JPH10509457A

JPH10509457A - 血管出血及びアルツハイマー病の予防及び治療方法

Info

Publication number: JPH10509457A
Application number: JP8516997A
Authority: JP
Inventors: アンダーソン，ステファン
Original assignee: ラトガーズ，ザステイトユニヴァーシティオブニュージャージー
Priority date: 1994-11-22
Filing date: 1995-11-22
Publication date: 1998-09-14
Also published as: AU4239196A; WO1996015799A1; EP0792156A1; EP0792156B1; ATE266417T1; EP0792156A4; DE69533040D1; US5589154A

Abstract

(57)【要約】血栓溶解療法に付きものでアルツハイマー病及びそれに関連した疾患の特性である血管出血を予防し又は治療する方法が提供される。かかる方法は、血栓溶解療法を受ける個人に改良された血栓溶解療法を提供し、アミロイド沈着物の堆積を特徴とするアルツハイマー病等の病気の診断及び治療を可能にする。

Description

【発明の詳細な説明】血管出血及びアルツハイマー病の予防及び治療方法関連出願のクロスレファレンス本願は、１９９４年１１月２２日に出願された米国特許出願番号０８／３４７１４４の一部継続出願である。発明の分野本発明は、血管出血を予防又は治療するための改良された方法に関する。特に、本発明は、血栓溶解療法を受ける個人に改良された血栓溶解療法を提供し、アミロイド沈着物の堆積を特徴とするアルツハイマー病等の病気を診断及び治療する方法に関する。本発明は、更に、アミロイド沈着物に起因する血管及び細胞損傷を防止するための治療薬に関する。本発明は、政府基金から資金援助を受けている（Ｒ０１ＡＧ１０４６２及びＲ０１ＡＧ１１５２５）．政府は、本発明に一定の権利を有する。発明の背景Ｉ．プラスミノーゲン及びプラスミノーゲンアクチベータ血清タンパク質であるプラスミノーゲンは、血液クロットのタンパク質分解溶解（即ち線溶現象）に不可欠な役割を果している。プラスミノーゲンは、不活性な「プロ酵素」である。プラスミノーゲンは、フィブリンに対して特有の親和性を有しているので、血液クロット形成時にクロット内に取り込まれる。プラスミノーゲンのタンパク質分解作用は、活性プロテアーゼであるプラスミンを生成すべく分子に特定的に付着する「プラスミノーゲンアクチベータ（ＰＡ）」により達成される。プラスミンは、血液クロットのフィブリン繊条並びに血液クロットの生成時に生じる他の物質例えばフィブリノゲン、Ｖ因子、ＶＩＩＩ因子、プロトロンビン、ＸＩＩ因子を分解することができる（検討のためにＫ．デノ他「癌研究報告」第４４巻、１３９−２６６頁（１９８５年）、出典を明示することによりその開示内容を本願明細書の一部とする）。プラスミンは、セリンプロテアーゼであり、実質的にアミノ酸であり、トリプシン、キモトリプシン及び膵臓エラスターゼと機械論的相同性を有する。プラスミンは、比較的広範なトリプシン状の特異性を有し、タンパク質及びペプチドをリシル・アンド・アルギニル結合により加水分解する（Ｒ．Ｗ．キャステリノ他、「酵素学の方法」第８０巻、３６５−３８０頁（１９８１年）、Ｋ．ダノ他「癌研究報告」第４４巻、１３９−２６６頁（１９８５年）。二つの種類の天然の哺乳類プラスミノーゲンアクチベータ即ちウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ及び組織型プラスミノーゲンアクチベータ（ｔ− ＰＡ）が、説明されている（Ｋ．ダノ他「癌研究報告」第４４巻、１３９−２６６頁（１９８５年）、デヴィリン他のＰＣＴ出願第ＷＯ８８／０５０８１、カサイア他の米国特許第５０９８８４０号、Ｓ．ハヤシ他の米国特許第４８５１３４５号、ササキ他の米国特許第４２５８０３０号、Ｓ．ハヤシ他の米国特許第５００４６０９号、Ｃ．パイク他の米国病理学ジャーナル」第１３８巻、１０５９− １０６７頁（１９９１年）、Ｅ．Ｌ．マジソン他「ネイチャー」第３３９巻、７２１−７２４号（１９８９年）、Ｆ．ブラシ他「細胞生物学ジャーナル」第１０４巻、８０１−８０４頁（１９８７年）。これらの二つの種類の分子は、組織部位により及びフィブリンによるそれらの作用の刺激により免疫学的に識別される。更に、第三のプラスミノーゲンアクチベータであるストレプトキナーゼも記載されている。ストレプトキナーゼは、ウロキナーゼ及びｔ−ＰＡとは、連鎖球菌により生成された細菌性タンパク質であるという点で異なる。ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ（ＵＫ）は、一つのドメインがトリプシン状のセリンプロテアーゼである多重ドメインタンパク質である（Ｒ．Ｗ．キャステリノ他、「酵素学の方法」第８０巻３６５−３８０頁（１９８１年）、Ｋ．ダノ他「癌研究報告」第４４巻、１３９−２６６頁（１９８５年）、Ｗ．ストラシュバーガ他「ＦＥＢＳ通信」第１５７巻、２１９−２２３頁（１９８３年））。このプロテアーゼのドメインは、アルギニル残基の分離によりプラスミノーゲンをプラスミンに変換する（Ｒ．Ｗ．キャステリノ他「酵素学の方法」第８０巻、３６５−３８０頁（１９８１年）、Ｋ．ダノ他「癌研究報告」際４４巻、１３９−２６６頁（１９８５年））。アミノ酸の配列順序及びトリプシン、キモトリプシン、及びエラスターゼを含む幾つかのセリンプロテアーゼの三次元構造が演繹されている（Ｋ．ダノ他、「癌研究報告」第４４巻、１３９−２６６頁（１９８５年）、Ｗ．ストラシュバーガ他「ＦＥＢＳ通信」第１５７巻、２１９− ２２３頁（１９８３年））。ウロキナーゼは、腎臓内で合成され、尿から回収することができる。これは、活性２鎖タンパク質内にプラスミンによりタンパク質分解を介して分離することができる単一鎖タンパク質である「プロウロキナーゼ」として当初は生成される（デヴリン他、ＰＣＴ出願ＷＯ８８／０５０８１）。組織型プラスミノーゲンアクチベータ（ｔ−ＰＡ）は、血管の管腔に沿って並ぶ細胞即ち内皮細胞により生成される。ウロキナーゼのように、ｔ−ＰＡもまた当初単一鎖分子として生成される（Ｄ．Ｇ．リケン他「生物化学ジャーナル」第２５６巻、７０３５−７０４１頁（１９８１年）、Ｄ．ペニカ他「ネイチャー」第３０１巻、２１４−２２１頁（１９８３年））。公知のプラスミノーゲンアクチベータは、生物学的半減期及びフィブリンに対するそれらの嗜好性等の特徴において、著しく異なる。３種のアクチベータは全て広範に心筋梗塞、脳卒中、動脈閉塞等の血栓の治療用の血栓溶解剤として使用されてきた（カサイ他米国特許第５０９８８４０号、ハヤシ他米国特許第５００４６０９号、ハヤシ他米国特許第４８５１３４５号、ササキ他米国特許第４２５８０３０号）。心筋梗塞、心臓発作、動脈閉塞その他の心臓血管病の治療のためのｔ−ＰＡの投与は、病気の過程で形成される微細な血液クロットの生成につながる。かかるクロットの存在は、病気の臨界性を著しく増大させ、その死亡率をも増加させる。ｔ−ＰＡはプラスミノーゲンをプラスミンに活性化することができるので、望ましくない血液クロットを溶解させるに必要な事象のカスケードを開始することができる。このように、その投与は、著しく心筋梗塞その他の急性心臓疾患にかかる死亡率を減少させる。不幸なことに、ｔ−ＰＡ及びストレプトキナーゼの使用は、特にクマリン又はヘパリン等の抗クロッティング因子と共に投与された場合、一部の人の出血の発生に関係してきた（Ｗ．Ｗ．ペンドレベリー他、「神経学年報」第２８巻、２１０ −２１３頁（１９８９年）、Ｅ．Ｆ．Ｍ．ウィディックス他「脳卒中」第２４巻、５５４−５５７頁（１９９３年）、Ｃ．Ｓ．カセ他「内科学年報」第１１２巻、１７−２１頁（１９９０年）Ｇ．Ｆ．モリナリ「脳卒中」第２４巻、５２３− ５２６頁（１９９３年）。この現象は、ある種の患者特に年配の患者における心臓血管病を治療するためのｔ−ＰＡ及びストレプトキナーゼの利用を限定した（Ｅ．Ｊ．トポル他「薬ニューイングランドジャーナル」第３２７巻、４５−４７頁（１９９２年）、Ｐ．Ｐ．ド・ジャゲール他「米国Ｃｏｌ心臓学ジャーナル」第１９巻、２８９−２９４頁（１９９２）、Ｊ．Ｍ．ゴア他「循環」第１８３巻、４４８−４５９頁（１９９１年）。 II．アルツハイマー病及び関連疾患アルツハイマー病（ＡＤ）は、ヒトの中枢神経の進行性疾患である。これには、中高年層の痴呆、失見当識、記憶喪失、言語、熟考、視覚空間的機能障害、精神医学的兆候等の兆候が伴う。これは、脳の幾つかの領域の退化ニューロンと関係している。アルツハイマー病は、Ｄ．Ｌ．プライス他（「臨床神経薬理学」第１４巻、第９−１４節（１９９１年））、Ｐ．ポールウェン他「核酸研究」第２０巻、６３−６８頁（１９９２年））、Ｂ．レグランド他（医学仮説」第３８巻１１−１９頁（１９９２年）））及びＳ．Ａ．ジョンソン（老化における生物学的研究の検討」第４巻、（Ｍ．ロスシュタイン編、ウィリー・リス社、ニューヨーク、１６３−１７０頁（１９９０年））により検討されている。病理学的には、アルツハイマー病は、細胞内タングルの存在、及びβアミロイドペプチドとして知られた細胞外の３９乃至４３個のアミノ酸ペプチドにより認識される（Ｄ．Ｌ．プライス他、「臨床神経薬理学」第１４巻、第９−１４節、（１９９１年）、Ｍ．Ｂ．ポドリスニィ他「サイエンス」第２３８巻、６６９− ６７１頁（１９８７年）、Ｊ．Ｒ．キューリ他「神経科学研究」第３０巻、６８７−６８９頁（１９９１年）。このペプチドにより形成される原線維は、脳実質の細胞外空間のアミロイド沈着物内で、及び脳の血管要素及びくも膜内で濃縮される（Ｊ．Ｒ．キューリ他、「神経科学研究ジャーナル」第３０巻、６８７−６８９頁（１９９１年）。アルツハイマー病の症例は全て脳実質内でのアミロイドの沈着を示す。アミロイドペプチドは、染色体２１上に位置するＡＰＰ遺伝子により符号化されるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解による分離から生じる。ＡＰＰ遺伝子は、中枢神経の脳細胞内で選択的に発現される。ＡＰＰのｍＲＮＡは、異なるＡＰＰのイソフォームが生成されるように、交互のスプライシングにより及びタンパク質分解による分離により処理される（Ｐ．ポールウェィン他（「核酸研究」第２０巻、６３−６８頁（１９９２年）、Ｄ．Ｌ．プライス他「臨床神経薬理学」第１４巻第９−１４節（１９９１年）。研究者は、ＡＰＰはβ／Ａ４ドメインがセルメンブラン内に部分的に埋設された細胞表面受容体又はトランスメンブラン・タンパク質であると提案している。 