JPH10510509A - 癌および感染症にたいするワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 悪性細胞もしくは感染性媒介物によって産生されるかまたはそれらに関連する抗原の免疫原性機能的模倣体として作用する霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントの免疫原量を投与する段階を包含する、悪性細胞もしくは感染性媒介物に対する、ヒトの免疫反応を刺激する方法。サブヒューマン抗イディオタイプ抗血清、特にヒヒから得たものが好ましい。このような抗イディオタイプ抗体を用いてワクチンを製造し、これにより、腫瘍、ウィルス、細菌、リッケチア、マイコプラズマ、原虫、真菌、多細胞寄生生物に対する予防免疫または治療的免疫反応を誘発する。

Description

【発明の詳細な説明】 癌および感染症にたいするワクチン 発明の背景 本発明は、患者における、悪性細胞、病原性微生物、寄生生物またはウィルス にたいする免疫反応を、霊長類「偽似抗原」抗イディオタイプ抗体を用いて刺激 する方法に係わる。この抗体は、悪性細胞、病原性微生物、寄生生物もしくはウ ィルスによって産生される抗原、または、それらと関連する抗原の免疫原性模倣 体として働く。このような抗イディオタイプ抗体を用いるワクチンを、前記の方 法で使用する。 癌、微生物もしくは寄生生物治療研究の大きな目標の一つは、患者の免疫系を 駆動し、腫瘍や感染性媒介物の増殖にたいして活発に反応させることにある。あ る種の病理現象、特に、癌やウィルス感染は、免疫系にたいして抵抗性を持つも ののようである。なぜなら、それら病理現象は、結果として宿主の耐性となるよ うな特質、もしくは、宿主の免疫系のそれら病理現象にたいする戦闘能力を無に するような特質を示すからである。 抗イディオタイプ抗体の投与は、腫瘍抗原にたいする自己寛容性を破る、もっ とも有望な方法の一つを表している。抗イデ ィオタイプ抗体（Ab2と名付ける）は、別の抗体（Ab1）の可変領域（抗原結合部 位）、即ちイディオタイプに対する抗体であり、上記Ab2 抗体の内のあるもの（ Ab2βと名付ける）は、Ab1によって認識される抗原の３次元構造を模倣できる。 一方、Ab2β抗体による免疫化は、Ab3 抗体を誘発する。このAb3 抗体は、元の Ab1抗体と同様の特異性を持つ（そのような Ab3抗体をAb1′と呼ぶ）。 様々の実験系において、Ab2β抗体は、元の抗原の代わりに、特異的免疫反応 を誘発できることが判明している。例えば、Nepom ら，Proc．Natl．Acad．Sci ．USA，81:2864-2867，1984；Kennedy ら，Science(Wash．DC)，223:930-931，1 984；McNamara ら，Science(Wash．DC)，226:1325- 1326，1984；Grzychら，Nat ure(Lond.)，316:74-76,1985；Raychaudhuriら，J．Immunol.，139:271-278，19 87；Dunnら，Immunology，60：181-186，1987；Bhattacharya-Chatterjeeら，J ．Immunol.，139:1354-1360，1987；Viale ら，J．Immunol.，139:4250-4255，1 987；Smorodinsky ら，Eur．J．Immunol,，18:1713-1718；Kresina ら，J．Clin ．Invest.，83:912-920，1989；および Powellら，J．Immunol.，142:1318-132 4，1989を参照 のこと。 ポリクローナルまたはモノクローナル Ab2抗体を用いる様々な方法が、人の治 療用に提案されているが、それらは皆、外来種、例えば、マウスやヤギから得た 免疫グロブリンを、免疫原として利用している。例えば、Herlynら，Proc．Natl ．Acad．Sci．USA，84:8055-8059，1987 および Ferroneら， 第７回国際免疫学会（抄録 117-9）、ベルリン、1989年を参照のこと。 このような Ab2分子を投与すると、何の治療的価値も持たないであろう Ab2分 子の定常領域に対する強い免疫反応が誘発されるようである。さらに、外来タン パク質で繰り返し免疫化することは、悪性の作用を及ぼすことがある。あるいは 、定常領域が、ヒトの免疫グロブリンのものと同じか、非常に近似している Ab2 β分子を投与すると、イディオタイプ抗原決定基に限局した免疫反応が誘発され るであろう。ヒトに系統発生的に近いサルのような動物から得た抗体は、そのよ うな代用物となり得る。実際、癌患者に投与されたヒヒの抗体は、他の動物から 得た免疫グロブリンよりも免疫原性が低い。 各種実験系において、抗イディオタイプ抗体が、Ab1 に認識 される抗体を機能的に模倣し、この元の抗原の代わりに特異的免疫反応を誘発す ることが判明している。例えば、Bonaら，Ann．Immunol．（パリ），136C:299-3 12，1985を参照されたい。さらに、元の抗原が３型レオウィルスヘムアグルチニ ンとランダム・ポリマーＧＡＴ（グルタミン酸、アラニンおよびチロシン）であ る２つの系において、配列分析したところ、上記抗原とAb2 分子の相補的抗原決 定領域との間には相同性のあることが判明した。Bruck ら，Proc．Notl．Acad． Sci．USA，83:6578-6582，1986；Ollier ら，EMBO J.，4:3681-3688，1985を参 照されたい。 動物モデルにおいて、病原体によるチャレンジにたいして防衛的に働く微生物 を模倣する Ab2抗体や、Ab2 β抗体で免疫化することは、したがって、元の抗原 （微生物または寄生生物）がワクチン用に手に入らない場合には、貴重な代用抗 原になるであろう。マウスにおいて、外来の免疫グロブリン分子上に存在する機 能的イメージ抗原を投与したところ、寛容抗原にたいして免疫反応を誘発した。 腫瘍抗原は、通常、宿主による自発性免疫反応を誘発しない。各種動物モデルに おいて、Ab2で免疫化すると、その後の腫瘍成長を防止することが判明した。 Raychaudhuriら，上掲；Dunnら，上掲；Powellら，上掲を参照のこと。ヒトにお ける臨床試験より、癌患者へマウスAb2 を投与すると腫瘍結合Ab3 抗体が誘発さ れることが示された。誘発された抗体が、治療的に有効であることが必要である が、マウス Ab2によって誘発された抗体の効能についてまだ明らかにされていな い。Herlynら，上掲；Ferroneら，上掲参照。 上記の問題にたいする解決は現在でもなお求められている。発明の目的 本発明の一つの目的は、ヒト癌患者において、通常許容される腫瘍にたいする 、および、通常難治性のウィルス感染にかかっている患者において、ウィルス抗 原にたいする、抗体の産生を刺激するワクチンを提供することである。 本発明のもう一つの目的は、病原性微生物や寄生生物にたいするワクチンを提 供することである。 本発明のさらにもう一つの目的は、癌や、病原性微生物もしくは寄生生物によ る感染を治療する方法を提供することであり、その方法は、腫瘍もしくは感染性 媒介物抗原にたいする特異的な免疫反応を誘発するのに、非腫瘍で、非感染性薬 物を用いる。 本発明のさらにもう一つの目的は、健康な人および動物にお いて、腫瘍の成長にたいして、また、病原性微生物や寄生生物の侵入にたいして 、免疫性を誘発することである。 本発明のそれ以外の目的については、当業者にとっては、下記の議論と具体例 を注意深く検討するならば自ずから明かであろう。発明の要約 前記の目的は、ヒトにおいて、悪性細胞または感染性媒介物にたいする免疫反 応を刺激する方法を提供することによって達成される。