JPH10507914A

JPH10507914A - 微生物の生育の阻止

Info

Publication number: JPH10507914A
Application number: JP8513717A
Authority: JP
Inventors: ボーレベントウルリヒセン; ヘルゲバッケツンカストベルク; カイトジョンストン
Original assignee: ティーデマンスヨーホーアンドレセンアーエンエス
Priority date: 1994-10-19
Filing date: 1995-10-19
Publication date: 1998-08-04
Also published as: AU3670695A; EP0785891A1; EP0785891B1; WO1996012646A1; DE69512259D1; CA2202763A1; NO971601L; AU690750B2; NO971601D0; GB9421123D0; DE69512259T2; ATE184564T1

Abstract

(57)【要約】フレッシュミルク（及びミルク製品）及びフレッシュフルーツジュースの如き非滅菌液体は、残念ながら、好気性又は、多くの酵母及び細菌のような通性嫌気性（理論的には、その代謝過程に酸素を要求しないが、実際には酸素によって毒作用は受けず、その存在下で生存できることを意味する）にかかわらず微生物のための良好な生育メディウムを提供する。しかしながら、実際には、かかる微生物はその代謝過程のいくつかの部分では酸素を要求すること、又は少なくとも実質的に酸素フリーの環境では、その生育が顕著に阻止されることが知見された。このように、本発明は、前記液体が保存される容器から実質的にすべての遊離の分子状酸素を除去するために酸素スカベンジャーを使用することにより、ミルク及びフルーツジュースの如き非滅菌液体中における微生物の生育を制御することを提案する。

Description

【発明の詳細な説明】微生物の生育の阻止本発明は、微生物の発育の阻止に係り、特に非滅菌（non−sterile）液体メディウムと接触する微生物の阻止に係る。さらに詳述すれば、本発明は、前記液体が保存される容器から遊離の分子状酸素の実質的にすべてを除去するために酸素スカベンジャーを使用することにより前記阻止を行うことに係る。食品（たとえば飲物）及び医薬品の如き酸素感受性物質（一括して「製品」という）の包装に当たっては、酸素汚染が特にやっかいである。一般に、酸素の導入を最少にするため又は製品に対する酸素の望ましくない影響を低減させるために注意が払われている。汚染物としての酸素の処理については多くの方法が存在する。最も基本的なものは、真空によって、不活性ガスでのスパージングによって、又はその両方によって製品から単に酸素を除去することである。このようなシステムは、オレンジジュース及び醸造工業において、及び変性雰囲気下での食品の包装で使用される。この技術は、装置が多少集約的となるが、製品（又はその容器）から空気中に存在する酸素の約９０〜９５％を除去できる。しかしながら、残りの５〜１０％の酸素の除去は、真空処理及び／又はスパージングに関してより長い時間及びより多量のより高純度の不活性ガス（これ自体、極微量レベルでも酸素で汚染されてはならない）を要求する。このため、極微量の酸素の除去は高価なものとなる。これらの方法の他の不利は、揮発性の製品成分が除去されがちであることである。これは、このような成分が、しばしば芳香及び風味の一部又は全部に該当する食品、たとえば飲物に特有の問題点である。ここで、用語「酸素スカベンジャー」は、ａ）閉じられた容器の内部から、捕捉された酸素又は容器内に侵入しつつある酸素と反応又は結合することによって分子状酸素を除去できるもの；又はｂ）たとえば容器を形成する材料物質中に酸素スカベンジャーを配合すること（たとえば、多層容器構造体の１以上の層に酸素スカベンジャーを配合することによる）によって、これらの方法以外では閉じられた容器内に分散されることになるはずの分子状酸素を除去できるものを意味する。ここで使用する用語「酸化防止剤」は、製品（例えば飲物）に添加される際、それ自体、酸化速度を遅らせるか、又は製品に対する酸化の望ましくない影響を低減させる物質（たとえば化合物）を意味する。ここで使用する用語「複合メディウム」とは、微生物の生育を支持し得る各種のメディウムをいい、当該メディウムは次の特性を有している。すなわち、生育のために存在する炭素及び窒素源は、単なる炭水化物及びアミノ酸だけではなく、たとえば炭水化物、多糖、たんぱく質、ペプチド、脂質、オイル、有機酸、ビタミン及びコファクター（そのままで存在するもの、又はたとえば植物又は動物産生流体、植物又は動物組織抽出物、又は組織加水分解物の如き栄養リッチの不確定な組成物に由来するものでもよい）の如き１以上の化合物でなる。 1930年代以降、ビール中の酸素はその風味及び安定性にマイナスに働くことが知られている。容器355ｍｌ当たり0.1〜0.2ｍｌ程度の少量の酸素でも、経時的に、ビールの黒色化、冷却−曇り値（chill−haze value）の増大及び顕著な味の変化の原因となる。ビールに対する酸素の影響は非常に重大であり、多くの醸造業者は、充填の間にびんから酸素を除去するために長い時間を費やしている。注意深い醸造業者によってびんのヘッド空間で達成された総Ｏ₂濃度約200〜400p pmは、びん355ｍｌ当たり約５０〜100μｌに相当する。このような少量のＯ₂であっても、なお、ビールの品質及び棚寿命に対する重大な制限の１つと考えられる。他の多くの食物も同様に酵素を媒体とする劣化を受ける。たとえば、調製された食物は一部ずつプラスチック製容器に収容されて販売されるが、その中に捕捉され、加工後にパッケージ内に漏出又は分散してくる空気は認識された工業的問題である。この漏出又は分散は、望ましい特性を有する多くのプラスチックが酸素に対しては比較的透過性であるため、完全にプラスチックでなる容器についてはしばしば重大である。上述の技術のいずれも、（ａ）製品に溶解した酸素（閉鎖された系が平衡になるに従って、容器のヘッド空間に放散される）、又は（ｂ）パッケージ内への酸素の漏出を排除又は制御できない。ビールに対する酸素の汚染の影響を低減させる試みにおいて、酸化防止剤（たとえば、二酸化イオウ、トリヒドロキシブチロフェノン、ブチル化ヒドロキシトルエン及びブチル化ヒドロキシアニソール）及び酸素スカベンジャー（たとえば、アスコルビン酸、イソアスコルビン酸及びグルコースオキシダーゼ−カタラーゼ）が使用されている。このような試薬のビールへの直接添加は重大な不利を有する。ビールに添加される際、二酸化イオウ及びアスコルビン酸塩はいずれも異風味を生ずる。さらに、このような化合物の食物への直接添加は、ラベルへの「本製品は添加剤を含有する」旨の表示を要求する。これは、「新鮮」かつ「オールナチュラル」の製品が求められる今日では望ましいことではない。さらに、容器壁を浸透する酸素を結合するために、壁が重合体、酸素捕捉特性を有する酸化可能な成分、及び金属触媒からなる層でなる又は包含してなるプラスチック容器（たとえば、ビール、他の飲物及び各種の他の食物用）を調製することも知られている（たとえばヨーロッパ特許公開第 301,719号参照）。