JPH10509776A

JPH10509776A - 毛玉形成しにくい性質を有する編織布を得る方法

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Publication number: JPH10509776A
Application number: JP8517262A
Authority: JP
Inventors: ルン，ヘンリック; ヘストペデルセン，ハンネ
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1994-12-05
Filing date: 1995-12-05
Publication date: 1998-09-22
Also published as: BR9509949A; AU3979195A; DE69536052D1; HUT77195A; CN1168705A; ATE460532T1; EP0796365B1; PL320746A1; EP0796365A1; MA23738A1; TW316930B; MX9703931A; US5916798A; WO1996017994A1; CN1092265C; TR199501537A2

Abstract

(57)【要約】好ましくは、少なくとも４、より好ましくは少なくとも 4.5の毛玉形成記録に相当する、非常に毛玉形成しにくい傾向を有するセルロース編織布を得る方法であって、この方法は未処理セルロース編織布を基準にして２％未満の重量損失に相当する繊維表面の部分加水分解を行うことができるセルラーゼを用いて布帛を処理することを含んでなる。セルラーゼは、好ましくはフミコラインソレンス(Humicola insolens)DSM 1800、配列番号：１から由来するか又はそれによって生産可能な43kDエンドグルカナーゼ、又は該セルラーゼの機能的類似体、例えば位置８，55，58，62，67，132，147，162，221，222，223，280 の１個所又はそれ以上のアミノ酸残基を置換することによって修飾されるか；又は位置 213からの任意の位置でのトランケーションにより、好ましくは遺伝的トランケーションにより修飾された変異体である。

Description

【発明の詳細な説明】毛玉形成しにくい性質を有する編織布を得る方法本発明は、著るしく毛玉形成しにくい傾向を有するセルロース編織布を得る方法に関する。更に詳しくは、本発明はセルロース編織布を、実質的重量損失なしでセルラーゼを用いた酵素処理して委ねる方法に関する。発明の背景仕上げ成分の適用抜きでは、大抵の綿布帛および綿ブレンド布帛は、相当に硬くかつごわごわした手触りの外観を有する。布帛表面は又、平滑でない、と言うのは小さな毛羽様のミクロフィブリルが表面から突出しているからである。加えて、比較的短かい期間の着用後、毛玉形成が布帛表面上に現われこれにより布帛表面は魅力に欠ける、着古された外観を与える。軟かくかつ平滑な布帛を得るための公知方法は、セルロース布帛をそれらの製造中セルロース分解酵素に委ねることである。この処理は、バイオ−ポリッシング(Bio-Polishing)(以下、バイオポリッシングという)として公知である、注、B azin J.およびSasserod, ，Mulhouse，フランスにおいて1991年10月21日に提出された論文（これは参考のため本発明に加えられる）を参照のこと。バイオポリッシングは糸の表面の特異的処理であり、これは布帛の湿潤性が損われることなく、手ざわりと外観に関する布帛の品質を改善する。バイオポリッシングの最も重要な効果は、より少ない毛羽ちそして毛玉形成、増加せしめられた光沢／つや、改善せしめられた布帛の手ざわり、増加せしめられた耐久性のある柔軟さおよび改善せしめられた水分吸収性によって特徴づけられる。バイオポリッシングは、編成しそして織んだ布帛の製造の湿式加工において通常行われる。湿式加工は、例えば脱のり、精練、漂白、洗浄、染色／印刷および仕上げの如き工程を含んでなる。これらの工程の各々において、布帛は機械的作用に委ねることができる。しかし、セルロース分解酵素はセルロース繊維表面の加水分解を触媒するので、酵素作用は、必然的に繊維又は布帛の重量損失をもたらすであろう。バイオポリッシングが、繊維表面の制御された部分加水分解を得るような方法で行なわれたとしても、布帛強度の過剰の損失なしで適当なポリッシング効果がこれまで３ −５ｗ／ｗ％の布帛重量損失で得られてきた。そのような重量損失は繊維産業に対し好ましくなく、そして経済的理由によりバイオポリッシングプロセスを望ましくないものとする。従って、本発明の目的は布帛の実質的重量損失がなく著るしく毛玉形成しにくい傾向を有するセルロース布帛を得る方法を提供する。発明の要約驚くべきことに、以下の内容が見出された；すなわち好ましくは単成分セルラーゼを用い、布帛をバイオポリッシングプロセスに委ねることにより、著るしく減少せしめられた重量損失で著るしく毛玉形成しにくい傾向を有するセルロース編織布を得ることが可能である。