この方法は、悪性細胞ま たは感染性媒介物によって産生される、または、それらと関連する抗原を、機能 的免疫原模倣体として働く霊長類の抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメ ントの免疫原有効量を、上記ヒトに投与するという段階を包含する。腫瘍または 感染性媒介抗原を模倣する抗イディオタイプ抗体および抗体フラグメントの調製 法が提供され、これは、前記の方法、および、それから得たワクチンの調製に用 いられる。詳細な説明 腫瘍または感染性媒介物抗原を模倣する抗イディオタイプ抗体は、癌、病原微 生物、寄生生物およびウィルスにたいして免 疫反応を誘発し得るワクチンの、安全で、有効な成分であり、この抗体は、悪性 腫瘍もしくは感染を患う患者の治療としても、癌の成長を抑える、または、侵入 する微生物、寄生生物もしくはウィルスを遠ざける予防手段としてのワクチン成 分である。 本明細書中で用いる「微生物」とは、ウィルス、細菌、リッケチア、マイコプ ラズマ、原虫類、真菌類等の微生物を指し、「寄生生物」とは、感染性の、一般 に微少な、もしくは、ごく小さい多細胞無脊椎動物、または、その卵もしくは幼 形で、抗体誘発性駆除もしくは溶解、または、食細胞による破壊に敏感なものを 指し、例えば、マラリア原虫類、スピロヘータ類などであり、また、「感染性媒 介物」または「病原体」とは、微生物と寄生生物の両方を指す。 本明細書中、「抗体」という用語の使用は、抗体全体、抗体フラグメント、サ ブフラグメントを包括するものとする。従って、特に断わらない限り、本議論に おいては、相互に交換的に使用される「抗体／フラグメント」という用語と等価 である。抗体は、例えば、IgG，IgM，IgA，IgD，IgE のような、いずれのクラス の全体免疫グロブリン(IgG)であっても、キメラ抗体や、二重もしくは多重抗原 またはエピトープ特異性を持つハイ ブリッド抗体であっても、例えば、F(ab′)₂，Fab′，Fab などのフラグメント で、ハイブリッド・フラグメントを含むものであってもよく、さらに、いかなる 免疫グロブリン、または、いかなる天然、合成、遺伝子工学的に加工された下記 のようなタンパク質であってもよい。すなわち、そのタンパク質は、特異抗原と 結合し、複合体を形成することによって、あるいは、抗イディオタイプもしくは 抗−抗イディオタイプ抗体の産生を刺激することによって、抗体のように作用す るタンパク質である。例えば、Bossら、アメリカ国特許第 4,816,397号の方法に よって抗体のＬ鎖とＨ鎖を組み込んだ組み換え分子が知られている。本発明には 、抗体の特徴を持つ組み換えまたは合成結合分子を生産する類似の方法が含まれ る。 「機能的模倣体(functionally mimic)」という用語は、抗原もしくはその特異 的エピトープに関する抗イディオタイプ抗体または抗体フラグメントに用いる場 合、その抗原／エピトープに特異的に結合し、かつ、抗イディオタイプを生産す るのに用いられるイディオタイプ抗体または抗体フラグメントの抗原／エピトー プへの結合を競合的に阻止する性質を指す。 抗イディオタイプ抗血清(Ab2)を誘発するのに用いられる、 イディオタイプ抗体または抗体フラグメント(Ab1)は、ポリクローナルであって も、モノクローナルであってもよいが、後者の方が望ましい、また、免疫グロブ リン全体もしくはフラグメント、または、合成および／または組み換え技術によ って作製した、さらに複雑な遺伝子構築物であってもよい。それらにとって重要 な特質は、抗原結合領域であって、これを、少なくともその一部が機能的に元の 抗原を模倣する抗イディオタイプの産生を刺激するのに用いることができる。 腫瘍抗原にたいする、また、病原体にたいする、イディオタイプ抗体は知られ ている。例えば、腫瘍または感染病巣、その中には、ウイルス性、細菌性、真菌 性、寄生生物による感染を含むが、そのような病巣によって生産される、もしく は、それらに関連するマーカに特異的に結合する抗体および抗体フラグメント、 および、そのような微生物と関連する抗原や産物は、特に、Hansenら，アメリカ 国特許第 3,927,193号，Goldenberg，アメリカ国特許第 4,331,647号，第 4,348 ,376号，第 4,361,544号，第 4,468,457号，第 4,444,744号，第 4,818,709号， 第 4,624,846号に開示されている。特に、ある抗原、例えば、悪性充実性腫瘍ま たは造血系腫瘍、例えば、 消化器、肺、乳房、前立腺、卵巣、睾丸、脳、リンパ系等の腫瘍、肉腫、もしく は、メラノーマによって産生される、または、それらと関連する胎児性腫瘍抗原 (oncofetal antigen)にたいする抗体を用いると好都合である。 感染性疾患媒介物にたいしては、様々なモノクローナル抗体が開発されており 、それらは、Polin により、Eur．J．Clin．Microbiol.，3(5):387-398，1984に まとめられて、簡単に入手できる。その中には、病原体にたいするモノクローナ ル抗体（MAb）や、下記のようなその抗原が含まれる。抗細菌 Mab Streptococcus agalactiae Legionella pneumophilia Streptococcus pyogenes Escherichia coli Neisseria gonorrhosae Neisseria meningitidis Pneumococcus Hemophilis influenzae B Treponema pallidum Lyme disease spirochetes Pseudomonas aeruginosa Mycobacterium leprae Brucella abortus Mycobacterium tuberculosis 破傷風毒素抗ウイルス MAb 狂犬病ウイルス インフルエンザウイルス サイトメガロウイルス 単純ヘルペスＩおよび II ヒト血清パルボ様ウイルス ＲＳウイルス 水痘一帯状庖疹ウイルス Ｂ型肝炎ウイルス 麻疹ウイルス アデノウイルス ヒトＴ細胞性白血病ウイルス エプスタイン−バ−ウイルス マウス白血病ウイルス おたふく風邪ウイルス 手足口病ウイルス Sindbis virus リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス いぼウイルス Blue tongue virus センダイウイルス ネコ白血病ウイルス レオウイルス ポリオウイルス サルウイルス 40* マウス乳腺腫瘍ウイルス* デングウイルス 風疹ウイルス * 動物ウイルス抗原虫類 MAb Plasmodium falciparum Plasmodium vivax Toxoplasma gondii Trypanosoma rangeli Trypanosoma cruzi Trypanosoma rhodesiensei Trypanosoma brucei Shistosoma mansoni Schistosoma japanicum Babesia bovis Elmeria tenella Onchocerca volvulus Leishmania tropica Trichinella spiralis Theileria parva Taenia hydatigena Taenia ovis Taenia saginata Echinococcus granulosus Mesocestoides corti 抗マイコプラズマ MAb Mycoplasma arthritidis M．hyorhinis M．orale M．arginini Acholeplasma Iaidlawii M．Salivarium M．