また、米国特許第4,048,361号は、酸素「ゲッター」を含有する少なくとも１のバリヤー層を有する食物用容器を開示しており、一方、米国特許第3,586,514号は薄壁ポリ塩化ビニル（PVC）容器（ここで、当該プラスチックは壁の酸素透過性を低減させるために酸化防止剤を含有する）を開示し、特開昭 58−160344号はｍ−キシレン基含有ポリアミド樹脂を含むポリエチレンテレフタレート（PET）の中空成形物を開示している。これら文献の容器は、壁を通り、容器内に入る酸素の伝達を阻止又は低減する酸素バリヤーとして記述されている。このような容器は、一般に、ガラス製容器よりも高価であり、ガラス製又はアルミニウム製容器よりも再利用性に乏しい。容器の王冠又は閉鎖部に酸素捕捉系を配合する試みがなされている。たとえば、米国特許第4,279,350号は、酸素透過性バリヤーと水吸収裏あて層との間に配置された触媒を包含する閉鎖ライナーを開示する。英国特許公開第2,040,889号に開示された他の閉鎖部は、閉鎖セル発泡コア（酸素スカベンジャーとして使用させるために水及び二酸化イオウを含有してもよい）及び液体不透過性の表皮を有するエチレン酢酸ビニル（EVA）から成形したストッパーである。また、ヨーロッパ特許公開第328,336号は、酸素スカベンジャーを含有する重合体マトリックスでなる予め形成した閉鎖部材（たとえばキャップ、除去可能なパネル又はライナー）を開示する。好適なスカベンジャーとしては、アスコルビン酸塩又はイソアスコルビン酸塩があり、これらの捕捉特性は、充填された容器に固定された後に該部材を低温殺菌又は滅菌することによって活性化される。同様に、ヨーロッパ特許公開第328,337号は、酸素スカベンジャーの介在によって変性した重合体マトリックス物質を包含してなる容器の閉鎖部のためのシーリング組成物を開示する。かかる組成物は、閉鎖部への適用のため又は閉鎖部ガスケットの形で閉鎖部上にデポジットとして存在するように液状又は溶融可能な性状である。アスコルビン酸塩又はイソアスコルビン酸塩は、単独で又は亜硫酸塩との組合せにおいて好適な酸素スカベンジャーである。さらに、これらの化合物の捕捉特性も、容器を封止する際、当該組成物を低温殺菌又は滅菌することによって活性化される。鉄粉及び酸化第一鉄は、いずれも食物用の酸素スカベンジャーとして市販されている。これらは、三菱ガス化学(株)（AGELESS（商標名）として知られた製品として販売している）を含む多くの企業により、この目的用として小袋入りの形で製造されている(たとえば、European Packaging Newsletter and World Repor t，vol．21，No．７，７月，1988年参照)。鉄粉を収容した小袋の他の製造業者としては、Multiform Desiccants Inc．（FRESHPAX（商標名）として当該小袋を製造している：英国特許公開第2,228,857号に述べられている）及び Hsaio Sung（O’BUSTER（ブランド名）として小袋を製造している；たとえば、Asia Pacific Food Industry，１１月，1994年，ｐ．１６参照）がある。このような製品も、米国特許第4,752,00 2号のように、酸素捕捉剤としてアスコルビン酸も含有しうる。他の酸素スカベンジャーは、米国特許第4,524,015号及び同第4,384,972号に開示されている。米国特許第4,536,409号及び第4,702,966号は、それぞれ、食料品を包装するために使用される重合体容器のための多層壁構造体（外層及び内層は構造上の及び保護用の層であり、これらの間に、望ましくない酸素の侵入を制御するための物質が配置されている）を開示する。高温では、外層及び内層は水蒸気が酸素吸収系に侵入することを許容し、当該系を活性状態にさせる。さらに、包装された食料品（たとえば飲物）及び医薬品の味、芳香又は機能をマイナスに変化させることなく、ぬれた又は湿った製品（又は容器内で水分を発生させる製品）のパッケージ内の酸素レベルを迅速に低減できる物質が知られている。当業者は、たとえば特開昭61−238836号及び特開昭54−22281号に開示された如く、かかる要求に適合するための試みに当たり、当該製品の容器に各種の試薬を添加している。たとえば米国特許第4,959,135号及び同第4,952,289号に開示されたように、アミン＋金属の錯体は酸素の如き配位子を結合でき、包装の際に酸素スカベンジャーとして使用される。当該錯体は、アミン及び鉄が共に水又は水蒸気にさらされるまでは形成されず、又は活性状態にはならない（すなわち、酸素を結合できない又は結合しない）。錯体の成分は混合され、遊離の状態で又は支持体の上又は中に固定して、中でもシリコーンゴム又は重合体（たとえば、PVC、EVA、ポリプロピレン（ＰＰ）、ＰＥ又はポリウレタン）上に又はこれと混合して使用される。米国特許第4,287,995号は、水性液体を保存するために使用される容器内のキャップ又はストッパーを開示する。キャップ又はストッパーは、ガス透過性ではあるが、水不透過性のフィルムによって、容器内の内容物とは接触しないように分離された酸素吸収剤を含有するシーリング部材を有する。同様のキャップシステムが米国特許第4,756,436号に開示されている。食料品（たとえば、野菜、魚、貝、肉、加工食料品（たとえばポテトチップス、ケーキ、ピーナッツ等）など）を保存するためには、食料品にかびがはえること及び食料品が腐敗することを阻止する必要がある。従来の方法は、食料品にかびがはえること又は食料品が腐敗することを阻止するため、フリーザー保存、冷却保存、真空包装及び包装内に存在するガスの不活性ガスによる置換を利用している。食料品を保存するため、酸化防止剤の如き添加剤が使用されている。近年、政府は、いくつかの添加剤がヒトに対して有害であるため、食物における添加剤の使用を規制し始めている。フリーザー保存法は大規模な装置及び煩雑な操作を必要とするため高価である。かび又は真菌、細菌又は高等生物（たとえば昆虫）は、食料品の保存を妨げる傾向がある。これらの昆虫、かび又は真菌、及び多くの細菌は、生存しかつ生育するために酸素を必要とし、食料品の腐敗及び品質の変化の原因となる。従って、食料品が包装される雰囲気から酸素を選択的に除去できれば、食料品の腐敗及び品質の変化の問題は解消され、食料品を長期間保存することが可能になる。特開昭47−19729号は、閉鎖された雰囲気から酸素を除去することにより野菜を保存するために酸素スカベンジャーを使用することを開示する。米国特許第2, 825,651号、同第4,127,503号及び英国特許公開第533,991号は他の形態の酸素スカベンジャーを開示する。ヨーロッパ特許公開第466,515号は、酸素吸収組成物及び該酸素吸収組成物を覆う酸素透過性フィルムを包含してなる酸素スカベンジャーを開示する。フィルムは、その厚さ方向における外側表面が緻密な表皮として形成されている非対称多孔膜を包含する。緻密な表皮は液体に対しては充分に高いバリヤー特性を有するが、高い酸素透過性をなお保持している。飲物の保存での使用では、酸素スカベンジャーは、酸化による包装された物質の化学的劣化を防止するために使用されるものとして開示されている。酸素スカベンジャーによる保護に適するものとして開示されている飲物としては、液体、流動性食物、水を含有する食品、フレッシュジュース（たとえばトマトジュース）、及びアルコールがある。