β／Ａ４ペプチドの分泌は、かくして、前駆体分子からのドメインの分離を促す（Ｊ．Ｍ．ロック他「生物化学ジャーナル」第２６７巻、２２１４−２２２１頁参照）。アルツハイマー病におけるβ／Ａ４ペプチドの沈着は、一つ以上のＡＰＰイソフォームの所謂「アミロイドジェニック」処理に起因すると言われているが（Ｊ．Ｒ．キューリ他「神経科学研究ジャーナル」第３０巻、６８７−６８９頁（１９９１年））、β／Ａ４ペプチド形成の正確な仕組みは、未だ解明されていない（Ｓ．Ａ．ジョンソン「老化における生物学的研究の検討」第４巻、Ｍ．ロスシュタイン編、ウィリー・リス社、ニューヨーク、１６３−１７０頁（１９９０年）、Ｊ．Ｍ．ロック他「生物科学ジャーナル」第２６７巻、２２１４−２２２１頁（１９９２年）参照）。脳内における神経炎沈着物としての或いは血管壁内でのβアミロイドペプチドの原線維の沈着は、アルツハイマー病、アミロイドーシス−ダッチ型の遺伝性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、ダウン症候群、及び脳アミロイドアンジオパシ（ＣＡＡ）を含む多くの疾患の特徴である。βアミロイド沈着は、また、通常の老化の過程でも生じる（Ｇ．Ｇ．グレナー他、「生物化学生物物理学研究通信」第１２０巻、８８５−８９０頁（１９８４年）、Ｃ．Ｌ．マスターズ他「米国科学アカデミー会報」第８２巻、４２４５−４２４９頁（１９８５年）、Ｓ．Ｇ．ヴァン・デューネン他「米国科学アカデミー会報」第８４巻、５９９１−５９９４頁（１９８７年）、Ｆ．コリア他、「米国病理学ジャーナル」第１２９巻、４２２−４２８頁（１９８７年）、Ｆ．ペレリ他、「神経化学ジャーナル」第５１巻、６４８− ６５１頁（１９８８年））。アミロイド沈着が主に血管内に生じるＣＡＡ及び特にＨＣＨＷＡ−Ｄにおいて、脳出血は、頻繁な事象である（Ｊ．Ｐ．Ｓ．フォンサッテル「神経学年報」第３０巻、６３７−６４９頁（１９９１年）。今日まで、成長段階にあるアルツハイマー病の治療は、無い。二つの治療的試薬、即ちコグネックス及びメンサインが、一部の患者に僅かな救いを提供するように見えるが、病気の進路を変えるものではない。アルツハイマー病の診断、予見、及び治療の重要性に鑑みて、これらの目的を達成するための効果的な手段が強く望まれる。更に、望ましくない出血の危険を防止し或いは減少させる改良された血栓溶解療法を提供することが望ましい。本発明は、かかる改良された診断及び療法を達成するための試薬及び方法を提供する。発明の概要本発明は、血栓溶解療法に伴う血管出血を予防又は治療するための改良された方法に関する。特に、本発明は、かかる療法を受ける個人に、改良された血栓溶解療法を提供すると共に、アミロイドペプチドの沈着により特徴付けられるアルツハイマー病等の病気を診断及び治療するための方法に関する。詳細には、本発明は、個人の潜在的な血管出血、特に急性心臓血管病を患っている個人に対する血栓溶解剤の投与に付随する出血を予防又は治療する方法であって、前記個人にβアミロイドペプチドに特定的に結合する有効量の薬剤を投与することを特徴とする方法を提供する。本発明は、特に、薬剤によるアミロイドペプチドの結合により、アミロイドペプチドが血栓溶解剤と相互作用するのを防止した実施形態に関する。本発明は、また、βアミロイドペプチドに特定的に結合する薬剤が血栓溶解剤によるβアミロイド結合のアンタゴニストであり、血栓溶解剤が組織型プラスミノーゲンアクチベータ又はストレプトキナーゼであり、急性心臓血管病（例えば心筋梗塞、脳卒中、局所貧血、及び肺塞栓等）が望ましくない血栓生成物により引き起こされることを特徴とする本方法の実施形態に関する。本発明は、特に、薬剤がβアミロイドペプチド又はβアミロイドペプチドを含む原線維に結合するが血栓溶解剤（例えば組織型プラスミノーゲンアクチベータ）に結合して刺激するフィブリンの機能を妨げない抗体又は抗体誘導体であることを特徴とする実施形態に関する。本発明は、また、血栓溶解療法を提供して急性心臓血管病に罹った個人に対する血栓溶解剤の投与に付随する潜在的な血管出血を防止又は治療する方法であって、前記個人に有効量のｔ−ＰＡ突然変位誘導体を投与し、前記誘導体が特定的にフィブリンに結合するがβアミロイドペプチドには実質的に結合することができないことを特徴とする方法を提供する。本発明は、更に、個人におけるβアミロイドペプチドの存在を診断する方法であって、前記個人にβアミロイドペプチドに特定的に結合する標識薬剤を該薬剤に結合する前記βアミロイドペプチドのいずれかの検出を可能とするに十分な量で投与し、前記薬剤が（１）βアミロイドペプチド又はβアミロイドペプチドを含む原線維には結合するがフィブリンには結合しない組織型プラスミノーゲンアクチベータ類似体及び（２）βアミロイドペプチド又はβアミロイドペプチドを含む原線維に結合するがフィブリンに結合しない抗体又は抗体誘導体とから成る群から選定されることを特徴とする方法を提供する。本発明は、更に、個人におけるβアミロイドペプチドの存在を診断する方法であって、前記個人から得た材料（例えば、脳脊髄液、尿、組織標本等）をβアミロイドペプチドに特定的に結合する標識薬剤と共に、前記薬剤に結合する前記β アミロイドペプチドのいずれかの検出が可能な量で培養し、前記薬剤が（１）β アミロイドペプチドに結合するがフィブリンには結合しない組織型プラスミノーゲンアクチベータ類似体、組織型プラスミノーゲンアクチベータ及び（２）βアミロイドペプチドに結合するがフィブリンには結合しない抗体又は抗体誘導体、から成る群から選定されることを特徴とする方法を提供する。本発明は、また、個人におけるβアミロイドペプチドの存在を診断する方法であって、前記個人から得た材料を組織型プラスミノーゲンアクチベータ、プラスミノーゲン及びプラスミン基質と共に培養し、前記材料の成分が前記組織プラスミノーゲンアクチベータを刺激して前記プラスミノーゲンをプラスミンに変換する範囲を決定し、前記決定が、前記プラスミン基質の濃度の変化か、或いは、前記プラスミンと前記プラスミン基質との間の反応生成物の濃度の変化を測定することにより行われることを特徴とする方法を提供する。本発明は、更に、個人のアルツハイマー病を予防又は治療する方法であって、前記個人の脳脊髄液内に有効量の組織型プラスミノーゲンアクチベータを任意のプラスミノーゲンと共に投与することを特徴とする方法を提供する。本発明は、更に、個人のアルツハイマー病を予防又は治療する方法であって、前記個人の脳細胞に遺伝子治療を施し、該遺伝子治療が、組織型プラスミノーゲンアクチベータの発現及び分泌を指向するベクターを任意のプラスミノーゲンと共に前記個人の脳脊髄液内に投与することを特徴とする方法を提供する。本発明は、また、個人のアルツハイマー病を防止又は治療する方法であって、前記個人の脳細胞に転写アクチベータを付与し、該アクチベータが脳細胞によりｔ−ＰＡの発現をもたらすに十分であることを特徴とする方法を提供する。本発明は、更に、（Ａ）前記個人の脳細胞に第二の転写アクチベータを付与し、前記第二のアクチベータが、前記脳細胞によるプラスミノーゲンの発現をもたらすに十分であり、（Ｂ）前記個人の脳細胞にプラスミノーゲンを付与する、ことを特徴とする方法の実施形態を特に提供する。本発明は、また、神経成長阻害を予防又は治療する方法であって、個人の神経細胞に、脳内でのトロンビンの活動を阻害してアミロイドペプチドへの又はアミロイドペプチドを含む原線維へのトロンビンの結合を防止する有効量のトロンビンアンタゴニスト（抗トロンビン抗体等）を付与することを特徴とする方法を提供する。図面の簡単な説明図１は、合成βアミロイドペプチドのアミノ酸配列順序、βアミロイドペプチド１−４２、βアミロイドペプチド１−２８及びＨＣＨＷＡ−Ｄに見られる変形例であるβアミロイドペプチド１−２８（ダッチ）を示す。ＨＣＨＷＡ−Ｄの突然変位に対応する残基２２には下線が引かれている。図２は、種々の刺激体の存在下におけるｔ−ＰＡによるプラスミノーゲンの活性化のための、非固定の状態条件での動力学データを示す。図３は、フィブリノゲン（黒三角）、βアミロイドペプチド１−２８（黒四角）及びβアミロイドペプチド１−２８ダッチ（白四角）の存在下における、或いはタンパク質刺激体（黒丸）の不存在下におけるｔ−ＰＡによるプラスミノーゲン活性化のラインウィーバ・バーク計算を示す。好適な実施形態の説明Ｉ．発明の概観組織型プラスミノーゲンアクチベータ（ｔ−ＰＡ）は、血管線溶現象に関係するヒトの主要なプラスミノーゲンアクチベータである。上述したように、急性心臓血管病の治療におけるｔ−ＰＡ投与の血栓溶解効果にも拘わらず、かかる投与は頭蓋内出血の高発生率に帰結した。実際のところ、ｔ−ＰＡ療法の効力についてのＴＩＭＩ−９４及ＧＵＳＴＯ−IIＡ試験の当初の報告では、０．５％以上の頭蓋内出血率を示した（Ｂ．Ｅ．ソーベル、「サーキュレーション」第９０巻、２１４７−２１５２頁（１９９４年））。こうした出血の原因は、未だ認識されていない。しかしながら、Ｂ．Ｅ．ソーベルにより論ぜられているように、因子としては、高血圧、年齢、女性、肝機能障害、ビタミンＫの摂取量、アスピリンの使用量、β遮断薬の使用量、或いは硝酸塩の使用量等の因子が提案されている（Ｂ．Ｅ．ソーベル、「サーキュレーション（循環）」第９０巻、２１４７−２１５２頁（１９９４年））。出血は、プラスミン等のタンパク質分解剤により損傷される血管壁内に微量のアミロイド沈着を有する患者を含む特定の患者における脳血管系の罹患性に起因すると考えられている（Ｂ．Ｅ．ソーベル、「サーキュレーション（循環）」第９０巻、２１４７−２１５２頁（１９９４年））。頭蓋内出血とアミロイド沈着物の存在との間の関係は示唆されてはいるが、アミロイド沈着物と出血との因果関係及びこの関係を遮断する手段は、未だ確認されていない（Ｗ．Ｗ．ペンドルベリー他、「新泌尿器学年報」第２９巻、２１０− ２１３頁（１９９１年）、Ｎ．イシイ他、「神経学／脳神経外科学／精神医学ジャーナル」第４７巻、１２０３−１２１０頁（１９８４年）、Ｃ．Ｓ．カセ他、「内科学年報」第１１２巻、１７−２１頁（１９９０年）、Ｅ．Ｆ．Ｍ．ウィディックス他、「ストローク（脳卒中）」第２４巻、５５４−５５７頁（１９９３年））。本発明は、部分的に、βアミロイドペプチドが報告された頭蓋内出血の原因であるという認識に立脚し、組織型プラスミノーゲンアクチベータ又はストレプトキナーゼと相互作用してこれを刺激することによりプラスミンを生成し、以てかかる血管及び細胞の損傷をもたらす。プラスミンの存在は、タンパク質の分解及びアミロイドが沈着した血管壁の断裂に触媒作用を及ぼす。従って、アミロイドの沈着により引き起こされる血管損傷を減少或いは防止するために、この相互作用を抑制する薬剤を、治療上使用してもよい。