従って、本発明の方法は、未処理セルロース繊維布帛基準で、２ｗ／ｗ％未満の重量損失に相当するか、又はセルラーゼ処理編織布の重量損失とセルラーゼなしで処理した編織布の重量損失（ブランク）との差異として計算された（％を用いて）約２％未満の重量損失に相当する繊維表面の部分的加水分解を行うことができるセルラーゼを用いてセルロース繊維含有編織布を処理することを含んでなる。発明の詳細な記載布帛本発明に関し、語句「セルロース編織布」および「セルロース繊維含有編織布」は、あらゆるタイプの布帛、特に例えば木パイプおよび綿からのセルロース又はセルロース誘導体を含有するセルロース含有物質から製造された、織ったか又は編成した布帛を示すことを意図する。また、本発明に関し、語句「布帛」は、衣類および他のタイプの加工された布帛を含むことを意図する。セルロース編織布の例は、綿、ビスコース（レーヨン）；リオセル；フラックス（リネン）；ビスコース、綿又はリオセルと他の繊維例えばポリエステルとの全てのブレンド；ビスコース／綿ブレンド、リオセル／綿ブレンド、ビスコース／ウールブレンド、リオセル／ウールブレンド、綿／ウールブレンド；フラックス（リネン）ラミーおよびセルロース繊維に基づく他の繊維であり、例えばウール、ポリアミド、アクリルおよびポリエステル繊維とセルロース繊維との全てのブレンド、例えばビスコース／綿／ポリエステルブレンド、ウール／綿／ポリエステルブレンド、フラックス／綿ブレンド等を含む。本発明に関し、語句「著るしく毛玉形成しにくい傾向」とは、本発明方法を施していない布帛と比較し、処理された（バイオポリッシュされた）布帛表面の表面上の毛玉の形成に対する永久的（そして顕著な）抵抗性を意味するものとする。毛玉形成する傾向は、Sc hweizerische Normen-Vereinigung，キルシュンベーク４，ポストファッハ，CH- 8032 チューリッチ，スイスにおいて出版されたスイス規準 SN 198525に従って試験でき、そしてその出版物は毛玉形成抵抗性の試験を記載しそして一方ではこれはスイス規準SNV 95150(Textiles-Standard climatic conditions and test c onditions for the physical tests under standra chimate conditions)および SN 198 529（Testing of textiles-“Scheuerfestigkeit”-マーチンダーレ法）に基づいている。試験の結果は、「毛玉形成指数」を用いて表わされそしてそれは毛玉形成指数１（相当の毛玉形成）ないし毛玉形成指数５（全く又は極めて殆ど毛玉形成なし）での評点であり、１／２毛玉形成指数も可能である。本発明の好ましい態様において、この方法は、SN 198525(1990)に従い測定された、少なくとも４、より好ましくは少なくとも 4.5、特に５の毛玉形成指数を好ましく有する編織布を提供する。別の好ましい態様において、本発明方法は、対応する未処理編織布よりも少なくとも１、好ましくは少なくとも２、特に少なくとも３高い毛玉形成指数である評点を与え；その絶対的毛玉形成指数は、SN 198525(1990)に従って測定される。本発明によれば、繊維表面の部分加水分解は、約２ｗ／ｗ％未満の重量損失、好ましくは約 1.8ｗ／ｗ％未満の重量損失、より好ましくは約 1.5ｗ／ｗ％未満の重量損失に相当する。重量損失は、制御された条件のもと、すなわち SNV 95150に従って測定される；上記参照。重量損失はセルラーゼ処理編織布の重量損失とセルラーゼなしの編織布の重量損失（ブランク）の差（％による）として表わされる。プロセス前記の如く、布帛のセルラーゼ処理は他の布帛製造手順、例えば湖抜きと同時に、又は布帛の漂白後に行うことができる。次のように理解されるべきである；すなわち、本発明方法は、任意の通常の湿式繊維加工工程において、好ましくは編織布の糊抜き又は漂白後、通常の（周知の）プロセス工程と同時に又は追加のプロセス工程として行うことができる。本法は、高速度循環システム例えばジェット−オーバーフロー染色機、高速度ウインチおよびジガーにおいて典型的に達成されるであろう。有用な高速度システムの例は、ビアンカラニー（イタリー）により製造される「Aero 1000」である。択一的に本法は、例えば、WO 93／20278 として公開された国際出願において開示される如く二工程バイオポリッシイングプロセスで達成でき、ここにおいて第一の工程は本質的に機械的処理なしで行なわれる別個のセルラーゼ処理であり、そして第二の工程が行なわれ、ここにおいて布帛は機械的処理に委ねられる。このセルラーゼ処理はＪ−ボックス中、パッド−ロール上又はパッド−バッチ中で行なわれる。本発明によるセルラーゼ処理および糊抜きは、調和可能なプロセスであり、これらのプロセスは同じ条件、すなわち、pH、温度、用量／時間比等で行うことができる。