との関係をインピーダンス検定により測定した。その結果を図４及び図５に示し、そして細胞濃度とプロタミン濃度との間の有意な相乗作用が認められることを明確に実証した。即ち、低細胞濃度では、プロタミン（１mg／ml）はグラム陰性菌シェワネラ・ピュトレファシエンス（４株）に用いて検出時間を12時間から 100時間以上に延長し、一方高細胞濃度では６時間から18時間にまで延長した。グラム陽性菌リステリア・モノサイトジェンス（２株）についての検出時間は、低細胞濃度ではプロタミン（１mg／ml）で処理したときに18時間から55時間にまで延長し、高細胞濃度では同じプロタミン濃度は４時間から15時間にまでしか延長しなかった。実施例４塩基性タンパク質、細胞壁分解酵素及びペルオキシダーゼ酵素系間での相乗抗菌作用実施例１記載の通りに実証したインピーダンス測定はpH及びNaCl濃度に依存するプロタミン、ポリアルギニン又はポリリジンとしての塩基性ペプチド、及びリゾチーム、及び／又はグルコースオキシダーゼ、及び／又はラクトペルオキシダーゼ酵素間での相乗作用を示す。増殖抑制実験を行った。ここで相乗及び累積作用は、それ自体では活性の全くない低濃度で化合物を混合し、そして要因計画(factoral design)を利用することにより決定した。この作用は増殖抑制として、又は接種物の完全な殺傷を伴う 100％の殺菌作用として測定した。プロタミン(250μｇ／ml)又はポリリジン(500μｇ／ml)とラクトペルオキシダーゼ（２Ｕ／ml）及びグルコースオキシダーゼ（２Ｕ／ml）との組合せはシュードモナス・フルオレセンスに対して 100％の致死作用をもち、一方同株はこれらの３種類の化合物いづれか単独で上記の濃度において処理されたときは抑制されなかった。相乗作用はプロタミン(250μｇ／ml)とポリリジン(500μｇ／ml)とリゾチーム (50000Ｕ／ml)とラクトペルオキシダーゼ（２Ｕ／ml）とグルコースオキシダーゼ（１Ｕ／ml）とを組合せたとき、又はリゾチーム（50,000Ｕ／ml）とポリリジン(500μｇ／ml)とラクトペルオキシダーゼ（２Ｕ／ml）とグルコースオキシダーゼ（１Ｕ／ml）とも組合せたときにシュードモナス・フルオレセンスに対して観察された。 25℃及び pH7.2において TSBの中でシェワネラ・ピュトレファシエンスの増殖抑制として抗菌作用を測定する実験は、プロタミンとリゾチームとの相乗作用を示した。その結果を応答表層プロットとして図６に示す。リゾチーム単独及び 5 00μｇ／ml末端の濃度のプロタミンはグラム陰性菌シェワネラ・ピュトレファシエンスに対して何ら作用をもたなく、一方その組合せは 300μｇ／mlを超えるプロタミン濃度及び10⁴〜10⁶Ｕ／mlのリゾチーム濃度（リゾチーム活性 150,000Ｕ／mg）で 100％の殺菌活性を引き起こした。実施例５静真菌及び殺真菌活性本実験は以下のBactometer基質を利用して実施例１に記載の通りに実施した： 0.75ｇの酵母抽出物(Difco)、3.0ｇのＤ（＋）グルコース、１ｇのKH₂PO₄、0.8 ｇのイソゲルアガロースIEF（Pharmacia）及び 100mlの蒸留水。プロタミンを試験菌類の胞子懸濁物（約10³〜10⁴cfu／ml）による接種の直前に基質に加えた。最小阻害濃度は 100ｈの測定中にDTを示さない最低濃度のプロタミンとして決定した（以下の表５参照のこと）。DTが決定されないとき、殺真菌活性は全ウェル内容物の希釈物をプレート培養することにより評価した。プロタミンの静真菌及び殺真菌作用は細菌に対する作用と同様に高いpH及び低い接種量で至適であった。pHの上昇は MIC値の有意な低下をもたらした。静真菌作用は殺真菌作用を決定したときに用いたものよりも２〜５の分の１のプロタミン濃度で得られた。表５に示す最も耐性な株は低pHで 100ｈにわたりプロタミンにより抑制されず、それ故 100ｈ抑制は pHを表に示す値に上昇させるまでは得られなかった。