かくして、本発明の一態様は、出血、特にｔ−ＰＡ或いはストレプトキナーゼ等の血栓溶解剤の投与により生じる出血を防止する薬剤及び方法に関する。アルツハイマー病の進行におけるアミロイドペプチドの関与の仕組みは、Ｄ．Ｊ．セルコエにより論ぜられている（「神経科学の動向」第１６巻、４０３−４０９頁（１９９３年）、出典を明記することによりその開示内容を本願の一部とする）。更に、アルツハイマー病の患者の脳内には、トロンビン沈着物が沈着することが分かった（Ｈ．アキヤマ他、「神経科学通信」第１４６巻、１５２−１５４頁（１９９２年）、Ｈ．アキヤマ他、「神経生物学的老化」第１５巻、第１２４節（１９９４年））。脳内では、トロンビンは、神経成長抑制剤として機能するように思われ、ニューロンにそれらの神経突起を引っ込めさせる（Ｄ．Ｄ．カニンハム、「ニューヨーク科学アカデミー年報」第６７４巻、２２８−２３６頁（１９９２年）、Ｄ．ゴービッツ他、「米国科学アカデミー会報」第８５巻、３４４０−３４４４頁（１９８８年））。近年、アミロイドプラーク沈着物内に、ｔ−ＰＡを含む多数の低比重リポタンパク質受容体（ＬＰＲ）結合タンパク質が発見された（Ｇ．Ｗ．リーベック他、「神経生物学的老化」第１５巻、第１１７節（１９９４年））。本発明の一態様は、トロンビンがもたらす神経成長抑制がアミロイドの沈着部位におけるトロンビンの沈着を通して生じるという認識に関する。かくして、神経学的障害を防止或いは治療するために、トロンビン−アミロイドペプチド会合を防止或いは抑制するアンチトロンビン又はアンチアミロイド抗体又はβアミロイドペプチド疑似剤等のトロンビン拮抗剤を使用することができる。また、ｔ−ＰＡを活性化するβ／Ａ４アミロイドペプチドの機能により、β／Ａ４アミロイドペプチドの存在を診断するための高感度の方法も提供される。同様に、プラスミンがもたらすアミロイド沈着物の溶解を誘発するために、ｔ−ＰＡ合成を（例えば脳内で）刺激する薬剤を使用することができる。かくして、本発明は、心臓血管病の場合に血栓溶解インタベンションのための改良された治療法を提供すると共に、アルツハイマー病を処置するための診断療法アプローチを提供する。 II．アミロイド沈着物とｔ−ＰＡとの相関関係アミロイド沈着物の主成分は、遥かに大きい膜結合βアミロイド前駆タンパク質（ＡＰＰ）に由来する分子量約４２００Ｄの３９乃至４３個のアミノ酸残基のペプチドである（Ｊ．カン他、「ネイチャー」第３２５巻、７３３−７３６頁（１９８７）、Ｎ．Ｋ．ロバキス他、「米国科学アカデミー会報」第８４巻、４１９０−４１９４ページ（１９８７年）。ＨＣＨＷＡ−Ｄにおいて、βアミロイドペプチドは、位置２２でグルタミン置換へのグルタミン酸を有する（Ｅ．レヴィ他、「サイエンス」第２４８巻、１１２４−１１２６頁（１９９０年）。アルツハイマー病とＨＣＨＷＡ−Ｄは、いずれもβアミロイド沈着物により特徴付けられるが、二つの病気はβアミロイド沈着物の主要発生部位が異なる。アルツハイマー病では、βアミロイド沈着物は、大脳皮質に顕著に見出されるか、殆どの場合、脳血管壁にもある程度のアミロイド沈着物が生じる（Ｂ．Ｅ．トムリンソン、「グリーンフィールドの神経病理学」第５版（編集者：Ｊ．Ｈ．アダムス、及びＬ．Ｗ．ダッチェン）、１２８４−１４１０頁（エドワード・アーノルド社、ロンドン、１９９２年））。臨床的には、アルツハイマー病は、進行性痴呆により特徴付けられる。ＨＣＨＷＡ−Ｄでは、βアミロイドは、軟膜及び大脳皮質の小又は中血管の壁内に、及びアルツハイマー病の初期のプレアミロイド沈着物に類似の実質沈着物内に顕著に見出される（Ｓ．Ｇ．ヴァン・デューネン他、「米国科学アカデミー会報」第８４巻、５９９１−５９９４頁（１９８７年）、Ｇ．ジアコーン「神経科学通信」第９７巻、２３２−２３５頁（１９８９年））。ＨＣＨＷＡ−Ｄの患者は、最終的に致命的な反復性出血を被る（Ａ．Ｒ．ワッテンドルフ他、「神経科学ジャーナル」第５５巻、１２１−１３５頁（１９８２年）、Ｗ．リューエンディーク他、「神経科学ジャーナル」第８５巻、２６７−２８０頁（１９８８年））。これらの病気のいずれでも、及び脳アミロイド血管障害を生じる他の疾患でも、血管壁に見出されるβアミロイドは、外膜、及び筋層である中膜内に沈着するように思われる。（Ｂ．Ｅ．トムリンソン、「「グリーンフィールドの神経病理学」第５版（編集者：Ｊ．Ｈ．アダムス、及びＬ．Ｗ．ダッチェン）、１２８４−１４１０頁（エドワード・アーノルド社、ロンドン、１９９２年）、Ｈ．Ｖ．ヴィンターズ、「ストローク（脳卒中）」第１８巻、３１１−３２４頁、（１９８７年））。しかしながら、アブルミナル血管基底膜内では、先ず原繊維が血管内腔付近に形成され得る（Ｈ．ヤマグチ他、「米国病理学ジャーナル」第１４１巻、２４９−２５９頁（１９９２年））。アルツハイマー病とＨＣＨＷＡ−Ｄにおけるβアミロイドの由来は明らかにされていないが、血管系がＡＰＰの一つの原因であるということが提案されている（Ｆ．タグリアヴィニ他、「実験研究」第６２巻、７６１−７６７頁（１９９０年）、Ｄ．Ｊ．セルコエ、「神経生物学的老化」第１０巻、３８７−３９５頁（１９８９年））。アミロイド前駆体は、先ず、血管筋組織内で沈着すべき内皮を通過し得る。この仕組みは、ＣＡＡにより冒された血管壁内に多数の血清タンパク質を頻繁に検出するという事実により支持されるが、これは、微小血管系が一定の高分子に対して比較的非特定のリーキネスを示すことを示唆する（Ｊ．Ｍ．パワーズ他、「神経病理学的実験神経学ジャーナル」第４０巻、５９２−６１２頁（１９８１年）、Ｊ．Ｍ．ゴースト他、「神経病理学的実験神経学ジャーナル」第４３巻、４８１−４８８頁（１９８４年））。ヒトの組織型プラスミノーゲンアクチベータ（ｔ−ＰＡ）は、血管内皮に由来する主要な周辺血栓溶解剤である。ｔ−ＰＡによるプラスミノーゲン活性化は、フィブリノゲン及びより効果的にはフィブリン及びフィブリン相似体により刺激される（Ｍ．ホリヤーツ他、「生物化学ジャーナル」第２５９巻、２９１２−２９１９頁（１９８２年））。 βアミロイドがｔ−ＰＡを刺激するフィブリン又はフィブリノゲン類似体として機能するという発見は、抗βアミロイドペプチド抗体がヒトのフィブリノゲン上の配座エピトープと交差反応し、抗フィブリノゲン抗体がβアミロイドペプチドと交差反応するという観察と一致する（Ｒ．Ａ．スターン他、「ＦＥＢＳ通信」第２６４巻、４３−４７頁（１９９０年））。ｔ−ＰＡとβアミロイドの相互作用により、血管壁中のアミロイドペプチド原線維は、ｔ−ＰＡの高局部集中とその結果生じて血管壁のタンパク質分解、破裂，出血に帰結するプラスミンの高局部集中を促進する。 III．血栓溶解療法に付随する血管出血の防止及び治療本発明の中心的態様は、血栓溶解療法（特にｔ−ＰＡ）を受けた一定の個人に観察される望ましくない出血が、沈着部位における投与ｔ−ＰＡのプラスミン生成機能を刺激するβアミロイド沈着物の存在により引き起こされる、という認識に関する。かかるｔ−ＰＡの望ましくない刺激は、βアミロイドペプチド又はその原線維に特定的に結合可能な薬剤を有効量だけ患者に投与することにより減少又は防止することができる。最も好ましくは、薬剤は、フィブリンを結合不能或いは実質的に不能であるように選定される。ここで使用する「特定的な結合」という用語は、二つ以上の分子がそれぞれの構造的特徴により互いに結合する機能を指す。かかる結合がそれぞれの分子の特徴に従属する場合は、ある分子が他の分子に「特定的な結合」可能である、と呼ぶ。この用語は、かかる結合を、関連分子の特定の構造に係わりなく生じる非特定的結合と区別するために使用する（例えば、ニトロセルロースに対するタンパク質の結合は、非特定的結合の例である）。特定的な結合の例としては、抗体の抗原への結合、ホルモンのその受容体への結合等が挙げられる。かかる結合のもしあればその範囲が非結合剤の濃度又は作用における生理学的に関連した変化を生じさせない場合には、ある分子は他の分子に実質的に結合することができない。最も好ましくは、本発明の分子が「極めて特定的な結合」を示し、緊密な関係にある分子に結合することを不可能或いは実質的に不可能にする。ここでは、ある薬剤の投与が当該薬剤を投与されていない患者の出血の可能性に対して投与患者の出血の可能性を減少させるとき、血管出血が当該薬剤の投与により防止されたと言う。かかる投与は、「予防的」なものでもよいし、或いは「治療的」なものでもよい。予防的処置は、その後の出血を防止又は減少させるべく出血の症状に先立ち行われるものである。治療的処置は、出血の検出に対応して行われてかかる出血の程度、範囲、又は過酷さを減少させるものである。治療薬の量は、症状の過酷さの臨床的に著しい変化或いは症状の開始の臨床的に著しい遅延をもたらすに十分である場合、「有効量」と呼ばれる。幾つかの実施形態では、本発明の分子を「純化された」形で用いてもよい。ここでは、ある分子がその自然状態において当該分子と通常関連する分子を欠く製剤内に存する場合、この分子を「純化された」形にあると言う。本発明の好適な結合剤は、抗体又は抗体フラグメントである。かかる抗体は、完全な免疫グロブリンでもよいし、或いは、抗体フラグメント（Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖抗体等）、再結合抗体、抗体融合タンパク質、キメラ抗体等でもよい。かかる分子は、βアミロイドタンパク質又はβアミロイドタンパク質の「機能類似体」であるペプチド又は疑似ペプチド分子との免疫感作に応じて導出される抗体間でスクリーニングすることにより得てもよい。ここでは、「機能類似体」という用語は、「古典類似体」と「疑似類似体」のいずれも含むものとする。ある分子の古典類似体とは、類似の生物学的作用を有して当該分子に化学的に関連したものである。一例を挙げれば、ｔ−ＰＡの非自然的に発生する突然変異体は、ｔ−ＰＡの古典類似体を構成する。同様に、突然変位させたβ／Ａ４アミロイドペプチドは、β／Ａ４アミロイドペプチドの古典類似体の一例を構成する。同様に、ヒト以外の哺乳類（マウス、猿等）から分離された分子は、当該分子の古典類似体の一例である。それに反して、ある分子の「疑似類似体」は、当該分子の生物学的作用は維持するが、化学的には関連していない。ｔ−ＰＡ又はβ／Ａ４アミロイドペプチドの結合部位によく似た構造を有する疑似タンパク質分子は、かかるタンパク質の「疑似類似体」を構成する。β ／Ａ４アミロイドペプチドのアミノ酸配列順序は、配列順序識別番号１に示されている。β／Ａ４アミロイドペプチドの生物学的に活性の好適なフラグメントは、配列順序識別番号１のアミノ酸残基２９−４２を欠く。