pneumoniae 感染性微生物に対抗するものとして生産されており、文献に記載されている、 その他の MAb例を、下に記す。 ヒト免疫不全ウィルス１(HIV-1)の gp120糖蛋白抗原にたいする MAb が知ら れているが、そのような抗体のあるものは、ヒトにおいて免疫防衛的役割を果た すことが可能である。例えば、Rossiら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，86:8055 -8058，1990を参照のこと。このことから次のことが分かる。すなわち、エピト ープの適切な選択は、治療標的と非治療標的とを区別できること、したがって、 患者にたいし、治療的な抗体反応を誘発する抗イディオタイプを選び出すことが できる、ということである。 マラリア原虫にたいする MAbは、スポロゾイト、メロゾイト、シゾント、生殖 母細胞の各段階に対抗的に向けることができる。スポロゾイト（環状スポロゾイ ト抗原）に対するMAb が調製されており、このMAb はインビトロで、また、げっ 歯類でスポロゾイトを中和することが判明した（N．Yoshidaら，Science 207:71 -73，1980）。 いくつかのグループが、トキソプラズマ症に係わる原虫類寄生生物、T．gondi i にたいする MAbを開発した（Kasperら，J，Immunol．129:1694-1699，1982;13 0:2407-2417 ，1983）。 住血吸虫表面抗原に対するMAb が開発されたが、これが、インビボ、または、 インビトロで、住血吸虫にたいして作用することが認められた（Simpson ら,Par asitology，83:163-177,1981；Smith ら，Parasitology，84:83-91，1982；Gryz chら，J．Immunol,，129:2739-2743，1982；Zodda ら，J．Immunol．129:2326-2 328，1982；Dissous ら，J．Immunol.，129:2232-2234，1982）。 Trypanosoma cruzi は、シャガス病の原因媒介物であり、血を吸うサシガメ科 の昆虫によって伝搬される。インビトロで、この寄生生物が、１つの形から他の 形（エピマスチゴートから トリポマスチゴートへの段階）へと分化するのを特異的に抑制し、細胞表面の糖 蛋白と反応する MAbが生産されている。しかしながら、この抗原は、その寄生生 物のほ乳類形（血流性）のものには存在しない（Sherら，Nature，300:639-640 ，1982）。 ヒトの大多数の感染症の原因となる微生物（細菌、ウィルス、原虫、寄生生物 ）の多くのものについては、それにたいする適当な MAbが開発されており、また 、多くのものが、従来から、インビトロの診断目的のために用いられてきた。こ れらの抗体、および、従来の方法で生産することのできる新しい MAbは、本発明 の方法、および、ワクチンに使用する抗イディオタイプ抗体を生産するのに適当 である。 通常、ポリクローナル抗体は、各種のよく用いられる動物、例えば、ヤギ、霊 長類、ロバ、ブタ、ウサギ、ウマ、ニワトリ、モルモット、ラット、または、マ ウスから得た抗血清調製物であり、適当な選択と精製を経た後のヒト抗血清の場 合もある。動物抗血清は、通常のプロトコルに従い、免疫原性形態の病原体、例 えば、腫瘍細胞全体、あるいは、粗製もしくは精製された、生の、弱毒化された 、もしくは、死滅された微生物または寄生生物を接種し、動物を出血させ、血清 ないし免疫グロブリ ン含有血清画分を回収することによって、調製される。比較的小さい抗原性構造 、例えば、多少なりとも精製した腫瘍抗原調製物、単離した腫瘍抗原および／ま たはそのオリゴペプチドフラグメント、または、ウィルスコートタンパク質およ び／またはそのフラグメント（例えば、HIV-1 gp-120 ペプチド）、微生物細胞 膜または細胞壁成分、寄生生物表面抗原、それらの部分、または、病原体破壊の 結果得られたフラグメント等も、イディオタイプ抗体産生を刺激するのに用いる ことができる。 抗血清は、好ましくは、従来の方法、例えば、抗原を、クロマトグラフカラム パッキング、例えば、セファデックスに結合させて抗血清をカラムに通して、ア フィニティー精製し、それによって、特異抗体を保持し、他の免疫グロブリンや 汚染物質を分離除去し、カオトロープ剤による溶出で精製抗体を回収し、その後 、必要に応じて、さらに精製を、例えば、血液グループ抗原まはたその他の非病 原性種を結合させたカラムを通過させて、行なう。この方法は、問題の病原体に たいし抗体価を生じた患者の血清から、所期の抗体を単離する場合には、好まし い。 ハイブリドーマ由来のモノクローナル抗体（ヒト、サル、ラット、マウスなど ）も、抗イディオタイプ生産に用いるのに適 しており、高度の特異性を持つという利点を有している。これらは、今では、一 般に、通例法とされるもので簡単に調製される。すなわち、ほ乳類を、免疫原性 抗原調製物、免疫性リンパ球ないし脾臓細胞、不死化骨髄腫細胞系統、および、 特異的ハイブリドーマクローンからの単離物等で免疫化する方法である。モノク ローナル抗体から得たハイブリドーマは、通常、マウスないしラット起源のもの で、通常 IgG，IgM 類である。もっとも、本発明に従って、抗イディオタイプを 調製するのに適当な抗体は、上記の種やＩｇクラスに限定されるということを意 図するものではない。モノクロナール抗体を調製する、通例とは言えない方法、 例えば、超可変領域の異種間融合や遺伝子工学的操作等も除外されない。なぜな ら、本発明においてその有用性に影響を与えるものは、主に、抗体の抗原特異性 だからである。ヒトリンパ球は、ヒト骨髄腫細胞系と融合させて、特定の特異性 、好ましくは、病原体の主要な抗原部位にたいする循環する抗体によってマスク されないエピトープにたいする特定の特異性を持つ抗体を生産するようにするこ とができる。 本発明はまた、抗原特異的フラグメントを、イディオタイプおよび／または抗 イディオタイプとして使用することを意図し ている。抗体フラグメントは、免疫グロブリン全体を、慣例法により、ペプシン またはパパイン消化することによって調製できる。抗体フラグメントは、抗体を 、ペプシンで酵素的に切断し、F(ab′)2 と称される５Ｓフラグメントを生ずる ことによって生産できることが知られている。このフラグメントはさらに、チオ ール還元剤を用い、さらに場合により、ジスルフィド結合切断により得られるス ルフヒドリル基にたいするブロック基を用いて、3.55 Fab′１価のフラグメント を生ずることができる。別法として、パパインによる酵素的切断は、２個の１価 Fab フラグメントとFcフラグメントを直接生ずる。この方法は、上記、Goldenbe rg，アメリカ国特許第 4,036,945号，第 4,331,647号および、その中に挙げられ ている文献に記載されている。この特許全体を、参照として主明細書中に取り込 むこととする。また、Nisonoffら，Arch．Biochem．Biophys.89，230(1960)；Po rter，Biochem．J.，73，119(1959)；Edelmanら，′Methods in Immunology and Immunochemistry′，Vol．1，422（Acad．Press，1967）に記載されており、当 業界においては慣用法である。 その他の、抗体切断法、例えば、Ｈ鎖を分離して、１価の Ｌ−Ｈ鎖ラグメントを形成するやり方、フラグメントをさらに切断するやり方、 あるいは、その他の酵素的、化学的、遺伝子技術を使用することもできる。ただ し、そのフラグメントが、その親抗体が指向する病原体または抗原にたいする特 異性を保持しているものとする。 単に、抗イディオタイプ抗体を用いて、腫瘍ないし感染媒介物抗原にたいして 抗体を誘発するだけでは十分ではない。