これらのプロセスを同時に行うことにより、全体の布帛製造プロセスは短かくなる。時間を節約するような順序が、本発明方法の主な利点である。酵素用量は、酵素反応時間に大きく依存する、すなわち比較的短い酵素反応時間は、比較的増加した酵素用量を必要としそして逆も又同様である。一般に、酵素用量は利用可能な反応時間に従って明記され得る。この方法で、本発明に係る布帛のセルラーゼ処理は、もしも例えば２つの反応が同時に行なわれなければならない場合、例えば糊抜き条件に合うようにしてよい。通常のバイオポリッシングから公知であるものに類似した酵素用量／時間比が、使用できる。好ましい酵素用量は、布帛１kg当たり約 100〜約10 0,000ECU、より好ましくは布帛１kg当たり約 500〜約 20,000ECU、特に布帛１kg 当たり約1000〜約5,000ECUである。典型的には、反応時間は、約10分〜約４時間、好ましくは約20分〜約２時間であるが、反応はプロセス装置の特異的タイプに依存して、約１分〜約24時間の間の任意の時間で行うことができる。本発明方法は、セルラーゼ、すなわち製剤化したセルラーゼ組成物に、又は別個に酵素処理が行なわれる洗液に添加できる幾つかの成分の存在下で行うことができる。安定剤は、セルロース分解酵素を安定化する試薬である。湿潤剤は、繊維の湿潤性を改善するのに役立ちこれにより急速でかつ一様な糊抜きを得ることができる。湿潤剤は、好ましくは酸化安定タイプのものである。緩衝剤は、好都合にはホスフェート、ボラート、シトラート、アセタート、アジペート、トリエタノールアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、カーボナート（特にアルカリ金属又はアルカリ土類金属、特に炭酸ナトリウムもしくはカリウム、又はアンモニウムおよび HCl塩）、ジアミン、特にジアミノエタン、イミダゾール又はアミノ酸緩衝剤であってよい。好ましくは、緩衝剤はモノ−、ジ−又はトリエタノールアミン緩衝剤である。分散剤は、好都合には非イオン、アニオン、カチオン、両性又は双性イオン界面活性から好都合に選ばれる。更に詳しくは、分散剤はカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、アルキルアリールスルホナート、長鎖アルコールスルフェート（第一および第二アルキルスルフェート）、スルホン化オレフィン、硫酸化モノグリセリド、硫酸化エーテル、スルホスクシネート、スルホン化メチルエーテル、アルカンスルホネート、ホスフェートエステル、アルキルイソチオネート、アシルサルコシド、アルキルタウリド（alkyl taurides）、フルオロ界面活性剤、脂肪アルコールおよびアルキルフェノール縮合物、脂肪酸縮合物、酸化エチレンとアミンとの縮合物、酸化エチレンとアミドとの縮合物、ブロックポリマー（ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、酸化エチレンもしくはプロレンと縮合したエチレンジアミン）、スクロースエステル、ソルビタンエステル、アルキロアミド、脂肪アミンオキシド、エトキシル化モノアミン、エトキシル化ジアミン、エトキシル化ポリアミン、エトキシル化アミンポリマーおよびこれらの混合物から選ばれる。好ましくは、分散剤はエトキシル化脂肪酸エステル又はノニルフェニルポリエチレングリコールエーテルである。更に、本発明方法は通常の抗再付着剤、例えばポリマー試薬、例えばポリビニルピロリドン(PVP)、カルボキシメチルセルロース(CMC)、およびポリアクリレートの存在下において行うことができる。酵素本発明に関し、語句「セルラーゼ」又は「セルロース分解酵素」はセルロースがグリコース、セロビオース、トリオースおよび他のセロオリゴ糖に分解するのを触媒する酵素をいう。本発明に関して、語句「酵素」又は「セルラーゼ酵素」は、成熟タンパク質又はその前駆形を含みその上本質的に全長酵素の活性を有するそれらの機能的断片を含むことが意図される。更に、語句「酵素」は、該酵素の同族体又は該酵素の類似体を含めることを意図している。そのような同族体は、親酵素、すなわち親セルラーゼのアミノ酸配列と少なくとも60％の同一性の程度を示すアミノ酸アミノ酸配列を含んでなる。同一性の程度は、常法により測定でき、例えば、Altshul et al.，Ball.Math.Bio. 48：603-616，1986、および Henikoff and Henicoff，Proc.Natl.Acad.Sci ．USA 89：10915-10919，1992 を参照のこと。短簡に言えば、２個のアミノ酸配列を、10のギャップ空白ペナルティ、１のギャップ伸長ペナルティ、およびHenikoff and Henicoff(上記参照)の「blosu m 62」スコアリングマトリックスを用いて整合スコアを最適化するように整合させる。