酸素スカベンジャーに好適な容器としては、ガラス製又はプラスチック製のびん、缶又はバッグがある。酸素スカベンジャーは、保護されるべき物質と直接接触するものとして又は短い距離で当該物質とは離れているものとして開示されている。酸素スカベンジャーを、密閉びん内のオレンジジュースに関する例において、びんのキャップ内で使用した際には、酸素含量は３日後で0.5％より少、３カ月後で１%より少であった。酸素スカベンジャーとして AGELESS の使用が開示されている。ベルギー特許第1,004,320号は、空気のヘッド空間における酵素による酸素捕捉系を開示する。酸素を吸収する酵素は不動化され、容器の内容物の気体相と接触する。酸素スカベンジャーを提供する方法は、容器の内容物の感覚受容性品質（organoleptic qualities）の保持に利用されるものとして開示されている。このスカベンジャーは、ビール、果物及び野菜ジュース、及びミルクに適するものとして開示されている。このスカベンジャーに適する容器としては、びん、金属製缶及びパラフィン加工カートンがある。非無菌的に充填された及び／又は最少限度で加工されたフルーツジュース（新たにしぼられたものを含む）に伴う特別な問題は、これらが棚寿命を低減させる微生物に汚染されていることである。さらに、低温殺菌されたジュースも、空気から又は包装材自体の汚染のため、包装の間に微生物で汚染される。Ｉ．Sagi 及び C．H．Mannheim，「未低温殺菌及び低温殺菌オレンジジュースの品質に対する酵素による酸素除去の影響」，Journal of Food Processing and Preservation １４（1990），253−266は、柑橘系ジュースが抽出後短時間で代表的な芳香を失うこと、酸素の存在が熱加工した柑橘系ジュースの風味に影響を及ぼすことが知られているため、ジュース抽出の直後に行うグルコールオキシダーゼ−カタラーゼによる酵素的脱酸素の酸素除去速度及びフレッシュ及び低温殺菌オレンジジュースの品質に対する影響が調査されたことを開示する。彼等は、酵素調製物がフレッシュオレンジジュース中の溶存酸素を室温において約３０分で１ppmより少に低減させることを見出している。フレッシュジュースでは、微生物の生育は遅延され、これらジュースの棚寿命が増大されている。低温殺菌されたジュースでは改善は見られない。しかしながら、この場合も、系はグルコールオキシダーゼ−カタラーゼ調製物の形の添加剤の使用を含み、ジュースを化学的に変質させる。本発明の１態様によれば、実質的に周囲雰囲気と接触しないように閉鎖された非滅菌液体複合メディウムと接触する微生物の生育を阻止する方法が提供され、該方法は、エンクロージャー内から実質的にすべての遊離の分子状酸素を除去するために酸素スカベンジャーを使用するものである。微生物は、その代謝において酸素が関与するか否か又はいかに関与するかを参照して特徴づけられる。好気性微生物（たとえば、アスペルギルス(Aspergillus )及びペニシリウム（Penicillium）の多くの種）は生存及び増殖のために酸素を要求する。これに対して、嫌気性微生物は酸素によって実際に死滅され、その不存在下でのみ生存する。通性嫌気性微生物は中間の種類である。これらは、一般にその代謝過程に酸素を要求しないものと考えられるが、必ずしも酸素が毒とはならず、その存在下でも生存しうる。本発明の方法は、微生物（ただし通性嫌気性タイプ（その代表的な例は、食料品中に又はこれに関連して自然に発生する酵母（たとえばサッカロミセス(Saccharomyces)）の多くである）を除くものではない）の制御に使用される。非滅菌液体複合メディウムは、食料品及び非食料品液体の広い範囲のものである。たとえば、動物性生産物（たとえば、ミルク又は各種のミルク関連物質(その中には、エンテロバクテリアセエ（Enterobacteri-aceae）の通性嫌気性のものがしばしば見られる)）、家庭の産物（たとえば、洗浄液／洗剤）、又は植物性油又は鉱油（このような産物又は油中には、シュードモナスアダセエ（Pseudomonasadaceae）の好気性のものが見られる）、又はフルーツジュース（その中には、通性嫌気性微生物のサッカロミセスがしばしば見られる）がある。しかしながら、本発明の本来の使用は、食料品液体（たとえば、ミルク及びフルーツジュース及びこの種の例の多くについては後述する）において微生物を制御することにある。フルーツジュースとしては、グレープフルーツジュース、パイナップルジュース、トマトジュース、グレープジュース、又はオレンジジュース又はこれらの混合物がある。特に、フルーツジュースは、オレンジジュース、グレープジュース又はトマトジュースである。全く予想されないことであるが、これらの３種についてのＯ₂ スカベンジャーの使用は、アップルジュース、グレープフルーツジュース又はパイナップルジュースに関するよりも明らかに顕著な生育阻止の程度を与えることが実験的に見出された。液体メディウムは、ミルク又はミルク製品である場合、生の又は低温殺菌されたミルク又はこれを使用して作られたもののいずれでもよい（後者は必ずしも完全に殺菌される必要はない）。複合メディウムは非滅菌（この用語は、本来的には、たとえば照射によって、又はウルトラ−熱処理(ultra−heat treatment)によって、処理前に存在していたすべての微生物を死滅させるために積極的に処理を行ってはいないことを意味する）である。しかしながら、本発明の方法は、初めは滅菌状態であったが、つづくいくつかの操作（充填又は封鎖工程）の間に非滅菌状態になるような液体中における微生物の生育阻止を含むものである。公知の非滅菌液体複合メディウムの例は、非低温殺菌的に包装された及び／又は最少限度で加工されたフルーツジュース（たとえば、フレッシュオレンジジュース）である。本発明は、封鎖された液体と接触する微生物の生育を阻止する方法にある。このように、微生物は、液体複合メディウム上に又はその中に浮遊し、エンクロージャーの内表面上に存在し、又はエンクロージャーのヘッド空間内に存在しうる。液体複合メディウムは閉鎖されて、実質的に周囲の酸素含有雰囲気との接触が断たれる。エンクロージャーはいかなる形状をもとりうる（たとえば、複合メディウム用の容器又はダクトでもよい）が、本発明は、特に板紙及び内側及び外側サーモプラスチック層でなるラミネート（可及的に、該ラミネート内に１以上の酸素又は他のバリヤー層が設けられる）で作られた液体包装用カートンの形の容器に適用される。自己活性形の酸素スカベンジャーが容器のヘッド空間に又はそのふた又は他のキャップ内に設置される。水分によって活性化される酸素スカベンジャーは、内側サーモプラスチック層の一部として適用される。このように、水分によって活性化されるスカベンジャーは、充填前に保管される容器に適用され、保管中にもＯ₂捕捉能力は失われない。酸素スカベンジャーとして使用される活性物質は、微生物の生育から液体メディウムを保護するために適する各種の物質である。一般的な物質の１つは、既に検討したように、固状の食物製品用の阻止スカベンジャーとして効果的に商業的に利用されている酸化第一鉄であり、他は鉄粉である。