治療が成功をもたらすためには、治療反 応が必要である。すなわち、抗体は、悪性の後退、または、感染性媒介物の抑制 、弱毒化もしくは破壊をもたらすものでなければならない。抗イディオタイプが 機能的に模倣する、腫瘍もしくは感染性媒介物抗原、および、そのエピトープを 慎重に選ぶならば、治療反応の効能を強化することができる。なぜなら、必ずし も全ての腫瘍ないし感染性媒介物抗原が、治療的抗体反応をもたらすという点で 、等しく有効な標的とはならないからである。後に、抗−イディオタイプ生産に 用いられるイディオタイプ抗体は、できれば、腫瘍ないし病原体にできるだけ特 異的で、正常なヒトの組織にたいして交差反応を持たないエピトープに結合する ものを選ぶことが望ましい。これによって、エピトープの機能的模倣体と して働く抗イディオタイプによるチャレンジにたいして産生される最終的抗体が 、健康組織よりはむしろ、主に、悪性細胞ないし感染性媒介物に作用することが 保障される。できるだけ腫瘍／病原体特異的なエピトープを選択するもう一つの 理由は、正常細胞上に存在するある抗原決定基にたいする免疫化が、有害の危険 性のある自己免疫反応を駆動するかも知れないからである。 イディオタイプ抗体／フラグメントを用いて、イディオタイプそのものを生産 するのに用いられるのと同じ通例法により、抗イディオタイプを生産することが できる。抗原特異的抗体、できれば、モノクローナル抗体ないし抗体フラグメン トであることが望ましいが、これを、ほ乳動物に、できればアジュバントと一緒 に注入する。免疫化は通常、定期的に繰り返し、注入後数週間で出血させて、抗 血清を得る。この抗血清をできれば１回以上、免疫化に用いたイディオタイプと 同じイソタイプの正常免疫グロブリンに結合させたアフィニティーカラムに吸着 させる。これにより、抗血清の抗定常領域成分が除去される。さらに、結合イデ ィオタイプカラムへの吸着を行い、その後、抗イディオタイプをカオトロピック 溶出する。抗イディオタイ プ抗血清の特異性の確認は、それが、例えば、ELISA 定量法で、イディオタイプ 抗体を、抗原自体と競合する能力を持つことを示すことで行なった。 Ab2 を治療剤として使用する場合、様々のパラメータを考慮に入れなければな らない。例えば、予防免疫を誘発するのに、モノクローナルまたはポリクローナ ルAb2 を投与してよいが、モノクローナル Ab2抗体の方が、明らかに、実施上の 利点を持っている。例えば、それらは、可能性として、無制限に供給できるし、 精製にも都合がよい。一方、腫瘍ないし病原体抗原を機能的に模倣する Ab2βは 、全 Ab2集団の内のごく少数を表しているにすぎない。 さらに、全部とは言わないまでもいくつかの Ab2β（たとえ Ab1抗体を誘発で きたとしても）は、腫瘍ないし病原体の成長にたいして保護作用を持っており、 したがって、全モノクローナル Ab2の内のほんの１画分のみが、治療的効能の可 能性を持つにすぎない。たとえその両方とも、元の抗原に結合する Ab1を誘発で きるとしても、例えば、ある動物モデルにおいて、マウス腫瘍、L1210/GZL の抗 原を機能的に模倣する２個のモノクローナル Ab2の内、１個だけしか、腫瘍の成 長を抑制しなかっ た。一方、保護分子は、ポリクローナル Ab2集団の一部をなしており、場合によ って、ポリクローナル Ab2の利用は好ましいことがある。多数のモノクローナル Ab2抗体をスクリーニングするのにまつわる仕事を回避するとすれば、イディオ タイプ準拠治療の効能を評価する場合には、ポリクローナル Ab2は特にふさわし い。 抗イディオタイプ抗体は、抗体全体でも、抗体フラグメントでも、サブフラグ メントであってもよい。抗イディオタイプ抗血清は、通例の方法を用い、酵素的 に消化し、フラグメント、例えば、F(ab′)2 または Fabを形成してもよい。こ のことについては、イディオタイプに関連して上記した通りである。抗体全体で はなく、好ましくは、フラグメントを使用する。これは、この方が、超可変領域 の分子割合が高いからである。定常領域ドメインは、I_gG 分子の３分の２を形成 する。従って、免疫グロブリン分子上の抗原性抗原決定基の多くは、イディオタ イプ関連性ではない。Ab2 分子の FabまたはF(ab′)₂フラグメントの投与は、定 常領域にたいする反応の大きさを低下させるであろう。にも拘らず、マウス I_gG 抗体のF(ab′)₂フラグメントを投与された患者は、マウス免疫グロブリンの定常 領域にたいす る抗体を生ずる。過去において、抗体反応を誘発できたものの、患者にたいし治 療的利益をもたらようなマウス抗イディオタイプを生産できなかったのは、種間 変動が高いことによって、定常領域の免疫原性が大きくなりすぎ、これが、ヒト 抗マウス抗体（HAMA）反応は強烈で、Ab1反応はごく僅かという結果を招いたの であろう。 もう一つ重要なパラメータは、Ab2 抗体の動物起源である。Ab2 分子の外来的 性質がその免疫原性をさらに増すものの、Ab2 分子の定常領域にたいする抗体の 産生はかえって生産性に逆行する結果となる。 抗イディオタイプの生産に選ばれるほ乳類は、通常、霊長類である。自己免疫 反応の可能性を少なくするには、ヒト以外の霊長類免疫グロブリンを用いるのが 好ましい。魅力的なやり方は、系統発生的に、ヒト免疫グロブリンに近い分子を 利用することである。 特に、ヒヒ Ab2β抗体ないし抗体フラグメントは好ましい。通常、ヒヒ抗体は 、ヒトによく許容され、また、ヒトの免疫グロブリンにたいする高度に相同な領 域を持つことと軌を一にして、共通の抗原決定基をたくさん共有している。これ は市販の 抗ヒト抗血清もヒヒ抗体に結合するという事実からも明かである。従って、ヒヒ 抗体ないし抗体フラグメントの超可変領域は、通常、大部な免疫反応を惹起し、 所期の抗原に結合する抗体の最大収量をもたらす。 ヒト免疫グロブリンにたいして高度の相同性を持つために、ヒヒ抗血清は、通 常、ヒトにたいして免疫原性がきわめて弱い。様々な動物種から得た抗腫瘍抗体 で治療した患者について調査したところ、ヒヒ免疫グロブリンの免疫原性が最小 であった。ヒヒ抗体を投与された６６人の患者の内、たった一人だけしか抗ヒヒ 抗体を生じなかった。一方、例えば、カニクイザル(cynomolgus monkey)免疫グ ロブリンで処置した患者の３６％が抗−抗体を産生した。Klein ら，上掲参照の こと。また、別の研究で、ヒヒ抗ＣＥＡ抗体の注入を受けた１４名の患者の内９ 名が、抗ヒヒ抗体を生じたが、抗体価の多くは、用いた定量法の感度限界をやっ と上回る程度であった。Hubermanら，Cancer Immunol．Immunother.，23:137-14 2，1986を参照のこと。ヒヒ抗大嚢胞性疾患液タンパク１５抗体によって処置さ れた４人の患者のいずれも、ヒト抗ヒヒ抗体を生じなかった。しかも、その患者 の中の一人は、抗体注入を４回も受けたので ある。Estabrook ら，Cancer Immunol．Immunother.，23:143-147，1986 ヒト受容者における、霊長類抗イディオタイプ抗体ないしフラグメント、特に 、ヒヒの Ab2βの弱い免疫原性を改善するために、免疫グロブリンをできれば、 ワクチン用ベヒクルに溶解して投与することによって、さらに免疫原性を高める ことが望ましい。通常、これらは、フロイントの完全ないし不完全アジュバント 、ミョウバンなどのよなアジュバントと組合わせて注入する。さらに、ヒトにお いて安全であることが知られている免疫原性担体、例えば、破傷風毒素、ＢＣＧ などのような弱毒化微生物媒介物に結合させることによって、その免疫原性を増 すこともできる。 抗イディオタイプが模倣する抗原は、抗体と複合させて、ワクチン化プロトコ ルに用いることができる。