択一的に、酵素の同族体又は類似体は、以下の条件下で、ヌクレオチド又はアミノ酸配列を基礎にして作成したオリゴヌクレオチドプローブとハイブリッドするヌクレオチド配列によってコードされたものであってよい：５×SSC 中でプレソーキングおよび20％ホルムアミド、５×Denhardt's溶液、50mMのリン酸ナトリウム、pH 6.8、および50μｇの変性音波処理ウシ胸腺 DNAの溶液中約40℃で１時間予備ハイブリッド形成、次いで約40℃で18時間 100μＭ ATPを加えた同溶液中でのハイブリッド形成、次いで約45℃の温度で 0.4×SSC 中での洗浄。オリゴヌクレオチドプローブがこれらの条件下でハイブリッドする分子を、標準検出手順（例えばサザンブロッティング）を用いて検出する。親酵素の同族体は、１又はそれ以上のアミノ酸置換、欠失又は付加を有することができる。これらの変化は、好ましくは小さな性質のものであり、つまり保存的アミノ酸置換であってタンパク質の折りたたみ又は活性に著るしく影響しないもの、典型的には１〜約30個のアミノ酸の少しの欠失；少しのアミノ−又はカルボキシ−末端伸長、例えばアミノ末端メチオニン残基、約20−25個までの残基の小さなリンカーペプチド、又はポリヒスチジントラクト、抗原性エピトープ又は結合ドメインの如き精製を促進する小伸長である。一般に Ford et al.，Protection Expression and Purification 2：95-107，199 1を参照のこと。保存性置換の例は、塩基性アミノ酸（例えばアルギニン、リシン、ヒスチジン）、酸性アミノ酸（例えばグルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（例えばグルタミンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（例えばロイシン、イソロイシン、バリン）、芳香族アミノ酸（例えばフェニルアラニン、トリプトファン、チロシン）および小アミノ酸（例えばグリシン、アラニン、セリン、トレオニン、メチオニン）の群内のものである。以下の内容は当業者に明らかであろう；すなわち、そのような置換は分子の機能に重要な領域の外側で行なわれることができそして活性酵素を生起する。本発明の酵素の活性に必須であり、それ故好ましくは置換に委ねられないアミノ酸は、当業者に公知の手順、例えば特定部位の突然変異誘発又はアラニンスキャンニング突然変異誘発（Cunningham and Wells，Science 244 ，1081-1085，1989 ）に従って同定される。後者の技術において、突然変異誘発は分子内の全ての残基で導入され、そして生成変異体分子は、分子の活性に重要であるアミノ酸残基を同定するためにセルロース分解活性に対し試験される。リガンド−レセプター相互作用の部位は又、核磁気共鳴、結晶等、又はフォトアフィニティラベルの如き技術により測定される如く結晶構造の分析により決定できる。例えば、Smith et al.，J.Mol.Biol ． 224 ：899-904，Wlodaver et al.，FEBS Lett. 309：59 -64，1992 を参照のこと。同族体は、対立形質の変異体、すなわち変異誘発により生じる遺伝子の択一的形態、又は変異した遺伝子によりコードされるが、本発明の酵素と実質的に同じ活性を有する改変された酵素であってよい。従って、変異誘発は、サイレント(s ilent)(コードされた酵素内に変化なし）であってもよく、あるいは改変されたアミノ酸配列を有する酵素をコードすることもできる。本発明の酵素の同族体は、また属又は種同族体であってよく、すなわち別の種由来の類似の活性を有する酵素であってよい。酵素の同族体は、問題となっている種の細胞のゲノム又はcDNAライブラリーを製調し、次いで例えば Sambrook et al.，MolecularColonig : A Laboratory Ma nual、第２版、Cold Spring Harbor Loboratory，Cold Spring Harbor，ニューヨーク，1989に記載される如き標準法に従って合成オリゴヌクレオチドプローブを用いることにより、又はSambrook et al.(上記)に記載の如き特異的プライマーを用いポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により同族体の全て又は一部をコードする DNA配列についてスクリーニングすることによって単離できる。好ましくは、本発明方法で用いられるべきセルロース分解酵素は、単成分（組換体）セルラーゼであり、すなわち他のタンパク質又はセルラーゼタンパク質を本質的に有しないセルラーゼである。組換セルラーゼ成分は、当業者に慣用の標準法に従ってクローン化され、そして発現される。本発明の好ましい態様において、本法で用いられるべき酵素は、エンドグルカナーゼ（EC 3.2.1.4）であるか、又は単成分（組換体）エンドグルカナーゼである。