フラグメントは、配列順序識別番号１に在るアミノ酸残基のみから構成してもよいし、或いは、終点又は部部位から一つ、二つ、又はそれ以上のアミノ酸の欠失、挿入、付加、置換を含んでもよい。かかるフラグメントの例としては、配列順序識別番号１の残基１ −２８から成るペプチドと、アミノ酸残基２２（Ｇｌｕ）をＧｌｎと置換した配列順序識別番号１の残基１−２８から成るペプチドとがある。付加的なｔ−ＰＡ又は抗体結合フラグメントは、直ちに識別してもよい。かかる分子は、プロテアーゼ、臭化シアン等によりβ／Ａ４アミロイドペプチドから分離してもよく、その結果得られるフラグメントは、ｔ−ＰＡを特定的に結合及び／又は活性化させる機能について評価される。しかしながら、より好ましくは、エピトープスキャニング（商標）方法（ケンブリッジ・リサーチ・バイオケミカルズ社）を使用して、かかるフラグメントを識別してもよい。かくして、β／Ａ４アミロイドペプチドのアミノ酸の線形配列順序を評価して、予め選定された数の残基によりある集合体の他の構成要素と重なる所定の長さの一連のフラグメントを決定する。所定のペプチド長さは、任意の数としてよい。しかしながら、この長さは、ペプチドに一定量の二次構造を付与するに十分大きく、且つ、ペプチドの全ライブラリを合成し得る程度に十分小さいことが好ましい。従って、約６個乃至約２５個のアミノ酸から成る長さが好ましい。所定の数を選定するに際して一般的に考慮すべきことは、抗体により認識される線形エピトープの９０％が６個以下のアミノ酸から成る長さを有することである（Ｈ．Ｍ．ゲイセン他、「米国科学アカデミー会報」第８１巻、３９９８−４００２頁（１９８４年））。予め選定される重なりの範囲は、一般には５０％超であり、好ましくは、ｎを所定のペプチド長さとして重なりが約（ｎ−１）乃至（ｎ−３）であるように選定される。（ｎ−１）の重なりが特に好ましい。ペプチドフラグメントの全ライブラリの配列順序が確認されると、ペプチドは好ましくは多重ピンペプチド合成装置等の自動化シンセサイザを用いて合成される。適当な装置又はペプチド合成サービスは、ケンブリッジ・リサーチ・バイオケミカルズ社、ＩＣＩバイオロジカル・プロダクツ社、チロン・ミミトープス社、ラブ・プロダクツ・インターナショナル社等から得られる。所望の決定基を有するペプチドを識別するために、各ペプチドは、マイクロタイタープレートの凹部に導入され、ｔ−ＰＡを結合及び／又は活性化する機能について評価される。かかる決定は、多様な方法のいずれで行ってもよい。ｔ−ＰＡによるプラスミノーゲンのプラスミンへの変換に対するかかるペプチドの活動度は、プラスミノーゲン活性化の見掛け上の一次速度定数を決定し得る分光光度法を用いて決定される。一実施形態において、ペプチドは凹部表面に固定され、支持体に固定される抗体の範囲を決定することにより分析を行う。より好ましくは、抗血清に結合する βアミロイドペプチド抗原と競合するペプチドの機能を決定する競合酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ）を行う。各ペプチドにより結合する抗体の範囲が決定され、分子の抗原決定基をマッピングするために使用される。決定基が観察されない場合、より大きな所定長さのペプチドを用いてこの方法を繰り返す。観察された決定基の全てがただ一つのフラグメント内に存在するときは、より小さな所定長さのペプチドを用いてこの方法を反復してもよい。このようにペプチドのライブラリを評価して抗原決定基を含む構成要素を識別する。ある特定のペプチドがある免疫決定基を有すると分かると、そのペプチドは、投薬を受けたことのない動物（即ちヒトのβアミロイドペプチドを予め投与されていない動物）内に抗体生成物を誘導するために使用可能である。また、必要に応じて、ペプチドは、それらの免疫性を高めるように改質することができる。従って、スペーサアームと共に或いはスペーサアーム無しでアミノ末端及び／又はカルボキシル末端のシステイン又はリシン残基を含むように、ペプチドを改質してもよい。ペプチドは、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、ヒト血清アルブミン、ＫＬＨ（キーホール・リンペット・ヘモシアニン）又は破傷風トキソイド等の担体に結合してもよい。ヒト血清アルブミンの使用は、オボアルブミン又はウシ血清アルブミンより好ましい。これは、ヒト血清アルブミンが他の種のアルブミンより酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ）及びドットブロットにおいて低いバックグランドレベルを生じさせるためである。急性心臓血管病に罹った或いはこれから回復した個人のクロットを溶解させるためのｔ−ＰＡの投与は、短く離散した期間（一般に、数時間から数日）に亘り行われるので、非ヒト由来の抗体を使用してもよい。従って、抗イデオタイプ又は抗異種免疫作用の発生如何に拘わらず、βアミロイドペプチドに結合するヒト以外の動物のポリクローナル抗体を本発明の方法に従って投与してもよい。例えば５０乃至５００μｇのβアミロイドペプチドを調整して雌の兎又は去勢された雄の羊を免疫感作することにより、適当なポリクローナル抗体を準備してもよい。注射に先立ち、免疫原を好ましくは水中に懸濁して完全フロイントアジュバントと共に乳化する。動物は、多数の内皮部位（好ましくは、被膜下）で注射され、好ましくは、４週間後に最初の免疫感作に用いたペプチド量の半分のβアミロイドペプチド（不完全フロイントアジュバント）を追加免疫される。必要に応じて、完全フロイントアジュバントを用いて月一度の間隔で追加免疫を行って、より高い抗体価を得るようにしてもよい。本発明のこの実施形態において、治療期間が外部由来の抗体を除去するために患者に必要な時間と同じ又はそれより短いため、抗体により提供される治療に逆免疫応答が関係することはない。かかる望ましくない免疫反応が生じる程度まで投与回数又は各投与量は補償のために増加される。ポリクローナル抗体を使用し得るが、マウスモノクローナル抗体が特に好ましい（Ｈ．コプロヴスキー他、米国特許第４１７２１２４号及び第４１９６２６５号公報）。この目的にはＢＡＬＢマウスが好ましいが、等価の系を使用してもよい。動物は、適当なアジュバント（タイターマックス・アジュバント（ヴァクセル、ノークロス、ＧＡ）等）で乳化された約２５μｇの親和力純化βアミロイドペプチド（又はその等価物）で免疫感作することが好ましい。免疫感作は、二つの筋肉内部位、即ち一つは腹腔内の部位、一つは尾の基部の皮下部位で行うことが好ましい。３週間後に通常の生理的食塩水として約２５μｇの抗原の血管内注射を追加することが好ましい。第二の注射から更に約１１日後、マウスから血を抜き取り、血液のスクリーニングを行って抗βアミロイド抗体の存在を確かめてもよい。好ましくは、この目的のために、直接結合エリザを採用する。最も好ましくは、最高の抗体力価を有するマウスに、約２５μｇのβアミロイドペプチド又はフラグメントの第三の血管内注射を実施する。この動物からの脾臓白血球を３日後に回収した後、最も好ましくはポリエチレングリコールを用いて適当な骨髄腫細胞系（例えば、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３骨髄腫細胞系）の細胞と共に溶解する。ハイブリドーマ細胞は、約１週間ＨＡＴ（ヒポクサンチン− アミノプテリン−チミン）選択に基づき細胞を培養することにより選択される。その結果生じたハイブリドーマクローンを、次に、好ましくは直接エリザにより、モノクローナル抗体（“ｍＡｂｓ）乃至βアミロイドペプチドを生成する機能につきスクリーニングしてもよい。かくして、もう一つの実施形態において、本発明は、モノクローナル抗βアミロイドペプチド抗体を表す新規な連続ハイブリドーマ細胞系と、かかる抗体を生成する前記細胞系の使用とを企図する。本発明は、また、動物をβアミロイドペプチドで免疫感作することにより得られる抗βアミロイドペプチド抗体を表す新規な連続ハイブリドーマ細胞系を企図する。抗体は、細胞の生体外培養を通して得てもよいし、或いは、細胞が繁殖して高レベルの抗βアミロイドペプチド抗体を生成することができる場合には当該細胞を組織適合動物内に注入することにより得てもよい。かかる抗体は、動物の腹水流体、リンパ液、血液等から回収することができる。極めて好適な実施形態において、ポリクローナルβアミロイドペプチド抗体の固体群又はモノクローナルβアミロイドペプチド抗体の種は、更にフィブリンに特定的に結合可能なそれらの抗体を除去するために、更にスクリーニングされる。ポリクローナル血清の場合、かかる除去は、固定フィブリンを含むカラムに血清を通すことにより、容易に行うことができる。モノクローナル抗体の場合、かかる除去は、フィブリンに結合する分子の機能を評価し、その後、βアミロイドペプチド及びフィブリンに特定的に結合する抗体を生成するハイブリドーマを除去することにより行うことができる。フィブリンに結合する抗体を除去することにより、フィブリンクロットを溶解すべく投与されたｔ−ＰＡの必要な機能が破壊されることが無くなる。長期に亘る投与が必要な場合には、非免疫性抗体の使用が好ましい。かかる分子は、疑似相同（即ちヒト以外の種により生成されるがヒトの抗体と免疫的に区別しにくい形に改変された）にすることができる。かかる疑似相同分子の例としては、組換えその他の技術により生成された「ヒト化」（即ちヒトにおいては非免疫性の）抗体がある。かかる抗体は、モノクローナル及びポリクローナル抗体の等価物であるが、免疫性が小さく且つ患者による広く許容される。ヒト化抗体は、例えば、ある抗体の免疫性部分を、対応するが非免疫性の部分と置換する（即ちキメラ抗体）ことにより生成してもよい（Ｒ．Ｒ．ロビンソン他の国際特許公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９、Ｋ．アキラ他の欧州特許出願第１８４１８７号、Ｍ．タニグチの欧州特許出願第１７１４９６号、Ｓ．Ｌ．モリソン他の欧州特許出願第１７３４９４号、Ｍ．Ｓ．ニューバーガー他のＰＣＴ出願ＷＯ８６／０１５３３，Ｓ．キャビリー他の欧州特許出願第１２５０２３号、Ｍ．ベター他、「サイエンス」第２４０巻、１０４１−１０４３頁（１９８８年）、Ａ．Ｙ．ルイ他「米国科学アカデミー会報」第８４巻、３４３９−３４４３頁（１９８７年）、Ａ．Ｙ．ルイ他「免疫学ジャーナル」第１３９巻、３５２１−３５２６頁（１９８７年）、Ｌ．Ｋ．サン「米国科学アカデミー会報」第８４巻、２１４−２１８頁（１９８７年）、Ｙ．ニシムラ他「癌研究」第４７巻、９９９−１００５巻（１９８７年）、Ｃ．Ｒ．