捕捉を目的とする酸化第一鉄は、現在では、三菱ガス化学(株)（AGELESS として市販している）を含む多くの企業によって小袋入りの形で製造される。他の酸素スカベンジャーはアスコルビン酸塩である（前述の米国特許第4,752,002号に開示）。たとえば、カーボンブラック及びアルカリ金属炭酸塩の如きさらに他の酸素スカベンジャーが上述の米国特許第4,524,015号に開示されている。酸素スカベンジャーは液体メディウムに直接的に添加されうると考えられるが、最も好ましくは、別個に保持され、液体メディウムに実際に入り込む（可及的に有害な影響を及ぼす）可能性を低減させるために不動化された形で使用される。各種の好適な形で不動化される。たとえば、液体メディウムを封入する容器の内部表面に付着され、又はこれを形成する材料内に包含され、又は内部表面又はその一部として包含される。事実、積層された容器材料のシングル内側層は酸素スカベンジャー及び酸素及び液体バリヤーの機能の２つ以上の機能を果たす。別法として、容器を封鎖するキャップ又は他の部材へのインサートとしても具備される。本発明の方法は、エンクロージャー内の雰囲気を実質的に分子状酸素フリーの状態に維持するために、エンクロージャーから分子状酸素を捕捉することを中心としている。分子状酸素について使用している表現「実質的にフリー」を定義することは必ずしも容易ではなく、１つの観点からは、現実に微生物の生育が阻止される酸素濃度であればよいと言える。一般的には、酸素濃度を0.3容量％、好ましくは0.1容量％（液体上の気体中において、これらは濃度0.3ｍｇ／ｌ、好ましくは0.1ｍｇ／ｌにほぼ等しい）に低減できれば十分であるが（後者も低い濃度が最も好ましい）、実際には、酸素濃度は微生物毎にかなり変動する。ここでは、雰囲気を実質的に分子状酸素フリーの状態に維持することによって通性嫌気性微生物（生育に必ずしも分子状酸素を要求しない）の生育を効果的に阻止できることが全く予測されない点が強調されるべきである。この点が、本発明の最も興味のある重要な態様の１つである。単に酸素を除外及び除去することにより、通性嫌気性微生物（好気性微生物と同様に）（及び特に食料品に対して顕著に有害な影響を及ぼすことが知られている一般的な酵母の全範囲）の液体メディウムにおける生育が安価にかつ有効に阻止される。本発明の方法は、エンクロージャーから分子状酸素を捕捉することによって微生物の生育を阻止するものである。しかしながら、他の微生物の阻止方法を併用することもでき、好適な併用方法の１つは、非滅菌液体メディウムを抗菌物質、特に不動化した抗菌物質と接触させることを包含するものであり、当然ながら、後者の場合、抗菌物質が液体メディウムに移動し、これによって液体メディウムを汚染する危険が全く又は実質的に生ずることなく液体メディウム中又はこれに近接して配置されるため、非常に好適である。酸素スカベンジャー及び抗菌物質の併用は系の能力を拡大させ、通性嫌気性微生物（及び当然に好気性微生物）と共に、嫌気性微生物の生育の制御に効果的となる。代表的な抗菌物質は重金属、特にヒトに対して無毒であるもの（たとえば銀）であり、利用できる他の抗菌剤はベンゾフロキサン、多くの第３級及び第４級アミン及び Nystatinの如き抗生物質である。酸素スカベンジャーと同様に、抗菌物質を各種の好適な形で不動化させることが非常に好ましい。この場合も、液体メディウムを保管する容器の内部表面に付着させ、又は内部表面の材料内に包含させ、又は内部表面又はその一部内に包含させることができ、実際、積層された容器材料のシングル内表面は、酸素スカベンジャー、抗菌物質及び酸素及び液体バリヤーの２つ以上の機能を果たす。酸素スカベンジャーと抗菌剤との組合せは単に付加的に作用するが、いくつかの組合せは相乗的作用を発揮する傾向がある（併用は、別々の成分の活性についての認識から予測されるものよりも微生物の生育の阻止においてより効果的である）。実際、抗菌物質と共に酸素スカベンジャーを使用する場合、非常に少量ずつの２つの各成分（スカベンジャー及び抗菌剤）を使用して実質的な微生物の生育の阻止を達成できることが特に本発明の有利な特徴であり、これに対して、一方のみで当該効果的な制御を達成するためには、ただ１つの成分を、たとえば高濃度の如き態様で使用することが必要であり、この場合、不利な副次的効果（たとえば、液体メディウム中への成分の浸出の可能性）があり、可及的に有害な影響がある。酸素スカベンジャー及び抗菌物質の併用は、特に、たとえば、ザイゴサッカロミセス・バイリ(Zygosac-charomyces bailli)，カンジダ・クルセイ(Candida kr useii)、ゲオトリクム・カンジダンス（Geotrichum candidans）、カンジダ・パラポイオシス（Candida parapoiosis）、カンジダ・シュードトロピカリス（Candida pseudotropicallis）、及びサッカロミセス・セレビシアエ（Saccaro myces cerevisiae）の如き通性嫌気性酵母を制御することが望まれる場合に望ましい。本発明は、当然ながら、酸素除外エンクロ−ジャーを形成する容器、その中の非滅菌液体複合メディウム、及び液体メディウムを変性させることなく、その内部から分子状酸素を効果的に捕捉し、これにより、液体メディウム内での微生物の生育を阻止するために前記容器内に配置された酸素スカベンジャー（好ましくは不動化される）を包含してなる組合せにも及ぶものであり、前記容器は、任意に、その内部に抗菌物質（好ましくは不動化される）を有し、これにより、さらに、すべての感受性微生物の生育を制御できる。以下に実施例を例示するが、これらは本発明を単に説明し、その詳細を示すためのものである。 AGELESS 小袋の評価、一般的方法商業的に入手可能な酸素捕捉製品 AGELESS（以下、「AgL」と表示することがある）の効果を、フルーツジュースにおける酵母（及びいくつかの他の微生物）の生育についてテストした。他に述べない限り、当該小袋を、ジュース（非滅菌液体複合メディウムとして使用したものであり、このジュースは制御されるべき微生物によってわざと汚染（又は接種）されている）を収容する滅菌500ｍｌ Sc hott Duran ガラスびんのふたの内側のフックにつるしてある。基本的テスト方法各びんにジュース 400ｍｌを充填し、各びん内にAgL の小袋（Ｏ₂結合容量２ ×100ｍｌ：タイプ SPU100）に配置して、それぞれ全体をプレ−脱酸素処理に供した。１１℃で２４時間後、本来の脱酸素処理の直前の接種の前、又はさらなるインキュベーションの前（上清（SNs）に関する場合）に、小袋を新たなペアと交換した。コントロールテスト用のびん内の液体上のガス中における酸素濃度を OXY−CH ECK メーター（デンマーク国の Temac Instruments 社によって供給されたもの）によって測定したところ、脱酸素処理後では、0.1％以下であることが測定された。実施例実施例１： AGELESS 小袋の存在下におけるオレンジジュース中での好気性真菌の生育の検討（ｉ）緒言この実験は、偏性好気性真菌の液体複合メディウム（オレンジジュース、Sain sbury 社製）中での生育に対する AGELESS 小袋の予測される効果を確認するために行ったものである。これら微生物の生育の阻止には、これらの生育が生育メディウムにおける分子状酸素の存在に依存しているため、小袋による酸素の除去が有効であることが予測される。