好ましくは、セルラーゼは微生物セルラーゼであり、より好ましくは細菌セルラーゼ又は菌類セルラーゼである。細菌セルラーゼの例は、シュードモナス(Pse udomonas) 又はバシラスラウタス(Bacillus lautus)から成る属の群から由来するか又はそれにより生産可能なセルラーゼである。セルラーゼ又はエンドグルカナーゼは、酸性、中性又はアルカリ性のセルラーゼ又はエンドグルカナーゼであってよく、すなわちそれぞれ酸性、中性又はアルカリ領域内で最大のセルロース分解活性を示すものである。従って、有用なセルラーゼは、酸性セルラーゼ、好ましくは菌類酸性セルラーゼ、より好ましくはトリコデルマ(Trichoderma)、アクチノマイセス(Actinomyce s)、ミロセシウム(Myrothecium)、アスパラギルス(Aspergillus)およびボツリチス（Botrytis）から成る属の群からの菌類に由来するか又はそれにより生産可能である、酸性条件下実質的にセルロース分解活性を有する菌類酸性セルラーゼ酵素である。好ましい有用な酸性セルラーゼは、トリコデルマビリデ（Trichoderma viri de）、トリコデルマレセイ（Trichoderma reesei）、トリコデルマロンギブラチアタム(Trichoderma longibrachiatum)、マイロセシウムベルカリア（Myr othecium verrucaria）、アスペルギルスニガー(Aspergillus niger)、アスペルギルスオリゼ（Aspergillus oryzae）およびボツリチスシネレ（Botrytis c inerea）から成る種の群からの菌類から由来するか又はそれにより生産可能である。別の有用なセルラーゼ又はエンドグルカナーゼは中性又はアルカリセルラーゼであり、好ましくは中性又はアルカリセルラーゼ、より好ましくはアルカリ条件で実質的セルロース分解活性を有する菌類アルカリセルラーゼ又はエンドグルカナーゼであり、これらはアスペルギルス(Aspergillus)、ペニシリウム(Penicill ium)、マイセリオプトラ（Myceliophthora）、フミコラ（Humicola）、イルペックス(Irpex)、フサリウム（Fusarium）、スタチボツリス（Stachybotrys）、スコプラリオプシス（Scopulariopsis）、ケトミウム（Chaetomium）、マイコゴン（Mycogone）、ベルチシリウム（Vert icillium）、ミロセシウム(Myrothecium)、パプロスポラ(Papulospora)、グリオクラジウム(Gliocladium)、セファロスポリウム（Cephalosporium）およびアクレモニウム（Acremonium）から由来するかはそれらから成る属の群からの菌類により生産可能である。好ましいアルカリセルラーゼは、フミコラインソレンス(Fumicola insolens )、フサリウムオキシスポラム（Fusarium oxysporum）、マイセリオフトラサーモフィル（Myceliophora thermophila）、又はセファロスポリウム（Cephal osporium）sp．から成る種の群からの菌類から由来するか又はそれにより生産可能であるか、又は好ましくはフミコラインソレンス(Humicola insolens)、DSM 1800、フサリウムオキシスポラム（Fusarium oxysporum）、DSM 2672、マイセリオフトラサーモフィル（Myceliophora thermophila）、CBS 117.65、又はセファロスポリウム（Cephalosporium）sp.，RYM-202から由来する。天然又は親セルラーゼの好ましい例は、アルカリエンドグルカナーゼであり、これはフミコラインソレンス(Humicola insolens)、DSM 1800から由来の高精製の約43kDのエンドグルカナーゼに対して生起せしめられた抗体と免疫学的に反応するか、又はこれはセルラーゼ活性を示す約43kDのエンドグルカナーゼの誘導体である。好ましいエンドグルカナーゼ成分は、配列番号１（これは、又 WO 91 ／17243 として公開された国際特許出願（これはその番号を引用して本明細書に加えられる）において配列番号２としても開示される）として含めたアミノ酸配列を有する。別の好ましいエンドグルカナーゼ成分は、配列番号１として示されたアミノ酸配列に相当するがしかし、位置１−213 に相当する（すなわち、位置 213でトランケーションされている）アミノ酸配列を有するコア酵素である。次のように企図されている、すなわち他の有用なエンドグルカナーゼは、配列番号１として示されたアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する酵素（しかし、これは配列番号１の位置 213〜位置 247間の任意の位置でトランケーションされ、好ましくは遺伝的にトランケーションされている）であり、すなわち、213〜247 個のアミノ酸残基から成るアミノ酸配列を有する酵素である。