抗原は、抗イディオタイプと一緒に、または、別々に 、同時ないし連続的のどちらかのやり方で、投与してもよい。しばしば、抗イデ ィオタイプ免疫原は、免疫反応を刺激し、患者を抗原そのものにたいして感作す るだろう。その後で、さらに抗体を誘発するのに抗原を用いることができる。 相補的抗体産生を誘発するものは、主に、抗イディオタイプ、特に超可変領域 の非相同領域である。好ましいヒヒ Ab2抗血清を投与すると、より共通部分の多 い供給源、例えば、ヤギやマウスから得た Ab2で免疫した場合よりも、抗定常領 域抗体の産生は少なくなる。 抗原特異的抗体の生産にたいするヒヒ抗血清の有用性は、マウスのモデル系で 例示することができる。結腸・直腸癌マーカー癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に特異的 に結合するマウス・モノクローナル抗体にたいするヒヒ Ab2抗体で免疫化したマ ウスは、少なくとも若干の Ab1′タイプの抗体を含む Ab3抗血清を生じる。した がって、この血清は、NP-4の認識するＣＥＡエピトープに結合する。NP-4を選ん だのは、これが、高分子量ＣＥＡにたいして特異的なので、顆粒球細胞上にある 正常では交差反応を起こす抗原と反応せず、また、低分子量のＣＥＡ変異種、例 えば、メコニウム抗原とも反応しないからである。AB3 抗血清の一部としての A b1′の産生は、AB3 血清が、競合的 ELISAにおいて、ビオチニル化 NP-4 による ＣＥＡのその後の認識を抑制することを証明することによって明らかにすること ができる。正常のヒヒ免疫グロブリンによって免疫化されたマウスから得 たコントロール血清は、この結合を抑制しない。この抑制は選択的である。なぜ なら、どちらのグループの血清のどれも、NP-3と CEA間の結合を抑制できないか らである。このことから、Ab2 誘発マウス抗ＣＥＡ抗体は、NP-4によって認識さ れるエピトープにたいして特異的であるのは明らかである。 この結果は、正常のヒヒ免疫グロブリンの弱い免疫原性に係わるものではない 。というのは、両グループ由来の血清も、きわめて高い抗体価のマウス抗ヒヒ抗 体を含んでいるからである。さらに、Ab3 抗体は、Ab1(NP-4)抗体とイディオタ イプを共有している。なぜなら、ヒヒ Ab2で免疫化したマウスから得た血清は、 NP-4とヒヒ Ab2抗体との間の結合を抑制するからである。上記のような実験から 、さらに、ヒヒ抗 NP-4 Ab2 抗体が機能的にＣＥＡエピトープを模倣すること、 ならびに、その抗体が、この特定のＣＥＡエピトープにたいする Ab1′抗体を誘 発し得るという証拠が得られた。非交差反応性 NP-3 エピトープにたいしてでは なく、NP-4エピトープにたいする抗ＣＥＡ抗体のみが誘発される。さらに、正常 のヒヒ免疫グロブリンの注入によっては、抗ＣＥＡ抗体は誘発されない。 抗イディオタイプ Ab2β抗体は代用抗原として働き、さらに、 生産しやすく、多くの場合安全性も高いという利点を持っている。適当なワクチ ン処方において、賢く選択された Ab2β抗体はさらに次のような利点を持つ。す なわち、それは、自己抗原にたいする寛容性を破るのに用いることができるとい うことである。したがって、通常、免疫原性ではない（「寛容」抗原）腫瘍や感 染性媒介物抗原でさえ模倣し、そのような抗原に特異的に結合する抗体を誘発す ることができる。 まとめると、霊長類、好ましくは、サブヒューマン、特にヒヒの抗イディオタ イプ抗体は、特異的イディオタイプ抗体が認識する腫瘍、または、病原体抗原エ ピトープを機能的に模倣することができる。これらを、ワクチン／免疫原として 使用すれば、抗−抗イディオタイプ抗体の産生を誘発し、少なくともその一部は 、その抗原エピトープの選択が良ければ、予防的／治療的効果を発揮する。 本発明の方法を例示するために、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）上のエピトープを模 倣するヒヒ Ab2 抗体の生産と精製、ある種の結腸・直腸腫瘍およびその他の癌 タイプの分泌するマーカー、それら抗体の、治療的抗ＣＥＡ抗体産生能力につい て説明を加える。この治療的抗体が、ＣＥＡ産生性癌の後退をもたらすわ けである。また、ヒト免疫不全ウィルス HIV-1、これはエイズに係わりのあるも のであるが、これの gp-120 ウィルス外被糖蛋白成分を模倣する、抗イディオタ イプ抗体の生産、および、エイズ・ウィルスによる感染にたいする免疫付与のた めの、それの使用法についても、説明を加える。 この実施例は例示的ではあるが、いかなる意味でも、本発明の範囲にたいして 限定的なものではなく、その範囲は、付属の請求の範囲によって規定される。実施例１ ヒヒ抗−腫瘍 Ab2抗体の調製 メス成獣ヒヒを、フロイントの不完全アジュバントに懸濁した NP-4 1mg で繰 り返し免疫した （全容量、１回注入当り１ml）。NP-4は、BALB/c IgG₁κマウス ・モノクローナル抗体であり、ＣＥＡ上のエピトープを認識するが、このエピト ープは、非特異的交差反応性抗原とも、メコニウム(meconium)抗原とも共有され ない。注入は、皮下投与で、皮下の異なる４箇所で行い、各免疫化後２週で出血 させた。抗 NP-4 抗体をアフィニティー・クロマトグラフィーで精製した。すな わち、血清を、NP-4アフィニティー・ゲル・カラム（Bio-Rad，Richmond CA）に 吸着させ、特異抗体を、0.1Mグリシン-HCl，pH 2.5で溶出した。得られた調製物 は、NP-4分子の定常領域に対する、抗イディオタイプ抗体および抗体の両方を含 んでいる。 この調製物を、NP-3アフィニティー・ゲル・カラム上の、抗−定常域抗体の吸 着によってイディオタイプ特異性とした。NP-3とは、BALB/c IgG₁κマウス・モ ノクローナル抗体であって、これは、NP-4を交差ブロックせず、また、非特異的 交差反応性抗原とは共有されない、かつ、メコニウム抗原上にも存在する、ＣＥ Ａ分子上のあるエピトープを認識する。NP-3を吸収剤として選んだのは、それが 、NP-4と同じイソタイプを持っており、しかも、NP-4とは交差反応しない抗ＣＥ Ａ抗体だからである。NP-3アフィニティー・ゲルに、２回の吸着工程を行なえば 、通常は、検出可能な抗定領常域抗体全部を十分除去することができる。実施例２ ヒヒ Ab2抗体の特異性 マウスモノクローナル抗体へのヒヒ Ab2抗体の結合は、ELISA でテストする。 簡単に言うと、ポリビニル・マイクロタイタープレートを、NP-4，NP-3，Mu-9（ 炭酸バッファー中で 10μg/ml，pH 8.6）の内のいずれか一つでコートし、一晩置く。Mu-9とは、結腸 特異的抗原−ｐに対するモノクローナル IgG₁κ抗体である。その後、牛血清ア ルブミン（ＢＳＡ）をコートした後（0.05％ツイーン−２０を含むリン酸緩衝塩 水（ＰＢＳ）に溶解して１％とする）、ヒヒ Ab2を、PBS-BSA-ツイーンの各種濃 度に希釈して、（50μl／ウェル）を加え、室温で２時間インキュベートする。 洗浄後、ペルオキシダーゼ接合マウス抗ヒト免疫グロブリン IgG（jackson Imm unoresearch，West Grove，PA，PGS-BSA-ツウィーン中 1/10,000 希釈）を加え 、室温で２時間インキュベートする。予備実験で、市販の、抗ヒト免疫グロブリ ン試薬が、ヒヒ抗体の検出に適していることが決定づけられた。徹底的な洗浄後 、100 μｌの基質（クエン酸・リン酸バッファーpH 5中の０−フェニレンジアミ ン 0.4mg/ml，H₂O₂ 0.012%）を、各ウェルに加え、光学密度を、20分後、動的マ イクロプレート・リーダ（Molecular Devices，Palo Alto，CA）を用いて450nm で読みとった。 