（ii）方法１．AgL 小袋を取付けるための装置を形成する方法は、上述の一般的方法に示したとおりである。２．上述の基本的テスト方法に従って、Sainsbury 社製のオレンジジュース（滅菌）300ｍｌを分配し、テストした。すなわち、充填したびんを２×100ｍｌ（能力）AGELESS 小袋によるプレ−脱酸素処理に供し、11℃において２４時間後に小袋を交換した。その後、メディウムに１以上の真菌（後述の表１参照）100cfu（コロニー形成単位）ｍｌ^-1 を接種した。同じメディウムについて、AGELESS を使用しないものをコントロールとした。３．コントロールにおいて、個々の真菌の種について目視的に生育が観察されるまで１１℃でインキュベーションを行った（各真菌についてのインキュベーションの日数を表中に示す）。ついで、各びん内の内容物を、最大速度で作動する滅菌 POLYTRON ホモゲナイザーにより１５秒間均質化し、ＭＡ（麦芽寒天）培地上におけるホモジネートの希釈物の生存数により cfu／ｍｌ数を測定した。（iii）結果１．下記の表１に示されるように、AGELESS 小袋の存在によってテストした真菌のすべての生育が阻止された。２．観察された生育の阻止は、いずれの場合にも、最終のcfu／ｍｌがテストした真菌のすべての種についてコントロールよりも小さいか又はわずかに下限よりも大きい程度であるため、ほぼ完全であった。コントロールの生育と比べて、生育阻止の程度は代表的には４〜５ log である。３．すべての工程について２５℃、より短時間でインキュベーションを行った点を除き、同じ実施例を行ったところ、実質的に同一の結果が得られた。（iv）結論１．この実験の結果は、偏性好気性真菌の液体複合メディウム中での生育が AGE LESS 小袋の存在によってほぼ完全に阻止された点で、正確に予測したとおりであった。２．結果は、AGELESS 小袋を使用する処理方法がオレンジジュース生育メディウムからの溶存酵素の除去に有効であることを示す。実施例２： AGELESS小袋の存在下におけるアップルジュース及びオレンジジュース中でのサッカロミセス・セレビシジアエの生育の検討（ｉ）緒言他の表面との組合せにおいて AgL の活性をテストする前に、AGELESS 小袋の存在下でインキュベートされる最のＳ．セレビシアエの生育の阻止を検討することが必須である。従って、この実験では、初めに、アップルジュース（ＡＪ）及びオレンジジュース（ＯＪ）中での AGELESS 小袋の存在下及び不存在下における生育を分析した。（ii）方法１．AgL 小袋を取付けるための装置を形成する方法は、上述の一般的方法に示したとおりである。２．上述の基本的テスト方法に従って、Norwegian 社製のＡＪ（滅菌）又は Sai nsbury 社製のＯＪ（滅菌）400ｍｌを分配し、テストした。すなわち、充填したびんを２×100ｍｌ（能力）AGELESS 小袋によるプレ−脱酸素処理に供し、１１ ℃、２４時間後に小袋を交換した。その後、メディウムにＳ．セレビシアエ 10cfu（コロニー形成単位）ｍｌ^-1 を接種した。同じメディウムについて、AGELESS を使用しないものをコントロールとした。３．インキュベーションを１１℃で７日間行い、その後、サンプルを麦芽寒天（ＭＡ）プレートに移植し、生存数によってＳ．セレビシアエの生育の程度を測定した。４．実験の終了時、AGELESS を使用するが、接種を行っていない同様に処理したテストびん中のコントロールオレンジジュースサンプルの溶存酸素含量を、0.01 容量％（0.01ｍｌ／ｌ）程度までの溶存酸素レベルを検出できるアナライザー O RBISPHERE モデル3600を使用して測定した。（iii）結果１．ＡＪ中で観察されたＳ．セレビシアエの生育の阻止は0.5 log〜１ logであった。「0.5 log」は、AgL を収容するびんが、コントロールびん（AgL なし）内で観察された計数可能なcfus数のざっと１０^-0.5倍（約１／３）を有することを意味し、「１ log」は、数が１０^-1倍、すなわち１／１０であることを意味する（「２ log」は、１０^-2倍、すなわち１／100である）。２．AgL 小袋を使用したＯＪ中で見られる阻止は1.5 〜２ log であり、これはＡＪで見られる阻止よりも驚くほど高い。３．非接種コントロールテストびん中の溶存酸素は0.1％以下に低減されたことが見出された。（iv）結論１．AGELESS 小袋はアップルジュース及びオレンジジュースの両方でＳ．セレビシアエの生育阻止を生ずる。２．小袋の活性は、アップルジュース中(0.5〜１ log)よりもオレンジジュース中（1.5〜２ log）で良好である。この理由は明白ではないが、アップルジュースがオレンジジュースよりも良好な栄養メディウムであり、そのため、酸素の除去による生育の阻止を達成することがより困難であることが１つの理由であろう。３．溶存酸素レベルの0.1％以下への低減は、Ｓ．セレビシアエの顕著な生育阻止を生じさせるに十分である。実施例３：ＯＪ中におけるＳ．セレビシアエの生育に対する AGELESS 上清の効果（ｉ）緒言この実験は、ＯＪ中、１１℃でのＳ．セレビシアエの生育に対する AGELESS 小袋からの上清の効果を分析するために実施したものである。（ii）方法１．AgL 小袋を取付けるための装置を形成する方法は、上述の一般的方法に示したとおりである。２．滅菌ＯＪ 300ｍｌを Schott Duran びんに分配し、上述の如くプレ−脱酸素処理に供し、その後、各びんにＳ．セレビシアエを１０ cfuml^-1で接種した。同じメディウムについて、AGELESS を使用しないものをコントロールとした。３．インキュベーションは酵母の種に応じて１１℃において７日間であり、その後、生存数を計数するためサンプルをＭＡプレートに移植した。４．基本的なプレ−脱酸素処理を行った他のセットのびんから上清を調製し、１１℃でさらに８日間インキュベートした。サンプルを取出し、Ｓ．セレビシアエを１０cfu／ｍｌで接種し、さらに１１℃で８日間インキュベーションを行った後、生育を測定した。（iii）効果１．AGELESS の存在下では、２ log の生育阻止が観察された。２．対応する上清は生育阻止を全く示さなかった。３．従って、酸素拒否による生育阻止以外に、AGELESS はＯＪ中での酵母の生育に関する他の効果を全く持たないと結論される。実施例４：異なるオレンジジュース中におけるＳ．セレビシアエの生育に対する AGELESSの効果（ｉ）緒言ＯＪ中でのＳ．セレビシアエの生育に関する嫌気生活の観察された効果がＯＪ中での一般的効果であるかどうかを確認するため、他の源のＯＪ（Mills 社製のオレンジジュース）中での生育に関する嫌気生活の効果を調査した。（ii）方法 Sainsbury 社製のオレンジジュースの代わりにMills 社製のオレンジジュースを使用した点及びインキュベーション期間を７日間とした点を除いて、実施例２に記載の実験を正確に再現した。（iii）結果１．AGELESS 小袋の存在下で、Mills 社製オレンジジュース中でのＳ．セレビシアエの生育の程度は1.6 log であった。２．上清では顕著な生育阻止は全く観察されなかった。（iv）結論 Mills 社製オレンジジュース中でのＳ．