有用なセルラーゼの他の例は、親セルラーゼとして、菌類起源のセルラーゼを有する変異性であり、例えば菌類属フミコラ（Fumicola）、トリコデルマ(Trich oderma)又はフサリウム（Fusarium）の株から由来できるセルラーゼである。例えば、親セルラーゼは、菌類種Ｈ．インソレンス（insolens）、トリコデルマレセイ（Trichoderma reesei）又はＦ．オキンスポラム(oxysporum)の株から由来することができ、好ましくはフミコラインソレンス(Humicola insolens)、D SM 1800から由来する約43kDエンドグルカナーゼであるか、又は該親セルラーゼの任意のものの機能性類似体であり、これはｉ）親セルラーゼのアミノ酸配列と少なくとも60％相同性であるアミノ酸配列を含んでなる、 ii）親セルラーゼに対して生起せしめられた抗体と反応する、および／又は iii）親セルラーゼをコードする DNA配列と同じプローブとハイブリッドする DNA配列によってコードされる。類似体の性質ｉ）は、第二の配列から第一の配列の誘導を示す類似体と親セルラーゼ間の同一性の程度を示すことが意図される。特に、ポリペプチドは、もしも各アミノ酸配列の比較により、約60％以上、例えば70％、80％、85％、90％以上、又は95％以上の同一性を表わす場合、親セルラーゼと相同性があると考えられる。配列の比較は、公知のアルコリズム、例えばLipmanとPerson（1985）により記載されたものを介して行うことができる。親セルラーゼの類似体の追加の性質ii）とiii）は次のように測定できる：追加の性質ii）、すなわち免疫交差反応は、親セルラーゼの少なくとも１つのエピトープに対して生起せしめられているか又はそれと反応する抗体を用いて分析できる。モノクローナル又はポリクローナルのいずれであってもよい抗体は、例えば Hudson et al.，1989に記載される如く当業者に公知の方法で製造できる。免疫交差反応性は、当業者に公知の分析を用いて測定できるが、その例はウェスタンブロッティング又は例えば Hudson et al.，1989に記載される如く放射免疫拡散法である。先に定義した性質iii）に従う類似体の特性化において用いられるオリゴヌクレオチドプローブは、親セルラーゼの全てもしくは部分ヌクレオチド又はアミノ酸配列を基礎にして好都合に製造できる。ハイブリッド形成は DNA配列をハイブリッドせしめるのに好適な条件下で行うことができる。例えば、そのような条件は、例えば５×SSC 中プレソーキングおよび、20％ホルムアミド、５×デンハルト溶液、50mMのリン酸ナトリウム、pH 6.8、および50μｇの変性音波処理したウシ胸腺 DNAの溶液中約40℃で１時間予備ハイブリッド形成、引き続き約40℃で18 時間 100μＭの ATPを加えた同溶液中でのハイブリッド形成又は例えば Sambroo k et al.，1989により記載された他の方法を含む、特異的条件下でのハイブリッド形成である。有用なセルラーゼ変異体の例は、位置８，55，58，62，67，132，147，162，2 21，222，223，280 の１又はそれ以上における１個又はそれ以上のアミノ酸残基を置換することにより修飾するか；そして所望により位置 213からの任意の位置でトランケーションし、好ましくは遺伝的にトランケーションすることによって更に修飾した、フミコラインソレンス(Humicola insolens)、DSM 1800から由来するか又はそれにより生産可能な43kDのエンドグルカナーゼの変異体、配列番号１である。好ましいセルラーゼ変異体は、次の如く： Y8F S55E/D D58A/S/N W62E D67R/N F132A/D/E/G Y147S A162P V221S N222S Q223T Y280F １個又はそれ以上のアミノ酸残基の置換により修飾された、フミコラインソレンス(Humicola insolens)、DSM 1800、から由来するか又はそれにより生産可能な43kDエンドグルカナーゼの変異体、配列番号１である。驚くべきことに、以下の内容が見出された；すなわち、43kD Ｈ．インソレンス、DSM 1800、エンドグルカナーゼの如きアルカリエンドグルカナーゼ、又はその言及した修飾変異体を用いる場合、本発明方法を、約９未満のpH、６未満のpH 、より好ましくは約 4.5〜約 5.5のpH、特に約 5.0のpHで行うことが好都合である。本発明に関し、セルラーゼ活性は ECUで表わすことができる。セルロース分解酵素は、CMCを加水分解し、これによりインキュベーション混合物の粘度が増加する。粘度の減少は、振動粘度計(例えば、ソフラセル，フランスからのMIVI 3000)により測定できる。 ECUで測定される、セルロース分解活性の測定は、次の分析法（分析）に従って行うことができる： ECU分析により、カルボキシルメチルセルロース(CMC)の溶液の粘度を減少せしめるサンプルの能力を測定することによりサンプル中に存在する触媒活性の量を定量化する。