ウッド「ネイチャー」第３１４巻、４４６−４４９号（１９８５年）、ショー他「国立癌研究所ジャーナル」第８０巻、１５５３−１５５９頁（１９８８年）、これらの全ては、出典を明示することによりその開示内容を本願明細書の一部とする）。「ヒト化」キメラ抗体の概観は、Ｓ．Ｌ．モリソン（「サイエンス」第２２９巻、１２０２−１２０７頁（１９８５年））及びＶ．Ｔ．オイ（「バイオテクニクス」第４巻、２１４頁（１９８６年））により提供されており、出典を明示することによりその開示内容も本願明細書の一部とする。また、適当な「ヒト化」抗体は、ＣＤＲ又はＣＥＡ置換によっても生成することができる（Ｐ．Ｔ．ジョーンズ他「ネイチャー」第３２１巻、５５２−５２５頁（１９８６年）、ベオエヤン他「サイエンス」第２３９巻、１５３４頁（１９８８年）、Ｃ．Ｂ．バイドラー他「免疫学ジャーナル」第１４１巻、４０５３− ４０６０頁（１９８８年）、出典を明示することによりその開示内容を本願明細書の一部とする）。本発明の別の実施形態において、より望ましい血栓溶解療法を達成するためにｔ−ＰＡの突然変位誘導体を投与してもよい。好ましくは、かかるｔ−ＰＡ誘導体は、フィブリンに結合する機能をとどめるが、アミロイド沈着物のアミロイドペプチドに結合することは実質的に或いは完全にできない。かかるｔ−ＰＡ突然変位体は、例えば、ｔ−ＰＡを符号化する核酸分子を突然変位させ、かかる分子を哺乳類の宿主細胞系（例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞）で表現し、かかる突然変位誘発がフィブリンに結合し得るがアミロイドペプチドに結合する機能は減少したｔ−ＰＡの変位体に帰結するかどうかを決定することにより、得てもよい。 IV．アルツハイマー病と関連疾患の診断本発明の第二の態様は、部分的に、アルツハイマー病とＨＣＨＷＡ−Ｄのアミロイドペプチドがｔ−ＰＡを刺激してプラスミノーゲンをフィブリンに付着させるという認識に立脚している。従って、本発明は、患者の脳（即ちＣＮＳ即ち中枢神経）細胞に関係したアミロイドペプチドの存在を診断する手段を提供する。ここで言う「ＣＮＳ細胞」とは、ニューロン、或いは神経膠等の神経細胞と接触した細胞のことである。一実施形態において、かかる診断は、生体内でアミロイドペプチド沈着物の位置及び範囲を撮像することにより行われる。本発明のこの実施形態によれば、ｔ −ＰＡの類似体を個人に投与して、当該類似体のアミロイド沈着物への結合を監視する。最も好ましくは、かかるｔ−ＰＡ類似体は、フィブリンに結合したりプラスミノーゲンを活性化したりする機能を欠くが、アミロイドペプチドに結合するｔ−ＰＡの機能はとどめる。かかる誘導体は、実質的にプラスミノーゲンを活性化することができないｔ− ＰＡ分子（例えば、位置４７８のセリン残基をアラニン残基と置換したｔ−ＰＡ変位体）を突然変位（又は合成）させ、次にβアミロイドペプチドに結合可能な分子をスクリーニングすることにより容易に分離することができる。生体内でのかかる分子の使用は、それらの投与が望ましくない血栓溶解療法を構成しないという利点を有する。また、かかる診断に上述したβアミロイドペプチド抗体を使用してもよい。最も好ましくは、かかる抗体はβアミロイドペプチドに結合することができるが、フィブリンには実質的に結合不能である。最も好ましくは、かかる生体内使用の場合、任意のアミロイド沈着物の位置の撮像を容易にするように、放射線同位体、常磁性標識等により検出可能に標識化される。更に別の実施形態においては、患者から材料（血液、血清、尿、脳脊髄液、組織生検等）を取り出し、上述した抗βアミロイドペプチド抗体又はｔ−ＰＡ類似体を用いてアミロイドペプチドの存在について評価する。これらの分子の検出は、多様な方法のいずれにより行ってもよい。一実施形態において、βアミロイドペプチドに結合可能な抗体が採用され、かかる分子の存在はイムノアッセイ（免疫検定法）を介して決定される。数多くの適当なイムノアッセイの形態が説明されている（Ｒ．Ｈ．ヨーケン「lnfect.Dis．レビュー」第４巻、３５頁（１９８２年）、Ｗ．Ｐ．コリンズ「代替的イムノアッセイ」ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社、ニューヨーク（１９８５年）、Ｔ．Ｔ．ヌゴウ他「酵素イムノアッセイ」プレナム・プレス社、ニューヨーク（１９８５年）、これらは、出典を明示することによりその開示内容を本願明細書の一部とする）。最も単純なイムノアッセイは、対象のβアミロイドペプチド分子を含むと思われるサンプルと共に抗βアミロイドペプチド抗体を単に培養することを含む。対象分子の存在は、当該対象分子に結合された抗体の濃度に比例した存在により決定される。最初から存在する未結合の抗体から対象に結合した抗体を分離し易くするために、典型的には固相が採用される。従って、例えば、サンプルを固形支持体に受動結合し、抗体と共に培養した後、支持体を洗浄して未結合の抗体を除去することができる。より高度なイムノアッセイにおいて、対象分子の濃度は、抗体を支持体に結合した後、対象分子を含むと思われるサンプルに支持体を接触せしめることにより、決定される。固定された抗体に結合した対象分子は、種々の方法のいずれかで検出することができる。例えば、対象分子の二次エピトープに結合可能な標識化された二次抗体の存在下で、支持体を培養することができる。従って、標識化された抗体の支持体上での不動性には対象の存在が必要であり、不動性はサンプル内の対象の濃度に比例する。別のアッセイにおいては、対象をサンプル及び既知の量の標識化対象と共に培養する。サンプル内の対象分子の存在は、抗体結合部位に対して、標識化対象分子と競合する。従って、抗体に結合し得る標識化対象分子の量は、サンプル内の対象分子の濃度に反比例する。上述したように、イムノアッセイの形態は、検出を容易にするために標識化抗体を採用してもよい。放射性同位体イムノアッセイ（ＲＩＡ_s）は、単純さ、高感度及び使用の容易さという利点を有する。放射性標識は、比較的小さな原子寸法を有し、通常では反応速度に影響しない。しかしながら、かかるアッセイは、放射性同位体の崩壊により、反応物の貯蔵寿命が短く、特別な取り扱いと処置を必要とし、複雑且つ高価な分析存在の使用を伴う、という欠点を有する。放射性同位体イムノアッセイは、出典を明示することによりその開示内容も本願明細書の一部としたＴ．Ｓ．ワーク他の「分子生物学における実験技術と生化学」（オランダ・パブリッシング社、ニューヨーク（１９７８年））の特にＴ．チャードの「ラジオイムノアッセイ（放射線免疫検定法）と関連技術」と題された章に記載されている。酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ_s）の形態は、安価な装置を用いて無数の異なる酵素で行い得るので、多数の検出方法（比色、ｐＨ、ガスの発生等）を使用してアッセイを定量化することができる。更に、酵素反応物は、比較的長い貯蔵寿命を有し、放射性同位体イムノアッセイに伴う放射線汚染の恐れが無い。酵素免疫抗体法は、出典を明示することによりその開示内容を本願明細書の一部とした「酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ）及び他の固相イムノアッセイ（ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社、ニューヨーク（１９８８年）Ｄ．Ｍ．ケメニー他編集）に記載されている。これらの理由により、酵素標識は特に好ましい。全ての想到可能なイムノメトリックアッセイにおいて標識として単一の酵素を用いることは好適ではない。その代わりに、特定のアッセイ方式においてどの酵素が適するかを決定する必要がある。酵素の選定にあたり重要な基準は、純酵素の代謝回転数（単位時間あたり酵素部位で製造するために変換される基質分子の数）、酵素製剤の純度、その生成物の検出感度、酵素反応検出の容易さと速度、試験流体内に干渉要素又は酵素類似作用が無いこと、酵素及びその抱合体の安定性、酵素及びその抱合体の調達容易性とコスト等である。適当な酵素の例としては、ペルオキシダーゼ、アセチルコリン、エステラーゼ、アルファ・グリセロール、リン酸デヒドロゲナーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、アスパラギナーゼ、 βガラクトシダーゼ、カタラーゼ、ステロイドΔ5 イソメラーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコース６−リン酸、デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、グリコアミラーゼ、ルシフェラーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ペルオキシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ウレアーゼ、イーストアルコールデヒドロゲナーゼ等がある。ペルオキシダーゼ及びウレアーゼは、その作用を容易に裸眼で可視にする色原体ｐＨ指示薬のために、より好適な酵素標識の中の一つである。かかる酵素標識の代わりに、化学発光、放射性同位体、又は蛍光標識を採用してもよい。適当な放射性同位体標識の例としては、3_H、111_IN、251_I、１３1_I、 32_P、35_s、14_C、51_Cr、57_To、58_Co、59_Fe、75_Se、152_Eu、90_Y、67_Cu、217_Ci、21 1_At、212_Pb、47_Sc、109_Pd等がある。適当な化学発光標識の例としては、ルミナル標識、イソルミナル標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識、シュウ酸エステル標識、ルシフェリン標識、エクオリン標識等がある。適当な蛍光標識の例としては、フルオロセイン標識、イソチオシアナート標識、ローダミン標識、フィコエリトリン標識、フィコシアニン標識、アロフィコシアニン標識、ｏ−フタルアルデヒド標識、フルオレサミン標識等がある。磁性共鳴撮像用には、常磁性標識（3_H、13_C等）が好ましい。Ｖ．アルツハイマー病と関連疾患の予防又は治療本発明の更に別の態様は、アルツハイマー病と関連疾患の予防又は治療に関する。既に説明したように、ＨＣＨＷＡ−Ｄ疾患は、血管表面へのアミロイドペプチドの沈着と、ｔ−ＰＡ従属プロセスにおけるプラスミンによるかかる沈着物のタンパク質溶解とを反映する。本発明の方法によれば、アルツハイマー病は、アルツハイマーのアミロイドプラーク沈着物のβアミロイドペプチドに対するプラスミンによるタンパク質分解により治療してもよい。