セレビシアエの生育に関する嫌気生活の効果は、Sainsbury 社製オレンジジュース中で既に観察されたものと同様であった。実施例５：他の液体食物製品中におけるＳ．セレビシアエの生育に関する AGE LESS の効果（ｉ）緒言この実験は、他の液体食物製品（主に他のフルーツジュース、ミルク）中でのＳ．セレビシアエの生育に関する嫌気生活の効果を分析するために行ったものである。（ii）方法１．AgL 小袋を取付けるための装置を形成する方法は、上述の一般的方法に示したとおりである。２．別々の滅菌 Schott Duran びんに、滅菌グレープフルーツジュース、パイナップルジュース、トマトジュース及びグレープジュース及び滅菌（すなわち UHT ）ミルクを300ｍｌずつ分配し、上述の如く基本的なプレ−脱酸素処理を行った。各びんにＳ．セレビシアエ１０cfu／ｍｌを接種し、びんを１１℃で８日間インキュベートした。３．AGELESS 小袋を使用しないコントロールを作成した。（iii）結果１．テストしたメディウムのすべてにおいて、Ｓ．セレビシアエの生育の顕著な阻止が観察された。この阻止の程度は、グレープフルーツジュース中で0.4 log 、ミルク中で１ log、パイナップルジュース中で1.2 log、トマトジュース中で1 .4 log、及びグレープジュース中で2.6 log であった。（iv）結論１．いくつかの液体複合メディウムにおいて、Ｓ．セレビシアエの生育の顕著な阻止が観察される。２．グレープフルーツジュース（0.4 log）、パイナップルジュース（1.2 log）及びミルク（１ log）中での阻止の程度は、アップルジュース中で既に観察されているものと同様であるが、グレープジュース(2.6 log)及びトマトジュース（1.4 log）中で観察された生育阻止の程度は、オレンジジュース中で観察されたものと同様又はそれよりも高い。実施例６： AGELESS 小袋の存在下におけるＯＪ中での酵母の生育の検討（ｉ）緒言この実験は、一般的なジュースの汚染源である酵母のＯＪ中での生育に対する AGELESS 小袋の効果を分析するために行ったものである。（ii）方法１．AgL 小袋を取付けるための装置を形成する方法は、上述の一般的方法に示したとおりである。２．Schott Duran びんに滅菌ＯＪ 300ｍｌを分配し、上述の基本的はプレ−脱酸素処理に供し、その後、各びんに酵母に属する種の１つ（下記の表参照）を１０cfu／ｍｌで接種した。３．酵母の種に応じてインキュベーションを１１℃において７〜１３日間行い、その後、生存数を計数するためのサンプルをＭＡプレート上に移植した。（iii）結果（下記の表２を参照）１．試験した１３種の酵母のすべてが、コントロールとの比較において、AGELES S の存在下において生育阻止を示した。しかしながら、阻止の程度は試験した種に従って1.5 log〜５ log の範囲であった。２．従って、この効果は酵母の生育阻止にも一般に適用可能であると結論される。実施例７：ＯＪ中におけるＳ．セレビシアエの生育に対するマトリックス上に不動化した抗菌物質と組合せた AgL 小袋の効果液体複合メディウム中において、AGELESS 小袋の使用によって、好気性真菌のほぼ完全な生育阻止、通性嫌気性真菌の実質的な生育阻止が達成されたが、達成される生育阻止の程度がさらに増大されることは明らかに有利である。従って、下記の実験は、それ自体で顕著な生育阻止を生ずることが知られている抗菌剤の併用によって阻止の程度が改善されるかどうかを測定するために行ったものである。実験Ｉ（ｉ）緒言予備実験は、マトリックス中に不動化し、ＯＪ 400ｍｌ中でテストした抗菌物質（ＡＭ）の表面がＳ．セレビシアエの生育を阻止し(阻止の程度１〜2.5 log) 、一方、上清では阻止の程度0.5 log を与えることを示した。この実験は、当該表面に加えて AGELESS の存在がさらに阻止を改善するかどうかを測定するために実施したものである。この特別な実験では、ＡＭはポリアクリルアミド（PAA）ゲル中に不動化したベンゾフロキサンである。（ii）方法１．AGELESS 小袋を取付けるための装置を形成する方法は、上述の一般的方法に示したとおりである。２．500ｍｌ Schott Duran びんにおいて、滅菌条件下でマトリックス２０ｍｌ中にＡＭ２０ｍｇを不動化させた。３．ＯＪ（滅菌）300ｍｌを添加し、上述の基本的なプレ−脱酸素処理に供した。ついで、それぞれにＳ．セレビシアエ１０cfu／ｍｌを接種し、１１℃で７日間インキュベートした。ついで、生存数を計数するためサンプルを移植した。４．AGELESS 小袋を使用したもの及び使用しないものの両方についてコントロールを作成した。（iii）結果１．AgL を使用したコントロール表面は、小袋を使用しないものに比べて２ log の阻止を有していた（AgLを使用したもの5.0×１０⁴cfus、使用しないもの7.3 ×１０⁶cfus）。２．テストＡＭ−マトリックス表面はそれ自体0.5log の阻止を生じ（1.2×１０⁶ cfus）、AGELESS 小袋と組合せた表面は、AGELESS を使用しないコントロール表面と比べて2.5 logの阻止を生じた（1.2×10⁴cfus）。（iv）結論１．この実験は、AGELESS 小袋を活性表面と併用する際、観察される阻止が改善されることを示していた。２．しかしながら、効果は付加的なものと考えられる。すなわち、AGELESS を使用したテスト表面で観察された効果は、AGELESS 及び表面の各効果の合計によるものと見られる。実験ＩＩ（ｉ）緒言前記の実験では、ＡＭ−マトリックス表面と組合せた AGELESS 小袋が、ＡＭ −マトリックスと比較して阻止を２ log 改善していることが観察された。この第２の実験は、結果を確認し、さらにテスト表面からの上清をテストするために行ったものである。（ii）方法１．使用した方法及び手順は実験Ｉと全く同じである。２．７日目の表面について上清を作成した。３．マトリックス表面を使用しないもの、及びAGELESS 小袋を使用したもの及び使用しないものの両方をコントロールとして作成した。（iii）結果１．AGELESS 小袋を使用したコントロール表面は、AGELESS 小袋を使用しないものと比べて２ log の阻止を示した（AgL を使用したもの1.6×１０⁴cfus、使用しないもの1.7×１０⁶cfus）。２．テストＡＭ−マトリックス表面は、それ自体、0.8 log の阻止を有しており（3.5×１０⁵cfus）、AGELESS の存在下において2.8 log の阻止を示した（3.1 ×１０³cfus）。３．AGELESS の不存在下でインキュベートした上清（コントロール及び表面）はいずれも、顕著な生育阻止を生じなかった。（iv）結論１．表面は活性であり、上清はこの実験では不活性であった。２．表面の活性は、AGELESS の存在下でインキュベートした場合、２ log 増大した。３．AGELESS を使用したコントロールはそれ自体２log の阻止を示したが、小袋が除外される場合には、この阻止は排除された。これは、AgL が酸素を除去することによってのみ作用すること、酸素が交換される際には阻止が全く観察されないことを示す。このように、AGELESS はメディウムを変性させず、従って、Ｓ．