分析は、40℃；pH 7.5； 0.1Ｍホスフェート緩衝剤；時間30分で；CMC(カルボキシメチルセルロースハーキュレス７LFD)基質の粘度を減少せしめるための相対的酵素標準物を用い酵素濃度約 0.15ECU／ml で行なわれる。アーチ標準は、8200ECU／ｇに規定する。有用なセルラーゼは、本発明方法においてそのままで用いられるけれども、適当な組成物に製剤化される。従って、有用なセルラーゼは、粒質物、好ましくは無粉塵性粒質物、液体、特に安定化液体、スラリーの形で又は保護された形で用いることができる。無粉塵性粒質物は、例えば、米国特許 4,106,991および米国特許4,661,452(双方ともノボノルディスクに付与)に記載される如く製造されそして所望により当業者に公知の方法でコートされる。例えば、液体酵素調製品は、確立された方法に従い、例えばプロピレングリコール、糖もしくは糖アルコール又は酢酸を添加することにより安定化できる。他の酵素安定剤は、当業者に周知である。保護された酵素は、ヨーロッパ特許23 8216に記載される方法に従がい製造できる。酵素の性能は、プロセス条件、例えばpHおよび温度に大きく依存する。本発明方法を達成する際、勿論例えばpH依存性能および熱安定性の如き因子は、セルロース分解酵素の選択において考慮されるべきである。他の条件、例えば湿潤剤の添加は又、実施されるべき全体プロセス並びに用いられる酵素に依存する。本発明を以下の非限定例により更に説明する。実施例装置：試験は、ビーカー当たり２個のスワッチを用い、アトラスLP２ラウンダ−Ｏ− メーター中で行った。布帛：漂白したからみ合い編みの 100％綿布帛、205ｇ／ｍ²。布帛を寸法14×12cm（各々約 3.5ｇ）の小片に切断し次いで一定条件下20℃でかつ65％の相対湿度で一夜コンディショニングを行った。酵素：Ａ：対照（セルソフトＬ；ノボノルディスク A／S，DK-2880 バグスバエルト，デンマークにより製造されそして市販された商業上の酸セルラーゼ調製品）。Ｂ：フミコラインソレンス(Humicola insolens)、DSM 1800由来の43kDのエンドグルカナーゼＣ：Ｂの変異体（置換D58A）Ｄ：Ｂの変異体（置換F132D）Ｅ：Ｂの変異体（置換Y280F）Ｆ：Ｂの変異体（置換D67R）Ｇ：Ｂの変異体（置換Y147S）Ｈ：Ｂの変異体（置換S55E）Ｊ：Ｂの変異体（置換Y8F，W62E，A162P，V221S，N222S，Q223T）Ｋ：Ｂの変異体（置換Y147N）実験条件：（ラウンダ−Ｏ−メーターバイオポリッシング）４個のビーカー（８個のスワッチ）を各試験に対して行った。液比１：20 液容量 140ml 研磨剤 20個のスチール球（ｄ＝14mm、11ｇ） pH 5.0 緩衝剤１ｇ／ｌアセタート時間 60分温度 55℃ 不活化：全てのスワッチを70℃で洗浄し、次いで標準のヨーロッパ形式家験を停止した。乾燥：スワッチを風乾し次いで20℃および65％の相対湿度で一夜コンディショニングした。試験：商業上の酵素調製品Ａを、布帛の重量基準で０−4.0 ｗ／ｗ％の範囲内で４回の用量で試験した。酵素調製品Ｂ−Ｋの各々を、１ｇの布帛当たり０−5.0ECUの範囲内で４回の用量で試験した。結果：次のパラメーターを測定し／計算した。 ☆ セルラーゼ処理編織布の重量損失とセルラーゼなし（ブランク）の処理の編織布の重量損失の重量損失（％で表わされる） ☆ 500回転でマーチンダーレ（Martindale）ピリングテスターを用いSN 198525 (1990)に従って測定した。未処理布帛について並びにセルラーゼなし（ブランク）で処理した布帛の毛玉形成記録は１であった。次の表は、セルラーゼ処理布帛について得られた毛玉形成記録4.5相当する測定重量損失を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｒ 1:645） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．著るしく毛玉形成しにくい性質を有するセルロース繊維布帛を得る方法であって、該方法が、セルロース繊維含有編織布を、未処理セルロース編織布基準で２ｗ／ｗ％未満の重量損失に相当する繊維表面の部分加水分解を形成することのできるセルラーゼ（セルロース分解酵素）で処理することを含んでなる、前記方法。２．毛玉形成が、少なくとも４、より好ましくは少なくとも 4.5の毛玉形成指数に相当する、請求の範囲第１項記載の方法。３．編織布が、綿、ビスコース（レーヨン）、リオセル(lyocell)から成る群から選ばれるセルロース繊維；ビスコース、綿又はリオセルとポリエステルの如き他の繊維との全てのブレンド；ビスコース／綿ブレンド、リオセル／綿ブレンド、ビスコース／ウールブレンド、リオセル／ウールブレンド、綿／ウールブレンド；フラックス（リネン）、ラミー、並びにセルロース繊維と、他の繊維例えばウール、ポリアミド、アクリルおよびポリエステル繊維、との全てのブレンド、例えばビスコース／綿／ポリエステルブレンド、ウール／綿／ポリエステルブレンド、およびフラックス／綿ブレンド等を含むセルロース繊維に基づく他の繊維を含有する、請求の範囲第１又は２項記載の方法。