実施例６小スケール洗濯の際の細菌の生存及び転写材料： Ariel Color(DF−9412330)。見本(白色綿、DF−9415585)、トリプトンダイズ培養液(TSB)で滅菌。滅菌水（12°dH）。株：スタフィロコッカス・アウレウス（皮膚単離物）シュードモナス・アエルギノーザ（皮膚単離物）方法：接種物：Ｓ．アウレウス及びＰ．アエルギノーザをトリプトンダイズ培養液(TSB)の中で25℃で30時間増殖させた。各株につき、６枚の無菌見本に約10⁶cfu／見本で接種を施し、そして30分間乾した。最小スケール洗濯： 0.56ｇのAriel Color を洗浄ビーカー毎に80mlの滅菌水（12°dH，35℃）に溶かし、７ｇ／ｌの最終濃度にした。水に溶かし、そしてフィルター除菌しておいたプロタミンをこの洗浄ビーカーの半分に至るまで加え、500μｇ／mlの最終濃度にした。 70秒後、１枚の接種で施した見本及び２枚の無菌見本を各洗浄ビーカーに移し入れ、そして35℃で15分洗濯した。１個のビーカーの中で、３枚の無菌見本をコントロールとして洗濯した。各洗濯ビーカーからの 0.1mlの洗剤溶液を TSBを含んでいるMalthus(イン−ダイレクト・セル)に移し、それにインキュベートした。見本を滅菌水で10分（撹拌しながら）すすいだ。各ビーカーからの 0.1mlのすすぎ水をMalthus(イン−ダイレクト・セル)の中でインキュベートした。全ての見本を無菌エアーで10分間若干乾燥した後、各見本をイン−ダイレクト Malthusセルに移し入れた。材料及び装置は洗剤を除き全て汚染を避けるために使用前に滅菌しておいた。イン−ダイレクトMalthus イン−ダイレクトMalthus 測定を生存細部数の概算に利用した。３mlの TSBをイン−ダイレクトMalthus セルの外部チャンバーに移し、そして 0.5mlの無菌KOH（0.1Ｍ）を内部チャンバーに移し入れた。細胞が外部チャンバーの中で増殖する際、それらは内部チャンバーの中の KOHに溶けるであろうCO₂ （g）を生成し、それ故 KOHのコンダクタンスを変化せしめる。コンダクタンス変化が Malthusにより測定可能となったとき、検出時間（DT）を記録する。DTを、cfu／mlをDTに相関させる検量曲線の利用（図１及び２参照）により、コロニー計測数に変換させた。 10⁸cfu／ml細胞懸濁物から一連の10倍希釈系列品を調製した。各希釈段階のコンダクタンDTを TSBの中で決定し、そして10倍希釈数系列品のcfu／mlを TSB中でのDTに相関させる検量曲線を各株につき構築した（図１及び２参照）。結果：小スケール洗濯の際に生存している細胞、洗浄溶液中の細胞、汚染見本に付着した細胞、すすぎ水に又は無菌見本に移った細胞の数をイン−ダイレクトMalthus により決定した（表６）。比較的多数の細胞が見本が洗い落とされ、そして洗浄水の中に見い出されたが、しかし約10³cfuが小スケール洗濯及び10分間のすすぎを経た後でも見本に付着し続けており、そして洗濯中、細胞は汚染見本から無菌見本に移ってしまった。Ｓ．アウレウス細胞はプロタミンに対して非常に感受性であり、これは高いpHでのプロタミンの抗菌活性の上昇により説明されうる。大量のＰ．アエルギノーザが洗剤溶液の中で測定され、そしてプロタミンは洗剤溶液中の細胞に対して活性であることが見い出されたが、見本に付着したＰ．アエルギノーザはプロタミンによって抑制又は殺傷されず、そしてＰ．アエルギノーザの接種の施された洗浄液中の無菌見本は全て洗濯中に汚染された。すすぎ水はほとんど無菌であり、それ故細胞は繊維にしっかりと付着しているようである。これらの結果から、Ariel Color はＳ．アウレウス及びＰ．アエルギノーザ（病原性皮膚単離物）に対して有意な殺菌作用をもたないことがわかるであろう。多数の細胞が見本から洗い落とされ、そして洗剤溶液の中に見い出され、そしてプロタミンを加えないと、接種を施して見本からの細胞は洗浄ビーカー中の無菌見本を汚染した。