かかるタンパク質分解は、ｔ −ＰＡを符号化する遺伝子がアルツハイマー病の沈着位置である脳内に顕著には現れないため、アルツハイマー病患者の体内で自然に生じることはない。かくして、本発明の方法によれば、脳脊髄液内へのｔ−ＰＡの投与は、アルツハイマー病の療法を構成する。また、アルツハイマー病を予防又は治療するために、ｔ−ＰＡの合成を誘発する薬剤を患者に投与してもよい。好適な薬剤は、ｔ−ＰＡを符号化するＤＮＡ（デオキシリボ核酸）分子である。かかる遺伝子療法の一般原理は、Ｒ．Ｋ．オールドハム（「生物療法の原理」ラベン・プレス社、ニューヨーク、１９８７年））、Ｓ．Ｓ．ボッグズ（「セル・クローンジャーナル」第８巻、８０−９６頁（１９９０年））、Ｅ．Ｍ．カーソン（「生物学的再生」第４２巻、３９−４９頁（１９９０年））、Ｆ．Ｄ．レドリー（「生物工学、総合論文」第７Ｂ巻、「遺伝子工学」ＶＣＨ出版社、ニューヨーク、３９９−４５８頁（１９８９年）により論ぜられており、出典を明示することによりその開示内容も全て本願明細書の一部とする。かかる方法によれば、ｔ−ＰＡを符号化するＤＮＡ分子は、ベクタ内に注入され、脳細胞又はその後に脳に移植される他の細胞に供給される。組換えアデノウイルスは、かかる体内遺伝子移送に効果的なベクトルである。ｔ−ＰＡ符号化ＤＮＡの転写は、任意の適当な真核生物プロモータにより行うことができる。かかる適当なプロモータの例としては、ＲＳＶ（ラウス肉腫ウイルス）、ＬＴＲ，ＳＶ４０初期プロモータ、（ＣＭＶ：サイトメガロウイルス）ＩＥプロモータ、及びＭＭＴＶ（マウス乳癌ウイルス）プロモータ等がある。特に好適な副実施形態において、遺伝子療法は、ｔ−ＰＡ分泌液を脳脊髄液内に導く配列に、ｔ−ＰＡ符号化ＤＮＡを連結する。最も限られた固体数のトランスフェクション細胞から得た治療的遺伝子生成物の分泌液でも、アミロイド沈着物の周りに高濃度のｔ−ＰＡを含む微環境を形成する。上述したようにかかる遺伝子療法は、既存の疾患を治療するために受容体に適用可能であるが、本発明の原理は、遺伝性突然変位又は体細胞突然変位によりアルツハイマー病に罹りやすい人を含む個人に予防的遺伝子療法を提供することができる。 VI．本発明の分子の投与本発明の上述した治療薬は、薬学的に有益な配合物を調合するために使用される公知の方法に従って調製される。これにより、これらの材料又はそれらの機能誘導体は、薬学的に許容される担体ビヒクルと混合して結合される。他のヒトタンパク質例えばヒト血清アルブミンを含む適当なビヒクル及びそれらの処方は、、例えば、「レミントンの薬理科学」（第１６版、Ａ．オーソル編、マック・イーストンＰＡ社（１９８０年））に記載されている。効果的な投与に適して薬学的に許容し得る配合物を形成するために、かかる配合物は適当量の担体ビヒクルと共に有効量の薬剤を含む。作用継続期間を制御するために、別の薬学的方法を採用してもよい。また、薬剤を錯体化して吸収するポリマを用いて放出制御調合を行ってもよい。制御移送は、適当な巨大分子（例えばポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン、酢酸ビニルエチレン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又は硫酸プロタミン等）、巨大分子の濃度並びに放出を制御するための導入方法を選定することにより行うことができる。放出制御調合により作用継続期間を制御する別の可能な方法は、薬剤をポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）又は酢酸ビニルエチレンコポリマ等の高分子材料の粒子内に導入することである。また、これらの薬剤をポリマ粒子内に導入する代わりに、これらの材料を、例えばコアセルベーション技術により、或いは例えばコロイドドラッグ移送系例えばリポソーム、アルブミンマイクロスフィア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル又はマクロエマルジョン内でヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル等を界面重合することにより形成したマイクロカプセル内で、エントラップしてもよい。かかる技術は、レミントンの薬理科学（１９８０年）に開示されている。出血を治療する好適な方法において、本発明の抗体及び他のアミロイドペプチド結合剤は、血栓溶解剤の投与と同時に又はより好ましくは投与前に供給される。かかる抗体及び他のアミロイドペプチド結合剤は、注射により最も好ましくは静脈内注射により供給される。従来、急性心臓血管病の緊急度にも拘わらず、血栓溶解剤の投入に伴う出血は、心臓血管病の診断が心臓医により確認されるまで、医療従事者にかかる薬剤の投与をためらわせた。本発明は出血の可能性を減少させるので、緊急の医療従事者（医療補助者、救急室の看護人等）により本発明を（単独で或いは血栓溶解剤の投与と組み合わせて）供給してもよい。更に、抗アミロイド抗体の副作用は知られておらず、また、抗体の投与と血栓溶解剤の投与との間の中休みがあることが望ましいので、本発明の抗アミロイド抗体は、急性心臓血管病と疑われる或いはその可能性がある場合の治療に、緊急医療従事者による投与に特に適している。本発明を一般的に説明してきたが、説明のために提供されて特に断りが無い限り本発明を限定しない以下の例を参照して、同じことが一層容易に理解されよう。例１ｔ−ＰＡの作用に対するβアミロイドペプチドの効果ｔ−ＰＡ作用に対するβアミロイドの効果を研究するために、３個の合成ペプチドを使用した（図１）。１個のペプチドは、４２個のアミノ酸を含み、βアミロイドペプチドの全長に相当した（図１）。他の２個のペプチドは、アルツハイマー病又はＨＣＨＷＡ−Ｄで検出されたβアミロイドペプチドの２８個のＮ末端残基を含んだ。βアミロイドペプチド１−２８及び１−２８（ダッチ）は、チロン・ミメトープス・ペプチド・システムから得た。βアミロイドペプチド１−４２は、バッチェム・バイオサイセンス社から得た。ペプチドの純度は、高性能液体クロマトグラフィ及びマス・スペクトロメトリにより達成された。特定の条件下での貯蔵時に、３個のペプチドは容易に、βアミロイドペプチドの特徴である原線維を形成した。原線維の形成は、ペプチドを水中で溶解することにより行われた。１０倍のカルシウム及びマグネシウムの無いリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）が添加されて１倍のＰＢＳ溶液（２．７ｍＭＫＣｌ、１．２ｍＭＫＨ₂ＰＯ₄、１３８ｍＭＮａＣｌ、８．１ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄）を得た。原線維の形成は、βアミロイドペプチドの理論ｐＩにｐＨを調節することにより得た。βアミロイドペプチド１−４２の理論ｐＩは４．９であった。βアミロイドペプチド１−２８の理論ｐＩは５．６であった。βアミロイドペプチド１−２８（ダッチ）は６．２であった。ペプチドの最終濃度は、１ｍｇ／ｍｌであった。原線維の形成は、ペプチドの理論等電点（ｐＩ）に近いｐＨで迅速であることが分かった。原線維は、直ちに或いは二日以内に室温で観察された。懸濁されて凝集したペプチドの小さなアリコートは、炭素被覆して２％（ｗ／ｖ）の酢酸ウラニルで染色された銅グリッド上に吸収された。サンプルは、ＪＥＯＬ１２００ＥＸ電子顕微鏡で試験された。ｔ−ＰＡによるプラスミノーゲンのプラスミンへの変換に対するβアミロイドペプチドの作用は、プラスミノーゲン活性化の見掛けの一次速度定数を決定し得る分光光度法を用いて研究された。アッセイは、触媒効果を決定して、プラスミノーゲンアクチベータレベルを定量化するための単純なシステムを構成する。これは、プラスミノーゲンのプラスミンへの変換がミカエリス・メンテン動力学に従うという知見に基づいている（Ｒ．ホール他、「生物化学」第２５５巻２００５ −２０１３頁（１９８０年）。アッセイは、プラスミノーゲンに関する一次状態である非固定状態下でクロモジェニック基質のＮベンゾエルＬアルギニン−ρニトロアニリド（ＢＡＰＡ）の加水分解を観察することにより、プラスミノーゲンのプラスミンへの変換を引き続き測定する。ＢＡＰＡに対するプラスミンのｋ_catは、理想的には低く、使用されるプラスミノーゲンの濃度での一次反応であるプラスミノーゲンのプラスミンへの変換は、存在するプラスミノーゲンの完全な活性化に必要な時間の少なくとも１／３で行われる。これは、非刺激ｔ−ＰＡの場合のように、触媒効率定数が約１０³Ｍ−¹ ｓ−¹であるとき、使用される実験条件下で２４時間までのデータ収集時間内に変換される。クロモジェニック基質は、実験中にその減少即ち吸光度の過度の蓄積を防止するために、極めて低い加水分解速度が必要である。プラスミノーゲンのプラスミンへの変換の見掛け上の一次速度定数ｋ（_app）は、アッセイから得られる。アッセイにおけるプラスミノーゲンアクチベータの濃度が既知である場合は、見掛け上の触媒効率定数ｋ_cat／Ｋ_m（_app）を計算することができる。アッセイにより得られた結果は、固定した状態条件下で決定された触媒効率の価と良く一致する。触媒効率の決定が十分である場合、このアッセイは、ｋ_cat 及びＫ_mを決定するように構成されたアッセイより実行が相当容易である。伝統的なミカエリス・メンテン研究においては、高濃度でのプラスミノーゲンの溶解性及びプラスミン生成物の初期速度の決定に関する困難が生じる。アッセイは、純化されたプラスミノーゲンアクチベータの動力学的研究に適しており、βアミロイドペプチド等の刺激要素を含む複合混合物内でのプラスミノーゲンアクチベータ作用レベルの決定にも使用することができる。アッセイは、カルシウム及びマグネシウムの無いリン酸緩衝溶液内で、２５° Ｃ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレン（８）ソルビタン）を含むｐＨ７．４（２．７ｍＭＫＣｌ、１３８ｍＭＮａＣｌ、１．２ｍＭＫＨ₂ ＰＯ₄、８．１ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄）で行われた。典型的な反応は、０．５ｎＭのｔ−ＰＡ（アクチヴェイス（商標）ジェネテック社）、０．５μＭのヒトのグルプラスミノーゲン（カルバイオケム社）及び０．６ｍＭのＬ−ＢＡＰＡ（ボーリンガー・マンヘイム社）を含んだ。ヒトのフィブリノゲン（カビ−ヴィトラム）及びβアミロイドペプチドが、０．１ｍｇ／ｍｌ添加された。アッセイ容積は０．９ｍｌであった。反応は、２５°Ｃで４８分の間隔で２４乃至３６時間４０５ｎｍで監視された。