このアッセイにより、ヒヒ Ab2は、NP-4とのみ反応し、イソタイプ適合性コ ントロール抗体、すなわち、NP-3ないし Mu-9とは反応しないことが確かめられ た。同様に、ヒヒ Ab2は、各 種イソタイプの、他の無関係の抗体にたいしてテストしたが、ほとんど結合を示 さなかった。したがって、Ab2 抗体は、NP-4にたいして特異的である。実施例３ ヒヒ Ab2抗体による、ＣＥＡへの結合の抑制 抗イディオタイプ抗体は、抗体分子の可変領域の抗原決定基に指向性を持つが 、このイディオタイプ抗原決定基は、抗体分子の抗原結合部位内に局在するかも しれないし、局在しないかもしれない。定義により、元の抗原を機能的に模倣す る Ab2分子は、抗原結合部位内で抗原決定基を認識し、したがって、Ab1 と元の 抗原との結合を阻止するものでなくてはならない。 競合 ELISAを用いて、ヒヒ Ab2抗体が、NP-4の結合部位内に局在する抗原決定 基に結合するかどうか調べた。競合 ELISAは下記のようにして実施する。PBS-BS A- ツウィーンで 1/10 に希釈したヒヒ血清を、ＣＥＡでコートしたポリ塩化ビ ニール製マイクロタイタープレート上に加え（50μl／ウェル）、２時間放置し た。洗浄後、ビオチニル化 NP-4（0.025μl/ml）をプレートに加え、３０分イン キュベートし、その後、ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ（0.05μg/ml） を加えて１時間放置 した。反応は、実施例２で記載したような基質を加えて明瞭化した。ビオチニル 化抗CEA NP-3を、１コントロールとして用い、正常ヒヒ免疫グロブリンであらか じめインキュベートしたものを、さらにもう一つのチェックとして用いた。 ヒヒ Ab2であらかじめインキュベートすると、NP-4のＣＥＡにたいする結合は ほぼ完全に抑制された。ヒヒ Ab2は、NP-3の、ＣＥＡにたいする結合には影響を 与えず、また、正常ヒヒ免疫グロブリンは、NP-4の、ＣＥＡにたいする結合を抑 制しなかった。このアッセイにより、この抑制が特異的であることが示された。実施例４ 癌治療法 上行結腸の再発性腫瘍で、左肺の多数葉と肝臓の多数部位に転移を持つ４０才 の女性患者は、高いＣＥＡ抗体価を持っていた。彼女の左臀部に、実施例１によ って製造した、ヒヒ Ab2ＣＥＡ模倣抗体 1mgを、0.1mg BCG（Litton Bionetics ）を含むアジュヴァント製剤に溶解した混合液を、皮内注射した。免疫化を、１ 週間隔で、３週間繰り返した。３回目の注射では、ＢＣＧを除外した。治療開始 前、各注射後１週目、その後１月 に１回、全血の 50ml サンプルを採血し、CEA 抗体価を定量した。６週後、その 患者で、ＣＥＡ，ヒヒ Ab2の両方にたいする反応性について調べた。有意に高レ ベルの反応が認められた。 免疫化プロトコルの完了の後、６−２０週の誘発期の後で、患者のＣＥＡ抗体 価は、有意に減少し、腫瘍の部分的後退が観察された。 もう一人の患者に、同様の免疫化プロトコルの下に、ヒヒ Ab2抗体ワクチンを 与えた。ただし、第３回目の注入は、Ab2でなく、精製ＣＥＡとした。抗CEA抗体 の抗体価は、二人の患者においてほぼ等しく、部分的な腫瘍後退が、２番目の患 者でも観察された。実施例５ ヒヒ抗HIV-1 Ab2 抗体の調製 プリスタン (Pristane)プライム化 Balb/c マウスを、フロイントの完全アジ ュヴァントに溶解したヒト免疫不全ウィルス１(HIV-1)外被糖蛋白 gp120で繰り 返し免疫化した。数週後、マウスを屠殺し、脾臓を摘出し、脾臓細胞を取り出し 、洗浄した。脾臓細胞とマウス骨髄腫細胞の融合を行い、得られたハイブリドー マを選 択、クローンし、gp120 に特異的に結合するモノ クローナル抗HIV-1 抗体の産生と分泌を行なった。 モノクローナル抗-HIV-1イディオタイプ抗体を用いて、ヒヒを免疫化し、実施 例１の操作に従って、Ab2 抗体を生産した。Ab2 と同じイソタイプではあるが、 異なる特異性を持つ抗体を結合させたカラム上で、抗血清をさらに精製した。こ のアフィニティー精製 Ab2調製物の免疫特異性は、実施例２、３のものと同様の 操作によって確認された。実施例６ AIDS 免疫 静注薬常用者で、HIV-1 抗体テスト陰性の、２０人の男性から成る試験グルー プを、２人１組のサブグループに分けた。最初のサブグループのメンバーには、 各々、実施例４でと同様の免疫化プロコルを用い、実施例５のアフィニティー精 製 Ab2調製物で免疫した。ただし、gp120 のブースター注入を、テスト期間中、 ４カ月間隔で行なった。第２サブグループのメンバーには注射をしなかった。 各グループのメンバーを３年間追跡し、定期的に、抗-HIV血清抗体の有無、AR C，AIDS 症状の発症についてテストした。３年後、第２グループの７名が、血清 陽性で、２名が、エイズの 初期症状を呈した。第１グループの１名が、免疫化スケジュールの終了後２週間 以内に血清陽性となった。すなわち、彼は、試験の開始時に検出されないままに 感染していたことを暗示する。第１グループの残りのメンバーは、免疫化スケジ ュールの終了後、６−２０週以内に、抗-HIV抗体を生じたが、３年の観察期間中 エイズ症状を呈さなかった。彼らの抗体価は、テスト期間中、ずっと高いままで あった。実施例７ 抗ウィルス療法 サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）外被タンパク質に対するマウスモノフローナ ル抗体を調製し、ヒヒを免疫するのに用いた。Ab2 抗血清を採取し、精製し、実 施例１−３の操作と同様にして、特異性を調べた。初期段階の巨細胞性封入体病 (cytomegalic inclusion disease)と診断された、３才の男児患者に、実施例４ のものと同様のプロトコルで、ヒヒ Ab2抗血清を注入した。免疫化スケジュール の終了から８週後、患者は、高い抗体価の抗-CMV抗体を生じ、彼の症状も有意に 重度で無くなった。実施例８ 抗マラリア療法 Plasmodium falciparum の、メロゾイトおよびスポロゾイトにたいするマウス ・モノクローナル抗体を、アメリカ国特許出願第07/399,566号の実施例６の方法 により製造した。簡単に言うと、超免疫化マウスから得た脾臓細胞を、骨髄腫細 胞と融合し、特異抗体を分泌するハイブリドーマを選択、クローンした。抗体は 、IgG₁サブクラスのものであった。抗メロゾイト抗体と抗スポロゾイト抗体の混 合物をヒヒに注入し、この実施例１−３でと同様に、Ab2 抗血清を採取し、精製 し、特異性についてスクリーニングした。 かなり初期段階のP．falciparum マラリアにかかり、軽度の悪寒、発熱を呈す る、３７才の女性患者に、この実施例４のものと同様の免疫化プロトコルに従っ て、ヒヒ抗血清を注入した。患者の血液中にメロゾイトのあることが、治療の開 始時に検出された。免疫化スケジュール終了後の２週間以内に、患者の抗メロゾ イト抗体価は高くなり、さらに１週間以内に、患者の血液中のメロゾイトの存在 は、もはや検出されなくなった。病気は、成熟赤血球段階には進行せず、患者の 発熱は引き、それ以 上の症状は発生しなかった。１年間、３カ月おきに、Ab2 抗血清の定期的なブー スター注入を行なったところ、抗メロゾイト抗体の抗体価は維持され、患者は、 その間、症状を持たず、また、その後、ブースター注射を止めた後でも、再発は なかった。 当業者にとっては、本発明の思想、範囲から逸脱することなしに、多くの変更 、修正を為し得ることは、容易に明らかであろう。例えば、他の腫瘍ないし病原 体抗原にたいして、治療的感度の高いエピトープに特異的なイディオタイプにた いする類似の抗血清を調製し、これを用いて、先述の実施例のものと同様の方法 により、予防的免疫、または治療的免疫反応を得ることも可能である。抗体フラ グメントおよび／または抗体様構築物を用いて、ワクチン中の抗原を模倣し、そ れによって、治療、予防用抗体を作製することもできる。 本明細書に引用した刊行物や特許出願はすべて、本明細書に参照として取り込 むことにする。たとえ個々の刊行物ないし特許出願が、特異的、個別的に、主明 細書中に参照として包含されると取り込まれるということが明示されていない場 合でも、ここに取り込むことにする。 前述の発明は、理解の明確化のために、例示と実施例を用い て、ある程度詳しく説明されたが、当業者には、本発明の教示に照らしてみれば 、添付の請求の範囲で規定した本発明の思想や範囲から逸脱することなしに、あ る種の変更や変形を本発明に加えることは可能であることは、直ちに明らかであ ろう。