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年９月３０日【補正内容】請求の範囲１．オキシドリダクターゼと組合さった、微生物細胞を殺傷できる塩基性タンパク質又はペプチドを本質的に含んで成る又はそれより本質的に成る殺菌性、静菌性、殺真菌性及び／又は静真菌性組成物。２．好ましくはII型エンドグリコシダーゼ、リゾチーム及びキチナーゼより成る群から選ばれる細胞壁分解酵素を更に含んで成る、請求項１記載の組成物。３．前記塩基性タンパク質が哺乳類細胞において天然であるアミノ酸より成るアミノ酸配列を有する、請求項１又は２記載の組成物。４．前記塩基性タンパク質が生物又は微生物を起源とする請求項１〜３のいづれか１項記載の組成物。５．前記塩基性タンパク質が生物学的材料から回収されるものである、請求項１〜４のいづれか１項記載の組成物。６．前記塩基性タンパク質が組換タンパク質である、請求項１〜４のいづれか１項記載の組成物。７．前記塩基性タンパク質がプロタミン、硫酸プロタミン、デフェンシン、マガイニン、メリチン、セクロビン及びプロテグリンより成る群から選ばれる、請求項１〜６のいづれか１項記載の組成物。８．前記塩基性ペプチドがポリリジン及びポリアルギニン並びにそのコポリマーより成る群から選ばれる合成ポリペプチドである、請求項１又は３記載の組成物。９．前記オキシドリダクターゼがオキシダーゼ（EC１．10．３）及びペルオキシダーゼ（EC１．11．１）より成る群から選ばれる、好ましくはペルオキシダーゼ酵素系（EC１．11．１．７）及びウッカーゼ酵素（ EC１．10．３．２）から選ばれる、請求項１〜８のいづれか１項記載の組成物。 10．前記ペルオキシダーゼ酵素系が、少なくとも一種のペルオキシダーゼ酵素及び過酸化水素生成酵素系、例えばオキシダーゼとオキシダーゼ用の基質、又はアミノ酸オキシダーゼと適当なアミノ酸又はペルオキシカルボン酸もしくはその塩を含んで成る、請求項１〜９のいづれか１項記載の組成物。 11．微生物細胞を殺傷できる塩基性タンパク質又はペプチド界面活性剤、及び任意的に微生物細胞壁分解酵素を含んで成る洗浄又は洗剤組成物。 12．前記塩基性タンパク質が哺乳類細胞において天然であるアミノ酸より成るアミノ酸配列を有す、請求項11記載の組成物。 13．前記塩基性タンパク質がプロタミン、硫酸プロタミン、デフェンシン、マガイニン、メリチン、セクロピン、プロテグリン、並びに合成ポリペプチド、例えばポリリジン及びポリアルギニンより成る群から選ばれる、請求項11記載の組成物。 14．前記細胞壁分解酵素がII型エンドグリコシダーゼ、並びにムラミダーゼ、例えばリゾチーム及びキチナーゼより成る群から選ばれ、並びに／又は前記オキシドリダクターゼがペルオキシダーゼ酵素系（EC１．11．１．７）及びラッカーゼ酵素（EC１．10．３．２）より選ばれる、請求項11〜13のいづれか１項記載の組成物。 15．前記ペルオキシダーゼ系が少なくとも一種のペルオキシダーゼ酵素及び過酸化水素生成酵素、例えばオキシダーゼとオキシダーゼ用の基質、又はアミノ酸オキシダーゼと適当なアミノ酸又はペルオキシカルボン酸もしくはその塩を含んで成る、請求項11〜14のいづれか１項記載の組成物。 16．プロテアーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ及びリパーゼより成る群から選ばれる少なくとも一種の酵素を更に含んで成る、請求項11〜15のいづれか１項記載の組成物。 17．前記界面活性剤が清浄界面活性剤、好ましくはアニオン性、非イオン性、両性、双イオン性及びカチオン性界面活性剤より選ばれるものである、請求項11 〜16のいづれか１項記載の組成物。 18．