決まって、ｋ（_app）測定の場合、〔ｔ−ＰＡ〕＝５×１０^-10Ｍ、〔グルプラスミノーゲン〕＝５×１０^-7Ｍ、〔フィブリノゲン〕＝３．２×１０^-7Ｍ、存在するとき〔ＢＡＰＡ〕＝０．６ｍＭ。動力学パラメータの決定には、ｋ_cat及びＫ_m〔ｔ−ＰＡ〕＝８×１０^-11Ｍ，〔グルプラスミノーゲン〕＝１．７×１０^-7Ｍ乃至７．３×１０^-6Ｍ、〔フィブリノゲン〕＝３．２× １０^-7Ｍ。プラスミノーゲンの濃度は、ρ−ニトロフェニール−ρ′−グアニジノベンゾアーテ（ＮＰＧＢ）（Ｔ．チェース他「生化学」第８巻、２２１２−２２２４頁（１９６９年））。活性ｔ−ＰＡ（１又は２本の鎖）の濃度は、基質に対するよりｔ−ＰＡの親和性が低いため、プラスミン用に使用したものより４倍高いトリタント濃度でＮＰＧＢ滴定により決定された。ＮＰＧＢ滴定による活性ｔ−ＰＡの決定は、クロモジェニックスＡＢ社（スウェーデン）から供給されたデータに基づき、基質Ｓ−２２８８（Ｈ−Ｄ−イソロイシル−Ｌ−プロピル−Ｌ−アルギニン−ρ−ニトロアニリド、カビ−ヴィトラム社から購入）を用いて標準的なアッセイで行われた。グルプラスミノーゲンの調合物は、ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミド電気泳動により均質であった。プラスミノーゲンの同一ロットの変換から生じるプラスミン作用の収量は、ウロキナーゼによる完全な変換後にプラスミン活動度を測定することにより決定された。プラスミン活動度は、標準アッセイＳ−２２８８（Ｈ−Ｄ−イソロイシル−Ｌ−プロピル−Ｌ−アルギニン−ρ−ニトロアニリド、クロモジェニックスＡＢ社、スウェーデン）を用いてプラスミン濃度に相関された。二鎖ｔ−ＰＡ及びプラスミン劣化フィブリノゲンは、架橋されたアフィジェル１０上に固定化されたプラスミンで培養することにより得られた。ジェルは、遠心分離法により除去された。吸光度は、自動細胞チェインジャを有するコントロン分光光度計を用いて決定された。熱電対制御水槽には、キュベットホルダが接続された。活性化の見掛け上の一次速度定数ｋ（ａｐｐ）は、データを以下の等式に当てはめて得た。ここで、Ａｂｓは、４０５ｎｍの吸光度であり、〔ｐｌｇ〕０はプラスミノーゲンの初期濃度、ａ〔_BAPA）はＢＡＰＡに対するプラスミンの固有の活動度、ｔは時間、Ａｂｓ０は初期吸光度、ｋ（_app）及びａ（_BAPA）は独立変数である。非線形回帰プログラム（Ｒ．Ｊ．リーセルバロー「エンジフィッタ」、エルセビール・サイエンティフィック社、ニューヨーク（１９８７年））が使用された。プログラムは、初期プラスミノーゲン濃度を定数として、ａ（_BAPA）及びＡｂｓ０を可変パラメータとして実行した。変数のそれぞれの評価で得られた標準誤差は、１０％を超えなかった。図２に示した曲線は、二つの独立した実験で得られた平均値ｋ（_app）に対応する曲線である。ａ（_BAPA）及びＡｂｓ０は、正規化された。合成βアミロイドペプチドを非凝集形態でこのシステム内で分析すると、使用したペプチドの濃度でのフィブリノゲンよりｔ−ＰＡに対してより大きな刺激効果を有することが分かった（図２）。３個のペプチドの間では刺激の程度に僅かな差が在るに過ぎなかった。その後の一連の実験で、βアミロイドペプチド（非凝集及び凝集形態）、フィブリノゲン、及びフィブリンに比肩し得る刺激効果を有する臭化シアン生成のフィブリノゲンフラグメントの刺激作用が試験された（Ｗ．ニューベンフューゼン他「生化学ジャーナル」第１７４巻、１６３−１６９頁（１９８８年））。多数の対照タンパク質も試験され、これらはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、オボアルブミン、ピルビン酸キナーゼ、及びアポフェリチンであった。副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）及び成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）も、また、それらが同様の寸法（それぞれ４１個と２９個のアミノ酸）と同様の含有量の疏水性残基を有していること並びにｐＩがβアミロイドペプチドのｐＩと同様である（ＣＲＦ、ｐＩ、４．９８）か又は反対である（ＧＲＦ、ｐＩ、１０．３８）という事実に基づいて、対照ペプチドとして使用された。これらのペプチドは、ｐＨが理論ｐＩに調製されると溶液から沈殿し、原線維を形成しなかった。プラスミノーゲン活性化の見掛け上の一次速度定数は、異なる刺激体の存在下で、ｔ−ＰＡによる（０．５ｎＭのｔ−ＰＡを用いた）非固定状態条件の下で得られた。これらのタンパク質の有無（表１）で計算された見掛け上の一次速度定数は、βアミロイドペプチドが全ての対照タンパク質と異なりｔ−ＰＡの作用に対して著しい刺激効果を有しているということを示した。表１において、ｋ（_ap _p ）は、平均値±２乃至６の独立実験の標準誤差であり、タンパク質は、各アッセイにおいて０．１ｍｇ／ｍｌであった。凝集された材料は、短期間（Ｓは、アッセイに先立ち２週間以下の間０．０２％のアジ化ナトリウムと共に４°Ｃで貯蔵された材料の使用を示す）貯蔵された材料か、或いは長期間（Ｌは、アッセイに先立ち６−１０週間０．０２％のアジ化ナトリウムと共に４°Ｃで貯蔵された材料の使用を表す）貯蔵された材料を使用して評価した。短期凝集の場合、刺激効果に著しい増加は殆ど無かった。しかしながら、０．０２％のアジ化ナトリウムと共に４°Ｃで長期貯蔵した後では、ペプチドの非凝集と凝集形態の間では効果に大きな変動が観察された。幾つかの凝集サンプルでは、非刺激ｔ−ＰＡの場合より少なくとも５０倍大きい活性化一次速度定数が得られた。これらの活性化速度は、フィブリンに対して得られたものに比肩し得る。従って、高度に凝集された形態のペプチドは、非凝集形態よりｔ−ＰＡの作用に対してより顕著な刺激効果を有すると思われる。βアミロイドペプチド１乃至２８の効果は、周辺線維素溶解経路におけるプラスミノーゲンの他の主要アクチベータであるウロキナーゼの作用について凝集及び非凝集形態で評価された。刺激効果は、検出されなかった。別の実験では、ｔ−ＰＡによるプラスミノーゲン活性化の初期速度は、異なるアッセイ方式を用いて固定状態条件下で得られた。触媒効率は、活性化の見掛け上の一次速度定数の決定を通して得られる触媒効率と比較され、ｋ_cat／Ｋm（_ap _p ）と定義された。アッセイは、速度分析において上記使用されたものと同じアッセイ媒体で実施された。プラスミンへのプラスミノーゲン変換の初期速度は、プラスミン・クロモジェニック基質Ｓ２２５１（ＨＤ−ヴァリル−Ｌ−リシン−ｐ−ニトロアニリド、キャビ−ヴィトラム社）を用いて計算された。フィブリノゲン又は非凝集βアミロイドペプチド１乃至２８の有無に基づいたｔ−ＰＡによるプラスミノーゲン活性化のラインウィーバ・バークプロット（二重逆数プロット）により、ｋ_cat及びＫ_mを決定した。βアミロイドペプチドの場合、フィブリノゲンの場合に観察されたように、Ｋ_mは非刺激ｔ−ＰＡよりも低く、ｋ_catは高かったが、変化はより顕著ではなかった。これらのアッセイで得られた触媒効率（ｋ_cat／Ｋ_m）により、触媒効率の値が非固定状態条件下で予め得られたプラスミノーゲン活性化の見掛け上の一次速度定数から導かれることが確認された（表１及び図３）。動力学的データは、表２にまとめられている。要するに、上記例は、βアミロイドペプチドが体内でｔ−ＰＡの作用を刺激することができるということを示している。アルツハイマー病の殆どの症例では、 βアミロイドペプチドは、血管壁よりもむしろ主として脳実質沈着物として沈着する。この状況は、血管が主に冒されるＨＣＨＷＡ−Ｄの場合と対照的である。実験は、脳血管のβアミロイドペプチドが血管系に由来することを示唆している（Ｆ．タグリアヴィニ他「実験研究」第６２巻、７６１−７６７頁（１９９０年）、Ｄ．Ｊ．セルコエ「神経生物学的老化」第１０巻、３８７−３９５頁（１９８９年）、Ｃ．ハス他「ネイチャー」第３５９巻、３２２−３２５頁（１９９２年）、Ｃ．Ｌ．ジョアチム他「ネイチャー」第３４１巻、２２６−２３０頁（１９８９年））。アルツハイマー病のアミロイドペプチドとＨＣＨＷＡ−Ｄのβアミロイドペプチドとの間に見られる沈着パターンの相違は、親水性及び／又は等電点の違いに起因すると思われる。ＨＣＨＷＡ−Ｄペプチドの突然変位は、溶解性を減少させ、ペプチドのｐＩを血液のｐＨに一層接近させる。これらの変化により、βアミロイドペプチドは異なるプロペンサイトを有するようになり原線維凝集体を形成すると共にＨＣＨＷＡ−Ｄ患者の脳血管系内に原線維の著しい沈着を招来する。血管内のβアミロイドの沈着は血管壁を構造的に弱化させ、結果的に出血を引き起こすことが示唆されている（Ｒ．Ｍ．トラック、病理学アメリカンジャーナル第８１巻、３４９−３６６頁（１９８２年）。本発明の知見は、βアミロイド原線維の存在に関係した脳疾患の病因が、部分的にはｔ−ＰＡによるプラスミノーゲン活性化の不適切な刺激の結果であることを示している。血液内では、自由プラスミンがアルファ２−抗プラスミンにより急速に中和されることが知られている。従って、フィブリン表面に生じるものと同様、ｔ−ＰＡ及びプラスミノーゲンは、βアミロイドペプチド原線維に結合することができ、新たに形成された結合プラスミンはアルファ２−抗プラスミンの作用から保護される（Ｈ．Ｒ．リネン他「血栓溶解止血セミナー」第８巻、２−１０頁（１９８２年）、Ｃ．トラン −サン他「血液」第６３巻、１３３１−１３３７頁（１９８４年））。かかる状況は、慢性の場合に、βアミロイドペプチド沈着から生じる血管壁の損傷する作用を構成する。プラスミンの高度の局部集中は、血管壁の破裂につながる血管の損傷を引き起こす。この状況は、特に、血管内のβアミロイドペプチドの沈着が広範囲に亘るＨＣＨＷＡ−Ｄに関係が深い。要するに、ｔ−ＰＡに対するβアミロイドペプチドの作用の分析により、アルツハイマー病とＨＣＨＷＡ−Ｄを特徴付けるβアミロイドペプチドが、ｔ−ＰＡによるプラスミノーゲン活性化に対してｔ−ＰＡの公知の刺激体に比肩し得る著しい刺激効果を有することが明らかになった。この知見は、アルツハイマー病、ＨＣＨＷＡ−Ｄ、ＣＡＡ関連の脳出血の止血を研究して制御する手段を提供するという点で重要である。これは、また、急性心臓血管病のｔ−ＰＡ又はストレプトキナーゼ治療を受けた患者に生じる脳内出血に起因する死に対する説明も提供する（Ｗ．Ｗ．ペンドレベリー他「神経学年報」第２８巻、２１０−２１３頁（１９８９年）、Ｅ．Ｆ．Ｍ．ウィディックス他「ストローク（脳卒中）」第２４巻、５５４−５５７頁（１９９３年）、Ｃ．Ｓ．カセ他「内科学年報」第１１２巻、１７−２１頁（１９９０年））。