４．セルラーゼが、単成分セルラーゼ、好ましくはエンドグルカナーゼ（EC 3 .2.1.4）である、請求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の方法。５．セルラーゼが、微生物セルラーゼ、好ましくは細菌セルラーゼ又は菌類セルラーゼ、より好ましくは菌類セルラーゼである、請求の範囲第３又は４項記載の方法。６．セルラーゼが、酸性セルラーゼ、好ましくは菌類酸性セルラーゼ、より好ましくはトリコデルマ、アクチノマイセス、トリコデルマ、マイオセシウム、ミロセシウム、アスペルギルスおよびボツリチスから成る属の群からの菌類に由来するか又はその群からの菌類により生産可能である、酸性条件下で実質的にセルロース分解活性を有する菌類酸性セルラーゼである、請求の範囲第５項記載の方法。７．セルラーゼが、トリコデルマビリデ、トリコデルマロンギブラチラタム、マイロセシウムベルルカリエ、アスペルギルスニガー、アスペルギルスオリゼおよびボツリチスシネラから成る種の群から由来するか又はその群からの菌類によって生産可能である、請求の範囲第６項記載の方法。８．セルラーゼが、中性又はアルカリセルラーゼ、好ましくは菌類の中性又はアルカリセルラーゼ、より好ましくはアスペルギルス、ペニシリウム、マイセリオプトラ、フミコラ、イルペックス、フサリウム、スタチボツリス、スコプラリオプシス、ケトミウム、マイコゴン、ベルチシリウム、ミロセシウム、パプロスポラ、グリオクラジウム、セファロスポリウムおよびアクレモニウムから由来するかはそれらから成る属の群からの菌類により生産可能であるアルカリ条件下で実質的にセルロース分解活性を有する菌類アルカリセルラーゼである、請求の範囲第５項記載の方法。９．アルカリセルラーゼが、フミコラインソレンス、フサリウムオキシスポラム、マイセリオプトラサーモフィラ、又はセファロスポリウム種から成る種の群からの菌類に由来するか又はその種の群からの菌類により生産可能である、請求の範囲第８項記載の方法。 10．セルラーゼが、フミコラインソレンス、DSM 1800、フサリウムオキシスポラム、DSM 2672、マイセリオフトラサーモフィラ、CBS 117.65、又はセファロスポリウムsp.，RYM-202から成る種の群からの菌類に由来するか又はその種の群からの菌類によって生産可能である、請求の範囲第９項記載の方法。 11．処理を、約９未満のpHで、好ましくは、６未満のpHで、より好ましくは約 4.5〜約 5.5のpHで、特に約 5.0のpHで行う、請求の範囲第８〜10項のいずれか１項に記載の方法。 12．請求の範囲第10又は11項に記載の方法であって、セルラーゼがフミコラインソレンス DSM 1800から由来するか又はそれにより生産可能である43kDのエンドグルカナーゼであるか、又は該セルラーゼの官能性類似体でありこれはｉ）セルラーゼのアミノ酸配列と少なくとも60％の相同性であるアミノ酸配列を含んでなる、 ii）セルラーゼに対して生起せしめられた抗体と反応する、および／又は iii）セルラーゼをコードする DNA配列と同じプローブとハイブリッドする DN A配列によってコードされる、前記方法。 13．セルラーゼが、位置８，55，58，62，67，132，147，162，221，222，223 ，280 の１又はそれ以上において、１個又はそれ以上のアミノ酸残基の置換により修飾されているか；又は位置 213からの任意の位置でトランケーション、好ましくは遺伝的トランケーションにより修飾されている、フミコラインソレンス DSM 1800から由来するか又はそれにより生産可能である43kDのエンドグルカナーゼの変異体、配列番号１である、請求の範囲第12項記載の方法。 14．１種又はそれ以上のアミノ酸残基が： Y8F S55E/D D58A/S/N W62E D67R/N F132A/D/E/G Y147S A162P V221S N222S Q223T Y280F 置換されている、請求の範囲第12項記載の方法。 15．細菌セルラーゼが、シュードモナス(Pseudomonas)又はバシラスラウタスから成る属の群からの細菌から由来するか又はそれによって生産可能である、請求の範囲第５項記載の方法。 16．処理を、通常の編織製造プロセスの任意の湿式プロセス工程において行う、請求の範囲第１〜15項のいずれか１項に記載の方法。 17．処理を、ジェットオーバフロー染色機（ジャトーダイヤー）、高速ウインチおよびジガーで行う、請求の範囲第16項記載の方法。 18．処理を、Ｊ−ボックスにおいて、パッド−ロール上で又は２工程バイオポリッシング工程中のパッド−浴中で行う、請求の範囲第16項記載の方法。