前記塩基性タンパク質が、細胞の殺傷又は細胞の増殖の抑制に有効な量、好ましくは洗浄液もしくは洗濯液１ｌ当り１〜4000mg、より好ましくは洗浄液もしくは洗濯液１ｌ当り１〜2000mg、特に洗浄液もしくは洗濯液１ｌ当り５〜1000 mgに相当する量のプロタミン又は硫酸プロタミンである、請求項13〜17のいづれか１項記載の組成物。 19．硬質表層上に存在している微生物細胞を殺傷するための方法であって、前記表層を請求項11〜18のいづれか１項記載の洗浄組成物、又は請求項１〜10のいづれか１項記載の組成物、好ましくはプロタミン又は硫酸プロタミンを含んで成る組成物と接触させることを含んで成る、方法。 20．洗濯品の上に存在している微生物細胞を殺傷する又はその微生物細胞の増殖を抑制するための方法であって、前記洗濯品を請求項11〜18のいづれか１項記載の洗剤組成物又は請求項１〜10のいづれか１項記載の組成物、好ましくはプロタミン又は硫酸プロタミンを含んで成る組成物と接触させることを含んで成る、方法。 21．食品、飲料品、化粧品、コンタクトレンズ製品、食品成分又は酵素組成物の保存のための方法であって、保存処理していない食品、飲料品、化粧品、コンタクトレンズ製品又は酵素組成物の中に微生物細胞の増殖を抑制するのに有効な量の塩基性タンパク質もしくは塩基性ペプチド、又は請求項１〜10のいづれか１項記載の組成物、好ましくはプロタミンもしくは硫酸プロタミン、又はプロタミンもしくは硫酸プロタミンを含んで成る組成物を組込むことを含んで成る方法。 22．ヒト又は動物の皮膚、粘膜、創傷、打ち身の上に、又は目の中に存在している微生物細胞を殺傷するために有効であり、且つ細胞を殺傷するのに有効な量の塩基性タンパク質もしくはペプチド、好ましくはプロタミンもしくは硫酸プロタミン、又は請求項１〜10もしくは11〜19のいづれか１項記載の組成物を含んで成る消毒薬を調製するための、請求項１〜10のいづれか１項記載の組成物又は請求項11〜18のいづれか１項記載の洗浄用組成物の利用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 38/44 ＡＤＡＣ１１Ｄ 7/42 ＡＤＺＡ６１Ｋ 37/50 ＡＤＺＣ１１Ｄ 3/386 ＡＤＡ 7/42 ＡＢＬ //(Ａ０１Ｎ 63/00 63:02 65:00） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．細胞壁分解酵素及び／又はオキシドリダクターゼと組合さった、微生物細胞を殺傷できる塩基性タンパク質又はペプチドを本質的に含んで成る又はそれより本質的に成る殺菌性、静菌性、殺真菌性及び／又は静真菌性組成物。２．前記塩基性タンパク質が哺乳類細胞において天然であるアミノ酸より成るアミノ酸配列を有する、請求項１記載の組成物。３．前記塩基性タンパク質が生物又は微生物を起源とする請求項１又は２記載の組成物。４．前記塩基性タンパク質が生物学的材料から回収されるものである、請求項１〜３のいづれか１項記載の組成物。５．前記塩基性タンパク質が組換タンパク質である、請求項１〜３のいづれか１項記載の組成物。６．前記塩基性タンパク質がプロタミン、硫酸プロタミン、デフェンシン、マガイニン、メリチン、セクロビン及びプロテグリンより成る群から選ばれる、請求項１〜５のいづれか１項記載の組成物。７．前記塩基性ペプチドがポリリジン及びポリアルギニン並びにそのコポリマーより成る群から選ばれる合成ポリペプチドである、請求項１又は２記載の組成物。８．前記細胞壁分解酵素がII型エンドグリコシダーゼ、リゾチーム及びキチナーゼより成る群から選ばれる、請求項１〜７のいづれか１項記載の組成物。９．前記オキシドリダクターゼがオキシダーゼ（EC１．10．３）及びペルオキシダーゼ（EC１．11．１）より成る群から選ばれる、好ましくはペルオキシダーゼ酵素系（EC１．11．１．７）及びウッカーゼ酵素（EC１．10．３．２）から選ばれる、請求項１〜８のいづれか１項記載の組成物。 10．