例２活性部位Ｉ¹²⁵標識組織型プラスミノーゲンアクチベータは、クリングルに基づいて合成アミロイド原線維に結合する。放射性標識ｔＰＡ及びアミロイド原線維に対する定性的研究を行った。ｔＰＡフィブリン結合を対照として使用することにより、ｔＰＡがβ１−２８及びβ１ −４０ペプチドから形成されたアミロイド原線維に結合することが分かった。結合混合物へのε−アミノカプロン酸の添加によりアミロイド結合に競合することができ、これは、ｔＰＡアミロイド結合がクリングルに基づいていることを示す。ｔＰＡの活性部位放射性ヨウ素化。ペプチジルクロロメチルケトンは、活性部位のヒスチジンに共有結合することによりセリンプロテアーゼを不可逆的に抑制する。Ｄ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−クロロメチルケトン（バケム・バイオサイエンス社）は、クロラミンＴ法により放射性ヨウ素化された後、ｔＰＡの活性部位を改変するために使用される（ケプト他「生化学分析」第２０６巻７３−８３頁（１９９２年）。１ｍＣｉのＩ¹²⁵が、ｐＨ７．５で、１ＭのＴｒｉｓ−ＨＣＬ内のＹＰＲｃｋ、及び０．０１％のトゥイーン２０と混合された。ヨウ素化を開始するために１０μｌの１ｍｇ／ｍｌクロラミンＴを添加した。１分後、２０ μｌの１ｍｇ／ｍｌメタ重亜硫酸ナトリウムを添加してクロラミンＴ及びヨウ化物を減少させた。次に１５μｌの１ｍｇ／ｍｌｔＰＡを添加し、混合物を室温で１時間培養して、ＹＰＲｃｋをｔＰＡに結合させた。放射性標識ｔＰＡは、自由ヨウ化物及び不反応ＹＰＲｃｋから、ＰＢＳ及び０．００３％のトゥイーン２０で予め平衡させたＰＤ１０カラムを用いて純化した。標識タンパク質を、２０° Ｃで貯蔵した。合成アミロイド原線維形成。β１−２８（チロン・ミモトープス・ペプチド・システム社）及びβ１−４０（バケム・バイオサイエンス社）ペプチドを、水に溶かした。凝集体の溶解条件は、１倍ＰＢＳ、１ｍｇ／ｍｌのβペプチドであり、ｐＨはペプチドの理論ｐＩに調節された（β１−２８は５．６、β１−４０は４．９）。溶液は室温に維持された。原線維形成は、光散乱及び透過型電子顕微鏡により確認された。アミロイド原線維又はフィブリンへの活性部位標識ｔＰＡの結合。ｔＰＡ結合は、ヒギンズ及びヴェアの方法の変形により決定された（「生化学」第２６巻、７７８６−７７９１巻（１９８７年））。約０．５ｎＭの標識ｔＰＡは、ｐＨ７．４の１倍ＰＢＳ、０．０１％のトゥイーン８０及び０．５％のＢＳＡ内で０．１ｍｇ／ｍｌ（最終）のβ−ペプチド原線維と結合された。２５°Ｃで１時間後、混合物を１００００ｒｐｍ以上で遠心分離し、原線維を小球状にした。上澄み液のアルクオットは、ガンマ放射を考慮した。原線維に結合されたパーセント標識ｔＰＡは、結合混合物のカウントを原線維を有しない対照と比較することにより決定した。標識ｔＰＡタンパク質結合面が放射性ヨウ素化により変化しないということを確認するために、原線維をフィブリノゲンと置換することにより当該面をフィブリンに結合した。フィブリンのクロット形成は、０．４単位／ｍｌ（最終）のヒトのトロンビンを加えることにより開始された。アッセイの残りの部分は、上述したように行った。 ε−アミノカプロン酸を用いたアミロイド原線維及びフィブリンへのクリングル従属標識ｔＰＡの結合の抑制。結合溶液は、０．１Ｍのε−アミノカプロン酸を含んだ点を除き、上述したように準備された。これらの実験の結果を表３に示す。以上、本発明を特定の実施形態に基づき説明してきたが、本発明が更に変形可能であること、並びに本願が、本発明の関係する従来技術の範囲内で公知又は慣習的な実施に相当して上述した本質的な特徴に適用し得ると共に添付請求の範囲に従うような本開示からの乖離を含んで一般に本発明の原理に従った本発明の変形、使用、又は適合を包含するものであることは理解されたい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 39/395 ＡＡＣＧ０１Ｎ 33/53 Ｄ 48/00 ＺＮＡＡ６１Ｋ 37/54 ＡＣＡ 49/00 37/52 ＡＢＮＣ１２Ｎ 15/09 37/465 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．個人の潜在的な血管出血を予防又は治療する方法であって、前記個人に、β アミロイドペプチドに又はβアミロイドペプチドを含む原線維に特定的に結合する有効量の薬剤を投与する、ことを特徴とする方法。２．前記個人が急性心臓血管病を患っており、前記血管出血が血栓溶解剤の投与に付随する、ことを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。３．前記βアミロイドペプチドに又はβアミロイドペプチドを含む原線維に特定的に結合する薬剤が、βアミロイドペプチドに基づいたプラスミノーゲン活性化のアンタゴニストである、ことを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。４．前記血栓溶解剤が、組織型プラスミノーゲンアクチベータである、ことを特徴とする請求の範囲第２項記載の方法。５．前記血栓溶解剤が、ストレプトキナーゼである、ことを特徴とする請求の範囲第２項記載の方法。６．前記急性心臓血管病が、望ましくない血栓生成物により引き起こされる、ことを特徴とする請求の範囲第２項記載の方法。７．前記急性心臓血管病が、心筋梗塞、脳卒中、局所貧血、及び肺塞栓から成る群から選定される、ことを特徴とする請求の範囲第６項記載の方法。８．前記薬剤がタンパク質である、ことを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。９．前記タンパク質が、βアミロイドペプチド又はβアミロイドペプチドを含む原線維に結合するが組織型プラスミノーゲンアクチベータに結合して刺激するフィブリンの機能を妨げない抗体又は抗体誘導体である、ことを特徴とする請求の範囲第８項記載の方法。１０．血栓溶解療法を提供して急性心臓血管病に罹った個人に対する血栓溶解剤の投与に付随する潜在的な血管出血を防止又は治療する方法であって、前記個人に有効量のｔ−ＰＡ突然変位誘導体を投与し、前記誘導体が、特定的にフィブリンに結合するが、βアミロイドペプチドには実質的に結合することができない、ことを特徴とする方法。１１．個人におけるβアミロイドペプチドの存在を診断する方法であって、前記個人に、βアミロイドペプチドに特定的に結合する標識薬剤を、該薬剤に結合する前記βアミロイドペプチドのいずれかの検出を可能とするに十分な量で投与し、前記薬剤が、（１）βアミロイドペプチド又はβアミロイドペプチドを含む原線維には結合するがフィブリンには結合しない組織型プラスミノーゲンアクチベータ類似体、及び（２）βアミロイドペプチド又はβアミロイドペプチドを含む原線維に結合するがフィブリンに結合しない抗体又は抗体誘導体、とから成る群から選定される、ことを特徴とする方法。１２．前記標識が、放射性又は常磁性である、ことを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。１３．個人におけるβアミロイドペプチドの存在を診断する方法であって、前記個人から得た材料を、βアミロイドペプチドに特定的に結合する標識薬剤と共に、前記薬剤に結合する前記βアミロイドペプチドのいずれかの検出が可能な量で培養し、前記薬剤が、（１）組織型プラスミノーゲンアクチベータ、（２）βアミロイドペプチドに結合するがフィブリンには結合しない組織型プラスミノーゲンアクチベータ類似体、（３）βアミロイドペプチドに結合するがフィブリンには結合しない抗体又は抗体誘導体、から成る群から選定される、ことを特徴とする方法。１４．前記標識が、放射性、常磁性、酵素性、蛍光性、又は化学発光性である、ことを特徴とする請求の範囲第１３項記載の方法。１５．個人におけるβアミロイドペプチドの存在を診断する方法であって、前記個人から得た材料を、組織型プラスミノーゲンアクチベータ、プラスミノーゲン及びプラスミン基質と共に培養し、前記材料のβアミロイド成分がもし在るなら前記組織プラスミノーゲンアクチベータを刺激して前記プラスミノーゲンをプラスミンに変換する範囲を決定し、前記決定が、前記プラスミン基質の濃度の変化か、或いは、前記プラスミンと前記プラスミン基質との間の反応生成物の濃度の変化を測定することにより、行われる、ことを特徴とする方法。１６．前記標識が、放射性、常磁性、酵素性、蛍光性、又は化学発光性である、ことを特徴とする請求の範囲第１５項記載の方法。１７．個人のアルツハイマー病を予防又は治療する方法であって、前記個人の脳脊髄液内に、有効量の組織型プラスミノーゲンアクチベータを投与する、ことを特徴とする方法。１８．更に、前記個人に、有効量のプラスミノーゲンを投与する、ことを特徴とする請求の範囲第１７項記載の方法。１９．個人のアルツハイマー病を予防又は治療する方法であって、前記個人のＣＮＳ細胞に遺伝子治療を施し、該遺伝子治療が、組織型プラスミノーゲンアクチベータの発現及び分泌を指向するベクター、又はベクターを含む細胞を前記個人の脳脊髄液内に投与する、ことを特徴とする方法。２０．更に、前記個人に有効量のプラスミノーゲンを投与する、ことを特徴とする請求の範囲第１９項記載の方法。２１．個人のアルツハイマー病を防止又は治療する方法であって、前記個人の脳細胞の転写活性化を生じさせる分子を付与し、前記活性化が前記脳細胞によりｔ −ＰＡの発現をもたらすに十分である、ことを特徴とする方法。２２．更に、（Ａ）前記個人の脳細胞に第二の転写アクチベータを付与し、前記第二のアクチベータが、前記脳細胞によるプラスミノーゲンの転写をもたらすに十分であり、（Ｂ）前記個人の脳細胞にプラスミノーゲンを付与する、ことを特徴とする請求の範囲第２１項記載の方法。２３．βアミロイドペプチドには特定的に結合するが、フィブリンには結合しない薬剤。２４．前記薬剤が、（１）βアミロイドペプチドに結合するがフィブリンには結合しない組織型プラスミノーゲンアクチベータ類似体と、（２）βアミロイドペプチドには結合するがフィブリンには結合しない抗体と、（３）βアミロイドペプチドに結合するがフィブリンには結合しない抗体誘導体と、から成る群から選定される、ことを特徴とする請求の範囲第２３項記載の薬剤。２５．神経成長阻害を予防又は治療する方法であって、個人の神経細胞に、βアミロイドペプチドへの又はβアミロイドペプチドを含む原線維へのトロンビンの結合を阻害する有効量の分子を付与する、ことを特徴とする方法。２６．前記分子が、抗トロンビン抗体、抗βアミロイド抗体、及びβアミロイド疑似ペプチド類似体から成る群から選定される、ことを特徴とする請求の範囲第２５項記載の方法。