【手続補正書】 【提出日】１９９６年５月２１日 【補正内容】 (1) 請求の範囲を別紙の通り補正する。 (2) 明細書６頁１６行目のあとに改行して下記文を加入する。 「前記目的は、被験者において、悪性細胞もしくは感染性媒介物に対する免疫 反応を刺激するために使用する抗腫瘍または抗病原体ワクチンであって、悪性細 胞もしくは感染性媒介物によって産生されるかまたはそれらと関連する抗原の免 疫原性機能的模倣体として作用する、免疫原性活性成分としてのヒヒ抗イディオ タイプ抗体もしくは抗体フラグメント、及び生理学的に許容可能なワクチンベヒ クルを含み、好ましくは前記ヒヒ抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメン が前記悪性細胞もしくは感染性媒介物に対し実質的に特異的である、前記抗原上 のエピトープの免疫原性機能的模倣体として作用するワクチンを提供することに よっても達成される。 １つの態様において、前記ワクチンを産生するのに使用する前記抗原は、悪性 充実性腫瘍もしくは造血腫瘍、ウィルス、細菌、リッケチヤ、マイコプラズマ、 原虫、真菌、または感染性寄生生物由来のものである。更に具体的な態様におい て、前記抗原は癌胎児性抗原またはヒト免疫不全ウイルス外被タンパク質であっ てもよい。もう１つの態様において、前記ワクチンは免疫刺激性アジュヴアント を含み、そして更に具体的には、フロイントのアジュヴアント、ミヨウバン、カ ルメット・ゲランウシ型結核菌（ＢＣＧ）および破傷風毒素から成る群から選ば れた少なくとも一種であり得る。更にもう１つの態様において、前記ワクチンが 更にこの段落に掲載された抗原を含むことができる。 前記目的は、ワクチンの製造法であって、 （ａ） 悪性細胞もしくは感染性媒介物によって産生されるかまたはそれらと関 連する抗原に特異的に結合するイディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントを 含む免疫原性調製物で、ヒヒをチャレンジする段階、 （ｂ） 前記ヒヒから抗血清を回収し、前記イディオタイプ抗体もしくは抗体フ ラグメントのイディオタイプ結合部位に特異的に結合し、かつ、前記抗原を機能 的に模倣する前記抗血清から、少なくとも１つの抗イディオタイプ抗体を単離し 、そして任意に前記の単離された抗イディオタイプ抗体を酵素的に断片化し、前 記抗イディオタイプ抗体の特異的結合部位を保持する、少なくとも１つの得られ た抗体フラグメントを回収する段階、並びに （ｃ） 前記抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントを、生理学的に許 容可能な ワクチンベヒクルと組合せる段階、 を含む方法を提供することによっても達成される。 この方法の１つの態様において、前記イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグ メントはげっ歯類または霊長類抗体遺伝子を起源とする。この方法の更に具体的 な態様において、前記抗原は癌胎児性抗原である。」 請求の範囲 １． 被験者において、悪性細胞もしくは感染性媒介物に対する免疫反応を刺激 するために使用する抗腫瘍または抗病原体ワクチンであって、悪性細胞もしくは 感染性媒介物によって産生されるかまたはそれらに関連する抗原の免疫原性機能 的模倣体として作用する、免疫原性活性成分としてのヒヒ抗イディオタイプ抗体 もしくは抗体フラグメント、及び生理学的に許容可能なワクチンベヒクルを含み 、好ましくは前記ヒヒ抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメンが前記悪性 細胞もしくは感染性媒介物に対し実質的に特異的である、前記抗原上のエピトー プの免疫原性機能的模倣体として作用するワクチン。 ２． ワクチンの製造法であって、 （ａ） 悪性細胞もしくは感染性媒介物によって産生されるかまたはそれらと関 連する抗原に特異的に結合するイディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントを 含む免疫原性調製物で、ヒヒをチャレンジする段階、 （ｂ） 前記ヒヒから抗血清を回収し、前記イディオタイプ抗体もしくは抗体フ ラグメントのイディオタイプ結合部位に特異的に結合し、かつ、前記抗原を機能 的に模倣する前記抗血清から、少なくとも１つの抗イディオタイプ抗体を単離し 、そして任意に前記の単離された抗イディオタイプ抗体を酵素的に断片化し、前 記抗イディオタイプ抗体の特異的結合部位を保持する、少なくとも１つの得られ た抗体フラグメントを回収する段階、並びに （ｃ） 前記抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントを、生理学的に許 容可能なワクチンベヒクルと組合せる段階、 を含む方法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． ヒトにおいて、悪性細胞もしくは感染性媒介物に対する免疫反応を刺激す る方法であって、悪性細胞もしくは感染性媒介物によって産生されるかまたはそ れらと関連する抗原の免疫原性機能的模倣体として作用する霊長類抗イディオタ イプ抗体もしくは抗体フラグメントの免疫原量を、前記ヒトに投与する段階を含 む方法。 ２． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、サブヒュ ーマン霊長類抗体もしくは抗体フラグメントである請求項１記載の方法。 ３． 前記サブヒューマン霊長類がヒヒである請求項２記載の方法。 ４． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、ヒト抗体 もしくは抗体フラグメントである請求項１記載の方法。 ５． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、前記悪性 細胞もしくは感染性媒介物に対し実質的に特異性をもつ、前記抗原上のエピトー プの免疫原性機能的模倣体 として作用する請求項１記載の方法。 ６． 前記抗原が、悪性細胞によって産生されるかまたはそれと関連するもので ある請求項１記載の方法。 ７． 前記抗原が、癌胎児性抗原である請求項６記載の方法。 ８． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、非特異的 交差反応性抗原もしくはメコニウム抗原のいずれによっても共有されない、癌胎 児性抗原上のエピトープの免疫原性模倣体として作用する請求項７記載の方法。 ９． 前記抗原が、ウイルスによって産生されるかまたはそれと関連するもので ある請求項１記載の方法。 １０． 前記抗原が、ヒト免疫不全ウィルス外被タンパク質である請求項１記載 の方法。 １１． 前記外被タンパク質が gp120である請求項１０記載の方法。 １２． 前記抗原が、細菌、リッケチア、マイコプラズマ、原虫、および真菌か ら成る群から選ばれた感染性微生物によって産生されるかまたはそれと関連する ものである請求項１記載の方法。 １３． 前記抗原が、感染性寄生生物によって産生される、ま たは、それと関連するものである請求項１記載の方法。 １４． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、免疫刺 激性アジュヴァントと組合わせて投与される請求項１記載の方法。 １５． 前記アジュヴァントが、フロイントのアジュヴァント、ミョウバン、カ ルメット・ゲランウシ型結核菌（ＢＣＧ），破傷風毒素から成る群から選ばれた 少なくとも一つの構成員である請求項１４記載の方法。 １６． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、さらに 前記抗原の投与を含むプロトコルの下に投与される請求項１記載の方法。 １７． 前記ヒトが、悪性充実性腫瘍もしくは造血腫瘍を患っている請求項１記 載の方法。 １８． 前記悪性充実性腫瘍もしくは造血腫瘍が、消化管、肺、乳房、前立腺、 卵巣、睾丸、脳もしくはリンパ系の病巣、肉腫、または、メラノーマ病巣である 請求項１７記載の方法。 １９． 前記ヒトが、ウィルス性感染を患っている請求項１記載の方法。 ２０． 前記ヒトが、細菌、リッケチア、マイコプラズマ、原 虫、真菌から成る群から選ばれた感染性微生物による感染を患っている請求項１ 記載の方法。 ２１． 前記ヒト、感染性寄生生物による感染を患っている請求項１記載の方法 。 ２２． 前記ヒトが悪性もしくは感染にかかっておらず、および、前記免疫反応 の結果、前記抗原を産生するかまたはそれに関連する細胞による悪性の発生に対 して、あるいは、前記抗原を産生するかまたはそれに関連する感染性媒介物によ る感染に対して、免疫を生ずる請求項１記載の方法。 ２３． 前記ヒトが、悪性もしくは感染発生の高危険性群の一員である請求項２ ２記載の方法。 ２４． 抗腫瘍または抗病原体ワクチンであって、悪性細胞もしくは感染性媒介 物によって産生されるかまたはそれらに関連する抗原の免疫原性機能的模倣体と して作用する、霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントの免疫原 量と、生理学的に許容可能なワクチンベヒクルとを含むワクチン。 ２５． 請求項２４記載の前記ベヒクルが、有効量の免疫刺激性アジュヴァント を含有するワクチン。 ２６． 前記アジュヴァントが、フロイントのアジュヴァント、 ミョウバン、ＢＣＧ、破傷風毒素から成る群から選ばれた少なくとも一つの構成 員である請求項２５記載のワクチン。 ２７． 前記抗原を含む請求項２４記載のワクチン。 ２８． 前記抗原を含む請求項２６記載のワクチン。 ２９． ワクチンの製造法であって、 （ａ）悪性細胞もしくは感染性媒介物によって産生されるかまたはそれと関連 する抗原に特異的に結合するイディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントを含 む免疫原性調製物で、霊長類をチャレンジする段階、 （ｂ）前記霊長類から抗血清を回収し、前記イディオタイプ抗体もしくは抗体 フラグメントのイディオタイプ結合部位に特異的に結合し、かつ、前記抗原を機 能的に模倣する前記抗血清から、少なくとも１つの抗イディオタイプ抗体を単離 する段階、並びに、 （ｃ）前記抗イディオタイプ抗体を、生理学的に許容可能なワクチンベヒクル と組合せる段階、 を包含する方法。 ３０． 段階（ｂ）がさらに、前記の単離された抗イディオタィプ抗体を酵素的 に断片化し、前記抗イディオタイプ抗体の特 異的結合部位を保持する、少なくとも１つの得られた抗体フラグメントを回収す ることを含み、かつ、前記抗イディオタイプフラグメントを、段階（ｃ）で前記 ベヒクルと組合わせる請求項２９記載の方法。 ３１． 前記イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、げっ歯類モノク ローナル抗体もしくは抗体フラグメントである請求項２９記載の方法。 ３２． 前記イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、霊長類抗体もし くは抗体フラグメントである請求項２９記載の方法。 ３３． 前記抗原が、癌胎児性抗原である請求項１記載の方法。 ３４． ヒトにおいて、悪性細胞もしくは感染性媒介物にたいする免疫反応を刺 激する方法への使用のための、且つ、ヒトに対して投与される抗腫瘍もしくは抗 病原体ワクチンの調製への、悪性細胞もしくは感染性媒介物によって産生される かまたはそれと関連する抗原の免疫原性機能的模倣体として作用する、免疫原量 の霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントの、生理学的に許容可 能なベヒクルとの組合わせによる使用。 ３５． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、サブヒ ューマン霊長類抗体もしくは抗体フラグメントである請求項３４記載の使用。 ３６． 前記サブヒューマン霊長類がヒヒである請求項３５記載の使用。 ３７． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、ヒト抗 体もしくは抗体フラグメントである請求項３４記載の使用。 ３８． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、前記悪 性細胞もしくは感染性媒介物に対し実質的に特異的である、前記抗原上のエピト ープの免疫原性機能的模倣体として作用する請求項３４〜３７のいずれか一項に 記載の使用。 ３９． 抗腫瘍または抗病原体ワクチンであって、悪性細胞もしくは感染性媒介 物によって産生されるかまたはそれと関連する抗原の免疫原性機能的模倣体とし て作用する霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントの免疫原量と 、生理学的に許容可能なワクチンベヒクルとを含有するワクチン。 ４０． 前記ワクチンベヒクルが、有効量の免疫刺激性アジュ ヴァントを含む請求項３９記載のワクチン。 ４１． 前記アジュヴァントが、フロイントのアジュヴァアント、ミョウバン、 ＢＣＧ、破傷風毒素から成る群から選ばれた少なくとも１つの構成員である請求 項４０記載のワクチン。 ４２． さらに、前記抗原を含む請求項３９−４１のいずれか一項に記載のワク チン。 ４３． 前記抗原が、ウィルス、または、細菌、リッケチア、マイコプラズマ、 原虫および真菌からなる群から選ばれた感染性微生物、または、感染性寄生生物 によって産生されるかまたはそれと関連するものである請求項３９−４２のいず れか一項に記載の前記ワクチン。 ４４． 前記抗原が、消化管、肺、乳房、前立腺、卵巣、睾丸、脳もしくはリン パの病巣、肉腫、または、メラノーマ病巣である、悪性充実性腫瘍または造血腫 瘍によって産生されるものである請求項３９−４２のいずれか一項に記載のワク チン。 ４５． 前記霊長類抗イディオタイプ抗体もしくは抗体フラグメントが、非特異 的交差反応性抗原もしくはメコニウム抗原のいずれとも共有されない、癌胎児性 抗原上のエピトープの免疫原性模倣体として作用する請求項３９−４２のいずれ か一項に 記載のワクチン。 ４６． 悪性細胞もしくは感染性媒介物に対するヒトの免疫反応を刺激する方法 の使用説明書と結合わせたものであって、ここに、前記ワクチンが、そのような 免疫反応を達成するのに有効な量で且つ有効なプロトコルに従ってヒトに投与さ れる請求項３９−４５のいずれか一項に記載のワクチン。