前記ペルオキシダーゼ酵素系が、少なくとも一種のペルオキシダーゼ酵素及び過酸化水素生成酵素系、例えばオキシダーゼとオキシダーゼ用の基質、又はアミノ酸オキシダーゼと適当なアミノ酸又はペルオキシカルボン酸もしくはその塩を含んで成る、請求項１〜９のいづれか１項記載の組成物。 11．微生物細胞を殺傷できる塩基性タンパク質又はペプチド及び界面活性剤を含んで成る洗浄又は洗剤組成物。 12．細胞壁分解酵素及び／又はオキシドリダクターゼを更に含んで成る請求項 11記載の組成物。 13．前記塩基性タンパク質が哺乳類細胞において天然であるアミノ酸より成るアミノ酸配列を有す、請求項11記載の組成物。 14．前記塩基性タンパク質がプロタミン、硫酸プロタミン、デフェンシン、マガイニン、メリチン、セクロピン、プロテグリン、並びに合成ポリペプチド、例えばポリリジン及びポリアルギニンより成る群から選ばれる、請求項11又は12記載の組成物。 15．前記細胞壁分解酵素がII型エンドグリコシダーゼ、並びにムラミダーゼ、例えばリゾチーム及びキチナーゼより成る群から選ばれ、並びに／又は前記オキシドリダクターゼがペルオキシダーゼ酵素系（EC１．11．１．７）及びラッカーゼ酵素（EC１．10．３．２）より選ばれる、請求項11〜14のいづれか１項記載の組成物。 16．前記ペルオキシダーゼ系が少なくとも一種のペルオキシダーゼ酵素及び過酸化水素生成酵素、例えばオキシダーゼとオキシダーゼ用の基質、又はアミノ酸オキシダーゼと適当なアミノ酸又はペルオキシカルボン酸もしくはその塩を含んで成る、請求項11〜15のいづれか１項記載の組成物。 17．プロテアーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ及びリパーゼより成る群から選ばれる少なくとも一種の酵素を更に含んで成る、請求項11〜16のいづれか１項記載の組成物。 18．前記界面活性剤が清浄界面活性剤、好ましくはアニオン性、非イオン性、両性、双イオン性及びカチオン性界面活性剤より選ばれるものである、請求項11 〜17のいづれか１項記載の組成物。 19．前記塩基性タンパク質が、細胞の殺傷又は細胞の増殖の抑制に有効な量、好ましくは洗浄液もしくは洗濯液１ｌ当り１〜4000mg、より好ましくは洗浄液もしくは洗濯液１ｌ当り１〜2000mg、特に洗浄液もしくは洗濯液１ｌ当り５〜1000 mgに相当する量のプロタミン又は硫酸プロタミンである、請求項14〜18のいづれか１項記載の組成物。 20．硬質表層上に存在している微生物細胞を殺傷するための方法であって、前記表層を請求項11〜19のいづれか１項記載の洗浄組成物、又は請求項１〜10のいづれか１項記載の組成物、好ましくはプロタミン又は硫酸プロタミンを含んで成る組成物と接触させることを含んで成る、方法。 21．洗濯品の上に存在している微生物細胞を殺傷する又はその微生物細胞の増殖を抑制するための方法であって、前記洗濯品を請求項11〜19のいづれか１項記載の洗剤組成物又は請求項１〜10のいづれか１項記載の組成物、好ましくはプロタミン又は硫酸プロタミンを含んで成る組成物と接触させることを含んで成る、方法。 22．食品、飲料品、化粧品、コンタクトレンズ製品、食品成分又は酵素組成物の保存のための方法であって、保存処理していない食品、飲料品、化粧品、コンタクトレンズ製品又は酵素組成物の中に微生物細胞の増殖を抑制するのに有効な量の塩基性タンパク質もしくは塩基性ペプチド、又は請求項１〜10のいづれか１項記載の組成物、好ましくはプロタミンもしくは硫酸プロタミン、又はプロタミンもしくは硫酸プロタミンを含んで成る組成物を組込むことを含んで成る方法。 23．ヒト又は動物の皮膚、粘膜、創傷、打ち身の上に、又は目の中に存在している微生物細胞を殺傷する方法であって、殺傷すべき細胞をそれを殺傷するのに有効な量の塩基性タンパク質もしくはペプチド、好ましくはプロタミンもしくは硫酸プロタミン、又は請求項１〜10もしくは11〜19のいづれか１項記載の組成物と接触させることを含んで成る方法。