セレビシアエのその後の生育に影響を及ぼす。酸素捕捉実験の要約１．酸素スカベンジャー（たとえば AGELESS 小袋）を使用することによって、液体複合メディウム中における好気性真菌のほぼ完全な生育阻止が達成される。２．嫌気生活により、菌株及びメディウムに応じた液体複合メディウム中における酵母の生育阻止のレベルの変動（２ log からほぼ完全まで）を達成できる。３．酸素の捕捉はＳ．セレビシアエを阻止し、ＯＪ中で２ logの阻止を生ずる。４．酸素の捕捉はＯ₂の存在下におけるＯＪ中での酵母のその後の生育には効果を持たない。５．酸素の捕捉は液体食物製品におけるＳ．セレビシアエの生育を阻止する。６．AGELESS の効果は少なくとも付加的であり、いくつかの場合には、不動化抗菌物質−マトリックス表面の活性に対して可及的に相乗的である（不活性上清を使用して2.8 log 以下の阻止を生ずる）。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９６年１０月２２日【補正内容】この場合も、系はグルコールオキシダーゼ−カタラーゼ調製物の形の添加剤の使用を含み、ジュースを化学的に変質させる。本発明の１態様によれば、実質的に周囲雰囲気と接触しないように閉鎖された非滅菌液体複合メディウムと接触する通性嫌気性微生物の生育を阻止する方法が提供され、該方法は、エンクロージャー内から実質的にすべての遊離の分子状酸素を除去するために酸素スカベンジャーを使用するものである。微生物は、その代謝において酸素が関与するか否か又はいかに関与するかを参照して特徴づけられる。好気性微生物（たとえば、アスペルギルス(Aspergillus )及びペニシリウム（Penicillium）の多くの種）は生存及び増殖のために酸素を要求する。これに対して、嫌気性微生物は酸素によって実際に死滅され、その不存在下でのみ生存する。通性嫌気性微生物は中間の種類である。これらは、一般にその代謝過程に酸素を要求しないものと考えられるが、必ずしも酸素が毒とはならず、その存在下でも生存しうる。本発明の方法は、通性嫌気性微生物（その代表的な例は、食料品中に又はこれに関連して自然に発生する酵母（たとえばサッカロミセス(Saccharomyces)）の多くである）の制御に使用される。非滅菌液体複合メディウムは、食料品及び非食料品液体の広い範囲のものである。たとえば、動物性生産物（たとえば、ミルク又は各種のミルク関連物質(その中には、エンテロバクテリアセエ（Enterobacteri-aceae）の通性嫌気性のものがしばしば見られる)）、又はフルーツジュース（その中には、通性嫌気性微生物のサッカロミセスがしばしば見られる）がある。本発明の本来の使用は、食料品液体（たとえば、ミルク及びフルーツジュース及びこの種の例の多くについては後述する）において微生物を制御することにある。フルーツジュースとしては、グレープフルーツジュース、パイナップルジュース、トマトジュース、グレープジュース、又はオレンジジュース又はこれらの混合物がある。特に、フルーツジュースは、オレンジジュース、グレープジュース又はトマトジュースである。全く予想されないことであるが、これらの３種についてのＯ₂スカベンジャーの使用は、アップルジュース、グレープフルーツジュース又はパイナップルジュースに関するよりも明らかに顕著な生育阻止の程度を与えることが実験的に見出された。液体メディウムは、ミルク又はミルク製品である場合、生の又は低温殺菌されたミルク又はこれを使用して作られたもののいずれでもよい（後者は必ずしも完全に殺菌される必要はない）。される。たとえば、液体メディウムを封入する容器の内部表面に付着され、又はこれを形成する材料内に包含され、又は内部表面又はその一部として包含される。事実、積層された容器材料のシングル内側層は酸素スカベンジャー及び酸素及び液体バリヤーの機能の２つ以上の機能を果たす。別法として、容器を封鎖するキャップ又は他の部材へのインサートとしても具備される。本発明の方法は、エンクロージャー内の雰囲気を実質的に分子状酸素フリーの状態に維持するために、エンクロージャーから分子状酸素を捕捉することを中心としている。分子状酸素について使用している表現「実質的にフリー」を定義することは必ずしも容易ではなく、１つの観点からは、現実に通性嫌気性微生物の生育が阻止される酸素濃度であればよいと言える。一般的には、酸素濃度を0.3 容量％、好ましくは0.1容量％（液体上の気体中において、これらは濃度0.3ｍｇ／ｌ、好ましくは0.1ｍｇ／ｌにほぼ等しい）に低減できれば十分であるが(後者も低い濃度が最も好ましい)、実際には、酸素濃度は微生物毎にかなり変動する。ここでは、雰囲気を実質的に分子状酸素フリーの状態に維持することによって通性嫌気性微生物（生育に必ずしも分子状酸素を要求しない）の生育を効果的に阻止できることが全く予測されない点が強調されるべきである。この点が、本発明の最も興味のある重要な態様の１つである。単に酸素を除外及び除去することにより、通性嫌気性微生物（好気性微生物と同様に）（及び特に食料品に対して顕著に有害な影響を及ぼすことが知られている一般的な酵母の全範囲）の液体メディウムにおける生育が安価にかつ有効に阻止される。本発明の方法は、エンクロージャーから分子状酸素を捕捉することによって通性嫌気性微生物の生育を阻止するものである。しかしながら、他の微生物の阻止方法を併用することもでき、好適な併用方法の１つは、非滅菌液体メディウムを抗菌物質、特に不動化した抗菌物質と接触させることを包含するものであり、当然ながら、後者の場合、抗菌物質が液体メディウムに移動し、これによって液体メディウムを汚染する危険が全く又は実質的に生ずることなく液体メディウム中又はこれに近接して配置されるため、非常に好適である。酸素スカベンジャー及び抗菌物質の併用は系の能力を拡大させ、通性嫌気性微生物（及び当然に好気性微生物）と共に、嫌気性微生物の生育の制御に効果的となる。代表的な抗菌物質は重金属、特にヒトに対して無毒であるもの（たとえば銀）であり、利用できる他の抗菌剤はベンゾフロキサン、多くの第３級及び第４級アミン及び Nystatin の如き抗生物質である。酸素スカベンジャーと同様に、抗菌物質を各種の好適な形で不動化させることが非常に好ましい。この場合も、液体メディウムを保管する容器の内部表面に付（Candida pseudotropicallis）、及びサッカロミセス・セレビシアエ（Saccaro myces cerevisiae）の如き通性嫌気性酵母を制御することが望まれる場合に望ましい。本発明は、当然ながら、酸素除外エンクロージャーを形成する容器、その中の非滅菌液体複合メディウム、及び液体メディウムを変性させることなく、その内部から分子状酸素を効果的に捕捉し、これにより、液体メディウム内での通性嫌気性微生物の生育を阻止するために前記容器内に配置された酸素スカベンジャー（好ましくは不動化される）を包含してなる組合せにも及ぶものであり、前記容器は、任意に、その内部に抗菌物質（好ましくは不動化される）を有し、これにより、さらに、すべての感受性微生物の生育を制御できる。以下に実施例を例示するが、これらは本発明を単に説明し、その詳細を示すためのものである。 AGELESS 小袋の評価、一般的方法商業的に入手可能な酸素捕捉製品 AGELESS（以下、「AgL」と表示することがある）の効果を、フルーツジュースにおける酵母（及びいくつかの他の微生物）の生育についてテストした。他に述べない限り、当該小袋を、ジュース（非滅菌液体複合メディウムとして使用したものであり、このジュースは制御されるべき微生物によってわざと汚染（又は接種）されている）を収容する滅菌500ｍｌ Sc hott Duran ガラスびんの請求の範囲１周囲雰囲気との接触を実質的に遮断するように閉鎖された非滅菌液体複合メディウムと接触する通性嫌気性微生物の生育を阻止する方法において、該方法は、エンクロージャーから実質的にすべての遊離の分子状酸素を捕捉するために酸素スカベンジャーを使用することを特徴とする、微生物の生育阻止法。２前記通性嫌気性微生物の１以上が酵母である、請求項１記載の方法。３前記非滅菌液体複合メディウムが、ミルク又はミルク製品、又はフルーツジュースである、請求項１又は２記載の方法。４前記フルーツジュースが、オレンジジュース、グレープジュース又はトマトジュースである、請求項３記載の方法。５前記酵素スカベンジャーが鉄及び／又は酸化第一鉄である、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。６前記液体複合メディウムが、板紙層及び内側及び外側サーモプラスチック層でなるラミネートで作製された液体包装用カートン形の容器内に閉鎖されており、前記ラミネート内に任意に１以上の酸素又は他のバリヤー層が存在する、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。７前記酸素スカベンジャーを不動化した形で使用する、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。８前記酸素スカベンジャーを、前記エンクロージャーの内部表面に付着させ、又は内部表面の材料、内部表面又はその一部内に含有させることによって不動化させるか、前記エンクロージャーを封止するキャップ又は他の材料へのインサートとして具備させる、請求項７記載の方法。９前記液体メディウム内の遊離の分子状酸素濃度を0.3ｍｇ／ｌより小に低減させる、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。 10 前記液体メディウム内の遊離の分子状酸素濃度を0.1ｍｇ／ｌより小に低減させる、請求項９記載の方法。 11 酸素スカベンジャーに加えて、前記非滅菌液体メディウムと接触させて抗菌物質を使用する、請求項１〜１０のいずれか１項記載の方法。 12 前記抗菌物質が銀又はベンゾフロキサンである、請求項１１記載の方法。 13 前記抗菌物質を不動化させる、請求項１１又は１２記載の方法。 14 前記抗菌物質を、前記エンクロージャーの内部表面に付着させ、又は内部表面の材料、内部表面又はその一部内に含有させることによって不動化させる、請求項１３記載の方法。 15 酸素除外エンクロージャーでなる容器、その中の非滅菌液体複合メディウム、及び前記液体メディウムを変性させることなく、その内部から分子状酸素を捕捉して、これにより、液体メディウム中での通性嫌気性微生物の生育を阻止するために前記容器内に配置した酸素スカベンジャーを包含してなる組合せ。 16 前記酸素スカベンジャーが前記容器内で不動化されたものである、請求項１５記載の組合せ。 17 前記容器が、その内に、予想される微生物に対して有効な抗菌物質をさらに有する、請求項１５又は１６記載の組合せ。 18 前記抗菌剤が容器内で不動化されたものである、請求項１７記載の組合せ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ジョンストンカイトイギリス国ケンブリッジシービー２・１エヌエヌベイトマンミューズ５

Claims

【特許請求の範囲】１周囲雰囲気との接触を実質的に遮断するように閉鎖された非滅菌液体複合メディウムと接触する微生物の生育を阻止する方法において、該方法は、エンクロージャーから実質的にすべての遊離の分子状酸素を捕捉するために酸素スカベンジャーを使用することを特徴とする、微生物の生育阻止法。２前記微生物が通性嫌気性である、請求項１記載の方法。３前記通性嫌気性微生物の１以上が酵母である、請求項２記載の方法。４前記非滅菌液体複合メディウムが、ミルク又はミルク製品、又はフルーツジュースである、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。５前記フルーツジュースが、オレンジジュース、グレープジュース又はトマトジュースである、請求項４記載の方法。６前記酵素スカベンジャーが鉄及び／又は酸化第一鉄である、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。７前記液体複合メディウムが、板紙層及び内側及び外側サーモプラスチック層でなるラミネートで作製された液体包装用カートン形の容器内に閉鎖されており、前記ラミネート内に任意に１以上の酸素又は他のバリヤー層が存在する、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。８前記酸素スカベンジャーを不動化した形で使用する、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。９前記酸素スカベンジャーを、前記エンクロージャーの内部表面に付着させ、又は内部表面の材料、内部表面又はその一部内に含有させることによって不動化させるか、前記エンクロージャーを封止するキャップ又は他の材料へのインサートとして具備させる、請求項８記載の方法。 10 前記液体メディウム内の遊離の分子状酸素濃度を0.3ｍｇ／ｌより小に低減させる、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。 11 前記液体メディウム内の遊離の分子状酸素濃度を0.1ｍｇ／ｌより小に低減させる、請求項１０記載の方法。 12 酸素スカベンジャーに加えて、前記非滅菌液体メディウムと接触させて抗菌物質を使用する、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。 13 前記抗菌物質が銀又はベンゾフロキサンである、請求項１２記載の方法。 14 前記抗菌物質を不動化させる、請求項１２又は１３記載の方法。 15 前記抗菌物質を、前記エンクロージャーの内部表面に付着させ、又は内部表面の材料、内部表面又はその一部内に含有させることによって不動化させる、請求項１４記載の方法。 16 酸素除外エンクロージャーでなる容器、その中の非滅菌液体複合メディウム、及び前記液体メディウムを変性させることなく、その内部から分子状酸素を捕捉して、これにより、液体メディウム中での微生物の生育を阻止するために前記容器内に配置した酸素スカベンジャーを包含してなる組合せ。 17 前記微生物が通性嫌気性微生物である、請求項16記載の組合せ。 18 前記酸素スカベンジャーが前記容器内で不動化されたものである、請求項１６又は１７記載の組合せ。 19 前記容器が、その内に、予想される微生物に対して有効な抗菌物質をさらに有する、請求項１６、１７又は１８記載の組合せ。 20 前記抗菌剤が容器内で不動化されたものである、請求項１９記載の組合せ。